BR112020017047A2

BR112020017047A2 - materiais e métodos para atrair e controlar nematoides fitopatogênicos

Info

Publication number: BR112020017047A2
Application number: BR112020017047-0A
Authority: BR
Inventors: Sean Farmer; Ken Alibek; Maja MILOVANOVIC
Original assignee: Locus Agriculture Ip Company, Llc
Priority date: 2018-02-20
Filing date: 2019-02-20
Publication date: 2021-02-23
Also published as: MX2020008750A; CA3091936A1; WO2019164878A1; AU2019223975A1; US20210084909A1; EP3755150A1; EP3755150A4

Abstract

A invenção se refere a materiais e método para atrair e controlar nematoides fitopatogênicos. Em formas de realização específicas, são fornecidas composições que compreendem a raiz de Valeriana, que afasta os nematoides das plantas, e/ou uma composição à base de micróbios compreendendo micro-organismos nematicidas e/ou seus subprodutos de crescimento, que controlam os nematoides mediante contato. As composições podem ser aplicadas ao ambiente de uma planta, incluindo o solo, para atrair e controlar nematoides, e para reduzir e/ou prevenir danos às plantas causados por nematoides.

Description

MATERIAIS E MÉTODOS PARA ATRAIR E CONTROLAR NEMATOIDES

FITOPATOGÊNICOS Referência Cruzada a Pedido de Patente Relacionado

[001] Este pedido de patente reivindica prioridade ao Pedido de Patente Provisório US nº 62/632,660, depositado em 20 de fevereiro de 2018, que é aqui incorporado por referência em sua totalidade. Fundamentos da Invenção

[002] A fim de aumentar a produtividade e proteger as culturas contra agentes patogênicos, pragas e doenças, os agricultores dependem muito do uso de produtos químicos sintéticos e fertilizantes químicos; no entanto, quando excessivamente usados ou aplicados de forma inadequada, essas substâncias podem escoar para águas superficiais, infiltrar-se em águas subterrâneas e evaporar para o ar. Como fontes de poluição do ar e da água, essas substâncias são cada vez mais examinadas, tornando o seu uso responsável um imperativo ecológico e comercial. Mesmo quando devidamente utilizados, a sobredependência e o uso em longo prazo de determinados fertilizantes e pesticidas químicos podem alterar de forma deletéria os ecossistemas do solo, reduzir a tolerância ao stress, aumentar a resistência às pragas e impedir o crescimento e a vitalidade das plantas e animais.

[003] Os nematoides são conhecidos por infectar plantas e animais. Esses vermes microscópicos podem ser encontrados em quase todos os tipos de ambiente. Ao residir no solo, os nematoides utilizam a quimiotaxia para localizar raízes de plantas para se alimentar, causando danos significativos à estrutura radicular e o desenvolvimento inadequado das plantas. O dano se manifesta, em geral, pelo crescimento de galhas, nós de raízes e outras anormalidades. A formação de galhas leva à redução do tamanho da raiz e à ineficácia do sistema radicular, o que, por sua vez, afeta seriamente outras partes da planta. Como resultado, a planta enfraquecida fica vulnerável a ataques de outros agentes patogênicos. Sem o tratamento adequado, a planta morre. Os nematoides causam milhões de dólares de danos todos os anos a gramíneas, plantas ornamentais e culturas alimentares.

[004] Os nematoides são uma classe de lombrigas ou oxiúros do filo Nematoda. Exemplos da classe são os nematoides formadores de cistos do gênero Heterodera (por exemplo, H. glycines, H. avenae e H. shachtii) e Globodera (por exemplo, G. rostochiens e G. pallida), os nematoides “stubby-root” do gênero Trichodorus, os nematoides de bulbos e caules do gênero Ditylenyi, o nematoide dourado Heterodera rostochiensis, os nematoides das galhas do gênero Meloidogyne (por exemplo, M. javanica, M. hapla, M. arenaria e M. incognita), os nematoides de lesão das raízes do gênero Pratylenchus (por exemplo, P. goodeyi, P. penetrans, P. zeae, P. coffeae, P. brachyurus e P. thornei), os nematoides dos citros do gênero Tylenchulus e os nematoides do gênero Belonalaimus.

[005] Os nematoides das galhas (Meloidogyne spp.) são um dos três gêneros de nematoides parasitas de plantas que mais prejudicam economicamente em plantações hortícolas e de campo. Os nematoides das galhas estão distribuídos em todo o mundo e são parasitas obrigatórios das raízes de milhares de espécies de plantas, incluindo plantas monocotiledôneas e dicotiledôneas, herbáceas e lenhosas. As culturas vegetais cultivadas em climas quentes podem sofrer perdas graves devidos aos nematoides das galhas e muitas vezes são tratadas comumente com um nematicida químico. Os danos pelos nematoides das galhas resultam em crescimento fraco, diminuição da qualidade e produtividade da cultura e redução da resistência a outros estresses (por exemplo, seca, outras doenças). Um alto nível de danos pode levar à perda total da safra. Por exemplo, cerca de 1,5 bilhões de dólares por ano são perdidos apenas para nematoides de cistos da soja.

[006] Os nematicidas convencionais usados para o controle de nematoides são aplicados no sulco de sementes na plantação. Devido à toxicidade para os animais próximos, como pássaros, pivôs centrais superiors com aplicações líquidas de compostos tóxicos, como Nemacur, Temik, Furadan, Dazinat e Mocap, caíram em desuso.

[007] Desde a década de 1960, o brometo de metila tem sido utilizado pelos produtores para esterilizar eficazmente os campos antes da plantação, principalmente para o controle de nematoides, bem como para tratar doenças e ervas daninhas; no entanto, uma vez que este composto tóxico é utilizado na forma gasosa, mais de metade da quantidade injetada no solo pode eventualmente acabar na atmosfera e contribuir para o afinamento da camada de ozônio. Em 2005, os países desenvolvidos proibiram o brometo de metila ao abrigo do Protocolo de Montreal, que é um tratado internacional assinado em 1987 para proteger a camada de ozônio estratosférico.

[008] Ao abrigo da proibição, o tratado permite o uso limitado de brometo de metila em morangos, amêndoas e outras culturas que carecem de alternativas para um controle eficaz e acessível de nematoides, doenças e ervas daninhas. A extensão do uso autorizado diminui a cada ano e provavelmente terminará em breve. Encontrar alternativas ao brometo de metila é, portanto, uma prioridade para produtores e agências reguladoras; no entanto, nenhum produto único fornece o amplo espectro de controle oferecido pelos brometos de metila.

[009] Os crescentes mandatos regulamentares que regem a disponibilidade e o uso de produtos químicos, bem como as demandas dos consumidores por alimentos sem resíduos e cultivados de forma sustentável, estão afetando a indústria e causando uma evolução de pensamento sobre como lidar com a infinidade de desafios. Embora a eliminação total de produtos químicos não seja viável neste momento, os agricultores estão cada vez mais adotando o uso de medidas biológicas como componentes viáveis dos programas de Manejo Integrado de Nutrientes e de Manejo Integrado de Pragas.

[010] Devido às desvantagens das principais abordagens descritas acima, a demanda por pesticidas mais seguros e estratégias alternativas de controle de pragas está aumentando. Particularmente, nos últimos anos, o controle biológico de nematoides tem atraído grande interesse. Este método utiliza agentes biológicos, como micróbios vivos, bioprodutos derivados desses micróbios e combinações destes, como pesticidas. Estes pesticidas biológicos têm vantagens importantes sobre outros pesticidas convencionais. Por exemplo, são menos prejudiciais em comparação aos pesticidas químicos convencionais. Além disso, eles são mais eficientes e específicos, e geralmente se degradam rapidamente, levando a uma menor poluição ambiental.

[011] O uso de biopesticidas e outros agentes biológicos têm sido bastante limitado por dificuldades na produção, transporte, administração, preços e eficácia. Por exemplo, muitos micróbios são de difícil desenvolvimento e, subsequentemente, implantam-se em quantidades suficientes para serem úteis nos sistemas de produção agrícola e florestal. Este problema é exacerbado pela perda de viabilidade e/ou atividade devido ao processamento, formulação, armazenamento, estabilização antes da distribuição, esporulação de células vegetativas como um meio de estabilização, transporte e aplicação. Além disso, uma vez aplicados, os produtos biológicos podem não prosperar por qualquer número de razões, incluindo, por exemplo, densidades de células iniciais insuficientes, a incapacidade de competir eficazmente com a microflora existente em um determinado local, e ser introduzidos ao solo e/ou outras condições ambientais nas quais o micróbio não pode florescer ou mesmo sobreviver.

[012] Por isso, há uma necessidade urgente de desenvolvimento de métodos e materiais melhorados e ecologicamente corretos para o controle de nematoides. Breve Sumário da Invenção

[013] A presente invenção fornece composições e métodos para atrair e controlar nematoides. Além disso, os presentes métodos e composições podem ser usados para prevenir danos às colheitas devido à infecção por nematoides, assim resultando em aumentos da produtividade. Vantajosamente, a presente invenção utiliza substâncias não tóxicas, como, por exemplo, micróbios e subprodutos benéficos do cultivo microbiano.

[014] Em uma forma de realização, a presente invenção fornece uma composição nematicida para atrair e, subsequentemente, controlar os nematoides no solo. Em algumas formas de realização, a composição compreende uma substância quimioatrativa e uma quantidade nematicidamente eficaz de uma composição à base de micróbios compreendendo um ou mais microrganismos benéficos e/ou seus subprodutos de crescimento, em que a composição à base de micróbios é capaz de ação nematicida.

[015] A composição nematicida pode ser usada para proteger plantas, seres humanos ou animais, atraindo e controlando pestes nematoides. Vantajosamente, a composição não é tóxica para os seres humanos.

[016] Em formas de realização preferidas, a composição compreende Valeriana (Valeriana officinalis) como um poderoso atrativo de nematoide. Em algumas formas de realização, a raiz de Valeriana pode ser cortada em pequenas partes e adicionada à composição. Em algumas formas de realização, o extrato de raiz de Valeriana ou o pó de raiz de Valeriana está incluído na composição. Pós, extratos e outras formas de outras partes de plantas de Valeriana também estão previstos para inclusão na composição.

[017] Em algumas formas de realização, a composição pode incluir células vivas e/ou micélio do fungo filamentoso Pleurotus ostreatuse/ou um seu subproduto do crescimento. Em uma forma de realização, o subproduto de crescimento é uma substância tóxica para nematoides. Em uma forma de realização específica, o subproduto de crescimento tóxico para nematoides de P. ostreatus é o peróxido de ácido linoleico.

[018] Em uma forma de realização, a composição pode ser composta por uma bactéria capaz de produzir o subproduto de crescimento antinematoide, a avermectina (por exemplo, Streptomyces avermitilis). Em uma forma de realização, a composição é composta por avermectina sem o micróbio que a produziu.

[019] Em uma forma de realização, a composição pode ser composta por uma levedura capaz de produzir um biotensoativo glicolipídico antinematoide. Por exemplo, em uma forma de realização, a composição pode incluir um micróbio capaz de produzir um tipo de glicolipídio antinematoide conhecido como manosileritritol lipídios (MEL) (por exemplo, Pseudozyma aphidis ou Meyerozyma guilliermondii). Em uma forma de realização, a composição compreende um EML sem o micróbio que o produziu.

[020] Os micróbios e/ou os subprodutos do crescimento de micróbios da composição nematicida podem ser obtidos através de processos de cultivo que variam de pequena a grande escala. Esses processos de cultivo incluem, mas não se limitam a, cultivo/fermentação submersa, fermentação em estado sólido (SSF) e suas combinações. A composição nematicida pode incluir, por exemplo, micróbios, o caldo resultante da fermentação e/ou subprodutos de crescimento purificado.

[021] Em uma forma de realização, um subproduto antinematoides de crescimento de micróbios é adicionado na forma de um sobrenadante não purificado resultante do cultivo de um microrganismo. Em outra forma de realização, o subproduto de crescimento pode ser extraído do sobrenadante e, opcionalmente, purificado, antes da inclusão na presente composição. O subproduto de crescimento pode incluir, por exemplo, ácido linoleico, avermectina e/ou MEL.

[022] Em uma forma de realização, a presente invenção fornece métodos para o controle de nematoides presentes em uma planta e/ou no ambiente ao redor de uma planta, bem como para a prevenção de danos a plantas e/ou culturas causados por nematoides, em que os métodos compreendem as etapas de: aplicar uma substância quimioatrativa a um local, em que o local está dentro do ambiente circundante da planta, porém localizado a uma distância de, por exemplo, 1 polegada a 60 polegadas, ou mais, da planta.

[023] Em algumas formas de realização, o método compreende ainda a aplicação de uma composição à base de micróbios compreendendo um ou mais microrganismos benéficos e/ou seus subprodutos de crescimento antinematoides ao local.

[024] O local de aplicação pode ser uma distância de, por exemplo, 1 a 60 polegadas (2,54 a 152,4 cm), ou mais, da planta mais próxima, aproximadamente 5 a 50 polegadas (12,7 a 127 cm) de distância, ou aproximadamente 10 a 25 polegadas (25,4 a 63,5 cm) de distância. Quando, por exemplo, a planta faz parte de um grupo de plantas, como uma cultura ou jardim, vários locais de aplicação podem ser empregados, por exemplo, espaçados uniformemente entre linhas de plantas ou entre plantas individuais. O local também poderia estar na periferia de um arranjo ou campo onde as plantas estão crescendo. Em determinadas formas de realização preferidas, a composição quimiotraente e/ou à base de micróbios é aplicada em ou diretamente sobre o solo.

[025] Vantajosamente, o método rapidamente afasta os nematoides fitopatogênicos das plantas e os controla quando em contato com eles. Em algumas formas de realização, a composição controla, por exemplo, mata, o nematoide rapidamente após o contato.

[026] Em uma forma de realização, o método compreende a aplicação de um ou mais microrganismos benéficos e/ou seus subprodutos de crescimento antinematoides, sem o quimioatrativo, a uma planta ou parte da planta. Assim, em situações em que nematoides e/ou ovos de nematoides estão presentes em uma planta, os nematoides e/ou os recém- eclodidos serão controlados antes de causar danos significativos à planta.

[027] As composições da presente invenção podem ser aplicadas, por exemplo, através de um sistema de irrigação, à superfície do solo e/ou às superfícies de pragas. A aplicação mecânica por meio de ferramentas manuais convencionais, aplicações robóticas e/ou aplicações através de “drones” aéreos ou terrestres também é facilitada. Além disso, em uma forma de realização, a composição pode ser colocada em uma cavilha ou em uma estação-isca, que é colocada no solo no local de aplicação. Breve Descrição dos Desenhos

[028] A Figura 1 mostra uma configuração de gráfico para avaliação da eficácia do atraente de nematoides, incluindo locais da zona de inoculação de nematoides e da zona de aplicação do atraente.

[029] A Figura 2 mostra a infestação percentual (da população plotada total de nematoides) em três locais diferentes nas parcelas para avaliação do atraente de nematoides. “Centro” se refere ao centro da zona de inoculação, “atraente” se refere à zona atraente e “não tratado” se refere a todas as outras áreas plotadas. Descrição Detalhada da Invenção

[030] A presente invenção fornece composições e métodos para atrair e controlar nematoides. Além disso, os presentes métodos e composições podem ser usados para prevenir danos às colheitas devido à infecção por nematoides, assim resultando em aumentos da produtividade. Vantajosamente, a presente invenção utiliza substâncias não tóxicas, como, por exemplo, micróbios e subprodutos benéficos do cultivo microbiano.

[031] Em uma forma de realização, a presente invenção fornece uma composição nematicida para atrair e, subsequentemente, controlar os nematoides no solo. Em algumas formas de realização, a composição compreende uma substância quimioatrativa e uma quantidade nematicidadmente eficaz de um ou mais microrganismos benéficos e/ou seus subprodutos de crescimento, em que os microrganismos benéficos e/ou seus subprodutos de crescimento são capazes de ação nematicida.

[032] Em uma forma de realização, as composições podem ser aplicadas ao solo ou outro local a alguma distância das plantas, assim fornecendo métodos de controle de nematoides, bem como prevenindo danos às plantas e/ou culturas causados por nematoides. Definições Selecionadas

[033] Como aqui se utiliza, referência a uma “composição à base de micróbios” significa uma composição que compreende componentes que foram produzidos como resultado do crescimento de microrganismos ou outras culturas de células. Assim, a composição à base de micróbios pode ser composta pelos próprios micróbios e/ou subprodutos do crescimento microbiano. Os micróbios podem estar em um estado vegetativo, na forma de esporos, na forma de micélios, em qualquer outra forma de propágulo, ou uma mistura desses. Os micróbios podem ser planctônicos ou em forma de biofilme, ou uma mistura de ambos. Os subprodutos de crescimento podem ser, por exemplo, metabólitos, componentes da membrana celular, proteínas expressas e/ou outros componentes celulares. Os micróbios podem estar intactos ou lisados. Em algumas formas de realização, os micróbios estão presentes, com o meio no qual foram cultivados, na composição à base de micróbios. As células podem estar presentes, por exemplo, em uma concentração de 1 x 104, 1 x 105, 1 x 106, 1 x 107, 1 x 108, 1 x 109, 1 x 1010, 1 x 1011, 1 x 1012 ou 1 x 1013 ou mais UFC por mililitro da composição.

[034] A presente invenção fornece ainda “produtos à base de micróbios”, que são produtos que devem ser aplicados na prática para alcançar um resultado desejado. O produto à base de micróbios pode ser simplesmente a composição à base de micróbios colhidos do processo de cultivo de micróbios ou seus componentes individuais, como o sobrenadante. Alternativamente, o produto à base de micróbios pode incluir outros ingredientes que foram adicionados. Esses ingredientes adicionais podem incluir, por exemplo, estabilizantes, tampões, carreadores apropriados, como água, soluções salinas ou qualquer outro carreador apropriado, nutrientes adicionais para apoiar o crescimento microbiano adicional, potenciadores de crescimento não nutrientes e/ou agentes que facilitam o rastreio dos micróbios e/ou da composição no ambiente ao qual é aplicado. O produto à base de micróbios também pode incluir misturas de composições à base de micróbios. O produto à base de micróbios também pode incluir um ou mais componentes de uma composição à base de micróbios que tenham sido processados de alguma forma, tal como, mas não limitado a, filtragem, centrifugação, lise, secagem, purificação e similares.

[035] Conforme aqui utilizado, “colhido” no contexto dos processos de fermentação se refere à remoção de parte ou de toda a composição à base micróbios de um vaso de crescimento.

[036] Como usado neste documento, um “biofilme” é um complexo agregado de microrganismos, em que as células aderem umas às outras. Em algumas formas de realização, os biofilmes podem aderir às superfícies. As células em biofilmes são fisiologicamente distintas das células planctônicas do mesmo organismo, que são células únicas que podem flutuar ou nadar em meio líquido.

[037] Conforme aqui utilizado, uma molécula “isolada” ou “purificada” de ácido nucleico, polinucleotídeo, polipeptídeo, proteína ou composto orgânico, como uma molécula pequena, é substancialmente isenta de outros compostos, como material celular, com o qual ela é associada na natureza. Um polinucleotídeo purificado ou isolado (ácido ribonucleico (RNA) ou ácido desoxirribonucleico (DNA)) é livre dos genes ou sequências que o flanqueiam em seu estado de ocorrência natural. Um polipeptídeo purificado ou isolado é livre de aminoácidos ou sequências que o flanqueiam em seu estado de ocorrência natural. Uma cepa microbiana “isolada” significa que a cepa é removida do ambiente na qual ela existe na natureza. Assim, a cepa isolada pode existir como, por exemplo, uma cultura biologicamente pura ou como esporos (ou outras formas da cepa) em associação com um carreador.

[038] Como aqui usada, uma “cultura biologicamente pura” é aquela que foi isolada de materiais com os quais é associada na natureza. Em uma forma de realização preferida, a cultura foi isolada de todas as outras células vivas. Em outras formas de realização preferidas, a cultura biologicamente pura tem características vantajosas em comparação a uma cultura do mesmo micróbio que existe na natureza. As características vantajosas podem ser, por exemplo, um período de teste melhorado de um ou mais subprodutos do seu crescimento.

[039] Em algumas formas de realização, os compostos purificados têm pelo menos 60% em peso (peso seco) do composto de interesse. De preferência, a preparação tem pelo menos 75%, de preferência pelo menos 90%, e mais preferivelmente pelo menos 99% em peso do composto de interesse. Por exemplo, um composto purificado é aquele que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 98%, 99% ou 100% (p/p) em peso do composto desejado. A pureza é medida por qualquer método padrão apropriado, por exemplo, por cromatografia em coluna, cromatografia em camada fina ou análise por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC).

[040] Um “metabólito” se refere a qualquer substância produzida por metabolismo (por exemplo, um subproduto do crescimento) ou uma substância necessária para participar em um determinado processo metabólico. Um metabólito pode ser um composto orgânico que é um material de partida (por exemplo, glicose), um intermediário (por exemplo, acetil-

COA) em ou um produto final (por exemplo, n-butanol) do metabolismo. Exemplos de metabólitos incluem, mas não se limitam a, biopolímeros, enzimas, ácidos, solventes, álcoois, proteínas, vitaminas, minerais, microelementos, aminoácidos, carboidratos e biotensoativos.

[041] Os intervalos aqui fornecidos são considerados abreviados para todos os valores dentro do intervalo. Por exemplo, um intervalo de 1 a 20 é entendido como incluindo qualquer número, combinação de números ou subintervalo do grupo consistindo em 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, bem como todos os valores decimais intermediários entre os números inteiros mencionados acima, como, por exemplo, 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,8 e 1,9. Em relação aos subintervalos, os “subintervalos aninhados” que se estendem de cada ponto final do intervalo são especificamente contemplados. Por exemplo, um subintervalo aninhado de um intervalo exemplificativo de 1 a 50 pode incluir de 1 a 10, de 1 a 20, de 1 a 30 e de 1 a 40 em uma direção, ou de 50 a 40, de 50 a 30, de 50 a 20 e de 50 a 10 na outra direção.

[042] Tal como aqui se utiliza, “não patogênico” significa incapaz de causar doenças a um organismo.

[043] Conforme aqui usado, “prevenção” significa evitar, retardar, prevenir ou minimizar o início ou a progressão de uma situação ou ocorrência específica. A prevenção pode incluir, mas não requer, prevenção absoluta ou completa, o que significa que a situação ou a ocorrência ainda pode se desenvolver, porém em um momento posterior ao que aconteceria sem medidas preventivas. A prevenção pode incluir a redução da gravidade do início de uma situação ou ocorrência, e/ou a inibição da progressão da situação ou ocorrência para uma situação ou ocorrência mais grave.

[044] Conforme aqui utilizado, “reduzir” se refere a uma alteração negativa, e o termo “aumento” se refere a uma alteração positiva, de pelo menos (positivo ou negativo) 1%, 5%, 10%, 25%, 50%, 75% ou 100%.

[045] Conforme aqui usado, “referência” se refere a uma condição padrão ou de controle.

[046] Conforme aqui usado, “tensoativo” se refere a um composto que reduz a tensão superficial (ou tensão interfacial) entre dois líquidos ou entre um líquido e um sólido. Os tensoativos atuam como, por exemplo, detergentes, agentes umectantes, emulsificantes, agentes espumantes e dispersantes. Um “biotensoativo” é um tensoativo produzido por um organismo vivo.

[047] Conforme usado neste documento, “agricultura” significa o cultivo e a reprodução de plantas, algas e/ou fungos para fins de alimentos, fibras, biocombustíveis, medicamentos, cosméticos, suplementos, ornamentais e outros usos. De acordo com a presente invenção, a agricultura também pode incluir horticultura, paisagismo, jardinagem, conservação de plantas, fruticultura e arboricultura. Também incluídos na agricultura estão o cuidado, o monitoramento e a manutenção do solo.

[048] Tal como aqui usado, uma “praga” é qualquer organismo, exceto o ser humano, que seja destrutivo, deletério e/ou prejudicial para os seres humanos ou para as preocupações humanas (por exemplo, agricultura, horticultura, criação de gado, aquacultura). As pragas podem causar e/ou transportar infecções, infestações e/ou doenças.

As pragas podem causar danos diretos, por exemplo, às plantas, por ingestão de partes vegetais. As pragas podem ser organismos unicelulares ou pluricelulares, incluindo, mas não se limitando a, vírus, fungos, bactérias, parasitas, artrópodes e/ou nematoides.

[049] Tal como aqui se utiliza, o termo “controle” utilizado em referência a uma praga significa matar, incapacitar, imobilizar, erradicar ou reduzir o número populacional de uma praga, ou de outra forma tornar a praga substancialmente incapaz de causar danos.

[050] Tal como é utilizado no presente documento, “nematicida” e “antinematoide” significam ter a capacidade de controlar nematoides. Assim, por exemplo, matar nematoides, reduzir sua motilidade e reduzir a contagem de ovos são exemplos de atividade nematicida/antinematoide. Por conseguinte, uma quantidade “nematicidamente eficaz” de uma substância é uma quantidade capaz de ação nematicida/antinematoide.

[051] Conforme aqui utilizado, o “ambiente circundante” de uma planta significa o solo e/ou outro meio no qual a planta está crescendo, que pode incluir a rizosfera. Em certas formas de realização, o ambiente ao redor não se estende além, por exemplo, de um raio de 100 pés (30,48 m), 10 pés (3,05 m), 8 pés (2,44 m) ou 6 pés (1,83 m) da planta.

[052] A descrição aqui contida de qualquer aspecto ou forma de realização da invenção usando termos como “compreendendo”, “tendo”, “incluindo” ou “contendo” com referência a um elemento ou elementos destina-se a suportar um aspecto semelhante ou forma de realização da invenção que “consiste em”, “consiste essencialmente em” ou “compreende substancialmente” esse elemento ou elementos específicos, salvo indicação em contrário ou claramente contradito pelo contexto.

[053] A menos que especificamente declarado ou óbvio a partir do contexto, conforme usado neste documento, o termo “ou” é entendido como inclusivo. A menos que seja especificamente declarado ou óbvio a partir do contexto, conforme aqui usado, os termos “um”, “uma”, “uns”, “umas” e “o”, “a” são compreendidos como únicos ou plurais.

[054] A menos que seja especificamente declarado ou óbvio a partir do contexto, conforme aqui usado, o termo “cerca de” é entendido como dentro de uma faixa de tolerância normal na técnica, por exemplo, dentro de 2 desvios padrão da média. Aproximadamente pode ser entendido como dentro de 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5%, 0,1%, 0,05% ou 0,01% do valor declarado.

[055] A enumeração de uma listagem de grupos químicos em qualquer definição de uma variável aqui inclui definições dessa variável como qualquer grupo único ou combinação de grupos listados. A enumeração de uma forma de realização para uma variável ou aspecto neste documento inclui a forma de realização como qualquer forma de realização única ou em combinação com quaisquer outras formas de realização ou partes dela.

[056] Todas as referências aqui referidas ou citadas são incorporadas por referência em sua totalidade, incluindo todas as figuras e tabelas, na medida em que não sejam inconsistentes com os ensinamentos explícitos deste relatório descritivo. Composições Nematicidas

[057] A presente invenção fornece composições e métodos para atrair e controlar nematoides. Além disso, os presentes métodos e composições podem ser usados para prevenir danos às colheitas devido à infecção por nematoides, assim resultando em aumentos da produtividade. Vantajosamente, a presente invenção utiliza substâncias não tóxicas, como, por exemplo, micróbios e subprodutos benéficos do cultivo microbiano.

[058] Em uma forma de realização, a presente invenção fornece uma composição nematicida para atrair e, subsequentemente, controlar os nematoides no solo. Em algumas formas de realização, a composição compreende uma substância quimioatrativa. Em algumas formas de realização, a composição compreende uma quantidade nematicidamente eficaz de uma composição à base de micróbios, compreendendo um ou mais microrganismos benéficos e/ou seus subprodutos de crescimento, em que a composição baseada em micróbios é capaz de ação nematicida.

[059] Em formas de realização preferidas, a composição compreende tanto a substância quimioatrativa quanto a composição baseada em micróbios.

[060] Em uma forma de realização, a composição compreende Valeriana (Valeriana spp., por exemplo, V. officinalis) como um poderoso nematoide quimioatrativo. Em algumas formas de realização, a raiz de Valeriana pode ser cortada em pequenas partes e adicionada à composição. Em algumas formas de realização, o extrato de raiz de Valeriana ou o pó de raiz de Valeriana está incluído na composição. Qualquer outro composto ou subproduto associado à planta de Valeriana também pode ser usado como um atrativo, de acordo com as composições e métodos em questão, na forma de pós, extratos ou outras formas, como o ácido valerênico. Também podem ser usadas outras substâncias atrativas aceitáveis, como as substâncias solúveis e gasosas produzidas pelas raízes das plantas hospedeiras ou pelos microrganismos da rizosfera.

[061] Em uma forma de realização, a composição compreende o extrato de raiz de Valeriana em uma concentração de 0,1% a 5,0%, 0,3% a 4,0% ou 0,5% a 2,0%.

[062] Em algumas formas de realização, a composição pode compreender uma composição baseada em micróbios compreendendo um ou mais microrganismos benéficos e/ou seus subprodutos de crescimento.

[063] Em uma forma de realização, a composição compreende as células vivas e/ou micélios do fungo filamentoso Pleurotus ostreatus e/ou um subproduto do crescimento do mesmo. Em uma forma de realização, o subproduto de crescimento é uma substância tóxica para nematoides. Em uma forma de realização específica, o subproduto de crescimento tóxico para nematoides de P. ostreatus é o peróxido de ácido linoleico.

[064] Em uma forma de realização, a composição pode ser composta por uma bactéria capaz de produzir o subproduto de crescimento antinematoide, a avermectina (por exemplo, Streptomyces avermitilis). Em uma forma de realização, a composição é composta por avermectina sem o micróbio que a produziu.

[065] Em uma forma de realização, a composição compreende a avermectina purificada em concentrações de 0,01 a 90% em peso, de 0,1 a 50% ou de 0,1 a 20%. Em outra forma de realização, o MEL purificado pode estar em combinação com um carreador aceito, em que a avermectina pode ser apresentada em concentrações de 0,01 µg/ml a 50 µg/ml, de 0,1 µg/ml a 25 µg/ml ou de 0,5 µg/ml a 15 µg/ml.

[066] Em uma forma de realização, a composição pode compreender uma levedura capaz de produzir um biotensoativo glicolipídico antinematoide. Por exemplo, em uma forma de realização, a composição pode compreender um micróbio capaz de produzir um tipo de glicolipídio antinematoide conhecido como manosileritritol lipídios (MEL). Em uma forma de realização, o micróbio produtor de MEL pode ser Pseudozyma spp. (por exemplo, P. aphidis), Candida spp., Ustilago spp., Schizonella spp., Kurtzmanomyces spp. e/ou Meyerozyma guilliermondii (também conhecido como Pichia guilliermondii). Em uma forma de realização, a composição compreende um MEL sem o micróbio que o produziu.

[067] Em uma forma de realização, a composição compreende MEL purificado em concentrações de 0,01 a 90% em peso, de 0,1 a 50% ou de 0,1 a 20%. Em outra forma de realização, o MEL purificado pode estar em combinação com um carreador aceito, em que o MEL pode ser apresentado em concentrações de 0,001 a 50% (v/v), de 0,01 a 20% (v/v) ou de 0,02 a 5% (v/v).

[068] Os microrganismos úteis de acordo com a presente invenção podem ser, por exemplo, cepas não fitopatogênicas de bactérias, leveduras e/ou fungos. Esses microrganismos podem ser microrganismos naturais ou geneticamente modificados. Por exemplo, os microrganismos podem ser transformados com genes específicos para exibir características específicas. Os microrganismos também podem ser mutantes de uma cepa desejada. Tal como aqui se utiliza, “mutante” significa uma cepa, variante genética ou subtipo de um microrganismo de referência, em que o mutante tem uma ou mais variações genéticas (por exemplo, uma mutação pontual, mutação missense, uma mutação nonsense, deleção, duplicação, mutação frameshift ou uma expansão repetida) em comparação ao microrganismo de referência. Os procedimentos para produzir mutantes são bem conhecidos na técnica microbiológica. Por exemplo, a mutagênese por UV e a nitrosoguanidina são amplamente utilizadas para esse fim.

[069] Os micróbios e/ou os subprodutos do crescimento de micróbios da composição nematicida podem ser obtidos através de processos de cultivo que variam de pequena a grande escala. Esses processos de cultivo incluem, mas não se limitam a, cultivo/fermentação submersa, fermentação em estado sólido (SSF) e suas combinações. A composição nematicida pode incluir, por exemplo, micróbios, o caldo resultante da fermentação e/ou subprodutos de crescimento purificado.

[070] Em uma forma de realização, um subproduto antinematoide de crescimento de micróbios é adicionado na forma de um sobrenadante não purificado resultante do cultivo de um microrganismo. Em outra forma de realização, o subproduto de crescimento pode ser extraído do sobrenadante e, opcionalmente, purificado, antes da inclusão na presente composição. O subproduto de crescimento pode ser, por exemplo, ácido linoleico, avermectina e/ou MEL.

[071] Os micróbios e/ou o meio de crescimento (incluindo camadas ou frações discretas) resultantes do crescimento microbiano podem ser removidos do vaso de crescimento no qual foram produzidos e transferidos, por exemplo, através de tubulação para uso imediato.

[072] Os microrganismos no produto à base de micróbios podem estar ativos ou inativos, na forma de células, forma de esporos e/ou forma de micélios. Os produtos à base de micróbios podem ser utilizados sem estabilização, conservação e armazenamento adicionais. Vantajosamente, o uso direto desses produtos à base de micróbios preserva uma alta viabilidade dos microrganismos, reduz a possibilidade de contaminação por agentes estranhos e microrganismos indesejáveis e mantém a atividade dos subprodutos do crescimento microbiano.

[073] Em uma forma de realização, os produtos de cultivo podem ser preparados como um produto de biomassa seco por aspersão. A biomassa pode ser separada por métodos conhecidos, como centrifugação, filtragem, separação, decantação, uma combinação de separação e decantação, ultrafiltragem ou microfiltragem. O produto de biomassa pode ser separado do meio de cultivo e seco por aspersão.

[074] Os produtos à base de micróbios podem ser formulados de várias formas, incluindo produtos líquidos, sólidos, granulares, em pó ou de liberação lenta, por meios que serão compreendidos por aqueles de habilidade na técnica como possuindo a vantagem da presente revelação.

[075] As formulações sólidas da invenção podem ter formas e formatos diferentes, como cilindros, hastes, blocos, cápsulas, comprimidos, pílulas, pellets, tiras, pontas, etc. As formulações sólidas também podem ser moídas, granuladas ou em pó. O material granulado ou em pó pode ser prensado em comprimidos ou utilizado para encher cápsulas ou envoltórios de gelatina pré-fabricados. Formulações semi- sólidas podem ser preparadas em preparações de pasta, cera, gel ou creme.

[076] As composições sólidas ou semi-sólidas da invenção podem ser revestidas usando compostos de revestimento em filme usados na indústria farmacêutica, como polietileno glicol, gelatina, sorbitol, goma, açúcar ou álcool polivinílico. Isso é particularmente essencial para comprimidos ou cápsulas usadas em formulações pesticidas. O revestimento em filme pode proteger o manipulador de entrar em contato direto com o ingrediente ativo nas formulações. Além disso, um agente de amargor, como o benzoato de denatônio ou quassin, também pode ser incorporado às formulações pesticidas, ao revestimento ou ambos.

[077] As composições da invenção também podem ser preparadas em formulações em pó e preenchidas em cápsulas de gelatina pré-fabricadas.

[078] As concentrações dos ingredientes nas formulações e a taxa de aplicação das composições podem variar muito dependendo da praga, planta ou área tratada, ou método de aplicação. Métodos para Cultura dos Micróbios

[079] A presente invenção usa métodos de cultivo de microrganismos e de produção de metabólitos microbianos e/ou outros subprodutos do crescimento microbiano. A presente invenção utiliza ainda processos de cultivo adequados para o cultivo de microrganismos e a produção de metabólitos microbianos em uma escala desejada. Esses processos de cultivo incluem, mas não se limitam a, cultivo/fermentação submersa, fermentação em estado sólido (SSF) e modificações, híbridos e/ou combinações desses.

[080] Conforme aqui utilizado, “fermentação” refere-se ao cultivo ou crescimento de células sob condições controladas. O crescimento pode ser aeróbico ou anaeróbico.

[081] Em uma forma de realização, a presente invenção fornece materiais e métodos para a produção de biomassa (por exemplo, material celular viável), metabólitos extracelulares (por exemplo, pequenas moléculas e proteínas excretadas), nutrientes residuais e/ou componentes intracelulares (por exemplo, enzimas e outras proteínas).

[082] O vaso de crescimento de micróbios utilizado de acordo com a presente invenção pode ser qualquer fermentador ou reator de cultivo para uso industrial. Em uma forma de realização, o vaso pode ter controles/sensores funcionais ou pode ser conectado a controles/sensores funcionais para medir fatores importantes no processo de cultivo, como pH, oxigênio, pressão, temperatura, umidade, densidade microbiana e/ou concentração de metabólitos.

[083] Em uma forma de realização adicional, o vaso também pode ser capaz de monitorar o crescimento de microrganismos dentro do vaso (por exemplo, medição do número de células e fases de crescimento). Alternativamente, uma amostra diária pode ser retirada do vaso e sujeita à enumeração por técnicas conhecidas na arte, como a técnica de diluição em placas. A diluição em placas é uma técnica simples usada para estimar o número de organismos em uma amostra. A técnica também pode fornecer um índice pelo qual diferentes ambientes ou tratamentos podem ser comparados.

[084] Em uma forma de realização, o método inclui complementar o cultivo com uma fonte de nitrogênio. A fonte de nitrogênio pode ser, por exemplo, nitrato de potássio, nitrato de amônio, sulfato de amônio, fosfato de amônio, amônia, ureia e/ou cloreto de amônio. Essas fontes de nitrogênio podem ser utilizadas independentemente ou em combinação de duas ou mais.

[085] O método pode fornecer oxigenação para a cultura em crescimento. Uma forma de realização utiliza a câmera lenta de ar para remover o ar com baixo teor de oxigênio e introduzir ar oxigenado. No caso da fermentação submersa, o ar oxigenado pode ser o ar ambiente suplementado diariamente através de mecanismos que incluem impulsores para agitação mecânica de líquido, e aspersores de ar para fornecer bolhas de gás ao líquido para dissolução do oxigênio no líquido.

[086] O método pode ainda incluir complementar o cultivo com uma fonte de carbono. A fonte de carbono é normalmente um carboidrato, como glicose, sacarose, lactose, frutose, trealose, manose, manitol e/ou maltose; ácidos orgânicos como ácido acético, ácido fumárico, ácido cítrico, ácido propiônico, ácido málico, ácido malônico e/ou ácido pirúvico; álcoois como etanol, propanol, butanol, pentanol, hexanol, isobutanol, e/ou glicerol; gorduras e óleos como óleo de soja, óleo de canola, óleo de farelo de arroz, óleo de oliva, óleo de milho, óleo de gergelim e/ou óleo de linhaça, etc. Essas fontes de carbono podem ser usadas independentemente ou em uma combinação de duas ou mais.

[087] Em uma forma de realização, fatores de crescimento e nutrientes residuais para microrganismos estão incluídos no meio. Isto é particularmente preferido ao cultivar micróbios que são incapazes de produzir todas as vitaminas que eles requerem. Nutrientes inorgânicos, incluindo elementos residuais como ferro, zinco, cobre, manganês, molibdênio e/ou cobalto, também podem ser incluídos no meio. Além disso, podem ser incluídas fontes de vitaminas, aminoácidos essenciais e microelementos, por exemplo, sob a forma de farinhas ou farelos, como farinha de milho, ou sob a forma de extratos, como o extrato de levedura, o extrato de batata, o extrato de carne, o extrato de soja, o extrato de casca de banana, e semelhantes, ou em formas purificadas. Também podem ser incluídos aminoácidos como, por exemplo, aqueles úteis para a biossíntese de proteínas.

[088] Em uma forma de realização, sais inorgânicos também podem ser incluídos. Os sais inorgânicos que podem ser usados podem ser o di-hidrogenofosfato de potássio, hidrogenofosfato de dipotássio, hidrogenofosfato dissódico, sulfato de magnésio, cloreto de magnésio, sulfato de ferro, cloreto de ferro, sulfato de manganês, cloreto de manganês, sulfato de zinco, cloreto de chumbo, sulfato de cobre, cloreto de cálcio, cloreto de sódio, carbonato de cálcio e/ou carbonato de sódio. Esses sais inorgânicos podem ser utilizados de forma independente ou em combinação de dois ou mais.

[089] Em algumas formas de realização, o método de cultivo pode ainda compreender a adição de ácidos e/ou antimicrobianos adicionais ao meio antes e/ou durante o processo de cultivo. Agentes antimicrobianos ou antibióticos são usados para proteger a cultura contra contaminação. Além disso, agentes antiespumantes também podem ser adicionados para evitar a formação e/ou o acúmulo de espuma quando gás é produzido durante o cultivo submerso.

[090] O pH da mistura deve ser adequado para o microrganismo de interesse. Tampões e reguladores de pH, como carbonatos e fosfatos, podem ser usados para estabilizar o pH próximo a um valor de preferência. Quando íons metálicos estão presentes em altas concentrações, pode ser necessário o uso de um agente quelante no meio.

[091] Os micróbios podem ser cultivados em forma planctônica ou como biofilme. No caso do biofilme, o vaso pode ter dentro dele um substrato sobre o qual os micróbios podem ser cultivados em estado de biofilme. O sistema também pode ter, por exemplo, a capacidade de aplicar estímulos (como tensão de cisalhamento) que estimulam e/ou melhoram as características de crescimento do biofilme.

[092] Em uma forma de realização, o método de cultivo de microrganismos é realizado a cerca de 5º a cerca de 100ºC, de preferência de 15 a 60ºC, mais preferencialmente de 25 a 50ºC. Em outra forma de realização, o cultivo pode ser realizado continuamente a uma temperatura constante. Em outra forma de realização, o cultivo pode estar sujeito a mudanças de temperatura.

[093] Em uma forma de realização, o equipamento usado no método e no processo de cultivo é esterilizado. O equipamento de cultivo, como o reator/vaso, pode ser separado de, porém conectado a, uma unidade de esterilização, por exemplo, uma autoclave. O equipamento de cultivo também pode ter uma unidade de esterilização que esteriliza in situ antes de iniciar a inoculação. O ar pode ser esterilizado por métodos conhecidos na arte. Por exemplo, o ar ambiente pode passar por pelo menos um filtro antes de ser introduzido ao vaso. Em outras formas de realização, o meio pode ser pasteurizado ou, opcionalmente, sem calor adicionado, em que o uso de baixa atividade de água e baixo pH pode ser explorado para controlar o crescimento bacteriano indesejável.

[094] Em uma forma de realização, a presente invenção fornece ainda um método para a produção de metabólitos microbianos, como, por exemplo, biotensoativos, enzimas, proteínas, etanol, ácido lático, betaglucano, peptídios, intermediários metabólicos, ácidos graxos poli-insaturados e lipídios, por cultivo de uma cepa de micróbios da invenção sob condições apropriadas para o crescimento e a produção de metabólitos; e, opcionalmente, purificação do metabólito. O teor de metabólitos produzido pelo método pode ser, por exemplo, pelo menos 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90%.

[095] Vantajosamente, de acordo com a presente invenção, o produto à base de micróbios pode compreender o meio no qual os micróbios foram cultivados. O produto pode ser de, por exemplo, pelo menos, em peso, 1%, 5%, 10%, 25%, 50%, 75% ou 100% do meio de crescimento. A quantidade de biomassa no produto, em peso, pode ser, por exemplo, de 0% a 100%, inclusive todos os percentuais intermediários.

[096] Em algumas formas de realização, o teor de biomassa pode ser, por exemplo, de 5 g/l a 180 g/l ou mais, ou de 10 g/l a 150 g/l. A concentração celular pode ser, por exemplo, 1 x 109, 1 x 1010, 1 x 1011, 1 x 1012 ou 1 x 1013 CFU por grama do produto final.

[097] O subproduto de crescimento microbiano produzido por microrganismos de interesse pode ser retido nos microrganismos ou secretado no meio de crescimento. O meio pode conter compostos que estabilizam a atividade do subproduto de crescimento microbiano.

[098] O método e o equipamento para o cultivo de microrganismos e a produção dos subprodutos microbianos podem ser realizados em um lote, um processo quase contínuo ou um processo contínuo.

[099] Em uma forma de realização, toda a composição de cultivo microbiano é removida após a conclusão do cultivo (por exemplo, após, por exemplo, atingir uma densidade celular desejada, ou densidade de um metabólito especificado). Neste procedimento de lote, um lote totalmente novo é iniciado mediante a colheita do primeiro lote.

[100] Em outra forma de realização, apenas uma parte do produto de fermentação é removida de cada vez. Nesta forma de realização, a biomassa com células viáveis, esporos, conídios, hifas e/ou micélios permanece no vaso como um inoculante para um novo lote de cultivo. A composição que é removida pode ser um meio sem células ou conter células, esporos ou outras propágulos reprodutivos e/ou uma combinação deles. Dessa forma, um sistema quase contínuo é criado.

[101] Em uma forma de realização, os micróbios são cultivados dentro de 100, 50, 25, 10, 5, 1 ou menos milhas de onde será usado o produto à base de micróbios. Em outras formas de realização, os micróbios, o sobrenadante e/ou os subprodutos de crescimento microbiano podem ser colocados em recipientes de tamanho adequado, levando em conta, por exemplo, o uso previsto, o método de aplicação contemplado,

o tamanho do tanque de fermentação e qualquer meio de transporte da instalação de crescimento de micróbios para o local de uso. Assim, os recipientes nos quais a composição à base de micróbios é colocada podem ser, por exemplo, de até 1 galão, 2 galões, 5 galões, 25 galões, até 1.000 galões ou mais.

[102] De forma vantajosa, o método não requer equipamentos complicados ou alto consumo de energia. Os microrganismos de interesse podem ser cultivados em pequena ou grande escala no local e utilizados, mesmo estando ainda misturados com seus meios.

[103] De forma vantajosa, os produtos à base de micróbios podem ser produzidos em locais remotos. As instalações de crescimento de micróbios podem operar fora da rede utilizando, por exemplo, energia solar, eólica e/ou hidrelétrica. Preparação de Produtos à base de Micróbios

[104] Um produto à base de micróbios da presente invenção é simplesmente o meio de fermentação contendo os microrganismos e/ou os metabólitos microbianos produzidos pelos microrganismos e/ou quaisquer nutrientes residuais. O produto de fermentação pode ser usado diretamente sem extração ou purificação. Se desejado, a extração e a purificação podem ser facilmente obtidas usando métodos ou técnicas padrão de extração e/ou purificação descritos na literatura.

[105] Os microrganismos nos produtos à base de micróbios podem estar em uma forma ativa ou inativa, ou na forma de células vegetativas, esporos reprodutivos, conídios, micélio, hifas ou qualquer outra forma de propágulo microbiano. Os produtos à base de micróbios podem também conter uma combinação de qualquer uma dessas formas de um microrganismo.

[106] Em uma forma de realização, as diferentes cepas de micróbios são cultivadas separadamente e, em seguida, misturadas para produzir o produto à base de micróbios. Os micróbios podem, opcionalmente, ser misturados com o meio no qual são cultivados e secos antes da mistura.

[107] Os produtos à base de micróbios podem ser utilizados sem estabilização, conservação e armazenamento adicionais. Vantajosamente, o uso direto desses produtos à base de micróbios preserva uma alta viabilidade dos microrganismos, reduz a possibilidade de contaminação por agentes estranhos e microrganismos indesejáveis e mantém a atividade dos subprodutos do crescimento microbiano.

[108] Na colheita da composição à base de micróbios dos vasos de crescimento, outros podem ser adicionados à medida que o produto colhido é colocado em recipientes e/ou canalizado (ou transportado de outra forma para uso). Exemplos desses aditivos incluem carreadores, adjuvantes, enchimentos, plastificantes, lubrificantes, glidantes, corantes, pigmentos, agentes de amargor, agentes de tamponamento, agentes de controle de solubilidade, agentes de ajuste do pH, conservantes, outras composições à base de micróbios produzidas na mesma instalação ou em instalações diferentes, modificadores de viscosidade, nutrientes para o crescimento de micróbios, nutrientes para o crescimento de plantas, tensoativos, agentes emulsificantes, agentes de controle, pesticidas, herbicidas, solventes, biocidas, antibióticos, estabilizantes, agentes de resistência à luz ultravioleta e outros aditivos adequados que são normalmente utilizados para essas preparações.

[109] Agentes de enrijecimento ou endurecimento também podem ser incorporados para fortalecer as formulações e torná-las fortes o suficiente para resistir à pressão ou à força em determinadas aplicações, como solo, alargamento de raiz ou comprimidos de injeção em árvores.

[110] Em uma forma de realização, a composição pode ainda incluir agentes de tamponamento, incluindo, por exemplo, ácidos orgânicos e aminoácidos ou seus sais. Tampões adequados incluem citrato, gluconato, tartarato, malato, acetato, lactato, oxalato, aspartato, malonato, gluco- heptonato, piruvato, galactarato, glutarato, tartronato, glutamato, glicina, lisina, glutamina, metionina, cisteína, arginina e uma mistura desses. Ácidos fosfóricos e fosforosos ou seus sais também podem ser usados. Os tampões sintéticos são adequados para serem utilizados, mas é preferível utilizar tampões naturais, como ácidos orgânicos e aminoácidos ou seus sais.

[111] Em uma forma de realização, a composição pode ainda incluir agentes de ajuste do pH, incluindo, por exemplo, hidróxido de potássio, hidróxido de amônio, carbonato ou bicarbonato de potássio, ácido clorídrico, ácido nítrico, ácido sulfúrico ou uma mistura.

[112] Em uma forma de realização, componentes adicionais, como bicarbonato ou carbonato de sódio, sulfato de sódio, fosfato de sódio, bifosfato de sódio, podem ser incluídos na formulação.

[113] A composição pode ainda ser combinada com outros componentes ativos ou inativos aceitáveis. Esses componentes podem ser, por exemplo, um componente de óleo, como óleo de canela, óleo de cravo, óleo de algodão, óleo de alho ou óleo de alecrim; outro tensoativo natural, como as saponinas de Yucca ou Quillaja; ou o componente pode ser um aldeído, como o aldeído cinâmico. Outros óleos que podem ser usados como um componente pesticida ou adjuvantes incluem: óleo de amêndoa, óleo de cânfora, óleo de canola, óleo de rícino, óleo de cedro, óleo de citronela, óleo cítrico, óleo de coco, óleo de milho, óleo de eucalipto, óleo de peixew, óleo de gerânio, lecitina, óleo de capim-limão, óleo de linhaça, óleo mineral, óleo de menta ou hortelã-pimenta, óleo de oliva, óleo de pinho, óleo de colza, óleo de cártamo, óleos de salva, óleo de semente de gergelim, óleo de laranja doce, óleo de tomilho, óleo vegetal e óleo de galtéria.

[114] Em uma forma de realização, as composições podem incluir um ou mais compostos químicos com atividade nematicida. Esses incluem nematicidas de carbamato, tais como benomila, carbofurano, carbossulfano e cleotocarde; nematicidas de carbamato de oxima, como alanicarbe, aldicarbe, aldoxicarbe, oxamila; nematicidas organofosforosos como diamidafos, fenamifos, fostietan, fosfamidon, cadusafos, clorpirifos, diclofentião, dimetoato, etoprofos, fensulfotião, fostiazato, heterofos, isamidofos, isazofos, metomil, forato, fosfocarbe, terbufos, tiodicarbe, tionazina, triazofos, imiciafos e mecarfon. Outros compostos com atividade nematicida incluem acetoprol, benclotiaz, cloropicrina, dazomet, DB CP, DCIP, 1,2- dicloropropano, 1,3-dicloropropeno, furfural, iodometano, metame, brometo de metila, isotiocianato de metila e xilenóis.

[115] Opcionalmente, o produto pode ser armazenado antes do uso. O tempo de armazenamento é, de preferência, curto. Assim, o tempo de armazenamento pode ser inferior a 60 dias, 45 dias, 30 dias, 20 dias, 15 dias, 10 dias, 7 dias, 5 dias, 3 dias, 2 dias, 1 dia ou 12 horas. Em uma forma de realização preferida, se houver células vivas presentes no produto, o produto será armazenado a uma temperatura fria, como, por exemplo, menos de 20°C, 15°C, 10°C ou 5°C. Produção Local de Produtos à Base de Micróbio

[116] Em algumas formas de realização da presente invenção, uma instalação de crescimento de micróbios produz microrganismos frescos e de alta densidade e/ou subprodutos de crescimento microbiano de interesse em uma escala desejada. A instalação de crescimento de micróbios pode estar localizada no local ou próxima ao local de aplicação. A instalação produz composições à base de micróbios de alta densidade em cultivo em lotes, quase contínuo ou cultivo.

[117] As instalações de crescimento de micróbios da presente invenção podem ser localizadas no local onde será usado o produto à base de micróbios (por exemplo, um pomar de frutas cítricas). Por exemplo, a instalação de crescimento de micróbios pode estar a menos de 300, 250, 200, 150, 100, 75, 50, 25, 15, 10, 5, 3 ou 1 milha do local de uso.

[118] Como o produto baseado à base de micróbios pode ser gerado localmente, sem recorrer aos processos de estabilização, preservação, armazenamento e transporte de microrganismos da produção microbiana convencional, pode ser gerada uma densidade muito mais elevada de microrganismos, assim, é necessário um volume menor do produto à base de micróbios para uso na aplicação no local ou que permita aplicações microbianas de densidade muito maior quando necessário para alcançar a eficácia desejada. Isso permite um biorreator de menores proporções (por exemplo, vaso de fermentação menor, suprimentos menores de material de partida, nutrientes e agentes de controle de pH), o que torna o sistema eficiente e pode eliminar a necessidade de estabilizar as células ou separá-las de seu meio de cultura. A geração local do produto à base de micróbios também facilita a inclusão do meio de crescimento no produto. O meio pode conter agentes produzidos durante a fermentação que são particularmente adequados para uso local.

[119] As culturas de micróbios robustas, de alta densidade e produzidas localmente são mais eficazes no campo do que aquelas que permaneceram na cadeia de fornecimento por algum tempo. Os produtos à base de micróbios da presente invenção são particularmente vantajosos em comparação aos produtos tradicionais em que as células foram separadas dos metabólitos e nutrientes presentes no meio de crescimento da fermentação. Os tempos de transporte reduzidos permitem a produção e a entrega de lotes frescos de micróbios e/ou seus metabólitos na hora e no volume exigidos pela demanda local.

[120] As instalações de crescimento de micróbios da invenção produzem composições novas e à base de micróbios, compreendendo os próprios micróbios, metabólitos microbianos e/ou outros componentes do meio em que os micróbios são cultivados. Se desejado, as composições podem ter alta densidade de células vegetativas ou propágulos, ou uma mistura de células vegetativas e propágulos.

[121] Em uma forma de realização, a instalação de crescimento de micróbios está localizada em, ou perto, de um local onde os produtos à base de micróbios serão usados (por exemplo, um pomar de frutas cítricas), por exemplo, dentro de 300 milhas, 200 milhas ou até mesmo dentro de 100 milhas. De forma vantajosa, isso permite que as composições sejam personalizadas para uso em um local especificado. A fórmula e a potência das composições à base de micróbios podem ser personalizadas quanto às condições locais específicas no momento da aplicação, tais como, por exemplo, o tipo de solo, a planta e/ou a cultura que está sendo tratada; qual a época, o clima e/ou a época do ano em que uma composição está sendo aplicada; e qual modo e/ou taxa de aplicação está sendo utilizada.

[122] Vantajosamente, as instalações de crescimento de micróbios distribuídas oferecem uma solução para o problema atual de depender de produtores distantes e de dimensões industriais, cuja qualidade do produto sofre devido a atrasos de processamento a montante, estrangulamentos da cadeia de fornecimento, armazenamento impróprio e outras contingências que inibem a entrega e a aplicação oportunas de, por exemplo, um produto de alta contagem de células viável e do meio e metabólitos associados, nos quais as células são originalmente cultivadas.

[123] Além disso, ao produzir uma composição localmente, a formulação e a potência podem ser ajustadas em tempo real para um local específico e as condições presentes no momento da aplicação. Isso oferece vantagens em relação às composições que são pré-produzidas em um local central e têm, por exemplo, proporções e formulações definidas que podem não ser ideais para um determinado local.

[124] As instalações de crescimento de micróbios fornecem versatilidade de produção por sua capacidade de personalizar os produtos à base de micróbios para melhorar as sinergias com as regiões de destino. Vantajosamente, nas formas de realização preferidas, os sistemas da presente invenção aproveitam o poder dos microrganismos locais de ocorrência natural e seus subprodutos metabólicos.

[125] O tempo de cultivo para os vasos individuais pode ser, por exemplo, de 1 a 7 dias ou mais. O produto de cultivo pode ser colhido de várias formas diferentes.

[126] A produção e a entrega locais dentro de, por exemplo, 24 horas da fermentação resultam em composições puras, de alta densidade celular e em custos de envio substancialmente mais baixos. Tendo em conta as perspectivas de rápido avanço no desenvolvimento de inoculantes microbianos mais eficazes e poderosos, os consumidores se beneficiarão grandemente desta capacidade de fornecer rapidamente produtos à base de micróbios. Métodos de Controle de Nematoides

[127] Em uma forma de realização, a presente invenção fornece métodos para controlar os nematoides presentes em uma planta e/ou no ambiente ao redor de uma planta, bem como para prevenir danos a plantas e/ou culturas causadas por nematoides, em que os métodos compreendem as etapas de: aplicar uma composição nematicida da presente invenção a um local, onde o local está dentro do ambiente circundante da planta, porém localizado a uma distância de, por exemplo,

pelo menos 1 a 60 polegadas (2,54 a 152,4 cm), ou mais, de distância da planta.

[128] Em algumas formas de realização, a composição nematicida compreende uma substância quimioatrativa, como, por exemplo, o extrato de raiz de Valeriana. Em algumas formas de realização, a composição nematicida compreende um ou mais microrganismos benéficos e/ou subprodutos de crescimento antinematoides, por exemplo, uma composição à base de micróbios, conforme descrito em outras partes deste documento.

[129] Em algumas formas de realização, um ou mais microrganismos benéficos são P. ostreatus, S. avermitilis, P. aphidis e/ou M. guilliermondii. Em algumas formas de realização, os subprodutos de crescimento antinematoides compreendem ácido linoleico purificado e/ou não purificado, avermectina e/ou um glicolipídio nematicida (por exemplo, MEL).

[130] Em uma forma de realização, o método compreende aplicar tanto a substância quimioatrativa quanto a composição à base de micróbios como uma única aplicação. Em outra forma de realização, o método compreende aplicar a substância quimioatrativa e a composição à base de micróbios separadamente, por exemplo, individualmente ou sequencialmente.

[131] Em determinadas formas de realização preferidas, a composição quimiotrativa e/ou à base de micróbios é aplicada em ou diretamente sobre o solo.

[132] O local de aplicação pode ser uma distância de, por exemplo, 1 a 60 polegadas (2,54 a 152,4 cm), ou mais, da planta mais próxima, aproximadamente 5 a 50 polegadas (12,7 a 127 cm) de distância, ou aproximadamente 10 a 25 polegadas (25,4 a 63,5 cm) de distância. Quando, por exemplo, a planta faz parte de uma pluralidade (ou seja, mais de uma) de plantas, como uma cultura ou jardim, vários locais de aplicação podem ser empregados, por exemplo, espaçados uniformemente entre as fileiras de plantas ou entre plantas individuais. De preferência, cada um dos vários locais estão localizados a uma distância de 1 a 60 polegadas (2,54 a 152,4 cm), ou mais, de distância de cada uma das plantas na pluralidade. O local ou locais também podem estar na periferia de uma parcela ou campo onde as plantas estão crescendo.

[133] Vantajosamente, o método rapidamente afasta os nematoides fitopatogênicos das plantas e os controla quando em contato com eles. Em algumas formas de realização, a composição controla, por exemplo, mata, o nematoide rapidamente após o contato.

[134] Em uma forma de realização, substâncias que aumentam o crescimento de microrganismos benéficos e a produção de subprodutos nematicidas de crescimento microbiano também podem ser adicionadas à composição e/ou ao local de tratamento. Essas substâncias incluem, mas não se limitam a, carbono ou substratos orgânicos, como óleo, glicerol, açúcar ou outros nutrientes.

[135] Os substratos de carbono podem incluir, mas não se limitam a, fontes de carbono orgânico, como óleo natural ou sintético, incluindo óleo de fritura usado; gordura; lipídios; cera (natural ou parafina); ácidos graxos, como láurico; mirístico, etc.; álcool de ácido graxo, como álcool laurílico; ésteres anfífílicos de ácidos graxos, com glicerol, como o monolaurato de glicerila; glicol ésteres de ácido graxo, como o monoestearato de polietileno; aminas de ácidos graxos, como a lauril amida; amidas de ácido gordo; hexanos; glicerol; glicose; etc. Quando a produção de biotensoativo é desejada, é preferível utilizar um substrato de carbono insolúvel em água.

[136] Em uma forma de realização, a composição pode ser adicionada ao solo, meio de cultivo de plantas, plantas, meio aquático ou qualquer área a ser tratada para evitar danos por pragas. Os microrganismos benéficos podem crescer in situ para produzir subprodutos de crescimento nematicidas e nematoides de controle.

[137] Em uma forma de realização, a composição pode ser aplicada por pulverização, despejo, imersão, na forma de líquidos concentrados ou diluídos, soluções, suspensões, pós e similares, contendo essas concentrações do(s) agente(s) ativo(s) mais adequadas para uma finalidade específica. Elas podem ser aplicadas como se apresentam ou reconstituídas antes do uso.

[138] Em uma forma de realização, a composição de acordo com a presente invenção pode ser aplicada em cerca de 0,0001 libra/acre a cerca de 10 libras/acre, cerca de 0,001 libra/acre a cerca de 5 libras/acre, cerca de 0,01 libra/acre a cerca de 1 libra/acre, cerca de 0,01 libra/acre a cerca de 0,1 libra/acre ou cerca de 0,01 libra/acre a cerca de 0,05 libra/acre.

[139] Em uma forma de realização, a composição de acordo com a presente invenção é aplicada ao ambiente de uma planta de cerca de 1 a cerca de 100 dias, cerca de 2 a cerca de 50 dias, cerca de 10 a cerca de 40 dias, cerca de 20 a cerca de 30 dias após a aplicação inicial ao solo ou semente.

[140] Em formas de realização específicas, as composições podem ser, por exemplo, introduzidas em um sistema de irrigação, pulverizadas a partir de uma mochila ou dispositivos portáteis semelhantes, aplicadas por um dispositivo robótico terrestre ou aéreo, como um drone, e/ou aplicadas com uma semente. Além disso, em uma forma de realização, a composição pode ser colocada em uma cavilha para solo ou em uma estação-iscas, como as usadas para iscas de cupins, que é colocada no solo no local de aplicação. Além disso, a composição pode ser aplicada por injeção direta ao solo ou alargamentos de raízes.

[141] Em algumas formas de realização, as composições aqui fornecidas são aplicadas à superfície do solo sem incorporação mecânica. O efeito benéfico da aplicação ao solo pode ser ativado por chuva, aspersores, inundação ou irrigação por gotejamento.

[142] A composição também pode ser aplicada para promover a colonização benéfica das raízes e/ou rizosfera, bem como o sistema vascular da planta, a fim de promover a saúde e a vitalidade das plantas. Assim, o crescimento de micróbios de fixação de nitrogênio, como Rhizobium e/ou Mycorrhizaer, pode ser promovido, bem como outros micróbios endógenos ou exógenos que combatem pragas ou doenças, ou de outra forma promovem o crescimento, a saúde e/ou a produtividade da cultura.

[143] Em uma forma de realização específica, o método compreende aplicar um ou mais microrganismos benéficos e/ou um ou mais subprodutos de crescimento antinematoides, sem o quimioatrativo, a uma planta ou parte da planta. Assim, os métodos podem ser usados para o controle de nematoides que já estão presentes na planta, bem como para evitar danos à planta pelos nematoides presentes e/ou que podem chegar após a planta ser tratada com a composição (por exemplo, os nematoides que emergem de ovos presentes).

[144] Em uma forma de realização, a composição pode ser aplicada a uma planta germinada e/ou em crescimento, incluindo raízes, hastes e folhas. A composição também pode ser aplicada como um tratamento de sementes. O uso como tratamento de sementes é benéfico porque a aplicação pode ser alcançada facilmente, e a quantidade usada para o tratamento pode ser reduzida, reduzindo ainda mais a toxicidade potencial, se houver.

[145] A aplicação em sementes pode ser, por exemplo, por um revestimento de sementes ou por aplicação da composição ao solo simultaneamente ao plantio de sementes. Isso pode ser automatizado, por exemplo, fornecendo um dispositivo ou um sistema de irrigação que aplique a composição à base de micróbios juntamente com, e/ou adjacente a, as sementes no momento ou próximo ao momento de plantio das sementes. Assim, a composição à base de micróbios pode ser aplicada dentro, por exemplo, de 5, 4, 3, 2 ou 1 dia antes ou após o momento do plantio ou simultaneamente ao plantio das sementes.

[146] Em uma forma de realização, a presente invenção fornece um método de melhorar a saúde da planta e/ou aumentar a produtividade da colheita aplicando uma composição aqui revelada ao solo, semente ou partes da planta. Em outra forma de realização, a presente invenção fornece um método de aumentar a produtividade da cultura ou da planta compreendendo várias aplicações de uma composição descrita aqui.

[147] Em algumas formas de realização, os métodos e as composições de acordo com a presente invenção reduzem os danos a uma planta causados por nematoides em cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90% ou mais, em comparação às plantas que crescem em ambiente não tratado.

[148] Em determinadas formas de realização, os métodos e as composições segundo a invenção levam a um aumento da produtividade da cultura de cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90% ou mais, em comparação às culturas não tratadas.

[149] Em uma forma de realização, os métodos da presente invenção levam a uma redução no número de ovos de nematoides nas raízes de uma planta em cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90% ou mais, em comparação a uma planta que cresce em um ambiente não tratado.

[150] Em uma forma de realização, os métodos da invenção levam a um aumento da massa de uma planta em cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90% ou mais, em comparação a uma planta que cresce em um ambiente não tratado. Pragas-Alvo

[151] Nas formas de realização preferidas da invenção, porém não limitantes, o nematoide controlado é escolhido a partir de: (1) um nematoide que seja um nematoide fitopatogênico, tal como, porém não limitado a: os Mematoides das Galhas (Meloidogyne spp.) do arroz (por exemplo, M. incognita, M. javanica ou M. graminicola), da soja (por exemplo, M.

incognita ou M. arenaria), do algodão (por exemplo, M. incognita), da batata (por exemplo, M. chitwoodi ou M. hapla), do tomate (por exemplo, M. chitwoodi), do tabaco (por exemplo, M. incognita, M. javanica ou M. arenaria) e do milho (por exemplo, M. incognita); os Nematoides de Cistos (Heterodera spp.) do arroz (por exemplo, H. oryzae), da soja (por exemplo, H. glycines) e do milho (por exemplo, H. zeae); os Nematoides de Cistos (Globodera spp.) da batata (por exemplo, G. pallida ou G. rostochiensis); os Nematoides Reniformes (Rotylenchulus spp.) do algodão (por exemplo, R. reniformis); os Nematoides de lesões radiculares (Pratylenchus spp.) da banana (por exemplo, P. coffeae ou P. goedeyi); os Nematoides Burrowing (Radopholus spp.) da banana (por exemplo, R. similis); e outros nematoides prejudiciais ao arroz, como o nematoide da raiz do arroz (Hirschmaniella spp., por exemplo, H. oryzae); (2) um nematoide capaz de infestar seres humanos, tal como, mas não limitado a: Enterobius vermicularis, a traça que causa enterobíase; Ascaris lumbridoides, a lombriga intestinal grossa que causa ascariose; Necator e Ancylostoma, dois tipos de ancilostomídeos que causam ancilostomíase; Trichuris trichiura, o verme que causa a tricuríase; Strongyloides stercoralis que causa estrongiloidíase; e Trichonella spirae que causa triquinose; Brugia malayi e Wuchereria bancrofti, os nematoides filariais associados às infecções por vermes conhecidas como filariose linfática e sua manifestação principal, a elefantíase, e Onchocerca volvulus, que causa cegueira dos rios;

(3) um nematoide capaz de infestar animais como, mas não se limitando a: cães ancilostomídeos, por exemplo, Ancylostoma caninum ou Uncinaria stenocephala, Ascarídeos, por exemplo, Toxocara canis ou Toxascaris leonina, ou tricurídeos, por exemplo, Trichuris vulpis), gatos (ancilóstomos, por exemplo, Ancylostoma tubaeforme, ascarídeos, por exemplo, Toxocara cati), peixes (vermes de arenque ou vermes de bacalhau, por exemplo, Anisakis, ou tênia, por exemplo, Diphyllobothrium), ovelhas (Wire worms, por exemplo, Haemonchus contortus) e gado (vermes gastrointestinais, por exemplo, Ostertagia ostertagi, Cooperia oncophora); (4) um nematoide que cause danos indesejáveis a substratos ou materiais, como nematoides que atacam gêneros alimentícios, sementes, madeira, tinta, plástico, vestuário, etc.

Exemplos desses nematoides incluem, mas não se limitam a: Meloidogyne spp. (por exemplo, M. incognita, M. javanica, M. arenaria, M. graminicola, M. chitwoodi ou M. hapla); Heterodera spp. (por exemplo, H. oryzae, H. glycines, H. zeae ou H. schachtii); Globodera spp. (por exemplo, G. pallida ou G. rostochiensis); Ditylenchus spp. (por exemplo, D. dipsaci, D. destructor ou D. angustus); Belonolaimus spp.; Rotylenchulus spp. (por exemplo, R. reniformis); Pratylenchus spp. (por exemplo, P. coffeae, P. goodeyi ou P. zeae); Radopholus spp. (por exemplo, R.

Similis); Hirschmaniella spp. (por exemplo, H. oryzae); Aphelenchoides spp. (por exemplo, A. besseyi); Criconemoides spp.; Longidorus spp.; Helicotylenchus spp.; Hoplolaimus spp.; Xiphinema spp.; Paratrichodorus spp. (por exemplo, P. minor); Tylenchorhynchus spp;

(5) nematoides transmissores de vírus (por exemplo, Longidorus macrosoma: transmite o vírus da mancha anelar necrótica de prunus, Xiphinema americanum: transmite o vírus da mancha anelar do tabaco, Paratrichadorus teres: transmite o vírus do escurecimento precoce da ervilha, ou Trichodorus similis: transmite o vírus do chocalho do tabaco)

[152] Pragas nematoides específicas incluem: Dracunculus medinensis, a lombriga que causa a Dracunculíase (doença do verme da Guiné); nematódeos Loa loa (o verme ocular africano), Mansonella streptocerca e Onchocerca volvulus, que causam Filariose Cutânea; Mansonella perstans e Mansonella ozzardi, que causam Filariose de Cavidade Corporal; Trichinella, incluindo T. pseudospiralis (que infecta mamíferos e pássaros em todo o mundo), T. nativa (que infecta ursos árticos), T. nelsoni (que infecta predadores e necrófagos africanos), e T. britovi (que infecta carnívoros da Europa e da Ásia Ocidental), que causa Triquinelose; Angiostrongylus cantonensis (a lagarta pulmonar do rato), que é a causa mais comum de meningite eosinofílica humana; Angiostrongylus costaricensis, que causa angiostrongiliase abdominal (ou intestinal) ; Toxocara, que causa toxocaríase humana ; Gnathostoma spinigerum, e raramente G. hispidum, que causa Gnathostomiasis; e Anisakis simplex, ou Pseudoterranova decipiens, que causa Anisaquíase.

[153] Em formas de realização específicas, os métodos e composições da presente invenção são utilizados para controlar o nematoide das galhas (Meloidogyne incognital), o nematoide de ferrão (Belonolaimo longicaudatus), o nematoide de cistos da soja (Heterodera glycines), o namatoide de lesões (Pratylenchus sp.), o nematoide-adaga( Xnematus sp.) e o nemiphenomus sp . o nematoide-adaga (Xiphinema sp.) e/ou o nematoide de citrinos (Tylenchulus semipenetrans). Plantas-Alvo

[154] Tal como aqui utilizado, o termo “planta” inclui, mas não se limita a, quaisquer espécies de plantas lenhosas, ornamentais ou decorativas, plantas de cultura ou cereais, frutíferas ou vegetais, flores ou árvores, macroalga ou microalga, fitoplâncton e algas fotossintéticas (por exemplo, algas verdes Chlamydomonas reinhardtii). “Planta” também inclui uma planta unicelular (por exemplo, microalga) e uma pluralidade de células vegetais que são amplamente diferenciadas em uma colônia (por exemplo, volvox) ou uma estrutura que está presente em qualquer estágio do desenvolvimento de uma planta. Essas estruturas incluem, mas não se limitam a, uma fruta, uma semente, um broto, um caule, uma folha, uma raiz, uma pétala de flor, etc. As plantas podem estar sozinhas, por exemplo, em um jardim, ou podem ser uma de muitas plantas, por exemplo, como parte de um pomar, cultura ou pastagem.

[155] Por exemplo, as plantas para as quais a presente invenção é útil incluem, mas não se limitam a, cereais e gramíneas (por exemplo, trigo, cevada, centeio, aveia, arroz, milho, sorgo, milho), beterrabas (por exemplo, beterrabas sacarinas ou forrageiras); frutas (por exemplo, uvas, morangos, framboesas, amoras, pomáceas, frutas de bagas, frutas macias, maçãs, peras, ameixas, pêssegos, amêndoas, cerejas ou frutas silvestres); culturas de leguminosas (por exemplo, feijão, lentilha, ervilha ou soja); culturas de óleo (por exemplo, colza, mostarda, papoulas, azeitonas, girassóis, coco, rícino, cacau ou amendoim); cucurbitáceas (por exemplo, abóboras, pepinos, abobrinhas ou melões); culturas de fibra (por exemplo, algodão, linho, cânhamo ou juta); frutas cítricas (por exemplo, laranjas, limões, toranjas ou tangerinas); vegetais (por exemplo, espinafre, alface, aspargo, repolho, cenoura, cebola, tomate, batata ou pimentão); Lauraceae (por exemplo, abacate, canela ou cânfora); e também tabaco, nozes, ervas, especiarias, plantas medicinais, café, berinjela, cana-de- açúcar, chá, pimenta, videira, lúpulo, a família plantain, plantas de látex, flores cortadas e ornamentais.

[156] Os tipos de plantas que podem se beneficiar da aplicação dos produtos e métodos da invenção incluem, mas não se limitam a: culturas em linha (por exemplo, milho, soja, sorgo, amendoins, batatas, etc.), culturas de campo (por exemplo, alfafa, trigo, grãos, etc.), culturas de árvores (por exemplo, nozes, amêndoas, nozes pecã, avelãs, pistache, etc.), culturas de frutas cítricas (por exemplo, laranja, limão, toranja, etc.), culturas de frutas (por exemplo, maçãs, peras, morangos, mirtilos, amoras, etc.), culturas de relva (por exemplo, grama), culturas ornamentais (por exemplo, flores, videiras, etc.), vegetais (por exemplo, tomates, cenouras, etc.), culturas de videira (por exemplo, uvas, etc.), silvicultura (por exemplo, pinheiros, abetos, eucaliptos, choupos, etc.), pastagens administradas (qualquer mistura de plantas usadas para sustentar animais em pastagem).

[157] Outras plantas que podem se beneficiar dos produtos e métodos da invenção incluem todas as plantas pertencentes à superfamília Viridiplantae, em particular as plantas monocotiledôneas e dicotiledôneas, incluindo leguminosas forrageiras ou forrageiras, plantas ornamentais, culturas alimentares, árvores ou arbustos selecionados dentre Acer spp., Actinidia spp., Abelmoschus spp., Agave sisalana, Agropyron spp., Agrostis stolonifera, Allium spp., Amaranthus spp., Ammophila arenaria, Ananas comosus, Annona spp., Apium graveolens, Arachis spp, Artocarpus spp., Asparagus officinalis, Avena spp. (por exemplo, A. sativa, A. fatua, A. byzantina, A. fatua var. sativa, A. hybrida), Averrhoa carambola, Bambusa sp., Benincasa hispida, Bertholletia excelsea, Beta vulgaris, Brassica spp. (por exemplo, B. napus, B. rapa ssp. [canola, colza, nabo]), Cadaba farinosa, Camellia sinensis, Canna indica, Cannabis sativa, Capsicum spp., Carex elata, Carica papaya, Carissa macrocarpa, Carya spp., Carthamus tinctorius, Castanea spp., Ceiba pentandra, Cichorium endivia, Cinnamomum spp., Citrullus lanatus, Citrus spp., Cocos spp., Coffea spp., Colocasia esculenta, Cola spp., Corchorus sp., Coriandrum sativum, Corylus spp., Crataegus spp., Crocus sativus, Cucurbita spp., Cucumis spp., Cynara spp., Daucus carota, Desmodium spp., Dimocarpus longan, Dioscorea spp., Diospyros spp., Echinochloa spp., Elaeis (por exemplo, E. guineensis, E. oleifera), Eleusine coracana, Eragrostis tef, Erianthus sp., Eriobotrya japonica, Eucalyptus sp., Eugenia uniflora, Fagopyrum spp., Fagus spp., Festuca arundinacea, Ficus carica, Fortunella spp., Fragaria spp., Ginkgo biloba, Glycine spp. (por exemplo, G. max, Soja hispida ou Soja max), Gossypium hirsutum, Helianthus spp. (por exemplo, H. annuus), Hemerocallis fulva, Hibiscus spp., Hordeum spp.

(por exemplo, H. vulgare), Ipomoea batatas, Juglans spp., Lactuca sativa, Lathyrus spp., Lens culinaris, Linum usitatissimum, Litchi chinensis, Lotus spp., Luffa acutangula, Lupinus spp., Luzula sylvatica, Lycopersicon spp. (por exemplo, L. esculentum, L. lycopersicum, L. pyriforme), Macrotyloma spp., Malus spp., Malpighia emarginata, Mammea americana, Mangifera indica, Manihot spp., Manilkara zapota, Medicago sativa, Melilotus spp., Mentha spp., Miscanthus sinensis, Momordica spp., Morus nigra, Musa spp., Nicotiana spp., Olea spp., Opuntia spp., Ornithopus spp., Oryza spp. (por exemplo, O. sativa, O. latifolia), Panicum miliaceum, Panicum virgatum, Passiflora edulis, Pastinaca sativa, Pennisetum sp., Persea spp., Petroselinum crispum, Phalaris arundinacea, Phaseolus spp., Phleum pratense, Phoenix spp., Phragmites australis, Physalis spp., Pinus spp., Pistacia vera, Pisum spp., Poa spp., Populus spp., Prosopis spp., Prunus spp., Psidium spp., Punica granatum, Pyrus communis, Quercus spp., Raphanus sativus, Rheum rhabarbarum, Ribes spp., Ricinus communis, Rubus spp., Saccharum spp., Salix sp., Sambucus spp., Secale cereale, Sesamum spp., Sinapis sp., Solanum spp. (por exemplo, S. tuberosum, S. integrifolium ou S. lycopersicum), Sorghum bicolor, Spinacia spp., Syzygium spp., Tagetes spp., Tamarindus indica, Theobroma cacao, Trifolium spp., Tripsacum dactyloides, Triticosecale rimpaui, Triticum spp. (por exemplo, T. aestivum, T. durum, T. turgidum, T. hybernum, T. macha, T. sativum, T. monococcum ou T. vulgare), Tropaeolum minus, Tropaeolum majus, Vaccinium spp., Vicia spp., Vigna spp., Viola odorata, Vitis spp., Zea mays, Zizania palustris, Ziziphus spp., entre outras.

[158] Outros exemplos de plantas de interesse incluem, mas não se limitam a, milho (Zea mays), Brassica sp. (por exemplo, B. napus, B. rapa, B. juncea), particularmente aquelas espécies Brassica úteis como fontes de óleo de semente, alfalfa (Medicago sativa), arroz (Oryza sativa), centeio (Secale cereale), sorgo (Sorghum bicolor, Sorghum vulgare), milheto (por exemplo, milheto-pérola (Pennisetum glaucum), milheto proso (Panicum miliaceum), milheto foxtail (Setaria italica), milheto finger (Eleusine coracana)), girassol (Helianthus annuus), cártamo (Carthamus tinctorius), trigo (Triticum aestivum), soja (Glycine max), tabaco (Nicotiana tabacum), batata (Solanum tuberosum), amendoim (Arachis hypogaea), algodão (Gossypium barbadense, Gossypium hirsutum), batata doce (Ipomoea batatus), mandioca (Manihot esculenta), café (Coffea spp.), coco (Cocos nucifera), abacaxi (Ananas comosus), árvores cítricas (Citrus spp.), cacau (Theobroma cacao), chá (Camellia sinensis), banana (Musa spp.), abacate (Persea americana), figo (Ficus casica), goiaba (Psidium guajava), manga (Mangifera indica), azeitona (Olea europaea), mamão papaya (Carica papaya), castanha de caju (Anacardium occidentale), macadâmia (Macadamia integrifolia), amêndoa (Prunus amygdalus), beterraba sacarina (Beta vulgaris), cana-de- aúcar (Saccharum spp.), aveia, cevada, vegetais, plantas ornamentais e coníferas.

[159] Os vegetais incluem tomates (Lycopersicon esculentum), alface (por exemplo, Lactuca sativa), feijão verde (Phaseolus vulgaris), feijão lima (Phaseolus limensis), ervilhas (Lathyrus spp.) e membros do gênero Cucumis como pepino (C.. Sativus), melão cantaloupe (C.

Cantalupensis) e melão musk (C. melo). As plantas ornamentais incluem azalea (Rhododendron spp.), hortênsia (Macrophylla hydrangea), hibisco (Hibiscus rosasanensis), rosas (Rosa spp.), tulipas (Tulipa spp.), narcisos (Narcissus spp.), petúnias (Petunia hybrida), craveiro (Dianthus caryophyllus), poinsétia (Euphorbia pulcherrima) e crisântemo. As coníferas que podem ser empregadas na prática das formas de realização incluem, por exemplo, pinheiros como pinheiro loblolly (Pinus taeda), pine-americano (Pinus elliotii), pinheiro ponderosa (Pinus ponderosa), pinheiro lodgepole (Pinus contorta) e pinheiro Monterey (Pinus radiata); abeto de Douglas (Pseudotsuga menziesii); Western hemlock (Tsuga canadensis); Sitka spruce (Picea glauca); sequoia-vermelha (Sequoia sempervirens); verdadeiros abetos como o abeto prateado (Abies amabilis) e o abeto balsâmico (Abies balsamea); e cedros como o cedro vermelho ocidental (Thuja plicata) e o cedro amarelo do Alaska (Chamaecyparis nootkatensis). As plantas da forma de realização incluem plantas de cultura (por exemplo, milho, alfafa, girassol, Brassica, soja, algodão, cártamo, amendoim, sorgo, trigo, milheto, tabaco, etc.), como plantas de milho e soja.

[160] Relvados incluem, mas não se limitam a: grama de prado anual (Poa annua); azevém-anual (Lolium multiflorum); prado canadense (Poa compressa); Chewings fescue (Festuca rubra); capim colonial (Agrostis tenuis); capim rastejante (Agrostis palustris); grama de trigo-de-crista (Agropyron desertorum); capim fairway (Agropyron cristatum); festuca rígida (Festuca longifolia); erva-de-febra (Poa pratensis); grama de pomar (Dactylis glomerate); azevém perene (Lolium perenne); festuca vermelha (Festuca rubra); festuca de topo vermelho (Agrostis alba); capim grosso (Poa trivialis); festuca de ovelha (Festuca ovine); bromo liso (Bromus inermis); festuca alta (Festuca arundinacea); timothy (Phleum pretense); velvet bentgrass (Agrostis canine); weeping alkaligrass (Puccinellia distans); western wheatgrass (Agropyron smithii); grama-Bermudas (Cynodon spp.); grama St. Agostinho (Stenotaphrum secundatum); grama Zoysia (Zoysia spp.); grama Bahia (Paspalum notatum); grama- tapete (Axonopus affinis); erva centopéia (Eremochloa ophiuroides); grama Kikuyu (Pennisetum clandesinum); grama Seashore paspalum (Paspalum vaginatum); grama azul (Bouteloua gracilis); grama Búfalo (Buchloe dactyloids); grama Sideoats (Bouteloua curtipendula).

[161] As plantas de interesse incluem plantas de grão que fornecem sementes de interesse, plantas de sementes oleaginosas e leguminosas. As sementes de interesse incluem sementes de grãos, como milho, trigo, cevada, arroz, sorgo, centeio, milheto, etc. As plantas de sementes oleaginosas incluem algodão, soja, cártamo, girassol, Brassica, milho, alfafa, palma, coco, linho, rícino, azeitona, etc. As leguminosas incluem feijão e ervilhas. Os grãos incluem guar, alfarroba, feno-grego, soja, vagem, feijão-frade, feijão- mungo, feijão de lima, feijão-fava, lentilha, grão de bico, etc.

[162] Outras plantas interesse incluem Cannabis (por exemplo, sativa, indica e ruderalis) e cânhamo industrial.

[163] Todas as plantas e partes de plantas podem ser tratadas de acordo com a invenção. Neste contexto, plantas devem ser entendidas como todas as plantas e populações de plantas, como plantas selvagens ou plantas de cultura desejadas e indesejadas (incluindo plantas de cultura que ocorrem naturalmente). As plantas de cultura podem ser plantas que podem ser obtidas por métodos tradicionais de reprodução e otimização ou por métodos biotecnológicos e recombinantes, ou combinações desses métodos, incluindo as plantas transgênicas e as variedades vegetais.

[164] Partes de plantas devem ser entendidas como todas as partes aéreas e subterrâneas e seus órgãos, como broto, folha, flor e raiz, exemplos que podem ser mencionados são folhas, agulhas, talos, caules, flores, corpos frutíferos, frutos e sementes, mas também raízes, tubérculos e rizomas. As partes de plantas também incluem material de colheita e material de propagação vegetativa e gerativa, por exemplo, estacas, tubérculos, rizomas, mudas e sementes. Exemplos

[165] Deve ser entendido que os exemplos e as formas de realização aqui descritas são apenas para fins ilustrativos e que várias modificações ou alterações daí decorrentes ocorrerão àqueles versados na técnica e devem estar incluídas no espírito e âmbito deste pedido de patente. Exemplo 1 - Fermentação De Pseudozyma Aphidis para Produção de MEL em Reator Portátil Distribuível de 14 L

[166] O volume de trabalho do reator é de 10 litros. O reator é um recipiente de vidro encamisado com aerossóis e um propulsor Rushton. Ele é equipado com sonda de OD, pH, temperatura e espuma. Ele tem uma estação de controle integrada, bombas embutidas, controladores de fluxo de gás e controladores de nível de pH / DO / espuma.

[167] O meio nutriente compreende nitrato de sódio, fosfato de potássio, sulfato de magnésio, extrato de levedura e óleo vegetal. O inóculo pode ser uma cultura de Pseudozyma aphidis com 1 a 2 dias de idade, a cerca de 5 a 10% do volume total da cultura. A duração do cultivo é de 9 a 15 dias, e a produção final de MEL é de 800 a 1.000 gramas. Exemplo 2 - Avaliação da Eficácia do Atrativo de Nematódeos

[168] As contagens e percentuais de infestação de Nematódeos das Galhas foram feitas em quatro câmaras vedadas de 11,6 pol. X 7,6 pol., contendo solo de areia fina de lago enriquecido com um material atrativo. O extrato de raiz de valeriana pré-produzido foi misturado com água, glicerina vegetal e álcool de cereais a 20% para produzir o atrativo.

[169] Cada parcela foi inoculada com nematoides em uma zona de 2 cm de diâmetro. Dez (10) mL do atrativo de nematoides foram adicionados a uma zona de 3 cm (A) x 1 cm (L), a 2 cm da zona de inoculação (Figura 1).

[170] As contagens de nematoides e os porcentuais de infestação foram tomados em três locais, 3 dias após o tratamento e 8 dias após o tratamento. Os três locais testados incluíram o centro da zona de inoculação, a zona atrativa e a área não tratada. Resultados

[171] Os resultados estão resumidos na Figura 2. As migrações em direção ao atrativo versus a área não tratada foram significativamente diferentes em relação à área de inoculação como um porcentual da população total. Nos eventos de amostragem de 24 e 48 horas, houve mais nematoides contados na zona atrativa do que nas áreas não tratadas da câmara em mais de 14%; entretanto, a zona central onde os nematoides foram inoculados continha a maioria dos nematoides em geral.

Claims

REIVINDICAÇÕES EMENDADAS

1. Composição nematicida, caracterizada pelo fato de que compreende uma substância quimioatraente e uma composição à base de micróbios, em que a composição à base de micróbios compreende um ou mais micro-organismos benéficos e/ou seus subprodutos de crescimento, e em que um ou mais micro-organismos benéficos e/ou seus subprodutos de crescimento são capazes de ação nematicida.

2. Composição nematicida, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a substância quimioatraente compreende Valeriana (Valeriana officinalis).

3. Composição nematicida, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o um ou mais micro- organismos benéficos compreende Pleurotus ostreatus e/ou uma levedura produtora de glicolipídios.

4. Composição nematicida, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o um ou mais subprodutos de crescimento compreende ácido linoleico.

5. Composição nematicida, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que a levedura é selecionada dentre Pseudodozyma aphidis e Meyerozyma guilliermondii, e o glicolipídio é um manosileritritol lipídio (MEL).

6. Composição nematicida, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o um ou mais subprodutos de crescimento é um manosileritritol lipídio (MEL).

7. Composição nematicida, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o MEL está na forma de um sobrenadante resultante do cultivo de P. aphidis ou M. guilliermondii.

8. Composição nematicida, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o um ou mais micro- organismos benéficos compreende Streptomyces avermitilis e/ou em que o um ou mais subprodutos compreende avermectina.

9. Composição nematicida, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende o extrato de raiz de Valeriana, e um ou mais dos seguintes: células vivas de P. ostreatus e/ou seus subprodutos de crescimento, células vivas de S. avermitilis e/ou seus subprodutos de crescimento, e células vivas de M. guilliermondii e/ou seus subprodutos de crescimento.

10. Método de controle de nematoides presentes em uma planta e/ou no ambiente circundante de uma planta, o método caracterizado pelo fato de que compreende a aplicação de uma substância quimioatraente e de uma composição à base de micróbios a um local, em que a composição à base de micróbios compreende um ou mais micro-organismos benéficos e/ou seus subprodutos de crescimento, em que o um ou mais micro-organismos benéficos e/ou seus subprodutos de crescimento são capazes de ação nematicida, e em que o local está dentro do ambiente circundante da planta, porém localizado a uma distância de pelo menos 1 polegada (2,54 cm) de distância da planta.

11. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a substância quimioatraente é o extrato de raiz de Valeriana.

12. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a composição à base de micróbios compreende um ou mais dos seguintes: células vivas de P. ostreatus e/ou seus subprodutos de crescimento, células vivas de S. avermitilis e/ou seus subprodutos de crescimento, e células vivas de M. guilliermondii e/ou seus subprodutos de crescimento.

13. Método, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que os subprodutos de crescimento de P. ostreatus compreendem o ácido linoleico em uma forma purificada ou na forma de um sobrenadante resultante do cultivo de P. ostreatus.

14. Método, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que os subprodutos de crescimento de S. avermitilis compreendem a avermectina em uma forma purificada ou na forma de um sobrenadante resultante do cultivo de S. avermitilis.

15. Método, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que os subprodutos de crescimento de M. guilliermondii compreendem MEL em uma forma purificada ou na forma de um sobrenadante resultante do cultivo de M. guilliermondii.

16. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o ambiente circundante da planta compreende o solo ou outro meio no qual a planta está crescendo, dentro de um raio de 100 pés (30,48 m) de distância da planta.

17. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que é usado para controlar um nematoide selecionado dentre o nematoide das galhas (Meloidogyne incognital), o nematoide de ferrão (Belonolaimus longicaudatus), o nematoide de cistos da soja (Heterodera glycines), o nematoide de lesões (Pratylenchus sp.), o nematoide-adaga (Xiphinema sp.) e o nematoide de citrinos (Tylenchulus semipenetrans).

18. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a substância quimioatraente e/ou a composição à base de micróbios são colocadas em uma espiga moída ou estação-isca, e a espiga moída ou estação- isca é colocada no solo no local.