BR112020017742A2

BR112020017742A2 - Partícula composta e composição que a compreende

Info

Publication number: BR112020017742A2
Application number: BR112020017742-3A
Authority: BR
Inventors: Igor CURCIC; Martin Brown; David GRZYWACZ; Kenneth Wilson
Original assignee: Terramera Exco Holdings Ltd
Priority date: 2018-03-01
Filing date: 2019-03-01
Publication date: 2020-12-22
Also published as: AU2019226671A2; WO2019166662A1; AU2019226671A1; US20200390107A1; CA3092518A1; GB2586402A; GB202015467D0; CN111970930A; US20210037832A1; MX2020009169A; EP3533332A1

Abstract

um método de liberação para bactérias, vírus, fungos e dsrna no qual as bactérias, vírus, fungos ou dsrna são protegidos de degradação por luz uv por encapsulamento em uma partícula de cera que também contém um bloqueador de uv. a formulação também pode incluir outro químico, tal como inseticidas. as partículas são comestíveis por insetos e suas larvas e resultam na ingestão das bactérias, vírus, fungos e/ou dsrna pelo inseto ou larva, resultando no controle dos mesmos.

Description

PARTÍCULA COMPOSTA E COMPOSIÇÃO QUE A COMPREENDE Introdução

[001] A presente invenção refere-se a partículas compostas para a liberação de agentes biológicos, tais como bactérias, vírus, fungos e dsRNA a plantas e animais para uso no controle de infestações de pragas, em particular pragas de insetos, e a partículas para uso em tal liberação.

[002] As vendas globais de biopesticidas aumentaram de cerca de US$ 0,6 bilhão em 2003 para cerca de US$ 3 bilhões hoje e estima-se que cheguem a US$ 11 bilhões em 2025. Com uma Taxa de Crescimento Anual Composta (CAGR) de 16-17%, os biopesticidas são atualmente o setor de crescimento mais rápido no setor de mercado de proteção de culturas.

[003] O mercado de biopesticidas responde atualmente por 3% do mercado geral de proteção de culturas. Estima-se que os biopesticidas baseados em vírus representem menos de 10% disso, com potencial significativo de crescimento.

[004] Certos agentes biológicos entomopatogênicos, tal como bactérias entomopatogênicas, vírus, fungos e dsRNA, são conhecidos por serem eficazes no controle de pragas em plantas e animais. No entanto, a liberação de tais agentes biológicos a tais pragas é problemática, pois todas são muito suscetíveis à degradação por raios UV, tal como à luz do sol. Normalmente, esses agentes biológicos irão durar no campo por um pequeno número de dias, por exemplo, 2-7 dias. As formulações de distribuição atuais incluem as bactérias, vírus, fungos e/ou dsRNA em uma formulação líquida na qual a bactéria, vírus, fungo e/ou dsRNA são suspensos e incluindo um bloqueador de UV dissolvido no líquido. No entanto, na liberação à planta ou animal, a bactéria, vírus, fungo e/ou dsRNA é separado do bloqueador de UV, com muito pouco do bloqueador de UV na vizinhança da bactéria, vírus, fungo ou dsRNA. Técnicas de encapsulamento também foram experimentadas usando substâncias poliméricas com dióxido de titânio ou negro de carbono como um absorvedor de luz. Essas técnicas também falharam em proteger os agentes biológicos da degradação por raios UV. Como resultado, o uso de bactérias, vírus, fungos e dsRNA para controlar pragas em plantas e animais é muito limitado.

[005] Um problema particular foi encontrado com culturas GM que foram projetadas para causar mortalidade em pragas que consomem as culturas. As pragas começaram a desenvolver resistência a essas culturas. Uma solução seria tratar essas pragas com bactérias, vírus, fungos e dsRNA. No entanto, as formulações atualmente disponíveis degradam à luz ultravioleta e, portanto, não permanecem ativas por um período de tempo adequado. Uma vantagem do uso de bactérias, vírus, fungos e dsRNA é que eles tendem a ter uma gama estreita de insetos hospedeiros, e a infectividade é restrita a um gênero ou família de hospedeiros. Geralmente, esses agentes biológicos têm a vantagem adicional de serem substancialmente não tóxicos aos vertebrados, como mamíferos, incluindo humanos, e geralmente não são conhecidos por serem tóxicos aos insetos benéficos, pássaros ou organismos aquáticos.

[006] Um problema adicional associado às formulações comerciais convencionais é que o vírus escolhido é normalmente suspenso na forma não envelopada em uma formulação aquosa que contribui para limitar ou reduzir a vida útil do vírus através da ação de processos oxidativos.

[007] Exemplos particulares de formulações conhecidas são discutidos abaixo.

[008] GB 2481307 revela partículas compostas contendo (i) partículas hidrofóbicas que aderem à cutícula de pelo menos uma espécie de artrópode de grãos armazenados e (ii) esporos de um fungo entomopatogênico que aderem às referidas partículas e que são capazes de germinar nas cutículas de pelo menos uma espécie de artrópode de grãos armazenados. Composições compreendendo tais partículas também são reveladas.

[009] US 5885603 revela composições biopesticidas compreendendo um ingrediente inseticida ativo, um polímero e um agente bloqueador de luz inorgânico.

[010] WO 2018/050860 revela uma forma de produto compreendendo um substrato inanimado, tal como um grânulo de fertilizante compreendendo (i) um agente ativo e (ii) partículas carreadoras compreendendo pelo menos uma superfície externa compreendendo um constituinte de matéria orgânica, em que o dito agente ativo é combinado dentro e/ou na superfície das partículas carreadoras, as partículas carreadoras estando a) na forma particulada seca e transportando pelo menos uma carga de superfície eletrostática e b) sendo pelo menos de modo substancial, uniformemente distribuídas sobre a superfície externa do substrato inanimado, tal como um grânulo de fertilizante.

[011] US 6113950 refere-se a uma composição de pesticida compreendendo partículas de pesticidas biológicos e partículas de TiO2 durável, uma forma modificada de TiO2.

[012] WO 2017/017234 refere-se a partículas compostas compreendendo (i) pelo menos uma partícula de baculovírus; e (ii) um revestimento de envelopamento de cera para a partícula de baculovírus de (i) feita de pelo menos uma cera que é degradável e/ou solúvel no intestino de uma larva de uma espécie de artrópode.

[013] Mgm Blanco et al reportam o resultado de estudos avaliando formulações granulares baseadas em polímeros de Bacillus thuringiensis israelensis contra larvas de aedes. As formulações granulares contêm protetor UV verde de malaquita. As formulações preferenciais compreendem como polímero, gelatina ou goma acácia.

[014] Ibargutxi, M.A. et al investiga o efeito de uma seleção de branqueadores ópticos na atividade inseticida de Bacillus thuringiensis.

[015] Atualmente não existe uma solução comercial eficaz e economicamente viável para melhorar a resiliência dos biopesticidas aos raios UV.

[016] Existe, portanto, a necessidade de fornecer formulações estáveis a UV alternativas e preferencialmente melhoradas para liberação de agentes biológicos, tais como bactérias, vírus, fungos e/ou dsRNA a plantas e animais. Adicionalmente, existe uma necessidade adicional de fornecer formulações nas quais o agente biológico, por exemplo, bactérias, vírus, fungos e/ou dsRNA seja menos suscetível à oxidação. A Invenção

[017] De acordo com um primeiro aspecto da invenção, é fornecida uma partícula composta tendo um diâmetro médio de volume na faixa de 2-200 mícrons, compreendendo: i. pelo menos um agente biológico selecionado a partir de uma bactéria, vírus, um fungo, um ácido nucleico e combinações de dois ou três dos mesmos; ii. pelo menos um bloqueador de UV; e iii. cera.

[018] Tais partículas podem ser aplicadas e irão aderir a plantas e animais. Quaisquer insetos que infestam a planta ou animal podem entrar em contato com e normalmente comer a partícula, tornando-se infectados com a bactéria, vírus, fungo e/ou ácido nucleico, por exemplo, dsRNA, siRNA ou RNAi, o que levará ao controle da infestação de insetos.

[019] Preferencialmente, a cera será uma que seja degradável e/ou solúvel no intestino de um inseto ou larva do mesmo. As ceras adequadas incluem aquelas que solubilizam ou degradam ou atacam a superfície o suficiente para liberar o ativo em um ambiente de intestino larval, por exemplo, em um pH básico. Tais ceras são tipicamente selecionadas a partir de ceras naturais que são ingeridas por larvas, como cera de carnaúba, cera de farelo de arroz, cera de candelila, cera de cana-de-açúcar, cera de ouricuri. Outras ceras adequadas incluem ceras sintéticas, tais como ceras de amida, ceras de polietileno, ceras de polietileno funcionalizadas, ceras de polietileno oxidadas ou uma mistura ou combinação de duas ou mais das mesmas. As ceras preferidas incluem cera de carnaúba, cera de abelha, cera de farelo de arroz e cera de candelila e misturas dos mesmos. Normalmente, as ceras usadas na invenção têm uma temperatura de fusão ≥40°C, dependendo do projeto. Ceras naturais adequadas para uso na invenção incluem ceras tendo um ponto de fusão de preferencialmente ≥50°C, e mais preferencialmente são feitas de ceras duras com um ponto de fusão ≥70°C. Exemplos de ceras naturais para uso na presente invenção incluem cera de carnaúba, cera de abelha, cera chinesa, cera de goma-laca, cera de espermacete, palmitato de miricila, palmitato de cetila, cera de candelila, cera de ricino, cera de ouricuri, cera de lã, cera de cana-de-açúcar, cera de retamo, cera de farelo de arroz e semelhantes.

[020] O bloqueador de UV pode ser qualquer agente capaz de bloquear os efeitos adversos da luz UV e, por exemplo, pode ser dióxido de titânio, produtos Blankophor, oxil metoxicinamato, óleo de soja modificado, nanopartículas de óxido de zinco, beta-caroteno, ácido p-aminobenzóico, protetores UV do tipo estilbeno (por exemplo, resveratrol) e as misturas dos mesmos. Outros protetores de radiação podem ser compostos conhecidos por reduzir o impacto de raios UV, como produtos de carbono, antioxidantes ou enzimas oxidativas.

[021] Um bloqueador de UV particularmente preferencial é o dióxido de titânio.

[022] Partículas da invenção contêm tipicamente o bloqueador de UV em uma quantidade de até 20% em peso da cera, preferencialmente até 10% em peso, preferencialmente pelo menos 0,5%, preferencialmente pelo menos 1%. A % pode variar de acordo com a potência do bloqueador. Em exemplos específicos, usamos TiO2 a cerca de 5% p/p (50g TiO2/1 Kg), Blankophor PO1 a cerca de 2% p/p (20g/Kg), Blankophor DSA a cerca de 2% (20g/Kg) e Blankophor DS a cerca de 2% p/p (20g/Kg).

[023] Normalmente, a partícula pode compreender adicionalmente um agente químico ativo. Preferencialmente, o agente químico ativo é um inseticida. Alternativamente, o agente químico pode ser um atrator de inseto ou um semioquímico. Os inseticidas adequados incluem um piretroide ou um inseticida organofosforado. Inseticidas adequados que podem ser adicionados às partículas compostas da invenção incluem α-cipermetrina, λ-cialotrina, [ciano- (3-fenoxifenil)-metil]-3-(2,2-dibromoetenil) -2,2dimetilciclopropano-1- carboxilato (deltametrina), T-fluvalinato, pirimifós-metil, clorpirifós, malatião, terbufós, fosmete, tiametoxame, clotianidina, acetamiprida, espinosade, rinaxapir e afins.

[024] Convenientemente, a partícula pode compreender adicionalmente um estimulante alimentar adicionado, tal como açúcares, por exemplo, sacarose, frutose, açúcar de palma, xarope dourado e afins misturados na mesma na forma particulada ou líquida, melaço, mel, sorbitol ou outras iscas artificiais ou orgânicas, incluindo voláteis selecionados de álcoois, ésteres e compostos aromáticos, tais como acetato de etil, 3-metilbutanol, hexanoato de etila, 2-feniletanol, octanoato de etila, (E)-4-decenoato de etila, decanoato de etila, dodecanoato de etila e afins, ou outros extratos de plantas ou um atrativo de larvas, tal como um feromônio de agregação de larvas, por exemplo o de Cydia pomonella.

[025] As partículas podem incluir outros aditivos, tais como agentes corantes, tais como branqueadores ópticos e agentes corantes disponíveis comercialmente, tais como agentes corantes alimentares, plastificantes, tais como glicerina ou óleo de soja, antioxidantes, tais como vitamina E, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), e outros antioxidantes que podem estar presentes, ou as misturas dos mesmos.

[026] O agente biológico pode compreender quaisquer bactérias eficazes no controle de insetos, em particular insetos que infestam culturas. As bactérias preferenciais incluem bactérias aeróbias. As bactérias adequadas incluem Bacillus thuringiensis, Lysinibacillus sphaericus e Paenibacillus popilliae.

[027] Uma bactéria preferencial é Bacillus thuringiensis. Bacillus thuringiensis (ou Bt) é uma bactéria Gram-positiva que vive no solo, comumente usada como pesticida biológico. A Bt também ocorre naturalmente no intestino de lagartas de vários tipos de mariposas e borboletas, bem como nas superfícies das folhas, ambientes aquáticos, fezes de animais, ambientes ricos em insetos e moinhos de farinha e instalações de armazenamento de grãos. Também foi observada parasitando outras mariposas, como Cadra calidella, em um experimento de laboratório trabalhando com C. calidella, muitas das mariposas estavam doentes devido a este patógeno.

[028] Os vírus adequados para inclusão no agente biológico incluem baculovírus e vírus de granulose. Os fungos adequados incluem fungos entomopatogênicos (por exemplo, espécie Beauveria e espécie Hirsutella).

[029] Os ácidos nucleicos em geral são adequados para uso como agentes biológicos na invenção. Os ácidos nucleicos podem ser DNA ou RNA e podem ser de cadeia simples ou dupla (ss ou ds). Em particular, as partículas podem conter RNA para uso em abordagens de RNAi para controle de pragas - vide, por exemplo, a análise de Mamta, B. & Rajam, M.V. Physiol Mol Biol Plants (2017) 23: 487.

[030] Os agentes biológicos preferenciais são bactérias, fungos e ácidos nucleicos, especialmente bactérias e ácidos nucleicos, especialmente RNA.

[031] Partículas da invenção contêm tipicamente o agente biológico em uma quantidade de até 20% em peso da cera, preferencialmente até 10% em peso, preferencialmente pelo menos 0,1%, preferencialmente pelo menos 0,5%. A % pode variar de acordo com a potência do agente.

[032] Partículas compreendendo cera são conhecidas por adquirirem facilmente uma carga eletrostática, o que as permite aderir a plantas e animais. Partículas de qualquer tamanho (medidas convenientemente como diâmetro médio de volume, VMD) de até 200 µm, e preferencialmente de até 100 µm, são adequadas para uso na invenção, incluindo para aderência a plantas e animais. Em modalidades preferenciais, as partículas têm um tamanho adequado para serem comidas por um inseto ou larva das mesmas. Preferencialmente, as partículas têm um VMD de 2-200 µm, mais preferencialmente as partículas têm um VMD de 5-100 µm e, mais preferencialmente ainda , as partículas têm um VMD de 5-50 µm ou 5-50 µm. As partículas usadas nos exemplos tinham VMDs de aproximadamente 10-15 µm.

[033] As espécies de artrópodes que podem ser alvejadas por partículas compostas da invenção incluem espécies de pragas de culturas de Lepidoptera, espécies de pragas de Diptera e espécies de pragas de Coleoptera, como de Scarabaeidae. As pragas de insetos que podem ser alvejadas usando partículas compostas da invenção são normalmente membros das espécies Lepidoptera e incluem as larvas de espécies de Lepidoptera que infestam sítios de processamento de alimentos e armazenamento de alimentos, como a Traça do fumo também conhecida como Warehouse moth (Ephestia elutella), Mediterranean Flour moth (Ephestia Kuehniella) [também conhecida como "Indian Flour Moth" e "Mill moth"], Raisin moth (Cadra figulilella), traça-do- cacau (Cadra cautella) e traça-indiana-da-farinha (Plodia interpunctella). Outras pragas de insetos que infestam plantações em crescimento que podem ser alvejadas usando partículas compostas da invenção incluem as larvas da lagarta- da-espiga, também conhecida como broca-grande-do-tomateiro ou Tobacco budworm [Helicoverpa zea], Cotton bollworm, Podborer [Helicoverpa armigera], Beet armyworm [Spodoptera exigua], Egyptian Cotton leafworm [Spodoptera littoralis], Lagarta africana Spodoptera exempta, lagarta-da-soja [Anticarsia gemmatalis], Mariposa-cigana [Lymantria dispar], Mariposa-das-maçãs[Cydia pomonella], Traça-das-crucíferas [Plutella xylostella], False Codling moth [Thaumatotibia leucotreta], Traça-da-batatinha [Phthorimaea operculella], Summer fruit tortrix moth [Adoxophyes orana], Oriental tea tortrix moth [Homona magnanima], e Smaller tea tortrix moth, [Adoxophyes honmai].

[034] Preferencialmente as partículas são preparadas por um método compreendendo: i) fundir pelo menos uma cera; ii) adicionar pelo menos um bloqueador de UV à cera fundida de i); iii) adicionar pelo menos uma das bactérias, vírus, fungos e ácido nucleico (por exemplo, dsRNA ou RNAi) à cera fundida de ii) e misturar com a mesma; iv) resfriar o produto de iii) a um sólido; e v) fragmentar e triturar o produto de iv) a um tamanho de partícula como definido em outro lugar.

[035] Na etapa i), a cera pode ser uma cera única ou uma mistura de ceras. Outros aditivos, como aditivos químicos, iscas ou estimulantes alimentares também podem ser adicionados na etapa ii). A etapa de resfriamento iv) é preferencialmente alcançada de maneira rápida. Por exemplo, isso pode ocorrer despejando a mistura líquida de iii) em uma grande bandeja rasa ou outro receptáculo adequado que é então colocado dentro de um meio de congelamento adequado, como um congelador, e mantido a uma temperatura na faixa de cerca de menos 5°C a menos 30°C, tal como a menos 24°C. Meios adicionais para atingir fusão rápida em i) e resfriamento do produto de iii) na etapa iv) incluem o uso de mantle vessels disponíveis comercialmente, tais como a chaleira Style D com super capa disponível das Lee Industries, Philipsburg, EUA, que são capazes de aquecer as misturas da invenção a altas temperaturas de liquefação e, em seguida, resfriá-las rapidamente a uma temperatura intermediária, como a temperatura de fusão da mistura, antes de despejar o líquido resfriado em um receptáculo como uma bandeja e refrigerar posteriormente, formando um sólido corpo de cera. Por último, a ordem de adição do bloqueador de UV e do agente biológico não é material, a ordem pode ser invertida ou eles podem ser adicionados ao mesmo tempo.

[036] Uma vez que a etapa de resfriamento de iv) é concluída, o bloco de cera resultante pode então ser fragmentado, triturado e micronizado para tamanhos de partícula do diâmetro desejado.

[037] Bactérias, vírus, fungos e ácidos nucleicos podem ser sensíveis à temperatura e podem não ser capazes de suportar a temperatura de fusão da cera. Quando esse é o caso, outros métodos de preparação das partículas são conhecidos, como partículas de soluções saturadas de gás. Neste e em outros métodos, o uso de alta pressão pode diminuir a temperatura de fusão da cera, permitindo assim que a viabilidade do agente biológico seja mantida.

[038] As partículas do primeiro aspecto podem ser usadas em um método de liberação do agente biológico a plantas ou animais para o tratamento de uma infestação de insetos. O tratamento pode ser um tratamento profilático. O uso pode ser em uma planta GM à qual os insetos desenvolveram resistência.

[039] As partículas do primeiro aspecto também podem ser úteis em formulações de cosméticos, biorremediação e fabricação de alimentos.

[040] As composições preferenciais da invenção são aquelas que compreendem uma pluralidade de partículas de acordo com qualquer reivindicação anterior.

[041] Em aspectos adicionais, a invenção fornece uma partícula composta ou uma composição de acordo com a invenção, para uso no controle de uma infestação de insetos de uma planta ou animal.

[042] Em aspectos adicionais, a invenção fornece uma partícula composta ou uma composição para uso de acordo com a invenção, para controle de uma infestação de insetos de uma planta GM, por exemplo, controle de infestação por insetos que são resistentes à planta GM.

[043] A partícula composta ou composição é seca nas modalidades preferenciais.

[044] Em modalidades preferenciais adicionais, a partícula composta ou composição está na forma de uma suspensão líquida e é, por exemplo, adequada para aplicação por pulverização.

[045] De acordo com um segundo aspecto da invenção, são fornecidas partículas compostas secas para uso no controle de uma infestação de insetos de uma planta ou animal, em que as partículas compreendem: i. pelo menos um agente biológico selecionado a partir de uma bactéria, um vírus, um fungo e um dsRNA; ii. pelo menos um bloqueador de UV; e iii. cera, a partícula formada de modo que o bloqueador de UV seja distribuído por toda a cera e a bactéria, vírus, fungo e/ou dsRNA seja totalmente encapsulado dentro da cera e do bloqueador de UV.

[046] De acordo com um terceiro aspecto da invenção, é fornecida uma formulação líquida compreendendo partículas suspensas em um líquido para uso no controle de uma infestação de insetos de uma planta ou animal, em que as partículas compreendem iv. pelo menos um agente biológico selecionado a partir de uma bactéria, um vírus, um fungo e um dsRNA; v. pelo menos um bloqueador de UV; e vi. cera,

[047] a partícula formada de modo que o bloqueador de UV seja distribuído por toda a cera e a bactéria, vírus, fungo e/ou dsRNA seja totalmente encapsulado dentro da cera e do bloqueador de UV.

[048] Em relação ao segundo e terceiro aspectos da invenção, as partículas compostas são conforme descritas em relação ao primeiro aspecto.

[049] A formulação líquida pode ser um líquido aquoso ou uma formulação líquida oleaginosa.

[050] As formulações aquosas podem incluir surfactantes selecionados a partir de gamas comercialmente disponíveis de surfactantes vendidos sob as marcas registradas, tais quais Libsorb, Silwet, Tween, Span, Tensiofix, Brij, Torpedo, Newmans, Lansurf, Atplus, Atlox, Synperonic, Fortune, Guard, Rhino, Biopower, e afins. Destes surfactantes, Tensiofix e Span são os mais preferenciais.

[051] As formulações líquidas deste aspecto da invenção podem incluir estimulantes alimentares adicionais na forma líquida ou sólida, como descrito acima.

[052] As formulações líquidas de acordo com este aspecto da invenção podem ser aplicadas a tecido eucariótico selecionado a partir de tecido de planta, como folhas, caules, corpos frutíferos e flores.

[053] As formulações oleaginosas, ou seja, as formulações de dispersão de óleo (OD), podem conter qualquer óleo adequado para uso na invenção o qual pode ser selecionado a partir de óleos de petróleo, tal como óleo de parafina,

óleos de pulverização de verão, a gama solvesso® de solventes, éter de petróleo e óleos de pulverização de inverno conhecidos na técnica e óleos vegetais, tais como óleo de colza, óleo de soja, óleo de girassol, óleo de palma e afins.

[054] As partículas compostas da invenção, uma vez distribuídas às superfícies alvejadas, são capazes de aderir às mesmas, à medida que o elemento aquoso da composição evapora ou, no caso de um elemento oleaginoso, o óleo se dispersa e fica disponível para ingestão pelas larvas de alimentação alvejadas. Vantagens

[055] Uma vantagem das formulações da invenção é a proteção melhorada de agentes biológicos ativos contra raios UV, por exemplo, bactérias e/ou ácidos nucleicos, para uso de pesticidas. A inclusão em partículas de cera formuladas protegeu o agente ativo da degradação por raios UV durante a aplicação em campo e pode auxiliar na redução do estresse oxidativo durante o armazenamento. Verificou-se que os agentes foram protegidos pelas formulações na superfície da folha e se foram ativados nas condições alcalinas do intestino médio do inseto.

[056] Uma vantagem adicional é que as partículas contendo cera da invenção podem ser co-formuladas com adjuvantes que são conhecidos por absorver ou refletir raios UV e melhorar a eficácia sem a necessidade de estabilizadores UV em misturas de tanque no campo - esta última abordagem mostrou não ser custo-benefíca, devido às altas taxas necessárias para mostrar efeitos positivos. Ademais, a mistura em tanque de acordo com o estado da técnica pode ser necessária em tais quantidades com aditivos particulados que a capacidade de pulverização é adversamente afetada, outra desvantagem que pode ser evitada na presente invenção.

[057] As partículas da invenção, incorporando adjuvantes bloqueadores UV dentro das partículas carregadas com o agente-vírus ativo, melhoraram a proteção UV e reduziram muito as quantidades necessárias, reduzindo, portanto, o custo da formulação.

[058] Seguem agora exemplos que ilustram a invenção. Deve ser entendido que os exemplos não devem ser interpretados como limitando a invenção de qualquer maneira.

[059] O seguinte é acompanhado pelas figuras que mostram:

[060] As Fig. 1, 2 e 3 mostram a proteção de biopesticida de baculovírus da radiação UV em uma formulação da invenção. Exemplo 1

INTRODUÇÃO

[061] O agente biológico (vírus) foi formulado em partículas de cera contendo bloqueador de UV.

[062] Chave:

[063] BV: Matéria-prima de Corpos de Oclusão de Baculovírus

[064] NPV: Nucleopoliedrovírus, um gênero da família de vírus baculoviridae incluído no âmbito do BV

[065] GV: Granulovírus, um gênero da família de vírus baculoviridae incluído no âmbito do BV

1. MATERIAIS:

[066] Ingrediente ativo (BV da espécie escolhida - SpliNPV alvejando Spodoptera littoralis, ou o verme da folha de algodão egípcio) originário do NRI

[067] Cera de candelila e Cera de farelo de arroz.

[068] Dióxido de titânio (TiO2)

2. EQUIPAMENTO:

[069] Placa de aquecimento que aquece até 150°C (Stuart scientific Ltd)

[070] Balança de duas casas decimais (Ohaus®)

[071] Congelador que resfria a pelo menos -24°C (qualquer marca/modelo servirá)

[072] Misturador/homogeneizador de alto cisalhamento (IKA® T18 digital)

[073] Moinho de fragmentação (KT modelo de manuseio limitado 04)

[074] Moinho de trituração (Apex® LTD tipo 314s)

[075] Moinho de jato de ar (qualquer marca/modelo servirá)

[076] Potes de amostra de tamanho adequado

3. PROCEDIMENTO DETALHADO

3.1. Usando uma balança calibrada, pesa-se a quantidade necessária de ceras carreadoras - 125,0 g de cera de farelo de arroz, 125,0 g de cera de candelila e 12,50 g de TiO2.

[077] Coloca-se uma mistura 50:50 de cera de candelila: cera de farelo de arroz (% p/p) em uma panela e coloca-se em uma placa de aquecimento ajustada para uma temperatura de 120° C. A cera é aquecida até fundir completamente e um líquido transparente sem sólidos é observado.

[078] Usando uma balança calibrada, uma quantidade do BV ativo a 1% p/p é pesada.

3.1.1. O BV e o TiO2 são adicionados juntos à cera fundida rapidamente por um período total de 60s e dispersos dentro da cera fundida por mistura de alto cisalhamento (usando um misturador de alto cisalhamento IKA® T18) para garantir uma distribuição uniforme na cera.

3.2. A cera é então transferida para uma bandeja rasa forrada com papel alumínio e transferida para um congelador ajustado a -24°C para resfriar e solidificar rapidamente dentro de aproximadamente 1-2h.

3.3. Uma vez que o material formulado é congelado em um bloco ou placa totalmente sólido, ele é quebrado em grandes pedaços e enviado para moagem. Os pedaços são moídos em um moinho de fragmentação (KT Handling Limited,

Modelo 04) em partículas de aproximadamente 2 mm de diâmetro médio

3.4. O material fragmentado é então triturado em partículas menores em um moinho de trituração (modelo 314s, da Apex® Ltd) em partículas de 150 µm de diâmetro médio.

3.5. O material triturado é adicionalmente micronizado em um moinho de jato (Hosokawa® Alpine Jet AFG 100 moinho de jato de leito fluidizado) para atingir a granulação de tamanho de partícula ~ 10µm.

3.6. O material micronizado contendo partículas de baculovírus e TiO 2 é armazenado em um recipiente de amostra adequado sob condições de refrigeração a 4°C, até o uso.

[079] As partículas foram usadas para testar as taxas de mortalidade de pragas contra controles. Principais descobertas

[080] Os resultados do estudo mostraram proteção consistente do biopesticida de baculovírus contra radiação UV na formulação. Vide a Fig. 1.

[081] Os bioensaios replicados mostraram um efeito consistente da formulação contendo bloqueador de UV (linha superior), com >80% de eficácia sendo mantida após 16 horas de exposição a raios UV (equivalente a 5 dias de exposição à luz solar no campo), em comparação com cerca de 30% para o vírus NPV em bruto (linha do meio) ou produto biopesticida comercial (linha inferior). Um bioensaio adicional indicou que > 80% de eficácia foi mantida mesmo após 96 horas de exposição aos raios UV (equivalente a cerca de 30 dias no campo). Vide a Fig. 2.

[082] A pulverização de uma única dose de NPV bruto, o padrão comercial ou formulações da invenção em plantas de tomate ou repolho, em seguida, expondo-as a luzes UV simulando a luz solar por 12 horas por dia por 0,1,2,3,4 ou 5 dias mostrou que as duas formulações da invenção (duas linhas superiores)

tiveram eficácia > 90% após 5 dias, em comparação com o padrão comercial (duas linhas inferiores) que tiveram cerca de 30%. Teste da Planta de Tomate

[083] Um exemplo adicional foi realizado comparando uma formulação da invenção com um produto disponível comercialmente (Littovir (SpliNPV). Os dados foram obtidos referentes a mortalidade para até 8 dias pós-infecção e mostraram mortalidade mantida em 60% após 8 dias de exposição à raios UV em comparação com 10% para Littovir (que após 8 dias teve mortalidade reduzida para a do controle, a constar, água). Vide a Fig. 3.

[084] A análise subsequente mostrou que a perda de atividade para as formulações da invenção ocorreu na primeira hora de exposição à raios UV. Isso pode ser devido à degradação de qualquer vírus não encapsulado presente; nesse caso, a proteção conferida pela formulação pode ter mantido o vírus essencialmente sem degradação como resultado da exposição aos raios UV. Discussão

[085] Uma das limitações do uso de agentes biológicos, por exemplo, baculovírus, como agentes de controle biológico é sua perda de atividade em condições de campo devido à inativação pela luz ultravioleta.

[086] Quando usadas no campo, as formulações da invenção podem estender e até mesmo estender dramaticamente a vida útil de agentes ativos, por exemplo, biopesticidas, o que significa que os agricultores podem reduzir o número de pulverizações necessárias para proteger as culturas e/ou que os produtores de biopesticidas podem reduzir drasticamente a quantidade de ingrediente ativo para alcançar o mesmo resultado. A pulverização profilática do biopesticida agora é uma opção devido à longevidade alcançada pela invenção. Os exemplos usaram vírus, mas a invenção é aplicável a outros agentes biológicos sensíveis a raios UV.

[087] As formulações estáveis a raios UV da invenção também podem aumentar a gama de plantas e as condições de crescimento para aplicações de biopesticidas de vírus. Exemplo 2

[088] Toxinas Bt são conhecidas por serem degradadas rapidamente pela luz solar; por exemplo, em estudos preliminares, quarenta e um por cento (41%) das toxinas testadas permaneceram após 24 horas. Em superfícies de plantas, a luz solar degrada Bt; a meia-vida das toxinas Bt pode ser de 1-4 dias.

[089] Testamos uma formulação da invenção quanto à sua capacidade de prevenir a inativação induzida por raios UV. Os resultados mostraram que após 96 horas na câmara UV (equivalente a um mês no campo), a formulação Bt foi eficaz, como visto na tabela abaixo: Lavagem da lâmina - 96 Bioensaio DBM em folha horas de exposição aos de repolho - 16DAT raios UV Partículas de cera - sem <10% de mortalidade <10% bloqueador de UV Partículas de cera - 50% 60% bloqueador de TiO2

[090] Bt é uma aeróbia, que requer oxigênio para crescer (ser ativada). Os resultados mostraram que: - 1) sobreviveu ao processo de inclusão de fusão a quente> 120 graus 2) sobreviveu com o encapsulamento de cera 3) a mortalidade não foi significativamente reduzida na presença de bloqueador de UV.

[091] A invenção fornece assim partículas compostas tendo um diâmetro médio de volume na faixa de 2-200 mícrons compreendendo ativo(s) mais pelo menos um bloqueador de UV.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Partícula composta, caracterizada pelo fato de que tem um diâmetro médio de volume na faixa de 2 a 200 mícrons compreendendo: i. pelo menos um agente biológico selecionado a partir de um fungo, um ácido nucleico e combinações dos mesmos; ii. pelo menos um bloqueador de UV; e iii. cera.

2. Partícula composta de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o bloqueador de UV é distribuído por toda a cera.

3. Partícula composta de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o bloqueador de UV está presente em uma quantidade de até 20%, em peso, da partícula.

4. Partícula composta de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que o agente biológico está presente em uma quantidade de até 20%, em peso, da partícula.

5. Partícula composta de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o ácido nucleico compreende RNAi ou dsRNA.

6. Partícula composta de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a cera é selecionada a partir de ceras naturais, ceras sintéticas, ceras minerais e misturas das mesmas.

7. Partícula composta de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um agente químico ativo.

8. Partícula composta de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que tem um diâmetro médio de volume na faixa de 5 a 100 mícrons.

9. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende uma pluralidade de partículas definidas em qualquer uma das reivindicações 1 a 8.

10. Partícula composta de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 ou composição de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de ser para uso no controle de uma infestação de insetos de uma planta ou animal.

11. Partícula composta ou composição de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de ser para controle de uma infestação de insetos de uma planta GM, por exemplo, controle da infestação por insetos que são resistentes à planta GM.

12. Partícula composta ou composição de acordo com a reivindicação 10 ou 11, caracterizada pelo fato de que a partícula composta ou composição é seca.

13. Partícula composta ou composição de acordo com a reivindicação 10 ou 11, caracterizada pelo fato de que a partícula composta ou composição está na forma de uma suspensão líquida.