BR112020016351A2 - Composições microbianas para a prevenção ou redução do crescimento de fungos patogênicos em plantas - Google Patents

Composições microbianas para a prevenção ou redução do crescimento de fungos patogênicos em plantas Download PDF

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Abstract

encontram-se divulgadas neste documento composições de biocontrole contra fungos patogênicos de plantas e métodos de uso das mesmas para prevenção ou redução da perda de colheita ou deterioração de alimentos. a composição de biocontrole pode compreender pelo menos um microrganismo com atividade antifúngica ou um metabólito secundário do pelo menos um microrganismo. os métodos podem compreender aplicar a composição de biocontrole a uma planta, uma semente ou um produto da mesma ou a um material de embalagem utilizado para transportar ou armazenar a produto.

Description

“COMPOSIÇÕES MICROBIANAS PARA A PREVENÇÃO OU REDUÇÃO DO CRESCIMENTO DE FUNGOS PATOGÊNICOS EM PLANTAS” REFERÊNCIA CRUZADA
[001] Este pedido reivindica a prioridade do Pedido Provisório U.S. No.
62/629,525, depositado em 12 de fevereiro de 2018, que é incorporado por referência neste documento na sua totalidade.
FUNDAMENTOS
[002] Fungos patogênicos acarretam perdas agrícolas significativas, levando à perda de colheita, desperdício de alimentos e perda econômica. Os microrganismos com propriedades antifúngicas têm sido desenvolvidos como agentes de controle biológico para reduzir tanto a perda de colheita quanto a deterioração dos alimentos por estes agentes fúngicos patogênicos. Produtos comercialmente disponíveis podem não apresentar a especificidade ou eficácia fúngica ou vegetal desejada. Além disso, existem opções limitadas para a proteção pós-colheita dos produtos, principalmente os produtos orgânicos. Composições de biocontrole para impedir o crescimento de fungos pode fornecer alternativas aos produtos atualmente disponíveis.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[003] Encontram-se descritas neste documento, em certas formas de realização, composições de biocontrole compreendendo: (i) pelo menos um microrganismo e (ii) um veículo; em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de rRNA 16S mais do que 99% idêntica a uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo de SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 9 ou em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 99% idêntica a uma sequência de ITS selecionada do grupo de SEQ ID NO: 17 e SEQ ID NO: 20 ou em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 90% idêntica a uma sequência de ITS de SEQ ID NO: 18. Encontram-se descritas ainda neste documento, em certas formas de realização, composições de biocontrole compreendendo: (i) pelo menos um microrganismo e (ii) um veículo; em que o pelo menos um microrganismo compreende uma sequência de rRNA mais do que 99%
idêntica a uma sequência maior que 200 bases, a sequência compreendendo uma sequência de rRNA selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1 e SEQ ID
NO: 9 ou em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 99% idêntica a uma sequência de ITS de SEQ ID NO: 17 ou em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 90% idêntica a
SEQ ID NO: 18. Encontram-se descritas ainda neste documento, em certas formas de realização, composições de biocontrole, compreendendo: (i) pelo menos um microrganismo e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de Fusarium oxysporum em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole ou inibir o crescimento de Verticillium dahliae em 60% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole,
conforme determinado pela medição da sobrevivência de Fusarium oxysporum ou
Verticillium dahliae, respectivamente.
Encontram-se descritas ainda neste documento,
em certas formas de realização, composições de biocontrole compreendendo (i) pelo menos um microrganismo e (ii) um veículo, em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de rRNA 16S mais do que 99% idêntica a uma sequência de rRNA 16S de SEQ ID NO: 22. Encontram-se descritas ainda neste documento, em certas formas de realização, composições de biocontrole compreendendo (i) pelo menos um microrganismo e (ii) um veículo, em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de rRNA 16S mais do que 99% idêntica a uma sequência de rRNA 16S de SEQ ID NO: 23. Encontram-se descritas ainda neste documento, em certas formas de realização, composições de biocontrole que compreende (i) pelo menos um microrganismo, e (ii) um veículo, em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de rRNA 16S mais do que 99% idêntica a uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo de SEQ ID NO: 24 ou em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 99% idêntica a uma sequência de ITS selecionada do grupo de SEQ ID NO: 25 ou em que o pelo menos um microrganismo possui um ITS s equação superior a 90% idêntica a uma sequência de ITS de SEQ ID NO: 25.
[004] Encontram-se descritas ainda neste documento, em certas formas de realização, composições de biocontrole compreendendo (i) pelo menos um microrganismo e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de Botrytis cinerea em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole. Encontram-se descritas ainda neste documento, em certas formas de realização, composições de biocontrole compreendendo (i) pelo menos um microrganismo e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de Monilinia vacinii- corymbosi em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole. Encontram-se descritas ainda neste documento, em certas formas de realização, composições de biocontrole compreendendo (i) pelo menos um microrganismo e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de Colletotrichum spaethanium em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole. Encontram-se descritas ainda neste documento, em certas formas de realização, composições de biocontrole compreendendo (i) pelo menos um microrganismo e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de Puccinia sorghi em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole.
Encontram-se descritas ainda neste documento, em certas formas de realização, composições de biocontrole compreendendo (i) pelo menos um microrganismo e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de Plasmopara viticola em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole. Encontram-se descritas ainda neste documento, em certas formas de realização, composições de biocontrole compreendendo (i) pelo menos um microrganismo e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de Erysiphe necator em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole. Encontram-se descritas ainda neste documento, em certas formas de realização, composições de biocontrole compreendendo (i) pelo menos um microrganismo e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de Podasphaera macularis em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole.
Encontram-se descritas ainda neste documento, em certas formas de realização, composições de biocontrole compreendendo (i) pelo menos um microrganismo e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de um organismo do gênero Pytium em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole. Encontram-se descritas ainda neste documento, em certas formas de realização, composições de biocontrole compreendendo (i) pelo menos um microrganismo e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de um organismo do gênero Rhizopus em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole.
[005] Encontram-se descritas ainda neste documento, em certas formas de realização, composições de biocontrole compreendendo: (i) um metabólito secundário de pelo menos um microrganismo e (ii) um veículo; em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 99% idêntica a uma sequência de ITS selecionada do grupo de SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21 e SEQ ID NO: 25. Encontram-se descritas ainda neste documento, em certas formas de realização, composições de biocontrole compreendendo: (i) um metabólito secundário de pelo menos um microrganismo e (ii) um veículo; em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de rRNA
16S mais do que 99% idêntica a uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, e SEQ ID NO: 24.
[006] Em um aspecto, a composição de biocontrole compreende ainda um segundo microrganismo, em que o segundo microrganismo não é idêntico ao pelo menos um microrganismo. O segundo microrganismo pode compreender uma sequência de RNA que é pelo menos 95% idêntica a uma sequência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1-25. O segundo microrganismo pode compreender uma sequência de rRNA 16S que é pelo menos 95% idêntica a uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 22, 23 e 24. O segundo microrganismo pode compreender uma sequência do espaçador interno transcrito (ITS) que é pelo menos 95% idêntica a uma sequência de ITS selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 17, 18, 19, 20, 21 e 25. O segundo microrganismo pode compreender uma sequência de rRNA 16S que é pelo menos 99% idêntica a uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 22, 23 e 24. O segundo microrganismo pode compreender uma sequência do espaçador interno transcrito (ITS) que é pelo menos 99% idêntica a uma sequência de ITS selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 17, 18, 19, 20, 21 e 25. O segundo microrganismo pode compreender uma sequência de rRNA 16S que é uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 22, 23 e 24. O segundo microrganismo pode compreender uma sequência do espaçador interno transcrito (ITS) que é uma sequência de ITS selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 17, 18, 19, 20, 21 e 25.
[007] Em algumas formas de realização, o pelo menos microrganismo compreende uma sequência de rRNA 16S que é pelo menos 99% idêntica a SEQ ID NO: 24 e o segundo microrganismo compreende uma sequência de ITS que é pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO: 25.
[008] Em um aspecto, a composição de biocontrole compreende ainda um terceiro microrganismo, e o terceiro microrganismo não é idêntico ao segundo ou ao pelo menos um microrganismo. Em algumas formas de realização, o pelo menos um microrganismo compreende uma sequência de rRNA 16S mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 23, o segundo microrganismo compreende uma sequência de rRNA 16S mais do que 99% idêntica à SEQ ID NO: 23, e o terceiro microrganismo compreende uma sequência de rRNA 16S mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO:
23. Em um aspecto, a composição de biocontrole compreende ainda um quarto microrganismo, e o terceiro microrganismo não é idêntico a nenhum dos terceiro, segundo ou o pelo menos um microrganismo. Em um aspecto, a composição de biocontrole compreende ainda um quinto microrganismo e o quinto microrganismo não é idêntico a nenhum dos quarto, terceiro, segundo ou o pelo menos um microrganismo. Quaisquer microrganismos na composição de biocontrole podem ser microrganismos isolados e purificados. Uma composição de biocontrole, tal como divulgada, pode compreender um ou mais microrganismos isolados e purificados.
Uma composição de biocontrole, tal como divulgada, pode compreender um ou mais, dois ou mais, três ou mais, quatro ou mais ou cinco ou mais microrganismos isolados e purificados. Em alguns casos, a composição de biocontrole pode compreender diferentes cepas de microrganismos isolados e purificados que são de uma única espécie de microrganismo.
[009] O pelo menos um microrganismo pode ter uma sequência de ITS mais do que 90% idêntica a SEQ ID NO: 18 e em que o segundo microrganismo é uma espécie de Gluconacetobacter. As espécies de Gluconacetobacter podem ser Gluconacetobacter liquefaciens. As espécies de Gluconacetobacter podem ter uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID
NO: 14 e SEQ ID NO: 16.
[010] Em um aspecto, o metabólito secundário do pelo menos um microrganismo é isolado de um sobrenadante de uma cultura do pelo menos um microrganismo. O metabólito secundário de pelo menos um microrganismo pode compreender um lipopeptídeo. O lipopeptídeo pode ser um lipopeptídeo cíclico selecionado do grupo que consiste em: uma surfactina, uma fengicina e uma iturina.
O metabólito secundário de pelo menos um microrganismo pode compreender um policetídeo. O metabólito secundário de pelo menos um microrganismo pode compreender um composto antifúngico volátil.
[011] Em um aspecto, o controle é exposto ao Bacillus subtilis cepa QST 713.
Em um aspecto, o pelo menos um microrganismo é isolado e purificado. Em um aspecto, a composição de biocontrole é um líquido ou um pó. Em um aspecto, a composição de biocontrole compreende um esporo.
[012] Encontram-se descritos neste documento, em certas formas de realização, métodos para prevenção ou redução do crescimento de um fungo patogênico em uma planta, nas raízes, uma semente, no solo ou sulco no qual a semente é adicionada ou um produto da mesma, compreendendo: aplicar à planta, às raízes, à semente, ao solo ou sulco no qual a semente ou planta é adicionada ou o produto, o biocontrole descrito aqui, em que a composição de biocontrole tem atividade antifúngica. Encontram-se descritos ainda neste documento, em certas formas de realização, métodos para prevenção ou redução do crescimento de um fungo patogênico em uma planta, uma semente, uma raiz, solo ou sulco no qual a semente ou planta é adicionada ou um produto da mesma, compreendendo: aplicar ao solo a composição de biocontrole descrita aqui, em que a composição de biocontrole tem atividade antifúngica. Encontram-se descritos ainda neste documento, em certas formas de realização, métodos para prevenção ou redução do crescimento de um fungo patogênico em um produto, compreendendo: pulverizar ou tratar de outro modo o produto antes da colheita com a composição de biocontrole descrita aqui, em que a composição de biocontrole tem atividade antifúngica. Encontram-se descritos ainda neste documento, em certas formas de realização, métodos para prevenção ou redução do crescimento de um fungo patogênico em um produto, compreendendo: pulverizar, imergir ou tratar de outro modo o produto com a composição de biocontrole descrita aqui, em que a composição de biocontrole tem atividade antifúngica.
Encontram-se descritos ainda neste documento, em certas formas de realização, métodos para prevenção ou redução do crescimento de um fungo patogênico em um produto, compreendendo: aplicar a um material de embalagem usado para transportar ou armazenar o produto a composição de biocontrole descrita aqui, em que a composição de biocontrole tem atividade antifúngica. Encontram-se descritos ainda neste documento, em certas formas de realização, métodos para prevenção ou redução do crescimento de um fungo patogênico em uma semente ou em um produto, compreendendo: integrar a composição de biocontrole descrita aqui em um processo selecionado do grupo que consiste em: lavar o produto ou a semente, revestir o produto ou a semente, e uma combinação dos mesmos.
[013] Em um aspecto, a planta, a semente ou o produto da mesma é uma planta ou produto da mesma da família Rosaceae. A planta, semente ou produto da mesma família Rosaceae pode pertencer ao gênero: Rubus, Malus, Pyrus, Cydonia, Prunus, Rosa ou Fragaria. A planta, a semente ou o produto da mesma do gênero Rubus pode ser uma framboesa ou amora. A planta, a semente ou o produto da mesma do gênero Fragaria pode ser um morango. A planta, a semente ou o produto da mesma do gênero Pyrus pode ser uma pera. A planta, a semente ou o produto da mesma do gênero Cydonia pode ser um marmelo. A planta, a semente ou o produto da mesma do gênero Prunus pode ser uma amêndoa, um pêssego, uma ameixa, um damasco, uma cereja ou um abrunho. A planta, a semente ou o produto da mesma do gênero Rosa pode ser uma rosa. A planta, a semente ou o produto da mesma do gênero Malus pode ser uma maçã.
[014] Em um aspecto, a planta, a semente ou o produto da mesma é uma planta ou produto da mesma da família Ericaceae. A planta, a semente ou o produto da mesma é uma planta, uma semente ou um produto da mesma da família Ericaceae que pode pertencer ao gênero Vaccinium. A planta, a semente ou o produto da mesma do gênero Vaccinium pode ser um mirtilo.
[015] Em um aspecto, a planta, a semente ou o produto da mesma é uma planta ou produto da mesma da família Vitaceae. A planta, a semente ou o produto da mesma é uma planta, uma semente ou um produto da mesma da família Vitaceae que pode ser do gênero Vitis. A planta, a semente ou o produto da mesma do gênero Vitis pode ser uma uva.
[016] Em um aspecto, a aplicação da composição de biocontrole compreende espanar, imergir, rolar, injetar, esfregar, pulverizar ou escovar a planta, a semente ou o produto com a composição de biocontrole. A aplicação da composição de biocontrole na planta pode compreender adicionar a composição de biocontrole a uma linha de gotejamento, sistema de irrigação, sistema de quimigação, pulverização ou imersão.
[017] A aplicação da composição de biocontrole à planta pode compreender aplicar a composição de biocontrole a uma raiz da planta. A aplicação na raiz pode ser indireta. A composição de biocontrole pode ser aplicada ao produto após a remoção do produto da planta. Em um aspecto, a aplicação não mata a planta. Em um aspecto, o método compreende ainda aplicar à planta um fertilizante, um herbicida, um pesticida ou uma combinação dos mesmos. O fertilizante, herbicida ou pesticida pode ser aplicado antes, depois ou simultaneamente com a composição de biocontrole.
[018] Em um aspecto, o material de embalagem compreende: tereftalato de polietileno (PET), fibra moldada, poliestireno orientado (OPS), espuma de poliestireno
(PS), polipropileno (PP) ou uma combinação dos mesmos. A aplicação a um material de embalagem pode compreender lavar ou impregnar o material de embalagem.
[019] Em um aspecto, a atividade antifúngica é a prevenção do crescimento do fungo patogênico por pelo menos 1, 2, 3, 4,5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 dias. A atividade antifúngica pode ser um crescimento reduzido do fungo patogênico na planta, na semente ou no produto da mesma em relação ao crescimento do fungo patogênico em um controle que é uma planta, uma semente ou um produto da mesma da família Rosaceae não exposto à composição de biocontrole.
O crescimento do fungo patogênico pode ser reduzido por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 dias após a exposição do fungo patogênico à composição de biocontrole em relação ao crescimento do fungo patogênico na planta, semente ou produto da mesma não exposto à composição de biocontrole. Em um aspecto, a composição de biocontrole tem atividade antifúngica contra um fungo patogênico filamentoso ou não filamentoso. O fungo patogênico filamentoso ou não filamentoso pode ser selecionado do grupo que consiste em: Albugo candida, Albugo occidentalis, Alternaria alternata, Alternaria cucumerina, Alternaria dauci, Alternaria solani Alternaria tenuis, Alternaria tenuissima, Alternaria tomatophila,, Aphanomyces euteiches, Aphanomyces raphani, Armillaria mellea, Botrydia theobromae, Botrytis cinerea, Botrytinia fuckeliana, Bremia lactuca, Cercospora beticola, Cercosporella rubi, Cladosporium herbarum, Colletotrichum acutatum, Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum lindemuthianum, Colletotrichum musae, Colletotrichum spaethanium, Cordana musae, Corynespora cassiicola, Daktulosphaira vitifoliae, Didymella bryoniae, Elsinoe ampelina, Elsinoe mangiferae, Elsinoe veneta, Erysiphe cichoracearum, Erysiphe necator, Eutypa lata, Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Ganoderma boninense, Guignardia bidwellii, Gymnoconia peckiana, Helminthosporium solani, Leptosphaeria coniothyrium, Leptosphaeria maculans, Leveillula taurica, Macrophomina phaseolina, Microsphaera alni, Monilinia fructicola, Monilinia vaccinii-corymbosi, Mycosphaerella angulate,
Mycosphaerella brassicicola, Mycosphaerella fragariae, Mycosphaerella fijiensis,
Oidopsis taurica, Passalora fulva, Peronospora sparse, Peronospora farinosa, Phoma exigua, Phomopsis obscurans, Phomopsis vaccinia, Phomopsis viticola, Phytophthora capsica, Phytophthora erythroseptica, Phytophthora infestans, Phytophthora parasitica, Plasmopara viticola, Plasmodiophora brassicae, Podosphaera macularis,
Polyscytalum pustulans, Pseudocercospora vitis, Puccinia allii, Puccinia sorghi,
Pucciniastrum vaccinia, Pythium debaryanum, Pythium sulcatum, Pythium ultimum,
Ralstonia solanacearum, Ramularia tulasneii, Rhizoctonia solani, Rhizopus arrhizus,
Rhizopus stoloniferz, Sclerotinia minor, Sclerotinia sclerotiorum, Sclerotium cepivorum, Sclerotium rolfsii, Sclerotinia minor, Sclerotinia sclerotiorum, Septoria apiicola, Septoria lactucae, Septoria lycopersici, Septoria petroelini, Sphaceloma perseae, Sphaerotheca macularis, Spongospora subterrannea, Stemphylium vesicarium, Synchytrium endobioticum, Thielaviopsis basicola, Uncinula necator,
Uromyces appendiculatus, Uromyces betae, Verticillium albo-atrum, Verticillium dahliae, Verticillium theobromae, e qualquer combinação dos mesmos.
O fungo patogênico filamentoso pode ser selecionado do grupo que consiste em: Fusarium oxysporum, Verticillium dahlia, Botrytis cinerea, Colletotrichum spaethaniu, Erysiphe necator, Podosphaera macularis, Monilinia vaccinii-corymbosi, Puccinia sorghi e qualquer combinação dos mesmos.
A planta, a semente ou o produto da mesma podem ser selecionados do grupo que consiste em: amêndoa, damasco, maçã,
alcachofra, banana, cevada, beterraba, amora, mirtilo, brócolis, couve-de-bruxelas,
repolho, cannabis, pimenta, cenoura, aipo, acelga, cereja, frutas cítricas, milho, frutos das curcubitáceas, tâmara, figo, alho, uva, erva, especiarias, couve, alface, óleo de palma, azeitona, cebola, ervilha, pera, pêssego, amendoim, mamão papaia,
pastinaca, noz pecan, caqui, ameixa, romã, batata, marmelo, rabanete, framboesa,
rosa, arroz, abrunho, sorgo, soja, espinafre, morango, batata-doce, tabaco, tomate,
folhas de nabo, nozes e trigo.
INCORPORAÇÃO POR REFERÊNCIA
[020] Todas as publicações, patentes e pedidos de patente mencionados neste relatório descritivo são incorporados neste documento por referência da mesma forma como se cada publicação, patente ou pedido de patente individual estivesse específica e individualmente indicado para ser incorporado por referência.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[021] As novas características da invenção são apresentadas distintivamente nas reivindicações anexas. Uma melhor compreensão das características e vantagens da presente invenção será obtida por referência à seguinte descrição detalhada que apresenta as formas de realização ilustrativas, nas quais os princípios da invenção são utilizados e os desenhos anexos:
[022] FIG. 1 ilustra o % de sobrevivência de Verticillium dahliae e Fusarium oxysporum em ágar semissólido após a aplicação de 14 microrganismos candidatos em comparação com um controle (Serenade®).
[023] FIG. 2 ilustra as relações filogenéticas entre as sequências 16S e ITS na Tabela 1.
[024] FIG. 3 ilustra a identificação de candidatos usando um entendimento das interações entre espécies em um ambiente. Hanseniaspora uvarum foi identificada como interagindo diretamente com Fusarium oxysporum, provocando a inibição do crescimento do fungo. A capacidade de Hanseniaspora uvarum em inibir o crescimento de Fusarium oxysporum foi confirmada, e Hanseniaspora uvarum avançou como um produto candidato. É mostrada aqui a interação de primeiro nível identificada entre H. uvarum e F. oxysporum; a identificação e isolamento de H.
uvarum; e a confirmação da inibição de F. oxysporum causada por H. uvarum.
[025] FIG. 4 ilustra o percentual de área de superfície de framboesas infectadas com Botrytis cinerea após diferentes tratamentos: um controle (+) infectado com Botrytis cinerea, um controle não infectado (-) e uma amostra infectada com Botrytis cinerea, mas à qual o sobrenadante de uma cultura do produto candidato BC8 (Bacillus amyloliquefaciens; cepa 28B) foi aplicado.
[026] FIGs. 5A-5C ilustram o crescimento de fungos em framboesas após diferentes regimes de tratamentos. FIG. 5A ilustra o crescimento de fungos em um controle infectado com Botrytis cinerea. FIG. 5B ilustra o crescimento de fungos em um controle não infectado. FIG. 5C ilustra o crescimento de fungos em framboesas infectadas com Botrytis cinerea e às quais o sobrenadante de uma cultura do produto candidato BC8 (Bacillus amyloliquefaciens; cepa28B) foi aplicado.
[027] FIG. 6 ilustra um alinhamento nucleotídico da sequência de RNA 16S da cepa BC8 e dois isolados de B. velezensis FZB42.
[028] FIG. 7 ilustra a incidência de Botrytis em arbustos de mirtilo em plantas tratadas e não tratadas
[029] FIG. 8 ilustra o percentual de mirtilos infectados por Botrytis em plantas tratadas e não tratadas.
[030] FIG. 9 ilustra o número de incidências de queima das flores (Blossom Blight) por Botrytis por arbusto de mirtilo em plantas tratadas e não tratadas.
[031] FIG. 10 ilustra o percentual de mirtilos infectados por Botrytis sobre as plantas tratadas e não tratadas.
[032] FIG. 11 ilustra o número de incidências de queima das flores por Botrytis por arbusto de mirtilo em plantas tratadas e não tratadas.
[033] FIG. 12 ilustra o percentual de mirtilos infectados por Botrytis em plantas tratadas e não tratadas.
[034] FIG. 13A ilustra o número de ataques em arbustos de mirtilo tratados e não tratados. FIG. 13B ilustra o número de frutas mumificadas em arbustos de mirtilo tratados e não tratados.
[035] FIG. 14A ilustra o número de ataques em arbustos de mirtilo tratados e não tratados. FIG. 14B ilustra o número de frutas mumificadas em arbustos de mirtilo tratados e não tratados.
[036] FIG. 15 ilustra o percentual de danos causados pela doença provocada pela ferrugem do milho em plantas de milho tratadas e não tratadas.
[037] FIG. 16A ilustra o percentual de danos causados pela doença provocada pela ferrugem do milho em plantas de milho tratadas e não tratadas. FIG. 16B ilustra o índice de gravidade da doença da ferrugem do milho em plantas de milho tratadas e não tratadas.
[038] FIG. 17A ilustra o percentual de danos causados pela doença provocada pela ferrugem do milho em plantas de milho tratadas e não tratadas. FIG. 17B ilustra o índice de gravidade da doença da ferrugem do milho em plantas de milho tratadas e não tratadas.
[039] FIG. 18A ilustra a gravidade da doença em percentual do míldio nas folhas de uva tratadas e não tratadas. FIG. 18B ilustra a gravidade da doença em percentual do míldio em folhas de uva tratadas e não tratadas.
[040] FIG. 19A ilustra a gravidade da doença em percentual por Botrytis em cachos de uvas tratados e não tratados. FIG. 19B ilustra o índice de doença em percentual por Botrytis em cachos de uvas tratados e não tratados.
[041] FIG. 20A ilustra a gravidade da doença em percentual do oídio em folhas de uva tratadas e não tratadas. FIG. 20B ilustra o índice de doença em percentual do oídio em folhas de uva tratadas e não tratadas.
[042] FIG. 21A ilustra a gravidade da doença em percentual do míldio nas folhas de uva tratadas e não tratadas. FIG. 21B ilustra o índice de doença em percentual do míldio nas folhas de uva tratadas e não tratadas.
[043] FIG. 22 ilustra a gravidade da doença em percentual por Botrytis em cachos de uvas tratados e não tratados.
[044] FIG. 23A ilustra a gravidade da doença em percentual do míldio nas folhas de uva tratadas e não tratadas. FIG. 23B ilustra o índice de doença em percentual do míldio nas folhas de uva tratadas e não tratadas.
[045] FIG. 24A ilustra a gravidade da doença em percentual do míldio nas folhas de uva tratadas e não tratadas. FIG. 24B ilustra o índice de doença em percentual do míldio nas folhas de uva tratadas e não tratadas.
[046] FIG. 25A ilustra a gravidade da doença em percentual por Botrytis em cachos de uvas tratados e não tratados. FIG. 25B ilustra o índice de doença em percentual por Botrytis em cachos de uvas tratados e não tratados.
[047] FIG. 26A ilustra a gravidade da doença em percentual do oídio nas folhas de uva tratadas e não tratadas. FIG. 26B ilustra o índice de doença em percentual do oídio em folhas de uva tratadas e não tratadas.
[048] FIG. 27A ilustra a gravidade média da doença em percentual por Botrytis em arbustos de framboesa tratados e não tratados. FIG. 27B ilustra o índice médio da doença em percentual por Botrytis em arbustos de framboesa tratados e não tratados.
[049] FIG. 28A ilustra a gravidade média da doença em percentual do oídio nas folhas de framboesa tratadas e não tratadas. FIG. 28B ilustra o índice médio da doença em percentual do oídio em folhas de framboesa tratadas e não tratadas.
[050] FIG. 29A ilustra a gravidade média da doença em percentual do oídio em framboesas tratadas e não tratadas. FIG. 29B ilustra o índice médio da doença em percentual do oídio em framboesas tratadas e não tratadas.
[051] FIG. 30A ilustra a gravidade média da doença em percentual por Botrytis em arbustos de framboesa tratados e não tratados. FIG. 30B ilustra o índice médio da doença em percentual por Botrytis em arbustos de framboesa tratados e não tratados.
[052] FIG. 31A ilustra a gravidade da doença em percentual do oídio nas folhas de framboesa tratadas e não tratadas. FIG. 31B ilustra o índice de doença em percentual do oídio em folhas de framboesa tratadas e não tratadas.
[053] FIG. 32A ilustra a gravidade da doença em percentual do oídio em framboesas tratadas e não tratadas. FIG. 32B ilustra o índice de doença em percentual do oídio em framboesas tratadas e não tratadas.
[054] FIG. 33A ilustra a gravidade média da doença em percentual por Botrytis em arbustos de framboesa tratados e não tratados. FIG. 33B ilustra o índice médio da doença em percentual por Botrytis em arbustos de framboesa tratados e não tratados.
[055] FIG. 34A ilustra a gravidade da doença em percentual do oídio nas folhas de framboesa tratadas e não tratadas. FIG. 34B ilustra o índice de doença em percentual do oídio em folhas de framboesa tratadas e não tratadas.
[056] FIG. 35A ilustra a gravidade da doença em percentual do oídio em framboesas tratadas e não tratadas. FIG. 35B ilustra o índice de doença em percentual do oídio em framboesas tratadas e não tratadas.
[057] FIG. 36 ilustra o número de morangos apodrecidos infectados por Botrytis e Rhizopus em plantas tratadas e não tratadas.
[058] FIG. 37 ilustra o número de morangos apodrecidos infectados por Botrytis e Rhizopus em plantas tratadas e não tratadas.
[059] FIG. 38 ilustra o plantio por metro de plantas de soja infectadas por Pythium em plantas tratadas e não tratadas.
[060] FIG. 39 ilustra framboesas tratadas e não tratadas que foram infectadas por Botrytis cinerea.
[061] FIG. 40 ilustra uvas tratadas e não tratadas que foram infectadas por Botrytis cinerea.
[062] FIG. 41 ilustra maçãs tratadas e não tratadas que foram infectadas por Botrytis cinerea.
[063] FIG. 42 ilustra maçãs tratadas que foram infectadas por Botrytis cinerea.
[064] FIG. 43 ilustra o percentual da maçã que estava necrosada em maçãs tratadas e não tratadas que foram infectadas por Botrytis cinerea.
[065] FIG. 44 ilustra pêssegos tratados e não tratados que foram infectados por Botrytis cinerea.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[066] Inúmeros fungos patogênicos podem infectar plantas de importância agrícola, resultando no apodrecimento e deterioração dos alimentos enquanto as plantas estão no campo ou após a colheita. Por exemplo, a podridão cinzenta, causada pelo fungo patogênico Botrytis cinerea, pode ser encontrada frequentemente em frutas, como morangos e framboesas, tanto no campo quanto em locais de venda.
Encontrar maneiras de reduzir a perda causada por fungos patogênicos é altamente desejável por qualquer pessoa envolvida na produção e consumo de alimentos, e estratégias de controle baseadas em produtos químicos e biológicos foram previamente desenvolvidas. No entanto, o uso de fungicidas químicos e biológicos em culturas alimentícias, embora eficazes, podem provocar efeitos colaterais imprevistos (por exemplo, toxicidade), além de ser indesejável do ponto de vista do consumidor.
Além disso, as composições de biocontrole comerciais atualmente disponíveis podem não proporcionar a especificidade ou eficácia desejada ao patógeno ou vegetal. Por fim, pode haver um ônus significativo no registro e relato das aplicações dos pesticidas químicos sintéticos, o que é oneroso para os agricultores e produtores.
[067] As composições de biocontrole descritas aqui podem ter atividade antifúngica contra fungos de importância agrícola e podem ser formuladas para serem usadas em vários pontos do processo de produção. Por exemplo, essas composições de controle biológico podem ser formuladas para uso antes da colheita, como por exemplo, incorporando a composição em uma linha de irrigação ou administrando em combinação com um fertilizante, bem como pós-colheita, ou seja, durante o processamento, embalagem, transporte, armazenamento, e exibição comercial do produto, como por exemplo, pulverizando o produto colhido com a composição ou aplicando a composição em um material de embalagem usado para armazenar ou transportar o produto. Além disso, essas composições de biocontrole podem mostrar eficácia aprimorada quando comparadas às composições de biocontrole comerciais.
[068] Conforme utilizado neste documento, o termo "índice de gravidade da doença" geralmente se refere a uma pontuação que representa o grau de sintomas da doença visível na planta. Por exemplo, um determinado índice de gravidade da doença pode ter um número específico (ou intervalo de números) de manchas indicativas de uma doença nas folhas. Por exemplo, uma planta com mais sintomas da doença tem um índice de gravidade da doença mais alto do que uma planta com um índice de gravidade da doença mais baixo. Diferentes espécies de plantas podem ter um índice de gravidade da doença diferente associado às mesmas.
[069] Conforme utilizado neste documento, o termo “gravidade da doença” ou “a gravidade média da doença” ou “a gravidade média da doença em percentual”, geralmente refere-se ao grau de sintomas da doença que é visível em uma planta ou população de plantas. A gravidade da doença pode ser calculada pelo percentual da planta que está coberto pelos sintomas da doença. A gravidade média da doença em percentual pode ser calculada para uma população por meio da avaliação da gravidade da doença de cada planta e do cálculo da média da gravidade da doença de cada planta.
[070] Conforme utilizado neste documento, o termo "índice de doença", "índice médio da doença" ou "índice médio da doença em percentual" geralmente se refere a uma pontuação para uma população de plantas que representa o grau de sintomas da doença visível em uma população de plantas. O índice da doença pode ser calculado como a incidência da doença multiplicada pela gravidade da doença. O índice médio da doença pode ser calculado com base em um índice ou pontuação da gravidade da doença para uma planta individual, no número de plantas com esse índice de gravidade, no número total de plantas, no índice máximo da doença e no percentual de incidência da doença para criar uma média ponderada que representa a gravidade média da doença. Em um exemplo não limitativo, um cálculo geral do índice médio da doença em percentual pode ser feito como uma [soma (número de plantas em uma determinada pontuação multiplicada pela pontuação)] /[(número total de plantas multiplicadas pela pontuação máxima)] multiplicado por 100.
Composições para prevenir ou reduzir a perda de colheita e a deterioração de alimentos
[071] Encontram-se reveladas nesse documento, composições de biocontrole que podem prevenir ou reduzir o crescimento de um fungo patogênico em uma planta, uma semente ou um produto da mesma. O termo "produto" pode ser usado aqui para se referir à porção comestível de uma planta, como por exemplo, as folhas, o caule, as sementes, a raiz, as flores ou os frutos. O termo "planta" pode ser usado aqui para se referir a qualquer parte da planta, como, por exemplo, as folhas, o caule, as sementes, a raiz ou o fruto. Prevenir ou reduzir o crescimento de fungos patogênicos na planta, na semente ou no produto da mesma pode reduzir a quantidade de perda de colheita e a deterioração de alimentos antes, durante ou após a colheita do produto da planta.
[072] O pelo menos um microrganismo pode ser uma bactéria ou uma levedura. O pelo menos um microrganismo pode compreender um microrganismo de um gênero selecionado do grupo que consiste em: Bacillus, Burkholderia, Cutaneotrichosporon, Cyberlindnera, Gluconacetobacter, Gluconobacter, Hanseniaspora, Paraburkholderia, Pseudomonas, Torulaspora, e qualquer combinação dos mesmos.
[073] O pelo menos um microrganismo pode compreender um microrganismo selecionado do grupo que consiste em: Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtilis, Bacillus velezensis, Cutaneotrichosporon jirovecii, Cutaneotrichosporon moniliiforme, Cutaneotrichosporon mucoides, Cyberlindnera mrakii, Cyberlindnera saturnus, Gluconacetobacter liquefaciens, Gluconobacter cerinus, Hanseniaspora uvarum, Paraburkholderia phytofirmans, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas frederiksbergensis, Pseudomonas lini, Pseudomonas migulae, Torulaspora delbrueckii e qualquer combinação dos mesmos.
[074] O pelo menos um microrganismo pode ser um microrganismo do gênero Bacillus. O pelo menos um microrganismo pode ser um microrganismo do gênero Burkholderia. O pelo menos um microrganismo pode ser um microrganismo do gênero Cutaneotrichosporon. O pelo menos um microrganismo pode ser um microrganismo do gênero Cyberlindnera. O pelo menos um microrganismo pode ser um microrganismo do gênero Gluconacetobacter. O pelo menos um microrganismo pode ser um microrganismo do gênero Gluconobacter. O pelo menos um microrganismo pode ser um microrganismo do gênero Hanseniaspora. O pelo menos um microrganismo pode ser um microrganismo do gênero Paraburkholderia. O pelo menos um microrganismo pode ser um microrganismo do gênero Pseudomonas. O pelo menos um microrganismo pode ser um microrganismo do gênero Torulaspora.
[075] O pelo menos um microrganismo pode ser Bacillus amyloliquefaciens.
O pelo menos um microrganismo pode ser Bacillus subtilis. O pelo menos um microrganismo pode ser Bacillus velezensis. O pelo menos um microrganismo pode ser Cutaneotrichosporon jivrovecii. O pelo menos um microrganismo pode ser Cutaneotrichosporon moniliiforme. O pelo menos um microrganismo pode ser Cutaneotrichosporon mucoides. O pelo menos um microrganismo pode ser Cyberlindnera mrakii. O pelo menos um microrganismo pode ser Cyberlindnera saturnus. O pelo menos um microrganismo pode ser Gluconacetobacter liquefaciens.
O pelo menos um microrganismo pode ser Gluconobacter cerinus. O pelo menos um microrganismo pode ser Hanseniaspora uvarum. O pelo menos um microrganismo pode ser Paraburkholderia phytofirmans. O pelo menos um microrganismo pode ser Paraburkholderia fluroescens. O pelo menos um microrganismo pode ser Paraburkholderia frederiksbergensis. O pelo menos um microrganismo pode ser Pseudomonas lini. O pelo menos um microrganismo pode ser Pseudomonas migulae.
O pelo menos um microrganismo pode ser Torulaspora delbrueckii.
[076] O pelo menos um microrganismo pode compreender pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 70%, 75%, 80%, 85%, 87%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação ao rRNA de um microrganismo selecionado do grupo que consiste em: Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtilis, Bacillus velezensis, Cutaneotrichosporon jirovecii, Cutaneotrichosporon moniliiforme, Cutaneotrichosporon mucoides, Cyberlindnera mrakii, Cyberlindnera saturnus, Gluconacetobacter liquefaciens, Gluconobacter cerinus, Hanseniaspora uvarum, Paraburkholderia phytofirmans, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas frederiksbergensis, Pseudomonas lini, Pseudomonas migulae, Torulaspora delbrueckii, e qualquer combinação dos mesmos. O rRNA pode ser um rRNA 16S, um rRNA 23S, um espaçador interno transcrito (ITS) ou uma combinação dos mesmos.
O pelo menos um microrganismo pode ser uma combinação de cepas de microrganismos de uma ou mais espécies de microrganismos.
[077] A composição de biocontrole pode compreender: (i) pelo menos um microrganismo ou um metabólito secundário do pelo menos um microrganismo e (ii) um veículo e em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de rRNA 16S mais do que 98% idêntica a uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo de SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 9 ou em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 98% idêntica a uma sequência de ITS selecionada do grupo de SEQ ID NO: 17 e SEQ ID NO: 20 ou em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 90% idêntica à sequência de ITS de SEQ ID NO: 18.
[078] O microrganismo pode compreender uma sequência de RNA com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a uma sequência selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 e SEQ ID NO: 25.
[079] A composição de biocontrole pode compreender ainda um segundo microrganismo, em que o segundo microrganismo não é idêntico ao pelo menos um microrganismo. O segundo microrganismo pode compreender uma sequência de RNA com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a uma sequência selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 e SEQ ID NO: 25. Em alguns casos, o primeiro microrganismo e o segundo microrganismo são da mesma espécie. Por exemplo, o primeiro microrganismo e o segundo microrganismo podem ser ambos Bacillus amyloliquefaciens. Em um exemplo não limitativo adicional, um primeiro microrganismo e um segundo microrganismo e, opcionalmente, mais de dois microrganismos, cada uma das diferentes cepas da mesma espécie, podem ser incluídos em uma composição de biocontrole, como divulgado aqui. Em alguns casos, o primeiro e o segundo microrganismos não são da mesma espécie. Por exemplo, o primeiro microrganismo pode ser Gluconobacter cerinus e o segundo microrganismo pode ser Hanseniaspora uvarum. Em alguns casos, o primeiro microrganismo e o segundo microrganismo não são do mesmo gênero. Em alguns casos, o primeiro e o segundo microrganismos não pertencem à mesma família. Em alguns casos, o primeiro e o segundo não estão na mesma ordem.
Em alguns casos, o primeiro e o segundo microrganismos não pertencem à mesma classe. Em alguns casos, o primeiro microrganismo e o segundo microrganismo não estão no mesmo filo. Em alguns casos, o primeiro e o segundo microrganismos não estão no mesmo reino.
[080] Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a uma sequência de rRNA de uma espécie de Bacillus. A espécie de Bacillus pode ser Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtilis ou Bacillus velezensis.
A sequência de rRNA pode ser uma sequência 16S. Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 23.
[081] Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a uma sequência de rRNA de uma espécie de Gluconacetobacter. A espécie de Gluconacetobacter pode ser Gluconacetobacter liquefaciens. A sequência de rRNA pode ser uma sequência 16S. Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 ou SEQ ID NO: 16.
[082] Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a uma sequência de rRNA de uma espécie de Gluconobacter. A espécie de Gluconobacter pode ser Gluconobacter cerinus. A sequência de rRNA pode ser uma sequência 16S. Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a SEQ ID NO: 24.
[083] Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a uma sequência de rRNA de uma espécie de Burkholderia ou uma espécie de Paraburkholderia. A espécie de Paraburkholderia pode ser Paraburkholderia phytofirmans. A sequência de rRNA pode ser uma sequência 16S.
Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 7 ou SEQ ID NO: 9.
[084] Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a uma sequência de rRNA de uma espécie de Pseudomonas. As espécies de Pseudomonas podem ser Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas lini, Pseudomonas migulae ou Pseudomonas frederiksbergensis. A sequência de rRNA pode ser uma sequência 16S. Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 15 ou SEQ ID NO: 22.
[085] Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a SEQ ID NO: 8.
[086] Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a uma sequência de rRNA de uma espécie de Cyberlindnera. As espécies de Cyberlindnera podem ser Cyberlinderna saturnus ou Cyberlindera mrakkii. A sequência de rRNA pode ser uma sequência de ITS. Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a SEQ ID NO: 17.
[087] Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a uma sequência de rRNA de uma espécie de Hanseniaspora. As espécies de Hanseniaspora podem ser Hanseniaspora uvarum. A sequência de rRNA pode ser uma sequência de ITS. Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a SEQ ID NO: 18 ou SEQ ID: 25. Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos 90% de identidade de sequência em relação a SEQ ID NO: 18 ou SEQ ID: 25.
Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos 95% de identidade de sequência em relação a SEQ ID NO: 18 ou SEQ ID: 25. Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos 99%
de identidade de sequência em relação a SEQ ID NO: 18 ou SEQ ID: 25.
[088] Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a uma sequência de rRNA de uma espécie de Torulaspora. A espécie de Torulaspora pode ser Torulaspora delbrueckii. A sequência de rRNA pode ser uma sequência de ITS. Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a SEQ ID NO: 19.
[089] Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a uma sequência de rRNA de uma espécie de Cutaneotrichosporon. As espécies de Cutaneotrichosporon pode ser Cutaneotrichosporon moniliiforme, Cutaneotrichosporon carinii ou Cutaneotrichosporon mucoides. A sequência de rRNA pode ser uma sequência de ITS. Em uma forma de realização, o pelo menos um microrganismo compreende pelo menos um microrganismo com pelo menos cerca de: 85%, 87%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência em relação a SEQ ID NO: 20 ou SEQ ID NO: 21.
[090] A composição de biocontrole pode compreender um consórcio de microrganismos compreendendo uma pluralidade de microrganismos. A pluralidade de microrganismos pode ser pelo menos dois microrganismos, pelo menos três microrganismos, pelo menos quatro microrganismos, pelo menos cinco microrganismos, pelo menos seis microrganismos, pelo menos sete microrganismos, pelo menos oito microrganismos, pelo menos nove microrganismos ou pelo menos dez microrganismos. Cada microrganismo da pluralidade de microrganismos pode ser um microrganismo diferente. A composição de biocontrole pode compreender metabólitos secundários de um consórcio de microrganismos compreendendo uma pluralidade de microrganismos, em que a pluralidade de microrganismos consiste em pelo menos dois microrganismos, pelo menos três microrganismos, pelo menos quatro microrganismos, pelo menos cinco microrganismos, pelo menos seis microrganismos, em pelo menos sete microrganismos, pelo menos oito microrganismos, pelo menos nove microrganismos ou pelo menos dez microrganismos.
[091] Os pelo menos dois microrganismos podem compreender pelo menos dois microrganismos selecionados do grupo que consiste em: microrganismos com uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 e microrganismos com uma sequência de ITS selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21 e SEQ ID NO: 25. Os pelo menos dois microrganismos podem compreender um primeiro microrganismo com uma sequência de rRNA 16S selecionada dentre a SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 9 ou em que o primeiro microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 98% idêntica a uma sequência de ITS selecionada do grupo de SEQ ID NO: 17 e SEQ ID NO: 20 ou em que o primeiro microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 90% idêntica a uma sequência de ITS de SEQ ID NO: 18. Os pelo menos dois microrganismos podem compreender um primeiro microrganismo tendo uma sequência de ITS mais do que 90% idêntica a SEQ ID NO: 18 e um segundo microrganismo pode ser uma espécie de Gluconacetobacter. A espécie de Gluconacetobacter pode ser Gluconacetobacter liquefaciens. As espécies de Gluconacetobacter podem ser uma espécie de Gluconacetobacter com uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 e SEQ ID NO: 16. Os pelo menos dois microrganismos podem compreender um primeiro microrganismo sendo uma espécie de Gluconobacter e um segundo microrganismo sendo uma espécie de Hanseniaspora. Os pelo menos dois microrganismos podem compreender um primeiro microrganismo sendo um Gluconobacter cerinus e um segundo microrganismo sendo um Hanseniaspora uvarum.
[092] Os pelo menos dois microrganismos podem compreender um primeiro microrganismo com uma sequência 16S mais do que 90% idêntica a SEQ ID NO: 24 e um segundo microrganismo com uma sequência de ITS mais do que 90% idêntica a SEQ ID NO: 25. Os pelo menos dois microrganismos podem compreender um primeiro microrganismo com uma sequência 16S mais do que 95% idêntica a SEQ ID NO: 24 e um segundo microrganismo com uma sequência de ITS mais do que 95% idêntica a SEQ ID NO: 25. Os pelo menos dois microrganismos podem compreender um primeiro microrganismo com uma sequência 16S mais do que 98% idêntica a SEQ ID NO: 24 e um segundo microrganismo com uma sequência de ITS mais do que 98% idêntica a SEQ ID NO: 25.
[093] Os pelo menos três microrganismos podem compreender um primeiro microrganismo com uma sequência de rRNA 16S mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 23, um segundo microrganismo com uma sequência de rRNA 16S mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 23, um terceiro microrganismo com sequência de rRNA 16S mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 23, em que o primeiro microrganismo, o segundo microrganismo e o terceiro microrganismo compõem genomas que não são idênticos. Em alguns casos, os genomas podem diferir por um único polimorfismo nucleotídico (SNP). Em alguns casos, os genomas podem diferir em mais de um SNPs. Em alguns casos, os genomas podem diferir pelo número de genes em cada genoma. Em alguns casos, os genomas podem diferir por rearranjos, como inserções, deleções, reordenações, refatorações ou fagos lisogênicos ou inativos, sequências de inserção, sequência genômica repetitiva ou outros conteúdos diferentes de regiões genômicas ou genes. Em alguns casos, o teor de DNA celular pode diferir pela inclusão de um ou mais plasmídeos, que podem diferir de uma cepa para outra. Em alguns casos, os genomas podem codificar diferentes isoformas dos genes. Por exemplo, uma proteína expressa do gene pode conter uma mutação pontual, uma deleção, uma inserção, o que pode afetar a função da proteína. Por exemplo, uma proteína expressa a partir do gene pode conter uma mutação pontual, uma deleção, uma inserção, que pode não afetar a função da proteína ou que pode não afetar substancialmente a função da proteína.
[094] Os pelo menos três microrganismos podem compreender pelo menos três microrganismos selecionados do grupo que consiste em microrganismos com uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo que consiste em microrganismos com uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23 e SEQ ID NO: 24 e microrganismos com uma sequência de ITS selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21 e SEQ ID NO: 25. Os pelo menos três microrganismos podem compreender pelo menos um microrganismo com uma sequência de rRNA 16S selecionada dentre a SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 9 ou SEQ ID 23 ou uma sequência de ITS selecionada dentre a SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 ou SEQ ID NO: 20.
[095] Os pelo menos quatro microrganismos podem compreender pelo menos quatro microrganismos selecionados do grupo que consiste em microrganismos com uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo que consiste em microrganismos com uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23 e SEQ ID NO: 24 e microrganismos com uma sequência de ITS selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21 e SEQ ID NO: 25. Os pelo menos quatro microrganismos podem compreender pelo menos um microrganismo com uma sequência de rRNA 16S selecionada dentre a SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 9 ou SEQ ID NO: 23 ou uma sequência de ITS selecionada dentre a SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 ou SEQ ID NO: 20.
[096] Os pelo menos cinco microrganismos podem compreender pelo menos cinco microrganismos selecionados do grupo que consiste em microrganismos com uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo que consiste em microrganismos com uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23 e SEQ ID NO: 24 e microrganismos com uma sequência de ITS selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21 e SEQ ID NO: 25. Os pelo menos cinco microrganismos podem compreender pelo menos um microrganismo com uma sequência de rRNA 16S selecionada dentre a SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 9 ou SEQ ID 23 ou uma sequência de ITS selecionada dentre a SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 ou SEQ ID NO: 20.
[097] A Tabela 1 ilustra os identificadores de cepa microbiana, espécie ou gênero microbiano putativo e as SEQ ID NOs correspondentes descritas aqui. O pelo menos um microrganismo pode ser um microrganismo na Tabela 1. As relações filogenéticas de algumas destas cepas encontram-se indicadas na FIG. 2. A Tabela 2 ilustra as sequências correspondentes a essas SEQ ID NOs.
TABELA 1. Cepas microbianas com atividade antifúngica Identificador(es) de Espécie ou gênero microbiano 16S ou SEQ ID NO. cepa microbiana putativo ITS 28B; BC8 Bacillus amyloliquefaciens SEQ ID NO: 1 16S 74A.1; BC12 Gluconacetobacter liquefaciens SEQ ID NO: 2 16S 41A2 Paraburkholderia or Burkholderia SEQ ID NO: 3 16S 253A; B253 Gluconacetobacter liquefaciens SEQ ID NO: 4 16S 254A; B254; BC13 Gluconacetobacter liquefaciens SEQ ID NO: 5 16S B125.D, 125B Pseudomonas fluorescens SEQ ID NO: 6 16S 41A; F41A Paraburkholderia or Burkholderia SEQ ID NO: 7 16S 41A.1; F41A.1 Desconhecido SEQ ID NO: 8 16S 41A.2; F41A.2; BC10 Paraburkholderia or Burkholderia SEQ ID NO: 9 16S B31 Pseudomonas lini SEQ ID NO: 10 16S 233B; BC11 Gluconacetobacter liquefaciens SEQ ID NO: 11 16S 234B; B234 Gluconacetobacter liquefaciens SEQ ID NO: 12 16S 239B; B239 Gluconacetobacter liquefaciens SEQ ID NO: 13 16S B240; BC15 Gluconacetobacter liquefaciens SEQ ID NO: 14 16S B125B2; B125.B2 Pseudomonas sp. SEQ ID NO: 15 16S 258B; BC14 Gluconacetobacter liquefaciens SEQ ID NO: 16 16S Cyberlindnera mrakii or 1C; BC1 SEQ ID NO: 17 ITS Cyberlindnera saturnus
74.2; BC2 Hanseniaspora uvarum SEQ ID NO: 18 ITS
74.3; BC9 Torulaspora delbrueckii SEQ ID NO: 19 ITS 125B; B125B1A Cutaneotrichosporon moniliiforme SEQ ID NO: 20 ITS Cutaneotrichosporon or 125B.1; B125B1 SEQ ID NO: 21 ITS Trichosporon BC16 Pseudomonas sp. SEQ ID NO: 22 16S BC17 Bacillus amyloliquefaciens SEQ ID NO: 23 16S BC18 Gluconobacter cerinus SEQ ID NO: 24 16S
Identificador(es) de Espécie ou gênero microbiano 16S ou SEQ ID NO. cepa microbiana putativo ITS BC18 Hanseniaspora uvarum SEQ ID NO: 25 ITS TABELA 2. Sequências SEQ ID NO Sequência SEQ ID NO: 1 CAAGCGTTGTCCGGAATTNTTGGGCGTAAAGGGCTNCGCAGGCGGTTT
NCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTT GGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTG TAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCG
ACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCT SEQ ID NO: 2 CGGAATGACTGGGCGTAAAGGGCGCGTAGGCGGTATGGACAGTCAGAT
GTGAAATTCCTGGGCTTAACCTGGGGGCTGCATTTGATACGTCCAAAA CTAGAGTGTGAGAGAGGGTTGTGGAATTCCCAGTGTAGAGGTGAAATT CGTAGATATTGGGAAGAACACCGGTGGCGAAGGCGGCAACCTGGCTCA
TAACTGACGCTGA SEQ ID NO: 3 CGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGTGCGCAGGCGGTTCGCTAA
GACAGATGTGAAATCCCCGGGCTTAACCTGGGAACTGCATTTGTGACT GGCGGGCTAGAGTATGGCAGAGGGGGGTAGAATTCCACGTGTAGCAGT GAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAATACCGATGGCGAAGGCAGCCCCCT
GGGCCAATACTGACGCTCATGCA SEQ ID NO: 4 AAGGGGGCTAGCGTTGCTCGGAATGACTGGGCGTAAAGGGCGCGTAGG
CGGTATGGACAGTCAGATGTGAAATTCCTGGGCTTAACCTGGGGGCTG CATTTGATACGTCCAAACTAGAGTGTGAGAGAGGGTTGTGGAATTCCC AGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTGGGAAGAACACCGGTGGCGAA
GGCGGCAACCTGGCTCATAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGG SEQ ID NO: 5 GAAGGGGGCTAGCGTTGCTCGGAATGACTGGGCGTAAAGGGCGCGTAG
GCGGTATGGACAGTCAGATGTGAAATTCCTGGGCTTAACCTGGGGGCT GCATTTGATACGTCCAAACTAGAGTGTGAGAGAGGGTTGTGGAATTCC CAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTGGGAAGAACACCGGTGGCGA AGGCGGCAACCTGGCTCATAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGG AGCAAACAGGATTAGATACCCCCGTAGTCCCTGTCTCTTATACACATC
TCCGAGCCCACGAGACA SEQ ID NO: 6 GCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTC
GTTAAGTTGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTCA AAACTGTCGAGCTAGAGTATGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTA GCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGAC CACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAAC
AGGATTAGATACCCCCGTAG SEQ ID NO: 7 GTAATACGTAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCG
TGCGCAGGCGGTTCGCTAAGACAGATGTGAAATCCCCGGGCTTAACCT GGGAACTGCATTTGTGACTGGCGGGCTAGAGTATGGCAGAGGGGGGTA GAATTCCACGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAATACCG ATGGCGAAGGCAGCCCCCTGGGCCAATACTGACGCTCATGCACGAAAG CGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCCCGTAGTCCCTGTCTCTTAT
ACACATCTCCGAGCCCACGAGACA SEQ ID NO: 8 GCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTT
GTTAAGTTGGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTCA AAACTGACAAGCTAGAGTATGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTA GCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGAC CACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAAC
SEQ ID NO Sequência
AGGATTAGATACCCCCGTAGTCCCTGTCTCTTATACACATCTCCGAGC
CCACGAGACA SEQ ID NO: 9 TGTTTTGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGGTGTCAGCAGC
CGCGGTAATACGTAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAA AGCGTGCGCAGGNGNNTCGCTAAGACAGATGTGAAATCCCCGGGCTTA ACCTGGGAACTGCATTTGTGACTGGCGGGCTAGAGTATGGCAGAGGGG GGTAGAATTCCACGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAAT ACCGATGGCGAAGGCAGCCCCCTGGGCCAATACTGACGCTCATGCACG AAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCCGGTAGTCCCTGTCTC
TTATACACATCTCCGAGCCCACGAGACA SEQ ID NO: 10 CAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTCG
TTAAGTTGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTCAA AACTGTCGAGCTAGAGTATGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAG CGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACC
ACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGT SEQ ID NO: 11 TTGTTTCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGGTGTCAGCCG
CCGCGGTAATACGAAGGGGGCTAGCGTTGCTCGGAATGACTGGGCGTA AAGGGCGCGTAGGCGGTATGGACAGTCAGATGTGAAATTCCTGGGCTT AACCTGGGGGCTGCATTTGATACGTCCAAACTAGAGTGTGAGAGAGGG TTGTGGAATTCCCAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTGGGAAGAA CACCGGTGGCGAAGGCGGCAACCTGGCTCATAACTGACGCTGAGGCGN
GAAAGCGTGGGGAG SEQ ID NO: 12 AAGGGGGCTAGCGTTGCTCGGAATGACTGGGCGTAAAGGGCGCGTAGG
CGGTATGGACAGTCAGATGTGAAATTCCTGGGCTTAACCTGGGGGCTG CATTTGATACGTCCAAACTAGAGTGTGAGAGAGGGTTGTGGAATTCCC AGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTGGGAAGAACACCGGTGGCGAA
GGCGGCAACCTGGCTCATAACTGACGCTGAGGCGC SEQ ID NO: 13 AAGGGGGCTAGCGTTGCTCGGAATGACTGGGCGTAAAGGGCGCGTAGG
CGGTATGGACAGTCAGATGTGAAATTCCTGGGCTTAACCTGGGGGCTG CATTTGATACGTCCAAACTAGAGTGTGAGAGAGGGTTGTGGAATTCCC AGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTGGGAAGAACACCGGTGGCGAA
GGCGGCAACCTGGCTCATAACTGACGCTGAGGCG SEQ ID NO: 14 AAGGGGGCTAGCGTTGCTCGGAATGACTGGGCGTAAAGGGCGCGTAGG
CGGTATGGACAGTCAGATGTGAAATTCCTGGGCTTAACCTGGGGGCTG CATTTGATACGTCCAAACTAGAGTGTGAGAGAGGGTTGTGGAATTCCC AGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTGGGAAGAACACCGGTGGCGAA
GGCGGCAACCTGGCTCATAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGT SEQ ID NO: 15 TGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTT
CGTTAAGTTGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTC AAAACTGTCGAGCTAGAGTATGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGT AGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGA
CCACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGC SEQ ID NO: 16 AGGGGGCTAGCGTTNCTCGGAATGACTGGGCGTAAAGGGCGCGTAGGC
GGTATGGACAGTCAGATGTGAAATTCCTGGGCTTAACCTGGGGGCTGC ATTTGATACGTCCAAACTAGAGTGTGAGAGAGGGTTGTGGAATTCCCA GTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTGGGAAGAACACCGGTGGCGAAG
GCGGCAACCTGGCTCATAACTGACGCTGAGGCGCGA SEQ ID NO: 17 AGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTAAAGTATTCTTCGGTGCAGCCAGC
GCTTCCACAGCGCGGCAGCCCAAACCTTACACACTGTGATTAGTTTTT TCTACTATTTACTTTGGCTGCACGAAGTGGCCAAAGGTTCTTAAACAC
SEQ ID NO Sequência
AAAAGATTTATATCTTTTTTTACAAAATTTAGTCAATGNAGTTTTAAT
ACTATNATCTTTCAAAACTTT SEQ ID NO: 18 AATNGCGCNGCTTCTTTAGAGTGTCGCAGTAAAAGTAGTCTTGCTTGA
ATCTCAGTCAACGCTACACACATTCGGAGTTTTTTTATTTTATTTTAT TTCTTTCGCTTTTGATTCAAAGGGTCCAGGCCAAAAACCAACCCCAAC CATTTTAATTTANTANTATTTTTTTAACCTAACCCAAATTTCCTACCG
AAATTTTTAAATTATTTNAAACCTTTCA SEQ ID NO: 19 CCATTAAGAAGAAATTCTATATGAATGAAGTTAGAGGACGTCTAAAGA
TACTGTAAGAGAGGATCTGGTTCAAGACCAGCGCTTAATTGCGCGGTT GCGGCTNGGTTCGCCTTTTGCGGAACATGTCTTTTCTCGTTGTTAACT CTACTTCAACTTCTACAACACTGTGGAGTTTTCTACACAACTTTTCTT CTTTGGGAAGATACGTCTTGTGCGTGCTTCCCAGAGGTGACAAACACA AACAACTTTTTATTATTATAAACCAGTCAAAACCAATTTCGTTATGAA ATTAAAAATATTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCAT
CGATGAAGAACGCAGCCTGTCTCTTATACACATCTCC SEQ ID NO: 20 GTGAATTGCTCTCTGAGCGTTAAACTATATCCATCTACACCTGTGAAC
TGTTGATTGACTTCGGTCGAATTACTTTTACAAACATTGTGTAATGAA
CGTCATGTTATTATAACAAAAAATAAC SEQ ID NO: 21 TCGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTAGTGAA
TTGCTCTCTGAGCGTTAAACTATATCCATCTACACCTGTGAACTGTTG ATTGACTTCGGTCAATTACTTTTACAAACATTGTGTAATGAACGTCAT
GTTATTATAACAAAAATAACTTTCAACAACGGA SEQ ID NO: 22 CAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTCG
TTAAGTTGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTCAA AACTGTCGAGCTAGAGTATGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAG CGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACC
ACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGT SEQ ID NO: 23 ACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGC
AGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAG GGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATT CCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGC GAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGG
GGAGCGAACAG SEQ ID NO: 24 CGAAGGGGGCTAGCGTTGCTCGGAATGACTGGGCGTAAAGGGCGCGTA
GGCGGTTTATGCAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTTAACCTGGGAAC TGCATTTGAGACGCATAGACTAGAGGTCGAGAGAGGGTTGTGGAATTC CCAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTGGGAAGAACACCGGTGGCG AAGGCGGCAACCTGGCTCGATACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGG
GAGCAAACAG SEQ ID NO: 25 AGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTAGAT
TGAATTATCATTGTTGCTCGAGTTCTTGTTTAGATCTTTTACAATAAT GTGTATCTTTATTGAAGATGTGCGCTTAATTGCGCTGCTTCTTTAAAG TGTCGCAGTGAAAGTAGTCTTGCTTGAATCTCAGTCAACGCTACACAC ATTGGAGTTTTTTTACTTTAATTTAATTCTTTCTGCTTTGAATCGAAA GGTTCAAGGCAAAAAACAAACACAAACAATTTTATTTTATTATAATTT TTTAAACTAAACCAAAATTCCTAACGGAAATTTTAAAATAATTTAAAA CTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCT
[098] O pelo menos um microrganismo pode ser cultivado em uma cultura. O pelo menos um microrganismo pode ser isolado e purificado da cultura. O pelo menos um microrganismo purificado da cultura pode compreender uma célula vegetativa ou esporo do pelo menos um microrganismo. A cultura pode ser um meio sólido ou semissólido. A cultura pode ser um meio líquido. A cultura pode ser um biorreator.
Qualquer biorreator adequado pode ser usado. Exemplos de biorreatores incluem, mas não estão limitados a um balão, biorreator de tanque com agitação contínua (CSTR), um biorreator sem bolhas, um reator airlift e um biorreator de membrana. Em alguns casos, um sobrenadante da cultura compreende um metabólito secundário de pelo menos um microrganismo. O metabólito secundário de pelo menos um microrganismo pode ser isolado e purificado a partir do sobrenadante. Em alguns casos, o sobrenadante pode ser aplicado como a composição de biocontrole, como descrito em outra parte deste documento.
[099] A composição de biocontrole pode compreender um ou mais metabólitos secundários é do pelo menos um microrganismo. O um ou mais metabólitos secundários podem ter propriedades antifúngicas próprias. O um ou mais metabólitos secundários podem, juntamente com outros microrganismos em uma composição de biocontrole, ter propriedades antifúngicas. O um ou mais metabólitos secundários podem ser isolados de um sobrenadante da cultura de pelo menos um microrganismo.
O um ou mais metabólitos secundários podem compreender um lipopeptídeo, um dipeptídeo, um aminopoliol, uma proteína, um sideróforo, um composto de fenazina, um policetídeo ou uma combinação dos mesmos.
[0100] O lipopeptídeo pode ser um lipopeptídeo linear ou um lipopeptídeo cíclico (CLP). Exemplos de lipopeptídeos incluem, mas não estão limitados a uma surfactina, uma fengicina, uma iturina, um massetolídeo, uma anfisina, uma artrofactina, uma tolassina, um siringopeptídeo, uma siringomicina, uma putisolvina, uma bacilomicina, uma bacilopeptina, uma bacitracina, uma polimixina, uma daptomicina, uma micosubtilina, uma curstaquina, uma tensina, uma plipastatina, uma viscosina e uma equinocandina. A equinocandina pode ser o equinocandibe B (BCE).
Em alguns casos, o metabólito secundário é uma surfactina, uma fengicina, uma iturina ou uma combinação dos mesmos.
[0101] O dipeptídeo pode ser bacilisina ou clorotetaína. O policetídeo pode ser deficidina, macrolactina, bacillaeno, butirolactol A, sorafeno A, hipolacnina A ou forazolina A. O metabólito secundário pode ser um aminopoliol. O aminopoliol pode ser zwittermicina A. O metabólito secundário pode ser uma proteína. A proteína pode ser uma bacisubina, subtilina ou uma fungicina.
[0102] O sideróforo pode ser uma piroverdina, tioquinolobactina ou uma piocelina. O composto fenazina pode ser um ácido fenzina-1-carboxílico, uma 1- hidroxifenazina ou uma fenazina-1-carboxamida. O metabólito secundário pode ser uma quitinase, uma celulase, uma amilase ou uma glucanase. O metabólito secundário pode ser um composto antifúngico volátil.
[0103] A composição de biocontrole pode ser formulada como uma formulação líquida ou uma formulação seca. A formulação líquida pode ser uma suspensão fluida ou aquosa. A formulação líquida pode compreender pelo menos um microrganismo ou um metabólito secundário do mesmo suspenso em água, óleo ou uma combinação dos mesmos (uma emulsão). Uma formulação seca pode ser um pó molhável, um floco seco, um pó ou um grânulo. Um pó molhável pode ser aplicado à planta, à semente, à flor ou ao produto da mesma como uma suspensão. Um pó pode ser aplicado à planta, à semente ou ao produto da mesma a seco, como às sementes ou folhagem. Um grânulo pode ser aplicado a seco ou pode ser misturado com água para criar uma suspensão. O pelo menos um microrganismo ou um metabólito secundário do mesmo pode ser formulado como uma microencapsulação, em que o pelo menos um microrganismo ou um metabólito secundário do mesmo possui uma camada inerte protetora. A camada inerte protetora pode compreender qualquer polímero adequado.
[0104] A composição de biocontrole pode compreender ainda um composto adicional. O composto adicional pode ser um veículo, um tensoativo, um agente umectante, um penetrante, um emulsificante, um propagador, um adesivo, um estabilizante, um nutriente, um ligante, um dessecante, um espessante, um dispersante, um protetor UV ou uma combinação dos mesmos. O veículo pode ser um veículo líquido, um veículo mineral ou um veículo orgânico. Exemplos de um veículo líquido incluem, mas não estão limitados ao óleo vegetal ou água. Exemplos de um veículo mineral incluem, entre outros, argila de caulinita ou terra de diatomáceas.
Exemplos de um veículo orgânico incluem, mas não estão limitados a farinha de grão.
O tensoativo pode ser um tensoativo aniônico, um tensoativo catiônico, um tensoativo anfotérico ou um tensoativo não iônico. O tensoativo pode ser Tween 20 ou Tween
80. O agente molhante pode compreender um éster de polioxietileno, um etoxi sulfato ou um derivado do mesmo. Em alguns casos, um agente umectante é misturado com um tensoativo não iônico. Um penetrante pode compreender um hidrocarboneto. Um propagador pode compreender um ácido graxo, um látex, um álcool alifático, um óleo vegetal (por exemplo, semente de algodão) ou um óleo inorgânico. Um adesivo pode compreender polietileno emulsionado, uma resina polimerizada, um ácido graxo, um destilado de petróleo ou farinha de milho pré-gelatinizada. O óleo pode ser óleo de coco, óleo de palma, óleo de mamona ou lanolina. O estabilizante pode ser lactose ou benzoato de sódio. O nutriente pode ser melaço ou peptona. O ligante pode ser goma arábica ou carboximetilcelulose. O dessecante pode ser gel de sílica ou um sal anidro.
Um espessante pode compreender uma poliacrilamida, um polímero de polietileno, um polissacarídeo, goma xantana ou um óleo vegetal. O dispersante pode ser celulose microcristalina. O protetor UV pode ser oxibenzona, blankophor BBH ou lignina.
[0105] A composição de biocontrole pode compreender ainda ácido dipicolínico.
[0106] O pelo menos um microrganismo pode compreender uma quantidade eficaz de microrganismos isolados e purificados isolados e purificados a partir de uma cultura líquida. O pelo menos um microrganismo da cultura líquida pode ser seco ao ar, liofilizado, seco por pulverização ou seco em leito fluidizado para produzir uma formulação seca. A formulação seca pode ser reconstituída em um líquido para produzir uma formulação líquida.
[0107] A composição de biocontrole pode ser formulada de modo que pelo menos um microrganismo possa se replicar depois de aplicado/ou administrado ao habitat alvo (por exemplo, o solo, a planta, a semente e/ou o produto).
[0108] A composição de biocontrole pode ter um prazo de validade de pelo menos uma semana, um mês, seis meses, pelo menos um ano, pelo menos dois anos, pelo menos três anos, pelo menos quatro anos ou pelo menos cinco anos. O prazo de validade pode indicar o período de tempo em que a composição de biocontrole mantém pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 99% ou 100% de suas propriedades antifúngicas. A composição de biocontrole pode ser armazenada em temperatura ambiente, a ou abaixo de 4°C, a ou abaixo de 0°C ou a ou abaixo de -20°C.
[0109] A composição de biocontrole pode compreender esporos. As composições contendo esporos podem ser aplicadas pelos métodos descritos aqui.
As composições contendo esporos podem prolongar a vida útil da composição de biocontrole. As composições contendo esporos podem sobreviver a pH baixo ou a baixas temperaturas em um habitat alvo. Por exemplo, composições contendo esporos podem ser aplicadas ao solo a uma temperatura mais baixa (por exemplo, abaixo de 10°C) e podem ter propriedades antifúngicas para uma semente plantada a uma temperatura mais alta (por exemplo, 20°C). Os esporos podem se tornar células vegetativas, permitindo-lhes quaisquer vantagens das células vegetativas.
[0110] A composição de biocontrole pode compreender células vegetativas.
As composições contendo células vegetativas podem ser aplicadas pelos métodos descritos aqui. As células vegetativas podem proliferar e aumentar a eficácia da composição. Por exemplo, células vegetativas na composição de biocontrole podem proliferar após aplicação, aumentando a área de superfície da planta que é exposta à composição de biocontrole. Em outro exemplo, as células vegetativas na composição de biocontrole podem proliferar após aplicação, aumentando a quantidade de tempo que a composição de biocontrole sobrevive e, assim, prolongando o tempo em que a composição de biocontrole tem eficácia. As células vegetativas podem proliferar e competir por nutrientes com um fungo patogênico. As células vegetativas podem produzir ativamente um ou mais metabólitos secundários com propriedades antifúngicas. As células vegetativas podem se tornar esporos, o que lhes permite vantagens.
[0111] A composição de biocontrole pode ter atividade antifúngica, tal como a prevenção do crescimento de um fungo patogênico ou redução do crescimento de um fungo patogênico em uma planta, semente ou produto da mesma. A composição de biocontrole pode impedir o crescimento de um fungo patogênico na planta, semente ou produto da mesma por pelo menos 1, pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 4 ou pelo menos 5 dias. A composição de biocontrole pode impedir o crescimento de um fungo patogênico na planta, semente ou produto da mesma por pelo menos 1, pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 4, pelo menos 5 dias, pelo menos 6 dias, pelo menos 7 dias, pelo menos 8 dias, pelo menos 9 dias ou pelo menos 10 dias. A composição de biocontrole pode impedir o crescimento de um fungo patogênico na planta, semente ou produto da mesma por mais de 10 dias.
[0112] A composição de biocontrole pode reduzir o crescimento do fungo patogênico na planta, semente ou produto da mesma em relação ao crescimento do fungo patogênico em um controle que é uma planta, uma semente, flor ou um produto da mesma não exposto à composição de biocontrole. O controle pode ser uma planta, uma semente ou um produto da mesma ao qual nenhum agente antifúngico foi aplicado ou pode ser uma planta, uma semente, flor ou produto da mesma ao qual um agente antifúngico comercialmente disponível foi aplicado. Exemplos de agentes antifúngicos disponíveis comercialmente incluem, mas não estão limitados a Bacillus subtilis cepa QST713 (Serenade®), Bacillus subtilis cepa GB02 (Kodiak®), Bacillus subtilis cepa MBI 600 (Subtilex®), Bacillus pumilus cepa GB34 (YieldShield), Bacillus licheniformis cepaSB3086 (EcoGuard®). A composição de biocontrole pode reduzir o crescimento de um fungo patogênico na planta, semente ou produto da mesma por pelo menos 1, pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 4 ou pelo menos 5 dias. A composição de biocontrole pode reduzir o crescimento de um fungo patogênico na planta, semente ou produto da mesma por pelo menos 1, pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 4, pelo menos 5 dias, pelo menos 6 dias, pelo menos 7 dias, pelo menos 8 dias, pelo menos 9 dias ou pelo menos 10 dias. A composição de biocontrole pode reduzir o crescimento de um fungo patogênico na planta, semente ou produto da mesma por mais de 10 dias. A composição de biocontrole pode reduzir o crescimento do fungo patogênico em pelo menos 25% em relação ao crescimento do fungo patogênico no controle. A composição de biocontrole pode reduzir o crescimento do fungo patogênico em pelo menos 60% em relação ao crescimento do fungo patogênico no controle. A composição de biocontrole pode reduzir o crescimento do fungo patogênico em pelo menos 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60% 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% ou mais em relação ao crescimento do fungo patogênico no controle.
[0113] O agente patogênico fúngico pode ser um fungo patogênico do gênero Albugo, Alternaria, Aphanomyces, Armillaria, Aspergillus, Botrytis, Botrydiplodia, Botrytinia, Bremia, Cercospora, Cercosporella, Cladosporium, Colletotrichum, Cordana, Corynespora, Cylindrocarpon, Daktulosphaira, Didymella, Elsinoe, Erysiphe, Eutypa, Fusarium, Ganoderma, Guignardia, Gymnoconia, Helminthosporium, Leptosphaeria, Leveillula, Macrophomina, Microsphaera, Monolinia, Mycosphaerella,
Oidopsis, Passalora, Peronospora, Phomopsis, Phytophthora, Peronospora, Phoma,
Plasmodiophora, Plasmopara, Podosphaera, Polyscytalum, Pseudocercospora,
Puccinia, Pucciniastrum, Pythium, Ralstonia, Ramularia, Rhizoctonia, Rhizopus,
Septoria, Sclerotinia, Sclerotium, Sphaerotheca, Sphaceloma, Spongospora,
Stemphylium, Synchytrium, Thielaviopsis, Uncinula, Uromyces, or Verticillium.
The fungal pathogen can be Albugo candida, Albugo occidentalis, Alternaria alternata,
Alternaria cucumerina, Alternaria dauci, Alternaria solani Alternaria tenuis, Alternaria tenuissima, Alternaria tomatophila,, Aphanomyces euteiches, Aphanomyces raphani,
Armillaria mellea, Botrydia theobromae, Botrytis cinerea, Botrytinia fuckeliana, Bremia lactuca, Cercospora beticola, Cercosporella rubi, Cladosporium herbarum,
Colletotrichum acutatum, Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum lindemuthianum, Colletotrichum musae, Colletotrichum spaethanium, Cordana musae,
Corynespora cassiicola, Daktulosphaira vitifoliae, Didymella bryoniae, Elsinoe ampelina, Elsinoe mangiferae, Elsinoe veneta, Erysiphe cichoracearum, Erysiphe necator, Eutypa lata, Fusarium germinareum, Fusarium oxysporum, Fusarium solani,
Ganoderma boninense, Guignardia bidwellii, Gymnoconia peckiana,
Helminthosporium solani, Leptosphaeria coniothyrium, Leptosphaeria maculans,
Leveillula taurica, Macrophomina phaseolina, Microsphaera alni, Monilinia fructicola,
Monilinia vaccinii-corymbosi, Mycosphaerella angulate, Mycosphaerella brassicicola,
Mycosphaerella fragariae, Mycosphaerella fijiensis, Oidopsis taurica, Passalora fulva,
Peronospora sparse, Peronospora farinosa, Phoma exigua, Phomopsis obscurans,
Phomopsis vaccinia, Phomopsis viticola, Phytophthora capsica, Phytophthora erythroseptica, Phytophthora infestans, Phytophthora parasitica, Plasmopara viticola,
Plasmodiophora brassicae, Podosphaera macularis, Polyscytalum pustulans,
Pseudocercospora vitis, Puccinia allii, Puccinia sorghi, Pucciniastrum vaccinia,
Pythium debaryanum, Pythium sulcatum, Pythium ultimum, Ralstonia solanacearum,
Ramularia tulasneii, Rhizoctonia solani, Rhizopus arrhizus, Rhizopus stoloniferz,
Sclerotinia minor, Sclerotinia sclerotiorum, Sclerotium cepivorum, Sclerotium rolfsii, Sclerotinia minor, Sclerotinia sclerotiorum, Septoria apiicola, Septoria lactucae, Septoria lycopersici, Septoria petroelini, Sphaceloma perseae, Sphaerotheca macularis, Spongospora subterrannea, Stemphylium vesicarium, Synchytrium endobioticum, Thielaviopsis basicola, Uncinula necator, Uromyces appendiculatus, Uromyces betae, Verticillium albo-atrum, Verticillium dahliae, Verticillium theobromae, ou uma combinação dos mesmos. O fungo patogênico pode ser o Fusarium oxysporum ou Verticillium dahliae. O fungo patogênico pode ser Botrytis cinerea. O fungo patogênico pode ser Colletotrichum spaethanium. O fungo patogênico pode ser Erysiphe necator. O fungo patogênico pode ser Peronospora farinosa. O fungo patogênico pode ser Podosphaera maculari. O fungo patogênico pode ser Monilinia vaccinii-corymbosi. O fungo patogênico pode ser Puccinia sorghi. O fungo patogênico pode ser um fungo patogênico que causa Oídio. O fungo patogênico pode ser um fungo patogênico que causa Míldio. O fungo patogênico pode ser um fungo patogênico que causa a baga mumificada (mummy berry). O fungo patogênico pode ser um fungo patogênico que causa a ferrugem do milho.
[0114] A planta, flor, semente ou produto da mesma pode ser de uma amêndoa, damasco, maçã, alcachofra, banana, cevada, beterraba, amora, mirtilo, brócolis, couve-de-bruxelas, repolho, cannabis, pimenta, cenoura, aipo, acelga, cereja, frutas cítricas, milho, frutos das curcubitáceas, tâmara, figo, alho, uva, erva, especiarias, couve, alface, óleo de palma, azeitona, cebola, ervilha, pera, pêssego, amendoim, mamão papaia, pastinaca, noz pecan, caqui, ameixa, romã, batata, marmelo, rabanete, framboesa, rosa, arroz, abrunho, sorgo, soja, espinafre, morango, batata-doce, tabaco, tomate, folhas de nabo, nozes e trigo. A planta, semente, flor ou produto da mesma pode ser uma planta ou um produto da mesma pertencente à família Rosaceae. A planta, flor, semente ou produto da mesma da família Rosaceae pode ser do gênero Rubus, como uma framboesa ou amora, Fragaria, como um morango, Pyrus, como uma pera, Cydonia, como um marmelo, Prunus, como uma amêndoa, pêssego, ameixa, damasco, cereja ou abrunho, Rosa, como uma rosa ou Malus, como uma maçã. A planta, semente, flor ou produto da mesma pode ser uma planta ou produto da mesma da família Ericaceae. A planta, semente, flor ou produto da mesma da família Ericaceae pode ser do gênero Vaccinium, como um mirtilo. A planta, semente, flor ou produto da mesma pode ser uma planta ou produto da mesma da família Ericaceae. A planta, semente, flor ou produto da mesma da família Ericaceae pode ser do gênero Vaccinium, como um mirtilo. A planta, semente, flor ou produto da mesma pode ser uma planta ou produto da mesma da família Vitaceae. A planta, semente, flor ou produto da mesma da família Vitaceae pode ser do gênero Vitis, como uma uva.
Métodos de identificação e isolamento da composição de biocontrole.
[0115] Métodos de identificação e/ou seleção para uma composição de biocontrole podem compreender realizar a cultura do pelo menos um microrganismo isoladamente ou com uma pluralidade de outros microrganismos e/ou fungos patogênicos. Por exemplo, o pelo menos um microrganismo pode ser cultivado com um fungo patogênico para identificar a eficácia do pelo menos um microrganismo para inibir o crescimento do fungo patogênico. A eficácia do pelo menos um microrganismo para inibir o crescimento do fungo patogênico pode ser determinada pela observação dos parâmetros de crescimento do fungo patogênico. Por exemplo, a falta de fungo patogênico vivo próximo ao pelo menos um microrganismo em um meio de crescimento sólido ou semissólido pode ser usada para determinar uma alta eficácia da inibição. A densidade óptica de um meio líquido contendo o pelo menos um microrganismo e o fungo patogênico pode ser usada para identificar uma eficácia do pelo menos um microrganismo.
[0116] O pelo menos um microrganismo pode ser identificado por uma variedade de métodos. O pelo menos um microrganismo pode ser submetido a uma reação de sequenciamento. A reação de sequenciamento pode identificar uma sequência de rRNA 16S, rRNA 12S, rRNA 18S, rRNA 28S, rRNA 13S e rRNA 23S, espaçador interno transcrito (ITS), ITS1, ITS2, citocromo oxidase I (COI), citocromo b ou qualquer combinação das mesmas). A reação de sequenciamento pode identificar uma sequência de rRNA 16S, uma sequência de ITS ou uma combinação das mesmas. A reação de sequenciamento pode ser usada para identificar as espécies ou linhagens do pelo menos um microrganismo.
[0117] O pelo menos um microrganismo pode ser afetado por outros microrganismos. Os microrganismos podem se comportar de forma sinérgica quando cultivados juntos, de modo que as propriedades antifúngicas sejam melhoradas quando cultivadas juntas, em comparação com aquelas quando cultivadas separadamente. Por exemplo, o pelo menos um microrganismo pode apresentar maior viabilidade quando cultivado com um outro microrganismo. O pelo menos um microrganismo pode apresentar proliferação aumentada quando cultivado com outro microrganismo. O pelo menos um microrganismo pode usar produtos químicos ou metabólitos produzidos por outro microrganismo. O pelo menos um microrganismo pode interagir diretamente com outro microrganismo. Por exemplo, o pelo menos um microrganismo e outro microrganismo podem formar biofilmes ou uma estrutura multicelular. O pelo menos um microrganismo pode produzir e/ou secretar uma quantidade aumentada do metabólito secundário quando cultivado com outro microrganismo. Por exemplo, o pelo menos um microrganismo pode produzir um metabólito intermediário, que, por sua vez, é processado por outro microrganismo, resultando no metabólito secundário. Os métodos divulgados aqui em outra parte podem ser utilizados para identificar microrganismos que podem se beneficiar da cultura com outro microrganismo, bem como identificar composições de biocontrole compreendendo um primeiro microrganismo e um segundo microrganismo, em que o segundo microrganismo não é idêntico ao primeiro microrganismo.
[0118] Em alguns casos, o pelo menos um microrganismo pode ser afetado pelas condições ambientais. O pelo menos um microrganismo pode crescer ou produzir um metabólito secundário em um pH específico. Por exemplo, o pH no qual o pelo menos um microrganismo é cultivado pode ser um pH de 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 6,2, 6,4, 6,6, 6,8, 7,0, 7,2, 7,4, 7,6, 7,8, 8,0, 9,0, 10.0 ou superior. Por exemplo, o pH no qual o pelo menos um microrganismo é cultivado pode ser um pH de 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 6,2, 6,4, 6,6, 6,8, 7,0, 7,2, 7,4, 7,6, 7,8, 8,0, 9,0, 10.0 ou inferior. O pelo menos um microrganismo pode crescer ou produzir um metabólito secundário na presença de sais. Os sais podem ser sais tamponantes. O pelo menos um microrganismo pode crescer ou produzir um metabólito secundário, na presença de açúcares ou carboidratos. O açúcar ou carboidrato pode ser a glicose ou glicerol.
[0119] As composições de biocontrole podem ser cultivadas usando uma variedade de meios ou substrato. O pelo menos um microrganismo pode ser culturas em uma placa de ágar. O pelo menos um microrganismo pode ser cultivado em um prato de ágar semissólido. O pelo menos um microrganismo pode ser cultivado em um meio líquido.
Seleção de consórcios microbianos
[0120] Métodos para identificar ou selecionar composições de biocontrole compreendendo consórcios microbianos podem ser usados. Por exemplo, os métodos descritos na Publicação de Patente U.S. No. 20180127796 podem ser usados para identificar ou selecionar consórcios de microrganismos. Em alguns casos, uma pluralidade de microrganismos pode ser cultivada em conjunto. Em alguns casos, o método pode compreender diluir uma amostra para formar uma pluralidade de diluições, em que uma diluição na pluralidade de diluições compreende um subconjunto da pluralidade de microrganismos. As diluições podem permitir a geração de uma pluralidade de subconjuntos em que diferentes microrganismos da pluralidade de microrganismos podem interagir. O subconjunto da pluralidade de microrganismos pode ser submetido à cultura de modo que os microrganismos possam proliferar. Os subconjuntos podem ser submetidos a reações de sequenciamento de modo que sequências dos microrganismos possam ser obtidas. A partir da reação de sequenciamento, é possível obter a espécie, cepa ou outras informações taxonômicas. Sequências para identificar um microrganismo específico são discutidas em outras partes deste documento. Os subconjuntos podem ser submetidos a tempos de cultura variados, que podem ser submetidos a reações de sequenciamento em vários momentos para monitorar a presença e/ou abundância relativa de uma espécie particular, cepa ou outra categoria taxonômica. Observando as mudanças na presença e/ou abundância relativa de uma determinada espécie, cepa ou outra categoria taxonômica, a interação entre múltiplos microrganismos pode ser determinada. Por exemplo, um primeiro microrganismo pode ter uma abundância relativa mais alta quando cultivado com um segundo microrganismo em comparação a uma abundância relativa quando não cultivado com o segundo microrganismo.
Neste exemplo, o primeiro microrganismo pode interagir com o segundo microrganismo, de modo que a viabilidade geral do primeiro microrganismo seja aumentada. A pluralidade de diluições pode ser cada uma submetida a reações de sequenciamento, de modo que os microrganismos de cada diluição possam ser identificados e possam permitir uma abordagem multiplexada e de alto rendimento.
[0121] A pluralidade de microrganismos pode ser diluída tal que um subconjunto da pluralidade de microrganismos é cultivado em conjunto. Em alguns casos, a diluição da pluralidade de microrganismos em série para formar uma pluralidade de diluições em série da amostra pode ser realizada. Os microrganismos na pluralidade de diluições em série da amostra podem ser devidos a dispersão ou ao acaso. A pluralidade de diluições em série pode ser diferente em diferentes implementações. Em algumas formas de realização, a pluralidade de diluições em série da amostra pode compreender, ou ser cerca de, 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000,
1:100000 1:1000000, 1:10000000, 1:100000000, 1:1000000000 ou um número ou intervalo entre dois desses valores, diluições da amostra. Em algumas formas de realização, a pluralidade de diluições em série da amostra pode compreender pelo menos ou no máximo 1:10, 1:100, 1:1000, 1:1000, 1:10000, 1:100000, 1:1000000, 1:10000000, 1:100000000 ou 1:1000000000 diluições da amostra. Por exemplo, uma amostra pode ser diluída 10 vezes em uma diluição de 1:10 da amostra usando, por exemplo, um tampão. A diluição de 1:10 da amostra pode ser diluída 10 vezes em uma diluição de 1:100 da amostra. A pluralidade de diluições em série pode compreender a diluição de 1:10 da amostra, diluição de 1:100 da amostra e outras diluições da amostra preparadas de maneira semelhante. Como outro exemplo, uma amostra pode ser diluída 10 vezes em uma diluição de 1:10 da amostra usando, por exemplo, um tampão. A amostra pode ser diluída 100 vezes em uma diluição de 1:100 da amostra. A pluralidade de diluições em série pode compreender a diluição 1:10 da amostra, diluição 1:100 da amostra e outras diluições da amostra preparadas de maneira semelhante.
[0122] Em algumas formas de realização, a cultura da pluralidade de diluições da amostra na primeira condição de cultura compreende a cultura da pluralidade de diluições da amostra na primeira condição de cultura por uma pluralidade de durações de tempo, que podem variar desde apenas um minuto até um ano.
[0123] A pluralidade de microrganismos pode ser submetida a uma reação de sequenciamento e microrganismos específicos podem ser identificados. Após a cultura dos subconjuntos por períodos de tempo, a representação percentual geral de cada microrganismo no subconjunto pode mudar do percentual no início da cultura.
Por exemplo, microrganismos que permanecem viáveis entre outros microrganismos após diferentes períodos de cultura podem indicar uma relação ou interação simbiótica entre os microrganismos da cultura e esses microrganismos podem formar um consórcio microbiano. Os consórcios microbianos podem ser testados quanto à eficácia de inibir o crescimento de um fungo patogênico de uma maneira semelhante aos métodos utilizados para identificar a eficácia do pelo menos um microrganismo, como descrito em outro local neste documento.
[0124] O isolamento de microrganismos específicos pode ser realizado também para uso em métodos ou composições descritas em outra parte neste documento. Por exemplo, a pluralidade de microrganismos pode ser submetida a diluições em série, de modo que uma colônia de um microrganismo em particular possa ser isolada. As diluições em série podem ser cultivadas em meio líquido, semissólido ou sólido. Em um meio semissólido ou sólido, como uma placa de ágar, a pluralidade de microrganismos pode formar colônias. As colônias podem ser bem dispersas para que uma colônia possa conter uma única cepa ou espécie de microrganismo. O isolamento de um microrganismo específico pode ser realizado também utilizando-se métodos de separação física, como uma centrifugação. Por exemplo, uma pluralidade de microrganismos pode ser cultivada em meio líquido e centrifugada para isolar os microrganismos da cultura. Um microrganismo em particular pode ser isolado também utilizando-se uma determinada condição de crescimento. Por exemplo, um microrganismo específico pode apresentar viabilidade mais alta em comparação a outro microrganismo quando cultivado em condições anaeróbicas. Um microrganismo específico pode apresentar uma viabilidade alta em comparação com outro microrganismo quando cultivado em um meio rico em um nutriente específico.
Métodos para prevenção ou redução do apodrecimento e deterioração de alimentos Tratamento da planta, da semente, da flor ou do produto da mesma com a composição de biocontrole antes da colheita
[0125] Os métodos para prevenção ou redução do crescimento de um fungo patogênico em uma planta, uma semente ou um produto da mesma pode compreender aplicar à planta, à semente, flor ou ao produto, antes de ter sido colhida, uma composição de biocontrole compreendendo pelo menos um microrganismo descrito aqui ou um ou mais metabólitos secundários do mesmo e um veículo. A colheita do produto pode se referir à remoção da parte comestível da planta do restante da planta ou pode se referir à remoção de toda a planta com a remoção subsequente da parte comestível posteriormente.
[0126] A aplicação da composição de biocontrole antes da colheita pode compreender espanar, injetar, pulverizar ou escovar a planta, a semente ou o produto da mesma com a composição de biocontrole. A aplicação da composição de biocontrole pode compreender adicionar a composição de biocontrole a uma linha de gotejamento, sistema de irrigação, sistema de quimigação, pulverização ou imersão.
Em alguns casos, a composição de biocontrole é aplicada à raiz da planta, à semente da planta, à folhagem da planta, ao solo que rodeia a planta ou à parte comestível da planta, que é referido aqui também como o produto da planta.
[0127] O método pode compreender ainda aplicar à planta um fertilizante, um herbicida, um pesticida, outros biocontroles ou uma combinação dos mesmos. Em alguns casos, o fertilizante, herbicida, pesticida, outros biocontroles ou combinação dos mesmos é aplicado antes, depois ou simultaneamente com a composição de biocontrole.
[0128] O método para a prevenção ou redução do crescimento de um fungo patogênico pode compreender aplicar à semente uma composição de biocontrole compreendendo pelo menos um microrganismo descrito aqui ou um metabólito secundário do mesmo e um veículo. A aplicação da composição de biocontrole às sementes da planta pode ocorrer antes do plantio, durante o plantio ou após o plantio e antes da germinação. Por exemplo, a composição de biocontrole pode ser aplicada à superfície da semente antes do plantio. Em alguns casos, um tratamento das sementes que ocorre antes do plantio pode compreender a adição de um pigmento ou corante, um veículo, um aglutinante, um adesivo, um agente antiespuma, um lubrificante, um nutriente ou uma combinação dos mesmos à composição de biocontrole.
[0129] O método para prevenção ou redução do crescimento de um fungo patogênico pode compreender aplicar ao solo uma composição de biocontrole compreendendo pelo menos um microrganismo descrito aqui ou um metabólito secundário do mesmo e um veículo. A composição de biocontrole pode ser aplicada ao solo antes, depois ou durante o plantio no solo de uma semente ou antes da transferência da planta para um novo local. Em um exemplo, um corretivo do solo é adicionado ao solo antes do plantio, em que o corretivo do solo resulta em um crescimento melhor de uma planta e em que o corretivo do solo compreende a composição de biocontrole. Em alguns casos, a alteração do solo compreende ainda um fertilizante.
[0130] O método para prevenção ou redução do crescimento de um fungo patogênico pode compreender aplicar à raiz uma composição de biocontrole compreendendo pelo menos um microrganismo descrito aqui ou um metabólito secundário do mesmo e um veículo. A composição de biocontrole pode ser aplicada diretamente à raiz. Um exemplo de uma aplicação direta à raiz da planta pode compreender imergir a raiz em uma solução contendo a composição de biocontrole.
A composição de biocontrole pode ser aplicada indiretamente à raiz. Um exemplo de uma aplicação indireta à raiz da planta pode compreender pulverizar a composição de biocontrole perto da base da planta, em que a composição de biocontrole permeia o solo para alcançar as raízes.
Tratamento do produto da mesma com a composição de biocontrole após a colheita
[0131] Os métodos para prevenção ou redução do crescimento de um fungo patogênico em um produto podem compreender aplicar ao produto, antes ou depois de ter sido colhido, uma composição de biocontrole compreendendo pelo menos um microrganismo descrito aqui ou um metabólito secundário do mesmo e um veículo.
[0132] A aplicação da composição de biocontrole antes ou após a colheita pode compreender espanar, imergir, rolar, injetar, esfregar, pulverizar ou escovar os produtos da planta com a composição de biocontrole. A composição de biocontrole pode ser aplicada ao produto imediatamente antes da colheita ou imediatamente após a colheita ou dentro de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias ou 1 semana após a colheita. Em alguns casos, a composição de biocontrole é aplicada pelo responsável que realiza a colheita, em um processo que trata o produto imediatamente antes da colheita ou após a colheita, pelo responsável que embala o produto, pelo responsável que transporta o produto ou pelo responsável que exibe comercialmente o produto para venda ou um consumidor.
[0133] A aplicação da composição de biocontrole após a colheita pode compreender ainda a integração da composição de biocontrole em um processo para tratar a produção pós-colheita. O produto pode ser tratado imediatamente após a colheita, por exemplo, em uma ou várias lavagens. As uma ou várias lavagens podem compreender o uso de água que recebeu alvejante (cloro) e/ou bicarbonato de sódio ou água ozonizada. O produto pode ser tratado também com óleos, resinas ou matrizes estruturais ou químicas. A composição de biocontrole pode ser misturada com os óleos, resinas ou matrizes estruturais ou químicas para aplicação. O produto pode ser tratado antes ou após a secagem do produto. Por exemplo, a composição de biocontrole pode ser adicionada a uma cera, goma arábica ou outro revestimento usado para revestir o produto. A composição de biocontrole pode ser adicionada em qualquer ponto do processo, incluída em uma das lavagens, como parte de uma nova lavagem ou misturando-a com a cera, goma arábica ou outro revestimento do produto.
Tratamento de um material de embalagem com a composição de biocontrole
[0134] Os métodos para a prevenção ou redução do crescimento de um fungo patogênico em um produto podem compreender aplicar a um material de embalagem usado para transportar ou armazenar o produto uma composição de biocontrole compreendendo pelo menos um microrganismo descrito aqui ou um metabólito secundário do mesmo e um veículo.
[0135] O material de embalagem pode compreender: tereftalato de polietileno (PET), fibra moldada, poliestireno orientado (OPS), espuma de poliestireno (PS), polipropileno (PP) ou uma combinação dos mesmos. O material da embalagem pode incluir papelão, cartão sólido, isopor ou polpa moldada. O material de embalagem pode compreender um substrato, como a celulose. O material de embalagem pode ser uma embalagem de fluxo horizontal (HFFS), uma embalagem de fluxo vertical (VFFS), uma embalagem termoformada, uma bandeja selada ou um filme extensível.
A embalagem termoformada pode ser uma embalagem do tipo clam shell. O material de embalagem pode ser uma caixa (punnet), uma bandeja, uma cesta ou um do tipo clam shell.
[0136] O material de embalagem tratado com a composição de biocontrole pode ser uma inserção. A inserção pode ser uma almofada, uma folha ou uma cobertura. A inserção pode ser colocada dentro ou sobre a caixa, a bandeja, a cesta ou o clam shell. A inserção pode compreender celulose ou um derivado de celulose.
A inserção pode compreender pelo menos uma camada de um polímero microporoso, como polietileno ou polipropileno e pelo menos uma camada de um polímero superabsorvente. Em alguns casos, a inserção compreende uma camada externa e uma camada interna. A camada interna pode ser uma camada absorvente de água. A camada interior pode compreender uma carboximetilcelulose, éter de celulose, polivinilpirrolidona, amido, dextrose, gelatina, pectina ou uma combinação dos mesmos. A camada externa pode ser uma camada permeável à água.
[0137] A aplicação da composição de biocontrole ao material de embalagem pode compreender lavar, pulverizar ou impregnar o material de embalagem com a composição de biocontrole.
[0138] A terminologia usada neste documento tem o objetivo de descrever apenas casos particulares e não se destina a ser limitativa. Os termos abaixo são discutidos para ilustrar significados dos termos usados neste relatório descritivo, além do entendimento desses termos pelos técnicos no assunto. Conforme usado neste documento e nas reivindicações anexas, as formas singulares "a/o" e "um/a" incluem os referentes plurais, a menos que o contexto indique claramente o contrário.
Observa-se ainda que as reivindicações podem ser elaboradas de modo a excluir qualquer elemento opcional. Como tal, esta declaração pretende servir como base antecedente para o uso das terminologias exclusivas como "exclusivamente", "somente" e similares em conexão com a recitação dos elementos de reivindicação ou uso de uma limitação "negativa".
[0139] Certos intervalos são apresentados aqui com os valores numéricos sendo precedidos pelo termo "cerca de". O termo "cerca de" é usado aqui para fornecer suporte literal para o número exato que o antecede, bem como um número que está próximo a ou é aproximado ao número que o termo precede. Ao determinar se um número está próximo a ou é aproximado a um número citado especificamente, o número não citado próximo ou aproximado pode ser um número que, no contexto no qual é apresentado, fornece o equivalente substancial do número recitado especificamente. Quando um intervalo de valores é apresentado, entende-se que cada valor intermediário, até o décimo da unidade do limite inferior, a menos que o contexto indique claramente o contrário, entre o limite superior e inferior desse intervalo e qualquer outro valor declarado ou intermediário nesse intervalo declarado, está contemplado pelos métodos e composições descritos aqui. Os limites superior e inferior desses intervalos menores podem ser incluídos independentemente nos intervalos menores e também estão contemplados nos métodos e composições descritos aqui, sujeitos a qualquer limite especificamente excluído no intervalo indicado. Onde o intervalo indicado inclui um ou ambos os limites, os intervalos excluindo um ou ambos os limites incluídos também estão incluídos nos métodos e composições descritos aqui.
[0140] Salvo definição em contrário, todos os termos técnicos e científicos aqui utilizados têm o mesmo significado que o comumente entendido por um técnico no assunto ao qual os métodos e composições descritos aqui pertencem. Embora quaisquer métodos e materiais semelhantes ou equivalentes aos descritos aqui também possam ser utilizados na prática ou no teste dos métodos e composições descritos aqui, métodos e materiais ilustrativos representativos são descritos nesse momento.
EXEMPLOS Exemplo 1: Seleção de microrganismos quanto à atividade antifúngica
[0141] Os microrganismos foram selecionados quanto à sua capacidade de impedir o crescimento das pragas fúngicas Verticillium dahliae e Fusarium oxysporum.
Catorze candidatos foram identificados como sendo ativos em uma primeira linha de triagem, que serviu para formar zonas de clareamento nas camadas de fungos (por exemplo, vide FIG. 3 que diz respeito à identificação da inibição de Fusarium oxysporum por Hanseniaspora uvarum). Esses quatorze candidatos foram examinados em um ensaio de segunda linha, projetado para simular o ambiente estruturado do solo, utilizando o ágar semissólido. Neste ensaio, o crescimento de fungos sem tratamento foi definido como 100% e a redução do crescimento foi determinada em relação aos fungos não tratados. O produto comercialmente disponível Serenade, contendo um ingrediente ativo de uma cepa QST 713 de Bacillus subtilis, foi usado como controle e reduziu o crescimento de F. oxysporum em ~ 25% e V. dahliae em > 99%. Desses candidatos, 10 reduziram o crescimento de F.
oxysporum mais do que com Serenade®; 11 reduziram o crescimento de V. dahliae em um nível praticamente igual ao do Serenade (FIG. 1).
[0142] As cepas candidatas testadas são encontradas na Tabela 3, junto com a espécie ou gênero microbiano mais próximo identificado.
TABELA 3. Cepas microbianas candidatas testadas quanto à atividade antifúngica em comparação com Serenade® Identificador da cepa Espécie ou gênero microbiano SEQ ID NO. 16S ou ITS microbiana putativo da FIG. 1 1 74.2 Hanseniaspora uvarum SEQ ID NO: 18 ITS 2 253 Gluconacetobacter liquefaciens SEQ ID NO: 4 16S Cyberlindnera mrakii ou 3 1C SEQ ID NO: 17 ITS Cyberlindnera saturnus 4 41A.2 Paraburkholderia or Burkholderia SEQ ID NO: 9 16S 5 28B Bacillus amyloliquefaciens SEQ ID NO: 1 16S 6 74.3 Torulaspora delbrueckii SEQ ID NO: 19 ITS 7 233B Gluconacetobacter liquefaciens SEQ ID NO: 11 16S 8 41A Paraburkholderia ou Burkholderia SEQ ID NO: 7 16S 9 B31 Pseudomonas lini SEQ ID NO: 10 16S 10 254A Gluconacetobacter liquefaciens SEQ ID NO: 5 16S 11 234B Gluconacetobacter liquefaciens SEQ ID NO: 12 16S 12 258B Gluconacetobacter liquefaciens SEQ ID NO: 16 16S Cutaneotrichosporon 13 125B SEQ ID NO: 20 ITS moniliiforme 14 239B Gluconacetobacter liquefaciens SEQ ID NO: 13 16S Exemplo 2: Atividade antifúngica de um sobrenadante de Bacillus amyloliquefaciens (cepa 28B; BC8) em framboesas
[0143] A atividade antifúngica do sobrenadante de uma cultura de uma cepa isolada de Bacillus amyloliquefaciens (cepa 28B; BC8) contra Botrytis cinerea em framboesas foi determinada. Após 120 horas, as framboesas às quais o sobrenadante da cepa de Bacillus amyloliquefaciens foi aplicado mostraram crescimento fúngico semelhante ao das framboesas controle negativo (que não foram infectadas com
Botrytis cinerea), com o crescimento fúngico cobrindo menos do que 5% da área de superfície das framboesas. Em contrapartida, as framboesas controle positivo (que foram infectadas com Botrytis cinerea) mostraram cerca de 90% de área de superfície coberta com crescimento fúngico após 120 horas (FIG. 4; FIG. 5A-5C).
Exemplo 3: Avaliação da eficácia de BC8 contra a queima das flores induzida por Botrytis cinerea e Colletotrichum spaethanium em plantações de mirtilo.
[0144] A eficácia de BC8 contra a queima das flores induzida por Botrytis cinerea e Colletotrichum spaethanium em mirtilo foi avaliada. Os arbustos de mirtilo foram tratados com BC8 ou tratamentos de controle. Como tratamentos de controle, os arbustos foram deixados sem tratamento ou tratados com Lifegard (Certis; ingrediente ativo: Bacillus mycoides), uma combinação de Stargus (Marrone; ingrediente ativo: Bacillus amyloliquefaciens cepa F727) e Nufilm (Fertrell; mistura de polímeros de terpenos e emulsificadores) ou uma aplicação sequencial de Bravo Weatherstik (Syngenta; ingrediente ativo: Clorotalonil (tetracloroisoftalonitrila) 54%), Captevate (Arysta; ingrediente ativo: fenhexamida, captana) e Pristine (BASF; ingrediente ativo: piraclostrobina, boscalida). Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. Os produtos de tratamento foram misturados em um volume de água de 75 galões (a 0,9 L/tratamento ou de acordo com a especificação do rótulo) e aplicados usando um dispositivo de pulverização nas plantas em intervalos regulares. Os arbustos foram tratados nos diferentes estádios de crescimento, incluindo a ponta verde precoce (EGT), ponta verde tardia (LGT), botão rosa (PB), floração (BLM), queda de pétalas (PF), fruta verde (GRF), 10% fruta azul (BLF). Os arbustos foram cultivados e mantidos de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0145] A infecção por Botrytis cinerea foi avaliada pela contagem do número de queima das flores por arbusto de mirtilo. Quatro replicatas por tratamento foram realizadas em um formato de desenho de parcelas aleatórias.
[0146] Os resultados, expressos como a incidência de queima das flores induzida por B. cinerea por arbusto são mostrados na FIG. 7. O BC8 foi eficaz na redução da incidência da queima das flores em cerca de 55% em comparação com os controles não tratados.
[0147] Os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 4: Avaliação da eficácia de BC8 contra o apodrecimento pós- colheita causado por Botrytis cinerea e Colletotrichum spaethanium em plantações de mirtilo.
[0148] A eficácia do BC8 contra o apodrecimento pós-colheita causado pela infecção por Botrytis cinerea ou Colletotrichum sp. em plantações de mirtilo foi avaliada. Os arbustos de mirtilo foram tratados com BC8 ou tratamentos de controle antes da colheita e os mirtilos obtidos a partir deles foram observados após a colheita.
Como tratamentos de controle, os arbustos foram deixados sem tratamento ou tratados com Lifegard (Certis), uma combinação de Stargus e Nufilm (Fertrell) ou um tratamento sequencial de Bravo Weatherstik (Syngenta), Captevate (Aresta) e Pristine (Bayer).
[0149] 50 bagas foram colhidas e avaliadas quanto ao apodrecimento pós- colheita causado por B. cinerea e Colletrotrichum sp. após colocação em câmaras úmidas em temperatura ambiente por 12 a 14 dias. Os resultados expressos em % de frutas infectadas são mostrados na FIG. 8. As bagas tratadas na colheita tiveram uma incidência de 10% de bagas apodrecidas, enquanto as bagas não tratadas na colheita apresentaram uma incidência de 85% de apodrecimento (FIG. 8). O BC8 foi tão eficaz quanto o padrão comercial, uma combinação de Bravo Weatherstik (Syngenta),
Captevate (Aresta) e Pristine (Bayer), na redução do apodrecimento pós-colheita em plantações de mirtilo (FIG. 8).
[0150] Os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 5: Avaliação da eficácia de BC16 contra a queima das flores induzida por Botrytis cinerea e Colletotrichum spaethanium em plantações de mirtilo.
[0151] O BC16 foi avaliado quanto à sua eficácia contra a queima das flores induzida por Botrytis cinerea e Colletotrichum spaethanium em mirtilo. Os arbustos de mirtilo foram tratados com BC16 ou um tratamento controle. Como tratamentos de controle, os arbustos foram deixados sem tratamento ou tratados com Lifegard (Certis), uma combinação de Stargus e Nufilm (Fertrell) ou uma aplicação sequencial de Bravo Weatherstik (Syngenta), Captevate (Arysta) e Pristine (Bayer). Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. Os produtos de tratamento foram misturados em um volume de água de 75 galões (a 0,9 L/tratamento ou de acordo com as especificações do fabricante) e aplicados usando um dispositivo de pulverização nas plantas em intervalos regulares. Os arbustos foram tratados nos diferentes estádios de crescimento, incluindo a ponta verde precoce (EGT), ponta verde tardia (LGT), botão rosa (PB), floração (BLM), queda de pétalas (PF), fruta verde (GRF), 10% fruta azul (BLF). Os arbustos foram cultivados e mantidos de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0152] A incidência de infecção por Botrytis cinerea e Colletotrichum spaethanium foi avaliada pela contagem do número de queima das flores por arbusto de mirtilo. Quatro replicatas por tratamento foram realizadas em um formato de desenho de parcelas aleatórias. Os resultados, expressos como a incidência de queima das flores por arbusto são mostrados na FIG. 9. O BC16 foi eficaz na redução da incidência da queima das flores em cerca de 52% em comparação com os controles não tratados.
[0153] Os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 6: Avaliação da eficácia de BC16 contra o apodrecimento pós- colheita causado por Botrytis cinerea e Colletotrichum spaethanium em plantações de mirtilo.
[0154] A eficácia de BC16 contra o apodrecimento pós-colheita causado pela infecção por Botrytis cinerea ou Colletotrichum sp. em plantações de mirtilo foi avaliada. Os arbustos de mirtilo foram tratados com BC16 ou um tratamento controle antes da colheita e os mirtilos obtidos a partir deles foram observados após a colheita.
Como tratamentos de controle, as bagas foram deixadas sem tratamento ou tratadas com Lifegard (Certis), uma combinação de Stargus e Nufilm (Fertrell) ou um tratamento sequencial de Bravo Weatherstik (Syngenta), Captevate (Aresta) e Pristine (Bayer). 50 bagas foram colhidas e avaliadas quanto ao apodrecimento pós-colheita causado por B. cinerea e Colletrotrichum sp. após colocação em câmaras úmidas em temperatura ambiente por 12 a 14 dias. Os resultados expressos em % de frutas infectadas são mostrados na FIG. 10. Os arbustos tratados com BC16 na colheita 1 apresentaram uma incidência de 5% de bagas apodrecidas (FIG. 10), enquanto as bagas não tratadas na colheita 1 apresentaram 85% de apodrecimento na colheita 1 (FIG. 10). O BC16 foi tão eficaz quanto Bravo Weatherstik (Syngenta), Captevate (Aresta) e Pristine (Bayer), o padrão comercial, na redução do apodrecimento pós- colheita em plantações de mirtilo (FIG. 10).
[0155] Os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 7: Avaliação da eficácia de BC17 contra a queima das flores induzida por Botrytis cinerea e Colletotrichum spaethanium em plantações de mirtilo.
[0156] O BC17 foi avaliado quanto à sua eficácia contra a queima das flores induzida por Botrytis cinerea e Colletotrichum spaethanium em mirtilo. Os arbustos de mirtilo foram tratados com BC17 ou produto controle. Como tratamentos de controle, os arbustos foram deixados sem tratamento ou tratados com Lifegard (Certis), uma combinação de Stargus e Nufilm (Fertrell) ou um tratamento sequencial de Bravo Weatherstik (Syngenta), Captevate (Arysta) e Pristine (Bayer). Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. Os produtos de tratamento foram misturados em um volume de água de 75 galões a 0,9 L/tratamento ou de acordo com as especificações do fabricante e aplicados usando um dispositivo de pulverização nas plantas em intervalos regulares.
Os arbustos foram tratados nos diferentes estádios de crescimento, incluindo a ponta verde precoce (EGT), ponta verde tardia (LGT), botão rosa (PB), floração (BLM), queda de pétalas (PF), fruta verde (GRF), 10% fruta azul (BLF). Os arbustos foram cultivados e mantidos de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0157] A infecção por Botrytis cinerea foi avaliada pela contagem do número de queima das flores por arbusto de mirtilo. Quatro replicatas por tratamento foram realizadas em um formato de desenho de parcelas aleatórias.
[0158] Os resultados, expressos como a incidência de queima das flores por arbusto são mostrados na FIG. 11. O BC17 foi eficaz na redução da incidência da queima das flores em cerca de 80% em comparação com os controles não tratados.
[0159] Os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 8: Avaliação da eficácia de BC17 contra o apodrecimento pós- colheita causado por Botrytis cinerea e Colletotrichum spaethanium em plantações de mirtilo.
[0160] O BC17 foi avaliado quanto à sua eficácia contra o apodrecimento pós- colheita causado pela infecção por Botrytis cinerea ou Colletotrichum sp. em plantações de mirtilo. Os arbustos de mirtilo foram tratados com BC17 ou um tratamento controle antes da colheita e os mirtilos obtidos a partir deles foram observados após a colheita. Como tratamentos de controle, as bagas foram deixadas sem tratamento ou tratadas com Lifegard (Certis), uma combinação de Stargus e Nufilm (Fertrell) ou um tratamento sequencial de Bravo Weatherstik (Syngenta), Captevate (Aresta) e Pristine (Bayer). 50 bagas foram colhidas e avaliadas quanto ao apodrecimento pós-colheita causado por B. cinerea e Colletrotrichum sp. após colocação em câmaras úmidas em temperatura ambiente por 12 a 14 dias.
[0161] Os resultados expressos em % de frutas infectadas são mostrados na FIG. 12. Os arbustos tratados com BC17 apresentaram uma incidência de 7% de bagas apodrecidas (FIG. 12), enquanto as bagas não tratadas apresentaram 85% de apodrecimento (FIG. 12). O BC17 foi tão eficaz quanto Bravo Weatherstik (Syngenta), Captevate (Aresta) e Pristine (Bayer), o padrão comercial, na redução do apodrecimento pós-colheita em plantações de mirtilo (FIG. 12).
[0162] Os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 9: Avaliação da eficácia de BC16 contra a mumificação das bagas induzida por Monilinia vaccinii-corymbosi em plantações de mirtilo.
[0163] O BC16 foi avaliado quanto à sua eficácia contra a mumificação das bagas induzida por Monilinia vaccinii-corymbosi em plantações de mirtilo. Como tratamentos de controle, os arbustos foram deixados sem tratamento ou tratados com uma combinação de Bravo Weatherstik (Syngenta), Indar 2F (Corteva Agriscience; ingrediente ativo: fenbuconazol) e Pristine (Bayer). Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. Os produtos de tratamento foram misturados em um volume de água de 75 galões a 0,9 L/tratamento ou de acordo com as especificações do fabricante e aplicados usando um dispositivo de pulverização nas plantas em intervalos regulares, por semana, aproximadamente. Os arbustos foram tratados nos diferentes estádios de crescimento, incluindo a ponta verde precoce (EGT), ponta verde tardia (LGT), botão rosa (PB), floração (BLM), queda de pétalas (PF), fruta verde (GRF), 10% fruta azul (BLF). Os arbustos foram cultivados e mantidos de acordo com a prática de cultivo padrão. Quatro replicatas por tratamento foram realizadas em um formato de desenho de parcelas aleatórias. A infecção foi avaliada antes da produção das frutas e após a produção das bagas.
[0164] A incidência da doença de mumificação das bagas devido à infecção por Monilinia vacinii-corymbosi foi avaliada pela presença de brotos de mirtilo afetados pela praga, comumente referidos como ataques. Os resultados, expressos como a incidência de ataques induzidos por M.vaccinii-corymbosi (por arbusto) são mostrados na FIG. 13A. Em comparação com o controle não tratado, BC16 foi eficaz na redução da incidência da queima das flores em cerca de 52%.
[0165] A incidência também foi avaliada pelo fenótipo dos frutos mumificados, caracterizados pelo endurecimento e encolhimento das bagas infectadas. Mirtilos que receberam BC16 foram avaliados quanto à presença de frutos mumificados sete dias após a plantação atingir o estágio de frutos verdes. Os resultados, expressos como incidência de frutos mumificados, são mostrados na FIG. 13B. O BC16 foi eficaz em reduzir o número de frutos mumificados em cerca de 59%, em comparação com o controle não tratado.
[0166] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 10: Avaliação da eficácia de BC17 contra a mumificação das bagas induzida por Monilinia vaccinii-corymbosi em plantações de mirtilo.
[0167] O BC17 foi avaliado quanto à sua eficácia contra a mumificação das bagas induzida por Monilinia vaccinii-corymbosi em plantações de mirtilo. Os arbustos foram tratados com BC17 ou um tratamento controle. Como tratamentos de controle, os arbustos foram deixados sem tratamento ou tratados com uma combinação de Bravo Weatherstik (Syngenta), Indar 2F (Corteva Agriscience) e Pristine (BASF).
Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. Os produtos de tratamento foram misturados em um volume de água de 75 galões a 0,9 L/tratamento ou de acordo com as especificações do fabricante e aplicados usando um dispositivo de pulverização nas plantas em intervalos regulares. Os arbustos foram tratados nos diferentes estádios de crescimento, incluindo a ponta verde precoce (EGT), ponta verde tardia (LGT), botão rosa (PB), floração (BLM), queda de pétalas (PF), fruta verde (GRF), 10% fruta azul (BLF). Os arbustos foram cultivados e mantidos de acordo com a prática de cultivo padrão. Quatro replicatas por tratamento foram realizadas em um formato de desenho de parcelas aleatórias. A infecção foi avaliada antes da produção das frutas e após a produção das bagas.
[0168] A doença de mumificação das bagas devido à infecção por Monilinia vacinii-corymbosi foi avaliada pela presença de brotos de mirtilo afetados pela praga, comumente referidos como ataques. Os resultados, expressos como a incidência de ataques induzidos por M.vaccinii-corymbosi por arbusto são mostrados na FIG. 14A.
BC17 foi eficaz na redução da incidência da queima das flores em cerca de 75% em comparação com os controles não tratados.
[0169] A incidência da doença também foi avaliada pelo fenótipo dos frutos mumificados, caracterizados pelo endurecimento e encolhimento das bagas infectadas. Mirtilos que receberam BC17 foram avaliados quanto à presença de frutos mumificados sete dias após a plantação atingir o estágio de frutos verdes. Os resultados, expressos como incidência de frutos mumificados, são mostrados na FIG.
14B. O BC17 foi eficaz em reduzir o número de frutos mumificados em cerca de 80%, respectivamente, em comparação com o controle não tratado.
[0170] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 11: Avaliação da eficácia de BC8 contra o fungo patogênico do milho Puccinia sorghi.
[0171] O BC8 foi avaliado quanto à sua eficácia contra a ferrugem do milho causada pelo fungo patogênico Puccinia sorghi em plantações de milho. O tratamento com BC8 consistiu em três aplicações na razão de 40 qt/acre em intervalos de 7-10 dias. Duas fileiras, cada uma com 20 pés de comprimento, foram tratadas com BC8, sendo uma fileira preservada como tampão entre as parcelas de tratamento. Quatro replicatas foram realizadas em cada protocolo de tratamento.
[0172] Como tratamentos de controle, as fileiras foram deixadas sem tratamento ou tratadas com Daconil SDG (Syngenta; ingrediente ativo: clorotalonil).
Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. Os arbustos foram cultivados e mantidos de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0173] Os produtos de tratamento foram misturados em um volume de água de 20 galões/acre e aplicados usando um pulverizador costal (lança de 7,5 pés com bicos de pulverização plana com 28 psi) às plantas em intervalos regulares. As plantações foram tratadas no início do período convencional (final de junho) ou no primeiro sinal de doença (o que ocorreu primeiro).
[0174] O BC8 foi eficaz na inibição da ferrugem e dos danos causados pela doença no milho quando comparada às parcelas não tratadas. Observou-se que o dano médio pela doença em parcelas tratadas com BC8, 4 dias após o último tratamento, foi de cerca de 8,8% em comparação com as parcelas não tratadas, onde se observou que o dano pela doença foi de cerca de 20% (FIG. 15). O BC8 foi mais eficaz do que o tratamento comercial na inibição dos danos causados pela ferrugem do milho em plantações de milho (FIG. 15).
[0175] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 12: Avaliação da eficácia de BC16 contra o fungo patogênico do milho Puccinia sorghi
[0176] O BC16 foi avaliado quanto à sua eficácia contra a ferrugem do milho causada pelo fungo patogênico Puccinia sorghi em plantações de milho. O tratamento com BC16 consistiu em três aplicações na razão de 20 qt/acre ou 40 qt/acre em intervalos de 7-10 dias. Duas fileiras, cada uma com 20 pés de comprimento, foram tratadas com BC16, sendo uma fileira preservada como tampão entre as parcelas de tratamento. Quatro replicatas foram realizadas em cada protocolo de tratamento.
[0177] Como tratamentos de controle, as fileiras foram deixadas sem tratamento ou tratadas com Daconil SDG (Syngenta). Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. A plantação de milho foi cultivada e mantida de acordo com a prática de cultivo padrão. Os produtos de tratamento foram misturados em um volume de água de 20 galões/acre e aplicados usando um pulverizador costal (lança de 7,5 pés com bicos de pulverização plana com 28 psi) às plantas em intervalos regulares. As plantações foram tratadas no início do período convencional (final de junho) ou no primeiro sinal de doença (o que ocorreu primeiro).
[0178] O BC16 foi eficaz na inibição da ferrugem e dos danos causados pela doença no milho quando comparada às parcelas não tratadas. Observou-se que o dano médio pela doença em parcelas tratadas com BC16, a 20 qt/acre, 4 dias após o último tratamento, foi de cerca de 10% em comparação com as parcelas não tratadas, onde se observou que o dano pela doença foi de cerca de 20% (FIG. 16A). Observou- se que o dano médio pela doença em parcelas tratadas com BC16, a 20 qt/acre, 4 dias após o último tratamento, foi de cerca de 5% em comparação com as parcelas não tratadas, onde se observou que o dano pela doença foi de cerca de 20% (FIG.
16A). O BC16 foi mais eficaz do que o tratamento padrão comercial na inibição dos danos causados pela ferrugem do milho em plantações de milho (FIG. 16A).
[0179] O índice de gravidade da doença foi medido após três aplicações. Em comparação com as parcelas não tratadas e parcelas tratadas com padrão comercial, as parcelas tratadas com BC16 a 20 qt/acre e a 40 qt/acre apresentaram redução da gravidade da doença (FIG. 16B).
[0180] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 13: Avaliação da eficácia de BC17 contra o fungo patogênico do milho Puccinia sorghi.
[0181] O BC17 foi avaliado quanto à sua eficácia contra a ferrugem do milho causada pelo fungo patogênico Puccinia sorghi em plantações de milho. O tratamento com BC17 consistiu em três aplicações na razão de 20 qt/acre em intervalos de 7-10 dias. Duas fileiras, cada uma com 20 pés de comprimento, foram tratadas com BC17, sendo uma fileira preservada como tampão entre as parcelas de tratamento. Quatro replicatas foram realizadas em cada protocolo de tratamento.
[0182] Como tratamentos de controle, os arbustos foram deixados sem tratamento ou tratados com Daconil SDG (Syngenta). Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. Os arbustos foram cultivados e mantidos de acordo com a prática de cultivo padrão. Os produtos de tratamento foram misturados em um volume de água de 20 galões/acre e aplicados usando um pulverizador costal (lança de 7,5 pés com bicos de pulverização plana com 28 psi) às plantas em intervalos regulares. As plantações foram tratadas no início do período convencional (final de junho) ou no primeiro sinal de doença (o que ocorreu primeiro).
[0183] O BC17 foi eficaz na inibição da ferrugem e dos danos causados pela doença no milho quando comparada às parcelas não tratadas. Observou-se que o dano médio pela doença em parcelas tratadas com BC17, a 20 qt/acre, 4 dias após o último tratamento, foi de cerca de 10% em comparação com as parcelas não tratadas, onde se observou que o dano pela doença foi de cerca de 20% (FIG. 17A). Observou- se que o dano médio pela doença em parcelas tratadas com BC17, a 20 qt/acre, 4 dias após o último tratamento, foi de cerca de 13,8% em comparação com as parcelas não tratadas, onde se observou que o dano pela doença foi de cerca de 20% (FIG.
17A). O BC17 foi mais eficaz na inibição dos danos causados pela ferrugem do milho em plantações de milho do que o Daconil SDG (Syngenta), o tratamento padrão comercial (FIG. 17A).
[0184] O índice de gravidade da doença foi medido após três aplicações. Em comparação com as parcelas não tratadas e o tratamento padrão comercial, as parcelas tratadas com BC17 a 20 qt/acre apresentaram redução da gravidade da doença (FIG. 17B).
[0185] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 14: Avaliação da eficácia de BC8 contra Plasmopara viticola em uvas Vignoles.
[0186] O BC8 foi avaliado quanto à sua eficácia contra a progressão de míldio causado por Plasmopara viticola em uvas Vignoles. As videiras foram tratadas com BC8 ou um tratamento controle. O tratamento com BC8 consistiu em oito aplicações aplicadas em intervalos de 7-14 dias dependendo dos estádios de crescimento. As quatro primeiras aplicações foram aplicadas na razão de 40 galões/acre e as quatro últimas aplicações foram aplicadas na razão de 50 galões/acre. Como tratamentos de controle, as videiras foram deixadas sem tratamento ou tratadas com uma combinação de RevusTop (Syngenta; ingredientes ativos: madnipropamida, defenoconazol) e Intuity (Valent USA; ingrediente ativo: mandestrobina) (referenciada na FIG. 18A e FIG. 18B como Intuity) ou uma combinação de Manzate (Keystone Pest Solutions; ingredientes ativos: mancozeb) e Pristine (Bayer) (referenciada nas FIG.
18A e FIG. 18B como Padrão Comercial). Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. As videiras foram cultivadas e mantidas de acordo com a prática de cultivo padrão. Os produtos de tratamento foram misturados em água de acordo com as especificações do fabricante e aplicados aos arbustos pelo uso de um dispositivo de pulverização (Spray bloom). Quatro replicatas experimentais foram realizadas para cada tratamento. O desenho de parcelas aleatórias foi adotado para o estudo.
[0187] O tratamento com BC8 resultou no controle eficaz do míldio nas folhas induzido por Plasmopara viticola, demonstrado por uma redução na gravidade da doença (FIG. 18A) e no índice da doença (FIG. 18B), em comparação com as folhas em parreiras não tratadas.
[0188] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 15: Avaliação da eficácia de BC8 contra o apodrecimento causado por Botrytis cinerea em uvas Vignoles.
[0189] O BC8 foi avaliado quanto à sua eficácia contra o apodrecimento causado por Botrytis cinerea em uvas Vignoles. As videiras foram tratadas com BC8 ou um tratamento controle. O tratamento com BC8 consistiu em oito aplicações aplicadas em intervalos de 7-14 dias dependendo dos estádios de crescimento. As quatro primeiras aplicações foram aplicadas na razão de 40 galões/acre e as quatro últimas aplicações foram aplicadas na razão de 50 galões/acre. Como tratamentos de controle, as videiras foram deixadas sem tratamento ou tratadas com uma combinação de RevusTop (Syngenta) e Intuity (Valent USA) (referenciada na FIG. 19A e FIG. 19B como Intuity) ou uma combinação de Manzate (Keystone Pest Solutions) e Pristine (Bayer) (referenciada na Figura 19A e Figura 19B como Padrão Comercial).
Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. As videiras foram cultivadas e mantidas de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0190] Os produtos de tratamento foram misturados em água de acordo com as especificações do fabricante e aplicados às videiras usando um dispositivo de pulverização 7.5. Quatro replicatas experimentais foram realizadas para cada tratamento. O desenho de parcelas aleatórias foi adotado para o estudo. No total, 4 replicatas com 3 videiras por parcela foram realizadas.
[0191] O tratamento com BC8 resultou em um controle eficaz do apodrecimento induzido por Botrytis cinerea nos cachos de uvas, demonstrado por uma redução na gravidade da doença em quase 32% (FIG. 19A) e uma redução no índice da doença em cerca de 50% (FIG. 19B), em comparação com os cachos de uvas não tratados.
[0192] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 16: Avaliação da eficácia de BC8 contra o oídio induzido por Erysiphe necator em uvas Vignoles.
[0193] O BC8 foi avaliado quanto à sua eficácia contra o oídio causado por Erysiphe necator em uvas Vignoles. As videiras foram tratadas com BC8 ou um tratamento controle. O tratamento com BC8 consistiu em oito aplicações aplicadas em intervalos de 7-14 dias dependendo dos estádios de crescimento. As quatro primeiras aplicações foram aplicadas na razão de 40 galões/acre e as quatro últimas aplicações foram aplicadas na razão de 50 galões/acre. Como tratamentos de controle, as videiras foram deixadas sem tratamento ou tratadas com uma combinação de RevusTop (Syngenta) e Intuity (Valent USA) (“Intuity” na FIG. 20A e FIG. 20B) ou uma combinação de Manzate (Keystone Pest Solutions) e Pristine (Bayer) ("Padrão Comercial" na FIG. 20A e FIG. 20B). Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. As uvas foram cultivadas e mantidas de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0194] Os produtos de tratamento foram misturados em água de acordo com as especificações do fabricante e aplicados às videiras usando um dispositivo de pulverização (Spray bloom). Quatro replicatas experimentais foram realizadas para cada tratamento. O desenho de parcelas aleatórias foi adotado para o estudo.
[0195] O tratamento com BC8 reduziu o oídio induzido por Erysiphe necator nas folhas de uva, demonstrado por uma redução na gravidade da doença em quase 30% (FIG. 20A) e uma redução no índice da doença em cerca de 50% (FIG. 20B), comparada às folhas em cachos de uvas não tratadas.
[0196] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 17: Avaliação da eficácia de BC16 contra Plasmopara viticola em uvas Vignoles.
[0197] O BC16 foi avaliado quanto à sua eficácia contra a progressão do míldio causado por Plasmopara viticola em uvas Vignoles. As videiras foram tratadas com BC16 ou um tratamento controle. O tratamento com BC16 consistiu em oito aplicações aplicadas em intervalos de 7-14 dias dependendo dos estádios de crescimento. As quatro primeiras aplicações foram aplicadas na razão de 40 galões/acre e as quatro últimas aplicações foram aplicadas na razão de 50 galões/acre. Como tratamentos de controle, as videiras foram deixadas sem tratamento ou tratadas com uma combinação de RevusTop (Syngenta) e Intuity (Valent USA) (“Intuity” na FIG. 21A e FIG. 21B) ou uma combinação de Manzate (Keystone Pest Solutions) e Pristine (Bayer) ("Padrão Comercial" na FIG. 21A e FIG.
21B). Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. As uvas foram cultivadas e mantidas de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0198] Os produtos de tratamento foram misturados em água de acordo com as especificações do fabricante e aplicados às videiras usando um dispositivo de pulverização (Spray bloom). Quatro replicatas experimentais foram realizadas para cada tratamento. O desenho de parcelas aleatórias foi adotado para o estudo.
[0199] O tratamento com BC16 reduziu o míldio nas folhas induzidas por Plasmopara viticola, demonstrado por uma redução na gravidade da doença (FIG.
21A) e no índice de doenças (FIG. 21B), em comparação com as folhas em parreiras não tratadas.
[0200] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 18: Avaliação da eficácia de BC16 contra o apodrecimento causado por Botrytis cinerea em uvas Vignoles.
[0201] O BC16 foi avaliado quanto à sua eficácia contra o apodrecimento causado por Botrytis cinerea em uvas Vignoles. As videiras foram tratadas com BC16 ou um tratamento controle. O tratamento com BC16 consistiu em oito aplicações aplicadas em intervalos de 7-14 dias dependendo dos estádios de crescimento. As quatro primeiras aplicações foram aplicadas na razão de 40 galões/acre e as quatro últimas aplicações foram na razão de 50 galões/acre. Como tratamentos de controle, as videiras foram deixadas sem tratamento ou tratadas com uma combinação de RevusTop (Syngenta) e Intuity (Valent USA) (“Intuity” na FIG. 22) ou uma combinação de Manzate (Keystone Pest Solutions) e Pristine (Bayer) ("Padrão Comercial" na FIG.
22). Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. As videiras foram cultivadas e mantidas de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0202] Os produtos de tratamento foram misturados em água de acordo com as especificações do fabricante e aplicados às videiras usando um dispositivo de pulverização (Spray bloom). Quatro replicatas experimentais foram realizadas para cada tratamento. O desenho de parcelas aleatórias foi adotado para o estudo.
[0203] O tratamento com BC16 inibiu o apodrecimento induzido por Botrytis cinerea em cachos de uvas, demonstrado por uma redução na gravidade de ambas as doenças em quase 32% (FIG. 22), em comparação com os cachos de uvas não tratados.
[0204] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 19: Avaliação da eficácia de BC16 contra o oídio induzido por Erysiphe necator em uvas Vignoles.
[0205] O BC16 foi avaliado quanto à sua eficácia contra o oídio causado por Erysiphe necator em uvas Vignoles. As videiras foram tratadas com BC16 ou um tratamento controle. O tratamento com BC16 consistiu em oito aplicações aplicadas em intervalos de 7-14 dias dependendo dos estádios de crescimento. As quatro primeiras aplicações foram aplicadas na razão de 40 galões/acre e as quatro últimas aplicações foram aplicadas na razão de 50 galões/acre. Como tratamentos de controle, as videiras foram deixadas sem tratamento ou tratadas com uma combinação de RevusTop (Syngenta) e Intuity (Valent USA) (referenciada na FIG. 23A e FIG. 23B como Intuity) ou uma combinação de Manzate (Keystone Pest Soluções) e Pristine (Bayer) ("Padrão Comercial" na FIG. 23A e FIG. 23B). Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. As videiras foram cultivadas e mantidas de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0206] Os produtos de tratamento foram misturados em água de acordo com as especificações do fabricante e aplicados às videiras usando um dispositivo de pulverização (Spray bloom). Quatro replicatas experimentais foram realizadas para cada tratamento. O desenho de parcelas aleatórias foi adotado para o estudo.
[0207] O tratamento com BC16 reduziu a gravidade do oídio induzido por Erysiphe necator nas folhas de uva (FIG. 23A), levando a uma redução no índice de doenças em cerca de 30% (FIG. 23B), em comparação com as folhas em cachos de uva não tratados.
[0208] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 20: Avaliação da eficácia de BC18 contra Plasmopara viticola em uvas Vignoles.
[0209] O BC18 foi avaliado quanto à sua eficácia contra a progressão do míldio causado por Plasmopara viticola em uvas Vignoles. As videiras foram tratadas com BC18 ou um tratamento controle. O tratamento com BC18 consistiu em oito aplicações aplicadas em intervalos de 7-14 dias dependendo dos estádios de crescimento. As quatro primeiras aplicações foram aplicadas na razão de 40 galões/acre e as quatro últimas aplicações foram aplicadas na razão de 50 galões/acre. Como tratamentos de controle, as videiras foram deixadas sem tratamento ou tratadas com uma combinação de RevusTop (Syngenta) e Intuity (Valent USA) (“Intuity” na FIG. 24A e FIG. 24B) ou uma combinação de Manzate (Keystone Pest Solutions) e Pristine (Bayer) ("Padrão Comercial" na FIG. 24A e FIG.
24B). Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. As videiras foram cultivadas e mantidas de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0210] Os produtos de tratamento foram misturados em água de acordo com as especificações do fabricante e aplicados às videiras usando um dispositivo de pulverização (Spray bloom). Quatro replicatas experimentais foram realizadas para cada tratamento. O desenho de parcelas aleatórias foi adotado para o estudo.
[0211] O BC18 foi tão eficaz quanto o tratamento padrão comercial no controle do míldio nas folhas de uva (FIG. 24A e FIG. 24B, respectivamente). O tratamento com BC18 reduziu o míldio nas folhas induzidas por Plasmopara viticola, demonstrado por uma redução na gravidade da doença em cerca de 71% (FIG. 24A) e índice de doença em cerca de 80% (FIG. 24B), em comparação com as folhas em parreiras não tratadas.
[0212] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 21: Avaliação da eficácia de BC18 contra o apodrecimento causado por Botrytis cinerea em uvas Vignoles.
[0213] O BC18 foi avaliado quanto à sua eficácia contra o apodrecimento causado por Botrytis cinerea em uvas Vignoles. As videiras foram tratadas com BC18 ou um tratamento controle. O tratamento com BC18 consistiu em oito aplicações aplicadas em intervalos de 7-14 dias dependendo dos estádios de crescimento. As quatro primeiras aplicações foram aplicadas na razão de 40 galões/acre e as quatro últimas aplicações foram na razão de 50 galões/acre. Como tratamentos de controle, as videiras foram deixadas sem tratamento ou tratadas com uma combinação de RevusTop (Syngenta) e Intuity (Valent USA) (“Intuity” na FIG. 25A e FIG. 25B) ou uma combinação de Manzate (Keystone Pest Solutions) e Pristine (Bayer) ("Padrão Comercial" na FIG. 25A e FIG. 25B). Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. As videiras foram cultivadas e mantidas de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0214] Os produtos de tratamento foram misturados em água de acordo com as especificações do fabricante e aplicados às videiras usando um dispositivo de pulverização (Spray bloom). Quatro replicatas experimentais foram realizadas para cada tratamento. O desenho de parcelas aleatórias foi adotado para o estudo.
[0215] O BC18 foi tão eficaz quanto o tratamento padrão comercial no controle da infecção por Botrytis cinerea em cachos de uvas (FIG. 25A e FIG. 25B, respectivamente). O tratamento com BC18 inibiu o apodrecimento induzido por Botrytis cinerea em cachos de uvas, demonstrado por uma redução na gravidade da doença em quase 80% (FIG. 25A) e uma redução no índice de doença em cerca de 87% (FIG. 25B), em comparação com cachos de uvas não tratados.
[0216] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 22: Avaliação da eficácia de BC18 contra o oídio induzido por Erysiphe necator em uvas Vignoles.
[0217] O BC18 foi avaliado quanto à sua eficácia contra o oídio causado por Erysiphe necator em uvas Vignoles. As videiras foram tratadas com BC18 ou um tratamento controle. O tratamento com BC18 consistiu em oito aplicações aplicadas em intervalos de 7-14 dias dependendo dos estádios de crescimento. As quatro primeiras aplicações foram aplicadas na razão de 40 galões/acre e as quatro últimas aplicações foram aplicadas na razão de 50 galões/acre. Como tratamentos de controle, as videiras foram deixadas sem tratamento ou tratadas com uma combinação de RevusTop (Syngenta) e Intuity (Valent USA) (“Intuity” na FIG. 26A e FIG. 26B) ou uma combinação de Manzate (Keystone Pest Solutions) e Pristine (Bayer) ("Padrão Comercial" na FIG. 26A e FIG. 26B). Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. As videiras foram cultivadas e mantidas de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0218] Os produtos de tratamento foram misturados em água de acordo com as especificações do fabricante e aplicados às videiras usando um dispositivo de pulverização (Spray bloom). Quatro replicatas experimentais foram realizadas para cada tratamento. O desenho de parcelas aleatórias foi adotado para o estudo.
[0219] O BC18 foi tão eficaz quanto o tratamento com Padrão Comercial e Intuity no controle do oídio em folhas de uva (FIG. 26A e FIG. 26B, respectivamente).
O tratamento com BC18 reduziu a gravidade do oídio induzido por Erysiphe necator em folhas de uva em cerca de 80% (FIG. 26A) e levando a uma redução no índice de doença em cerca de 87% (FIG. 26B), em comparação com as folhas em cachos de uvas não tratados.
[0220] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 23: Avaliação da eficácia de BC8 contra a infecção por Botrytis cinerea em framboesas.
[0221] O BC8 foi avaliado quanto à sua eficácia contra o oídio causado por Botrytis cinerea e Podosphaera macularis em framboesas. Os arbustos foram tratados com BC8 ou um tratamento controle. O tratamento com BC8 foi aplicado em intervalos de 14 dias ou 7 dias dependendo dos estádios de crescimento. O tratamento consistiu em um total de 5-6 aplicações em uma razão de 39 galões/acre. Como tratamentos de controle, os arbustos foram deixados sem tratamento ou tratados com o padrão industrial (uma combinação de Rally (Corteva Agriscience; ingrediente ativo: micobutanil), Pristine (BASF), Elevate (Arysta LifeScience; ingrediente ativo: fenhexamid) e Switch (Syngenta)) ou controles biológicos incluindo Botector (Nufarm; ingrediente ativo: Aureobasidium pullalans), Double Nickel (Certis; ingrediente ativo: Bacillus amyloliquefaciens cepa D747) ou Stargus/NuFilm P. Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. Os arbustos foram cultivados e mantidos de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0222] Os produtos de tratamento foram misturados em água de acordo com as especificações do fabricante e aplicados às plantas em intervalos regulares. Quatro replicatas experimentais foram realizadas para cada tratamento. Um protocolo de parcela aleatória foi adotado para o estudo usando parcelas de 10' por tratamento.
[0223] O BC8 foi tão eficaz quanto os tratamentos comerciais no controle da infecção por Botrytis cinerea em arbustos de framboesa. O tratamento com BC8 reduziu a gravidade da infecção por Botrytis cinerea em framboeseiras em cerca de 75% (FIG. 27A) e o índice médio da doença em mais de 90% (FIG. 27B) em comparação com os controles não tratados.
[0224] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 24: Avaliação da eficácia de BC8 contra oídio causada por Podosphaera macularis em arbustos de framboesa.
[0225] O BC8 foi avaliado quanto à sua eficácia contra o oídio causado por Podosphaera macularis em arbustos de framboesa. Os arbustos foram tratados com BC8 ou um tratamento controle. O tratamento com BC8 foi aplicado em intervalos de 14 dias ou 7 dias, dependendo dos estádios de crescimento. O tratamento consistiu em um total de 5-6 aplicações em uma razão de 39 galões/acre. Como tratamentos de controle, os arbustos foram deixados sem tratamento ou tratados com o padrão industrial (uma combinação de Rally (Corteva Agriscience), Pristine (Bayer), Elevate (Arysta LifeScience) e Switch (Syngenta)) ou controles biológicos, incluindo Botector, Double Nickel ou Stargus/NuFilm P. Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. Os arbustos foram cultivados e mantidos de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0226] Os produtos de tratamento foram misturados em água de acordo com as especificações do fabricante e aplicados às plantas em intervalos regulares. Quatro replicatas experimentais foram realizadas para cada tratamento. Um protocolo de parcela aleatória foi adotado para o estudo usando parcelas de 10’ por tratamento.
[0227] A eficácia de BC8 contra oídio como medida pela redução na gravidade média da doença e no índice médio da doença em folhas de framboesa é mostrada na FIG. 28A e FIG. 28B, respectivamente. O tratamento com BC8 reduziu a gravidade da infecção por Podosphaera macularis em folhas de framboesa em cerca de 75% (FIG. 28A). O tratamento com BC8 foi tão eficaz quanto o tratamento comercial e reduziu o índice médio da doença em cerca de 70% (FIG. 28B) em comparação com os controles não tratados.
[0228] A eficácia de BC8 contra o oídio, medida pela redução na gravidade média da doença e no índice médio da doença em bagas de framboesa, é mostrada na FIG. 29A e FIG. 29B, respectivamente. O tratamento com BC8 reduziu a gravidade da infecção por Podosphaera macularis em bagas de framboesa em cerca de 70% (FIG. 29A). O tratamento com BC8 reduziu o índice médio da doença em bagas de framboesa em cerca de 90% (FIG. 29B) em comparação com os controles não tratados.
[0229] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 25: Avaliação da eficácia de BC16 contra a infecção por Botrytis cinerea em framboesas.
[0230] O BC16 foi avaliado quanto à sua eficácia contra oídio causado por
Botrytis cinerea e Podosphaera macularis em framboesas. Os arbustos foram tratados com BC16 ou um tratamento controle. O tratamento com BC16 foi aplicado em intervalos de 14 dias ou 7 dias, dependendo dos estádios de crescimento. O tratamento consistiu em um total de 5-6 aplicações em uma razão de 39 galões/acre.
Como tratamentos de controle, os arbustos foram deixados sem tratamento ou tratados com o padrão industrial (uma combinação de Rally (Corteva Agriscience), Pristine (Bayer), Elevate (Arysta LifeScience) e Switch (Syngenta)) ou controles biológicos, incluindo Botector, Double Nickel ou Stargus/NuFilm P. Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. Os arbustos foram cultivados e mantidos de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0231] Os produtos de tratamento foram misturados em água de acordo com as especificações do fabricante e aplicados às plantas em intervalos regulares. Quatro replicatas experimentais foram realizadas para cada tratamento. Um protocolo de parcela aleatória foi adotado para o estudo usando parcelas de 10’ por tratamento.
[0232] O BC16 foi tão eficaz no controle da infecção por Botrytis cinerea em arbustos de framboesa. O tratamento com BC16 reduziu a gravidade da infecção por Botrytis cinerea em framboeseiras em cerca de 50% (FIG. 30A) e o índice médio da doença em mais de 63% (FIG. 30B) em comparação com os controles não tratados.
[0233] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 26: Avaliação da eficácia de BC16 contra oídio causado por Podosphaera macularis em arbustos de framboesa.
[0234] O BC16 foi avaliado quanto à sua eficácia contra oídio causado por Podosphaera macularis em arbustos de framboesa. Os arbustos foram tratados com
BC16 ou um tratamento controle. O tratamento com BC16 foi aplicado em intervalos de 14 dias ou 7 dias, dependendo dos estádios de crescimento. O tratamento consistiu em um total de 5-6 aplicações em uma razão de 39 galões/acre. Como tratamentos de controle, os arbustos foram deixados sem tratamento ou tratados com o padrão industrial (uma combinação de Rally (Corteva Agriscience), Pristine (Bayer), Elevate (Arysta LifeScience) e Switch (Syngenta)) ou controles biológicos, incluindo Botector, Double Nickel ou Stargus/NuFilm P. Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. Os arbustos foram cultivados e mantidos de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0235] Os produtos de tratamento foram misturados em água de acordo com as especificações do fabricante e aplicados às plantas em intervalos regulares. Quatro replicatas experimentais foram realizadas para cada tratamento. Um protocolo de parcela aleatória foi adotado para o estudo usando parcelas de 10’ por tratamento.
[0236] A eficácia de BC16 contra o oídio, medida pela redução na gravidade da doença e no índice da doença nas folhas de framboesa, é mostrada na FIG. 31A e FIG. 31B, respectivamente. O tratamento com BC16 reduziu a gravidade da infecção por Podosphaera macularis em folhas de framboesa em cerca de 56% (FIG. 31A). O tratamento com BC16 reduziu o índice médio da doença em cerca de 70% (FIG. 31B) em comparação com os controles não tratados.
[0237] A eficácia de BC16 contra o oídio, medida pela redução na gravidade da doença e no índice da doença em bagas de framboesa, é mostrada na FIG. 32A e FIG. 32B, respectivamente. O tratamento com BC16 reduziu a gravidade da infecção por Podosphaera macularis em bagas de framboesa em cerca de 50% (FIG. 32A). O tratamento com BC16 reduziu o índice médio da doença em bagas de framboesa em cerca de 55% (FIG. 32B) em comparação com os controles não tratados.
[0238] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 27: Avaliação da eficácia de BC17 contra a infecção por Botrytis cinerea em framboesas.
[0239] O BC17 foi avaliado quanto à sua eficácia contra o oídio causado por Botrytis cinerea e Podosphaera macularis em framboesas. Os arbustos foram tratados com BC17 ou um tratamento controle. O tratamento com BC17 foi aplicado em intervalos de 14 dias ou 7 dias, dependendo dos estádios de crescimento. O tratamento consistiu em um total de 5-6 aplicações em uma razão de 39 galões/acre.
Como tratamentos de controle, os arbustos foram deixados sem tratamento ou tratados com o padrão industrial (uma combinação de Rally (Corteva Agriscience), Pristine (Bayer), Elevate (Arysta LifeScience) e Switch (Syngenta)) ou controles biológicos, incluindo Botector, Double Nickel ou Stargus/NuFilm P. Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. Os arbustos foram cultivados e mantidos de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0240] Os produtos de tratamento foram misturados em água de acordo com as especificações do fabricante e aplicados às plantas em intervalos regulares. Quatro replicatas experimentais foram realizadas para cada tratamento. Um protocolo de parcela aleatória foi adotado para o estudo.
[0241] O BC17 foi eficaz no controle da infecção por Botrytis cinerea em arbustos de framboesa. O tratamento com BC17 reduziu a gravidade da infecção por Botrytis cinerea em framboeseiras em cerca de 50% (FIG. 33A) e o índice médio da doença em mais de 55% (FIG. 33B) em comparação com os controles não tratados.
[0242] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 28: Avaliação da eficácia de BC17 contra oídio causado por Podosphaera macularis em arbustos de framboesa.
[0243] O BC17 foi avaliado quanto à sua eficácia contra o oídio causado por Podosphaera macularis em arbustos de framboesa. Os arbustos foram tratados com BC17 ou um tratamento controle. O tratamento com BC17 foram aplicados em intervalos de 14 dias ou 7 dias, dependendo dos estádios de crescimento. O tratamento consistiu em um total de 5-6 aplicações em uma razão de 39 galões/acre.
Como tratamentos de controle, os arbustos foram deixados sem tratamento ou tratados com o padrão industrial (uma combinação de Rally (Corteva Agriscience), Pristine (Bayer), Elevate (Arysta LifeScience) e Switch (Syngenta)) ou controles biológicos, incluindo Botector, Double Nickel ou Stargus/NuFilm P. Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. Os arbustos foram cultivados e mantidos de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0244] Os produtos de tratamento foram misturados em água de acordo com as especificações do fabricante e aplicados às plantas em intervalos regulares. Quatro replicatas experimentais foram realizadas para cada tratamento. Um protocolo de parcela aleatória foi adotado para o estudo.
[0245] A eficácia de BC17 contra o oídio, medida pela redução na gravidade da doença e no índice da doença nas folhas de framboesa, é mostrada na FIG. 34A e FIG. 34B, respectivamente. O tratamento com BC17 reduziu a gravidade da infecção por Podosphaera macularis em folhas de framboesa em cerca de 45% (FIG. 34A). O tratamento com BC17 reduziu o índice médio da doença em cerca de 70% (FIG. 34B) em comparação com os controles não tratados.
[0246] A eficácia de BC17 contra o oídio, medida pela redução na gravidade da doença e no índice da doença em bagas de framboesa, é mostrada na FIG. 35A e
FIG. 35B, respectivamente. O tratamento com BC17 reduziu a gravidade da infecção por Podosphaera macularis em bagas de framboesa em cerca de 50% (FIG. 35A). O tratamento com BC17 reduziu o índice médio da doença em bagas de framboesa em cerca de 50% (FIG. 35B) em comparação com os controles não tratados.
[0247] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 29: Avaliação da eficácia de BC16 contra o apodrecimento causado pela infecção por Botrytis cinerea e Rhizopus spp. em morangos.
[0248] O BC16 foi avaliado quanto à sua eficácia contra o apodrecimento causado por Botrytis cinerea e Rhizopus spp. em morangos. Parcelas de morangueiros foram tratadas com BC16 ou um tratamento controle. O tratamento com BC16 consistiu em cinco aplicações foliares aplicadas semanalmente em uma razão de 40 quartos/acre. Como tratamentos de controle, parcelas foram deixadas sem tratamento ou tratadas com o padrão comercial, incluindo CAPTAN (soluções Keystone Pest) e Procidic (Greenspire Global Inc.; ingrediente ativo: ácido cítrico), Aviv (Sym Agro; ingrediente ativo: Bacillus subtilis cepa IAB/BS03), Stk 73 (STK;), Procidic (Greenspire Global Inc.). Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. As plantas foram cultivadas e mantidas de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0249] Os produtos de tratamento foram misturados em um volume de água de 150 galões por acre e aplicados nas plantas usando um pulverizador costal de CO2 portátil com 8 bicos. Quatro replicatas experimentais foram realizadas para cada tratamento. O desenho de parcelas aleatórias foi adotado para o estudo. A primeira colheita foi realizada no dia após a última aplicação e a segunda colheita, 7 dias após a última aplicação. Os dados foram coletados de 32 bagas maduras coletadas em cada parcela e observadas por 12 a 14 dias para avaliar o apodrecimento das bagas devido à presença de Botrytis cinerea ou Rhizopus spp.
[0250] Os resultados expressos como número de frutas apodrecidas são mostrados na FIG. 36. As bagas tratadas com BC16 tiveram significativamente menos apodrecimento em comparação com as bagas não tratadas e tiveram um desempenho comparável aos fungicidas disponíveis comercialmente que foram utilizados neste estudo.
[0251] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 30: Avaliação da eficácia de BC17 contra o apodrecimento causado pela infecção por Botrytis cinerea e Rhizopus spp. em morangos.
[0252] O BC17 foi avaliado quanto à sua eficácia contra o apodrecimento causado por Botrytis cinerea e Rhizopus spp. em morangos. Parcelas de morangueiros foram tratadas com BC17 ou um tratamento controle. O tratamento com BC17 consistiu em cinco aplicações foliares aplicadas semanalmente em uma razão de 40 quartos/acre. Como tratamentos de controle, os arbustos foram deixados sem tratamento ou tratados com os padrões comerciais, incluindo CAPTAN (soluções Keystone Pest) e Procidic (Greenspire Global Inc.), Aviv (Sym Agro), Stk 73 (STK), Procidic (Greenspire Global Inc.). Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. Os arbustos foram cultivados e mantidos de acordo com a prática de cultivo padrão. Os produtos de tratamento foram misturados em um volume de água de 150 galões por acre e aplicados aos arbustos usando um pulverizador costal de CO2 portátil com 8 bicos.
Quatro replicatas experimentais foram realizadas para cada tratamento. O desenho de parcelas aleatórias foi adotado para o estudo. A primeira colheita foi realizada no dia após a última aplicação e a segunda colheita, 7 dias após a última aplicação. Os dados foram coletados de 32 bagas maduras coletadas em cada parcela e observadas por 12 a 14 dias para avaliar o apodrecimento das bagas devido à presença de Botrytis cinerea ou Rhizopus spp.
[0253] Os resultados expressos como número de frutas apodrecidas são mostrados na FIG. 37. As bagas tratadas com BC17 tiveram significativamente menos apodrecimento em comparação com as bagas não tratadas e tiveram um desempenho comparável aos fungicidas disponíveis comercialmente que foram utilizados neste estudo.
[0254] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 31: Avaliação da eficácia de BC17 contra o apodrecimento radicular causado por Pythium sp. em soja.
[0255] O BC17 foi avaliado quanto à sua eficácia contra o apodrecimento radicular causado por Pythium sp. em soja. As parcelas foram tratadas com BC17 ou um tratamento controle. Os tratamentos com BC17 consistiram em três aplicações na variedade Credenz de soja. A primeira aplicação foi no plantio em sulco ou encharcado no topo da linha de sementes após o plantio. O segundo banho de aplicação ocorreu em 100% de emergência e o terceiro foi realizado 7 a 10 dias após a segunda aplicação. O tratamento consistiu em duas taxas de aplicação diferentes de 20 litros/acre ou 40 litros/acre. Como tratamentos de controle, as parcelas foram deixadas sem tratamento ou tratadas com o padrão comercial, Daconil SDG (Syngenta) (“Padrão Comercial” na FIG. 38). Todos os segmentos de tratamento também receberam um programa de fertilização e inseticida padrão comercial. As parcelas foram cultivadas e mantidas de acordo com a prática de cultivo padrão.
[0256] Os produtos de tratamento foram misturados em um volume de água de 20 galões por acre e aplicados usando um pulverizador costal (lança de 0,5 pé com bicos de inundação com 28 psi) às plantas nos períodos sazonais convencionais (final de Junho) ou no primeiro sinal de doença (o que ocorrer primeiro). Quatro replicatas experimentais foram realizadas para cada tratamento. Duas fileiras, cada uma com 20 pés de comprimento, foram tratadas com BC17, sendo uma fileira preservada como tampão entre as parcelas de tratamento. Quatro replicatas foram realizadas em cada protocolo de tratamento. O desenho de blocos aleatórios completos foi adotado para esse estudo.
[0257] A avaliação do estande de plantação foi realizada como uma medida da saúde das plantas e da taxa de emergência. Os resultados expressos como estande de plantação (por metro) são mostrados na FIG. 38. A contagem do estande de plantação foi avaliada na segunda aplicação, antes da terceira aplicação e 14 dias após a terceira aplicação. O tratamento com BC17 a 40 qts/acre aumenta significativamente o estande de soja em comparação com a soja não tratada. O BC17 teve um desempenho melhor do que o padrão comercial no aumento do estande de plantação.
[0258] Todos os dados foram analisados por meio de uma análise de variância unidirecional (ANOVA) e as médias foram comparadas usando a diferença mínima significativa de Fisher (LSD). Os diagramas de caixa identificados com a mesma letra em cada gráfico não são significativamente diferentes (LSD p = 0,05).
Exemplo 32: Eficácia de composição de biocontrole contra a infecção por Botrytis cinerea sobre a vida útil da framboesa
[0259] As framboesas foram colhidas de uma planta e colocadas em um recipiente estéril. As framboesas não apresentaram qualquer infecção fúngica perceptível. As framboesas foram deliberadamente infectadas por Botrytis cinerea.
Dois grupos de framboesas foram avaliados; um que foi tratado com um sobrenadante de uma cultura de BC8 e o outro foi deixado sem tratamento. O tratamento foi aplicado pela imersão da fruta em formulação de tratamento e pode ser integrado também à embalagem que acondiciona as framboesas ou aplicado com pulverização ou usando outros métodos adequados, como descrito ao longo do documento. Após 3 dias, foi observada uma infecção fúngica visível nas framboesas não tratadas. As framboesas tratadas com BC8, por outro lado, não mostraram infecção mesmo após 5 dias.
Framboesas tratadas e não tratadas são mostradas na FIG 39.
Exemplo 33: Eficácia da composição de biocontrole contra a infecção por Botrytis cinerea sobre a vida útil da uva
[0260] As uvas foram colhidas de uma planta e colocadas em um recipiente estéril. As uvas não apresentaram qualquer infecção fúngica perceptível. Dois grupos de uvas foram deliberadamente infectadas por Botrytis cinerea. A FIG. 40 mostra três grupos de uvas que foram avaliados. Um foi deliberadamente não infectado e designado como (-) ctrl, um foi deliberadamente infectado e tratado com uma composição de biocontrole BC16, sendo designado como Produto BC16, e um foi deliberadamente infectado e deixado sem tratamento, sendo designado como (+) ctrl.
O tratamento foi aplicado pela imersão da fruta na formulação de tratamento e pode ser integrado também à embalagem que acondiciona as uvas ou aplicado com pulverização ou usando outros métodos adequados, como descrito ao longo do documento. As uvas tratadas com BC16 não apresentaram infecção fúngica perceptível.
Exemplo 34: Eficácia da composição de biocontrole contra a infecção por Botrytis cinerea sobre a vida útil da maçã
[0261] As maçãs foram colhidas de uma planta e colocadas em um recipiente estéril. As maçãs não apresentaram qualquer infecção fúngica perceptível. Duas maçãs foram deliberadamente infectadas por Botrytis cinerea. A FIG. 42 mostra três maçãs que foram avaliadas. Uma maçã não foi deliberadamente infectada, sendo designada como (-) ctrl, uma maçã foi infectada deliberadamente e tratada com uma composição de biocontrole BC16, sendo designada como Produto BC16, e uma maçã foi infectada deliberadamente e deixada sem tratamento, sendo designada como (+) ctrl. O tratamento foi aplicado pela imersão da fruta na formulação de tratamento e pode ser integrado também à embalagem que acondiciona as maçãs ou aplicado com pulverização ou usando outros métodos adequados, como descrito ao longo do documento. As maçãs tratadas com BC16 mostraram uma área menor de infecção fúngica em comparação com as maçãs não tratadas. As maçãs também foram deliberadamente infectadas e tratadas com BC17, designadas como Produto BC17. As maçãs tratadas por BC17 (FIG. 42) mostraram uma área menor de infecção fúngica em comparação com as maçãs não tratadas. A FIG. 43 mostra um percentual das frutas que necrosaram das várias maçãs.
Exemplo 35: Eficácia da composição de biocontrole contra a infecção por Botrytis cinerea sobre a vida útil do pêssego
[0262] Os pêssegos foram colhidos de uma planta e colocados em um recipiente estéril. Os pêssegos não apresentaram qualquer infecção fúngica perceptível. Os pêssegos foram deliberadamente infectados por Botrytis cinerea. A FIG. 44 mostra três pêssegos que foram avaliados. Um pêssego não foi deliberadamente infectado, sendo designado como (-) ctrl, um pêssego foi deliberadamente infectado e tratado com uma composição de biocontrole BC17, sendo designado como BC17, e um pêssego foi deliberadamente infectado e deixado sem tratamento, sendo designado como (+) ctrl. O tratamento foi aplicado pela imersão da fruta na formulação de tratamento e pode ser integrado também à embalagem que acondiciona os pêssegos ou aplicado com pulverização ou usando outros métodos adequados, como descrito ao longo do documento. Os pêssegos tratados com BC17 não apresentaram infecção fúngica perceptível.
[0263] Embora as formas de realização preferenciais da presente invenção tenham sido mostradas e descritas aqui, será evidente para os técnicos no assunto que tais formas de realização são proporcionadas apenas a título de exemplo.
Numerosas variações, alterações e substituições ocorrerão agora para os técnicos no assunto sem se afastar da invenção. Deve-se compreender que várias alternativas às formas de realização da invenção descritas neste documento podem ser empregadas na prática da invenção. Pretende-se que as reivindicações anexas definam o escopo da invenção e que os métodos e estruturas compreendidos no escopo dessas reivindicações, bem como seus equivalentes, estejam protegidos pelas mesmas.

Claims (84)

REIVINDICAÇÕES
1. Composição de biocontrole CARACTERIZADA por compreender: (i) pelo menos um microrganismo, e (ii) um veículo; em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de rRNA 16S mais do que 99% idêntica a uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo de SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 9 ou em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 99% idêntica a uma sequência de ITS selecionada do grupo de SEQ ID NO: 17 e SEQ ID NO: 20 ou em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 90% idêntica a uma sequência de ITS de SEQ ID NO: 18.
2. Composição de biocontrole CARACTERIZADA por compreender: (i) pelo menos um microrganismo, e (ii) um veículo; em que o pelo menos um microrganismo compreende uma sequência de rRNA mais do que 99% idêntica a uma sequência maior que 200 bases, a sequência compreendendo uma sequência de rRNA selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 9 ou em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 99% idêntica a uma sequência de ITS de SEQ ID NO: 17 ou em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 90% idêntica a SEQ ID NO: 18.
3. Composição de biocontrole CARACTERIZADA por compreender: (i) pelo menos um microrganismo, e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de Fusarium oxysporum em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole ou inibir o crescimento de Verticillium dahliae em 60% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole, conforme determinado pela medição da sobrevivência de Fusarium oxysporum ou Verticillium dahliae, respectivamente.
4. Composição de biocontrole CARACTERIZADA por compreender: (i) pelo menos um microrganismo, e (ii) um veículo, em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de rRNA 16S mais do que 99% idêntica a uma sequência de rRNA 16S de SEQ ID NO: 22.
5. Composição de biocontrole CARACTERIZADA por compreender: (i) pelo menos um microrganismo, e (ii) um veículo, em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de rRNA 16S mais do que 99% idêntica a uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo de SEQ ID NO: 23.
6. Composição de biocontrole CARACTERIZADA por compreender: (i) pelo menos um microrganismo, e (ii) um veículo, em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de rRNA 16S mais do que 99% idêntica a uma sequência de rRNA 16S de SEQ ID NO: 24 ou em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 99% idêntica a uma sequência de ITS de SEQ ID NO: 25 ou em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 90% idêntica a uma sequência de ITS de SEQ ID NO: 25.
7. Composição de biocontrole CARACTERIZADA por compreender: (i) pelo menos um microrganismo, e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de Botrytis cinerea em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole.
8. Composição de biocontrole CARACTERIZADA por compreender: (i) pelo menos um microrganismo, e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de Monilinia vacinii-corymbosi em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole.
9. Composição de biocontrole CARACTERIZADA por compreender: (i) pelo menos um microrganismo, e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de Colletotrichum spaethanium em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole.
10. Composição de biocontrole CARACTERIZADA por compreender: (i) pelo menos um microrganismo, e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de Puccinia sorghi em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole.
11. Composição de biocontrole CARACTERIZADA por compreender: (i) pelo menos um microrganismo, e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de Plasmopara viticola em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole.
12. Composição de biocontrole CARACTERIZADA por compreender: (i) pelo menos um microrganismo, e
(ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de Erysiphe necator em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole.
13. Composição de biocontrole CARACTERIZADA por compreender: (i) pelo menos um microrganismo, e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de Podasphaera macularis em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole.
14. Composição de biocontrole CARACTERIZADA por compreender: (i) pelo menos um microrganismo, e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de um organismo do gênero Pytium em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole.
15. Composição de biocontrole CARACTERIZADA por compreender: (i) pelo menos um microrganismo, e (ii) um veículo, em que a composição de biocontrole é capaz de inibir o crescimento de um organismo do gênero Rhizopus em 25% ou mais em relação a um controle não exposto à composição de biocontrole.
16. Composição de biocontrole CARACTERIZADA por compreender: (i) um metabólito secundário de pelo menos um microrganismo, e (ii) um veículo; em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 99% idêntica a uma sequência de ITS selecionada do grupo de SEQ ID NO: 17, SEQ
ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21 e SEQ ID NO: 25.
17. Composição de biocontrole CARACTERIZADA por compreender: (i) um ou mais metabólitos secundários de pelo menos um microrganismo, e (ii) um veículo; em que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de rRNA 16S mais do que 99% idêntica a uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, e SEQ ID NO: 24.
18. Composição de biocontrole, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-17, CARACTERIZADA pelo fato de que o pelo menos um microrganismo é isolado e purificado.
19. Composição de biocontrole, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-17, CARACTERIZADA pelo fato de que a composição de biocontrole compreende ainda um segundo microrganismo, em que o segundo microrganismo não é idêntico ao, pelo menos, um microrganismo.
20. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 19, CARACTERIZADA pelo fato de que o segundo microrganismo é isolado e purificado.
21. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 18 ou 20, CARACTERIZADA pelo fato de que o segundo microrganismo compreende uma sequência de RNA que é pelo menos 95% idêntica a uma sequência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO: 1-25.
22. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADA pelo fato de que o segundo microrganismo compreende uma sequência de rRNA 16S que é pelo menos 95% idêntica a uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 22, 23 e 24.
23. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 21,
CARACTERIZADA pelo fato de que o segundo microrganismo compreende uma sequência do espaçador interno transcrito (ITS) que é pelo menos 95% idêntica a uma sequência de ITS selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 17, 18, 19, 20, 21 e 25.
24. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADA pelo fato de que o segundo microrganismo compreende uma sequência de rRNA 16S que é pelo menos 99% idêntica a uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 22, 23 e 24.
25. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADA pelo fato de que o segundo microrganismo compreende uma sequência do espaçador interno transcrito (ITS) que é pelo menos 99% idêntica a uma sequência de ITS selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 17, 18, 19, 20, 21 e 25.
26. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADA pelo fato de que o segundo microrganismo compreende uma sequência de rRNA 16S que é uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 22, 23 e 24.
27. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADA pelo fato de que o segundo microrganismo compreende uma sequência do espaçador interno transcrito (ITS) que é uma sequência de ITS selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 17, 18, 19, 20, 21 e 25.
28. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADA pelo fato de que o pelo menos microrganismo compreende uma sequência de rRNA 16S que é pelo menos 99% idêntica a SEQ ID NO: 24 e o segundo microrganismo compreende uma sequência de ITS que é pelo menos 99% idêntica a
SEQ ID NO: 25.
29. Composição de biocontrole, de acordo com qualquer uma das reivindicações 21-27, CARACTERIZADA pelo fato de que a composição de biocontrole compreende um terceiro microrganismo e o terceiro microrganismo não é idêntico ao segundo ou ao pelo menos um microrganismo.
30. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADA pelo fato de que a composição de biocontrole compreende um quarto microrganismo e o terceiro microrganismo não é idêntico a nenhum dos terceiro, segundo ou o pelo menos um microrganismo.
31. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 30, CARACTERIZADA pelo fato de que a composição de biocontrole compreende um quinto microrganismo e o quinto microrganismo não é idêntico a nenhum dos quarto, terceiro, segundo ou o pelo menos um microrganismo.
32. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADA pelo fato de que o pelo menos um microrganismo compreende uma sequência de rRNA 16S mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 23, o segundo microrganismo compreende uma sequência de rRNA 16S mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 23, e o terceiro microrganismo compreende uma sequência de rRNA 16S s mais do que 99% idêntica a SEQ ID NO: 23.
33. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 18, CARACTERIZADA pelo fato de que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 90% idêntica a SEQ ID NO: 25 e em que o segundo microrganismo é uma espécie de Gluconobacter.
34. Biocomposição, de acordo com a reivindicação 33, CARACTERIZADA pelo fato de que a espécie de Gluconobacter é um Gluconobacter cerinus.
35. Biocomposição, de acordo com a reivindicação 33, CARACTERIZADA pelo fato de que o Gluconobacter tem uma sequência de rRNA 16S mais do que 99%
idêntica a SEQ ID NO: 24.
36. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 18, CARACTERIZADA pelo fato de que o pelo menos um microrganismo possui uma sequência de ITS mais do que 90% idêntica a SEQ ID NO: 18 e em que o segundo microrganismo é uma espécie de Gluconacetobacter.
37. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 35, CARACTERIZADA pelo fato de que a espécie de Gluconacetobacter é o Gluconacetobacter liquefaciens.
38. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 35, CARACTERIZADA pelo fato de que a espécie de Gluconacetobacter possui uma sequência de rRNA 16S selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 e SEQ ID NO: 16.
39. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 16 ou 17, CARACTERIZADA pelo fato de que o metabólito secundário do pelo menos um microrganismo é isolado de um sobrenadante de uma cultura do pelo menos um microrganismo.
40. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 16 ou 17, CARACTERIZADA pelo fato de que o um ou mais metabólito(s) secundário(s) de pelo menos um microrganismo inclui um lipopeptídeo.
41. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 40, CARACTERIZADA pelo fato de que o lipopeptídeo é um lipopeptídeo cíclico selecionado do grupo que consiste em: uma surfactina, uma fengicina e uma iturina.
42. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 16 ou 17, CARACTERIZADA pelo fato de que o um ou mais metabólito(s) secundário(s) de pelo menos um microrganismo compreende um policetídeo.
43. Composição de biocontrole, de acordo com a reivindicação 16 ou 17,
CARACTERIZADA pelo fato de que o um ou mais metabólito(s) secundário(s) de pelo menos um microrganismo compreende um composto antifúngico volátil.
44. Composição de biocontrole, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3-15, CARACTERIZADA pelo fato de que o controle é exposto a Bacillus subtilis cepa QST 713.
45. Composição de biocontrole, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-15, CARACTERIZADA pelo fato de que o pelo menos um microrganismo é isolado e purificado.
46. Composição de biocontrole, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-45, CARACTERIZADA pelo fato de que a composição de biocontrole é um líquido ou um pó.
47. Composição de biocontrole, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-46, CARACTERIZADA pelo fato de que a composição de biocontrole compreende uma célula vegetativa.
48. Composição de biocontrole, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-46, CARACTERIZADA pelo fato de que a composição de biocontrole compreende um esporo.
49. Método para a prevenção ou redução do crescimento de um fungo patogênico em uma planta, uma semente ou um produto da mesma, CARACTERIZADO por compreender: aplicar à planta, à semente, à flor ou ao produto, a composição de biocontrole definida em qualquer uma das reivindicações 1- 46, em que a composição de biocontrole tem atividade antifúngica.
50. Método para a prevenção ou redução do crescimento de um fungo patogênico em uma planta, uma semente, uma flor ou um produto da mesma, CARACTERIZADO por compreender: aplicar ao solo a composição de biocontrole definida em qualquer uma das reivindicações 1-46, em que a composição de biocontrole tem atividade antifúngica.
51. Método para a prevenção ou redução do crescimento de um fungo patogênico em um produto, CARACTERIZADO por compreender: aplicar a um material de embalagem utilizado para transportar ou armazenar o produto a composição de biocontrole definida em qualquer uma das reivindicações 1-46, em que a composição de biocontrole tem atividade antifúngica.
52. Método para a prevenção ou redução do crescimento de um fungo patogênico em uma semente ou um produto, CARACTERIZADO por compreender: integrar a composição de biocontrole definida em qualquer uma das reivindicações 1- 46 em um processo selecionado do grupo que consiste em: lavar o produto ou a semente, revestir o produto ou a semente, e uma combinação dos mesmos.
53. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49-52, CARACTERIZADO pelo fato de que a planta, a semente, a flor ou o produto da mesma é uma planta, uma semente, uma flor ou um produto da mesma da família Ericaceae.
54. Método, de acordo com a reivindicação 53, CARACTERIZADO pelo fato de que a planta, a semente ou o produto da mesma é uma planta, uma semente, uma flor ou um produto da mesma da família Ericaceae que pertence ao gênero Vaccinium.
55. Método, de acordo com a reivindicação 54, CARACTERIZADO pelo fato de que a planta, a semente, a flor ou o produto da mesma do gênero Vaccinium é um mirtilo.
56. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49-52, CARACTERIZADO pelo fato de que a planta, a semente, a flor ou o produto da mesma é uma planta, uma semente, uma flor ou um produto da mesma da família Vitaceae.
57. Método, de acordo com a reivindicação 56, CARACTERIZADO pelo fato de que a planta, a semente, a flor ou o produto da mesma é uma planta, uma semente ou um produto da mesma da família Vitaceae que pertence ao gênero Vitis.
58. Método, de acordo com a reivindicação 57, CARACTERIZADO pelo fato de que a planta, a semente, a flor ou o produto da mesma do gênero Vitis é uma uva.
59. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49-52, CARACTERIZADO pelo fato de que a planta, a semente, a flor ou o produto da mesma é uma planta, uma semente ou um produto da mesma da família Rosaceae.
60. Método, de acordo com a reivindicação 59, CARACTERIZADO pelo fato de que a planta, a semente, a flor ou o produto da mesma da família Rosaceae pertence ao gênero Rubus, Malus, Pyrus, Cydonia, Prunus, Rosa ou Fragaria.
61. Método, de acordo com a reivindicação 60, CARACTERIZADO pelo fato de que a planta, a semente, a flor ou o produto da mesma do gênero Rubus é uma framboesa ou amora.
62. Método, de acordo com a reivindicação 60, CARACTERIZADO pelo fato de que a planta, a semente, a flor ou o produto da mesma do gênero Fragaria é um morango.
63. Método, de acordo com a reivindicação 60, CARACTERIZADO pelo fato de que a planta, a semente, a flor ou o produto da mesma do gênero Pyrus é uma pera.
64. Método, de acordo com a reivindicação 60, CARACTERIZADO pelo fato de que a planta, a semente, a flor ou o produto da mesma do gênero Cydonia é um marmelo.
65. Método, de acordo com a reivindicação 60, CARACTERIZADO pelo fato de que a planta, a semente, a flor ou o produto da mesma do gênero Prunus é uma amêndoa, um pêssego, uma ameixa, um damasco, uma cereja ou um abrunho.
66. Método, de acordo com a reivindicação 60, CARACTERIZADO pelo fato de que a planta, a semente, a flor ou o produto da mesma do gênero Rosa é uma rosa.
67. Método, de acordo com a reivindicação 60, CARACTERIZADO pelo fato de que a planta, a semente, a flor ou o produto da mesma pertencente ao gênero Malus é uma maçã.
68. Método, de acordo com a reivindicação 49, CARACTERIZADO pelo fato de que a aplicação da composição de biocontrole compreende espanar, imergir, rolar, injetar, esfregar, pulverizar ou escovar a planta, a semente, a flor ou o produto com a composição de biocontrole.
69. Método, de acordo com a reivindicação 49, CARACTERIZADO pelo fato de que a aplicação da composição de biocontrole na planta compreende adicionar a composição de biocontrole a uma linha de gotejamento, um sistema de irrigação, um sistema de quimigação, uma pulverização ou uma imersão.
70. Método, de acordo com a reivindicação 49, CARACTERIZADO pelo fato de que a aplicação da composição de biocontrole na planta compreende aplicar a composição de biocontrole a uma raiz da planta.
71. Método, de acordo com a reivindicação 70, CARACTERIZADO pelo fato de que a aplicação à raiz é indireta.
72. Método, de acordo com a reivindicação 49, CARACTERIZADO pelo fato de que a composição de biocontrole é aplicada ao produto após o produto ter sido removido da planta.
73. Método, de acordo com a reivindicação 49, CARACTERIZADO pelo fato de que a aplicação não mata a planta.
74. Método, de acordo com a reivindicação 49, CARACTERIZADO por compreender ainda aplicar à planta um fertilizante, um herbicida, um pesticida, outra composição de biocontrole ou uma combinação dos mesmos.
75. Método, de acordo com a reivindicação 49, CARACTERIZADO pelo fato de que o fertilizante, herbicida, pesticida ou outra composição de biocontrole é aplicado antes, depois ou simultaneamente com a composição de biocontrole.
76. Método, de acordo com a reivindicação 51, CARACTERIZADO pelo fato de que o material de embalagem compreende: tereftalato de polietileno (PET), fibra moldada, poliestireno orientado (OPS), espuma de poliestireno (PS), polipropileno (PP) ou uma combinação dos mesmos.
77. Método, de acordo com a reivindicação 51, CARACTERIZADO pelo fato de que a aplicação a um material de embalagem compreende lavar ou impregnar o material de embalagem.
78. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49-52, CARACTERIZADO pelo fato de que a atividade antifúngica é a prevenção do crescimento do fungo patogênico por, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, or 20 dias.
79. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49-52, CARACTERIZADO que a atividade antifúngica é o crescimento reduzido do fungo patogênico na planta, na semente, na flor ou no produto da mesma em relação ao crescimento do fungo patogênico em um controle que é uma planta ou um produto da mesma da família Rosaceae não exposto à composição de biocontrole.
80. Método, de acordo com a reivindicação 79, CARACTERIZADO pelo fato de que o crescimento do fungo patogênico é reduzido por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 dias após a exposição do fungo patogênico à composição de biocontrole em relação ao crescimento do fungo patogênico na planta, na semente, na flor ou no produto da mesma não exposto à composição de biocontrole.
81. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49-52, CARACTERIZADO pelo fato de que a composição de biocontrole tem atividade antifúngica contra um fungo patogênico filamentoso ou não filamentoso.
82. Método, de acordo com a reivindicação 81, CARACTERIZADO pelo fato de que o fungo patogênico filamentoso ou não filamentoso é selecionado do grupo que consiste em: Albugo candida, Albugo occidentalis, Alternaria alternata, Alternaria cucumerina, Alternaria dauci, Alternaria solani Alternaria tenuis, Alternaria tenuissima,
Alternaria tomatophila,, Aphanomyces euteiches, Aphanomyces raphani, Armillaria mellea, Botrydia theobromae, Botrytis cinerea, Botrytinia fuckeliana, Bremia lactuca,
Cercospora beticola, Cercosporella rubi, Cladosporium herbarum, Colletotrichum acutatum, Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum lindemuthianum,
Colletotrichum musae, Colletotrichum spaethanium, Cordana musae, Corynespora cassiicola, Daktulosphaira vitifoliae, Didymella bryoniae, Elsinoe ampelina, Elsinoe mangiferae, Elsinoe veneta, Erysiphe cichoracearum, Erysiphe necator, Eutypa lata,
Fusarium germinareum, Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Ganoderma boninense, Guignardia bidwellii, Gymnoconia peckiana, Helminthosporium solani,
Leptosphaeria coniothyrium, Leptosphaeria maculans, Leveillula taurica,
Macrophomina phaseolina, Microsphaera alni, Monilinia fructicola, Monilinia vaccinii-
corymbosi, Mycosphaerella angulate, Mycosphaerella brassicicola, Mycosphaerella fragariae, Mycosphaerella fijiensis, Oidopsis taurica, Passalora fulva, Peronospora sparse, Peronospora farinosa, Phoma exigua, Phomopsis obscurans, Phomopsis vaccinia, Phomopsis viticola, Phytophthora capsica, Phytophthora erythroseptica,
Phytophthora infestans, Phytophthora parasitica, Plasmopara viticola,
Plasmodiophora brassicae, Podosphaera macularis, Polyscytalum pustulans,
Pseudocercospora vitis, Puccinia allii, Puccinia sorghi, Pucciniastrum vaccinia,
Pythium debaryanum, Pythium sulcatum, Pythium ultimum, Ralstonia solanacearum,
Ramularia tulasneii, Rhizoctonia solani, Rhizopus arrhizus, Rhizopus stoloniferz,
Sclerotinia minor, Sclerotinia sclerotiorum, Sclerotium cepivorum, Sclerotium rolfsii,
Sclerotinia minor, Sclerotinia sclerotiorum, Septoria apiicola, Septoria lactucae,
Septoria lycopersici, Septoria petroelini, Sphaceloma perseae, Sphaerotheca macularis, Spongospora subterrannea, Stemphylium vesicarium, Synchytrium endobioticum, Thielaviopsis basicola, Uncinula necator, Uromyces appendiculatus,
Uromyces betae, Verticillium albo-atrum, Verticillium dahliae, Verticillium theobromae,
e qualquer combinação dos mesmos.
83. Método, de acordo com a reivindicação 81, CARACTERIZADO pelo fato de que o fungo patogênico filamentoso é selecionado do grupo que consiste em: Fusarium oxysporum, Verticillium dahliae, Botrytis cinerea, Colletotrichum spaethaniu, Erysiphe necator, Podosphaera macularis, Monilinia vaccinii-corymbosi, Puccinia sorghi e qualquer combinação dos mesmos.
84. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49-52, CARACTERIZADO pelo fato de que a planta, a semente ou o produto da mesma é selecionado a partir do grupo que consiste em: amêndoa, damasco, maçã, alcachofra, banana, cevada, beterraba, amora, mirtilo, brócolis, couve-de-bruxelas, repolho, cannabis, pimenta, cenoura, aipo, acelga, cereja, frutas cítricas, milho, frutos das curcubitáceas, tâmara, figo, alho, uva, erva, especiarias, couve, alface, óleo de palma, azeitona, cebola, ervilha, pera, pêssego, amendoim, mamão papaia, pastinaca, noz pecan, caqui, ameixa, romã, batata, marmelo, rabanete, framboesa, rosa, arroz, abrunho, sorgo, soja, espinafre, morango, batata-doce, tabaco, tomate, folhas de nabo, nozes e trigo.
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