BR112020011738A2 - 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1h-tetrazol para o tratamento tópico de infecções bacterianas - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-se a um composto 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol, métodos para a fabricação do dito composto, composições tópicas compreendendo o dito composto e métodos de uso das mesmas no tratamento tópico de infecções causadas por bactérias patogênicas como um sítio de ferida.

Description

“5-(2,5-BIS(4-CLORO-2-ISOPROPILFENIL)TIOFEN-3-IL)-1H-TETRAZOL PARA O TRATAMENTO TÓPICO DE INFECÇÕES BACTERIANAS”

INFORMAÇÃO DE PEDIDO ANTERIOR

[001]O presente pedido reivindica o benefício do Pedido de Patente Provisória US. No. 62/597.159, depositado em 11 de dezembro de 2017, intitulado “Topical Treatment of Infeccions”, cujo conteúdo é incorporado aqui por referência.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[002]O diabetes é uma doença crítica que afeta mais de 415 milhões de pessoas em todo o mundo, com a incidência estimada em mais de 642 milhões em 2035 (International Diabetes Federation, 2016). Os pacientes diabéticos podem apresentar inúmeras complicações graves que incluem fluxo sanguíneo periférico reduzido. O fluxo sanguíneo reduzido para as extremidades pode resultar no aparecimento de neuropatia periférica, a degeneração dos nervos periféricos.

Afetando até 50% dos diabéticos, a neuropatia periférica é caracterizada por uma sensação de formigamento, dormência e incapacidade de detectar dor nas extremidades, o que resulta em infecções que se desenvolvem em úlceras diabéticas (as chamadas “infecções por úlceras diabéticas” ou “DUIs”), frequentemente encontradas nos pés (“DFIs”). A cada ano, aproximadamente 3% dos diabéticos desenvolvem uma úlcera diabética, o que se traduz em mais de 11,5 milhões de pessoas. Uma proporção significativa de pacientes com úlcera diabética desenvolve infecções graves que atingem as camadas mais profundas da pele e, finalmente, o osso, resultando frequentemente em amputação parcial ou total da extremidade.

Como um resultado das más opções de tratamento atualmente disponíveis, muitas dessas infecções progridem em gravidade.

[003]Os tratamentos antibióticos atuais para DUIs têm sucesso limitado, com transição de aproximadamente 50% do estágio 2 de DFI para o Estágio 3 de DFI. Os casos mais graves (representando até 50% de todas as infecções diabéticas dos pés)

requerem amputação total ou parcial do pé, de fato, os DFIs representam 25% de todas as internações de pacientes diabéticos. Os antibióticos orais ou injetáveis existentes não foram eficazes no tratamento de DFIs, porque a vasculatura dentro e ao redor da úlcera diabética é fraca e reduz a capacidade desses antibióticos de chegar ao sítio da infecção.

[004]Os antibióticos tópicos prometem fornecer um tratamento mais eficaz, pois são aplicados diretamente no sítio da infecção e podem erradicar bactérias, mesmo na ausência de vasculatura normal. Infelizmente, os antibióticos tópicos atualmente disponíveis geralmente não são eficazes, devido às suas propriedades físico-químicas inerentes que os impedem de penetrar profundamente na pele. Além disso, a resistência a múltiplos fármacos (MDR) foi exibida em DFIs, aumentando o desafio de projetar terapias apropriadas.

[005]Estratégias recentes para desenvolver novos antibióticos direcionados a bactérias MDR têm se concentrado amplamente na criação de novas gerações de antibióticos existentes versus alvos conhecidos. No entanto, como os mecanismos subjacentes já estão em vigor, a resistência geralmente se desenvolve rapidamente.

Classes de antibióticos que não estão sendo usados atualmente, projetados versos novos alvos, são necessárias, pois mais promissoras para combater infecções por bactérias MDR.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[006]São fornecidos compostos que têm propriedades físico-químicas adaptadas para administração tópica e que inibem um alvo bacteriano atualmente não explorado na terapia antibacteriana. Estes compostos demonstram um espectro bacteriano e uma eficácia na administração tópica que são inesperadamente bons, mesmo quando comparados aos compostos antibacterianos de uma classe similar.

[007]Em geral, em um aspecto, é fornecido 5-(2,5-bis(4-cloro-2- isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[008]Em geral, em um aspecto, uma composição farmacêutica com 5-(2,5- bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador dermatologicamente aceitável são fornecidos.

[009]Em geral, em um aspecto, é fornecido o uso das composições acima como um medicamento, particularmente como um medicamento para erradicar bactérias patogênicas dentro de uma úlcera diabética ou para o tratamento de uma infecção de pé diabético ou para celulite.

[010]Em geral, em um aspecto, é fornecido um método para erradicar bactérias patogênicas dentro de uma úlcera diabética, o método incluindo aplicar uma quantidade eficaz de uma das composições acima na úlcera de um indivíduo em necessidade de tal tratamento.

[011]Em geral, em um aspecto, é fornecido um método de tratamento de infecção de pé diabético de um indivíduo em necessidade de tal tratamento no sítio de infecção, o método incluindo aplicar uma quantidade eficaz de uma das composições acima no sítio de infecção.

[012]Em geral, em um aspecto, é fornecido um método de tratamento da celulite em um sítio de infecção de um indivíduo em necessidade de tal tratamento, o método incluindo aplicar uma quantidade eficaz de uma das composições acima no sítio.

[013]Em geral, em um aspecto, é fornecido um método de fabricação de 5- (2,5-bis (4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, o método incluindo reagir uma mistura de 5-bromotetrazóis N- protegidos com ácido tiofen-3-il-borônico sob condições de acoplamento cruzado mediado por paládio.

[014]Com as vantagens e características anteriores e outras da invenção que tornar-se-ão aparentes a seguir, a natureza da invenção pode ser mais claramente entendida por referência à seguinte descrição detalhada da invenção e às reivindicações em anexo.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[015]A Figura 1 mostra a porcentagem de contração da ferida ao longo do tempo em um modelo de orelha isquêmica de coelho. A linha preta (embaixo) indica o grupo de controle DMSO a 1%; a linha vermelha (meio) indica o grupo de pomada de mupirocina a 2%; a linha pontilhada roxa (em cima) indica o grupo de 5-(2,5-bis(4- cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol a 2% (peso / volume) em DMSO a 1% (em volume).

[016]A Figura 2A mostra log (unidades formadoras de colônias por peso de tecido) para camundongos SKH1 que foram injetados intradermicamente com MRSA e tratados por 7 dias (N = 5 / grupo). A barra vermelha (esquerda) é o grupo de controle; a barra azul (meio) é o grupo tratado com comparador de mupirocina; a barra verde (direita) é um grupo tratado com 5-(2,5-bis (4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)- 1H-tetrazol.

[017]A Figura 2B mostra a área da lesão em milímetros quadrados para camundongos SKH1 que foram injetados intradermicamente com MRSA e tratados por 7 dias (N = 5 / grupo). A linha azul escuro (em cima) é o grupo de controle; a linha azul claro (em baixo) é um grupo tratado com 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen- 3-il)-1H-tetrazol.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[018]A síntese de lipídios é um alvo atraente para a descoberta de fármacos antibacterianos, já que muitas etapas são exclusivas das bactérias e são altamente conservadas em todos os gêneros. AcpS, que catalisa a ativação da proteína carreadora de acila para seu uso subsequente na síntese de lipídios e outras macromoléculas importantes, é um desses alvos. Apresenta-se aqui um inibidor de AcpS, o 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol, que é eficaz contra uma ampla gama de bactérias Gram-positivas clinicamente relevantes. Devido ao seu modo de ação exclusivo, o 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol mostra um alto nível de potência em comparação com importantes isolados clínicos MDR de MRSA e VRE. O tratamento tópico de animais com 5-(2,5-bis(4-cloro-2- isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol erradica a infecção por MRSA e melhora a cicatrização. Portanto, o 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol tem valor como um medicamento para infecções tópicas.

[019]Especificamente, como discutido aqui, o modo de ação exclusivo é que o composto é um inibidor da ACP sintase, conforme discutido nos Exemplos. Além disso, demonstrou-se que o composto tem uma penetração particularmente boa nas camadas da pele sem penetrar apreciavelmente através da pele no espaço sistêmico.

Como será apreciado por um versado na técnica, este é um benefício significativo porque o fármaco está presente onde as bactérias estão (na pele), mas não seria esperado que entrassem no corpo, como discutido abaixo.

[020]Todas as patentes, pedidos de patente e outras publicações aqui referidas são incorporadas por referência em sua totalidade.

[021]Em uma modalidade, é fornecido 5-(2,5-bis(4-cloro-2- isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[022]Em uma modalidade, uma composição farmacêutica compreendendo 5- (2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um carreador dermatologicamente aceitável é fornecida. Em algumas modalidades, o carreador dermatologicamente aceitável é um creme e o 5- (2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol ou um sal farmaceuticamente aceitável deste está presente em uma concentração de cerca de 0,5 a 5%, por exemplo, de 2% ou 1%. Em algumas modalidades, o carreador dermatologicamente aceitável compreende base Glaxal.

[023]Em uma modalidade, é fornecido o uso de uma das composições fornecidas acima como um medicamento. Em algumas modalidades, o medicamento é para erradicar bactérias patogênicas dentro de uma úlcera diabética. Em algumas modalidades, o medicamento é para o tratamento de uma infecção de pé diabético.

Em algumas modalidades, o medicamento é para tratamento de celulite.

[024]Exemplos de bactérias patogênicas incluem, mas não estão limitadas a: Enterococcus sp, Enterococcus faecalis, incluindo enterococcus resistente à vancomicina ATCC700211 e ATCC51299, Bacillus sp, Bacillus cereus, Staphylococcus sp, Staphylococcus epidermidis, Staphylocococcus aureus, cepas de Staphylocococcus aureus NRS7 (intermediário de vancomicina), NRS2 (intermediário de vancomicina), ATCC43300 (resistente à meticilina - MRSA), NRS1, NRS382 (cepa epidêmica USA100), NRS383 (cepa epidêmica USA200), NRS384 (cepa epidêmica USA200), NRS384 (cepa epidêmica USA300), isolados clínicos incluindo isolados clínicos de MRSA, isolados clínicos de MRSA adquirido na comunidade, e isolados clínicos resistentes a múltiplos fármacos (MDR) ciprofloxacina, penicilina, eritromicina e / ou mupirocina, Streptococcus sp, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pneumoniae e Clostridium spp.

[025]Em uma modalidade, é fornecido um método para erradicar bactérias patogênicas dentro de uma úlcera diabética, o método compreendendo aplicar uma quantidade eficaz de uma das composições fornecidas acima sobre a úlcera de um indivíduo em necessidade de tal tratamento.

[026]Em uma modalidade, é fornecido um método de tratamento da infecção de pé diabético em um sítio de infecção, o método compreendendo aplicar uma quantidade eficaz de uma das composições fornecidas acima no sítio de infecção de um indivíduo em necessidade de tal tratamento.

[027]Em uma modalidade, é fornecido um método de tratamento da celulite no sítio de infecção, o método compreendendo aplicar quantidade eficaz de uma das composições fornecidas acima no sítio de infecção de um indivíduo em necessidade de tal tratamento.

[028]Como será apreciado por um versado na técnica, um “indivíduo em necessidade de tal tratamento” refere-se a um indivíduo que está sofrendo de, foi diagnosticado com ou é suspeito de ter uma úlcera diabética compreendendo bactérias patogênicas, um infecção de pé diabético e / ou celulite.

[029]Como será apreciado por um versado na técnica, uma “quantidade eficaz” refere-se a uma quantidade que é suficiente para reduzir a gravidade de pelo menos um sintoma associado a uma úlcera diabética compreendendo bactérias patogênicas, uma infecção de pé diabético e / ou celulite. Exemplos de sintomas dessas doenças são bem conhecidos dos versados na técnica e / ou podem ser determinados facilmente consultando uma variedade de fontes de referência. Por exemplo, alguns sintomas incluem: inflamação e purulência, continuação da condição ulcerativa (falta ou lentidão da cicatrização), aumento da área ou profundidade da úlcera.

[030]Em algumas modalidades, uma “quantidade eficaz” é uma quantidade eficaz para limpar a infecção ou uma quantidade eficaz para reduzir o risco de complicações tal como osteomielite ou amputação de extremidade inferior.

[031]Em uso, o composto deve ser aplicado periodicamente, por exemplo, uma ou duas vezes ao dia. As aplicações comuns seriam de 7 a 14 dias, por exemplo, 7 ou 10 ou 14 dias ou até o fechamento da ferida.

[032]Em uma modalidade, um método de fabricação de 5-(2,5-bis(4-cloro-2- isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol ou um sal farmaceuticamente aceitável é fornecido, o método compreendendo reagir uma mistura de 5-bromotetrazóis N- protegidos com ácido tiofen-3-ilborônico sob condições de acoplamento cruzado mediado por paládio. Em algumas modalidades, o grupo protetor de nitrogênio é benzila. Em algumas modalidades, as condições de acoplamento cruzado mediado por paládio compreendem Pd(PPh3)4 e carbonato de sódio.

[033]Os métodos de tratamento ou usos, conforme fornecidos acima, são preferencialmente aplicados a um mamífero, mais preferencialmente um ser humano, em necessidade de tratamento. O método de tratamento ou usos são preferencialmente administrados topicamente em, sobre ou ao redor da úlcera ou sítio de infecção, conforme aplicável.

Definições

[034]A menos que definido de outra forma, os termos usados na especificação se referem às seguintes definições, conforme detalhado abaixo.

[035][Os termos “administração” ou “administrar” o composto devem ser entendidos como significando fornecer 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)- 1H-tetrazol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para um indivíduo em uma forma que pode ser introduzida no corpo do indivíduo ou sobre ele em uma quantidade eficaz para profilaxia, tratamento ou diagnóstico, conforme aplicável; e particularmente, fornecer formas de dosagem tópicas que compreendem carreadores farmaceuticamente aceitáveis, mais particularmente que compreendem carreadores dermatologicamente aceitáveis.

[036]Em algumas modalidades, as formas de dosagem tópica são líquidas, sólidas ou semissólidas. Em algumas modalidades, as formas de dosagem tópica são formuladas como cremes, emulsões, pomadas, pastas ou géis. Em algumas modalidades, a forma de dosagem tópica é aplicada à pele de um indivíduo, se aberta ou fechada. Em algumas modalidades, uma formulação tópica é misturada com 5- (2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo em condições estéreis, a formulação tópica compreendendo carreadores farmaceuticamente aceitáveis e quaisquer excipientes desejados, tal como conservantes, antioxidantes, tampões, umectantes, intensificadores de permeação, ou espessantes. Em algumas modalidades, a formulação compreende uma base oleaginosa ou hidrocarboneto. Em algumas modalidades, a formulação compreende uma base anidra ou de absorção. Em algumas modalidades, a formulação compreende uma base de emulsão (água em óleo ou óleo em água). Em algumas modalidades, a formulação compreende uma base solúvel em água.

[037]O termo “amino”, conforme usado aqui, significa um grupo —NH2.

[038]O termo “bromo”, conforme aqui utilizado, significa —Br.

[039]O termo “carbonila”, conforme aqui utilizado, significa um grupo —C (═O) —.

[040]O termo “carboxi”, conforme usado aqui, significa um grupo —COOH, que pode ser protegido como um grupo éster: —COO-alquila.

[041]O termo “ciano”, conforme usado aqui, significa um grupo —CN.

[042]O termo “fluoro”, conforme aqui utilizado, significa —F.

[043]O termo “halo” ou “halogênio”, conforme aqui utilizado, significa Cl, Br, I ou F.

[044]O termo “hidróxi”, conforme usado aqui, significa um grupo —OH.

[045]O termo “grupo protetor de hidroxi” significa um substituinte que protege os grupos hidroxila contra reações indesejáveis durante procedimentos sintéticos.

Exemplos de grupos protetores de hidróxi incluem, mas não estão limitados a, metoximetila, benziloximetila, 2-metoxietoximetila, 2-(trimetilsilil) etoximetila, benzila, trifenilmetila, 2,2,2-tricloroetila, t-butila, trimetilsilila, t-butildimetilsilila, t-butildifenilsilila, metileno acetal, acetonida benzilideno acetal, orto ésteres cíclicos, metoximetileno, carbonatos cíclicos, e boronatos cíclicos. Os grupos protetores hidróxi são anexados aos grupos hidróxi por reação do composto que contém o grupo hidróxi com uma base, tal como trietilamina, e um reagente selecionado a partir de um alquil haleto, alquil trifilato, trialquilsilil haleto, trialquilsilil triflato, arildialquilsilil triflato, ou um alquil cloroformato, CH2I2, ou um di-haloboronato éster, por exemplo, com iodeto de metil iodeto, benzil iodeto, trietilsilil triflato, acetil cloreto, benzil cloreto, ou dimetil carbonato.

Um grupo protetor também pode ser anexado a um grupo hidróxi por reação do composto que contém o grupo hidróxi com ácido e um alquil acetal.

[046]O termo “grupo protetor de nitrogênio”, conforme usado neste documento, significa aqueles grupos destinados a proteger um átomo de nitrogênio contra reações indesejáveis durante procedimentos sintéticos. Grupos protetores de nitrogênio compreendem carbamatos, amidas, derivados de N-benzila e derivados de imina. Os grupos protetores de nitrogênio preferenciais são acetila, benzoíla, benzila, benziloxicarbonila (Cbz), formila, fenilsulfonila, pivaloíla, ter-butoxicarbonila (Boc), ter- butilacetila, trifluoroacetila, e trifenilmetila (tritila). Os grupos protetores de nitrogênio são anexados a grupos amino primário ou secundário fazendo reagir o composto que contém o grupo amina com base, tal como trietilamina, e um reagente selecionado a partir de um alquil haleto, um alquil trifilato, um dialquil anidrido, por exemplo, como representado por (alquil-O) 2 C═O, um diaril anidrido, por exemplo, como representado por (aril-O) 2 C═O, um acil haleto, um alquil cloroformato ou um alquilsulfonil haleto, um arilsulfonil haleto ou halo-CON (alquil) 2, por exemplo, acetil cloreto, benzoíl cloreto, benzil brometo, benziloxicarbonil cloreto, formil fluoreto, fenilsulfonil cloreto, pivaloil cloreto, (ter-butil-O-C═O) 2 O, anidrido trifluoroacético, e trifenilmetil cloreto.

[047]A menos que indicado ao contrário, o termo “grupo de proteção” ou “grupo protetor”, quando usado para se referir a parte de uma molécula sujeita a uma reação química, significa uma fração química que não é reativa sob as condições dessa reação química, e que pode ser removido para fornecer uma porção que é reativa sob essas condições. Os grupos protetores são bem conhecidos na técnica.

Ver, por exemplo, Greene, T. W. e Wuts, P. G. M., Protective Groups in Organic Synthesis (3ª ed., John Wiley & Sons: 1999); Larock, R. C., Comprehensive Organic Transformations (2ª ed., John Wiley & Sons: 1999). Alguns exemplos incluem benzila, difenilmetila, tritila, Cbz, Boc, Fmoc, metoxicarbonila, etoxicarbonila e ftalimido. Os grupos protetores incluem, por exemplo, grupos protetores de nitrogênio e grupos protetores de hidróxi. Um composto protegido em um nitrogênio pode ser chamado de “N-protegido”.

[048]Os compostos da invenção podem ser utilizados na forma de sais farmaceuticamente aceitáveis derivados de ácidos inorgânicos ou orgânicos. Os sais farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica. Para maior clareza, o termo “sais farmaceuticamente aceitáveis”, conforme usado aqui, geralmente se refere a sais preparados a partir de ácidos ou bases não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis incluindo ácidos e bases inorgânicos e ácidos e bases orgânicos. Os sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem sais metálicos feitos a partir de alumínio, cálcio, lítio, magnésio, potássio, sódio e zinco ou sais orgânicos feitos a partir de lisina, N,N’-dibenziletilenodiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilenodiamina, meglumina (N- metilglucamina) e procaína. Os ácidos não tóxicos adequados incluem ácidos inorgânicos e orgânicos, tal como ácido acético, algínico, antranílico, benzenossulfônico, benzoico, canforsulfônico, cítrico, etenossulfônico, fórmico, fumárico, furoico, galacturônico, glucônico, glucurônico, glutâmico, glicólico, bromídrico, clorídrico, isetônico, lático, maleico, málico, mandélico, metanossulfônico, múcico, nítrico, pamoico, pantotênico, fenilacético, fosfórico, propiônico, salicílico, esteárico, sucínico, sulfanílico, sulfúrico, tartárico e ácido p-toluenossulfônico. Os ácidos não tóxicos específicos incluem ácidos clorídrico, bromídrico, fosfórico, sulfúrico e metanossulfônico. Exemplos de sais específicos incluem assim sais cloridrato e mesilato. Outros são bem conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ª ed. (Mack Publishing, Easton Pa.: 1990) e Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19ª ed. (Mack Publishing, Easton Pa.: 1995). A preparação e o uso de sais de adição de ácido, sais de carboxilato, sais de adição de aminoácidos, e sais zwitterion dos compostos da presente invenção também podem ser considerados farmaceuticamente aceitáveis se forem, dentro do escopo de um julgamento médico adequado, adequados para uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais inferiores, sem toxicidade indevida, irritação, resposta alérgica e similares, são proporcionais a uma relação risco / benefício razoável, e são eficazes para o uso pretendido. Tais sais também podem incluir vários solvatos e hidratos do composto da presente invenção.

[049]Certos compostos da presente invenção podem ser marcados isotopicamente, por exemplo, com vários isótopos de carbono, flúor ou iodo, conforme aplicável quando o composto em questão contém pelo menos um tal átomo.

[050]Dever-se-ia notar que uma porção química que faz parte de um composto maior pode ser descrita aqui usando um nome comumente aceito quando existe como uma molécula única ou um nome comumente atribuído ao seu radical.

Por exemplo, os termos “piridina” e “piridil” recebem o mesmo significado quando usados para descrever uma porção ligada a outras porções químicas. Assim, por exemplo, as duas frases “XOH, em que X é piridil” e “XOH, em que X é piridina” têm o mesmo significado e abrangem os compostos piridin-2-ol, piridin-3-ol e piridin-4 -ol.

[051]A menos que indicado ao contrário, os termos “impedir”, “prevenir” e “prevenção” consideram uma ação que ocorre antes que um paciente comece a sofrer da doença ou distúrbio especificado, que inibe ou reduz a gravidade da doença ou distúrbio ou de um ou mais de seus sintomas. Os termos abrangem profilaxia.

[052]A menos que indicado de outra forma, uma “quantidade profilaticamente eficaz” de um composto é uma quantidade suficiente para evitar uma doença ou condição, ou um ou mais sintomas associados à doença ou condição, ou para impedir sua recorrência. Uma quantidade profilaticamente eficaz de um composto é uma quantidade de agente terapêutico, isoladamente ou em combinação com outros agentes, que fornece um benefício profilático na prevenção da doença. O termo “quantidade profilaticamente eficaz” pode abranger uma quantidade que melhora a profilaxia geral ou melhora a eficácia profilática de outro agente profilático.

[053]A menos que indicado de outra forma, uma “quantidade diagnosticadamente eficaz” de um composto é uma quantidade suficiente para diagnosticar uma doença ou condição. Em geral, a administração de um composto para fins de diagnóstico não continua enquanto o uso terapêutico de um composto, e pode ser administrado apenas uma vez se for suficiente para produzir o diagnóstico.

[054]A menos que indicado de outra forma, uma “quantidade terapeuticamente eficaz” de um composto é uma quantidade suficiente para tratar uma doença ou condição, ou um ou mais sintomas associados à doença ou condição.

[055]O termo “sujeito” é destinado a incluir organismos vivos nos quais a doença pode ocorrer. Exemplos de sujeitos incluem seres humanos, macacos, vacas, ovelhas, cabras, cães, gatos, camundongos, ratos e espécies transgênicas dos mesmos.

[056]O termo “substancialmente puro” significa que o material isolado é pelo menos 90% puro, preferencialmente 95% puro, ainda mais preferencialmente 99% puro como testado por técnicas analíticas conhecidas.

[057]Os níveis reais de dosagem de ingredientes ativos em composições farmacêuticas podem ser variados de modo a obter uma quantidade do(s) composto(s) ativo(s) que seja eficaz para alcançar a resposta terapêutica desejada para um paciente, composições e modo de administração específicos. O nível de dosagem selecionado dependerá da atividade do composto particular, da via de administração, da gravidade da condição a ser tratada e da condição e histórico médico anterior do paciente que está sendo tratado. No entanto, é da competência da técnica iniciar doses do composto em níveis inferiores aos exigidos para alcançar o efeito terapêutico desejado e aumentar gradualmente a dosagem até que o efeito desejado seja alcançado.

[058]Uma quantidade eficaz de 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)- 1H-tetrazol pode ser empregada na forma pura ou, quando essas formas existirem,

na forma de sal farmaceuticamente aceitável. O uso diário total será decidido por um médico dentro do escopo do julgamento médico correto. O nível de dose eficaz específico e a frequência de administração para qualquer paciente particular dependerão de uma variedade de fatores, incluindo o distúrbio a ser tratado e a gravidade do distúrbio; a composição específica empregada; a idade, peso corporal, estado geral de saúde, sexo e dieta do paciente; o tempo necessário para a administração; a duração do efeito de cada administração; a duração do tratamento global; a relação risco / benefício; fármacos utilizados em combinação ou coincidentes com o composto específico empregado; e fatores similares bem conhecidos nas técnicas médicas. Por exemplo, está dentro da competência da técnica iniciar doses do composto em níveis inferiores aos exigidos para alcançar o efeito terapêutico desejado e aumentar gradualmente a dosagem até que o efeito desejado seja alcançado.

[059]Informação adicional sobre os compostos, composições, métodos e usos descritos neste documento pode ser encontrada nos Exemplos abaixo.

[060]EXEMPLOS

[061]Exemplo 1 - Síntese de 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H- tetrazol

[062]Referência é feita ao esquema químico dado abaixo:

[063]Bromocarbonitrilo 2 (1,0 g, 3,7 mmol), éster isopropilfenilborônico 1 (2,31 g, 8,2 mmol, 2,2 eq), e Pd(PPh3)4 (0,22 g, 0,19 mmol, 0,05 eq) foram adicionados a um frasco de fundo redondo, e aspirado por 3 segundos e lavado com argônio três vezes. A esses foi adicionado solução aquosa de carbonato de sódio a 2 M (9,4 ml, 18,8 mmol, 5 eq) e 20 ml de dioxano. A reação foi agitada a 95° C durante a noite e depois arrefecida com água. A mistura escura foi extraída com etil acetato (2 x 20 ml), seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada por evaporação rotativa.

Tiofenilcarbonitrilo 3 (1,4 g, 90%) foi obtido por cromatografia de coluna à média pressão (DCM a 25% em hexanos).

[064]Tiofenilcarbonitrilo 3 (1,0 g, 2,4 mmol), azida de sódio (0,39 g, 6,0 mmol, 2,5 eq) e brometo de zinco (1,36 g, 6,0 mmol, 2,5 eq) foram combinados com 20 ml de DMF anidro em um frasco de fundo redondo, e aspirado por 3 segundos e lavado com argônio três vezes. A reação foi agitada a 135° C durante a noite e então arrefecida com 5 ml de solução de HCl a 1 N. A mistura foi filtrada e o produto foi obtido por cromatografia de coluna à média pressão (AcOH a 1% e EtOAc a 35% em hexanos).

[065]Avaliação NMR. 1H NMR (500 MHz, CDCl3):  (ppm) 1,13 (s, br, 6H), 1,30 (d, J = 6,8 Hz, 6H), 2,92 (m, 1H), 3,38 (m, 1H), 7,26 (dd, J = 2,0, 8,1 Hz, 1H), 7,40 (m, 4H), 7,54 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 7,76 (s, 1H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3):  (ppm) 24,6 (2), 24,7, 24,8, 30,4, 31,0, 123,0, 126,5, 126,9, 127,2, 127,8. 128,1, 128,7, 130,0, 132,5, 132,7, 135,9, 137,8, 142,5, 143,9, 150, 151,5.

[066]Exemplo 2 (Profético) - Síntese livre de azida de 5-(2,5-bis(4-cloro-2- isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol

[067]O 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol também pode ser feito por proteção de tetrazol para produzir uma mistura de tetrazóis N-protegidos.

Essa etapa é seguida por bromação para produzir uma mistura de 5-bromotetrazóis N-protegidos, seguida por acoplamento cruzado mediado por paládio usando ácido tiofen-3-ilborônico. Os produtos resultantes são então bromados nas posições 2 e 5 de tiofeno, seguidos de acoplamento cruzado mediado por paládio usando ácido (4-

cloro-2-isopropilfenil) borônico.

A desproteção das porções de tetrazol N-protegido resolve a mistura em um único produto.

A desproteção pode ser combinada ou seguida com a introdução de porções de sal farmaceuticamente aceitável, utilizando métodos conhecidos na técnica.

Uma possível síntese é dada no esquema abaixo, no qual o grupo protetor de nitrogênio é benzila:

N N N

N N N B(OH)2

N N N BnBr N Br2 Br

N S Bn Bn N K2CO3 + AcOH + Pd(PPh3)4

H N Na2CO3

N N

N N Bn N Bn Br N

N N N N

N N N B(OH)2

N N Br Bn Bn S Br2 Br Cl

S + AcOH + Pd(PPh3)4 N N Na2CO3

N N N Bn N Bn

N N Br

S S Br

N N N

N Cl Bn N

S N

N H2 / Pd N

H Cl Cl

S + Cl

N

N N Bn

N Cl

S Cl

[068]Exemplo 3 - Preparação de uma composição farmacêutica contendo 5- (2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol e um carreador dermatologicamente aceitável

[069]A formulação foi realizada dissolvendo-se 50 mg de composto em 50 µl de DMSO a 100%, seguido por adição gradual e misturação a 5 ml de base Glaxal (WellSpring Pharmaceutical Canada Corp., Oakville, Canadá) para obter uma concentração final de composto a 1% (peso / volume) e DMSO a 1% (em volume).

[070]DADOS BIOLÓGICOS

[071]Concentrações Inibitórias Mínimas (MIC)

[072]Usando um teste de microdiluição em caldo de acordo com as diretrizes do Clinical Laboratory Standards Institute (CSLI), testou-se o 5-(2,5-bis(4-cloro-2- isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol (“Artigo de teste” na tabela abaixo) para estabelecer MICs contra uma ampla gama de bactérias MDR e notou-se a atividade substantiva contra Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA), Enterococcus resistente à vancomicina (VRE) e Streptococcus spp. O teste de susceptibilidade antimicrobiana foi realizado por um ensaio de microdiluição em caldo, de acordo com as diretrizes de CLSI. O inóculo foi preparado a partir de culturas em fase estacionária diluídas em água. Os poços da placa de microtitulação receberam alíquotas de 100 μL do composto diluído em meio de cátions ajustados Mueller-Hinton II. A concentração final do composto variou tipicamente de 250 a 0,125 µg / ml em diluições em série de duas vezes. Além do composto de teste, foram incluídos controles de crescimento e esterilidade, juntamente com linhas de controle de veículo DMSO. As placas de microtitulação foram inoculadas com 5 x 105 bactérias e incubadas durante a noite a 35° C em uma atmosfera umidificada.

[073]Mais testes in vitro de 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H- tetrazol versus um painel de 125 cepas Gram-positivas importantes e isolados clínicos MDR de MRSA, VRE e S. epidermidis indicaram valores de MIC de 0,5 a 1,0 µg / ml contra essas cepas MDR, incluindo cepas resistentes à vancomicina, penicilina, eritromicina e ciprofloxacina.

Organismo e propriedades Artigo de Teste Vancomicina Atividade Antibacteriana (MIC, g/ml) _________________________________________________________________________________________ E. faecium ATCC51299 resistente à vancomicina 1,0 >16 E. faecalis ATCC51599 resistente à vancomicina 0,5 >16 S. epidermidis NRS7 intermediário à vancomicina 1,0 4,0 Cepa epidêmica de S. aureus MRSA USA300 0,5 1,0 Cepa epidêmica de S. aureus MRSA USA200 0,5 0,5 Cepa epidêmica de S. aureus MRSA USA100 1,0 1,0 S. aureus MRSA MISA MU50 NRS1 0,5 4,0 S. aureus MRSA MISA MU3 NRS2 1,0 1,0 S. aureus MRSA ATCC43300 0,5 0,5 Isolado clínico de S. aureus MRSA de Manchester 0,5 0,5 Isolado clínico de S. aureus MRSA resistente à ciprofloxacina 1,0 0,5 Isolado clínico de S. aureus MRSA resistente à penicilina 0,5 1,0 e eritromicina Isolado clínico de S. aureus MRSA multirresistente 0,5 0,5

[074]O 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol também reteve a atividade contra cepas resistentes à mupirocina de S. epidermidis, E. faecalis, E. faecalis VRE, e em um painel de cepas de S. aureus resistentes à mupirocina (MMX 1013, MMX 7779, MMX 7782, MMX 8845, MMX 9202: MIC de 2 ug / ml vs > 256 ug / ml para mupirocina); isso é notável, pois a mupirocina é um dos antibióticos tópicos mais comumente usados.

[075]O 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol também reteve a atividade contra Clostridium spp., um patógeno presente em casos de DUI mais avançados / complexos, enquanto seu isômero estrutural 5-(4,5-bis(4-cloro-2- isopropilfenil)tiofen-2-il)-1H-tetrazol foi inativo contra essas espécies.

[076]O 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol é rapidamente bactericida, conforme demonstrado contra as cepas de MRSA USA100 e USA300.

[077]Mecanismo de Ação

[078]O gene acpS foi amplificado a partir do DNA genômico de S. aureus e E.

coli e inserido em um vetor pET23b usando a metodologia padrão de DNA recombinante, de modo que o produto proteico resultasse na adição de uma etiqueta 6x-His C-terminal em quadro com quadros de leitura aberta AcpS. A sequência de DNA dos produtos inseridos no vetor foi sequenciada e verificou-se ser idêntica aos quadros de leitura abertos conhecidos acpS de E. coli e S. aureus. A expressão de AcpS His-marcado recombinante foi induzida por adição de IPTG e cultura durante a noite. O lisado celular foi obtido por aspiração sequencial através de agulhas de 16, 18 e 21 G em um tampão de Tris-HCl a 50 mM (pH 8,5), MgCl2 a 10 mM, DTT a 2 mM, glicerol a 5%, e ainda ajustado para pH 8,1 com MES. A purificação via metodologia de etiqueta His resultou em uma solução enzimática purificada estoque de ~ 2 mg / ml. Em um ensaio típico de atividade enzimática de AcpS, acil-CoA [3H]-marcado a 57 µM, 2 µg de apo-ACP, MgCl2 a 10 mM, DTT a 5 mM, fosfato de Na a 50 mM (pH 7,0), e AcpS em um volume final de 10 µL foram incubados em temperatura ambiente em um tubo de microcentrífuga de 1,5 mL. Aos 5, 10, 15 e 20 minutos, foram adicionados 2 µL de reação a 750 µL de TCA a 10% em gelo. Albumina de soro bovino (BSA; 20 µL de uma solução de 25 mg / ml) foi então adicionada para facilitar a precipitação de proteína radiomarcada. As amostras foram centrifugadas a 12.000 rcf por 5 min. Os sobrenadantes foram removidos, e os peletes foram lavados duas vezes com 750 µL de ácido tricloroacético a 10%. Os peletes foram ressuspensos em 50 µL de ácido fórmico e transferidos para frascos de cintilação. Foram adicionados 2 mL de fluido de cintilação, e a quantidade de holo-ACP [3H]-marcado formado foi quantificada por contagem de cintilação líquida. Cada ponto de dados (atividade da enzima AcpS restante) foi expresso como uma porcentagem do controle de veículo, com o valor médio de quatro pontos no tempo apresentado.

[079]AcpS foi visto como inibido por 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen- 3-il)-1H-tetrazol.

[080]Para determinar se a inibição de AcpS é o principal alvo in vivo que resulta em morte bacteriana por 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H- tetrazol, superexpressou-se AcpS em bactérias. Uma cepa de E. coli geneticamente modificada para ter uma membrana externa porosa (cepa D22) foi transformada com um plasmídeo expressando AcpS de E. coli ou S. aureus sob controle de um promotor induzível por IPTG. Os compostos que matam bactérias através da inibição de AcpS devem mudar o MIC para uma concentração mais alta com o aumento da expressão de AcpS, e isso é realmente o que foi observado para 5-(2,5-bis(4-cloro-2- isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol (32 vezes para E. coli; 16 vezes para S. aureus).

Seletividade

[081]Ensaios enzimáticos in vitro, realizados de forma análoga à descrita acima, determinaram que o 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol não inibiu outras duas enzimas bacterianas utilizando ACP: LpxA e ácido graxo sintase.

[082]Farmacocinética dérmica na pele de cadáveres humanos de espessura total

[083]A pele humana de espessura total foi retirada do torso de um doador humano pós-morte e armazenada a -80 graus Celsius. No dia do estudo, os pedaços de pele foram descongelados por alguns minutos em temperatura ambiente em solução salina, e depois divididos em pedaços individuais de aproximadamente 2 cm de comprimento x 2 cm de largura, dos quais sete pedaços de pele de espessura total foram selecionados. Aproximadamente 2/3 da largura da camada de hipoderme foi cortado para montar os pedaços selecionados nas células Franz. O tampão receptor foi preparado (tampão de bicarbonato Krebs-Ringer contendo HEPES a 10 mM, bicarbonato de sódio a 15 mM e cloreto de cálcio a 1,2 mM; ajustado para pH 7,4 e fortificado com azida de sódio a 0,1% e albumina de soro bovino a 1%). Cada pedaço foi equilibrado por 30 min com 12 mL de tampão receptor a 32 graus Celsius por um módulo de camisa de água / agitação funcionando a 600 rpm. A perda transepitelial de água foi lida para cada pedaço após 30 minutos usando um vapômetro. A área de superfície exposta do pedaço era de 1,77 cm2.

[084]Aproximadamente 300 ul de 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)- 1H-tetrazol formulado em base glaxal a 2% em peso foram aplicados diretamente através de uma seringa em cima de cada pedaço. As amostras receptoras foram coletadas a partir do compartimento receptor de cada célula Franz às 3, 6, 12, 18 e 24 horas e substituídas por um volume igual de tampão quente e fresco para manter as condições de afundamento. No final de 24 horas, a quantidade global de formulação restante em cada pedaço de pele foi limpa usando pontas de algodão, armazenadas juntas em um frasco seco para análise. A epiderme e a derme foram então separadas suavemente usando uma pinça após um breve tratamento térmico a 60 graus Celsius por não mais do que 2 minutos. Cada camada foi então seca, pesada e armazenada em frascos de vidro separados. Todas as amostras foram armazenadas a -80 graus Celsius até análise por LC / MS-MS.

[085]As concentrações cumulativas de 5-(2,5-bis(4-cloro-2- isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol que permeavam em cada ponto no tempo foram calculadas pela soma da concentração medida nesse ponto no tempo mais 1/12 das concentrações medidas nos pontos no tempo anteriores (uma vez que 1 mL dos 12 mL de volume total do receptor é retirado e substituído a cada vez). Os valores de fluxo ao longo do período de permeação de 24 horas foram calculados a partir da inclinação da parte linear da curva. O fluxo foi representado pela equação Fluxo = d [(Cr-T x Vr) / dt / A

[086]onde Cr-T é a concentração cumulativa em cada ponto no tempo (ng / mL); Vr é 12 mL; t é a duração em horas; e A é a área de superfície de 1,77 cm 2.

[087]Os resultados mostraram que não havia 5-(2,5-bis(4-cloro-2- isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol detectável nas amostras receptoras no final do período de permeação de 24 horas (limite inferior de detecção: 0,5 ng / mL). O fluxo a partir de cima (simulando a administração tópica) até o fundo (simulando a entrada no espaço sistêmico) foi calculado como sendo inferior a 0,141 ng / h / cm 2 neste experimento. Em vez disso, verificou-se que o 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen- 3-il)-1H-tetrazol se acumulava nas camadas de pele. A quantificação por LC-MS / MS mostrou níveis na epiderme (163 ± 58,0 ng por mg de tecido), derme (0,821 ± 0,469 ng por mg de tecido) e hipoderme (1,86 ± 1,04 ng por mg de tecido) ao final do período de permeação de 24 horas.

Eficácia no modelo de ferida isquêmica de coelho

[088]O 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol foi testado quanto à sua eficácia contra a infecção no modelo de ferida isquêmica de coelho, o modelo animal padrão-ouro que imita DUI humano. Nesse modelo, o ouvido é tornado isquêmico pela divisão das artérias nutrientes central e rostral de coelhos brancos da Nova Zelândia. Os coelhos brancos da Nova Zelândia foram empregados para este estudo e sua criação e manipulação experimental aderiram aos Guides for the Care and Use of Laboratory Animals (2001). Foi feita uma incisão no nível da cartilagem nua na base da orelha e seguida por injeção intradérmica de epinefrina para obter vasoconstrição e auxiliar no descolamento da pele. A pele é separada do pericôndrio subjacente e removida com um punção de biópsia aórtica de 6,0 mm. Alimentos e água foram administrados à vontade e os animais foram aclimatados por 7 dias com fotoperíodos alternados de 12 horas de claro e escuro, juntamente com analgésico (Buprenex 0,02 mg / kg sc) e anestesia (isoflurano (0,5 a 5% com carreador de oxigênio 0,5 a 2 L / min) durante os procedimentos.

[089]Um modelo de cicatrização ferida de isquemia foi conduzido cirurgicamente. Cada ferida foi inoculada com 50 µl de 2 x 107 CFU / ml de MRSA (ATCC # 33591) e aplicado curativo. Após um dia, as feridas foram tratadas com 50 μl de creme de controle contendo veículo (N = 4), 50 μl contendo mupirocina (N = 4) ou 50 μl de creme contendo 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol (N = 8) diariamente. As observações clínicas foram realizadas nos dias 1, 3, 5, 7, 10 e 14. As feridas foram avaliadas e as observações registradas usando o sistema de escore de Draize. Fotografias digitais de cada ferida foram obtidas e documentadas.

[090]No dia 14 após o ferimento, sob anestesia, os animais foram sacrificados com uma injeção intravenosa de Beuthanasia-D a uma dose de 150 mg / kg de peso corporal. Amostras incluindo a ferida inteira, juntamente com aproximadamente 2 a 3 mm das margens normais da pele não ferida foram colhidas. Cada amostra de ferida no ouvido foi cortada em metades. Para uma metade da ferida, a ferida foi colocada em um recipiente com formalina tamponada neutra a 10% e processada para avaliação histológica de rotina. A organização da ferida foi classificada quanto a quatro parâmetros em uma escala de 0 a 4 no sítio da ferida quanto à inflamação, granulação, angiogênese e epitelização. As feridas foram caracterizadas de maneira cega por um membro certificado do College of American Pathologists. A outra metade da ferida foi pesada (mg) em uma placa de Petri estéril, depois colocada em um moedor de tecidos descartável estéril e homogeneizada para microbiologia quantitativa. O tubo contendo a amostra de tecido moída foi preenchido com 5 ml de solução salina estéril a 0,85%.

Cinco diluições em série 1:10 foram então preparadas com alíquotas de 0,5 ml e 4,5 ml de solução salina estéril por alíquota. Subsequentemente, 0,1 ml do homogenato e cada diluição foram colocados em ágar tripticase de soja e colocados em uma incubadora a 37º C. O número de organismos viáveis por ferida foi registrado como CFU / grama de tecido.

[091]O 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol demonstrou uma redução > 99% na sobrevivência bacteriana (queda de 4 log CFU) em comparação com o controle. O grupo de 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)- 1H-tetrazol foi significativamente melhor que o grupo de mupirocina na cicatrização de feridas e na epitelização. O grupo de 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)- 1H-tetrazol estava sozinho entre os grupos em mostrar efeito positivo no eritema e edema. Ver a Figura 1 para um gráfico da redução percentual de feridas ao longo do tempo nos três grupos; o grupo de controle teve menos contração de ferida do que o grupo tratado (p < 0,001), e o grupo tratado com 5-(2,5-bis(4-cloro-2- isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol foi melhor que o grupo tratado com mupirocina (p

< 0,03).

Eficácia na Celulite

[092]Camundongos SKH1 foram injetados intradermicamente com MRSA (N = 15). Cinco (5) camundongos receberam formulação tópica de controle neutro por 7 dias. 5 camundongos receberam uma formulação tópica contendo mupirocina por 7 dias. 5 camundongos receberam uma formulação tópica contendo 5-(2,5-bis(4-cloro- 2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol por 7 dias. A área da lesão foi medida a cada dia. Após 7 dias, as unidades formadoras de colônias terminais (CFUs) foram medidas para determinar a eficácia microbiológica. Verificou-se que o tratamento com 5-(2,5- bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol reduz significativamente a área da lesão e a contagem de CFU terminal (ver Figura 2B, 2A).

Claims (16)

REIVINDICAÇÕES

1. 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

2. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um carreador dermatologicamente aceitável.

3. Uso da composição de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de que é como um medicamento.

4. Uso, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que o uso é para erradicar bactérias patogênicas dentro de uma úlcera diabética.

5. Uso, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que o uso é o tratamento de uma infecção de pé diabético.

6. Uso, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que o uso é o tratamento de uma celulite.

7. Método para erradicar bactérias patogênicas dentro de uma úlcera diabética em um indivíduo em necessidade de tal tratamento, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende aplicar uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil) tiofen-3-il)-1H-tetrazol na úlcera.

8. Método, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato de que as bactérias patogênicas são selecionadas a partir do grupo que consiste de: Enterococcus sp, Enterococcus faecalis, incluindo enterococcus resistente à vancomicina ATCC700211 e ATCC51299, Bacillus sp, Bacillus cereus, Staphylococcus sp, Staphylococcus epidermidis, Staphylocococcus aureus, cepas de Staphylocococcus aureus NRS7 (intermediário à vancomicina), NRS2 (intermediário à vancomicina), ATCC43300 (resistente à meticilina - MRSA), NRS1, NRS382 (cepa epidêmica USA100), NRS383 (cepa epidêmica USA200), NRS384 (cepa epidêmica

USA200), isolados clínicos incluindo isolados clínicos de MRSA, isolados clínicos de MRSA adquirido na comunidade, e isolados clínicos resistentes a múltiplos fármacos (MDR) ciprofloxacina, penicilina, eritromicina e / ou mupirocina, Streptococcus sp, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pneumoniae e Clostridium spp.

9. Método, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato de que o composto é aplicado uma ou duas vezes ao dia por 7 a 14 dias ou até o fechamento da ferida.

10. Método de tratamento de infecção de pé diabético em um indivíduo em necessidade de tratamento que tem um sítio de infecção, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende aplicar uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de 5-(2,5-bis(4-cloro-2)-isopropilfenil) tiofen-3-il)-1H-tetrazol ao sítio.

11. Método, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato de que as bactérias patogênicas são selecionadas a partir do grupo que consiste de: Enterococcus sp, Enterococcus faecalis, incluindo enterococcus resistente à vancomicina ATCC700211 e ATCC51299, Bacillus sp, Bacillus cereus, Staphylococcus sp, Staphylococcus epidermidis, Staphylocococcus aureus, cepas de Staphylocococcus aureus NRS7 (intermediário à vancomicina), NRS2 (intermediário à vancomicina), ATCC43300 (resistente à meticilina - MRSA), NRS1, NRS382 (cepa epidêmica USA100), NRS383 (cepa epidêmica USA200), NRS384 (cepa epidêmica USA200), isolados clínicos incluindo isolados clínicos de MRSA, isolados clínicos de MRSA adquirido na comunidade, e isolados clínicos resistentes a múltiplos fármacos (MDR) ciprofloxacina, penicilina, eritromicina e / ou mupirocina, Streptococcus sp, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pneumoniae e Clostridium spp.

12. Método, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato de que o composto é aplicado uma ou duas vezes ao dia por 7 a 14 dias ou até o fechamento da ferida.

13. Método de tratamento da celulite em um indivíduo em necessidade de tratamento tendo um sítio de infecção, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende aplicar uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de 5- (2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H-tetrazol no sítio.

14. Método, de acordo com a reivindicação 13, CARACTERIZADO pelo fato de que as bactérias patogênicas são selecionadas a partir do grupo que consiste de: Enterococcus sp, Enterococcus faecalis, incluindo enterococcus resistente à vancomicina ATCC700211 e ATCC51299, Bacillus sp, Bacillus cereus, Staphylococcus sp, Staphylococcus epidermidis, Staphylocococcus aureus, cepas de Staphylocococcus aureus NRS7 (intermediário à vancomicina), NRS2 (intermediário à vancomicina), ATCC43300 (resistente à meticilina - MRSA), NRS1, NRS382 (cepa epidêmica USA100), NRS383 (cepa epidêmica USA200), NRS384 (cepa epidêmica USA200), isolados clínicos incluindo isolados clínicos de MRSA, isolados clínicos de MRSA adquirido na comunidade, e isolados clínicos resistentes a múltiplos fármacos (MDR) ciprofloxacina, penicilina, eritromicina e / ou mupirocina, Streptococcus sp, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pneumoniae e Clostridium spp.

15. Método, de acordo com a reivindicação 13, CARACTERIZADO pelo fato de que o composto é aplicado uma ou duas vezes ao dia por 7 a 14 dias ou até o fechamento da ferida.

16. Método de fabricação de 5-(2,5-bis(4-cloro-2-isopropilfenil)tiofen-3-il)-1H- tetrazol, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende reagir uma mistura de 5-bromotetrazóis N-protegidos com ácido tiofen-3-il-borônico sob condições de acoplamento cruzado mediado por paládio.