BR112021002725A2

BR112021002725A2 - métodos para avaliar a fibrilação atrial, para prever o risco de acidente vascular cerebral, para avaliar a eficácia de uma terapia, para identificar um paciente, para monitorar a terapia de anticoagulação e para auxiliar na avaliação da fibrilação atrial, método implementado por computador, kit e uso in vitro

Info

Publication number: BR112021002725A2
Application number: BR112021002725-4A
Authority: BR
Inventors: Peter Kastner; André Ziegler; Ursula-Henrike Wienhues-Thelen; Vinzent Rolny; Manuel Dietrich; Ulrich Schotten
Original assignee: F. Hoffmann-La Roche Ag; Universiteit Maastricht; Academisch Ziekenhuis Maastricht
Priority date: 2018-08-16
Filing date: 2019-08-16
Publication date: 2021-07-20
Also published as: CN113302497A; WO2020035588A1; JP2021535370A; CN113302497B; JP7518061B2; KR20210046675A; US20210181211A1; EP3837549A1

Abstract

MÉTODOS PARA AVALIAR A FIBRILAÇÃO ATRIAL, PARA PREVER O RISCO DE ACIDENTE VASCULAR CEREBRAL, PARA AVALIAR A EFICÁCIA DE UMA TERAPIA, PARA IDENTIFICAR UM PACIENTE, PARA MONITORAR A TERAPIA DE ANTICOAGULAÇÃO E PARA AUXILIAR NA AVALIAÇÃO DA FIBRILAÇÃO ATRIAL, MÉTODO IMPLEMENTADO POR COMPUTADOR, KIT E USO IN VITRO. A presente invenção refere-se a um método para avaliar a fibrilação atrial em um paciente, o referido método compreendendo as etapas de determinar a quantidade de TFPI-2 em uma amostra do paciente e comparar a quantidade de TFPI-2 a uma quantidade de referência, pelo que a fibrilação atrial deve ser avaliada. Além disso, a presente invenção refere-se a métodos para avaliar a terapia de anticoagulação e a métodos para prever o risco de acidente vascular cerebral de um paciente. Os referidos métodos são baseados na determinação da quantidade de TFPI-2 em uma amostra do paciente.

Description

“MÉTODOS PARA AVALIAR A FIBRILAÇÃO ATRIAL, PARA PREVER O RISCO DE ACIDENTE VASCULAR CEREBRAL, PARA AVALIAR A EFICÁCIA DE UMA TERAPIA, PARA IDENTIFICAR UM PACIENTE, PARA MONITORAR A TERAPIA DE ANTICOAGULAÇÃO E PARA AUXILIAR NA AVALIAÇÃO DA FIBRILAÇÃO ATRIAL, MÉTODO IMPLEMENTADO POR COMPUTADOR, KIT E USO IN VITRO”

[0001] A presente invenção refere-se a um método para avaliar a fibrilação atrial em um paciente, o referido método compreendendo as etapas de determinar a quantidade de TFPI-2 em uma amostra do paciente e comparar a quantidade de TFPI-2 a uma quantidade de referência, por meio da qual a fibrilação atrial deve ser avaliada. Além disso, a presente invenção refere-se a métodos para avaliar a terapia de anticoagulação e a métodos para prever o risco de acidente vascular cerebral de um paciente. Os referidos métodos são baseados na determinação da quantidade de TFPI-2 em uma amostra do paciente.

SEÇÃO DE ANTECEDENTES

[0002] A fibrilação atrial (FA) é o tipo mais comum de arritmia cardíaca e uma das condições mais comuns entre a população idosa. A fibrilação atrial é caracterizada por batimentos cardíacos irregulares e geralmente começa com breves períodos de batimentos anormais que podem aumentar com o tempo e se tornar uma condição permanente. Estima-se que 2,7 a 6,1 milhões de pessoas nos Estados Unidos tenham fibrilação atrial e aproximadamente 33 milhões de pessoas em todo o mundo (Chugh S.S., et al., Circulation 2014;129:837-47).

[0003] O diagnóstico de arritmia cardíaca, tal como fibrilação atrial, geralmente envolve a determinação da causa da arritmia e a classificação da arritmia. As diretrizes para a classificação da fibrilação atrial de acordo com o American College of Cardiology (ACC), a American Heart Association (AHA) e a

European Society of Cardiology (ESC) são baseadas principalmente na simplicidade e relevância clínica. A primeira categoria é chamada de “primeiro FA detectada”. As pessoas nesta categoria são inicialmente diagnosticadas com FA e podem ou não ter tido episódios anteriores não detectados. Se um primeiro episódio detectado interromper por conta própria em menos de uma semana, mas for seguido por outro episódio posteriormente, a categoria muda para “FA paroxística”. Embora os pacientes nesta categoria tenham episódios que duram até 7 dias, na maioria dos casos de FA paroxística, os episódios interrompem em menos de 24 horas. Se o episódio durar mais de uma semana, é classificado como “FA persistente”. Se tal episódio não puder ser interrompido, ou seja, por cardioversão elétrica ou farmacológica, e continuar por mais de um ano, a classificação é alterada para “FA permanente”.

[0004] Um diagnóstico precoce de fibrilação atrial é altamente desejado porque a fibrilação atrial é um fator de risco importante para acidente vascular cerebral e embolia sistêmica (Hart et al., Ann Intern Med 2007; 146 (12): 857-67; Go AS et al. JAMA 2001; 285 (18): 2370-5). O acidente vascular cerebral ocupa a segunda posição após a doença isquêmica do coração como causa de perda de incapacidade - ajustada - de anos de vida em países de alta renda e como causa de morte em todo o mundo. A fim de reduzir o risco de acidente vascular cerebral, a terapia de anticoagulação parece ser a terapia mais apropriada.

[0005] O TFPI-2 (inibidor da via do fator tecidual 2), também conhecido como TFPI2, PP5, REF1, é um homólogo do TFP-1 e contém três domínios do tipo Kunitz e uma região C terminal básica. Ele pertence à família do tipo Kunitz que engloba inibidores da serina proteinase que incluem um ou mais domínios do tipo Kunitz de mais de vinte membros, que incluem o inibidor da tripsina pancreática bovina (aprotinina), inibidor da via do fator tecidual (TFPI- 1) e seu homólogo, inibidor da via do fator tecidual tipo 2, ou TFPI-2. O TFPI-2 humano foi originalmente isolado do tecido placentário como uma glicoproteína de 30-36 kDa, que foi referida como proteína 5 da placenta (PP5).

[0006] O TFPI-2 é um inibidor da serina proteinase sintetizado por uma variedade de células e secretado direcionalmente em sua matriz extracelular (ECM), onde se pensa que ele regula a degradação e remodelação da ECM mediada pela plasmina (revisado por Chand et al.). A proteína pode inibir uma variedade de serina proteases incluindo fator VIIa/fator tecidual, fator Xa, plasmina, tripsina, quimotripsina e calicreína plasmática, certas metaloproteinases de matriz.

[0007] O gene que codifica TFPI-2 também foi identificado como um gene supressor de tumor em vários tipos de câncer. O TFPI-2 é regulado negativamente na maioria dos tumores agressivos, tais como glioma, câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer de mama, melanoma, câncer colorretal, câncer pancreático e carcinoma hepatocelular. Tal silenciamento é principalmente devido a alterações epigenéticas induzidas pela hipermetilação do promotor TFPI-2 e desacetilação da histona. A hipermetilação de TFPI-2 foi detectada, por exemplo, para câncer gástrico/colorretal (Hu et al. Oncotarget, 2017, Vol. 8, (No. 48), pp: 84054-84065).

[0008] O TFPI-2 desempenha ainda um papel na regulação da coagulação e inibe a fibrinólise do coágulo. Vadivel et al. (J Biol Chem 2014; 289: 31647–31661) mostram que as plaquetas contêm TFPI-2 derivado de megacariócitos e inibem a fibrinólise. O TFPI-2 regula a coagulação e a fibrinólise induzida por tPA e promove a estabilização do coágulo.

[0009] O papel do TFPI-2 na aterosclerose foi descrito, por exemplo, por Crawley et al. (Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2002; 22: 218-224).

Em vasos sanguíneos humanos saudáveis, o TFPI-2 foi detectado no endotélio vascular. Em tecidos ateroscleróticos humanos, a expressão de TFPI-2 foi atribuída a macrófagos, células T, células endoteliais e células de músculo liso.

[00010] Além disso, Herman et al. (J. Clin. Invest. 2001,107: 1117- 1126) relatam que TFPI-2 funciona como um inibidor da metaloproteinase de matriz com implicações para a ateriosclerose.

[00011] Latini R. et al. (J Intern Med. 2011 Feb; 269 (2): 160-71) mediram vários biomarcadores circulantes (hsTnT, NT-pró-BNP, MR-pró-ANP, MR-pró-ADM, copeptina e CT-proendotelina-1) em pacientes com fibrilação atrial.

[00012] Há uma necessidade de métodos confiáveis para a avaliação da fibrilação atrial, incluindo o diagnóstico de fibrilação atrial, a estratificação de risco de pacientes com fibrilação atrial (tal como ocorrência de acidente vascular cerebral), a avaliação da gravidade da fibrilação atrial e a avaliação de uma terapia em pacientes com fibrilação atrial.

[00013] O problema técnico subjacente à presente invenção pode ser visto como o fornecimento de métodos para atender às necessidades mencionadas acima. O problema técnico é resolvido pelas modalidades caracterizadas nas reivindicações e abaixo no presente documento.

[00014] De maneira vantajosa, verificou-se no contexto dos estudos da presente invenção que a determinação da quantidade de TFPI-2 em uma amostra de um paciente permite uma melhor avaliação da fibrilação atrial.

Graças à presente invenção, pode ser diagnosticado, por exemplo, se um paciente sofre de fibrilação atrial ou não. A invenção também fornece um método para prever acidente vascular cerebral. Além disso, pode ser, por exemplo, diferenciado entre fibrilação atrial paroxística e persistente em um paciente que sofre de fibrilação atrial.

DESCRIÇÃO RESUMIDA DA PRESENTE INVENÇÃO

[00015] A presente invenção se refere a um método para avaliar a fibrilação atrial em um paciente, compreendendo as etapas de a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e b) comparar a quantidade do biomarcador TFPI-2 a uma quantidade de referência para TFPI-2 e, opcionalmente, comparar a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional a uma quantidade de referência para o referido pelo menos um biomarcador adicional, por meio do qual a fibrilação atrial deve ser avaliada.

[00016] A presente invenção refere-se ainda a um método para prever o risco de acidente vascular cerebral em um paciente, compreendendo as etapas de (a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e (b) avaliar a pontuação de risco clínica de acidente vascular cerebral para o referido paciente, e (c) prever o risco de acidente vascular cerebral com base nos resultados das etapas a) e b).

[00017] A presente invenção refere-se ainda a um método para aprimorar a precisão da previsão de uma pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral para um paciente, compreendendo as etapas de a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e,

opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM- 1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), em que o paciente tem uma pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral conhecida, e b) combinar um valor para a quantidade de TFPI-2 e/ou a quantidade de um ou mais biomarcadores compreendendo um peptídeo natriurético, ESM-1, ANGT2, IGFBP7 com a pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral, por meio da qual a precisão da previsão da referida pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral é melhorada.

[00018] A presente invenção se refere ainda a um método para avaliar a eficácia de uma terapia de anticoagulação de um paciente, compreendendo as etapas de a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e a) comparar a quantidade do biomarcador TFPI-2 a uma quantidade de referência para TFPI-2 e, opcionalmente, comparar a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional a uma quantidade de referência para o referido pelo menos um biomarcador adicional, por meio do qual a eficácia da terapia de anticoagulação deve ser avaliada.

[00019] A presente invenção refere-se ainda a um método para identificar um paciente que é elegível para a administração de pelo menos um medicamento de anticoagulação ou que é elegível para uma terapia de anticoagulação intensificada, compreendendo a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e b) comparar a quantidade do biomarcador TFPI-2 a uma quantidade de referência para TFPI-2 e, opcionalmente, comparar a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional a uma quantidade de referência para o referido pelo menos um biomarcador adicional, por meio do qual é identificado um paciente é elegível para a administração do referido pelo menos um medicamento ou para uma terapia de anticoagulação intensificada.

[00020] A presente invenção refere-se ainda a um método para monitorar a terapia de anticoagulação, compreendendo as etapas de (a) determinar, na primeira amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1(Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), (b) determinar, em uma segunda amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), em que a referida segunda amostra foi obtida após a referida primeira amostra, (c) comparar a quantidade de TFPI-2 na primeira amostra com a quantidade de TFPI-2 na referida segunda amostra e, opcionalmente, comparar a quantidade do referido pelo menos um biomarcador adicional na primeira amostra com a quantidade do referido pelo menos um biomarcador adicional na referida segunda amostra, monitorando assim a terapia de anticoagulação.

[00021] A presente invenção refere-ze ainda a um método para auxiliar na avaliação da fibrilação atrial, o referido método compreendendo as etapas de: a) fornecer pelo menos uma amostra de um paciente, b) determinar, na pelo menos uma amostra fornecida na etapa a), a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e c) fornecer informações sobre a quantidade determinada do biomarcador TFPI-2 e, opcionalmente, sobre a quantidade determinada do pelo menos um biomarcador adicional a um médico, auxiliando assim na avaliação de fibrilação atrial.

[00022] A presente invenção refere-se ainda a um método para auxiliar na avaliação da fibrilação atrial, compreendendo: a) fornecer um ensaio para o biomarcador TFPI-2 e, opcionalmente, pelo menos um ensaio adicional para um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e b) fornecer instruções para uso dos resultados de ensaio obtidos ou obteníveis pelo(s) referido(s) ensaio(s) na avaliação de fibrilação atrial.

[00023] A presente invenção refere-se ainda a um método implementado por computador para avaliar a fibrilação atrial, compreendendo a) receber, em uma unidade de processamento, um valor para a quantidade de TFPI-2 e, opcionalmente, pelo menos um valor adicional para a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), em que a referida quantidade de TFPI-2 e, opcionalmente, a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional foram determinadas em uma amostra de um paciente, b) comparar, pela referida unidade de processamento, o valor ou valores recebidos na etapa (a) a uma referência ou a referências, e c) avaliar a fibrilação atrial com base na etapa de comparação b).

[00024] A presente invenção refere-se ainda a um kit compreendendo um agente que especificamente se liga a TFPI-2 e pelo menos um agente adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um agente que especificamente se liga a um peptídeo natriurético, um agente que especificamente se liga a ESM-1, um agente que especificamente se liga a Ang2 e um agente que especificamente se liga a IGFBP7.

[00025] A presente invenção refere-se ainda ao uso in vitro do i) biomarcador TFPI-2 e, opcionalmente, pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e/ou ii) pelo menos um agente que especificamente se liga a TFPI- 2 e, opcionalmente, pelo menos um agente adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um agente que especificamente se liga a um peptídeo natriurético, um agente que especificamente se liga a ESM-1, um agente que especificamente se liga a Ang2 e um agente que especificamente se liga a IGFBP7, para a) avaliar a fibrilação atrial, b) prever o risco de acidente vascular cerebral em um paciente, c) melhorar a precisão da previsão de uma pontuação de risco clínica de acidente vascular cerebral, para avaliar a eficácia de uma terapia de anticoagulação de um paciente, d) identificar um paciente que é elegível para a administração de pelo menos um medicamento anticoagulante ou que é elegível para uma terapia de anticoagulação intensificada e/ou e) monitorar a terapia de anticoagulação.

[00026] Em uma modalidade, a avaliação da fibrilação atrial é o diagnóstico de fibrilação atrial.

[00027] Em uma modalidade, uma quantidade de TFPI-2 e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional acima da quantidade de referência é indicativa para um paciente que sofre de fibrilação atrial e/ou uma quantidade de TFPI-2 e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional abaixo da quantidade de referência é indicativa para um paciente que não sofre de fibrilação atrial.

[00028] Em uma modalidade da presente invenção, a avaliação da fibrilação atrial é a diferenciação entre a fibrilação atrial paroxística e persistente.

[00029] Em uma modalidade da presente invenção, uma quantidade de TFPI-2 e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional acima da quantidade de referência é indicativa para um paciente que sofre de fibrilação atrial persistente e/ou em que uma quantidade de TFPI- 2 e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional abaixo da quantidade de referência é indicativa para um paciente que sofre de fibrilação atrial paroxística.

[00030] Em uma modalidade da presente invenção, a avaliação da fibrilação atrial é a previsão do risco de um evento adverso associado à fibrilação atrial.

[00031] Em uma modalidade da presente invenção, o evento adverso associado à fibrilação atrial é a recorrência de fibrilação atrial e/ou acidente vascular cerebral.

[00032] Em uma modalidade da presente invenção, uma quantidade de TFPI-2 e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional acima da quantidade de referência é indicativa para um paciente que está em risco de sofrer um evento adverso associado à fibrilação atrial e/ou uma quantidade de TFPI-2 e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional abaixo da quantidade de referência é indicativa para um paciente que não está em risco de sofrer de um evento adverso associado à fibrilação atrial.

[00033] Em uma modalidade da presente invenção, a avaliação da fibrilação atrial é a identificação de um paciente que deverá ser submetido a eletrocardiografia (ECG).

VISÃO GERAL DETALHADA SOBRE A PRESENTE INVENÇÃO E DEFINIÇÕES

[00034] A presente invenção se refere a um método para avaliar a fibrilação atrial em um paciente, compreendendo as etapas de a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e b) comparar a quantidade do biomarcador TFPI-2 a uma quantidade de referência para TFPI-2, por meio da qual a fibrilação atrial deve ser avaliada.

[00035] Em uma modalidade do método da presente invenção, o método compreende ainda determinar a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina) em uma amostra do paciente na etapa a) e a comparação da quantidade do pelo menos um biomarcador adicional a uma quantidade de referência na etapa b).

[00036] Consequentemente, a presente invenção se refere a um método para avaliar a fibrilação atrial em um paciente, compreendendo as etapas de a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e b) comparar a quantidade do biomarcador TFPI-2 a uma quantidade de referência para TFPI-2 e, opcionalmente, comparar a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional a uma quantidade de referência para o referido pelo menos um biomarcador adicional, por meio do qual a fibrilação atrial deve ser avaliada.

[00037] A avaliação da fibrilação atrial (FA) deve ser baseada nos resultados da etapa de comparação b).

[00038] Por conseguinte, a presente invenção compreende, preferivelmente, as etapas de a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM- 1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina),

b) comparar a quantidade do biomarcador TFPI-2 a uma quantidade de referência para TFPI-2 e, opcionalmente, comparar a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional a uma quantidade de referência para o referido pelo menos um biomarcador adicional, e c) avaliar a fibrilação atrial com base nos resultados da etapa de comparação b).

[00039] O método conforme referido de acordo com a presente invenção inclui um método que consiste essencialmente nas etapas acima mencionadas ou em um método que inclui etapas adicionais. Além disso, o método da presente invenção, preferivelmente, é um método ex vivo e, mais preferencialmente, um método in vitro. Além disso, pode compreender etapas além daquelas explicitamente mencionadas acima. Por exemplo, etapas adicionais podem estar relacionadas à determinação de marcadores adicionais e/ou a amostras de pré-tratamentos ou avaliação dos resultados obtidos pelo método. O método pode ser realizado manualmente ou assistido por automação.

Preferivelmente, as etapas (a), (b) e/ou (c) podem total ou parcialmente ser auxiliadas pela automação, por exemplo, por um equipamento robótico e sensorial adequado para a determinação na etapa (a) ou um cálculo implementado por computador na etapa (b).

[00040] De acordo com a presente invenção, a fibrilação atrial deve ser avaliada. O termo "avaliação da fibrilação atrial", conforme usado neste documento, refere-se preferencialmente ao diagnóstico de fibrilação atrial, a diferenciação entre fibrilação atrial paroxística e persistente, a previsão de um risco de um evento adverso associado à fibrilação atrial (tal como acidente vascular cerebral), para a identificação de um paciente que deverá ser submetido à eletrocardiografia (ECG) ou à avaliação de uma terapia para fibrilação atrial.

[00041] Como será entendido pelos técnicos no assunto, a avaliação da presente invenção geralmente não se destina a ser correta para

100% dos pacientes a serem testados. O termo, preferivelmente, requer que uma avaliação correta (tal como o diagnóstico, diferenciação, previsão, identificação ou avaliação de uma terapia conforme referida no presente documento) possa ser feita para uma porção estatisticamente significativa de pacientes. Uma porção estatisticamente significativa pode ser determinada sem mais delongas pelo técnico no assunto, usando várias ferramentas de avaliação estatística conhecidas, por exemplo, determinação de intervalos de confiança, determinação de valor p, teste t de Student, teste de Mann-Whitney e etc.

Detalhes são encontrados em Dowdy e Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, Nova York, 1983. Intervalos de confiança preferidos são de pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%. Os valores p são, preferivelmente, 0,4, 0,1, 0,05, 0,01, 0,005 ou 0,0001.

[00042] É conhecido na técnica que os biomarcadores podem estar aumentados em várias doenças e distúrbios. Isso também se aplica a TFPI-2 que, por exemplo, é conhecido por estar aumentado em pacientes com câncer.

No entanto, isso é levado em consideração pelo técnico no assunto.

[00043] Assim, a "avaliação da fibrilação atrial" é entendida como um auxílio na avaliação da fibrilação atrial e, portanto, como um auxílio no diagnóstico de fibrilação atrial, um auxílio na diferenciação entre fibrilação atrial paroxística e persistente, um auxílio na previsão de um risco de um evento adverso associado à fibrilação atrial, um auxílio na identificação de um paciente que deverá ser submetido a eletrocardiografia (ECG), ou como um auxílio na avaliação de uma terapia para fibrilação atrial. O diagnóstico final, em princípio, será realizado pelo médico.

[00044] Em uma modalidade preferida da presente invenção, a avaliação da fibrilação atrial é o diagnóstico de fibrilação atrial. Consequentemente, é diagnosticado se um paciente sofre de fibrilação atrial ou não.

[00045] Consequentemente, a presente invenção fornece um método para diagnosticar a fibrilação atrial em um paciente, compreendendo as etapas de a) determinar a quantidade de TFPI-2 em uma amostra do paciente, e b) comparar a quantidade de TFPI-2 a uma quantidade de referência, por meio da qual a fibrilação atrial deve ser diagnosticada.

[00046] Em uma modalidade, o método acima mencionado compreende as etapas de: a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e b) comparar a quantidade do biomarcador TFPI-2 a uma quantidade de referência para TFPI-2 e, opcionalmente, comparar a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional a uma quantidade de referência para o referido pelo menos um biomarcador adicional, por meio do qual a fibrilação atrial deve ser diagnosticada.

[00047] Preferivelmente, o paciente a ser testado em relação ao método para o diagnóstico de fibrilação atrial é um paciente que é suspeito de sofrer de fibrilação atrial. No entanto, também é contemplado que o paciente já foi previamente diagnosticado como sofrendo de FA e que o diagnóstico anterior é confirmado pela realização do método da presente invenção.

[00048] Em outra modalidade preferida da presente invenção, a avaliação da fibrilação atrial é a diferenciação entre a fibrilação atrial paroxística e persistente. Consequentemente, é determinado se um paciente sofre de fibrilação atrial paroxística ou persistente.

[00049] Por conseguinte, a presente invenção fornece um método para diferenciar entre fibrilação atrial paroxística e persistente em um paciente, compreendendo as etapas de a) determinar a quantidade de TFPI-2 em uma amostra do paciente, e b) comparar a quantidade de TFPI-2 a uma quantidade de referência, por meio da qual é diferenciado entre fibrilação atrial paroxística e persistente.

[00050] Em uma modalidade, o método acima mencionado compreende as etapas de: a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e b) comparar a quantidade do biomarcador TFPI-2 a uma quantidade de referência para TFPI-2 e, opcionalmente, comparar a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional a uma quantidade de referência para o referido pelo menos um biomarcador adicional, por meio do qual é diferenciado entre fibrilação atrial paroxística e persistente.

[00051] Em outra modalidade preferida da presente invenção, a avaliação da fibrilação atrial é a previsão do risco de um evento adverso associado à fibrilação atrial (tal como acidente vascular cerebral). Assim, é previsto se o paciente está em risco ou não de sofrer do referido evento adverso.

[00052] Assim, a presente invenção fornece um método para prever o risco de um evento adverso associado à fibrilação atrial em um paciente,

compreendendo as etapas de a) determinar a quantidade de TFPI-2 em uma amostra do paciente, e b) comparar a quantidade de TFPI-2 a uma quantidade de referência, por meio da qual o risco do evento adverso associado à fibrilação atrial deve ser previsto.

[00053] Em uma modalidade, o método acima mencionado compreende as etapas de: a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e b) comparar a quantidade do biomarcador TFPI-2 a uma quantidade de referência para TFPI-2 e, opcionalmente, comparar a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional a uma quantidade de referência para o referido pelo menos um biomarcador adicional, por meio do qual o risco do evento adverso associado à fibrilação atrial deve ser previsto.

[00054] Prevê-se que vários eventos adversos podem ser previstos. Um evento adverso preferido a ser previsto é o acidente vascular cerebral.

[00055] Por conseguinte, a presente invenção refere-se, em particular, a um método para prever o risco de acidente vascular cerebral em um paciente, compreendendo as etapas de a) determinar a quantidade de TFPI-2 em uma amostra do paciente, e b) comparar a quantidade de TFPI-2 a uma quantidade de referência, por meio da qual o risco de acidente vascular cerebral deve ser previsto.

[00056] O método acima mencionado pode compreender ainda a etapa c) prever acidente vascular cerebral com base nos resultados de comparação da etapa b). Assim, as etapas a), b), c) são preferencialmente as seguintes: a) determinar a quantidade de TFPI-2 em uma amostra do paciente, e b) comparar a quantidade de TFPI-2 a uma quantidade de referência, e c) prever acidente vascular cerebral com base nos resultados da comparação da etapa b)

[00057] Em outra modalidade preferida da presente invenção, a avaliação da fibrilação atrial é a avaliação de uma terapia para a fibrilação atrial.

[00058] Consequentemente, a presente invenção fornece um método para a avaliação de uma terapia para fibrilação atrial em um paciente, compreendendo as etapas de a) determinar a quantidade de TFPI-2 em uma amostra do paciente, e b) comparar a quantidade de TFPI-2 a uma quantidade de referência, por meio da qual a terapia para fibrilação atrial deve ser avaliada.

[00059] Em uma modalidade, o método acima mencionado compreende as etapas de: a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e b) comparar a quantidade do biomarcador TFPI-2 a uma quantidade de referência para TFPI-2 e, opcionalmente, comparar a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional a uma quantidade de referência para o referido pelo menos um biomarcador adicional, por meio do qual a terapia para fibrilação atrial deve ser avaliada.

[00060] Preferivelmente, o paciente em conexão com a diferenciação acima mencionada, a previsão acima mencionada e a avaliação de uma terapia para fibrilação atrial é um paciente que sofre de fibrilação atrial, em particular, que é conhecido por sofrer de fibrilação atrial (e, portanto, ter um histórico de fibrilação atrial). No entanto, no que diz respeito ao método de previsão mencionado acima, também prevê-se que o paciente não tenha histórico conhecido de fibrilação atrial.

[00061] Em outra modalidade preferida da presente invenção, a avaliação da fibrilação atrial é a identificação de um paciente que deverá ser submetido a eletrocardiografia (ECG). Assim, identifica-se como paciente quem é quem deverá ser submetido à eletrocardiografia.

[00062] Assim, a presente invenção prevê um método para identificar um paciente que deverá ser submetido a eletrocardiografia, compreendendo as etapas de a) determinar a quantidade de TFPI-2 em uma amostra do paciente, e b) comparar a quantidade de TFPI-2 a uma quantidade de referência, por meio da qual é identificado um paciente que deverá ser submetido à eletrocardiografia.

[00063] Em uma modalidade, o método acima mencionado compreende as etapas de: a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e b) comparar a quantidade do biomarcador TFPI-2 a uma quantidade de referência para TFPI-2 e, opcionalmente, comparar a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional a uma quantidade de referência para o referido pelo menos um biomarcador adicional, por meio do qual um paciente é identificado e deve ser submetido a eletrocardiografia.

[00064] Preferivelmente, o paciente em conexão com o método acima mencionado de identificar um paciente que deverá ser submetido a eletrocardiografia é um paciente que não tem histórico conhecido de fibrilação atrial. A expressão "nenhum histórico conhecido de fibrilação atrial" é definida em outro lugar neste documento.

[00065] Em outra modalidade preferida da presente invenção, a avaliação da fibrilação atrial é a avaliação da eficácia de uma terapia de anticoagulação de um paciente. Consequentemente, a eficácia da referida terapia é avaliada. O paciente de acordo com este método pode ou não sofrer de fibrilação atrial.

[00066] Em outra modalidade preferida da presente invenção, a avaliação da fibrilação atrial é o monitoramento de uma terapia de anticoagulação de um paciente. O paciente de acordo com este método pode ou não sofrer de fibrilação atrial.

[00067] Em outra modalidade preferida da presente invenção, a avaliação da fibrilação atrial é a previsão do risco de acidente vascular cerebral em um paciente. Consequentemente, é previsto se um paciente, conforme referido neste documento, está em risco de acidente vascular cerebral, ou não.

[00068] Em outra modalidade preferida da presente invenção, a avaliação da fibrilação atrial é a identificação de um paciente sendo elegível para a administração de pelo menos um medicamento de anticoagulação ou sendo elegível para uma terapia de anticoagulação intensificada. Assim, é avaliado se um paciente é elegível para a referida administração e/ou o referido aumento da dosagem.

[00069] Em outra modalidade preferida da presente invenção, a avaliação da fibrilação atrial é o monitoramento da terapia de anticoagulação.

Consequentemente, é avaliado se um paciente responde à referida terapia, ou não.

[00070] O termo "fibrilação atrial" (abreviado FA ou Faib) é bem conhecido na técnica. Conforme usado neste documento, o termo refere-se, preferivelmente, a uma taquiarritmia supraventricular caracterizada pela ativação atrial não coordenada com consequente deterioração da função mecânica atrial.

Em particular, o termo refere-se a um ritmo cardíaco anormal caracterizado por batimentos rápidos e irregulares. Envolve as duas câmaras superiores do coração. Em um ritmo cardíaco normal, o impulso gerado pelo nó sinoatrial se espalha pelo coração e causa contração do músculo cardíaco e bombeamento de sangue. Na fibrilação atrial, os impulsos elétricos regulares do nó sinoatrial são substituídos por impulsos elétricos rápidos e desorganizados, que resultam em batimentos cardíacos irregulares. Os sintomas da fibrilação atrial são palpitações cardíacas, desmaios, falta de ar ou dor no peito. No entanto, a maioria dos episódios não apresenta sintomas. No eletrocardiograma, a fibrilação atrial é caracterizada pela substituição de ondas P consistentes por oscilações rápidas ou ondas fibrilatórias que variam em amplitude, formato e tempo, associadas a uma resposta ventricular irregular, frequentemente rápida, quando a condução atrioventricular está intacta.

[00071] O American College of Cardiology (ACC), a American Heart

Association (AHA) e a European Society of Cardiology (ESC) propõem o seguinte sistema de classificação (ver Fuster V. et al., Circulation 2006; 114 (7): e257-354 que está incorporado neste documento por referência em sua totalidade, vide, por exemplo, a Figura 3 no documento): FA detectada pela primeira vez, FA paroxística, FA persistente e FA permanente.

[00072] Todas as pessoas com FA estão inicialmente na categoria chamada FA detectada pela primeira vez. No entanto, o paciente pode ou não ter tido episódios não detectados anteriormente. Um paciente sofre de FA permanente, se a FA persistir por mais de um ano e, em particular, a conversão de volta ao ritmo sinusal não ocorre (ou somente com intervenção médica). Um paciente sofre de FA persistente, se a FA durar mais que 7 dias. O paciente pode exigir intervenção farmacológica ou elétrica para terminar a fibrilação atrial.

Assim, a FA persistente ocorre em episódios, mas a arritmia normalmente não se converte espontaneamente no ritmo sinusal (isto é, sem intervenção médica).

A fibrilação atrial paroxística, preferencialmente, refere-se a um episódio intermitente de fibrilação atrial que dura até 7 dias. Na maioria dos casos de FA paroxística, os episódios duram menos que 24 horas. O episódio de Fibrilação Atrial termina espontaneamente, ou seja, sem intervenção médica. Assim, enquanto o(s) episódio(s) de fibrilação atrial paroxística preferencialmente termina(m) espontaneamente, a fibrilação atrial persistente preferencialmente não termina espontaneamente. Preferivelmente, a fibrilação atrial persistente requer cardioversão elétrica ou farmacológica para término, ou outros procedimentos, tais como procedimentos de ablação (Fuster V. et al., Circulation 2006; 114 (7): e257-354). Tanto a FA persistente quanto a paroxística podem ser recorrentes, pelas quais a distinção entre FA paroxística e persistente é fornecida por registros de ECG: quando um paciente teve 2 ou mais episódios, a FA é considerada recorrente. Se a arritmia termina espontaneamente, a FA, em particular, a FA recorrente, é designada paroxística. A FA é designada como persistente se durar mais que 7 dias.

[00073] Em uma modalidade preferencial da presente invenção, o termo "fibrilação atrial paroxística" é definido como episódios de FA que terminam espontaneamente, em que os referidos episódios duram menos que 24 horas. Em uma modalidade alternativa, os episódios que terminam espontaneamente duram até sete dias.

[00074] O "paciente" como referido neste documento é, preferivelmente, um mamífero. Mamíferos incluem, mas não estão limitados a, animais domesticados (por exemplo, vacas, ovelhas, gatos, cães e cavalos), primatas (por exemplo, humanos e primatas não humanos, como macacos), coelhos e roedores (por exemplo, camundongos e ratos). Preferivelmente, o paciente é um paciente humano.

[00075] Preferivelmente, o paciente a ser testado é de qualquer idade, mais preferencialmente, o paciente a ser testado tem 50 anos ou mais, mais preferencialmente, 60 anos ou mais e, mais preferencialmente, 65 anos ou mais. Além disso, é previsto que o paciente a ser testado tenha 70 anos de idade ou mais.

[00076] Além disso, é previsto que o paciente a ser testado tenha 75 anos de idade ou mais. Além disso, o paciente pode ter entre 50 e 90 anos.

[00077] Em uma modalidade preferida do método de avaliação da fibrilação atrial, o paciente a ser testado deve sofrer de fibrilação atrial.

Consequentemente, o paciente deve ter um histórico conhecido de fibrilação atrial. Assim, o paciente deve ter experimentado episódios de fibrilação atrial antes de obter a amostra de teste, e pelo menos um dos episódios anteriores de fibrilação atrial deve ter sido diagnosticado, por exemplo, por ECG. Por exemplo, considera-se que o paciente sofre de fibrilação atrial, se a avaliação da fibrilação atrial é a diferenciação entre fibrilação atrial paroxística e persistente, ou se a avaliação da fibrilação atrial é a previsão de um risco de um evento adverso associado à atrial fibrilação, ou se a avaliação da fibrilação atrial é a avaliação de uma terapia para a fibrilação atrial.

[00078] Em outra modalidade preferida do método de avaliação da fibrilação atrial, o paciente a ser testado é suspeito de sofrer de fibrilação atrial, por exemplo, se a avaliação da fibrilação atrial é o diagnóstico de fibrilação atrial ou a identificação de um paciente que deverá ser submetido a eletrocardiografia (ECG).

[00079] Preferivelmente, um paciente que é suspeito de sofrer de fibrilação atrial é um paciente que mostrou pelo menos um sintoma de fibrilação atrial antes de se realizar o método para avaliar a fibrilação atrial. Esses sintomas são geralmente transitórios, podem surgir em alguns segundos e desaparecer com a mesma rapidez. Os sintomas de fibrilação atrial incluem tonturas, desmaios, falta de ar e, em particular, palpitações cardíacas. Preferivelmente, o paciente apresentou pelo menos um sintoma de fibrilação atrial nos seis meses anteriores à obtenção da amostra.

[00080] Alternativamente ou adicionalmente, um paciente com suspeita de sofrer de fibrilação atrial deve ser um paciente com 70 anos de idade ou mais.

[00081] Preferivelmente, o paciente que é suspeito de sofrer de fibrilação atrial não deve ter histórico conhecido de fibrilação atrial.

[00082] De acordo com a presente invenção, um paciente sem histórico conhecido de fibrilação atrial é, preferivelmente, um paciente que não foi diagnosticado como sofrendo de fibrilação atrial anteriormente, isto é, antes de se realizar o método da presente invenção (em particular antes de se obter a amostra do paciente). No entanto, o paciente pode ou não ter tido episódios anteriores de fibrilação atrial não diagnosticados.

[00083] Preferivelmente, o termo "fibrilação atrial" refere-se a todos os tipos de fibrilação atrial. Consequentemente, o termo preferencialmente engloba fibrilação atrial paroxística, persistente ou permanente.

[00084] Em uma modalidade da presente invenção, no entanto, o paciente a ser testado não sofre de fibrilação atrial permanente. Nesta modalidade, o termo "fibrilação atrial" refere-se somente a fibrilação atrial paroxística e persistente.

[00085] Em outra modalidade da presente invenção, no entanto, o paciente a ser testado não sofre de fibrilação atrial paroxística e permanente.

Nesta modalidade, o termo "fibrilação atrial" refere-se somente a fibrilação atrial persistente.

[00086] Como estabelecido acima, os biomarcadores de TFPI-2 podem ser aumentados em várias doenças e distúrbios diferentes da fibrilação atrial. Em uma modalidade da presente invenção, prevê-se que o paciente não sofra de tais doenças e distúrbios. Por exemplo, prevê-se que o paciente não sofra de câncer e/ou pancreatite. e que não esteja grávida.

[00087] O paciente a ser testado pode ou não apresentar episódios de fibrilação atrial quando a amostra é obtida. Assim, em uma modalidade preferida da avaliação da fibrilação atrial (tal como no diagnóstico de fibrilação atrial), o paciente não experimenta episódios de fibrilação atrial quando a amostra é obtida. Por conseguinte, o paciente deve ter um ritmo sinusal normal quando a amostra é obtida (e deve estar em ritmo sinusal). Assim, o diagnóstico de fibrilação atrial é possível mesmo na ausência (temporária) de fibrilação atrial.

De acordo com o método da presente invenção, a elevação dos biomarcadores, como referido neste documento, deve ser preservada após o episódio de Fibrilação Atrial e, assim, fornecer um diagnóstico de um paciente que sofreu de Fibrilação Atrial. Preferivelmente, o diagnóstico de FA ocorre em cerca de três dias, em cerca de um mês, em cerca de três meses, ou em cerca de 6 meses após a realização do método da presente invenção (ou para ser mais preciso após a amostra ter sido obtida). Em uma modalidade preferida, o diagnóstico de

Fibrilação Atrial dentro de cerca de seis meses após o episódio é viável. Em uma modalidade preferida, o diagnóstico de Fibrilação Atrial dentro de cerca de seis meses após o episódio é viável. Por conseguinte, a avaliação da fibrilação atrial, conforme referido neste documento, em particular o diagnóstico, a previsão do risco ou a diferenciação, conforme referido aqui, em conexão com a avaliação da fibrilação atrial, é preferencialmente realizada após cerca de três dias, mais preferencialmente após cerca de um mês, ainda mais preferencialmente após cerca de três meses, e mais preferencialmente após cerca de seis meses após o último episódio de fibrilação atrial. Consequentemente, é considerado que a amostra a ser testada é preferencialmente obtida após cerca de três dias, mais preferencialmente após cerca de um mês, ainda mais preferencialmente após cerca de três meses, e mais preferencialmente após cerca de seis meses após o último episódio de fibrilação atrial. Consequentemente, o diagnóstico de fibrilação atrial preferencialmente também abrange o diagnóstico de episódios de fibrilação atrial que ocorreram preferencialmente em cerca de três dias, mais preferencialmente em cerca de três meses, e mais preferencialmente em cerca de seis meses antes da amostra ser obtida.

[00088] No entanto, também prevê-se que o paciente experimente episódios de fibrilação atrial quando a amostra for obtida (por exemplo, com relação à previsão de acidente vascular cerebral).

[00089] O método da presente invenção também pode ser usado para a triagem de populações maiores de pacientes. Portanto, prevê-se que pelo menos 100 pacientes, em particular pelo menos 1000 pacientes, sejam avaliados em relação à fibrilação atrial. Assim, a quantidade do biomarcador é determinada em amostras de pelo menos 100, ou em particular de pelo menos 1000 pacientes. Além disso, é previsto que pelo menos 10.000 pacientes sejam avaliados.

[00090] O termo "amostra" refere-se a uma amostra de um fluido corporal, a uma amostra de células separadas ou a uma amostra de um tecido ou órgão. Amostras de fluidos corporais podem ser obtidas por técnicas bem conhecidas e incluem amostras de sangue, plasma, soro, urina, fluido linfático, escarro, ascite ou qualquer outra secreção ou derivado corporal. As amostras de tecido ou órgão podem ser obtidas de qualquer tecido ou órgão por, por exemplo, biópsia. As células separadas podem ser obtidas a partir de fluidos corporais, tecidos ou órgãos por técnicas de separação, tais como centrifugação ou classificação celular. Por exemplo, amostras de células, tecidos ou órgãos podem ser obtidas dessas células, tecidos ou órgãos que expressam ou produzem o biomarcador. A amostra pode ser congelada, fresca, fixa (por exemplo, fixada em formalina), centrifugada e/ou embebida (por exemplo, em parafina), etc. A amostra de células pode, é claro, ser submetida a uma variedade de preparativos pós-coleta bem conhecidos e técnicas de armazenamento (por exemplo, extração de ácido nucleico e/ou proteína, fixação, armazenamento, congelamento, ultrafiltração, concentração, evaporação, centrifugação, etc.) antes de avaliar a quantidade do(s) biomarcador(es) na amostra.

[00091] Em uma modalidade preferida da presente invenção, a amostra é uma amostra de sangue (isto é, sangue total), soro ou plasma. Soro é a fração líquida do sangue total obtida após a coagulação do sangue. Para obter o soro, o coágulo é removido por centrifugação e o sobrenadante é coletado. Plasma é a porção de líquido acelular do sangue. Para obter uma amostra de plasma, o sangue total é coletado em tubos tratados com anticoagulante (por exemplo, tubos tratados com citrato ou EDTA). As células são removidas da amostra por centrifugação e o sobrenadante (isto é, a amostra de plasma) é obtido.

[00092] Conforme estabelecido acima, o paciente pode estar em ritmo sinusal ou pode sofrer de um episódio de ritmo de FA no momento em que a amostra é obtida.

[00093] TFPI-2 (inibidor da via do fator tecidual 2) é bem conhecido na técnica. A proteína é um membro da família de inibidores da serina proteinase do tipo Kunitz. A proteína pode inibir uma variedade de serina proteases incluindo fator VIIa/fator tecidual, fator Xa, plasmina, tripsina, quimotripsina e calicreína plasmática.

[00094] O gene do biomarcador TFPI-2 está localizado no cromossomo humano 7q22 e é um inibidor da serina proteinase do tipo Kunitz associado à matriz de 32 kDa que consiste em uma região curta amino terminal, três domínios tandem do tipo Kunitz e uma cauda carbóxi terminal carregada positivamente. A proteína pode inibir uma variedade de serina proteases incluindo fator VIIa/fator tecidual, fator Xa, plasmina, tripsina, quimotripsina e calicreína plasmática. Esse gene foi identificado como um gene supressor de tumor em vários tipos de câncer.

[00095] Em uma modalidade preferida da presente invenção, a quantidade do polipeptídeo TFPI-2 humano é determinada em uma amostra do paciente. A sequência do polipeptídeo TFPI-2 humano é bem conhecida na técnica e pode, por exemplo, ser avaliada através do banco de dados da Uniprot, vide UniProtKB - P48307 (TFPI2_HUMAN).

[00096] Em humanos, o gene TFPI-2 é mapeado para o cromossomo 7 na região 7q22. O gene TFPI-2 humano abrange 8164 bases de nucleotídeos e consiste em cinco éxons e quatro íntrons. Cada domínio do tipo Kunitz é codificado por um único éxon. O gene TFPI-2 humano não contém éxons adicionais na região flanqueadora 5', ou éxons que codificam as regiões de conexão presentes entre os domínios do tipo Kunitz. Embora o TFPI-2 tenha um sítio de terminação de transcrição de aproximadamente 390 bp a jusante (+4321) do códon de terminação (TAA), existem três sítios de iniciação de transcrição localizados 75 bp (13), 56 bp (11) e 38 bp a montante do sítio de início de tradução (ATG).

[00097] O splicing alternativo resulta em múltiplas variantes de transcrição de TFPI-2. Este gene tem 3 transcritos (variantes de splice), 91 ortólogos e 8 parálogos.

[00098] Em uma modalidade preferida, a quantidade da isoforma 1 do transcrito de TFPI-2 é determinada, isto é, a isoforma 1 tendo uma sequência como mostrado sob o número de acesso ENST00000222543.9.

[00099] Em outra modalidade preferida, a quantidade da isoforma 2 do transcrito de TFPI-2 é determinada, isto é, a isoforma 2 tendo uma sequência como mostrado sob o número de acesso ENST00000451238.1.

[000100] Em outra modalidade preferida, a quantidade da isoforma 3 do transcrito de TFPI-2 é determinada, isto é, a isoforma 3 tendo uma sequência como mostrado sob o número de acesso ENST00000461482.1 (http://www.ensembl.org).

[000101] Em outra modalidade preferida, a quantidade das isoformas 1, 2 e 3 do transcrito de TFPI-2 é determinada, isto é, TFPI-2 total.

[000102] O termo “peptídeo natriurético” compreende peptídeo natriurético atrial (ANP) e peptídeos do tipo peptídeo natriurético cerebral (BNP).

Assim, os peptídeos natriuréticos de acordo com a presente invenção compreendem peptídeos do tipo ANP e tipo BNP e variantes dos mesmos (vide, por exemplo, Bonow RO. et al., Circulation 1996; 93:1946-1950).

[000103] Os peptídeos do tipo ANP compreendem pré-pró-ANP, pró- ANP, NT-pró-ANP e ANP.

[000104] Os peptídeos do tipo BNP compreendem pré-pró-BNP, pró- BNP, NT-pró-BNP e BNP.

[000105] O pré-pró-peptídeo (134 aminoácidos no caso do pré-pró- BNP) compreende um peptídeo sinal curto, que é enzimaticamente clivado para liberar o pró-peptídeo (108 aminoácidos no caso do pró-BNP). O pró-peptídeo é ainda clivado em um pró-peptídeo N-terminal (NT-pró-peptídeo, 76 aminoácidos no caso de NT-pró-BNP) e no hormônio ativo (32 aminoácidos no caso do BNP, 28 aminoácidos no caso de ANP).

[000106] Os peptídeos natriuréticos preferidos de acordo com a presente invenção são NT-pró-ANP, ANP, NT-pró-BNP e BNP. ANP e BNP são os hormônios ativos e têm meia-vida mais curta do que seus respectivos homólogos inativos, NT-pró-ANP e NT-pró-BNP. O BNP é metabolizado no sangue, enquanto o NT-pró-BNP circula no sangue como uma molécula intacta e, como tal, é eliminado por via renal.

[000107] Os peptídeos natriuréticos mais preferidos de acordo com a presente invenção são NT-pró-BNP e BNP, em particular NT-pró-BNP.

Conforme brevemente discutido acima, o NT-pró-BNP humano como referido de acordo com a presente invenção é um polipeptídeo compreendendo, preferencialmente, 76 aminoácidos de comprimento correspondendo à porção N-terminal da molécula de NT-pró-BNP humana. A estrutura do BNP e do NT- pró-BNP humanos foi descrita em detalhes no estado da técnica, por exemplo, WO 02/089657, WO 02/083913, e Bonow RO. Et al., New Insights into the cardio natriuretic peptides. Circulation 1996;93: 1946-1950. Preferivelmente, NT-pró- BNP humano, conforme usado neste documento, é NT-pró-BNP humano, conforme divulgado em EP 0 648 228 B1.

[000108] A IGFBP-7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina) é uma glicoproteína modular de 30 kDa que é secretada por células endoteliais, células musculares lisas vasculares, fibroblastos e células epiteliais (Ono, Y., et al., Biochem Biophys Res Comm 202 (1994) 1490- 1496). Preferivelmente, o termo "IGFBP-7" refere-se a IGFBP-7 humana. A sequência da proteína é bem conhecida na técnica e é, por exemplo, acessível por meio da UniProt (Q16270, IBP7_HUMAN) ou por meio do GenBank (NP_001240764.1). Uma definição detalhada do biomarcador IGFBP-7 é, por exemplo, fornecida no documento WO 2008/089994, que é incorporado no presente documento por referência em sua totalidade. Existem duas isoformas de IGFBP-7, Isoforma 1 e 2, que são produzidas por splicing alternativo. Em uma modalidade da presente invenção, a quantidade total de ambas as isoformas é medida (para a sequência, vide entrada do banco de dados da UniProt (Q16270- 1 e Q16270-2).

[000109] O biomarcador da molécula específica da célula endotelial 1 (abreviada ESM-1) é bem conhecido na técnica. O biomarcador é frequentemente também referido como endocan. ESM-1 é uma proteína secretada que se expressa principalmente nas células endoteliais do pulmão humano e tecidos renais. Dados de domínio público sugerem expressão também na tireoide, pulmão e rim, mas também no tecido cardíaco vide, por exemplo, a entrada para ESM-1 no banco de dados Protein Atlas (Uhlén M. et al., Science 2015; 347(6220): 1260419). A expressão desse gene é regulada por citocinas.

ESM-1 é um proteoglicano composto por um polipeptídeo maduro de 20 kDa e uma cadeia de glicano ligada a O de 30 kDa (Bechard D et al., J Biol Chem 2001; 276 (51): 48341-48349).

[000110] Em uma modalidade preferida da presente invenção, a quantidade do polipeptídeo ESM-1 humano é determinada em uma amostra do paciente. A sequência do polipeptídeo ESM-1 humano é bem conhecida na técnica (vide, por exemplo, Lassale P. et al., J. Biol. Chem. 1996; 271:20458- 20464) e pode ser avaliada, por exemplo, através do banco de dados Uniprot, vide entrada Q9NQ30 (ESM1_HUMAN). Duas isoformas de ESM-1 são produzidas por splicing alternativo, a isoforma 1 (tendo o identificador Q9NQ30- 1 da Uniprot) e isoforma 2 (tendo o identificador Q9NQ30-2 da Uniprot). A isoforma 1 tem comprimento de 184 aminoácidos. Na isoforma 2, os aminoácidos 101 a 150 da isoforma 1 estão ausentes. Os aminoácidos 1 a 19 formam o peptídeo sinal (que pode ser clivado).

[000111] Em uma modalidade preferida, a quantidade da isoforma 1 do polipeptídeo ESM-1 é determinada, isto é, a isoforma 1 tendo uma sequência conforme mostrado sob o número de acesso da UniProt Q9NQ30-1.

[000112] Em outra modalidade preferida, a quantidade da isoforma 2 do polipeptídeo ESM-1 é determinada, isto é, a isoforma 2 tendo uma sequência conforme mostrado sob o número de acesso da UniProt Q9NQ30-2.

[000113] Em outra modalidade preferida, a quantidade da isoforma- 1 e isoforma 2 do polipeptídeo ESM-1 é determinada, isto é, ESM-1 total.

[000114] Por exemplo, a quantidade de ESM-1 pode ser determinada com um anticorpo monoclonal (tal como um anticorpo de camundongo) contra os aminoácidos 85 a 184 do polipeptídeo ESM-1 e/ou com um anticorpo policlonal de cabra.

[000115] O biomarcador Angiopoietina-2 (abreviada "Ang-2", frequentemente também chamada de ANGPT2) é bem conhecido na técnica. É um antagonista de ocorrência natural para Ang-1 e TIE2 (vide, por exemplo, Maisonpierre, et al., Science 277 (1997) 55-60). A proteína pode induzir a fosforilação da tirosina de TEK/TIE2 na ausência de ANG-1. Na ausência de indutores angiogênicos, tais como o VEGF, o afrouxamento mediado por ANG2 dos contatos da matriz celular pode induzir apoptose celular endotelial com consequente regressão vascular. Em conjunto com o VEGF, ele pode facilitar a migração e proliferação de células endoteliais, servindo assim como um sinal angiogênico permissivo. A sequência da Angiopoietina humana é bem conhecida na técnica. A Uniprot lista três isoformas da Angiopoietina-2: Isoforma 1 (identificador Uniprot: O15123-1), Isoforma 2 (identificador: O15123-2) e Isoforma 3 (O15123-3). Em uma modalidade preferida, é determinada a quantidade total de Angiopoietina-2. A quantidade total é, preferivelmente, a soma das quantidades de Angiopoietina-2 complexada e livre.

[000116] O termo "determinar" a quantidade de um biomarcador,

conforme referido neste documento (tal como TFPI-2 ou o peptídeo natriurético), refere-se à quantificação do biomarcador, por exemplo, medir o nível do biomarcador na amostra, empregando métodos apropriados de detecção descritos em outro lugar neste documento. Os termos "medir" e "determinar" são usados no documento de forma intercambiável.

[000117] Em uma modalidade, a quantidade de um biomarcador é determinada por colocar a amostra em contato com um agente que especificamente se liga ao biomarcador, formando assim um complexo entre o agente e o referido biomarcador, detectando a quantidade de complexo formado e, assim, medindo a quantidade do referido biomarcador.

[000118] Os biomarcadores conforme referidos no presente documento (tais como TFPI-2) podem ser detectados usando métodos geralmente conhecidos na técnica. Os métodos de detecção geralmente abrangem métodos para quantificar a quantidade de um biomarcador na amostra (método quantitativo). É geralmente conhecido pelo especialista na técnica quais dos seguintes métodos são adequados para a detecção qualitativa e/ou quantitativa de um biomarcador. As amostras podem ser convenientemente analisadas para, por exemplo, proteínas usando Westerns e imunoensaios, tais como ELISAs, RIAs, imunoensaios baseados em fluorescência e luminescência e ensaios de extensão por proximidade, que estão disponíveis comercialmente.

Outros métodos adequados para detectar biomarcadores incluem medir uma propriedade física ou química específica para o peptídeo ou polipeptídeo, tal como sua massa molecular precisa ou espectro de RMN. Os referidos métodos compreendem, por exemplo, biossensores, dispositivos ópticos acoplados a imunoensaios, biochips, dispositivos analíticos, tais como espectrômetros de massa, analisadores de RMN ou dispositivos de cromatografia. Além disso, os métodos incluem métodos baseados em microplacas ELISA, imunoensaios totalmente automatizados ou robóticos (disponíveis, por exemplo, nos analisadores ElecsysTM), CBA (um ensaio enzimático de ligação de cobalto, disponível por exemplo nos analisadores Roche-HitachiTM) e ensaios de aglutinação de látex (disponível, por exemplo, nos analisadores Roche- HitachiTM).

[000119] Para a detecção de proteínas de biomarcadores, como referido no presente documento, está disponível uma ampla gama de técnicas de imunoensaio usando esse formato de ensaio, vide, por exemplo, patentes de nº 4.016.043, 4.424.279 e 4.018.653. Isso inclui ensaios de local único e de dois locais ou "sanduíche" dos tipos não competitivos, bem como nos ensaios de ligação competitivos tradicionais. Estes ensaios também incluem a ligação direta de um anticorpo marcado a um biomarcador alvo.

[000120] Os métodos que empregam marcadores eletroquimiluminescentes são bem conhecidos. Tais métodos usam a capacidade de complexos metálicos especiais para alcançar, por meio de oxidação, um estado excitado a partir do qual eles decaem para o estado fundamental, emitindo eletroquimiluminescência. Para revisão, vide Richter, M.

M., Chem. Rev. 2004; 104: 3003-3036.

[000121] Em uma modalidade, o anticorpo de detecção (ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) a ser usado para medir a quantidade de um biomarcador é rutenilado ou iridinilado. Por conseguinte, o anticorpo (ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) deve compreender um marcador de rutênio. Em uma modalidade, o referido marcador de rutênio é um complexo de bipiridina-rutênio (II). Ou o anticorpo (ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) deve compreender um marcador de irídio. Em uma modalidade, o referido marcador de irídio é um complexo, conforme divulgado no documento WO 2012/107419.

[000122] Em uma modalidade do ensaio em sanduíche para a determinação de TFPI-2, o ensaio compreende um primeiro anticorpo monoclonal biotinilado que especificamente se liga a TFPI-2 (como anticorpo de captura) e um fragmento F(ab`)2 rutenilado de um segundo anticorpo monoclonal que especificamente se liga a TFPI-2 como anticorpo de detecção.

Os dois anticorpos formam complexos de imunoensaio em sanduíche com TFPI- 2 na amostra.

[000123] Em uma modalidade do ensaio em sanduíche para a determinação do peptídeo natriurético, o ensaio compreende um primeiro anticorpo monoclonal biotinilado que especificamente se liga ao peptídeo natriurético (como anticorpo de captura) e um fragmento F(ab`)2 rutenilado de um segundo anticorpo monoclonal que especificamente se liga ao peptídeo natriurético (como anticorpo de detecção). Os dois anticorpos formam complexos de imunoensaio em sanduíche com o peptídeo natriuréticona amostra.

[000124] Medir a quantidade de um polipeptídeo (tal como TFPI-2 ou o peptídeo natriurético) pode, preferivelmente, compreender as etapas de (a) colocar o polipeptídeo em contato com um agente que especificamente se liga ao referido polipeptídeo, (b) (opcionalmente) remover o agente não ligado, (c) medir a quantidade de agente de ligação ligado, isto é, o complexo do agente formado na etapa (a). De acordo com uma modalidade preferida, as referidas etapas de colocar em contato, remover e medir podem ser realizadas por uma unidade analisadora. De acordo com algumas modalidades, as referidas etapas podem ser executadas por uma única unidade analisadora do referido sistema ou por mais de uma unidade analisadora em comunicação operacional entre si.

Por exemplo, de acordo com uma modalidade específica, o referido sistema divulgado neste documento pode incluir uma primeira unidade analisadora para executar as referidas etapas de colocar em contato e remover e uma segunda unidade de analisador, conectada operacionalmente à referida primeira unidade analisadora por uma unidade de transporte (por exemplo, um braço robótico), que executa a referida etapa de medir.

[000125] O agente que especificamente se liga ao biomarcador (aqui também referido como "agente de ligação") pode ser acoplado covalentemente ou não covalentemente a um marcador que permite a detecção e medição do agente ligado.

A marcação pode ser feita por métodos diretos ou indiretos.

A marcação direta envolve o acoplamento direto do marcador (covalentemente ou não covalentemente) ao agente de ligação.

A marcação indireta envolve a ligação (covalentemente ou não covalentemente) de um agente de ligação secundário ao primeiro agente de ligação.

O agente de ligação secundário deve especificamente se ligar ao primeiro agente de ligação.

O referido agente de ligação secundário pode ser acoplado a um marcador adequado e/ou ser o alvo

(receptor) de um agente de ligação terciário que se liga ao agente de ligação secundário.

Agentes de ligação secundários e de ordem superior adequados podem incluir anticorpos, anticorpos secundários e o bem conhecido sistema estreptavidina-biotina (Vector Laboratories, Inc.). O agente de ligação ou substrato também pode ser "etiquetado" com uma ou mais etiquetas, como conhecido na técnica.

Tais etiquetas podem então ser alvos para agentes de ligação de ordem superior.

As etiquetas adequadas incluem biotina,

digoxigenina, etiqueta His, glutationa-S-transferase, FLAG, GFP, etiqueta myc,

hemaglutinina (HA) do vírus influenza A (HA), proteína de ligação à maltose e similares.

No caso de um peptídeo ou polipeptídeo, a etiqueta está,

preferivelmente, no terminal N e/ou terminal C.

Marcadores adequados são quaisquer marcadores detectáveis por um método de detecção apropriado.

Os marcadores típicos incluem partículas de ouro, contas de látex, éster acridan,

luminol, complexos de rutênio, complexos de irídio, marcadores enzimaticamente ativos, marcadores radioativas, marcadores magnéticos ("por exemplo, contas magnéticas", incluindo marcadores paramagnéticos e superparamagnéticos) e marcadores fluorescentes.

Os marcadores enzimaticamente ativos incluem, por exemplo, peroxidase do rábano silvestre,

fosfatase alcalina, beta-Galactosidase, Luciferase e derivados dos mesmos.

Substratos adequados para detecção incluem diaminobenzidina (DAB), 3,3'-5,5'- tetrametilbenzidina, NBT-BCIP (cloreto azul de 4-nitro tetrazólio e 5-bromo-4- cloro-3-indolil-fosfato, disponível como solução de estoque pronta da Roche Diagnostics), CDP-Star™ (Amersham Bio-sciences), ECF™ (Amersham Biosciences). Uma combinação enzima-substrato adequada pode resultar em um produto de reação colorido, fluorescência ou quimioluminescência, que pode ser determinado de acordo com métodos conhecidos na técnica (por exemplo, usando um filme sensível à luz ou um sistema de câmera adequado). Quanto à medição da reação enzimática, os critérios dados acima se aplicam analogamente. Os marcadores fluorescentes típicos incluem proteínas fluorescentes (tais como GFP e seus derivados), Cy3, Cy5, Texas Red, Fluoresceína e os corantes Alexa (por exemplo, Alexa 568). Estão disponíveis marcadores fluorescentes adicionais, por exemplo, da Molecular Probes (Oregon). Também é contemplado o uso de pontos quânticos como marcadores fluorescentes. Um marcador radioativo pode ser detectado por qualquer método conhecido e apropriado, por exemplo, um filme sensível à luz ou um gerador de imagens de fósforo.

[000126] A quantidade de um polipeptídeo pode ser, também preferivelmente, determinada da seguinte forma: (a) colocar um suporte sólido compreendendo um agente de ligação para o polipeptídeo, conforme descrito neste documento em outro lugar, em contato com uma amostra compreendendo o peptídeo ou polipeptídeo e (b) medir a quantidade de peptídeo ou polipeptídeo que está ligado ao suporte. Os materiais para os suportes de fabricação são bem conhecidos na técnica e incluem, mas não estão limitados a, materiais de coluna disponíveis comercialmente, contas de poliestireno, contas de látex, contas magnéticas, partículas de metal coloidal, lascas e superfícies de vidro e/ou silício, tiras de nitrocelulose, membranas, folhas, duracitos, poços e paredes de bandejas de reação, tubos de plástico etc.

[000127] Em ainda um aspecto, a amostra é removida do complexo formado entre o agente de ligação e do pelo menos um marcador antes da medição da quantidade de complexo formado. Por conseguinte, em um aspecto, o agente de ligação pode ser imobilizado em um suporte sólido. Ainda em um aspecto, a amostra pode ser removida do complexo formado no suporte sólido aplicando uma solução de lavagem.

[000128] "Ensaios sanduíche" estão entre os ensaios mais úteis e comumente usados, abrangendo uma série de variações da técnica de ensaio sanduíche. Em suma, em um ensaio típico, um agente de ligação não marcado (captura) é imobilizado ou pode ser imobilizado em um substrato sólido, e a amostra a ser testada é colocada em contato com o agente de ligação de captura. Após um período adequado de incubação, por um período de tempo suficiente para permitir a formação de um complexo agente de ligação- biomarcador, um segundo agente de ligação (detecção) marcado com uma molécula repórter capaz de produzir um sinal detectável é então adicionado e incubado, permitindo tempo suficiente para a formação de outro complexo de agente de ligação-agente de ligação marcado com biomarcador. Qualquer material que não reagiu pode ser lavado e a presença do biomarcador é determinada pela observação de um sinal produzido pela molécula repórter ligada ao agente de ligação de detecção. Os resultados podem ser qualitativos, por simples observação de um sinal visível, ou podem ser quantificados por comparação com uma amostra de controle contendo quantidades conhecidas de biomarcador.

[000129] As etapas de incubação de um ensaio sanduíche típico podem variar conforme necessário e apropriado. Tais variações incluem, por exemplo, incubações simultâneas, nas quais dois ou mais agentes de ligação e biomarcadores são coincubados. Por exemplo, ambos a amostra a ser analisada e um agente de ligação marcado são adicionados simultaneamente a um agente de ligação de captura imobilizado. Também é possível primeiro incubar a amostra a ser analisada e um agente de ligação marcado e depois adicionar um anticorpo ligado a uma fase sólida ou capaz de se ligar a uma fase sólida.

[000130] O complexo formado entre um agente de ligação específico e o biomarcador deve ser proporcional à quantidade do biomarcador presente na amostra. Será entendido que a especificidade e/ou sensibilidade do agente de ligação a ser aplicado define o grau de proporção de pelo menos um marcador compreendido na amostra que é capaz de ser especificamente ligado. Detalhes adicionais sobre como a medição pode ser realizada também são encontrados em outras partes deste documento. A quantidade de complexo formado deve ser transformada em uma quantidade do biomarcador que reflete a quantidade realmente presente na amostra.

[000131] Os termos "agente de ligação", "agente de ligação específico", "agente de ligação específico do analito", "agente de detecção" e "agente que especificamente se liga a um biomarcador" são usados aqui de forma intercambiável. Preferivelmente, referem-se a um agente que compreende uma fração de ligação que especificamente se liga ao biomarcador correspondente. Exemplos de "agentes de ligação", "agentes de detecção", "agentes" são uma sonda de ácido nucleico, iniciador de ácido nucleico, molécula de DNA, molécula de RNA, aptâmero, anticorpo, fragmento de anticorpo, peptídeo, ácido nucleico peptídico (APN) ou composto químico. Um agente preferido é um anticorpo que especificamente se liga ao biomarcador a ser determinado. O termo "anticorpo" aqui é usado no sentido mais amplo e abrange várias estruturas de anticorpos, incluindo, mas não limitados a, anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos) e fragmentos de anticorpos, desde que exibam a atividade de ligação ao antígeno desejada (isto é, fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos). Preferivelmente, o anticorpo é um anticorpo policlonal (ou um fragmento de ligação ao antígeno a partir do mesmo). Mais preferencialmente, o anticorpo é um anticorpo monoclonal (ou, portanto, um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo). Além disso, como descrito no presente documento em outra parte, prevê-se o uso de dois anticorpos monoclonais que se ligam em diferentes posições de TFPI-2 (em um imunoensaio em sanduíche). Assim, pelo menos um anticorpo é usado para a determinação da quantidade de TFPI-2

[000132] Em uma modalidade, o pelo menos um anticorpo é um anticorpo monoclonal de camundongo. Em outra modalidade, o pelo menos um anticorpo é um anticorpo monoclonal de coelho. Em uma outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo policlonal de cabra. Em ainda outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo policlonal de ovelha.

[000133] O termo "ligação específica" ou "especificamente se liga" refere-se a uma reação de ligação em que as moléculas de pares de ligação exibem uma ligação entre si em condições em que significativamente não se ligam a outras moléculas. O termo "ligação específica" ou "especificamente se liga", ao se referir a uma proteína ou peptídeo como biomarcador, refere-se, preferivelmente, a uma reação de ligação em que um agente de ligação se liga ao biomarcador correspondente com uma afinidade (Ka "constante de associação") de pelo menos 107 M-1. O termo "ligação específica" ou "especificamente se liga" refere-se, preferivelmente, a uma afinidade de pelo menos 108 M-1 ou, ainda mais preferivelmente, de pelo menos 109 M-1 para sua molécula alvo. O termo "específico" ou "especificamente" é usado para indicar que outras moléculas presentes na amostra não se ligam significativamente ao agente de ligação específico para a molécula alvo.

[000134] Em uma modalidade, o método da presente invenção é baseado na detecção de um complexo de proteínas compreendendo TFPI-2 humano e um agente de ligação específica de TFPI-2 não humano ou quimérico.

Em tal modalidade, a presente invenção lê um método para avaliar a fibrilação atrial em um paciente, o referido método compreendendo as etapas de (a) incubar uma amostra do referido paciente com um agente de ligação específica de TFPI-2 não humano (b) medir o complexo entre o agente de ligação específica de TFPI-2 e TFPI-2 formado em (a), e (c) comparar o complexo da quantidade medida a uma quantidade de referência. Uma quantidade do complexo igual ou acima da quantidade de referência é indicativa para o diagnóstico (e, portanto, a presença) de fibrilação atrial, a presença de fibrilação atrial persistente, um paciente que deverá ser submetido a ECG, ou um paciente que está em risco de um evento adverso. Uma quantidade do complexo abaixo da quantidade de referência é indicativa de ausência de fibrilação atrial; a presença de fibrilação atrial paroxística, um paciente que não deve ser submetido a ECG, ou um paciente que não está em risco de um evento adverso.

[000135] O termo "quantidade", conforme usado neste documento, abrange a quantidade absoluta de um biomarcador, conforme referido neste documento (tal como TFPI-2 ou o peptídeo natriurético), a quantidade relativa ou concentração do referido biomarcador, bem como qualquer valor ou parâmetro que se correlaciona com o mesmo ou pode ser derivado disso. Tais valores ou parâmetros compreendem valores de sinal de intensidade de todas as propriedades físicas ou químicas específicas obtidas dos referidos peptídeos por medições diretas, por exemplo, valores de intensidade em espectros de massa ou espectros de RMN. Além disso, estão incluídos todos os valores ou parâmetros que são obtidos por medições indiretas especificadas em outras partes desta descrição, por exemplo, quantidades de resposta determinadas a partir de sistemas de leitura biológica em resposta aos peptídeos ou sinais de intensidade obtidos a partir de ligantes especificamente ligados. Deve ser entendido que os valores correlacionados com as quantidades ou parâmetros acima mencionados também podem ser obtidos por todas as operações matemáticas padrão.

[000136] O termo "comparar", conforme usado neste documento, refere-se à comparação da quantidade do biomarcador (tal como TFPI-2 e o peptídeo natriurético como NT-proBNP ou BNP) na amostra do paciente à quantidade de referência do biomarcador especificado em outra parte desta descrição. Deve ser entendido que comparar, conforme usado neste documento, geralmente refere-se a uma comparação dos parâmetros ou valores correspondentes, por exemplo, uma quantidade absoluta é comparada a uma quantidade de referência absoluta enquanto uma concentração é comparada a uma concentração de referência ou um sinal de intensidade obtido do biomarcador em uma amostra é comparado ao mesmo tipo de sinal de intensidade obtido a partir de uma amostra de referência. A comparação pode ser realizada manualmente ou assistida por computador. Assim, a comparação pode ser realizada por um dispositivo de computação. O valor da quantidade determinada ou detectada do biomarcador na amostra do paciente e a quantidade de referência pode ser, por exemplo, comparado entre si e a referida comparação pode ser realizada automaticamente por um programa de computador que executa um algoritmo para a comparação. O programa de computador que realiza a referida avaliação fornecerá a avaliação desejada em um formato de saída adequado. Para uma comparação assistida por computador, o valor da quantidade determinada pode ser comparado aos valores correspondentes a referências adequadas que são armazenadas em um banco de dados por um programa de computador. O programa de computador pode avaliar ainda mais o resultado da comparação, ou seja, fornecer automaticamente a avaliação desejada em um formato de saída adequado. Para uma comparação assistida por computador, o valor da quantidade determinada pode ser comparado aos valores correspondentes a referências adequadas que são armazenadas em um banco de dados por um programa de computador. O programa de computador pode avaliar ainda mais o resultado da comparação, ou seja, fornecer automaticamente a avaliação desejada em um formato de saída adequado.

[000137] De acordo com a presente invenção, a quantidade do biomarcador TFPI-2 e, opcionalmente, a quantidade do peptídeo natriurético devem ser comparadas a uma referência. Por conseguinte, a referência é, preferivelmente, uma quantidade de referência. O termo "quantidade de referência" é bem entendido pelo técnico no assunto. Deve ser entendido que a quantidade de referência deve permitir a avaliação descrita neste documento de fibrilação atrial. Por exemplo, em conexão ao método para prever o risco de acidente vascular cerebral, a quantidade de referência refere-se, preferivelmente, a uma quantidade que permite a alocação de um paciente no (i) grupo de pacientes que sofrem de fibrilação atrial ou (ii) no grupo de pacientes que não sofrem de fibrilação atrial. Uma quantidade de referência adequada pode ser determinada a partir de uma amostra de referência a ser analisada em conjunto, isto é, simultaneamente ou subsequentemente, com a amostra de teste.

[000138] Deve ser entendido que a quantidade de TFPI-2 é comparada a uma quantidade de referência para TFPI-2, enquanto a quantidade do peptídeo natriurético é comparada a uma quantidade de referência do peptídeo natriurético. Se as quantidades de dois marcadores forem determinadas, também prevê-se que uma pontuação combinada seja calculada com base nas quantidades de TFPI-2 e de pelo menos um biomarcador adicional. Em uma etapa subsequente, a pontuação é comparada a uma pontuação de referência.

[000139] As quantidades de referência podem, em princípio, ser calculados para uma coorte de pacientes, conforme especificado acima, com base na média ou valores médios de um determinado biomarcador, aplicando métodos padrão de estatística.

Em particular, a precisão de um teste, como um método que visa diagnosticar um evento, ou não, é melhor descrita por suas características de operação do receptor (ROC) (vide, especialmente, Zweig MH.,

Et al., Clin.

Chem. 1993;39:561-577). O gráfico ROC é um gráfico de todos os pares de sensibilidade versus especificidade resultantes da variação contínua do limiar de decisão em todo a faixa de dados observada.

O desempenho clínico de um método de diagnóstico depende de sua precisão, isto é, sua capacidade de alocar corretamente os pacientes para um determinado prognóstico ou diagnóstico.

O gráfico ROC indica a sobreposição entre as duas distribuições,

traçando a sensibilidade versus especificidade 1 - para toda a faixa de limiares adequados para fazer uma distinção.

No eixo y está a sensibilidade, ou a fração verdadeira positiva, que é definida como a taxa entre o número de resultados de testes verdadeiro positivos ao produto do número de resultados de testes verdadeiro positivos e ao número de resultados de testes falso negativos.

Ele é calculado somente a partir do subgrupo afetado.

No eixo x está a fração falso positiva, ou a especificidade 1 -, que é definida como a taxa entre o número de resultados falso positivos ao produto do número de resultados falso positivos e número de resultados falso positivos.

Ele é um índice de especificidade e é calculado inteiramente a partir do subgrupo não afetado.

Como as frações verdadeira e falso positivas são calculadas inteiramente separadamente, usando os resultados dos testes de dois subgrupos diferentes, o gráfico ROC é independente da prevalência do evento na coorte.

Cada ponto no gráfico ROC representa um par de sensibilidade/especificidade 1 -correspondente a um limiar de decisão particular.

Um teste com discriminação perfeita (sem sobreposição nas duas distribuições de resultados) possui um gráfico ROC que passa pelo canto superior esquerdo, onde a fração verdadeira positiva é 1,0 ou 100%

(sensibilidade perfeita) e a fração falso positiva é 0 (perfeita especificidade). O gráfico teórico para um teste sem discriminação (distribuições idênticas de resultados para os dois grupos) é uma linha diagonal de 45° do canto inferior esquerdo ao canto superior direito. A maioria dos gráficos se enquadra entre esses dois extremos. Se o gráfico ROC cair completamente abaixo da diagonal de 45°, isso é facilmente remediado revertendo o critério de "positividade" a "maior que" para "menor que" ou vice-versa. Qualitativamente, quanto mais próximo o gráfico estiver do canto superior esquerdo, maior será a precisão geral do teste. Dependendo do intervalo de confiança desejado, um limiar pode ser derivado da curva ROC, permitindo o diagnóstico de um determinado evento com um equilíbrio adequado de sensibilidade e especificidade, respectivamente. Por conseguinte, a referência a ser usada para o método da presente invenção, isto é, um limiar que permite avaliar a fibrilação atrial, pode ser gerada, preferivelmente, estabelecendo um ROC para a referida coorte conforme descrito acima e derivando uma quantidade limiar da mesma. Dependendo da sensibilidade e especificidade desejadas para um método de diagnóstico, o gráfico ROC permite derivar um limiar adequado. Será entendido que uma sensibilidade ideal é desejada para, por exemplo, excluir um pacicente de sofrer de fibrilação atrial (ou seja, um descarte), enquanto uma especificidade ideal é considerada para um pacicente a ser avaliado como sofrendo de fibrilação atrial (ou seja, uma inclusão). Em uma modalidade, o método da presente invenção permite a previsão de que um paciente está em risco de um evento adverso associado à fibrilação atrial, tal como a ocorrência ou recorrência de fibrilação atrial e/ou acidente vascular cerebral.

[000140] Em uma modalidade preferida, o termo "quantidade de referência" neste documento refere-se a um valor predeterminado. O referido valor predeterminado deve permitir avaliar a fibrilação atrial e, assim, diagnosticar a fibrilação atrial, para diferenciar entre fibrilação atrial paroxística e persistente, para predizer o risco de um evento adverso associado à fibrilação atrial, para identificar um paciente que deverá ser submetido a eletrocardiografia (ECG), ou para a avaliação de uma terapia para fibrilação atrial. Entende-se que a quantidade de referência pode variar de acordo com o tipo de avaliação. Por exemplo, a quantidade de referência para TFPI-2 para a diferenciação de FA será geralmente maior do que a quantidade de referência para o diagnóstico de FA. No entanto, isso é levado em consideração pelo técnico no assunto.

[000141] Conforme estabelecido acima, o termo "avaliação da fibrilação atrial" refere-se preferencialmente ao diagnóstico de fibrilação atrial, a diferenciação entre fibrilação atrial paroxística e persistente, a previsão de um risco de um evento adverso associado à fibrilação atrial, para a identificação de um paciente que deverá ser submetido à eletrocardiografia (ECG), ou à avaliação de uma terapia para fibrilação atrial. A seguir, essas modalidades do método da presente invenção serão descritas em mais detalhes. As definições acima se aplicam em conformidade.

MÉTODO PARA DIAGNOSTICAR FIBRILAÇÃO ATRIAL

[000142] O termo "diagnóstico", conforme usado neste documento, significa avaliar se um paciente, conforme referido de acordo com o método da presente invenção, sofre de fibrilação atrial (FA) ou não. Em uma modalidade, é diagnosticado que um paciente sofre de FA. Em uma modalidade preferida, é diagnosticado que um paciente sofre de FA paroxística. Em uma modalidade alternativa, é diagnosticado que um paciente não sofre de FA.

[000143] De acordo com a presente invenção, todos os tipos de FA podem ser diagnosticados. Assim, a fibrilação atrial pode ser FA paroxística, persistente ou permanente. Preferivelmente, a fibrilação atrial persistente é diagnosticada, em particular em um paciente que não sofre de FA permanente.

[000144] O diagnóstico real se um paciente sofre de FA ou não pode incluir outras etapas, tais como a confirmação de um diagnóstico (por exemplo, por ECG, tal como Holter-ECG). Assim, a presente invenção permite avaliar a probabilidade de um paciente sofrer de fibrilação atrial. Um paciente que tem uma quantidade de TFPI-2 acima da quantidade de referência provavelmente sofre de fibrilação atrial, enquanto um paciente que tem uma quantidade de TFPI-2 abaixo da quantidade de referência provavelmente não sofre de fibrilação atrial. Por conseguinte, o termo "diagnóstico" no contexto da presente invenção também abrange ajudar o médico a avaliar se um paciente sofre de fibrilação atrial ou não.

[000145] Preferivelmente, uma quantidade de TFPI-2 (e opcionalmente uma quantidade de pelo menos um biomarcador adicional, tal como ESM-1, Ang-2, IGFBP-7, e/ou o peptídeo natriurético) na amostra de um paciente de teste que está aumentada em comparação à quantidade de referência (ou às quantidades de referência) é indicativa para um paciente que sofre de fibrilação atrial e/ou uma quantidade de TFPI-2 (e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional, tal como ESM -1, Ang-2, IGFBP-7, e/ou o peptídeo natriurético) na amostra de um paciente que está diminuída em comparação à quantidade de referência (ou às quantidades de referência) é indicativa para um paciente que não sofre de atrial fibrilação.

[000146] Em uma modalidade preferida, a quantidade de referência, ou seja, a quantidade de referência de TFPI-2 e, se for determinado, a quantidade de referência para o pelo menos um biomarcador adicional, deve permitir a diferenciação entre um paciente que sofre de fibrilação atrial e um paciente que não sofre de fibrilação atrial. Preferivelmente, a referida quantidade de referência é um valor predeterminado.

[000147] Em uma modalidade, o método da presente invenção permite o diagnóstico de um paciente que sofre de fibrilação atrial.

Preferivelmente, o paciente está sofrendo de FA, se a quantidade de TFPI-2 (e opcionalmente uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional, tal como ESM-1, Ang-2, IGFBP-7, e/ou o peptídeo natriurético) está acima da quantidade de referência. Em uma modalidade, o paciente sofre de fibrilação atrial, se a quantidade de TFPI-2 é superior a um determinado percentil (por exemplo, 99º percentil) do limite superior de referência (URL) de uma quantidade de referência.

[000148] Em outra modalidade preferida, o método da presente invenção permite o diagnóstico de que um paciente não está sofrendo de fibrilação atrial. Preferivelmente, o paciente não sofre de FA, se a quantidade de TFPI-2 (e opcionalmente uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional, tal como ESM-1, Ang-2, IGFBP-7, e/ou o peptídeo natriurético) está abaixo da quantidade de referência (tal como o URL de determinado percentil).

Assim, em uma modalidade, o termo "diagnosticar fibrilação atrial" refere-se a "descartar fibrilação atrial".

[000149] Descartar a fibrilação atrial é de particular interesse, uma vez que outros testes de diagnóstico para o diagnóstico de fibrilação atrial, tais como um teste de ECG, podem ser evitados. Assim, graças à presente invenção, custos desnecessários com cuidados de saúde podem ser evitados.

[000150] Consequentemente, a presente invenção também refere- se a um método para descartar fibrilação atrial, compreendendo as etapas de a) determinar a quantidade de TFPI-2 em uma amostra do paciente, e b) comparar a quantidade de TFPI-2 a uma quantidade de referência, por meio da qual a fibrilação atrial é descartada.

[000151] Preferivelmente, uma quantidade de um biomarcador TFPI-2 na amostra do paciente que está diminuída em comparação à quantidade de referência (tal como uma referência para descartar fibrilação atrial) é indicativa para um paciente que não sofre de fibrilação atrial, e, portanto, para descartar fibrilação atrial no paciente. Por exemplo, a quantidade de referência para TFPI-2 pode ser determinada em uma amostra de um paciente que não sofre de FA, ou a partir de amostras de um grupo do mesmo.

[000152] Ao determinar o biomarcador TFPI-2 e o peptídeo natriurético em combinação, um descarte ainda mais confiável pode ser alcançado. Consequentemente, as etapas a) e b) são preferencialmente as seguintes: a) determinar a quantidade de TFPI-2 e a quantidade de um peptídeo natriurético em uma amostra do paciente, e b) comparar as quantidades de TFPI-2 e do peptídeo natriurético às quantidades de referência, por meio das quais a fibrilação atrial é descartada.

[000153] Preferivelmente, as quantidades de ambos os biomarcadores, ou seja, a quantidade do biomarcador TFPI-2 e a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional, na amostra do paciente que estão diminuídas em comparação à respectiva quantidade de referência (tal como uma quantidade de referência para descartar fibrilação atrial) são indicativas para um paciente que não sofre de fibrilação atrial e, portanto, para descartar fibrilação atrial no paciente. Por exemplo, a quantidade de referência para o peptídeo natriurético pode ser determinada em uma amostra de um paciente que não sofre de FA, ou a partir de amostras de um grupo do mesmo.

[000154] Em uma modalidade do método de diagnóstico de fibrilação atrial, o referido método compreende ainda uma etapa de recomendar e/ou iniciar uma terapia para fibrilação atrial com base nos resultados do diagnóstico. Preferivelmente, uma terapia é recomendada ou iniciada se for diagnosticado que o paciente sofre de FA. Terapias preferidas para fibrilação atrial são divulgadas em outro lugar neste documento.

MÉTODO PARA DIFERENCIAR ENTRE FIBRILAÇÃO ATRIAL PAROXÍSTICA E PERSISTENTE

[000155] O termo "diferenciar", conforme usado neste documento, significa distinguir entre fibrilação atrial paroxística e persistente em um paciente.

O termo, conforme usado neste documento, preferencialmente, inclui o diagnosticar de forma diferencial fibrilação atrial paroxística e persistente em um paciente. Assim, o método da presente invenção permite avaliar se um paciente com fibrilação atrial sofre de fibrilação atrial paroxística ou fibrilação atrial persistente. A diferenciação real pode compreender outras etapas, tal como a confirmação da diferenciação. Assim, o termo "diferenciação" no contexto da presente invenção também abrange ajudar o médico a diferenciar entre FA paroxística e persistente.

[000156] Preferivelmente, uma quantidade de TFPI-2 (e opcionalmente uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional, tal como ESM-1, Ang-2, IGFBP-7, e/ou o peptídeo natriurético) na amostra de um paciente que está aumentada em comparação à quantidade de referência (ou às quantidades de referência) é indicativa para um paciente que sofre de fibrilação atrial persistente e/ou uma quantidade de TFPI-2 (e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional, tal como ESM-1, Ang-2, IGFBP-7, e/ou o peptídeo natriurético) na amostra de um paciente que está diminuída em comparação a uma quantidade de referência (ou às quantidades de referência) é indicativa para um paciente que sofre de fibrilação atrial paroxística. Em ambos os tipos de FA (paroxística e persistente), a quantidade de TFPI-2 está aumentada em comparação à quantidade de referência de pacientes sem FA.

[000157] Em uma modalidade preferida, a(s) quantidade(s) de referência deve(m) permitir a diferenciação entre um paciente que sofre de fibrilação atrial paroxística e um paciente que sofre de fibrilação atrial persistente.

Preferivelmente, a referida quantidade de referência é um valor predeterminado.

[000158] Em uma modalidade do método acima de diferenciação entre fibrilação atrial paroxística e persistente, o paciente não sofre de fibrilação atrial permanente.

MÉTODO PARA PREVER O RISCO DE UM EVENTO ADVERSO ASSOCIADO À FIBRILAÇÃO ATRIAL

[000159] O método da presente invenção também contempla um método para prever o risco de um evento adverso.

[000160] Em uma modalidade, o risco de um evento adverso conforme estabelecido neste documento pode ser a previsão de qualquer evento adverso associado à fibrilação atrial. Preferivelmente, o referido evento adverso é selecionado a partir da recorrência de fibrilação atrial (tal como a recorrência de fibrilação atrial após cardioversão) e acidente vascular cerebral.

Consequentemente, o risco de um paciente (que sofre de fibrilação atrial) sofrer no futuro de um evento adverso (tal como acidente vascular cerebral ou recorrência de fibrilação atrial) deve ser previsto.

[000161] Além disso, considera-se que o referido evento adverso associado à fibrilação atrial é a ocorrência de fibrilação atrial em um paciente que não tem histórico conhecido de fibrilação atrial.

[000162] Em uma modalidade particularmente preferida, o risco de acidente vascular cerebral é previsto.

[000163] Por conseguinte, o método da presente invenção para prever o risco de acidente vascular cerebral em um paciente, compreendendo as etapas de a) determinar a quantidade de TFPI-2 em uma amostra do paciente, e b) comparar a quantidade de TFPI-2 a uma quantidade de referência, por meio da qual o risco de acidente vascular cerebral deve ser previsto.

[000164] Por conseguinte, a presente invenção refere-se, em particular, a um método para prever o risco de acidente vascular cerebral em um paciente, compreendendo as etapas de

(a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e (b) comparar a quantidade do biomarcador TFPI-2 a uma quantidade de referência para TFPI-2 e, opcionalmente, comparar a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional a uma quantidade de referência para o referido pelo menos um biomarcador adicional, por meio do qual o risco de acidente vascular cerebral deve ser previsto.

[000165] Preferivelmente, o termo "prever o risco", conforme usado neste documento, refere-se à avaliação da probabilidade de acordo com a qual o paciente sofrerá de um evento adverso, conforme referido neste documento (por exemplo, de acidente vascular cerebral). Normalmente, é previsto se um paciente está em risco (e, portanto, em risco elevado) ou não está em risco (e, portanto, em risco reduzido) de sofrer do referido evento adverso.

Consequentemente, o método da presente invenção permite a diferenciação entre um paciente em risco e um paciente sem risco de sofrer o referido evento adverso. Além disso, é previsto que o método da presente invenção permita a diferenciação de um paciente que está em um risco reduzido, médio e elevado.

[000166] Conforme estabelecido acima, o risco (e probabilidade) de sofrer de tal evento adverso dentro de uma determinada janela de tempo deve ser previsto. Em uma modalidade da presente invenção, a janela preditiva é um período de cerca de cerca de três meses, cerca de seis meses ou, em particular, cerca de um ano. Assim, o risco a curto prazo é previsto.

[000167] Em outra modalidade preferida, a janela preditiva é um período de cerca de cinco anos (por exemplo, para a previsão de acidente vascular cerebral). Além disso, a janela preditiva pode ser um período de cerca de seis anos (por exemplo, para a previsão de acidente vascular cerebral).

Alternativamente, a janela preditiva pode ser de cerca de 10 anos. Além disso, é previsto que a janela preditiva é um período de 1 a 3 anos. Assim, o risco de sofrer de acidente vascular cerebral dentro de 1 a 3 anos é previsto. Além disso, é previsto que a janela preditiva é um período de 1 a 10 anos. Assim, é previsto o risco de sofrer um acidente vascular cerebral dentro de 1 a 10 anos.

[000168] Preferivelmente, a janela preditiva é calculada a partir da conclusão do método da presente invenção. Mais preferencialmente, a referida janela preditiva é calculada a partir do período de tempo em que a amostra a ser testada foi obtida. Como será entendido pelos técnicos no assunto, a previsão de um risco geralmente não é considerada correta para 100% dos pacientes. O termo, no entanto, requer que a previsão possa ser feita para uma porção estatisticamente significativa de pacientes de uma maneira adequada e correta.

Uma porção estatisticamente significativa pode ser determinada sem mais delongas pelo técnico no assunto, usando várias ferramentas de avaliação estatística conhecidas, por exemplo, determinação de intervalos de confiança, determinação de valor p, teste t de Student, teste de Mann-Whitney e etc.

Detalhes são encontrados em Dowdy e Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, Nova York, 1983. Intervalos de confiança preferidos são de pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%. Os valores p são, preferivelmente, 0,1, 0,05, 0,01, 0,005, ou 0,0001.

[000169] Conforme estabelecido acima, a expressão "prever o risco do referido evento adverso" significa que o paciente a ser analisado pelo método da presente invenção é alocado tanto no grupo de pacientes em risco de sofrer do referido evento adverso, ou no grupo de pacientes sem risco de sofrer do referido evento adverso (tal como acidente vascular cerebral). Assim, é previsto se o paciente está em risco ou não de sofrer do referido evento adverso. Como usado neste documento, "um paciente que está em risco de sofrer do referido evento adverso", preferencialmente, tem um risco elevado de sofrer do referido evento adverso (preferivelmente, dentro da janela preditiva). Preferivelmente, o referido risco é elevado em comparação com o risco médio em uma coorte de pacientes. Conforme usado neste documento, "um paciente que não está em risco de sofrer do referido evento adverso ”, preferencialmente, tem um risco reduzido de sofrer do referido evento adverso (preferivelmente, dentro da janela preditiva). Preferivelmente, o referido risco é reduzido em comparação com o risco médio em uma coorte de pacientes. Um paciente que está em risco de sofrer do referido evento adverso, preferivelmente, tem um risco de sofrer do referido evento adverso, tal como recorrência ou ocorrência de fibrilação atrial de pelo menos 20% ou mais, preferivelmente, de pelo menos 30%, preferivelmente, dentro de uma janela preditiva de cerca de um ano. Um paciente que não está em risco de sofrer do referido evento adverso, preferivelmente, tem um risco inferior a 12%, preferivelmente, inferior a 10% de sofrer do referido evento adverso, preferivelmente, dentro de uma janela preditiva de um ano.

[000170] No que diz respeito à previsão de acidente vascular cerebral, um paciente que está em risco de sofrer o referido evento adverso preferencialmente tem um risco de sofrer o referido evento adverso de pelo menos 10% ou mais, preferencialmente de pelo menos 13%, preferencialmente dentro de uma janela preditiva de cerca de cinco anos ou, em particular, de cerca de seis anos. Um paciente que não está em risco de sofrer o referido evento adverso preferencialmente tem um risco inferior a 10%, mais preferencialmente inferior a 8%, ou mais preferencialmente inferior a 5% de sofrer o referido evento adverso, preferivelmente, dentro de uma janela preditiva de cerca de cinco anos ou, em particular, de cerca de seis anos. O risco pode ser maior, se o paciente não receber terapia de anticoagulação. No entanto, isso é levado em consideração pelo técnico no assunto.

[000171] Preferivelmente, uma quantidade de TFPI-2 (e opcionalmente uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional, tal como ESM-1, Ang-2, IGFBP-7 e/ou o peptídeo natriurético) na amostra de um paciente que está aumentada em comparação à quantidade de referência (ou às quantidades de referência) é indicativa para um paciente que está em risco do evento adverso associado à fibrilação atrial,e/ou uma quantidade de TFPI-2 (e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional, tal como ESM-1, Ang-2, IGFBP-7 e/ou o peptídeo natriurético) na amostra de um paciente que está diminuída em comparação à quantidade de referência (ou às quantidades de referência) é indicativa para um paciente que não está em risco do evento adverso associado à fibrilação atrial.

[000172] Em uma modalidade preferida, a quantidade de referência (ou quantidades de referência) deve permitir a diferenciação entre um paciente que está em risco de um evento adverso, conforme referido neste documento, e um paciente que não está em risco do referido evento adverso. Preferivelmente, a referida quantidade de referência é um valor predeterminado.

[000173] De acordo com o método da presente invenção, o risco de acidente vascular cerebral deve ser previsto. O termo "acidente vascular cerebral" é bem conhecido na técnica. Conforme usado neste documento, o termo, preferencialmente, refere-se a derrame isquêmico, em particular, a acidente vascular cerebral isquêmico. Um acidente vascular cerebral previsto pelo método da presente invenção deve ser causado por fluxo sanguíneo reduzido para o cérebro ou partes dele, o que leva a uma oferta insuficiente de oxigênio para as células cerebrais. Em particular, o acidente vascular cerebral leva a danos irreversíveis nos tecidos devido à morte de células cerebrais. Os sintomas de acidente vascular cerebral são bem conhecidos na técnica. O acidente vascular cerebral isquêmico pode ser causado por aterotrombose ou embolia de uma artéria cerebral importante, por distúrbios de coagulação ou doença vascular não ateromatosa ou por isquemia cardíaca que leva a um fluxo sanguíneo geral reduzido. O acidente vascular cerebral isquêmico é, preferivelmente, selecionado a partir do grupo que consiste em acidente vascular cerebral aterotrombótico, acidente vascular cerebral cardioembólico e acidente vascular cerebral lacunar. Preferivelmente, o acidente vascular cerebral a ser previsto é um acidente vascular cerebral isquêmico agudo, em particular acidente vascular cerebral cardioembólico. Um acidente vascular cerebral cardioembólico (frequentemente também referido como acidente vascular cerebral embólico ou tromboembólico) pode ser causado por fibrilação atrial.

[000174] Preferivelmente, o referido acidente vascular cerebral deve ser associado à fibrilação atrial. Mais preferencialmente, o acidente vascular cerebral deve ser causado por fibrilação atrial. No entanto, também prevê-se que o paciente não tenha histórico de fibrilação atrial.

[000175] Preferivelmente, um acidente vascular cerebral está associado à fibrilação atrial, se houver uma relação temporal entre o acidente vascular cerebral e um episódio de fibrilação atrial. Mais preferencialmente, um acidente vascular cerebral está associado a fibrilação atrial, se o acidente vascular cerebral for causado por fibrilação atrial. Mais preferencialmente, um acidente vascular cerebral está associado à fibrilação atrial, se o acidente vascular cerebral pode ser causado por fibrilação atrial. Por exemplo, um acidente vascular cerebral cardioembólico (frequentemente também referido como acidente vascular cerebral embólico ou tromboembólico) pode ser causado por fibrilação atrial. Preferivelmente, um acidente vascular cerebral associado à FA pode ser evitado por anticoagulação oral.

[000176] Também preferencialmente, o acidente vascular cerebral é considerado como associado à fibrilação atrial, se o paciente a ser testado sofre de fibrilação atrial e/ou tem um histórico conhecido da mesma. Além disso, em uma modalidade, o acidente vascular cerebral pode ser considerado como estando associado à fibrilação atrial, se o paciente for suspeito de sofrer de fibrilação atrial.

[000177] O termo "acidente vascular cerebral" não inclui, preferivelmente, acidente vascular cerebral hemorrágico. Pode ser determinado por métodos bem conhecidos se um paciente sofre acidente vascular cerebral, em particular, acidente vascular cerebral isquêmico. Além disso, os sintomas de acidente vascular cerebral são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, os sintomas de acidente vascular cerebral incluem dormência repentina ou fraqueza do rosto, braço ou perna, especialmente em um lado do corpo, confusão repentina, dificuldade para falar ou entender, dificuldade repentina para ver em um ou ambos os olhos e dificuldade súbita para caminhar, tontura, perda de equilíbrio ou coordenação.

[000178] Os termos "comparar", "quantidade", "paciente" e "determinar" etc. são definidos em outro lugar neste documento. As definições se aplicam em conformidade. Por exemplo, a amostra é preferencialmente uma amostra de sangue, soro ou plasma.

[000179] Em uma modalidade preferida do método acima mencionado de previsão de um evento adverso (tal como acidente vascular cerebral), o paciente a ser testado sofre de fibrilação atrial. Mais preferencialmente, o paciente tem um histórico conhecido de fibrilação atrial. De acordo com o método para prever um evento adverso, o paciente sofre preferencialmente de fibrilação atrial permanente, mais preferencialmente, de fibrilação atrial persistente e, mais preferencialmente, de fibrilação atrial paroxística.

[000180] Em uma modalidade do método de previsão de um evento adverso, o paciente que sofre de fibrilação atrial sofre episódios de fibrilação atrial quando a amostra é obtida. Em outra modalidade do método de previsão de um evento adverso, o paciente que sofre de fibrilação atrial não sofre episódio de fibrilação atrial quando a amostra é obtida (e, portanto, deve ter um ritmo sinusal normal). Além disso, o paciente cujo risco deve ser previsto pode estar em terapia de anticoagulação.

[000181] Em outra modalidade preferida do método acima mencionado de prever um evento adverso (tal como acidente vascular cerebral), o paciente a ser testado tem um histórico de acidente vascular cerebral.

[000182] Em outra modalidade preferida do método acima mencionado de previsão de um evento adverso (tal como acidente vascular cerebral), o paciente a ser testado tem um histórico de tromboembolismo.

[000183] Em outra modalidade do método de previsão de um evento adverso, o paciente a ser testado não tem histórico conhecido de fibrilação atrial.

Em particular, prevê-se que o paciente não sofre de fibrilação atrial.

[000184] O método da presente invenção pode auxiliar a medicina personalizada. Em uma modalidade preferida, o método para prever o risco de acidente vascular cerebral em um paciente compreende ainda (i) a etapa de recomendar terapia de anticoagulação, ou (ii) recomendar uma intensificação da terapia de anticoagulação, se o paciente tiver sido identificado como estando em risco de sofrer de acidente vascular cerebral.

[000185] Em uma modalidade preferida, o método para prever o risco de acidente vascular cerebral em um paciente compreende ainda (i) a etapa de iniciar a terapia de anticoagulação, ou (ii) intensificar a terapia de anticoagulação, se o paciente tiver sido identificado como estando em risco de sofrer de acidente vascular cerebral (pelo método da presente invenção).

[000186] Se o paciente de teste está em terapia de anticoagulação, e se o paciente foi identificado como não estando em risco de sofrer de acidente vascular cerebral (pelo método da presente invenção), a dosagem da terapia de anticoagulação pode ser reduzida. Consequentemente, uma redução da dosagem pode ser recomendada. Ao reduzir a dosagem, o risco de sofrer de efeitos colaterais (tais como sangramento) pode ser reduzido.

[000187] O termo "recomendar", como aqui usado, significa estabelecer uma proposta para uma terapia que possa ser aplicada ao paciente.

A terapia a ser recomendada depende do desfecho fornecido pelo método da presente invenção.

[000188] Em especial, aplica-se o seguinte:

[000189] Se o paciente a ser testado não receber terapia de anticoagulação, é recomendado o início da anticoagulação, se o paciente tiver sido identificado como estando em risco de sofrer um acidente vascular cerebral.

Assim, a terapia de anticoagulação deve ser iniciada.

[000190] Se o paciente a ser testado já recebe terapia de anticoagulação, recomenda-se a intensificação da anticoagulação, se o paciente tiver sido identificado como estando em risco de sofrer um acidente vascular cerebral. Assim, a terapia de anticoagulação deve ser intensificada.

[000191] Em uma modalidade preferida, a terapia de anticoagulação é intensificada aumentando a dosagem do anticoagulante, isto é, a dosagem do anticoagulante atualmente administrado.

[000192] Em uma modalidade particularmente preferida, a terapia de anticoagulação é intensificada aumentando a substituição do anticoagulante atualmente administrado por um anticoagulante mais eficaz. Portanto, recomenda-se a substituição do anticoagulante.

[000193] Foi descrito que uma melhor prevenção em pacientes de alto risco é alcançada com o anticoagulante oral apixaban versus o antagonista da vitamina K varfarina, como mostrado em Hijazi at al., The Lancet 2016 387, 2302-2311,(Figura 4).

[000194] Assim, é previsto que o paciente a ser testado seja tratado com um antagonista da vitamina K, tal como varfarina ou dicumarol. Se for identificado que o paciente está em risco de sofrer de acidente vascular cerebral

(pelo método da presente invenção), recomenda-se a substituição do antagonista da vitamina K por um anticoagulante oral, em particular, dabigatran, rivaroxaban ou apixaban. Consequentemente, a terapia com o antagonista da vitamina K é descontinuada e a terapia com um anticoagulante oral é iniciada.

[000195] Nos estudos subjacentes à presente invenção, foi demonstrado ainda que a determinação de TFPI-2 permite aprimorar a precisão da previsão de uma pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral para um paciente. Assim, a determinação combinada da pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral e a determinação de TFPI-2 permitem uma previsão ainda mais confiável de acidente vascular cerebral em comparação à determinação de TFPI-2 ou à determinação da pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral sozinhas. (vide Exemplo 3).

[000196] Por conseguinte, o método para prever o risco de acidente vascular cerebral pode compreender ainda a combinação da quantidade de TFPI-2 com a pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral. Com base na combinação da quantidade de TFPI-2 e da pontuação de risco clínico, é previsto o risco de acidente vascular cerebral do paciente de teste.

[000197] Em uma modalidade do método acima mencionado, o método compreende ainda a comparação da quantidade de TFPI-2 a uma quantidade de referência. Nesse caso, os resultados da comparação são combinados com a pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral.

[000198] Por conseguinte, a presente invenção refere-se, em particular, a um método para prever o risco de acidente vascular cerebral em um paciente, compreendendo as etapas de a) determinar a quantidade de TFPI-2 em uma amostra do paciente, e b) combinar a quantidade de TFPI-2 a uma pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral, por meio da qual o risco de acidente vascular cerebral do referido paciente deve ser previsto.

[000199] De acordo com o método da presente invenção, prevê-se que o paciente seja um paciente que tenha uma pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral conhecida. Consequentemente, o valor da pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral é conhecida pelo paciente.

[000200] Alternativamente, o método pode compreender obter ou fornecer o valor para a pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral.

Preferivelmente, o valor é um número. Em uma modalidade, a pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral é gerada por uma das ferramentas de base clínica disponíveis para os médicos. Preferivelmente, o valor é fornecido ao se determinar o valor da pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral para o paciente. Mais preferencialmente, o valor é obtido de bancos de dados de registros de pacientes e histórico médico do paciente. O valor da pontuação, portanto, também pode ser determinado usando dados publicados ou do histórico do paciente.

[000201] De acordo com a presente invenção, a quantidade de TFPI- 2 é combinada com a pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral.

Isto significa, preferivelmente, que o valor para a quantidade de TFPI-2 é combinado com a pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral.

Consequentemente, os valores são operacionalmente combinados para prever o risco do paciente sofrer acidente vascular cerebral. Combinando-se o valor, um único valor pode ser calculado, o qual pode ser usado para a previsão.

[000202] As pontuações clínicas de risco de acidente vascular cerebral são bem conhecidas na técnica. Por exemplo, as referidas pontuações são descritas em Kirchhof P. et al., (European Heart Journal 2016; 37: 2893– 2962), que é incorporado neste documento por referências no que diz respeito a todo o seu conteúdo de divulgação. Em uma modalidade, a pontuação é a pontuação CHA₂DS₂-VASc. Em outra modalidade, a pontuação é a pontuação

CHADS₂. (Gage BF. Et al., JAMA, 285 (22) (2001), pp. 2864-2870) e pontuação ABC (Hijazi Z. et al., Lancet 2016; 387(10035): 2302–2311)

MÉTODO PARA APRIMORAR A PRECISÃO DA PREVISÃO DE UMA PONTUAÇÃO DE RISCO CLÍNICO DE ACIDENTE VASCULAR CEREBRAL

[000203] A presente invenção refere-se ainda a um método para aprimorar a precisão da previsão de uma pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral para um paciente, compreendendo as etapas de a) determinar a quantidade de TFPI-2 em uma amostra, e b) combinar um valor para a quantidade de TFPI-2 com a pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral, por meio da qual a precisão da previsão da referida pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral é aprimorada.

[000204] O método pode compreender a etapa adicional de c) aprimorar a precisão da previsão do referida pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral com base nos resultados da etapa b).

[000205] Em uma modalidade preferida, as etapas a) e b) do método acima mencionado são as seguintes: a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), em que o paciente tem uma pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral conhecida, e b) combinar um valor para a quantidade de TFPI-2 e/ou a quantidade de um ou mais biomarcadores compreendendo um peptídeo natriurético, ESM-1, Ang2, IGFBP7 com a pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral, por meio da qual a precisão da previsão da referida pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral é aprimorada.

[000206] As definições e explicações fornecidas acima no presente documento, em conexão com o método de avaliar a fibrilação atrial, em particular, de prever o risco de um evento adverso tal (como acidente vascular cerebral), também se aplicam, preferivelmente, ao método mencionado acima.

Por exemplo, é previsto que o paciente seja um paciente que tem uma pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral. Alternativamente, o método pode compreender obter ou fornecer o valor para a pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral.

[000207] De acordo com a presente invenção, a quantidade de TFPI- 2 é combinada com a pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral.

Consequentemente, os valores são operacionalmente combinados para aprimorar a precisão da previsão da referida pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral.

MÉTODO PARA IDENTIFICAR UM PACIENTE QUE DEVERÁ SER SUBMETIDO À ELETROCARDIOGRAFIA (ECG)

[000208] De acordo com esta modalidade do método da presente invenção, deve ser avaliado se o paciente a ser testado com o biomarcador será submetido à eletrocardiografia (ECG), ou seja, a uma avaliação eletrocardiográfica. A referida avaliação deve ser realizada para o diagnóstico, ou seja, para detectar a presença ou ausência de FA, no referido paciente.

[000209] O termo "identificar um paciente", conforme usado neste documento, preferencialmente refere-se ao uso das informações ou dados gerados em relação à quantidade de TFPI-2 em uma amostra de um paciente para identificar o paciente que deve ser submetido a ECG. O paciente que é identificado tem maior probabilidade de sofrer de FA. A avaliação do ECG é feita como uma confirmação.

[000210] Eletrocardiografia (ECG abreviada) é o processo de registro da atividade elétrica do coração por uma ECG adequada. Um dispositivo de ECG registra os sinais elétricos produzidos pelo coração que se espalham por todo o corpo até a pele. O registro do sinal elétrico é obtido pelo contato da pele do paciente de teste com os eletrodos incluídos no dispositivo de ECG. O processo de obtenção do registro é não invasivo e sem riscos. A ECG é realizada para o diagnóstico de fibrilação atrial, ou seja, para a avaliação da presença ou ausência de fibrilação atrial no paciente de teste. Na modalidade do método da presente invenção, o dispositivo de ECG é um dispositivo de uma derivação (tal como um dispositivo de ECG portátil de uma derivação). Em outra modalidade preferida, o dispositivo de ECG é um dispositivo de ECG de 12 derivações, tal como um monitor Holter.

[000211] Preferivelmente, uma quantidade de TFPI-2 (e opcionalmente uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional, tal como ESM-1, Ang-2, IGFBP-7 e/ou o peptídeo natriurético) na amostra de um paciente de teste que está aumentada em comparação à quantidade de referência (ou às quantidades de referência) é indicativa para um paciente que deverá ser submetido a ECG e/ou uma quantidade de TFPI-2 (e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional, tal como ESM-1, Ang-2, IGFBP-7 e/ou o peptídeo natriurético) na amostra de um paciente que está diminuída em comparação à quantidade de referência (ou às quantidades de referência) é indicativa para um paciente que não deve ser submetido a ECG.

[000212] Em uma modalidade preferencial, a quantidade de referência deve permitir a diferenciação entre um paciente que deverá ser submetido a ECG e um paciente que não será submetido a ECG.

MÉTODO PARA AVALIAÇÃO DE UMA TERAPIA PARA FIBRILAÇÃO ATRIAL

[000213] Conforme usado neste documento, o termo "avaliação de uma terapia para fibrilação atrial", preferencialmente refere-se à avaliação de uma terapia que visa tratar a fibrilação atrial. Em uma modalidade preferida, a referida terapia é terapia de anticoagulação. Consequentemente, a presente invenção engloba um método para avaliar a terapia de anticoagulação.

[000214] Por exemplo, a eficácia de uma terapia (por exemplo, terapia de anticoagulação) deve ser avaliada. A avaliação de uma terapia para fibrilação atrial inclui o monitoramento de uma terapia (por exemplo, terapia de anticoagulação). Além disso, a avaliação de uma terapia para fibrilação atrial inclui a identificação de um paciente sendo elegível para a administração de pelo menos um medicamento de anticoagulação ou sendo elegível para uma terapia de anticoagulação intensificada. O paciente de acordo com a avaliação de uma terapia para fibrilação atrial pode ou não sofrer de fibrilação atrial.

[000215] A terapia a ser avaliada pode ser qualquer terapia que visa tratar a fibrilação atrial. Preferivelmente, a referida terapia é selecionada a partir do grupo que consiste na administração de pelo menos um anticoagulante (isto é, terapia de anticoagulação), controle de ritmo, controle de taxa, cardioversão e ablação. As referidas terapias são bem conhecidas na técnica e são, por exemplo, revistas em Fuster V et al. Circulation 2011;123:e269-e367 que neste documento é incorporado por referência em sua totalidade.

[000216] Em uma modalidade, a terapia é a administração de pelo menos um anticoagulante, isto é, terapia de anticoagulação. Como estabelecido acima, a terapia de anticoagulação é, preferivelmente, uma terapia que visa reduzir o risco de anticoagulação no referido paciente. A administração de pelo menos um anticoagulante deve reduzir ou prevenir a coagulação do sangue e acidente vascular cerebral relacionado. Em uma modalidade preferida, pelo menos um anticoagulante é selecionado a partir do grupo que consiste em heparina, um derivado de cumarina (ou seja, um antagonista da vitamina K), em particular, varfarina ou dicumarol, anticoagulantes orais, em particular, dabigatran, rivaroxaban ou apixaban, inibidor da via do fator tecidual (TFPI), antitrombina III, inibidores do fator IXa, inibidores do fator Xa, inibidores dos fatores Va e VIIIa e inibidores da trombina (tipo anti-IIa). Por conseguinte, é previsto que o paciente tome pelo menos um dos medicamentos acima mencionados.

[000217] Na modalidade preferida, o anticoagulante é um antagonista da vitamina K, tal como varfarina ou dicumarol. Os antagonistas da vitamina K, tais como varfarina ou dicumarol, são menos custosos, mas necessitam de uma melhor adesão do paciente, devido ao tratamento inconveniente, complicado e muitas vezes não confiável, com tempo flutuante na faixa terapêutica. O NOAC (novos anticoagulantes orais) compreende inibidores diretos do fator Xa (apixaban, rivaroxaban, darexaban, edoxaban), inibidores diretos da trombina (dabigatran) e antagonistas da PAR-1 (vorapaxar, atopaxar).

[000218] Em outra modalidade preferida, o anticoagulante é um anticoagulante oral, em particular, apixaban, rivaroxaban, darexaban, edoxaban, dabigatran, vorapaxar ou atopaxar.

[000219] Assim, o paciente a ser testado pode estar em terapia com um anticoagulante oral ou um antagonista da vitamina K no momento do teste (isto é, no momento em que a amostra é recebida).

[000220] Em uma modalidade preferida, a avaliação de uma terapia para fibrilação atrial é o monitoramento da referida terapia. Nesta modalidade, a quantidade de referência é, preferivelmente, a quantidade de TFPI-2 em uma amostra obtida anteriormente (isto é, em uma amostra que foi obtida antes da amostra de teste na etapa a), também referida neste documento como a primeira amostra.

[000221] Opcionalmente, a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional, conforme referido neste documento, é determinada além da quantidade de TFPI-2.

[000222] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um método para monitorar uma terapia para fibrilação atrial, tal como um método para monitorar a terapia de anticoagulação, em um paciente, em que o referido método compreende as etapas de (a) determinar, na primeira amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1(Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), (b) determinar, em uma segunda amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), em que a referida segunda amostra foi obtida após a referida primeira amostra, (c) comparar a quantidade de TFPI-2 na primeira amostra à quantidade de TFPI-2 na referida segunda amostra e, opcionalmente, comparar a quantidade do referido pelo menos um biomarcador adicional na primeira amostra à quantidade do referido pelo menos um biomarcador adicional na referida segunda amostra, monitorando assim a terapia, tal como terapia de anticoagulação.

[000223] Em uma modalidade do método da presente invenção, o paciente sofre de fibrilação atrial. Em outra modalidade do método acima, o paciente não sofre de fibrilação atrial.

[000224] O termo "monitorar", conforme usado neste documento, preferencialmente, refere-se à avaliação dos efeitos de uma terapia, conforme referido neste documento em outro lugar. Assim, a eficácia de uma terapia (tal como a terapia de anticoagulação) é monitorada.

[000225] O método acima mencionado pode compreender a etapa adicional de monitoramento da terapia com base nos resultados da etapa de comparação realizada na etapa c). Como será entendido pelos técnicos no assunto, a previsão de um risco geralmente não é considerada correta para 100% dos pacientes. O termo, no entanto, requer que a previsão possa ser feita para uma porção estatisticamente significativa de pacientes de uma maneira adequada e correta. Assim, o monitoramento real pode compreender outras etapas, tal como a confirmação.

[000226] Preferivelmente, ao realizar o método da presente invenção, pode ser avaliado se o paciente responde à referida terapia ou não.

Um paciente responde a uma terapia se a condição em que o paciente melhora entre a obtenção da primeira e da segunda amostra. Preferivelmente, um paciente não responde à terapia se a condição piorou entre a obtenção da primeira e da segunda amostra.

[000227] Um paciente é, preferencialmente, considerado como respondendo à terapia, se a terapia reduzir o risco do paciente de recorrência de fibrilação atrial. Um paciente é, preferencialmente, considerado como não respondendo à terapia, se a terapia não reduzir o risco do paciente de recorrência de fibrilação atrial.

[000228] Alternativamente, um paciente que responde à terapia de anticoagulação é preferencialmente um paciente cujo risco de acidente vascular cerebral diminui entre a obtenção da primeira e da segunda amostra. Um paciente que não responde à terapia de anticoagulação é preferencialmente um paciente cujo risco de acidente vascular cerebral aumenta, ou permanece inalterado, entre a obtenção da primeira e da segunda amostra. Se o risco de acidente vascular cerebral aumenta, diminui ou permanece inalterado, ele pode ser, por exemplo, determinado avaliando a pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral do paciente. Pontuações preferidas são divulgadas em outro lugar neste documento.

[000229] Preferivelmente, a primeira amostra é obtida antes do início da referida terapia. Mais preferencialmente, a amostra é obtida dentro de uma semana, em particular dentro de duas semanas antes do início da referida terapia. No entanto, também está contemplado que a primeira amostra pode ser obtida após o início da referida terapia (mas antes que a segunda amostra seja obtida). Neste caso, uma terapia em andamento é monitorada.

[000230] Assim, a segunda amostra deve ser obtida após a primeira amostra. Deve ser entendido que a segunda amostra deve ser obtida após o início da referida terapia.

[000231] Além disso, é particularmente contemplado que a segunda amostra seja obtida após um período de tempo razoável após a obtenção da primeira amostra. Deve ser entendido que as quantidades de biomarcadores referidas neste documento não mudam instantaneamente (por exemplo, dentro de 1 minuto ou 1 hora). Portanto, "razoável" neste contexto refere-se a intervalos entre a obtenção da primeira e da segunda amostra, cujos intervalos permitem que o(s) biomarcador(es) se ajuste(m). Portanto, a segunda amostra, preferivelmente, é obtida pelo menos um mês após a referida primeira amostra, pelo menos três meses, ou, em particular, pelo menos seis meses após a referida primeira amostra.

[000232] Preferivelmente, uma diminuição e, mais preferencialmente, uma diminuição significativa e, mais preferencialmente, uma diminuição estatisticamente significativa da(s) quantidade(s) do(s) biomarcador(es), ou seja, de TFPI-2 e opcionalmente do peptídeo natriurético na segunda amostra em comparação à(s) quantidade(s) do(s) biomarcador(es) na primeira amostra são indicativas para um paciente que responde à terapia.

Assim, a terapia é eficiente. Também preferivelmente, nenhuma alteração da concentração de TFPI-2 ou um aumento, mais preferencialmente, um aumento significativo, mais preferencialmente, um aumento estatisticamente significativo da(s) quantidade(s) do(s) biomarcador(es) na segunda amostra em comparação à(s) quantidade(s) do(s) biomarcador(es) na primeira amostra são indicativos para um paciente que não responde à terapia. Assim, a terapia não é eficiente.

[000233] Os termos "significativo(a)" e "estatisticamente significativo(a)" são conhecidos pelo técnico no assunto. Assim, se um aumento ou diminuição é significativo ou estatisticamente significativo pode ser determinado sem mais delongas pelo técnico no assunto usando várias ferramentas de avaliação estatística bem conhecidas. Por exemplo, um aumento ou diminuição significativa é um aumento ou diminuição de pelo menos 10%, em particular de pelo menos 20%.

[000234] Em uma modalidade, a intensidade da terapia é aumentada se o paciente não responder à terapia. Além disso, prevê-se que a intensidade da terapia seja diminuída, se um paciente responder à terapia. Alternativamente, a terapia pode ser continuada com a mesma intensidade, se um paciente responder à terapia.

[000235] Por exemplo, a intensidade de uma terapia pode ser aumentada aumentando a dosagem do medicamento administrado. Por exemplo, a intensidade de uma terapia pode ser diminuída diminuindo a dosagem do medicamento administrado. Se a terapia for continuada com a mesma intensidade, o medicamento administrado e a dosagem podem permanecer inalterados. Com relação ao aumento da intensidade da terapia de anticoagulação, vide as explicações feitas neste documento em outro lugar, tais como as explicações feitas em conexão com a avaliação da eficácia de uma terapia de anticoagulação de um paciente.

[000236] Em outra modalidade preferida, a avaliação de uma terapia para fibrilação atrial é a orientação de uma terapia para fibrilação atrial. O termo "orientação", conforme usado neste documento, preferencialmente, refere-se ao ajuste da intensidade de uma terapia, tal como aumentar ou diminuir a dose de anticoagulação oral, com base na determinação do biomarcador, ou seja, TFPI- 2, durante a terapia.

[000237] Em uma outra modalidade preferida, a avaliação de uma terapia para fibrilação atrial é a estratificação de uma terapia para fibrilação atrial.

Assim, deve ser identificado um paciente que é elegível para uma determinada terapia para fibrilação atrial. O termo "estratificação", conforme usado neste documento, preferivelmente, refere-se à seleção de uma terapia adequada com base no risco particular, caminho molecular identificado e/ou eficácia esperada do fármaco ou procedimento específicos. Dependendo do risco detectado, principalmente os pacientes com sintomas mínimos ou nenhum sintoma relacionado à arritmia se tornarão elegíveis para o controle da frequência ventricular, cardioversão ou ablação, que de outra forma receberiam apenas terapia antitrombótica.

[000238] O método da presente invenção pode ser usado para avaliar a eficácia de uma terapia de anticoagulação de um paciente. Em uma modalidade, a eficácia de uma terapia de anticoagulação é avaliada através da realização das seguintes etapas: a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e b) comparar a quantidade do biomarcador TFPI-2 a uma quantidade de referência para TFPI-2 e, opcionalmente, comparar a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional a uma quantidade de referência para o referido pelo menos um biomarcador adicional, por meio do qual a eficácia da terapia de anticoagulação deve ser avaliada.

[000239] Preferivelmente, uma quantidade de TFPI-2 (e, opcionalmente uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional, tal como ESM-1, Ang-2, IGFBP-7 e/ou o peptídeo natriurético) na amostra de um paciente de teste que está aumentada em comparação à quantidade de referência (ou às quantidades de referência) indica que a terapia não é eficaz e/ou uma quantidade de TFPI-2 (e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional, tal como ESM-1, Ang-2, IGFBP-7 e/ou o peptídeo natriurético) na amostra de um paciente que está diminuída em comparação à quantidade de referência (ou às quantidades de referência) indica que a terapia é eficaz.

[000240] Se o paciente de teste receber uma terapia de anticoagulação e se o método acima indicar que a terapia não é eficaz, a intensificação da terapia de anticoagulação é recomendada. Assim, a terapia de anticoagulação deve ser intensificada ou a substituição do anticoagulante é recomendada.

[000241] O método da presente invenção pode ser usado para identificar um paciente sendo elegível para a administração de pelo menos um medicamento de anticoagulação ou sendo elegível para uma terapia de anticoagulação intensificada. Isso pode ser alcançado realizando as seguintes etapas: a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e b) comparar a quantidade do biomarcador TFPI-2 a uma quantidade de referência para TFPI-2 e, opcionalmente, comparar a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional a uma quantidade de referência para o referido pelo menos um biomarcador adicional, por meio do qual um paciente sendo elegível para administração do referido pelo menos um medicamento ou para uma terapia de anticoagulação intensificada é identificado.

[000242] Preferivelmente, uma quantidade de TFPI-2 (e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional, tal como ESM-1, Ang-2, IGFBP-7 e/ou o peptídeo natriurético) na amostra de um paciente de teste que está aumentada em comparação à quantidade de referência (ou às quantidades de referência) indica que o paciente é elegível para a administração de pelo menos um medicamento de anticoagulação ou é elegível para uma terapia de anticoagulação intensificada. Uma quantidade de TFPI-2 (e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional, tal como ESM-1, Ang-2, IGFBP-7 e/ou o peptídeo natriurético) na amostra de um paciente que está diminuída em comparação à quantidade de referência (ou às quantidades de referência) que o paciente não é elegível para a administração de pelo menos um medicamento de anticoagulação ou não é elegível para uma terapia de anticoagulação intensificada. Se o paciente de teste está em terapia de anticoagulação, e se o paciente foi identificado como não elegível para um aumento de pelo menos um medicamento de anticoagulação, a dosagem de terapia de anticoagulação pode ser reduzida.

[000243] A quantidade de referência deve permitir a diferenciação entre um paciente que é elegível para a administração de pelo menos um medicamento de anticoagulação e entre um paciente que não é elegível para a administração de pelo menos um medicamento de anticoagulação.

Alternativamente ou adicionalmente, a quantidade de referência deve permitir a diferenciação entre um paciente que é elegível para a intensificação da terapia de anticoagulação e entre um paciente que não é elegível para a intensificação da terapia de anticoagulação.

[000244] Em especial, aplica-se o seguinte:

[000245] Se o paciente a ser testado não recebe terapia de anticoagulação, o método acima mencionado é realizado para identificar um paciente que é elegível para a administração de pelo menos um medicamento de anticoagulação. A administração de pelo menos um medicamento de anticoagulação é recomendada, se o paciente foi identificado como elegível para a administração de pelo menos um medicamento de anticoagulação. Assim, deve ser iniciada a terapia com administração de pelo menos um medicamento de anticoagulação.

[000246] Se o paciente a ser testado já recebe terapia de anticoagulação (ou seja, terapia com fármacos, por exemplo, a administração de um antagonista da vitamina K, tal como varfarina ou dicumarol), o método acima mencionado é realizado para identificar um paciente que é elegível para a intensificação da terapia de anticoagulação. A intensificação da anticoagulação é recomendada, se o paciente for identificado como elegível para a intensificação da terapia de anticoagulação.

[000247] Em uma modalidade, a terapia de anticoagulação é intensificada pelo aumento da dosagem do(s) anticoagulante(s), ou seja, a dosagem do(s) anticoagulante(s) atualmente administrado(s).

[000248] Em outra modalidade, a terapia de anticoagulação é intensificada pela substituição do(s) anticoagulante(s) atualmente administrado(s) por um anticoagulante mais eficaz. Portanto, recomenda-se a substituição do anticoagulante.

[000249] Foi descrito que uma melhor prevenção em pacientes de alto risco é alcançada com o anticoagulante oral apixaban versus o antagonista da vitamina K varfarina, como mostrado em Hijazi at al., The Lancet 2016 387, 2302-2311, (Figura 4).

[000250] Assim, é previsto que o paciente a ser testado seja tratado com um antagonista da vitamina K, tal como varfarina ou dicumarol. Se o paciente foi identificado como elegível para a intensificação da terapia de anticoagulação, o paciente é elegível para a substituição do antagonista da vitamina K por um anticoagulante oral, em particular, dabigatrana, rivaroxabana ou apixabana. Consequentemente, a terapia com o antagonista da vitamina K é descontinuada e a terapia com um anticoagulante oral é iniciada.

[000251] A presente invenção refere-se ainda a um método de auxiliar na previsão do risco de acidente vascular cerebral de um paciente, o referido método compreendendo as etapas de: a) fornecer pelo menos uma amostra de um paciente, b) determinar, na pelo menos uma amostra fornecida na etapa a), a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e c) fornecer informações sobre a quantidade determinada do biomarcador TFPI-2 e, opcionalmente, sobre a quantidade determinada do pelo menos um biomarcador adicional a um médico, auxiliando assim na avaliação de fibrilação atrial.

[000252] O médico deve ser o médico assistente, ou seja, o médico que solicitou a determinação do(s) biomarcador(es). O método acima mencionado deve auxiliar o clínico assistente na avaliação da fibrilação atrial.

Assim, o método não inclui o diagnóstico, previsão, monitoramento, diferenciação, identificação, conforme referido acima em conexão ao método de avaliação da fibrilação atrial.

[000253] O etapa a) do método acima mencionado de obtenção da amostra não abrange o desenho da amostra do paciente. Preferivelmente, a amostra é obtida recebendo uma amostra do referido paciente. Assim, a amostra pode ter sido entregue.

[000254] Em uma modalidade, o método acima é um método para auxiliar na previsão de acidente vascular cerebral, o referido método compreendendo as etapas de: a) fornecer pelo menos uma amostra de um paciente, conforme referido neste documento, em conexão com o método de avaliar a fibrilação atrial, em particular, em conexão com o método de prever a fibrilação atrial, b) determinar a quantidade do biomarcador TFPI-2 e a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e c) fornecer informações sobre a quantidade determinada do biomarcador TFPI-2 e, opcionalmente, sobre a quantidade determinada do pelo menos um biomarcador adicional a um médico, auxiliando assim na previsão de acidente vascular cerebral.

[000255] A presente invenção refere-se ainda a um método, compreendendo: a) fornecer um ensaio para o biomarcador TFPI-2 e, opcionalmente, pelo menos um ensaio adicional para um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e b) fornecer instruções para o uso dos resultados do ensaio obtidos ou obteníveis pelo(s) referido(s) ensaio(s) na avaliação da fibrilação atrial.

[000256] O objetivo do referido método é, preferencialmente, o auxílio na avaliação da fibrilação atrial.

[000257] As instruções devem conter um protocolo para a realização do método de avaliação da fibrilação atrial, conforme descrito acima. Além disso, as instruções devem conter pelo menos um valor para uma quantidade de referência para TFPI-2 e, opcionalmente, pelo menos um valor para uma quantidade de referência para um peptídeo natriurético.

[000258] O "ensaio" é preferencialmente um kit adaptado para determinar a quantidade do biomarcador. O termo "Kit" é explicado neste documento abaixo. Por exemplo, o referido kit deve compreender pelo menos um agente de detecção para o biomarcador TFPI-2 e, opcionalmente, pelo menos um agente adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um agente que especificamente se liga a um peptídeo natriurético, um agente que especificamente se liga a ESM-1, um agente que especificamente se liga a Ang2 e um agente que especificamente se liga a IGFBP7. Assim, um a quatro agentes de detecção podem estar presentes. Os agentes de detecção para os dois biomarcadores podem ser fornecidos em um único kit ou em dois kits separados.

[000259] O resultado do teste obtido ou obtenível pelo referido teste é o valor da quantidade do(s) biomarcador(es).

[000260] Em uma modalidade, a etapa (b) compreende fornecer instruções para o uso dos resultados de testes obtidos ou obteníveis pelos referidos testes na previsão de acidente vascular cerebral (como descrito em outro parte do presente documento).

[000261] A presente invenção refere-se ainda ao método implementado por computador para avaliar a fibrilação atrial, compreendendo d) receber, em uma unidade de processamento, um valor para a quantidade de TFPI-2 e, opcionalmente, pelo menos um valor adicional para a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), em que a referida quantidade de TFPI-2 e, opcionalmente, a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional foram determinadas em uma amostra de um paciente, e) comparar, pela referida unidade de processamento, o valor ou valores recebidos na etapa (a) a uma referência ou a referências, e f) avaliar a fibrilação atrial com base na etapa de comparação b).

[000262] O método acima mencionado é um método implementado por computador. Preferivelmente, todas as etapas do método implementado por computador são realizadas por uma ou mais unidades de processamento de um computador (ou rede de computadores). Assim, a avaliação na etapa (c) é realizada por uma unidade de processamento. Preferivelmente, a referida avaliação é baseada nos resultados da etapa (b).

[000263] O valor ou valores recebidos na etapa (a) devem ser derivados da determinação da quantidade do biomarcador de um paciente, conforme descrito em outro lugar neste documento. Preferivelmente, o valor é um valor para a concentração do biomarcador. O valor será normalmente recebido pela unidade de processamento ao carregar ou enviar o valor para a unidade de processamento. Alternativamente, o valor pode ser recebido pela unidade de processamento inserindo o valor por meio de uma interface de usuário.

[000264] Em uma modalidade do método acima mencionado, a referência (ou referências) estabelecidas na etapa (b) é estabelecida a partir de uma memória. Preferivelmente, um valor para a referência é estabelecido a partir da memória.

[000265] Em uma modalidade do método implementado por computador acima mencionado da presente invenção, o resultado da avaliação feita na etapa c) é fornecido por meio de um monitor, configurado para apresentar o resultado.

[000266] Em uma modalidade do método implementado por computador acima mencionado da presente invenção, o método pode compreender a etapa adicional de transferir as informações sobre a avaliação feita na etapa c) para os registros médicos eletrônicos do paciente.

[000267] Além disso, a presente invenção refere-se ao uso (em particular, o uso in vitro, por exemplo, em uma amostra de um paciente) do i) biomarcador TFPI-2 e, opcionalmente, pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e/ou ii) pelo menos um agente que especificamente se liga a TFPI- 2 e, opcionalmente, pelo menos um agente adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um agente que especificamente se liga a um peptídeo natriurético, um agente que especificamente se liga a ESM-1, um agente que especificamente se liga a Ang2 e um agente que especificamente se liga a IGFBP7, para a) avaliar a fibrilação atrial, b) prever o risco de acidente vascular cerebral em um paciente, c) aprimorar a precisão da previsão de uma pontuação de risco de acidente vascular cerebral clínico, para avaliar a eficácia de uma terapia de anticoagulação de um paciente, d) identificar um paciente que é elegível para a administração de pelo menos um medicamento de anticoagulação ou que é elegível para intensificar a terapia de anticoagulação (ou reduzir a terapia de anticoagulação, por exemplo, reduzindo a dosagem de pelo menos um medicamento de anticoagulação) e/ou e) monitorar a terapia de anticoagulação.

[000268] Em particular, a presente invenção refere-se ao uso (em particular o uso in vitro, por exemplo, em uma amostra de um paciente) do i) biomarcador TFPI-2 e, opcionalmente, pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e/ou ii) pelo menos um agente que especificamente se liga a TFPI- 2 e, opcionalmente, pelo menos um agente adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um agente que especificamente se liga a um peptídeo natriurético, um agente que especificamente se liga a ESM-1, um agente que especificamente se liga a Ang2 e um agente que especificamente se liga a IGFBP7, para prever acidente vascular cerebral.

[000269] A presente invenção refere-se ainda ao uso do i) biomarcador TFPI-2 e, opcionalmente, pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e/ou ii) pelo menos um agente que especificamente se liga a TFPI- 2 e, opcionalmente, pelo menos um agente adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um agente que especificamente se liga a um peptídeo natriurético, um agente que especificamente se liga a ESM-1, um agente que especificamente se liga a Ang2 e um agente que especificamente se liga a IGFBP7, em uma amostra de um paciente,

em combinação com uma pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral, para prever o risco de um paciente sofrer acidente vascular cerebral.

[000270] Além disso, a presente invenção refere-se ao uso (em particular o uso in vitro, por exemplo, em uma amostra de um paciente) do i) biomarcador TFPI-2 e, opcionalmente, pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e/ou ii) pelo menos um agente que especificamente se liga a TFPI- 2 e, opcionalmente, pelo menos um agente adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um agente que especificamente se liga a um peptídeo natriurético, um agente que especificamente se liga a ESM-1, um agente que especificamente se liga a Ang2 e um agente que especificamente se liga a IGFBP7, para aprimorar a precisão da previsão de uma pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral.

[000271] Os termos mencionados em conexão com o uso acima mencionado, tais como "amostra", "paciente", "agente de detecção", "ligação específica", "fibrilação atrial" e "avaliação da fibrilação atrial" foram definidos em conexão com o método de avaliar a fibrilação atrial. As definições e explicações se aplicam em conformidade.

[000272] Preferivelmente, os usos acima mencionados são usos in vitro. Além disso, o agente de detecção é, preferivelmente, um anticorpo, tal como um anticorpo monoclonal (ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo).

[000273] A presente invenção refere-se ainda a um kit. Em uma modalidade, o kit da presente invenção compreende um agente que especificamente se liga a TFPI-2 e pelo menos um agente adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um agente que especificamente se liga a um peptídeo natriurético, um agente que especificamente se liga a ESM- 1, um agente que especificamente se liga a Ang2 e um agente que especificamente se liga a IGFBP7.

[000274] Preferivelmente, o referido kit é adaptado para realizar o método da presente invenção, isto é, o método de avaliar a fibrilação atrial.

Opcionalmente, o referido kit compreende instruções para realizar o referido método.

[000275] O termo "kit", conforme usado neste documento, refere-se a uma coleção dos componentes acima mencionados, preferivelmente, fornecidos separadamente ou dentro de um único recipiente. O recipiente também compreende instruções para realizar o método da presente invenção.

Estas instruções podem estar na forma de um manual ou podem ser fornecidas por um código de programa de computador que é capaz de realizar os cálculos e comparações referidos nos métodos da presente invenção e estabelecer a avaliação ou diagnóstico em conformidade quando implementado em um computador ou dispositivo de processamento de dados. O código do programa de computador pode ser fornecido em um meio de armazenamento de dados ou dispositivo, tal como um meio de armazenamento óptico (por exemplo, um CD) ou diretamente em um computador ou dispositivo de processamento de dados.

Além disso, o kit pode, preferencialmente, compreender quantidades padrão para o biomarcador TFPI-2 para fins de calibração. Em uma modalidade preferida, o kit compreende ainda quantidades padrão para o peptídeo natriurético para fins de calibração

[000276] Em uma modalidade, o referido kit é usado para avaliar a fibrilação atrial in vitro.

[000277] As Figuras mostram:

[000278] Figura 1: medição de TFPI-2 no estudo Mapping: painel exploratório FAib: pacientes com histórico de fibrilação atrial submetidos à cirurgia de tórax aberto e mapeamento epicárdico de FA paroxística, FA persistente ou RS (estudo Mapping). Os perfis de expressão de RNA do tecido atrial foram avaliados.

[000279] Figura 2a: medição de TFPI-2 no estudo Mapping: painel exploratório FAib: pacientes com histórico de fibrilação atrial submetidos à cirurgia de tórax aberto e mapeamento epicárdico de FA paroxística, FA persistente ou RS (estudo Mapping). Os níveis circulantes de TFPI-2 foram avaliados.

[000280] Figura 2b: medição de TFPI-2 no estudo Beat FA: painel FAib com desfecho de acidente vascular cerebral: pacientes com diferentes tipos de fibrilação atrial, FA paroxística, FA persistente e FA permanente. Os níveis circulantes de TFPI-2 foram avaliados.

[000281] Figura 3: previsão do risco de acidente vascular cerebral de TFPI-2 (estudo Beat FA): a Figura 3 mostra que os títulos elevados de TFPI- 2 se associam ao aumento do risco de acidente vascular cerebral. TFPI-2 aprimoraou o índice C de várias pontuações de risco clínico.

[000282] Figura 4: Correlação com NTproBNP e ESM-1 em Beat FA: A Figura 4 mostra que TFPI-2 tem apenas baixa correlação com marcadores estabelecidos (NTpró-BNP e ChadsVasc), bem como com ESM-1: a) TFPI-2 vs.

NTpró-BNP coeficiente de correlação = 0,22, b) TFPI-2 vs. ESM1 coeficiente de correlação = 0,32 c) TFPI-2 vs. CHADsVASc. coeficiente de correlação = 0,13.

Estes dados sugerem que TFPI-2 fornece informações complementares e combinações de marcadores TFPI-2 e/ou NTpró-BNP e/ou ESM1 e/ou CHADsVASc podem fornecer detecção aprimorada de pacientes com alto risco de acidente vascular cerebral vs. cada marcador sozinho.

[000283] Figura 5: Valores de TFPI-2 observados no estudo BEAT-

FA separado pela ingestão de anticoagulação oral: Os pacientes que usam Rivaroxaban apresentam concentrações mais baixas de TFPI-2 em comparação aos demais pacientes.

EXEMPLOS

[000284] A invenção será meramente ilustrada pelos seguintes Exemplos. Os referidos Exemplos não devem, de modo algum, ser interpretados de maneira a limitar o escopo da invenção.

EXEMPLO 1: EXPRESSÃO DIFERENCIAL DE TFPI-2 EM TECIDO CARDÍACO DE

PACIENTES COM FA

[000285] Os níveis de expressão diferencial de TFPI-2 foram determinados em amostras do tecido do miocárdio do apêndice atrial direito de n = 38 pacientes.

ANÁLISES DE RNASEQ

[000286] O tecido atrial foi coletado durante a cirurgia de tórax aberto por causa de CABG ou cirurgia de válvula. Evidência de FA ou RS (controles) foi gerada durante a cirurgia com mapeamento de ativação de alta densidade Endo- Epicárdico simultâneo. Pacientes com FA e controles foram pareados em relação a sexo, idade e comorbidades.

[000287] Amostras de tecido atrial foram preparadas para • pacientes com FA; n = 9 pacientes • pacientes controle em RS; n = 29 pacientes.

[000288] A expressão diferencial de TFPI-2 foi determinada em análises de RNAseq aplicando os algoritmos RSEM e DESEQ2.

[000289] Conforme mostrado na Figura 1, a expressão de TFPI-2 foi encontrada ser regulada positivamente nos tecidos atriais analisados dos 9 pacientes com FA paroxística versus os 29 pacientes controle.

[000290] A alteração da dobra na expressão (FC) foi de 1,221.

[000291] A expressão alterada de TFPI-2 foi determinada no órgão final danificado, o tecido atrial. Os níveis de mRNA de TFPI-2 foram comparados aos resultados do mapeamento de alta densidade do tecido atrial. Níveis elevados de mRNA de TFPI-2 foram detectados em amostras de tecido atrial com distúrbios de condução conforme caracterizado por mapeamento elétrico.

Os distúrbios de condutância podem ser causados por infiltração de gordura ou fibrose intersticial. A expressão diferencial observada de TFPI-2 no tecido atrial de pacientes que sofrem de fibrilação atrial suporta que TFPI-2 é liberado na circulação do miocárdio, em particular, do apêndice atrial direito e títulos elevados de soro/plasma auxiliam na detecção de episódios de FA.

[000292] Conclui-se que TFPI-2 é liberado do coração para o sangue e pode auxiliar na detecção de episódios de FA e prever o risco de desenvolver acidente vascular cerebral relacionado à FA.

EXEMPLO 2: AVALIAÇÃO DE FA COM TFPI-2 CIRCULANTE

[000293] O estudo MAPPING é relacionado a pacientes submetidos à cirurgia de tórax aberto. As amostras foram obtidas antes da anestesia e da cirurgia. Os pacientes foram caracterizados eletrofisiologicamente usando mapeamento epicárdico de alta densidade com matrizes de múltiplos eletrodos (mapeamento de alta densidade).

[000294] Os níveis circulantes de TFPI-2 foram determinados em 12 pacientes com fibrilação atrial paroxística, 16 pacientes com fibrilação atrial persistente e 30 controles, pareados da melhor forma possível (em idade, sexo, comorbidades). TFPI-2 foi determinado em amostras do estudo MAPPING.

[000295] As medidas foram realizadas em 30 pacientes com ritmo sinusal (RS), em 12 pacientes com fibrilação atrial paroxística (FApar) e em 16 com fibrilação atrial persistente (FApers).

[000296] A Figura 2a mostra que TFPI-2 está significativamente elevado em pacientes com FApers em comparação a pacientes em RS (ASC 0,71). Portanto, TFPI-2 pode ser usado para auxiliar no diagnóstico de FApers.

Valores elevados de TFPI-2 indicariam uma maior probabilidade de FApers.

[000297] A Figura 2a mostra que em pacientes do estudo MAPPING com FApar em comparação a pacientes com RS, os valores de TFPI-2 são ainda mais elevados no grupo de FA (ASC 0,55), mas não são mais significativos.

[000298] O estudo Beat FA relacionado a amostras de base de pacientes com FA acompanhados para o desfecho de acidente vascular cerebral por 6 anos.

[000299] A Figura 2b mostra que títulos de TFPI-2 circulantes comparáveis foram detectados em pacientes com diferentes tipos de FA em pacientes do estudo Beat FA. Os títulos de TFPI-2 observados nos pacientes com FA do estudo Beat AF foram elevados em comparação aos pacientes do estudo MAPPING em RS.

EXEMPLO 3: PREVISÃO DE ACIDENTE VASCULAR CEREBRAL

ABORDAGEM DA ANÁLISE

[000300] A capacidade de TFPI-2 circulante de prever o risco de ocorrência de acidente vascular cerebral foi avaliada em um registro prospectivo multicêntrico de pacientes com fibrilação atrial documentada (Conen D., Forum Med Suisse 2012; 12: 860–862). TFPI-2 foi medido usando um projeto de coorte de caso estratificado, conforme descrito em Borgan (2000).

[000301] Para cada um dos 70 pacientes que sofreram um acidente vascular cerebral durante o acompanhamento (“eventos”), 1 controle correspondente foi selecionado. Os controles foram pareados com base nas informações demográficas e clínicas de idade, sexo, histórico de hipertensão, tipo de fibrilação atrial e histórico de insuficiência cardíaca (histórico de ICC).

[000302] Os resultados de TFPI-2, NTpró-BNP, ESM-1, Ang-2, IGFBP-7 estavam disponíveis para 67 pacientes com um evento e 66 pacientes sem um evento.

[000303] TFPI-2 foi medido usando a plataforma Olink, portanto nenhum valor de concentração absoluta está disponível e pode ser relatado. Os resultados serão relatados em uma escala de sinal arbitrária (NPX).

[000304] NTpró-BNP, Ang-2 e IGFBP-7 foram medidos usando a plataforma Elecsys e ESM-1 foi medido usando uma placa de microtitulação Elisa.

[000305] A fim de quantificar o valor prognóstico univariado de TFPI- 2, modelos de risco proporcional foram usados com o desfecho de acidente vascular cerebral.

[000306] O desempenho prognóstico univariado de TFPI-2 foi avaliado por duas incorporações diferentes da informação prognóstica fornecida por TFPI-2.

[000307] O primeiro modelo de risco proporcional incluiu TFPI-2 binarizado na mediana (221 NPX) e, portanto, comparando o risco de pacientes com TFPI-2 abaixo ou igual à mediana versus pacientes com TFPI-2 acima da mediana.

[000308] O segundo modelo de risco proporcional incluiu os níveis originais de TFPI-2, mas foi transformado em uma escala log2. A transformação em log2 foi realizada para permitir uma melhor calibração do modelo.

[000309] Como as estimativas de um modelo de risco proporcional virgem na coorte de controle de caso seriam tendenciosas (devido à proporção alterada de casos para controles), foi usado um modelo de risco proporcional ponderado. Os pesos são baseados na probabilidade inversa de cada paciente a ser selecionado para a coorte de caso-controle, conforme descrito em Mark (2006).

[000310] A fim de obter estimativas para as taxas de sobrevivência absoluta nos dois grupos com base na medição TFPI-2 de linha de base dicotomizada (<= 221 NPX vs. > 221 NPX), uma versão ponderada do gráfico de Kaplan-Meier foi criada conforme descrito em Mark (2006).

[000311] A fim de avaliar se o valor prognóstico de TFPI-2 é independente dos fatores de risco clínicos e demográficos conhecidos, foi calculado um modelo de Cox proporcional ponderado, incluindo adicionalmente as variáveis idade, sexo, histórico de ICC, histórico de hipertensão, histórico de acidente vascular cerebral/AIT/tromboembolismo, histórico de doença vascular e histórico de diabetes.

[000312] A fim de avaliar a capacidade de TFPI-2 de aprimorar as pontuações de risco existentes para o prognóstico de acidente vascular cerebral, as pontuações CHADS₂, CHA₂DS₂-VASc e ABC foram estendidas por TFPI-2 (transformado em log2). A extensão foi feita através da criação de um modelo de risco dividido, incluindo TFPI-2 e a respectiva pontuação de risco como variáveis independentes. NTpró-BNP, ESM-1, Ang-2 e IGFBP-7 foram avaliados quanto à capacidade de aprimorar a pontuação CHA₂DS₂-VASc.

[000313] Os índices c das pontuações CHADS₂ e CHA₂DS₂-VASc foram comparados aos índices c desses modelos. Para o cálculo do índice c na configuração da coorte de caso, uma versão ponderada do índice c foi usada conforme proposto em Ganna (2011).

RESULTADOS

[000314] A Tabela 1 mostra os resultados dos dois modelos de risco proporcionais ponderados univariados, incluindo TFPI-2 binarizado ou transformado em log2. A associação entre o risco de sofrer um acidente vascular cerebral com o valor da linha de base de TFPI-2 é altamente significativa em ambos os modelos. A taxa de risco para TFPI-2 binarizado implica um risco 2,36 vezes maior de acidente vascular cerebral no grupo de pacientes com TFPI-2 >= 221 NPX de linha de base versus o grupo de pacientes com FPI-2 < 221 NPX de linha de base. Os resultados do modelo de risco proporcional, incluindo TFPI-2 como preditora de risco linear transformada em log2, sugerem que os valores transformados em log2 de TFPI-2 são proporcionais ao risco de sofrer um acidente vascular cerebral. A taxa de risco de 2,52 pode ser interpretada de maneira que um aumento de 2 vezes da TFPI-2 esteja associado ao aumento de risco de 2,52 para um acidente vascular cerebral.

[000315] Neste contexto, é interessante notar que o nível de TFPI-2 se correlaciona com a ingestão de certos anticoagulantes orais (OAKs). A Figura 5 mostra que os pacientes que usam Rivaroxaban apresentam concentrações mais baixas de TFPI-2 em comparação aos demais pacientes. Mas também existem alguns pacientes com ingestão de Rivaroxaban que apresentam valores de CES acima de 221 NPX. Isso pode indicar que TFPI-2 pode ser usado para monitorar a eficácia da ingestão de OAK.

TABELA 1: OS RESULTADOS DO MODELO DE RISCO PROPORCIONAL PONDERADO UNIVARIADO, INCLUINDO TFPI-2 BINARIZADO E TRANSFORMADO EM LOG2. Taxa de Risco (TR) 95% - IC TR Valor p TFPI-2 log2 2,5153 1,2558/5,0380 0,0093 Linha de base TFPI-2 >= 2,3612 1,2007/4,6433 0,0128 221 NPX vs. TFPI-2 <221

NPX

[000316] A Tabela 2 mostra os resultados de um modelo de risco proporcional incluindo TFPI-2 (transformada em log2) na combinação com variáveis clínicas e demográficas. Ela mostra claramente que o efeito prognóstico do TFPI-2 permanece estável se ajustado para o efeito prognóstico de variáveis clínicas e demográficas relevantes.

TABELA 2: MODELO MULTIVARIADO DE RISCO PROPORCIONAL INCLUINDO TFPI-2 E VARIÁVEIS CLÍNICAS E DEMOGRÁFICAS RELEVANTES. Taxa de Risco (TR) 95% - IC TR Valor p Histórico de hipertensão 1,3471 0,5923 - 3,0639 0,4773 Idade 1,0272 0,9814 - 1,075 0,2488

Taxa de Risco (TR) 95% - IC TR Valor p Histórico de acidente vascular cerebral/AIT/embolia 1,9457 0,7698 - 4,9179 0,1594 Sexo = masculino 1,2565 0,4547 - 3,4722 0,6598 Histórico de ICC 0,6667 0,2718 - 1,6355 0,3759 Histórico de doença vascular 1,4862 0,5658 - 3,9041 0,4214 TFPI-2 (transformado em log2) 2,7248 1,0987 - 6,7577 0,0305

[000317] A Tabela 3 mostra os resultados do modelo de risco proporcional ponderado que combinam a pontuação CHADS₂ com TFPI-2 (transformado em log2). Também neste modelo, TFPI-2 pode adicionar informações prognósticas à pontuação CHADS₂.

TABELA 3: MODELO DE RISCO PROPORCIONAL PONDERADO QUE COMBINA A PONTUAÇÃO CHADS₂ COM TFPI-2 (TRANSFORMADO EM LOG2) Taxa de Risco 95% - IC TR Valor p (TR) Pontuação CHADS₂ 1,4450 1,1286 - 1,8502 0,0035 TFPI-2 (transformado em log2) 2,5818 1,3275 - 5,0212 0,0052

[000318] A Tabela 4 mostra os resultados do modelo de risco proporcional ponderado que combina a pontuação CHA₂DS₂-VASc com TFPI-2 (transformado em log2). Também neste modelo, TFPI-2 pode adicionar informações prognósticas à pontuação CHA₂DS₂-VASc.

TABELA 4: MODELO DE RISCO PROPORCIONAL PONDERADO QUE COMBINA A PONTUAÇÃO CHA₂DS₂-VASC COM TFPI-2 (TRANSFORMADO EM LOG2) Taxa de Risco 95% - IC TR Valor p (TR) Pontuação CHA₂DS₂-VASc 1,3950 1,0784 - 1,8046 0,0112 TFPI-2 (transformado em log2) 2,2217 1,1047 - 4,4683 0,0251

[000319] A Tabela 5 mostra os resultados do modelo de risco proporcional ponderado que combina a pontuação ABC com TFPI-2 (transformado em log2). Também neste modelo, a TFPI-2 pode adicionar informações prognósticas à pontuação de risco.

TABELA 5: MODELO DE RISCO PROPORCIONAL PONDERADO QUE COMBINA A PONTUAÇÃO ABC COM TFPI-2 (TRANSFORMADO EM LOG2) Taxa de Risco 95% - IC TR Valor p (TR) Pontuação ABC 1,1209 1,0004 - 1,256 0,0493 TFPI-2 (transformado em log2) 2,1272 0,7548 - 2,1272 0,0413

[000320] A Tabela 6 mostra os índices c estimados de TFPI-2 sozinho, das pontuações CHADS₂, CHA₂DS₂-VASc e ABC e do modelo de risco proporcional ponderado combinando as pontuações CHADS₂, CHA₂DS₂-VASc e ABC com TFPI-2 (log2) na seleção da coorte de caso. Pode-se observar que a adição de TFPI-2 aprimora o índice c de todos os três modelos de risco. Os aprimoramentos são 0,0646, 0,0432 e 0,0671 para as pontuações CHADS₂, CHA₂DS₂-VASc e ABC respectivamente.

[000321] A Tabela 6 mostra os índices c estimados de NTpró-BNP sozinho, de ESM-1 sozinho, de Ang-2 sozinho, de IGFBP-7 sozinho, da pontuação CHA₂DS₂-VASc e do modelo de risco proporcional ponderado combinando a pontuação CHA₂DS₂-VASc com NTpró-BNP (log2), com ESM-1 (log2), com ANG-2 (log2), com IGFBP-7 (log2) na seleção da coorte de caso.

Pode-se observar que a adição de todos os biomarcadores aprimora o índice c ds pontuação CHA₂DS₂-VASc. Os aprimoramentos da pontuação CHA₂DS₂- VASc são 0,002, 0,064, 0,036 e 0,006 para NT-pró-BNP, ESM-1, Ang-2, IGFBP- 7, respectivamente.

TABELA 6: ÍNDICES C DE TFPI-2, NTPRÓ-BNP, ESM-1, ANG-2, IGFBP-7, DA PONTUAÇÃO CHA₂DS₂-VASC E DA COMBINAÇÃO DA PONTUAÇÃO CHA₂DS₂-VASC COM TFPI-2, NTPRÓ-BNP, ESM -1, ANG-2, IGFBP-7 E ÍNDICES C DAS PONTUAÇÕES CHADS₂ E ABC E SUA COMBINAÇÃO COM TFPI-2. Índice c TFPI-2 univariado 0,682 CHADS₂ 0,650 CHADS₂ + TFPI-2 0,715 CHA₂DS₂-VASc 0,674 CHA₂DS₂-VASc + TFPI-2 0,717

Índice c Pontuação ABC 0,648 Pontuação ABC + TFPI-2 0,716 NTpró-BNP univariado 0,651 CHA₂DS₂-VASc + NTpró-BNP 0,676 ESM-1 univariado 0,708 CHA₂DS₂-VASc + ESM-1 0,738 Ang-2 univariada 0,696 CHA₂DS₂-VASc + Ang-2 0,710 IGFBP-7 univariada 0,652 CHA₂DS₂-VASc + IGFBP-7 0,680 EXEMPLO 4: MEDIDAS DE BIOMARCADOR

[000322] TFPI-2 foi medido em um painel de marcadores múltiplos disponível comercialmente da O-link para o inibidor de fator tecidual 2 (TFPI-2); ensaio de extensão de proximidade da O-link, Suécia.

EXEMPLO 5: PREVISÃO DE ACIDENTE VASCULAR CEREBRAL

ABORDAGEM DA ANÁLISE

[000323] A capacidade de TFPI-2 circulante de prever o risco de ocorrência de acidente vascular cerebral foi verificada (em referência ao exemplo 3) em um registro prospectivo multicêntrico de pacientes com fibrilação atrial documentada (Conen D., Swiss Med Wkly. 10 de julho de 2017; 147: w14467).

TFPI-2 foi medido usando um projeto de coorte de caso estratificado, conforme descrito em Borgan (2000).

[000324] Para cada um dos 68 pacientes (status de abril de 2019) que sofreram um acidente vascular cerebral durante o acompanhamento ("eventos"), 1 controle correspondente foi selecionado aleatoriamente entre 2319 pacientes sem um evento.

[000325] TFPI-2, os resultados estavam disponíveis para 62 pacientes com um evento e 61 pacientes sem um evento.

[000326] TFPI-2 foi medido usando a plataforma Olink, portanto nenhum valor de concentração absoluta está disponível e pode ser relatado. Os resultados serão relatados em uma escala de sinal arbitrária (NPX). Por favor,

note que, portanto, nenhuma comparação é possível ao exemplo 3 em termos de concentração e distribuição do biomarcador (por exemplo, mediana).

[000327] A fim de quantificar o valor prognóstico univariado de TFPI- 2, modelos de risco proporcional foram usados com o desfecho de acidente vascular cerebral.

[000328] O desempenho prognóstico univariado de TFPI-2 foi avaliado por duas incorporações diferentes da informação prognóstica fornecida por TFPI-2.

[000329] O primeiro modelo de risco proporcional incluiu TFPI-2 binarizado na mediana (748 NPX) e, portanto, comparou o risco de pacientes com TFPI-2 abaixo ou igual à mediana versus paciente com TFPI-2 acima da mediana.

[000330] O segundo modelo de risco proporcional incluiu os níveis originais de TFPI-2, mas foi transformado em uma escala log2. A transformação em log2 foi realizada para permitir uma melhor calibração do modelo.

[000331] Como as estimativas de um modelo de risco proporcional virgem na coorte de controle de caso seriam tendenciosas (devido à proporção alterada de casos para controles), foi usado um modelo de risco proporcional ponderado. Os pesos são baseados na probabilidade inversa de cada paciente a ser selecionado para a coorte de caso-controle, conforme descrito em Mark (2006).

[000332] A fim de obter estimativas para as taxas de sobrevivência absoluta nos dois grupos com base na medição TFPI-2 de linha de base dicotomizada (<= 748 NPX vs. > 748 NPX), uma versão ponderada do gráfico de Kaplan-Meier foi criada conforme descrito em Mark (2006).

[000333] A fim de avaliar se o valor prognóstico de TFPI-2 é independente de fatores de risco clínicos e demográficos conhecidos, foi calculado um modelo de cox proporcional ponderado incluindo, além das variáveis, idade e histórico de acidente vascular cerebral/AIT/tromboembolismo.

Esses foram os únicos preditores de risco clínico significativos em toda a coorte (incluindo todos os controles).

[000334] A fim de avaliar a capacidade de TFPI-2 de aprimorar as pontuações de risco existentes para o prognóstico de acidente vascular cerebral, as pontuações CHADS₂, CHA₂DS₂-VASc e ABC foram estendidas por TFPI-2 (transformado em log2). A extensão foi feita através da criação de um modelo de risco dividido, incluindo TFPI-2 e a respectiva pontuação de risco como variáveis independentes.

[000335] Os índices c das pontuações CHADS₂ e CHA₂DS₂-VASc foram comparados aos índices c desses modelos. Para o cálculo do índice c na configuração da coorte de caso, uma versão ponderada do índice c foi usada conforme proposto em Ganna (2011).

RESULTADOS

[000336] A Tabela 7 mostra os resultados dos dois modelos de risco proporcional ponderado univariado, incluindo TFPI-2 binarizado ou transformado em log2. A associação entre o risco de sofrer um acidente vascular cerebral e o valor de avaliação inicial de TFPI-2 é altamente significativa nos dois modelos. A taxa de risco para TFPI-2 binarizado implica um risco 2,04 vezes maior de acidente vascular cerebral no grupo de pacientes com TFPI-2 >= 748 NPX de linha de base versus o grupo de pacientes com TFPI-2 < 748 NPX de linha de base. Os resultados do modelo de risco proporcional, incluindo TFPI-2 como preditora de risco linear transformada em log2, sugerem que os valores transformados em log2 de TFPI-2 são proporcionais ao risco de sofrer um acidente vascular cerebral.

A taxa de risco de 2,54 pode ser interpretada de maneira que um aumento de 2 vezes da TFPI-2 esteja associado ao aumento de risco de 2,54 para um acidente vascular cerebral.

TABELA 7: OS RESULTADOS DO MODELO DE RISCO PROPORCIONAL PONDERADO UNIVARIADO, INCLUINDO TFPI-2 BINARIZADO E TRANSFORMADO EM LOG2. Taxa de Risco 95% - IC TR Valor p (TR) TFPI-2 log2 2,5445 1,2078 - 5,3606 0,0140 Linha de base TFPI-2 >= 748 NPX 2,0365 0,9639 - 4,3030 0,0624 vs. TFPI-2 <748 NPX

[000337] A Tabela 8 mostra os resultados de um modelo de risco proporcional incluindo TFPI-2 (transformada em log2) na combinação com variáveis clínicas e demográficas. Ela mostra claramente que o efeito prognóstico do TFPI-2 permanece estável se ajustado para o efeito prognóstico de variáveis clínicas e demográficas relevantes.

TABELA 8: MODELO MULTIVARIADO DE RISCO PROPORCIONAL INCLUINDO TFPI-2 E VARIÁVEIS CLÍNICAS E DEMOGRÁFICAS RELEVANTES. Taxa de Risco 95% - IC TR Valor p (TR) Idade 1,1347 1,0632 - 1,2110 0,2488 Histórico de acidente vascular cerebral/AIT/embolia 6,7040 2,5049 - 17,9425 0,1594 TFPI-2 (transformado em log2) 2,7248 1,1610 - 6,7540 0,0305

[000338] A Tabela 9 mostra os resultados do modelo de risco proporcional ponderado que combinam a pontuação CHADS₂ com TFPI-2 (transformado em log2). Também neste modelo, TFPI-2 pode adicionar informações prognósticas à pontuação CHADS₂.

TABELA 9: MODELO DE RISCO PROPORCIONAL PONDERADO QUE COMBINA A PONTUAÇÃO CHADS₂ COM TFPI-2 (TRANSFORMADO EM LOG2) Taxa de 95% - IC TR Valor p Risco (TR) Pontuação CHADS₂ 1,4175 0,9690 - 2,0737 0,0722 TFPI-2 (transformado em log2) 2,7709 1,2504 - 6,1405 0,0121

[000339] A Tabela 10 mostra os resultados do modelo de risco proporcional ponderado que combina a pontuação CHA₂DS₂-VASc com TFPI-2

(transformado em log2). Também neste modelo, TFPI-2 pode adicionar informações prognósticas à pontuação CHA₂DS₂-VASc.

TABELA 10: MODELO DE RISCO PROPORCIONAL PONDERADO QUE COMBINA A PONTUAÇÃO CHA₂DS₂-VASC COM TFPI-2 (TRANSFORMADO EM LOG2) Taxa de Risco 95% - IC TR Valor p (TR) Pontuação CHA₂DS₂-VASc 1,3497 0,9496 - 1,9185 0,0946 TFPI-2 (transformado em log2) 2,4365 1,1391 - 5,2114 0,0217

[000340] A Tabela 11 mostra os resultados do modelo de risco proporcional ponderado que combina a pontuação CHADS₂ com TFPI-2 (transformado em log2). Também neste modelo, a TFPI-2 pode adicionar informações prognósticas à pontuação de risco.

TABELA 11: MODELO DE RISCO PROPORCIONAL PONDERADO QUE COMBINA A PONTUAÇÃO ABC COM TFPI-2 (TRANSFORMADO EM LOG2) Taxa de Risco 95% - IC TR Valor p (TR) Pontuação ABC 1,2692 1,0818 - 1,4892 0,0035 TFPI-2 (transformado em log2) 1,9093 0,8658 - 4,2106 0,1090

[000341] A Tabela 12 mostra os índices c estimados de TFPI-2 sozinho, das pontuações CHADS₂, CHA₂DS₂-VASc e ABC e do modelo de risco proporcional ponderado que combina as pontuações CHADS₂, CHA₂DS₂-VASc e ABC com TFPI-2 (log2) na seleção da coorte de caso. Pode-se observar que a adição de TFPI-2 aprimora o índice c de todos os três modelos de risco. Os aprimoramentos são 0,057, 0,047 e 0,022 para as pontuações CHADS₂, CHA₂DS₂-VASc e ABC, respectivamente.

TABELA 12: ÍNDICES C DE TFPI-2, A PONTUAÇÃO CHA₂DS₂-VASC E DA COMBINAÇÃO DA PONTUAÇÃO CHA₂DS₂-VASC COM TFPI-2 E ÍNDICES C DAS PONTUAÇÕES CHADS₂ E ABC E SUA COMBINAÇÃO COM TFPI-2. Índice c TFPI-2 univariado 0,608 CHADS₂ 0,573 CHADS₂ + TFPI-2 0,630 CHA₂DS₂-VASc 0,577

Índice c CHA₂DS₂-VASc + TFPI-2 0,624 Pontuação ABC 0,680 Pontuação ABC + TFPI-2 0,702 EXEMPLO 6: ESTUDOS DE CASO

[000342] Há um interesse crescente em saber e reduzir o risco de acidente vascular cerebral isquêmico também em pacientes sem fibrilação atrial (Yao X et al, Am Heart J. 2018; 199: 137-143). Por exemplo, prever o risco de acidente vascular cerebral é essencial para estabelecer estratégias de tratamento ideais, identificando e incluindo esses pacientes com alto risco de acidente vascular cerebral em estudos de fármacos com anticoagulação oral. A pontuação CHA2DS2-VASc, por exemplo, prevê a incidência de acidente vascular cerebral isquêmico também em pacientes sem fibrilação atrial, mas com uma taxa de eventos absoluta mais baixa (Mitchell LB et al, Heart.

2014;100:1524-30). Portanto, é menos claro se e em que pontuação CHA2DS2- VASc esses pacientes sem fibrilação atrial devem receber anticoagulação oral (OAC) e em que dose, de tal modo que biomarcadores como TFPI2 ajudem a avaliar a necessidade de terapia e eficácia de OAC.

[000343] Um paciente do sexo feminino, com 76 anos, hipertenso e sem histórico de fibrilação atrial, apresenta-se em ritmo sinusal. TFPI2 é determinado em uma amostra de plasma de EDTA obtida do paciente. As informações clínicas da pontuação CHA2DS2-VASc (idade avançada e hipertensão) indicam um certo risco de acidente vascular cerebral e, além disso, o valor de TFPI2 está acima de uma quantidade de referência. Os títulos elevados de TFPI2 são indicativos de alto risco de acidente vascular cerebral.

Como consequência, o paciente é admitido em uma terapia de anticoagulação.

[000344] Um paciente do sexo masculino, com 65 anos, sem histórico de fibrilação atrial, solicita um check-up no consultório médico. Apresenta-se em ritmo sinusal, porém doença cardíaca estrutural é diagnosticada. Por causa do histórico de acidente vascular cerebral e alta pontuação geral CHA2DS2-VASc, o paciente já recebe terapia de anticoagulação oral (em dose baixa). Para determinar o risco atual de acidente vascular cerebral e concluir sobre uma eventual mudança de terapia, TFPI2 é medido em uma amostra de soro obtida do paciente. O valor de TFPI2 observado está acima de uma quantidade de referência. Os títulos elevados de TFPI2 e outros parâmetros de risco (histórico de acidente vascular cerebral) são indicativos de um alto risco de acidente vascular cerebral residual que é maior do que o risco de sangramento (avaliado com outras informações clínicas).

Como consequência, a dosagem da terapia de anticoagulação é aumentada.

[000345] Um paciente obeso do sexo feminino, com 68 anos, com Diabetes Mellitus e insuficiência cardíaca com fração de ejeção reduzida apresenta sintomas agudos de falta de ar. Em consultas anteriores, o paciente não tinha histórico de fibrilação atrial. De acordo com uma alta pontuação de risco geral CHA2DS2-VASc, o médico decidiu iniciar a anticoagulação oral (dose baixa) mesmo na ausência de FAib. O nível de TFPI2 foi determinado antes e após o início da anticoagulação. O paciente agora está se perguntando se a terapia de anticoagulação é eficaz e ainda necessária. A fim de especificar o risco atual de acidente vascular cerebral, TFPI2 é determinado em uma amostra de EDTA obtida do paciente. O valor de TFPI2 observado está abaixo de uma quantidade de referência e menor em comparação ao início do tratamento. Os títulos reduzidos de TFPI2 são indicativos de uma terapia de anticoagulação eficaz. Como consequência, a terapia de anticoagulação é mantida.

[000346] Descrição Resumida: Os estudos subjacentes à presente invenção mostram que TFPI-2 pode ser usado para diagnosticar FA, para classificar FA, para avaliar a gravidade da FA, para orientar a terapia (com objetivos de intensificação/redução da terapia), para prever o desfecho da doença (previsão de risco, por exemplo, acidente vascular cerebral), para monitorar a terapia e para estratificação da terapia (seleção de opções da terapia).

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. MÉTODO PARA AVALIAR A FIBRILAÇÃO ATRIAL em um paciente, caracterizado por compreender as etapas de a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e b) comparar a quantidade do biomarcador TFPI-2 a uma quantidade de referência para TFPI-2 e, opcionalmente, comparar a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional a uma quantidade de referência para o referido pelo menos um biomarcador adicional, por meio do qual a fibrilação atrial deve ser avaliada.

2. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela amostra ser uma amostra de sangue, soro ou plasma, e/ou em que o paciente é um ser humano

3. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado pela avaliação de fibrilação atrial ser o diagnóstico de fibrilação atrial, preferivelmente, em que uma quantidade de TFPI-2 e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional acima da quantidade de referência ser indicativa para um paciente que sofre de fibrilação atrial e/ou em que uma quantidade de TFPI-2 e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional abaixo da quantidade de referência ser indicativa para um paciente que não sofre de fibrilação atrial, ou em que o paciente está sofrendo de fibrilação atrial, e em que a avaliação da fibrilação atrial é a diferenciação entre fibrilação atrial paroxística e persistente, preferivelmente, em que uma quantidade de TFPI-2 e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional acima da quantidade de referência ser indicativa para um paciente que sofre de fibrilação atrial persistente e/ou em que uma quantidade de TFPI-2 e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional abaixo da quantidade de referência ser indicativa para um paciente que sofre de fibrilação atrial paroxística.

4. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado pela avaliação de fibrilação atrial ser a previsão do risco de acidente vascular cerebral associado à fibrilação atrial, preferivelmente, em que uma quantidade de TFPI-2 e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional acima da quantidade de referência ser indicativa para um paciente que está em risco de sofrer de acidente vascular cerebral associado à fibrilação atrial e/ou em que uma quantidade de TFPI- 2 e, opcionalmente, uma quantidade do pelo menos um biomarcador adicional abaixo da quantidade de referência ser indicativa para um paciente que não está em risco de sofrer de acidente vascular cerebral associado à fibrilação atrial.

5. MÉTODO PARA PREVER O RISCO DE ACIDENTE VASCULAR CEREBRAL em um paciente, caracterizado por compreender as etapas de (a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e (b) avaliar a pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral para o referido paciente, e

(c) prever o risco de acidente vascular cerebral com base nos resultados das etapas a) e b).

6. MÉTODO PARA AVALIAR A EFICÁCIA DE UMA TERAPIA de anticoagulação de um paciente, caracterizado por compreender as etapas de a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e b) comparar a quantidade do biomarcador TFPI-2 a uma quantidade de referência para TFPI-2 e, opcionalmente, comparar a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional a uma quantidade de referência para o referido pelo menos um biomarcador adicional, por meio do qual a eficácia da terapia de anticoagulação deve ser avaliada.

7. MÉTODO PARA IDENTIFICAR UM PACIENTE que é elegível para a administração do pelo menos um medicamento anticoagulante ou que é elegível para uma terapia de anticoagulação intensificada, caracterizado por compreender a) determinar, em pelo menos uma amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e b) comparar a quantidade do biomarcador TFPI-2 a uma quantidade de referência para TFPI-2 e, opcionalmente, comparar a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional a uma quantidade de referência para o referido pelo menos um biomarcador adicional, pelo qual é identificado um paciente elegível para a administração do referido pelo menos um medicamento ou para uma terapia de anticoagulação intensificada.

8. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado por um paciente, que é elegível para uma terapia de anticoagulação intensificada, ser elegível para um aumento da dosagem do anticoagulante administrado atualmente, ou para a substituição de um anticoagulante administrado atualmente por um anticoagulante mais eficaz, tal como a substituição de um antagonista da vitamina K atualmente administrado, tal como varfarina ou dicumarol, por um anticoagulante oral, em particular, dabigatrana, rivaroxabana ou apixabana.

9. MÉTODO PARA MONITORAR A TERAPIA DE ANTICOAGULAÇÃO, caracterizado por compreender as etapas de (a) determinar, na primeira amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1(Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), (b) determinar, em uma segunda amostra do paciente, a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 (Angiopoietina 2) e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), em que a referida segunda amostra foi obtida após a referida primeira amostra, (c) comparar a quantidade de TFPI-2 na primeira amostra com a quantidade de TFPI-2 na referida segunda amostra e, opcionalmente,

comparar a quantidade do referido pelo menos um biomarcador adicional na primeira amostra com a quantidade do referido pelo menos um biomarcador adicional na referida segunda amostra, monitorando assim a terapia de anticoagulação.

10. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 9, caracterizado pelo paciente sofrer de fibrilação atrial.

11. MÉTODO PARA AUXILIAR NA AVALIAÇÃO DA FIBRILAÇÃO ATRIAL, caracterizado por compreender as etapas de: a) fornecer pelo menos uma amostra de um paciente, b) determinar, na pelo menos uma amostra fornecida na etapa a), a quantidade do biomarcador TFPI-2 (Inibidor da Via do Fator Tecidual 2) e, opcionalmente, a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e c) fornecer informações sobre a quantidade determinada do biomarcador TFPI-2 e, opcionalmente, sobre a quantidade determinada do pelo menos um biomarcador adicional a um médico, auxiliando assim na avaliação de fibrilação atrial.

12. MÉTODO PARA AUXILIAR NA AVALIAÇÃO DA FIBRILAÇÃO ATRIAL, caracterizado por compreender: a) fornecer um ensaio para o biomarcador TFPI-2 e, opcionalmente, pelo menos um ensaio adicional para um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e b) fornecer instruções para uso dos resultados de ensaio obtidos ou obteníveis pelo(s) referido(s) ensaio(s) na avaliação de fibrilação atrial.

13. MÉTODO IMPLEMENTADO POR COMPUTADOR para avaliar a fibrilação atrial, caracterizado por compreender a) receber, em uma unidade de processamento, um valor para a quantidade de TFPI-2 e, opcionalmente, pelo menos um valor adicional para a quantidade de pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), em que a referida quantidade de TFPI-2 e, opcionalmente, a quantidade do pelo menos um biomarcador adicional foram determinadas em uma amostra de um paciente, b) comparar, pela referida unidade de processamento, o valor ou valores recebidos na etapa (a) a uma referência ou a referências, e c) avaliar a fibrilação atrial com base na etapa de comparação b).

14. KIT, caracterizado por compreender um agente que especificamente se liga a TFPI-2 e pelo menos um agente adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um agente que especificamente se liga a um peptídeo natriurético, um agente que especificamente se liga a ESM-1, um agente que especificamente se liga a Ang2 e um agente que especificamente se liga a IGFBP7.

15. USO IN VITRO de i) biomarcador TFPI-2 e, opcionalmente, pelo menos um biomarcador adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um peptídeo natriurético, ESM-1 (Endocan), Ang2 e IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina), e/ou ii) pelo menos um agente que especificamente se liga a TFPI- 2 e, opcionalmente, pelo menos um agente adicional selecionado a partir do grupo que consiste em um agente que especificamente se liga a um peptídeo natriurético, um agente que especificamente se liga a ESM-1, um agente que especificamente se liga a Ang2 e um agente que especificamente se liga a

IGFBP7,

caracterizado por ser para a) avaliar a fibrilação atrial, b) prever o risco de acidente vascular cerebral em um paciente, c) melhorar a precisão da previsão de uma pontuação de risco clínico de acidente vascular cerebral, para avaliar a eficácia de uma terapia de anticoagulação de um paciente, d) identificar um paciente que é elegível para a administração de pelo menos um medicamento anticoagulante ou que é elegível para uma terapia de anticoagulação intensificada e/ou e) monitorar a terapia de anticoagulação.