BR112020012702A2

BR112020012702A2 - kit and process for detection of immunoglobulins and and immunoglobulins g1

Info

Publication number: BR112020012702A2
Application number: BR112020012702-7A
Authority: BR
Inventors: Marília Porto Oliveira Nunes; Maria Izabel Florindo Guedes; Eridan Orlando Pereira Tramontina Florean; Maurício Fraga Van Tiuburg
Original assignee: Fundação Universidade Estadual Do Ceará - Funece; Greenbean Biotecnologia Ltda Me
Priority date: 2017-12-20
Filing date: 2018-06-29
Publication date: 2020-11-24
Also published as: WO2019119087A1

Abstract

A presente invenção tem por objetivo o diagnóstico de reações alérgicas por meio detecção de Imunoglobulinas IgE e IgG1 específicas para alimentos in natura, alimentos industrializados, aditivos alimentares e medicamentos. O teste é específico, não invasivo, fidedigno em seus resultados, de rápido resultado, o qual em um único teste podem ser testados vários alérgenos, além de ser de fácil acesso e baixo custo, não necessitando de jejum e podendo ser aplicado em pessoas de qualquer idade. A presente invenção se situa no campo da medicina e farmácia, enfermagem, nutrição, biomedicina e bioengenharia, mais especificamente, a análise de material biológico.The present invention aims to diagnose allergic reactions by detecting specific IgE and IgG1 immunoglobulins for fresh foods, processed foods, food additives and medications. The test is specific, non-invasive, reliable in its results, of fast result, which in a single test can be tested several allergens, besides being easy to access and low cost, not requiring fasting and can be applied to people of any age. The present invention is located in the field of medicine and pharmacy, nursing, nutrition, biomedicine and bioengineering, more specifically, the analysis of biological material.

Description

Relatório Descritivo de Criação IndustrialIndustrial Creation Descriptive Report

KIT E PROCESSO PARA DETECÇÃO DE IMUNOGLOBULINAS E E IMUNOGLOBULINAS G1 Campo da InvençãoKIT AND PROCESS FOR IMMUNOGLOBULIN AND IMMUNOGLOBULIN DETECTION G1 Field of the Invention

[0001] A presente invenção refere-se à detecção de Imunoglobulinas E (IgE) e Imunoglobulinas G1 (IgG1) específicas em amostras biológicas, utilizando a técnica ELISA indireta. A presente invenção se situa no campo da medicina e farmácia, enfermagem, nutrição, biomedicina e bioengenharia, mais especificamente, a análise de material biológico.[0001] The present invention relates to the detection of specific Immunoglobulins (IgE) and Immunoglobulins G1 (IgG1) in biological samples, using the indirect ELISA technique. The present invention is located in the field of medicine and pharmacy, nursing, nutrition, biomedicine and bioengineering, more specifically, the analysis of biological material.

Antecedentes da InvençãoBackground of the Invention

[0002] A alergia alimentar (AA) é um problema de saúde pública que apresentou um crescimento nas últimas décadas, provavelmente devido à maior exposição da população a um número maior de alérgenos alimentares disponíveis, como também o acesso mais fácil a esses alimentos. Ela vem se tornando um problema de saúde pública em todo o mundo e está associada a um impacto negativo significativo na qualidade de vida (CHARLES et al, 2011).[0002] Food allergy (AA) is a public health problem that has grown in recent decades, probably due to the greater exposure of the population to a greater number of food allergens available, as well as easier access to these foods. It has become a public health problem worldwide and is associated with a significant negative impact on quality of life (CHARLES et al, 2011).

[0003] A AA é mais comum em crianças, estima-se uma prevalência de aproximadamente 6% a 8% em menores de três anos e de 3,5% em adultos. Esta maior prevalência na infância pode ser principalmente devido ao sistema imunológico não apresentar sua maturação completa (BATISTA; FREITAS; HAACK, 2009).[0003] AA is more common in children, with a prevalence of approximately 6% to 8% in children under three years of age and 3.5% in adults. This higher prevalence in childhood may be mainly due to the immune system not showing its full maturation (BATISTA; FREITAS; HAACK, 2009).

[0004] Apesar das diferenças de culinárias regionais, existem dados de prevalência mundial que responsabilizam um grupo de oito alimentos que causam de 80 a 90% das reações alérgicas, entre eles estão o leite, ovo, soja, trigo, peixes, frutos do mar, amendoim e castanhas (SAMPSON et al, 2011), no Brasil o milho pode ser incluído neste grupo, por ser muito utilizado na alimentação brasileira (PALMA et al, 2009).[0004] Despite the differences in regional cuisines, there are data of global prevalence that blame a group of eight foods that cause 80 to 90% of allergic reactions, among them are milk, egg, soy, wheat, fish, seafood , peanuts and chestnuts (SAMPSON et al, 2011), in Brazil corn can be included in this group, as it is widely used in Brazilian food (PALMA et al, 2009).

[0005] Estudos realizados na Inglaterra e Estados Unidos (EUA), têm demonstrado que a alergia ao amendoim dobrou na última década em crianças, e que a tolerância ocorre em 20% dos casos por volta dos 5 anos de idade. Já os adultos apresentaram mais alergia a mariscos (2%), seguido pelo amendoim (0,6%), castanha (0,5%) e peixe (0,4%). As reações alérgicas a frutas e vegetais não são consideradas severas, porém cerca de 5% da população desse estudo são alérgicas (SICHERER, 2011). Por volta de 35% das crianças com dermatite atópica, moderada e grave, apresentaram alergia alimentar mediada pela IgE e em de 6% à 8% das crianças asmáticas têm manifestações alérgicas induzidas por alimentos (HALKEN, 2003; BARAL; MANDAL; CHATTOPADHYAY, 2005). Além disso, a AA parece ser a causa mais importante de anafilaxia fora dos hospitais levando ao atendimento de cerca de 30 casos tratados nas emergências hospitalares a cada ano nos EUA (SAMPSON, 2005).[0005] Studies conducted in England and the United States (USA), have shown that peanut allergy has doubled in the last decade in children, and that tolerance occurs in 20% of cases around 5 years of age. The adults were more allergic to shellfish (2%), followed by peanuts (0.6%), nuts (0.5%) and fish (0.4%). Allergic reactions to fruits and vegetables are not considered severe, however, about 5% of the population in this study are allergic (SICHERER, 2011). Around 35% of children with atopic dermatitis, moderate and severe, had IgE-mediated food allergy and in 6% to 8% of asthmatic children have food-induced allergic manifestations (HALKEN, 2003; BARAL; MANDAL; CHATTOPADHYAY, 2005 ). In addition, AA appears to be the most important cause of anaphylaxis outside of hospitals leading to the care of about 30 cases treated in hospital emergencies each year in the USA (SAMPSON, 2005).

[0006] A identificação e a eliminação das proteínas alergênicas da dieta devem levar à resolução dos sintomas. Na criança, o alimento considerado maior responsável pela AA são as proteínas do leite de vaca (2,5%), seguido pelas proteínas do ovo (1,3%), amendoim (0,8%), trigo (0,4%), castanhas (0,2%), peixes (0,1%) e mariscos (0,1%) (SICHERER, SAMPSON, 2006), e a alergia a aditivos alimentares (corantes, conservantes, edulcorantes, espessantes, etc.) são responsáveis por menos de 1% dos casos (GAZOLA, 2008).[0006] The identification and elimination of allergenic proteins from the diet should lead to resolution of symptoms. In children, the food considered most responsible for AA is cow's milk proteins (2.5%), followed by egg proteins (1.3%), peanuts (0.8%), wheat (0.4%) ), nuts (0.2%), fish (0.1%) and seafood (0.1%) (SICHERER, SAMPSON, 2006), and allergy to food additives (dyes, preservatives, sweeteners, thickeners, etc. ) are responsible for less than 1% of cases (GAZOLA, 2008).

[0007] Diversas pesquisas têm sido desenvolvidas objetivando incrementar o diagnóstico de alergia para que seja rápido, de baixo custo e eficaz, já que a população infantil é a mais afetada, levando a um fator negativo na qualidade de vida tanto dos pacientes quando dos familiares envolvidos.[0007] Several researches have been developed aiming to increase the diagnosis of allergy so that it is fast, low cost and effective, since the child population is the most affected, leading to a negative factor in the quality of life of both patients and family members. involved.

[0008] Mesmo com o avanço dos conhecimentos atuais sobre os mecanismos alérgicos, e com a variedade existente de métodos in vivo e in vitro para o diagnóstico nessa área (ASBAI, 2009), a investigação laboratorial das doenças alérgicas pode ser uma tarefa difícil tanto para médicos quanto para profissionais da área da saúde. No entanto, o diagnóstico correto da alergia alimentar é fundamental para o tratamento adequado e para que não se instituam dietas desnecessárias (CHEHADE; MAYER, 2005).[0008] Even with the advancement of current knowledge about allergic mechanisms, and with the existing variety of in vivo and in vitro methods for diagnosis in this area (ASBAI, 2009), laboratory investigation of allergic diseases can be a difficult task both for doctors and health professionals. However, the correct diagnosis of food allergy is essential for proper treatment and for avoiding unnecessary diets (CHEHADE; MAYER, 2005).

[0009] A determinação de IgE total costuma ser solicitada na investigação de alergia, porém numerosos fatores (predisposição genética, sexo, idade, infecções, poluição e tabagismo) contribuem para variação do nível sérico de IgE e devem ser considerados para a sua interpretação correta. O nível sérico de IgE total é detectado por ensaio imunoenzimático (ELISA) mostrando resultados quantitativos e é variável de acordo com a idade, sendo indetectável no neonato e atingindo concentrações máximas em adultos jovens (ASBAI, 2009).[0009] The determination of total IgE is usually requested in the investigation of allergy, however numerous factors (genetic predisposition, sex, age, infections, pollution and smoking) contribute to variation in the serum level of IgE and must be considered for its correct interpretation . The serum level of total IgE is detected by immunoenzymatic assay (ELISA) showing quantitative results and is variable according to age, being undetectable in the neonate and reaching maximum concentrations in young adults (ASBAI, 2009).

[0010] Vale ressaltar que o nível de IgE elevado não indica a presença de doença alérgica, pois avalia apenas sua quantidade momentânea e não especifica o antígeno causador das manifestações. Os resultados elevados de IgE também podem estar associados à parasitoses intestinais ou cutâneas, mieloma, síndrome de hiper-IgE, entre outras (BOYCE et al, 2010).[0010] It is worth mentioning that the elevated IgE level does not indicate the presence of allergic disease, as it evaluates only its momentary quantity and does not specify the antigen that causes the manifestations. Elevated IgE results may also be associated with intestinal or cutaneous parasitosis, myeloma, hyper-IgE syndrome, among others (BOYCE et al, 2010).

[0011] Outro dado importante a ser destacado é que os testes in vitro apresentam algumas desvantagens em relação ao custo, tempo de execução e sensibilidade para alguns alérgenos. Porém são considerados a melhor alternativa para pacientes em uso de anti-histamínicos, pós-quadro de anafilaxia (até 6 semanas), quando não há disponibilidade de certos extratos em testes cutâneos, quando há risco de reações sistêmicas, dentre outros (ASBAI, 2009).[0011] Another important fact to be highlighted is that the in vitro tests have some disadvantages in relation to the cost, time of execution and sensitivity for some allergens. However, they are considered the best alternative for patients using antihistamines, after anaphylaxis (up to 6 weeks), when certain extracts are not available in skin tests, when there is a risk of systemic reactions, among others (ASBAI, 2009 ).

[0012] Importante destacar que o teste hoje considerado padrão ouro é o teste de provocação oral (PAYOT et al, 2013), o qual consiste na oferta de alimentos em doses crescentes e em intervalos regulares, sob supervisão médica, com monitoramento das reações clínicas possíveis. Entretanto é um método invasivo, custo elevado, requer ambiente hospitalar para sua realização já que pode levar o paciente a um quadro anafilático. Outro fator a ser mencionado, é por esse método consistir da ingestão gradativa do alérgeno pelo paciente, este apresentará reações alérgicas levando a um desconforto imediato (WANG, SAMPSON, 2011).[0012] It is important to highlight that the test today considered the gold standard is the oral provocation test (PAYOT et al, 2013), which consists of offering food in increasing doses and at regular intervals, under medical supervision, with monitoring of clinical reactions possible. However, it is an invasive method, high cost, requires a hospital environment for its performance since it can lead the patient to an anaphylactic condition. Another factor to be mentioned is that this method consists of the gradual ingestion of the allergen by the patient, who will present allergic reactions leading to immediate discomfort (WANG, SAMPSON, 2011).

[0013] Outros métodos sorológicos vêm sendo estudados no sentido de confirmar o diagnóstico de AA, já que hoje os testes encontrados são feitos com o sangue ou na pele do paciente e necessitam de vários parâmetros para um diagnóstico mais fidedigno, pois com a utilização de apenas 1 deles não se pode dar diagnóstico de alergia (SOLÉ et al, 2012).[0013] Other serological methods have been studied in order to confirm the diagnosis of AA, since today the tests found are done with the patient's blood or skin and need several parameters for a more reliable diagnosis, because with the use of only 1 of them cannot be diagnosed with allergy (SOLÉ et al, 2012).

[0014] Na busca pelo estado da técnica em literaturas científica e patentária, foram encontrados os seguintes documentos que tratam sobre o tema:[0014] In the search for the state of the art in scientific and patent literature, the following documents dealing with the topic were found:

[0015] O documento de AMADO. L. A. Saliva como espécime clínico para o estudo da hepatite A: aplicações no diagnóstico, na epidemiologia molecular e na patogênese. 2010. 148f. Tese (Doutorado em Biologia Parasitária) - Fundação Oswaldo Cruz, Instituto Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, RJ, 2010, revela a aplicabilidade das amostras de saliva para o diagnóstico da hepatite A através da detecção de anti-HAV IgM.[0015] The AMADO document. L. A. Saliva as a clinical specimen for the study of hepatitis A: applications in diagnosis, molecular epidemiology and pathogenesis. 2010. 148f. Thesis (PhD in Parasitic Biology) - Oswaldo Cruz Foundation, Oswaldo Cruz Institute, Rio de Janeiro, RJ, 2010, reveals the applicability of saliva samples for the diagnosis of hepatitis A through the detection of anti-HAV IgM.

[0016] O documento de Liu J, Duan Y. Saliva: A mídia potencial para diagnóstico de doenças e monitoramento. Oncologia Oral. 2012; 48: 569-577, revela o diagnóstico de câncer bucal através detecção eletroquímica de proteínas salivares e ácidos nucleicos.[0016] The document by Liu J, Duan Y. Saliva: The potential media for disease diagnosis and monitoring. Oral Oncology. 2012; 48: 569-577, reveals the diagnosis of oral cancer through electrochemical detection of salivary proteins and nucleic acids.

[0017] O documento de Oliveira S. A. et al, Diagnosis of rubella infection by detecting specific immunoglobulin M antibodies in saliva samples: a clinic based study in Niterói, RJ, Brazil. Ver Soc Bras Med Trop. 2000; 33 (4): 335-339, revela o diagnóstico de rubéola através detecção da imunoglobulina M.[0017] The document by Oliveira S. A. et al, Diagnosis of rubella infection by detecting specific immunoglobulin M antibodies in saliva samples: a clinic based study in Niterói, RJ, Brazil. See Soc Bras Med Trop. 2000; 33 (4): 335-339, reveals the diagnosis of rubella by detecting immunoglobulin M.

[0018] O documento de Berroterán A et al. Prevalecía de Helicobacter pylori em amostras de placa dental de um grupo de pacientes venezuelanos, mediante técnica de PCR. Acta Odontol Venez 2002; 40 (2):2002, revela o diagnóstico da infecção por Helicobacter pylori através detecção do DNA da bactéria pela técnica do PCR.[0018] The document by Berroterán A et al. Helicobacter pylori prevalence in dental plaque samples from a group of Venezuelan patients, using PCR technique. Acta Odontol Venez 2002; 40 (2): 2002, reveals the diagnosis of Helicobacter pylori infection by detecting the bacterium's DNA using the PCR technique.

[0019] O documento de Rujner j. et al, Séricos antigliadina e IgA salivar e anticorpos anti-endomísio soro como teste de triagem para a doença celíaca, Acta Pediatr 1996; 85: 814-7, revela o diagnóstico de doença celíaca através detecção da IgA salivar gliadina.[0019] The document by Rujner j. et al, Sera antigliadin and salivary IgA and anti-endomysium antibodies serum as a screening test for celiac disease, Acta Pediatr 1996; 85: 814-7, reveals the diagnosis of celiac disease by detecting salivary IgA gliadin.

[0020] O documento de Mortimer P. P.; Parry J. V., Detection of antibody to HIV in saliva: a brief review Clin. Diagn. Virol, Agosto 1994; 2 (4-5): 231-43 (doi: doi:10.1016/0928-0197(94)90048-5), revela o diagnóstico de HIV através detecção da IgG salivar.[0020] The document by Mortimer P. P .; Parry J. V., Detection of antibody to HIV in saliva: a brief review Clin. Diagn. Virol, August 1994; 2 (4-5): 231-43 (doi: doi: 10.1016 / 0928-0197 (94) 90048-5), reveals the diagnosis of HIV through the detection of salivary IgG.

[0021] O documento de Mortimer P. P.; Parry J. V., Detection of antibody to HIV in saliva: a brief review Clin. Diagn. Virol., Agosto 1994; 2 (4-5): 231-43 (doi: doi:10.1016/0928-0197(94)90048-5), revela o diagnóstico de alergia alimentar através detecção de IgE total e específico bem como IgG específico no soro de pacientes pelo ensaio imunoenzimático.[0021] The document by Mortimer P. P .; Parry J. V., Detection of antibody to HIV in saliva: a brief review Clin. Diagn. Virol., August 1994; 2 (4-5): 231-43 (doi: doi: 10.1016 / 0928-0197 (94) 90048-5), reveals the diagnosis of food allergy through detection of total and specific IgE as well as specific IgG in the serum of patients by immunoenzymatic assay.

[0022] O documento de Carvalho S. et al: ImmunoCAP ISAC®: Tecnologia microarray no estudo da alergia alimentar em contexto de reactividade cruzada. Ver. Port. Imunoalergologia 2010; 18 (4): 331-352, revela o diagnóstico de alergia alimentar através detecção de IgE no soro de pacientes pelo ImmunoCAP®.[0022] The document by Carvalho S. et al: ImmunoCAP ISAC®: Microarray technology in the study of food allergy in the context of cross-reactivity. See. Port. Immunoallergology 2010; 18 (4): 331-352, reveals the diagnosis of food allergy through detection of IgE in the serum of patients by ImmunoCAP®.

[0023] O documento de Ferrer M et al: Molecular diagnosis in Allergology: application of the microarray tecnique. J Investig Allergol Clin Immunol 2009, 19 (1): 19-24, revela o diagnóstico de alergia alimentar através detecção de IgE no soro de pacientes pelo microarray.[0023] The document by Ferrer M et al: Molecular diagnosis in Allergology: application of the microarray tecnique. J Investig Allergol Clin Immunol 2009, 19 (1): 19-24, reveals the diagnosis of food allergy through detection of IgE in the serum of patients by microarray.

[0024] O documento US2011195401 utiliza fluidos corporais para diagnosticar alergia alimentar por meio de um KIT chamado FIXANAL que detecta a presença de das imunoglobulinas IgE e IgG. Diferentemente desse documento, a presente invenção revela um processo para investigar a alergia alimentar, utilizando extratos brutos dos alimentos a serem investigados, por meio da técnica de ELISA, que detecta a presença de imunoglobulinas IgE e IgG1 em amostras biológicas de um paciente.[0024] The document US2011195401 uses body fluids to diagnose food allergy through a KIT called FIXANAL that detects the presence of IgE and IgG immunoglobulins. Unlike this document, the present invention discloses a process to investigate food allergy, using crude extracts from the foods to be investigated, using the ELISA technique, which detects the presence of IgE and IgG1 immunoglobulins in biological samples from a patient.

[0025] O documento RU2442980 utiliza a imunoglobulina IgA na saliva, após 5 dias do contato com o alérgeno, para diagnosticar alergia alimentar através da técnica de ELISA. Diferentemente desse documento, a presente invenção detecta as imunoglobulinas IgE e IgG1 na saliva por meio da técnica de ELISA, podendo ser realizado o exame no mesmo dia do contato com o alérgeno.[0025] Document RU2442980 uses IgA immunoglobulin in saliva, after 5 days of contact with the allergen, to diagnose food allergy using the ELISA technique. Unlike this document, the present invention detects IgE and IgG1 immunoglobulins in saliva using the ELISA technique, and the test can be performed on the same day of contact with the allergen.

[0026] O documento PI0114343-3 revela o diagnóstico de alergia alimentar através detecção de IgE e IgG no sangue de pacientes utilizando a técnica microarray. Diferentemente desse documento, a presente invenção apresenta um processo para detecção de IgE e IgG1 a partir da saliva ou do soro utilizando a técnica de ELISA e extrato bruto dos alimentos investigados.[0026] Document PI0114343-3 reveals the diagnosis of food allergy by detecting IgE and IgG in the blood of patients using the microarray technique. Unlike this document, the present invention presents a process for detecting IgE and IgG1 from saliva or serum using the ELISA technique and crude extract from the investigated foods.

[0027] O documento WO2016094961 revela o diagnóstico de alergia alimentar através da técnica Methylation Patter que detecta regiões/genes metilados no DNA de diversos fluidos corporais, tendo a saliva como um deles. Esta patente não realiza ensaios imunoenzimáticos e por isso não detecta imunoglobulinas, o que a torna diferente da presente invenção, que provê uma investigação da alergia alimentar por meio da detecção das imunoglobulinas IgE e IgG1 na saliva e no soro do paciente, utilizando a técnica de ELISA e o extrato bruto dos alimentos investigados.[0027] The document WO2016094961 reveals the diagnosis of food allergy through the Methylation Patter technique that detects regions / genes methylated in the DNA of several body fluids, with saliva as one of them. This patent does not perform immunoenzymatic assays and therefore does not detect immunoglobulins, which makes it different from the present invention, which provides an investigation of food allergy through the detection of IgE and IgG1 immunoglobulins in the patient's saliva and serum, using the technique of ELISA and the crude extract of the investigated foods.

[0028] O documento US2014315749 revela o diagnóstico de alergia alimentar através da detecção de linfócitos B em fluidos corporais com a técnica de citometria de fluxo. Diferentemente desse documento, a presente invenção realiza a investigação de alergia alimentar em pacientes por meio da detecção das imunoglobulinas IgE e IgG1 na saliva utilizando extrato bruto dos alimentos investigados e a técnica de ELISA.[0028] The document US2014315749 reveals the diagnosis of food allergy through the detection of B lymphocytes in body fluids with the flow cytometry technique. Unlike this document, the present invention performs the investigation of food allergy in patients by detecting IgE and IgG1 immunoglobulins in saliva using crude extract from the investigated foods and the ELISA technique.

[0029] Assim, do que se depreende da literatura pesquisada, não foram encontrados documentos antecipando ou sugerindo os ensinamentos da presente invenção, de forma que a solução aqui proposta possui novidade e atividade inventiva frente ao estado da técnica.[0029] Thus, from what can be inferred from the researched literature, no documents were found anticipating or suggesting the teachings of the present invention, so that the solution proposed here has novelty and inventive activity in view of the state of the art.

[0030] Não obstante, em vista dos métodos atuais utilizados para a investigação de sinalizadores fisiológicos de alergias alimentares em pacientes, não exaustivamente, destaca-se o problema constante no estado da técnica de alguns processos serem invasivos (coleta de sangue), e necessitarem a repetição dos testes, o que pode causar dor e desconforto ao paciente investigado, tornando um problema principalmente quando se trata de um público infantil; além disso os outros processos não invasivos, não permitirem o detecção de sinalizadores fisiologicos de alergia alimentar, utilizando extratos brutos dos alimentos investigados, por meio da técnica de ELISA que detecta a presença das imunoglobulinas Ige e IgG1 na saliva e no soro.[0030] However, in view of the current methods used for the investigation of physiological signaling of food allergies in patients, not exhaustively, the constant problem in the state of the art of some processes is invasive (blood collection), and requires the repetition of tests, which can cause pain and discomfort to the investigated patient, making it a problem especially when it comes to a child audience; in addition, the other non-invasive processes do not allow the detection of physiological signals of food allergy, using crude extracts from the investigated foods, using the ELISA technique that detects the presence of the immunoglobulins Ige and IgG1 in saliva and serum.

[0031] Outro ponto importante, é que nos testes existentes atualmente há necessidade de jejum por de 8 horas em crianças aproximadamente e 4 horas em adultos, o que muitas vezes causam angústia, ansiedade e/ou tristeza aos candidatos a serem investigados, assim como os pais destes (no caso de crianças).[0031] Another important point is that in the existing tests currently there is a need for fasting for approximately 8 hours in children and 4 hours in adults, which often cause distress, anxiety and / or sadness to the candidates to be investigated, as well as their parents (in the case of children).

Sumário da InvençãoSummary of the Invention

[0032] Desta forma, a presente invenção tem por objetivo resolver os problemas constantes no estado da técnica a partir do desenvolvimento do desenvolvimento de um método detectar Imunoglobulinas IgE e IgG1 específicas para alimentos, envolvendo a técnica de ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) de forma não invasivo, mais fidedigno em seus resultados, de rápido resultado, em um único teste podem ser testados vários alimentos. Além disso, o método descrito não requer que o paciente esteja de jejum e pode ser aplicado em qualquer idade.[0032] Thus, the present invention aims to solve the constant problems in the state of the art from the development of a method to detect IgE and IgG1 immunoglobulins specific for food, involving the ELISA technique (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) in a non-invasive way, more reliable in its results, of quick result, in a single test, several foods can be tested. In addition, the method described does not require the patient to be fasting and can be applied at any age.

[0033] Em um primeiro objeto a presente invenção descreve um kit para detecção de imunoglobulinas E e imunoglobulinas G1, compreendendo (1) um coletor de saliva, (2) componentes para preparar um extrato de alimentos; em que o dito componente (2), deve apresentar pelo menos um PBS 1X, em que o PBS 1X é composto por cloreto de sódio, fosfato de potássio dibásico, fosfato de sódio dibásico e água destilada.[0033] In a first object the present invention describes a kit for detecting E immunoglobulins and G1 immunoglobulins, comprising (1) a saliva collector, (2) components for preparing a food extract; wherein said component (2) must have at least one PBS 1X, where PBS 1X is composed of sodium chloride, dibasic potassium phosphate, dibasic sodium phosphate and distilled water.

[0034] Em um segundo objeto a presente invenção descreve um processo para detecção de imunoglobulinas E e imunoglobulinas G1, executado em um ensaio imunoenzimático indireto (ELISA), tendo seus resultados coletados e compreendendo os componentes: - um antígeno, em o dito antígeno é obtido a partir de um alimento ou medicamento que podem ocasionar alergias;[0034] In a second object, the present invention describes a process for the detection of immunoglobulins E and immunoglobulins G1, performed in an indirect immunoenzymatic assay (ELISA), having its results collected and comprising the components: - an antigen, in which said antigen is obtained from a food or medicine that can cause allergies;

- amostra biológica, em que a dita amostra biológica selecionada entre soro ou saliva; em que a análise dos resultados, envolve uma análise da absorbâncias obtida no final do ensaio imunoenzimático indireto realizado, para determinação dos valores de imunoglobulinas E e imunoglobulinas G1, em que o resultado positivo para alergia é identificado por um valor de absorbância maior que o ponto de corte, em que pelo ponto de corte ser definido através uma análise estatística da soma da média das absorbâncias das amostras de controle negativo, com adição de três vezes o desvio padrão.- biological sample, in which said biological sample selected from serum or saliva; where the analysis of the results involves an analysis of the absorbances obtained at the end of the indirect immunoenzymatic assay performed, to determine the values of immunoglobulins E and immunoglobulins G1, in which the positive result for allergy is identified by an absorbance value greater than the point cutoff, in which the cutoff point is defined by means of a statistical analysis of the sum of the mean of the absorbances of the negative control samples, with the addition of three times the standard deviation.

[0035] Ainda, o conceito inventivo comum a todos os contextos de proteção reivindicados é a detecção de imunoglobulinas E e imunoglobulinas G1, para a investigação reações alérgicas de alimentos.[0035] Still, the inventive concept common to all the protection contexts claimed is the detection of immunoglobulins E and immunoglobulins G1, for the investigation of food allergic reactions.

[0036] Este e outros objetos da invenção serão imediatamente valorizados pelos versados na arte e pelas empresas com interesses no segmento, e serão descritos em detalhes suficientes para sua reprodução na descrição a seguir.[0036] This and other objects of the invention will be immediately valued by those skilled in the art and by companies with interests in the segment, and will be described in sufficient detail for their reproduction in the description below.

Breve Descrição das FigurasBrief Description of the Figures

[0037] A Figura 1 mostra um teste “Enzyme linked immunossorbent assay” (ELISA) com soro de crianças alérgicas e não alérgicas na diluição de 1:100, revelando a presença de IgE para as proteínas dos alimentos (milho, mamão, leite de vaca, clara de ovo, soja, amendoim) no grupo dos pacientes alérgicos quando comparados aos não alérgicos.[0037] Figure 1 shows an “Enzyme linked immunossorbent assay” (ELISA) test with serum from allergic and non-allergic children at a 1: 100 dilution, revealing the presence of IgE for food proteins (corn, papaya, cow, egg white, soy, peanut) in the group of allergic patients when compared to non-allergic patients.

[0038] A Figura 2 mostra um teste “Enzyme linked immunossorbent assay” (ELISA) com soro de crianças alérgicas e não alérgicas na diluição de 1:100, revelando a presença de IgG1 para as proteínas dos alimentos (milho, mamão, leite de vaca, clara de ovo, soja, amendoim) no grupo dos pacientes alérgicos quando comparados aos não alérgicos.[0038] Figure 2 shows an “Enzyme linked immunossorbent assay” (ELISA) test with serum from allergic and non-allergic children at a 1: 100 dilution, revealing the presence of IgG1 for food proteins (corn, papaya, cow, egg white, soy, peanut) in the group of allergic patients when compared to non-allergic patients.

[0039] A Figura 3 mostra um Teste “Enzyme linked immunossorbent assay” (ELISA) com saliva de crianças alérgicas e não alérgicas na diluição de 1:100,[0039] Figure 3 shows an “Enzyme linked immunossorbent assay” (ELISA) test with saliva from allergic and non-allergic children at a 1: 100 dilution,

revelando a presença de IgE para as proteínas dos alimentos (milho, mamão, leite de vaca, clara de ovo, soja, amendoim) no grupo dos pacientes alérgicos quando comparados aos não alérgicos.revealing the presence of IgE for food proteins (corn, papaya, cow's milk, egg white, soy, peanuts) in the group of allergic patients when compared to non-allergic patients.

[0040] A Figura 4 mostra uma comparação dos testes “Enzyme linked immunossorbent assay” (ELISA) com soro e saliva de crianças na diluição de 1:100, revelando a detecção da presença de IgE para as proteínas dos alimentos (milho, mamão, leite de vaca, clara de ovo, soja, amendoim) no grupo dos pacientes alérgicos.[0040] Figure 4 shows a comparison of the “Enzyme linked immunossorbent assay” (ELISA) tests with children's serum and saliva at a 1: 100 dilution, revealing the detection of the presence of IgE for food proteins (corn, papaya, cow's milk, egg white, soy, peanuts) in the group of allergic patients.

[0041] A Figura 5 mostra uma comparação dos testes “Enzyme linked immunossorbent assay” (ELISA) com soro e saliva de crianças na diluição de 1:100, revelando a detecção da presença de IgG1 para as proteínas dos alimentos (milho, mamão, leite de vaca, clara de ovo, soja, amendoim) no grupo dos pacientes alérgicos.[0041] Figure 5 shows a comparison of the “Enzyme linked immunossorbent assay” (ELISA) tests with children's serum and saliva at a 1: 100 dilution, revealing the detection of the presence of IgG1 for food proteins (corn, papaya, cow's milk, egg white, soy, peanuts) in the group of allergic patients.

[0042] A Figura 6 mostra uma comparação do Teste “Enzyme linked immunossorbent assay” (ELISA) com soro de crianças na diluição de 1:100, revelando a detecção da presença de IgE e IgG1 específicas para as proteínas dos alimentos (milho, mamão, leite de vaca, clara de ovo, soja, amendoim) no grupo dos pacientes alérgicos.[0042] Figure 6 shows a comparison of the “Enzyme linked immunossorbent assay” (ELISA) test with children's serum at a 1: 100 dilution, revealing the detection of the presence of specific IgE and IgG1 for food proteins (corn, papaya , cow's milk, egg white, soy, peanuts) in the group of allergic patients.

[0043] A Figura 7 mostra uma comparação do Teste “Enzyme linked immunossorbent assay” (ELISA) com saliva de crianças na diluição de 1:100, revelando a detecção da presença de IgE e IgG1 específicas para as proteínas dos alimentos (milho, mamão, leite de vaca, clara de ovo, soja, amendoim) no grupo dos pacientes alérgicos Descrição Detalhada da Invenção[0043] Figure 7 shows a comparison of the “Enzyme linked immunossorbent assay” (ELISA) test with children's saliva at a 1: 100 dilution, revealing the detection of the presence of specific IgE and IgG1 for food proteins (corn, papaya , cow's milk, egg white, soy, peanuts) in the group of allergic patients Detailed Description of the Invention

[0044] A presente invenção refere-se a um processo que utiliza amostra biológica coletadas de candidatos humanos, para a investigação de sinalizadores específicos para alergias alimentares, a partir de testes laboratoriais. Vale ressaltar que uma vez coletada a mostra biológica, o processo aqui descrito não envolve nenhuma outra etapa in vivo. Mais precisamente, a presente invenção descreve o desenvolvimento de processo para detecção de imunoglobulinas E (IgE) e imunoglobulinas G1 (IgG1) de amostras biológicas de candidatos humanos, preferencialmente utilizando a saliva como material biológico. O processo tem com objetivo fomentar a investigação de reações alérgicas alimentares através da presença de IgE e IgG1, utilizando extrato brutos de alimentos, saliva coletada e a técnica de ELISA.[0044] The present invention relates to a process that uses biological samples collected from human candidates, for the investigation of specific flags for food allergies, from laboratory tests. It is worth mentioning that once the biological sample has been collected, the process described here does not involve any other step in vivo. More precisely, the present invention describes the development of a process for the detection of immunoglobulins E (IgE) and immunoglobulins G1 (IgG1) from biological samples from human candidates, preferably using saliva as biological material. The process aims to promote the investigation of food allergic reactions through the presence of IgE and IgG1, using crude food extracts, collected saliva and the ELISA technique.

[0045] As amostras biológicas coletadas na presente invenção podem ser diversas. Sendo que para isso diversos métodos de coletadas de material já conhecidos na técnica podem ser utilizados na presente invenção. Preferencialmente, o material biológico utilizado na presente invenção é a saliva.[0045] The biological samples collected in the present invention can be diverse. For that, several methods of collecting material already known in the art can be used in the present invention. Preferably, the biological material used in the present invention is saliva.

[0046] Entre as vantagens da presente invenção, destaca-se que pelo fato do material biológico ser a saliva, por tal motivo o processo torna-se não invasivo. Interessante dizer que, em outros processos, na fase do diagnóstico de alergia os pacientes podem ter seu sangue coletado inúmeras vezes. Assim, a construção de um teste não invasivo a repetição dos testes poderiam acontecer de uma forma que não causasse dor nem desconforto ao paciente investigado, tornando um argumento importante por se tratar de um maior público infantil. Outro fato importante a mencionar e a presente invenção não necessitara grandes quantidades do material (saliva) para realização do teste, tornando-o mais viável.[0046] Among the advantages of the present invention, it is highlighted that because the biological material is saliva, for this reason the process becomes non-invasive. It is interesting to say that, in other processes, at the stage of allergy diagnosis, patients can have their blood collected numerous times. Thus, the construction of a non-invasive test and the repetition of the tests could happen in a way that would not cause pain or discomfort to the investigated patient, making it an important argument because it is a larger child audience. Another important fact to mention and the present invention will not need large quantities of the material (saliva) to perform the test, making it more viable.

[0047] A presente invenção apresenta uma solução no que refere-se a um processo para investigação de alergia alimentar através da detecção das imunoglobulinas IgE e IgG1 específicas para determinados alimentos. Uma vez que a determinação de IgE total, utilizada nos testes diagósticos existentes atualmente, pode variar com numerosos fatores (predisposição genética, sexo, idade, infecções, poluição e tabagismo) o que não torna os resultados fidedignos. Além disso, os testes diagnóstico atuais, exceto o por provocação oral, só consegue detectar a imunoglobulina E diagnosticando apenas um tipo de alergia (mediada por IgE), ou apenas doenças associadas com sua elevação sérica parasitoses intestinais ou cutâneas, mieloma, síndrome de hiper-IgE, entre outras . Dessa forma, a presente invenção será mais fidedigna por se tratar da detecção de imunoglobulinas especificas, além de conseguir diagnosticar os três tios de alergias existentes (mediada por IgE, não mediada por IgE e mistas) através da detecção da imunoglobulina IgG1, a qual está presente em pessoas alérgicas em geral e não sofrem variações com fatores externos.[0047] The present invention presents a solution with regard to a process for investigation of food allergy through the detection of specific IgE and IgG1 immunoglobulins for certain foods. Since the determination of total IgE, used in the current diagnostic tests, can vary with numerous factors (genetic predisposition, sex, age, infections, pollution and smoking), which does not make the results reliable. In addition, current diagnostic tests, except for oral challenge, can only detect immunoglobulin E by diagnosing only one type of allergy (mediated by IgE), or only diseases associated with its elevated serum intestinal or skin parasitosis, myeloma, hyper syndrome -Ige, among others. Thus, the present invention will be more reliable because it deals with the detection of specific immunoglobulins, in addition to being able to diagnose the three types of existing allergies (IgE-mediated, non-IgE-mediated and mixed) through the detection of IgG1 immunoglobulin, which is present in allergic people in general and do not suffer variations with external factors.

[0048] A tecnologia utilizada na presente invenção é o ensaio imunoenzimático (ELISA) já utilizado atualmente por ser de rápido resultado. Na presente invenção, com apenas um teste é possível investigar a vários alimentos ao mesmos tempo. Além disso, o extrato de alimentos utilizados pode ser em sua forma bruta ou liofilizadas.[0048] The technology used in the present invention is the enzyme immunoassay (ELISA) already used today because it is a fast result. In the present invention, with just one test it is possible to investigate several foods at the same time. In addition, the food extract used can be in its raw form or lyophilized.

[0049] Além da detecção de IgE e IgG1 específicas para alimentos, o teste também pode ser utilizada para o diagnóstico de reações alérgicas causadas por medicamentos (antibióticos como penicilina, dipirona etc).[0049] In addition to detecting food-specific IgE and IgG1, the test can also be used to diagnose allergic reactions caused by medications (antibiotics such as penicillin, dipyrone, etc.).

[0050] Ainda, a presente invenção descreve um para kit diagnóstico, hábil à produção em escala industrial, para possibilitar que o teste esteja presente em hospitais e até mesmo consultórios e Unidades de Saúde, já que a presente invenção será autoexplicativa podendo ser executada por qualquer professional de saúde, o que facilita o diagnóstico de alergia alimentar na população. KIT para Detecção de Imunoglobulinas E e Imunoglobulinas G1[0050] In addition, the present invention describes a diagnostic kit, capable of production on an industrial scale, to enable the test to be present in hospitals and even offices and health units, since the present invention will be self-explanatory and can be performed by any health professional, which facilitates the diagnosis of food allergy in the population. KIT for Detection of Immunoglobulins E and Immunoglobulins G1

[0051] O Kit compreende um coletor de material biológico (1) que tem como objetivo coletar a saliva ou soro para ser analisado. O dito coletor de material biológico (1) pode ter inúmeras formas e estruturas. Preferencialmente, o coletor de material biológico (1) é um coletor de saliva.[0051] The Kit comprises a biological material collector (1) that aims to collect saliva or serum to be analyzed. Said collector of biological material (1) can have numerous shapes and structures. Preferably, the biological material collector (1) is a saliva collector.

[0052] O kit ainda compreende um componente para preparação do antígeno (2), sendo tem a função de tratar um extrato de alimento ou medicamento para prover os antígenos presentes. Para a preparação de um extrato de alimentos, o componente para preparação do antígeno (2) é preferencialmente uma solução PBS, mais preferencialmente é uma solução PBS 1X, em que a dita solução destaca-se por compreender cloreto de sódio, fosfato de potássio dibásico, fosfato de sódio dibásico e água destilada.[0052] The kit also includes a component for the preparation of the antigen (2), and has the function of treating an extract of food or medicine to provide the present antigens. For the preparation of a food extract, the component for preparation of the antigen (2) is preferably a PBS solution, more preferably it is a PBS 1X solution, in which said solution stands out for comprising sodium chloride, dibasic potassium phosphate , dibasic sodium phosphate and distilled water.

[0053] Dessa forma, em um primeiro objeto a presente invenção descreve um kit para detecção de imunoglobulinas E e imunoglobulinas G1, compreendendo coletor de material biológico (1), (componente para preparação do antígeno (2); em que o dito componente (2), compreende um PBS prover antígenos de a partir de um extrato de alimentos, ou um X prover antígenos de a partir de um medicamento.[0053] Thus, in a first object the present invention describes a kit for the detection of immunoglobulins E and immunoglobulins G1, comprising collector of biological material (1), (component for preparation of the antigen (2); wherein said component ( 2), comprises a PBS providing antigens from a food extract, or an X providing antigens from a drug.

[0054] Na invenção, o kit pode ser utilizado junto com um ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) para poder realizar a detecção de imunoglobulinas E e imunoglobulinas G1.[0054] In the invention, the kit can be used together with an indirect enzyme immunoassay (ELISA) to be able to detect immunoglobulins E and immunoglobulins G1.

[0055] Dessa forma, KIT descrito destaca-se para ser utilizado para a execução do processo para detecção de imunoglobulinas E (IgE) e imunoglobulinas G1 (IgG1). Sendo que tal processo é mais bem descrito abaixo. Processo para Detecção de Imunoglobulinas E e Imunoglobulinas G1[0055] Thus, KIT described stands out to be used for the execution of the process for the detection of immunoglobulins E (IgE) and immunoglobulins G1 (IgG1). Such a process is better described below. Process for Detection of Immunoglobulins E and Immunoglobulins G1

[0056] Em um segundo objeto a presente invenção descreve um processo para detecção de imunoglobulinas E e imunoglobulinas G1, executado em um ensaio imunoenzimático indireto (ELISA), tendo seus resultados coletados e compreendendo os componentes: - um antígeno, em o dito antígeno é obtido a partir de um alimento ou medicamento que podem ocasionar alergias; - amostra biológica, em que a dita amostra biológica selecionada entre soro ou saliva; em que a análise dos resultados, envolve uma análise da absorbâncias obtida no final do ensaio imunoenzimático indireto realizado, para determinação dos valores de imunoglobulinas E e imunoglobulinas G1, em que o resultado positivo para alergia é identificado por um valor de absorbância maior que o ponto de corte,[0056] In a second object the present invention describes a process for the detection of E immunoglobulins and G1 immunoglobulins, performed in an indirect immunoenzymatic assay (ELISA), having its results collected and comprising the components: - an antigen, in which said antigen is obtained from a food or medicine that can cause allergies; - biological sample, in which said biological sample selected from serum or saliva; where the analysis of the results involves an analysis of the absorbances obtained at the end of the indirect immunoenzymatic assay performed, to determine the values of immunoglobulins E and immunoglobulins G1, in which the positive result for allergy is identified by an absorbance value greater than the point cutting,

em que pelo ponto de corte ser definido através uma análise estatística da soma da média das absorbâncias das amostras de controle negativo, com adição de três vezes o desvio padrão.in which the cut-off point is defined by means of a statistical analysis of the sum of the mean absorbances of the negative control samples, with the addition of three times the standard deviation.

[0057] Em outra concretização do segundo objeto, o alérgeno é um extrato de alimento selecionado entre: leite de vaca, milho, soja, amendoim, clara de ovo e mamão.[0057] In another embodiment of the second object, the allergen is a food extract selected from: cow's milk, corn, soybeans, peanuts, egg white and papaya.

[0058] Em outra concretização do segundo objeto, a etapa de preparo de ensaio imunoenzimático ELISA indireto, compreende a etapa de sensibilização do ensaio imunoenzimático ELISA indireto com extratos de alergênicos.[0058] In another embodiment of the second object, the stage of preparation of an indirect ELISA immunoenzymatic assay, comprises the sensitization stage of the indirect ELISA immunoenzymatic assay with extracts of allergens.

[0059] Em outra concretização do segundo objeto, o processo compreende as seguintes etapas: i. sensibilização das placas através da adição de 5 µg dos extratos dos alimentos por poço; ii. adição de 100 µl de tampão de carbonato de sódio 50 mM, pH 9,6em cada poço; iii. incubação de pernoite das placas a uma temperatura de 4°C; iv. lavagem das placas com PBS; v. bloqueio, utilizando 200 µL de PBS gelatina à 1% por 2h em uma temperatura de 37 °C; vi. incubação das placas com as amostras biológicas diluídas em PBS gelatina na proporção de 1:100 µg/µL por 2 horas à 37ºC; vii. lavagem utilizando PBS Tween; viii. repetição por duas vezes da etapa vii; ix. adição de anticorpos anti-IgE e anti-IgG1,diluídos em PBS gelatina (1:2000); x. descanso do material obtido na etapa ix por 1h à temperatura de 37ºC; xi. lavagem utilizando PBS Tween; xii. repetição por duas vezes da etapa xi; xiii. adição de 100 µL por poço da solução reveladora tetrametilbenzidina; xiv. descanso do material obtido na etapa xiii por 15 minutos; xv. medição das absorbâncias em comprimento de onda de 620nm.[0059] In another embodiment of the second object, the process comprises the following steps: i. plaque sensitization by adding 5 µg of food extracts per well; ii. addition of 100 µl of 50 mM sodium carbonate buffer, pH 9.6 in each well; iii. overnight incubation of the plates at a temperature of 4 ° C; iv. washing the plates with PBS; v. blocking, using 200 µL of PBS gelatin at 1% for 2h at a temperature of 37 ° C; saw. incubation of the plates with biological samples diluted in PBS gelatin in the proportion of 1: 100 µg / µL for 2 hours at 37ºC; vii. washing using PBS Tween; viii. repetition twice of step vii; ix. addition of anti-IgE and anti-IgG1 antibodies, diluted in gelatin PBS (1: 2000); x. rest of the material obtained in step ix for 1h at a temperature of 37ºC; xi. washing using PBS Tween; xii. repetition of step xi twice; xiii. addition of 100 µL per well of the tetramethylbenzidine developer solution; xiv. rest of the material obtained in step xiii for 15 minutes; xv. measurement of absorbances at 620nm wavelength.

[0060] A presente invenção se destaca por apresentar uma técnica não invasiva, que detecta antígenos específicos, mais fidedigna em seus resultados, de rápido resultado, em um único teste podem ser testados vários alimentos, de fácil acesso e baixo custo. Além disso, não necessitando de jejum e pode ser aplicado em qualquer idade. Quando comparado ao teste existente atualmente, essas características não são encontradas.[0060] The present invention stands out for presenting a non-invasive technique, which detects specific antigens, more reliable in its results, of fast result, in a single test can be tested several foods, of easy access and low cost. In addition, it does not require fasting and can be applied at any age. When compared to the existing test today, these characteristics are not found.

Exemplos - ConcretizaçõesExamples - Achievements

[0061] Os exemplos aqui mostrados têm o intuito somente de exemplificar uma das inúmeras maneiras de se realizar a invenção, contudo, sem limitar o escopo da mesma. Exemplo 1. Processo para o Desenvolvimento do Teste Diagnóstico para Alergia a Alimentos e Medicamentos Coleta da Saliva[0061] The examples shown here are intended only to exemplify one of the countless ways of carrying out the invention, however, without limiting its scope. Example 1. Process for the Development of the Diagnostic Test for Food and Drug Allergy Saliva Collection

[0062] As amostras de saliva foram coletadas com pipeta plástica descartável no período da manhã, não necessitando de jejum. Após a coleta, os materiais foram colocados em tubos plásticos de 1,5mL devidamente fechados, identificados e levados a um isopor contendo gelo. As amostras salivares foram centrifugadas durante 10 minutos e retirados os sobrenadantes para em seguida armazená-los à 20ºC até as análises. Preparo dos extratos alimentares[0062] Saliva samples were collected with a disposable plastic pipette in the morning, not requiring fasting. After collection, the materials were placed in plastic tubes of 1.5mL properly closed, identified and taken to a styrofoam containing ice. The salivary samples were centrifuged for 10 minutes and the supernatants were removed and then stored at 20ºC until analysis. Preparation of food extracts

[0063] Para os testes imunológicos, foram utilizados os extratos proteicos do leite de vaca, milho, soja, amendoim, clara de ovo e mamão, preparados no Laboratório de Biotecnologia e Biologia Molecular da UECE. Os alimentos foram escolhidos por fazer parte da alimentação habitual das crianças brasileiras, porém o amendoim foi escolhido devido ao seu poder alergênico.[0063] For immunological tests, protein extracts from cow's milk, corn, soy, peanuts, egg white and papaya were used, prepared at the UECE Biotechnology and Molecular Biology Laboratory. Foods were chosen because they are part of the usual diet of Brazilian children, but peanuts were chosen because of their allergenic power.

[0064] Os extratos proteicos foram obtidos dos alimentos previamente macerados e centrifugados para obtenção do sobrenadante, contendo as proteínas solúveis em tampão fosfato pH 7,4. As proteínas do sobrenadante foram precipitadas com acetona 10% TCA (ácido tricloroacético). O precipitado proteico foi ressuspendido em tampão fosfato pH 7,4 e utilizado para a sensibilização das placas Técnica Utilizada ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)[0064] Protein extracts were obtained from foods previously macerated and centrifuged to obtain the supernatant, containing proteins soluble in phosphate buffer pH 7.4. The supernatant proteins were precipitated with 10% TCA acetone (trichloroacetic acid). The protein precipitate was resuspended in pH 7.4 phosphate buffer and used to sensitize the plates. Technique Used ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)

[0065] A técnica de ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) indireta foi utilizada para avaliar os níveis de IgE e IgG1 presentes no soro e saliva dos pacientes alérgicos e não alérgicos. Para esse ensaio, foram usadas as placas de 96 poços.[0065] The indirect ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) technique was used to assess the levels of IgE and IgG1 present in the serum and saliva of allergic and non-allergic patients. For this test, 96-well plates were used.

[0066] As placas foram sensibilizadas com os extratos dos alimentos em estudo (5 µg/orifício), Todos os antígenos foram diluídos em tampão de carbonato de sódio 50 mM, pH 9,6, sendo usado 100 µl em cada poço.[0066] The plates were sensitized with the extracts of the food under study (5 µg / hole). All antigens were diluted in 50 mM sodium carbonate buffer, pH 9.6, using 100 µl in each well.

[0067] As placas foram incubadas ‘overnight’ a uma temperatura de 4°C. Em seguida, as placas foram lavadas com PBS (NaCl, KH2PO4, Na2HPO4.12H2O e KCl)-Tween (0,05 %) e bloqueadas por 2 h a uma temperatura de 37 °C com com 200 µL de PBS gelatina à 1%. Logo após o descarte da solução de bloqueio, as placas foram incubadas com amostras dos soros e salivas dos pacientes também diluídos em PBS gelatina na proporção de 1:100 µg/µL, onde permaneceram por mais 2 horas à 37ºC, de acordo com a metodologia citada por Paschoal (2010).[0067] The plates were incubated 'overnight' at a temperature of 4 ° C. Then, the plates were washed with PBS (NaCl, KH2PO4, Na2HPO4.12H2O and KCl) -Tween (0.05%) and blocked for 2 h at a temperature of 37 ° C with 200 µL of PBS gelatin at 1%. Right after the disposal of the blocking solution, the plates were incubated with samples of the patients' sera and saliva also diluted in PBS gelatin in the proportion of 1: 100 µg / µL, where they remained for another 2 hours at 37ºC, according to the methodology cited by Paschoal (2010).

[0068] Em seguida, as placas foram lavadas 3 vezes com PBS Tween e adicionados anticorpos anti-IgE e anti-IgG1 (anticorpos secundários conjugados à peroxidase), diluídos em PBS gelatina (1:2000), permanecendo por mais 1h à temperatura de 37ºC. Para finalizar o processo as placas foram novamente lavadas 3 vezes com PBS Tween, para então receber 100 µL/poço da solução reveladora TMB (tetrametilbenzidina) para após 15 minutos medir as densidades ópticas em leitor de ELISA (PASCHOAL, 2010; FLORINDO et al., 2002).[0068] Then, the plates were washed 3 times with PBS Tween and anti-IgE and anti-IgG1 antibodies (secondary antibodies conjugated to peroxidase) were added, diluted in gelatin PBS (1: 2000), remaining for another 1h at room temperature. 37ºC. To finish the process, the plates were washed again 3 times with PBS Tween, to then receive 100 µL / well of the TMB developer solution (tetramethylbenzidine) to measure the optical densities in an ELISA reader after 15 minutes (PASCHOAL, 2010; FLORINDO et al. , 2002).

[0069] Para a análise dos resultados, as médias das absorbâncias das amostras de sangue e saliva do grupo controle serviram para estabelecer o ponto de corte (cuttof), o qual foi calculado pela soma da média com três vezes o desvio padrão, segundo Oliveira et al (2006). Os valores encontrados acima do cuttof foram considerados positivos para alergia alimentar. Testes com soro e saliva de crianças alérgicas e não alérgicas[0069] For the analysis of the results, the means of the absorbances of the blood and saliva samples of the control group served to establish the cutoff point, which was calculated by adding the average with three times the standard deviation, according to Oliveira et al (2006). The values found above the cuttof were considered positive for food allergy. Tests with serum and saliva of allergic and non-allergic children

[0070] O soro e a saliva de crianças alérgicas e não alérgicas foram coletados e testados com os extratos alimentares produzidos.[0070] The serum and saliva of allergic and non-allergic children were collected and tested with the food extracts produced.

[0071] A amostra estudada foi composta por crianças sendo alérgicas à proteína do leite de vaca (APLV) e com ausência de sintomas alérgicos. A população alérgica do estudo foi composta por (55%) meninos e (45%) meninas com idade média de 14,7 meses (± 11,2 meses) e o diagnóstico de APLV aos 3,6 meses (± 4,1 meses). Os sintomas apresentados foram diarréia, urticária, distensão abdominal, vômitos, sangramentos, angioedema, dermatite atópica, baixo ganho de peso e dor abdominal.[0071] The sample studied was composed of children being allergic to cow's milk protein (APLV) and with no allergic symptoms. The allergic population of the study was composed of (55%) boys and (45%) girls with a mean age of 14.7 months (± 11.2 months) and the diagnosis of APLV at 3.6 months (± 4.1 months) ). The symptoms presented were diarrhea, hives, bloating, vomiting, bleeding, angioedema, atopic dermatitis, low weight gain and abdominal pain.

[0072] Das amostras estudadas, 70,7% das crianças receberam leite materno, porém o tempo médio de amamentação foi de 3,7 meses (± 3,1). Em relação à avaliação antropométrica das pacientes, o peso médio encontrado de 0 a 12 meses de idade foi 7.161Kg (± 1.973), dos 13 aos 24 meses de idade 9.456Kg (± 2.216) e as crianças dos 25 aos 51 meses foi de 12.263Kg (± 3.023).[0072] Of the studied samples, 70.7% of the children received breast milk, however the average breastfeeding time was 3.7 months (± 3.1). Regarding the anthropometric assessment of patients, the mean weight found from 0 to 12 months of age was 7,161 kg (± 1,973), from 13 to 24 months of age 9,456 kg (± 2,216) and children from 25 to 51 months were 12,263Kg (± 3,023).

[0073] A classificação segundo o Escore Z das crianças, de acordo com os parâmetros da Organização Mundial da Saúde – (WHO, 2007), a grande maioria apresentou adequação quanto à estatura/idade, peso/idade e peso/estatura, apresentando apenas 1 criança acima e 8 abaixo da curva.[0073] The classification according to the Z-score of children, according to the parameters of the World Health Organization - (WHO, 2007), the great majority presented adequacy regarding height / age, weight / age and weight / height, presenting only 1 child above and 8 below the curve.

[0074] No presente estudo, o soro e a saliva de todas as crianças foram submetidos ao teste de ELISA indireto para detectar a presença de imunoglobulinas IgG1 e IgE como indicadoras de reações alérgicas.[0074] In the present study, the serum and saliva of all children were subjected to an indirect ELISA test to detect the presence of IgG1 and IgE immunoglobulins as indicators of allergic reactions.

[0075] No grupo dos alérgicos foi feita uma análise de variância pela ANOVA e comparado as médias através do Teste Turkey entre os alimentos com o soro e a imunoglobulina E. A diferença estatisticamente significante (p<0,05) foi encontrada quando o mamão foi comparado com a albumina e o leite de vaca, bem como o leite de vaca com a soja e amendoim.[0075] In the group of allergy sufferers an analysis of variance was performed by ANOVA and compared the averages through the Turkey Test between foods with serum and immunoglobulin E. The statistically significant difference (p <0.05) was found when papaya was compared with albumin and cow's milk, as well as cow's milk with soy and peanuts.

[0076] Quando analisados os soros e a IgG1, os resultados estatisticamente significativos (p<0,05) foram obtidos quando comparado o leite de vaca com o milho, a albumina e o amendoim. O mesmo cruzamento foi feito entre os alimentos e a saliva, resultado o qual não mostrou significância.[0076] When the sera and IgG1 were analyzed, the statistically significant results (p <0.05) were obtained when comparing cow's milk with corn, albumin and peanuts. The same crossing was made between food and saliva, a result which did not show significance.

[0077] Quando a placa foi sensibilizada com os precipitados de proteínas dos alimentos analisados, observou-se que em 85% das crianças alérgicas foi detectada a presença de IgE e em 98% a presença de IgG1 para o soro no leite de vaca. Já na saliva foi de 88% da população detectando a IgE e 100% de IgG1, mostrando que tanto a saliva quanto o IgG1 foram mais sensíveis diante do sangue e IgE. Por outro lado, nenhuma reação nem variação relevantes foram observadas com os soros das 19 crianças não alérgicas, resultados semelhantes foram observados com os demais alimentos, como pode ser observado na figura 4 e tabela 1.[0077] When the plaque was sensitized with protein precipitates from the analyzed foods, it was observed that in 85% of allergic children the presence of IgE was detected and in 98% the presence of IgG1 for serum in cow's milk. In saliva, 88% of the population detected IgE and 100% IgG1, showing that both saliva and IgG1 were more sensitive to blood and IgE. On the other hand, no relevant reactions or variations were observed with the sera of the 19 non-allergic children, similar results were observed with the other foods, as can be seen in figure 4 and table 1.

[0078] Quando comparado o grupo alérgico com o grupo o controle não alérgico, observa-se que utilizando o “teste QUI-QUADRADO”, os resultados de IgE e IgG1 no sangue e na saliva são significativamente diferentes com p < 0,05 para todos os alimentos, podendo ser dito o mesmo para o experimento com a saliva.[0078] When comparing the allergic group with the non-allergenic control group, it is observed that using the "QUI-SQUARE test", the results of IgE and IgG1 in blood and saliva are significantly different with p <0.05 for all foods, and the same can be said for the experiment with saliva.

[0079] Enquanto a comparação entre os alimentos tanto utilizando o soro quanto a saliva, foi observado que o leite de vaca e o milho foram os alimentos com maior tendência a induzir a produção de IgE e IgG1.[0079] While comparing foods using both whey and saliva, it was observed that cow's milk and corn were the foods most likely to induce the production of IgE and IgG1.

ReferênciasReferences

[0080] ABBAS, Abul K.; LICHTMAN, Andrew H.; PILLAI, Shiv. Imunologia Celular e Molecular. 7ª edição. Rio de Janeiro, Elsevier: 2012.[0080] ABBAS, Abul K .; LICHTMAN, Andrew H .; PILLAI, Shiv. Cellular and Molecular Immunology. 7th edition. Rio de Janeiro, Elsevier: 2012.

[0081] ALVES J. Q. N.; MENDES J. F. R. Consumo dietético e estado nutricional em crianças com alergia à proteína do leite de vaca. Com Ciências Saúde, 2013. v 24, n 1, paginação: 65-72.[0081] ALVES J. Q. N .; MENDES J. F. R. Dietary intake and nutritional status in children with allergy to cow's milk protein. With Health Sciences, 2013. v 24, n 1, pagination: 65-72.

[0082] ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DE ALERGIA E IMUNOPATOLOGIA E SOCIEDADE BRASILEIRA DE ALIMENTAÇÃO E NUTRIÇÃO. Guia prático de diagnóstico e tratamento da Alergia às Proteínas do Leite de Vaca mediada pela imunoglobulina E. Rev. bras. alerg. imunopatol. 2012;35(6).[0082] BRAZILIAN ASSOCIATION OF ALLERGY AND IMMUNOPATHOLOGY AND BRAZILIAN SOCIETY OF FOOD AND NUTRITION. Practical guide for diagnosis and treatment of Cow's Milk Protein Allergy mediated by immunoglobulin E. Rev. bras. allerg. immunopatol. 2012; 35 (6).

[0083] BARRET, J. T. Textbook of Immunology. An introduction to immunochemistry and immunobiology. 5ª edição. St. Louis. Ed. C. V. Mosby Company, 1988. Paginação: 25 – 214.[0083] BARRET, J. T. Textbook of Immunology. An introduction to immunochemistry and immunobiology. 5th edition. St. Louis. Ed. C. V. Mosby Company, 1988. Pagination: 25 - 214.

[0084] BATISTA, Gabyella S.; FREITAS, Ana Maria F.; HAACK, Adriana. Alergia alimentar e desmame precoce: uma revisão do ponto de vista nutricional. Com. Ciências Saúde. Brasília. v.20, n.4: 2009. Paginação: 351 –[0084] BATISTA, Gabyella S .; FREITAS, Ana Maria F .; HAACK, Adriana. Food allergy and early weaning: a review from a nutritional point of view. Health Sciences. Brasília. v.20, n.4: 2009. Pagination: 351 -

360.360.

[0085] BARAL R.; MANDAL I.; CHATTOPADHYAY U. Immunostimulatory neem leaf preparation acts as an adjuvant to enhance the efficacy of poorly immunogenic B16 melanoma surface antigen vaccine. Int Immnopharmacol,[0085] BARAL R .; MANDAL I .; CHATTOPADHYAY U. Immunostimulatory neem leaf preparation acts as an adjuvant to enhance the efficacy of poorly immunogenic B16 melanoma surface antigen vaccine. Int Immnopharmacol,

2005. v.5, paginação: 1343 – 13522005. v.5, pagination: 1343 - 1352

[0086] BOYCE, J. A.; FINKELMAN, FRED; SHEARER, WILLIAM T.; VERCELLI, DONATA. Update on risk factors for food allergy. Journal Allergy Clinical Immunology. London. May, 2012. Paginação: 1187 – 1197.[0086] BOYCE, J. A .; FINKELMAN, FRED; SHEARER, WILLIAM T .; VERCELLI, DONATA. Update on risk factors for food allergy. Journal Allergy Clinical Immunology. London. May, 2012. Pagination: 1187 - 1197.

[0087] BRASIL. Ministério da Saúde. Secretaria de Atenção à Saúde. Departamento de Atenção Básica. Orientações para a coleta e análise de dados antropométricos em serviços de saúde: Norma Técnica do Sistema de Vigilância Alimentar e Nutricional - SISVAN / Ministério da Saúde, Secretaria de Atenção à Saúde, Departamento de Atenção Básica. Brasília: Ministério da Saúde, 2011. 76 p.: il. – (Série G. Estatística e Informação em Saúde).[0087] BRAZIL. Ministry of Health. Department of Health Care. Department of Primary Care. Guidelines for the collection and analysis of anthropometric data in health services: Technical Norm of the Food and Nutritional Surveillance System - SISVAN / Ministry of Health, Health Care Secretariat, Department of Primary Care. Brasília: Ministry of Health, 2011. 76 p .: il. - (Series G. Health Statistics and Information).

[0088] CAI C.; SHEN J.; ZHAO D.; QIAO Y.; XU A.; JIN S.; RAN Z.; ZHENG Q.; Serological Investigation of Food Specific Immunoglobulin G Antibodies in Patients with Inflammatory Bowel Diseases. Plos One, China 2014. v.9, n.11, paginação: 1 – 8.[0088] CAI C .; SHEN J .; ZHAO D .; QIAO Y .; XU A .; JIN S .; RAN Z .; ZHENG Q .; Serological Investigation of Food Specific Immunoglobulin G Antibodies in Patients with Inflammatory Bowel Diseases. Plos One, China 2014. v.9, n.11, pagination: 1 - 8.

[0089] CHARLES M.; KUMAR P. Influenza immunization in egg allergy: an update for the 2011-2012 season – A comparison with ‘green book’,[0089] CHARLES M .; KUMAR P. Influenza immunization in egg allergy: an update for the 2011-2012 season - A comparison with ‘green book’,

Departament of Health UK guideline. Clinical & Experimental, 2011. v. 42, n. 1, paginação: 167.Department of Health UK guideline. Clinical & Experimental, 2011. v. 42, n. 1, pagination: 167.

[0090] CHASE, M. B. Inibition of experimental drug allergy by prior feeding of sensitized agent. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1946. v 61, paginação: 257 – 259.[0090] CHASE, M. B. Inhibition of experimental drug allergy by prior feeding of sensitized agent. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1946. v 61, pagination: 257 - 259.

[0091] COCCO, Renata R.; SOLÉ, Dirceu. Abordagen laboratorial no diagnóstico de alergia alimentar. Rev Paul Pediatr. Paraná, 2007. Vol. 23, n.3, Paginação: 258 - 265.[0091] COCCO, Renata R .; SOLÉ, Dirceu. Laboratory approach in the diagnosis of food allergy. Rev Paul Pediatr. Paraná, 2007. Vol. 23, n.3, Pagination: 258 - 265.

[0092] CORTEZ A. P. B.; MEDEIROS L. C. S.; SPERIDIÃO P. G. L.; MATTAR, R. H. G. M.. FAGUNDES NETO U.; MORAES, M. B. Conhecimento de pediatras e nutricionistas sobre o tratamento da alergia ao leite de vaca no lactente. Revista Paul Pediatria, 2007. v. 25, n. 2, paginação: 106 - 113.[0092] CORTEZ A. P. B .; MEDEIROS L. C. S .; SPERIDIÃO P. G. L .; MATTAR, R. H. G. M .. FAGUNDES NETO U .; MORAES, M. B. Knowledge of pediatricians and nutritionists on the treatment of cow's milk allergy in infants. Revista Paul Pediatria, 2007. v. 25, n. 2, pagination: 106 - 113.

[0093] COSTA, C. F.; MENDES, K. de F.; TEIXEIRA N. M.; MOURA R. C. de. Alergia Alimentar. Juiz de Fora, Minas Gerais. ICB – Departamento de Nutrição da Universidade Federal de Juiz de Fora, 2010.[0093] COSTA, C. F .; MENDES, K. de F .; TEIXEIRA N. M .; MOURA R. C. de. Food allergy. Juiz de Fora, Minas Gerais. ICB - Department of Nutrition, Federal University of Juiz de Fora, 2010.

[0094] CUMMINGS A. J.; KNIBB R. C.; KING R.M.; LUCAS J. S. Psychosocial impact of food allergy and food hypersensitivity in children, adolescents and their families: a review. Allergy: 2010b. v65, n8, paginação: 933 – 945.[0094] CUMMINGS A. J .; KNIBB R. C .; KING R.M .; LUCAS J. S. Psychosocial impact of food allergy and food hypersensitivity in children, adolescents and their families: a review. Allergy: 2010b. v65, n8, pagination: 933 - 945.

[0095] DUARTE A. C. G. Avaliação Nutricional: aspectos clínicos e laboratoriais. São Paulo: Atheneu, 2007.[0095] DUARTE A. C. G. Nutritional Assessment: clinical and laboratory aspects. São Paulo: Atheneu, 2007.

[0096] FAGIOLI D.; NASSER L. A. Educação nutricional na infância e na adolescência: planejamento, intervenção, avaliação e dinâmicas. São Paulo: REN Editora, 2008.[0096] FAGIOLI D .; NASSER L. A. Nutritional education in childhood and adolescence: planning, intervention, evaluation and dynamics. São Paulo: REN Editora, 2008.

[0097] FRISANCHO, A. R. Antropometric standards for the assessment of growth and nutrition status. Ann Arbor: The University of Michigan Press, 1990.[0097] FRISANCHO, A. R. Anthropometric standards for the assessment of growth and nutrition status. Ann Arbor: The University of Michigan Press, 1990.

[0098] GAZOLA, Helen Bressan. Alergia Alimentar em Crianças. Revista Nutrição e Pediatria. Mai/Jun, 2008.[0098] GAZOLA, Helen Bressan. Food Allergy in Children. Nutrition and Pediatrics Magazine. May / Jun, 2008.

[0099] HALKEN, S. Clinical symptoms of food allergy/intolerance in children.[0099] HALKEN, S. Clinical symptoms of food allergy / intolerance in children.

[0100] Environmental toxicology and pharmacology, 1997. v. 4, n. 1-2, paginação: 175 – 178.[0100] Environmental toxicology and pharmacology, 1997. v. 4, n. 1-2, pagination: 175 - 178.

[0101] HUBBARD, Sherry K. et al. Terapia Médica Nutricional para Alergia e[0101] HUBBARD, Sherry K. et al. Nutritional Medical Therapy for Allergy and

Intolerância Alimentar. In: Silvia Escott-Stump et al. Krause – Alimentos, Nutrição e Dietoterapia. 12ª edição e 2ª tiragem. Rio de Janeiro: Elsevier, 2010. Paginação: 739 – 763.Food intolerance. In: Silvia Escott-Stump et al. Krause - Food, Nutrition and Diet Therapy. 12th edition and 2nd print run. Rio de Janeiro: Elsevier, 2010. Pagination: 739 - 763.

[0102] MARTINS, Myrian T. S.; GALEAZZI, Maria A. M. Alergia alimentar: considerações sobre o uso de proteínas modificadas enzimaticamente. Revista de caderno e debate. Campinas. 1996, v. 9, paginação: 89 - 110.[0102] MARTINS, Myrian T. S .; GALEAZZI, Maria A. M. Food allergy: considerations on the use of enzyme-modified proteins. Notebook and debate magazine. Campinas. 1996, v. 9, pagination: 89 - 110.

[0103] MORAIS, M. B.; SPERIDÃO, P. G. L.; Alergia Alimentar. In: Dan L. Waitzberg. Nutrição Oral, Enteral e Parenteral na Prática Clínica. 4ª edição. São Paulo: Atheneu, 2009. v. 2, paginação: 1389 – 1404.[0103] MORAIS, M. B .; SPERIDÃO, P. G. L .; Food allergy. In: Dan L. Waitzberg. Oral, Enteral and Parenteral Nutrition in Clinical Practice. 4th edition. São Paulo: Atheneu, 2009. v. 2, pagination: 1389 - 1404.

[0104] MURPHY KENNETH. Alergia e Hipersensibilidade. In: Abbas Abul K., et al. Imunologia Celular e Molecular. Rio de Janeiro, Elsevier, 2008, 6ª edição. paginação: 553 – 595.[0104] MURPHY KENNETH. Allergy and Hypersensitivity. In: Abbas Abul K., et al. Cellular and Molecular Immunology. Rio de Janeiro, Elsevier, 2008, 6th edition. pagination: 553 - 595.

[0105] NOWAK-WEGRZYN, A; SAMPSON, H. A. Adverse reactions to food. Medical Clinics of North America. Philadelphia, jan, 2006. v. 90, n 1, p. 77-95.[0105] NOWAK-WEGRZYN, A; SAMPSON, H. A. Adverse reactions to food. Medical Clinics of North America. Philadelphia, Jan, 2006. v. 90, No. 1, p. 77-95.

[0106] PEREIRA, A. C. S.; MOURA, S. M.; CONSTANT, P. B. L. Alergia alimentar: sistema imunológico e principais alimentos envolvidos. Semina: Ciências Biológicas e da Saúde, Londrina. JUN/DEZ, 2008, v. 29, n. 2, paginação: 189-2008.[0106] PEREIRA, A. C. S .; MOURA, S. M .; CONSTANT, P. B. L. Food allergy: immune system and main foods involved. Semina: Biological and Health Sciences, Londrina. JUN / DEC, 2008, v. 29, n. 2, pagination: 189-2008.

[0107] PEREIRA B. P.; SILVA C. P. Alergia a proteína do leite de vaca em crianças: repercussão da dieta de exclusão e dieta substitutiva sobre o estado nutricional. Revista de Pediatria, 2008. São Paulo. v.30, n.2, paginação: 100-[0107] PEREIRA B. P .; SILVA C. P. Allergy to cow's milk protein in children: repercussions of the exclusion and substitution diet on nutritional status. Revista de Pediatria, 2008. São Paulo. v.30, n.2, pagination: 100-

106.106.

[0108] SABRÁ, A., DEL CASTILLO, R., SABRÁ, S., MADI, K. Alergia Alimentar. In: Temas de Pediatria, 1995. n.59, página: 56, Nestlé.[0108] SABRÁ, A., DEL CASTILLO, R., SABRÁ, S., MADI, K. Food Allergy. In: Temas de Pediatria, 1995. n.59, page: 56, Nestlé.

[0109] SAMPSON, H. A. Update on food allergy. J Allergy Clin Immunol., New York, may 2004. v. 113, n. 5, p. 805-8019.[0109] SAMPSON, H. A. Update on food allergy. J Allergy Clin Immunol., New York, May 2004. v. 113, n. 5, p. 805-8019.

[0110] SAMPSON H. A. Food allergy – accurately identifying clinical reactivity. Allergy. Copenhagen, 2005. v. 60, paginação: 19 – 24.[0110] SAMPSON H. A. Food allergy - accurately identifying clinical reactivity. Allergy. Copenhagen, 2005. v. 60, pagination: 19 - 24.

[0111] SANZ, Y., DE PALMA, G. Gut microbiota, and probiotics in modulation of epithelium, and gut-associated lymphoid tissue function. Int. Rev. Immunol,[0111] SANZ, Y., DE PALMA, G. Gut microbiota, and probiotics in modulation of epithelium, and gut-associated lymphoid tissue function. Rev. Immunol,

2009. v. 28, paginação: 397–413.2009. v. 28, pagination: 397–413.

[0112] SCOTT H.; SICHERER M. D. Epidemiology of food allergy. J Allergy Clin Immunol, 2011. v.127, n.3, paginação: 594 – 602.[0112] SCOTT H .; SICHERER M. D. Epidemiology of food allergy. J Allergy Clin Immunol, 2011. v.127, n.3, pagination: 594 - 602.

[0113] SICHERER, Scott H.; SAMPSON, Hugh A. Food allergy. Journal Allergy Clinical Immunology, New York, 2006, v. 125, n. 2, paginação: 470 – 475.[0113] SICHERER, Scott H .; SAMPSON, Hugh A. Food allergy. Journal Allergy Clinical Immunology, New York, 2006, v. 125, n. 2, pagination: 470 - 475.

[0114] SICHERER S. Epidemiology of food allergy. J Allergy Clin Immunol,[0114] SICHERER S. Epidemiology of food allergy. J Allergy Clin Immunol,

2011. v.127, paginação: 594 – 602.2011. v.127, pagination: 594 - 602.

[0115] TAYLOR S. L. Chemistry and detection of food allergens. Food Technol,[0115] TAYLOR S. L. Chemistry and detection of food allergens. Food Technol,

1992. v.5. paginação: 146 – 152.1992. v.5. pagination: 146 - 152.

[0116] VIEIRA M. C.; MORAIS M. B.; SPOLIDORO J. V.; TOPOROVSKI M.; CARDOSO A. L.; ARAÚJO G. T. B., et al. A Survey on clinical presentation and nutrition-al status of infants with suspented Cow’s Milk Allergy. BMC Pedriatrics,[0116] VIEIRA M. C .; MORAIS M. B .; SPOLIDORO J. V .; TOPOROVSKI M .; CARDOSO A. L .; ARAÚJO G. T. B., et al. A Survey on clinical presentation and nutrition-al status of infants with suspented Cow’s Milk Allergy. BMC Pedriatrics,

2010. v.10, página: 25.2010. v.10, page: 25.

[0117] WANG, Julie; SAMPSON, Hugh, A. Food Allergy. The Journal of Clinical Investigation. New York. v.121 ,n.3: March 2011. Paginação: 827 - 835.[0117] WANG, Julie; SAMPSON, Hugh, A. Food Allergy. The Journal of Clinical Investigation. New York. v.121, n.3: March 2011. Pagination: 827 - 835.

[0118] WORLD HEALTH ORGANIZATION. Child Growth Standards: Length/height-for-age, weight-for-age, weight-for-length, weight-for-height and body mass index-for-age: Methods and development. Geneva, 2006.[0118] WORLD HEALTH ORGANIZATION. Child Growth Standards: Length / height-for-age, weight-for-age, weight-for-length, weight-for-height and body mass index-for-age: Methods and development. Geneva, 2006.

[0119] WULFERT F.; SANYASI G,; TONGEN L,; WATANABE L. A.; WANG X., RENAULT N. K., FALCONE F. H., JACOB C. M. A., ALCOCER M. J. C. Prediction of tolerance in children with IgE mediated cow's milk allergy by microarray profiling and chemometric approach. Journal of Immunological Methods, 2012. n. 382, paginação: 48–57.[0119] WULFERT F .; SANYASI G ,; TONGEN L ,; WATANABE L. A .; WANG X., RENAULT N. K., FALCONE F. H., JACOB C. M. A., ALCOCER M. J. C. Prediction of tolerance in children with IgE mediated cow's milk allergy by microarray profiling and chemometric approach. Journal of Immunological Methods, 2012. n. 382, pagination: 48–57.

Claims

1. Kit for detection of immunoglobulins E and immunoglobulins G1, characterized by comprising (1) a saliva collector, (2) components to prepare a food extract; wherein said component (2) must have at least one PBS 1X, where PBS 1X is composed of sodium chloride, dibasic potassium phosphate, dibasic sodium phosphate and distilled water.

2. Process for the detection of immunoglobulins E and immunoglobulins G1, characterized by the fact that it is performed in an indirect immunoenzymatic assay (ELISA) and that its results are obtained in said assay and that it comprises the components: - an antigen, in which said antigen is obtained at from a food or medicine that can cause allergies; - biological sample, in which said biological sample selected from serum or saliva; where the analysis of the results involves an analysis of the absorbances obtained at the end of the indirect immunoenzymatic assay performed, to determine the values of immunoglobulins E and immunoglobulins G1, in which the positive result for allergy is identified by an absorbance value greater than the point cutoff, in which the cutoff point is defined by means of a statistical analysis of the sum of the mean of the absorbances of the negative control samples, with the addition of three times the standard deviation.

Process according to claim 2, characterized by comprising the components: - allergen, in which said allergen is obtained from a food extract, in its crude or lyophilized form; - biological sample, in which said biological sample is saliva; in which the analysis of the results involves an analysis of the absorbances obtained at the end of the indirect immunoenzymatic assay performed, to determine the values of immunoglobulins E and immunoglobulins G1, in which the positive result for food allergy is identified by an absorbance value greater than the cutoff; in which the cut-off point is defined by means of a statistical analysis of the sum of the mean absorbances of the negative control samples, with the addition of three times the standard deviation.

4. Process according to any one of claims 2 to 3, characterized by the biological sample being a saliva prepared by the following steps: - Addition of Saliva in a closed container, which allows centrifugation in centrifuges; - centrifugation at 4000rpm, for 10 minutes; - collection of the supernatant to be analyzed in the indirect enzyme immunoassay.

Process according to any one of claims 2 to 4, characterized in that the allergen component is a food extract prepared by the following steps: - crushing the food in PBS 1X, in which said PBS1X is produced from the junction of 80g of sodium chloride, 2g of dibasic potassium phosphate, 21.7g of dibasic sodium phosphate in 1 liter of distilled water which resulted in PBS 10X, and when diluted 100 mL of this in 900 mL of distilled water, adjusted the pH to 7.4 with hydrochloric acid results in PBS 1X; in which cover buffer used for the dilution of all extracts was the carbonate buffer (0.01M) obtained by mixing 1.59 g of sodium carbonate with 2.93 g of sodium bicarbonate for each 1 liter of distilled water and pH 9.6.

Process according to any one of claims 2 to 5, characterized in that the allergen is a food extract selected from: cow's milk, corn, soybeans, peanuts, egg white and papaya.

Process for the detection of Immunoglobulins E and Immunoglobulins G1 according to any one of claims 2 to 6, characterized by the step of preparing an indirect ELISA immunoenzymatic assay, comprising the sensitization step of the indirect ELISA immunoenzymatic assay with allergenic extracts.

Process for detecting Immunoglobulins E and Immunoglobulins G1 according to any one of claims 2 to 7, characterized in that it comprises the following steps: i. plaque sensitization by adding 5 µg of food extracts per well; ii. addition of 100 µl of 50 mM sodium carbonate buffer, pH 9.6 in each well; iii. overnight incubation of the plates at a temperature of 4 ° C; iv. washing the plates with PBS; v.blocking, using 200 µL of PBS gelatin at 1% for 2h at a temperature of 37 ° C; saw. incubation of the plates with biological samples diluted in PBS gelatin in the proportion of 1: 100 µg / µL for 2 hours at 37 ° C; vii. washing using PBS Tween; viii. repetition twice of step vii; ix. addition of anti-IgE and anti-IgG1 antibodies, diluted in gelatin PBS (1: 2000); x. rest of the material obtained in step ix for 1h at 37 ° C; xi. washing using PBS Tween; xii. repetition of step xi twice; xiii. addition of 100 µL per well of the tetramethylbenzidine developer solution; xiv. rest of the material obtained in step xiii for 15 minutes; xv. measurement of absorbances at 620nm wavelength.