BR112020010127A2

BR112020010127A2 - métodos e sistemas para abordagem contínua e sinergística para tratamento e preservação de células biológicas.

Info

Publication number: BR112020010127A2
Application number: BR112020010127-3A
Authority: BR
Inventors: Lisa A. Herickhoff; Myles Shepherd; Christopher Bennett
Original assignee: Membrane Protective Technologies, Inc.
Priority date: 2017-11-21
Filing date: 2018-11-21
Publication date: 2020-11-10
Also published as: CA3082590A1; AU2018372175A1; EP3714037A1; EP3714037A4; WO2019104184A1; MX2020005037A; US20210120808A1

Abstract

Modalidades da presente invenção podem fornecer abordagens de continuidade sinérgica ao tratamento de células biológicas que podem mitigar danos às mesmas, incluindo mas não se limitando a preservar uma coleção de células biológicas (6) colhidas a partir de uma fonte in vivo (7) talvez em um meio de retenção (10 ) que pode ser adaptado de um regime de limitação de dano celular previsto (8) e até de um uso predeterminado (9). Algumas modalidades da presente invenção fornecem um ambiente uniforme (15) ao redor de células biológicas.

Description

RELATÓRIO DESCRITIVO Pedido de Patente de Invenção para “MÉTODOS E

SISTEMAS PARA ABORDAGEM CONTÍNUA E SINERGÍSTICA

PARA TRATAMENTO E PRESERVAÇÃO DE CÉLULAS BIOLÓGICAS” Reivindicação de prioridade

[001] Este pedido é um pedido PCT internacional que reivindica prioridade e benefício do Pedido Provisório dos EUA No.

62/589.422 depositado em 21 de novembro de 2017 e Pedido Provisório dos EUA No. 62/594.394 depositado em 4 de dezembro de 2017, cada um aqui incorporado por referência neste documento.

Campo técnico

[002] A presente invenção pode se relacionar a abordagens de continuidade sinérgica ao tratamento de células biológicas que podem mitigar os danos associados à exposição, movimento e armazenamento ambiental que podem ocorrer logo após a colheita das células e durante o transporte para uma instalação de processamento e talvez através das etapas de preservação e posterior uso ou análise. O tratamento das células pode ser fornecido talvez pela adição de soluções naturais, como com vários extratos ou similares. As células biológicas podem ser protegidas com ambientes altamente uniformes para cada célula.

Antecedentes da invenção

[003] O processamento in vitro de células ou tecidos biológicos pode incluir a remoção de células de seu ambiente nativo, talvez in vivo, transportando essas células, talvez preservadas de alguma maneira, depois utilizadas e/ou analisadas em algum momento futuro.

Especificamente, pode haver cinco etapas no processamento de células biológicas. Um primeiro passo pode ser um passo de colheita, depois um passo de transporte, depois um passo de resfriamento ou mesmo uma criopreservação, um passo de descongelamento ou mesmo de aquecimento e, finalmente, o uso de células como implantação, fertilização, uso in vivo, uso in vitro, ou semelhante. Além disso, pode haver uma etapa de análise em que a qualidade das células pode ser testada para uso potencial ou talvez para determinar o resultado final potencial do uso de células ou tecidos.

[004] No passado, o tratamento de células biológicas começava apenas quando recebidas do transporte de um local de colheita.

Durante o transporte, as células estão sujeitas a ambientes prejudiciais, podem cultivar bactérias e podem até ter viabilidade reduzida, estrutura de membrana modificada ou até mesmo estar parcialmente morta. Nas instalações de processamento, é possível combinar diferentes coleções para fornecer células vivas suficientes para o processamento. Como essas células foram danificadas e podem conter bactérias ou outros contaminantes biológicos, normalmente são necessários antibióticos para serem adicionados às células.

[005] Em cada uma dessas etapas, pode ser importante, e talvez até vital, otimizar o ambiente, de modo que as células (por exemplo, tecidos, órgãos ou similares) sejam capazes de funcionar no máximo quando forem utilizadas posteriormente. É bem entendido que pode ser necessário transportar células antes de processá-las, como com a criopreservação. As células podem ser coletadas em um local, mas processadas e até congeladas em outro local. Como apenas um exemplo não limitativo, pode-se considerar a criopreservação de células-tronco que podem ser coletadas em um hospital onde o paciente pode estar localizado; as células podem ser enviadas para um segundo local, como um laboratório com experiência em criopreservação; talvez posteriormente utilizado para transplante em um receptor em um terceiro local. Em outro exemplo não limitativo, as células espermáticas podem ser coletadas em um primeiro local do animal macho e podem precisar ser transportadas para um segundo local para um laboratório processar as células para criopreservação.

Portanto, os espermatozóides podem precisar de transporte por até 24 horas antes do processamento para a criopreservação. Além disso, células ou tecidos coletados para análise médica / diagnóstico podem exigir transporte para uma instalação onde estão sendo analisados ou utilizados. Como outro exemplo, considere transplantes de órgãos. Muitas vezes, os pacientes podem estar doentes demais para viajar para o local da colheita do órgão, portanto, esse órgão deve ser transportado. Se essas células (por exemplo,

tecidos) não puderem sofrer criopreservação imediata, o processo de transporte poderá causar alterações prejudiciais que podem alterar o resultado de algumas análises de diagnóstico ou uso final, como na criopreservação de gametas.

[006] No primeiro passo, as células podem ser colhidas a partir de uma fonte in vivo. Segundo, para que as células sejam posteriormente utilizadas com sucesso in vivo, elas devem estar livres de porções prejudiciais, incluindo talvez itens como bactérias ou oxidantes ou similares que possam estar associados às células, talvez como resultado do procedimento de colheita. Terceiro, cada célula distinta pode precisar estar em um ambiente uniforme, talvez contatado pelos vários componentes benéficos de maneira homogênea. Quarto, os materiais podem precisar ser cercados por compostos que possam ajudar os componentes moleculares das células sobrevivem aos rigores de todo o processo. Em quinto lugar, pode ser desejável que os materiais utilizados sejam compatíveis com a fonte do destinatário, de modo que não sejam necessários mais processamento ou manuseio (e danos concomitantes).

[007] As células podem ser armazenadas a uma temperatura resfriada durante o transporte, o que pode incluir armazenamento a cerca de 4 ° C, cerca de 17 ° C ou mesmo à temperatura ambiente. Em cada um desses casos, as células (por exemplo, tecidos ou órgãos) podem continuar respirando e até metabolizando ativamente. Fazer isso pode resultar na produção de oxidantes, outros metabólitos e até bioprodutos metabólicos que podem danificar as células de maneira imediata ou final. De fato, para cada diminuição de cerca de 10 ° C na temperatura, a maioria das enzimas pode mostrar uma redução de cerca de 1,5 a cerca de 2 vezes na atividade metabólica. No entanto, o resfriamento pode causar uma transição de fase lipídica que pode até causar danos cumulativos às estruturas membranosas, acidose, trauma mecânico, produção de radicais livres, contratura ou mesmo apoptose, ou similares. (Ver, por exemplo, Rubinsky, Boris, 2003, "Principles of Low Temperature Cell Preservation", "Heart Failure Reviews", 8: 277-84, aqui incorporado por referência aqui). Além disso, o próprio transporte pode causar movimentos, traumas mecânicos, misturas ou similares, que podem resultar na dissolução de oxigênio ou mesmo superóxido na solução, o que pode prejudicar a integridade das células.

[008] Nas etapas de processamento biológico das células, as células podem sofrer lesões físicas. A lesão, como trauma mecânico, pode liberar danos endógenos associados a padrões moleculares das mitocôndrias (MTDs) que podem levar a uma resposta imune (ver, por exemplo, Qin Zhang, Mustafa Raoof, Chen Yu, Sumi Yuka, Tolga Sursal, Junger). Wolfgang, Karim Brohi, Kiyoshi Itagaki e Carl J. Hauser, 2010, "DAMPs mitocondriais circulantes causam respostas inflamatórias à lesão", Nature, 464: 104-07, cada um aqui incorporado por referência aqui).

Embora isso possa não causar problemas enquanto as células são mantidas in vitro, uma vez que as células estejam em um ambiente in vivo, esses MTDs podem provocar lesões mediadas por neutrófilos. De fato, esses MTDs podem levar a uma resposta semelhante à sepse, talvez porque os MTDs possam ser semelhantes a bactérias (por exemplo, padrões moleculares associados a patógenos microbianos). A injeção de MTDs no fígado de rato por via intravenosa parece ter causado resposta inflamatória acentuada tão rapidamente quanto cerca de 3 horas após a injeção (ver, por exemplo, Qin et al. 2010). Pode-se inferir que um método para reduzir o dano às células coletadas, que pode diminuir as MTDs, pode resultar em uma transferência mais eficaz das células para um ambiente secundário.

Considerando a colheita de células-tronco e até o transplante para terapia: a indução de uma resposta imune talvez ao injetar células-tronco como terapia de cura pode ser a antese da resposta prevista e até desejada; portanto, pode ser imperativo desenvolver um método para inibir essas respostas, como o uso de soluções naturais e até não prejudiciais. Além disso, algumas propriedades antibacterianas ou bacteriostáticas de uma solução podem ser úteis.

[009] O uso de células biológicas, talvez além das questões acima, possa incluir pelo menos algumas células mortas de uma fonte doadora ou componentes de células de uma fonte doadora que podem provocar uma resposta inflamatória no hospedeiro. (Ver, por exemplo, Kono, Hajime, Dipti Karmarkar, Yoichiro Iwakura e Kenneth L. Rock,

2010, “Identificação do sensor celular que estimula a resposta inflamatória à morte celular estéril”, The Journal of Immunology, 184: 4470- 78, aqui incorporada por referência aqui.) Como um exemplo não limitativo, se as células-tronco forem colhidas, limpas e inseridas em um local secundário, elas poderão evocar uma resposta inflamatória no local secundário, se alguma porcentagem das células tiver morrido durante o processamento.

Essa resposta pode ter várias conseqüências no local do hospedeiro, incluindo talvez, o mais prejudicial, a rejeição das células-tronco.

Minimizar a morte de células em uma solução in vitro pode resultar em uma melhor aceitação das células vivas intactas quando entregues in vivo.

[0010] Na etapa um, as células biológicas podem ser recuperadas com fluidos associados e até materiais. Esses fluidos associados podem conter componentes que são, de fato, prejudiciais para as células. Antes do transporte dessas células, pode ser benéfico inibir a atividade dos componentes, como pode ser o caso da fosfolipase A2 ou fosfolipases semelhantes, que podem ser encontradas nos ejaculados de cabras e outros mamíferos (ver, por exemplo, Purdy, P. (2006), "Uma revisão sobre a criopreservação de espermatozóides de cabra." Small Ruminant Research 63 (3): 2l5-225). A fosfolipase A2 pode levar a uma resposta pró-inflamatória pela hidrólise de fosfolipídios (ver, por exemplo, Iritani, A. e Y. Nishikawa (1963), "Estudos sobre a enzima coaguladora de óvulos no sêmen de cabra: IV. Sobre a posição dos constituintes da gema"

atacado pela enzima coagulante ", Jpn J Anim Reprod 8 (4): 113-117 e Purdy (2006), cada um aqui incorporado por referência aqui) que pode danificar as células. Além disso, as fosfolipases podem causar despolarização de mitocôndrias em células como espermatozóides. A despolarização pode resultar em diminuição da motilidade dos espermatozóides, talvez comprometendo a função final da célula. Os compostos que são inadvertidamente coletados, como fosfolipases, também podem afetar negativamente as soluções usadas para processamento adicional das células, talvez resultando na multiplicação de seu impacto negativo.

[0011] Outros compostos tais como células bacterianas podem ser coletados em conjunto com as células biológicas. Estes podem ser expelidos da fonte das células ou inadvertidamente podem ser coletados. A coleta inadvertida pode ocorrer devido a bactérias residentes na superfície da pele de um animal ou talvez devido a bactérias residentes no equipamento usado para coleta das células. Independentemente da fonte de células contaminantes, as bactérias podem ser prejudiciais para as células coletadas e também podem ser prejudiciais para o destinatário das células, tais como, mas não limitadas a, tecidos ou células para transplante, bem como para células utilizadas para reprodução. Além disso, as bactérias podem ser parte integrante do tecido ou células coletadas, como é bem entendido no intestino, no rúmen e em outros órgãos do aparelho digestivo.

Enquanto in vivo, essas bactérias vivem sinergicamente com as células ou tecidos, uma vez em um ambiente in vitro, a combinação de bactérias e células ou tecidos pode causar deterioração das referidas células ou tecidos que podem ser prejudiciais ao seu objetivo final.

[0012] Como mencionado acima, a criopreservação pode ser um bom método para preservar células como gametas, células germinativas, linhas celulares únicas, células-tronco, tecidos do cordão umbilical, células bacterianas, fúngicas, algas e similares. Infelizmente, a criopreservação também pode afetar negativamente a integridade da célula, por exemplo, provocando alterações em uma bicamada lipídica e até mesmo nas proteínas da bicamada lipídica, bem como danos oxidativos, talvez causando danos ao DNA e até organelas. Além disso, a composição lipídica da membrana pode afetar o sucesso da criopreservação.

[0013] A criopreservação pode afetar o DNA, as mitocôndrias ou talvez até outras organelas da célula. Tais alterações podem ser fatais para a célula. Por exemplo, ao chorar na reserva de espermatozóides eqüinos e bovinos, pelo menos cerca de 50% das células podem estar mortas quando as referidas células são descongeladas ou talvez retornadas a um estado não congelado. Da mesma forma, em células como o sangue do cordão umbilical, dependendo da técnica utilizada, apenas cerca de 40% ou menos das células podem ser viáveis. Porém, ao criopreservar o esperma de javali, que pode ter mais fosfatidiletanolamina e esfingomielina (ver, por exemplo, Johnson, LA, et al. (2000) "Armazenamento de sêmen de javali". Animal Reproduction Science 62 (1): 143-172, incorporado neste documento. por referência aqui), até cerca de 100% do esperma de javali pode estar morto após o descongelamento, potencialmente devido a essa diferença na composição fosfolipídica. Como outro exemplo, diferentes espécies de cabras podem congelar com mais ou menos sucesso (cerca de 0% a cerca de 50% de motilidade pós-degelo), o que pode ser devido à composição lipídica da membrana.

[0014] A composição lipídica das membranas pode ter um efeito direto na capacidade de criopreservar uma célula. No passado, foram feitas tentativas com vários graus de sucesso para adicionar colesterol e fluidez semelhante, induzindo ácidos graxos às células espermáticas. Além disso, lipídios foram adicionados ao meio de cultura quando as células estão crescendo.

[0015] As células criopreservadas podem ser armazenadas a cerca de -20 ° C, cerca de -80 ° C ou até -96 ° C (por exemplo, armazenamento de nitrogênio líquido). No passado, as células podem ser congeladas em soluções que podem conter açúcares, lipídios, antioxidantes e talvez até um crioprotetor como glicerol, DMSO, trealose, metanol ou similares. Embora possam mitigar alguns dos danos e permitir a criopreservação de algumas espécies, espermatozóides e células de outras espécies, como javalis e felinos, ainda podem ter muitos danos para serem congelados comercialmente.

[0016] Durante cada estágio do processo de tratamento, as células podem ser cercadas por um ambiente não uniforme que pode danificar ainda mais as células ou até mesmo causar mais danos. Por exemplo, uma célula pode estar em contato direto com porções de açúcar, mas não com lipídios ou glicerol. Alternativamente, uma célula pode estar em contato direto com outra célula e não com uma solução. O sucesso final de uma célula quando adicionado ao meio pode depender em parte da exposição a cada célula individual.

[0017] As soluções fornecidas anteriormente podem se concentrar apenas em um aspecto ou mesmo em uma etapa específica de um processo, mas nunca abordaram o processo completo. Por exemplo, métodos anteriores para proteger as células contra danos podem incluir transporte a temperaturas reduzidas, como preservação hipotérmica (acima de zero), e talvez até a adição de porções que possam inibir, impedir ou retardar os danos induzidos por compostos negativos. As frações atuais podem incluir não-eletrólitos, como sacarose, rafmose, sacaróide, ânions de alto peso molecular, tampões, glutationa para acidose e similares (ver, por exemplo, Rubinsky, Boris, 2003, “Principles of Low Temperature Cell Preservation”, Principles of Low Temperature Cell Preservation). 8: 277- 84, aqui incorporado por referência aqui.). O citrato pode ser usado para retardar a ativação de porções como a fosfolipase A2, mas pode ser insuficiente em alguns animais (ver, por exemplo, Roy, A. (1957), "Enzima coaguladora de gema de ovo no sêmen e na glândula de Cowper da cabra" , "Nature 179 (4554): 318, aqui incorporado por referência aqui). A supressão dessas bactérias pode ser conseguida por meios químicos, como talvez por antibióticos. No entanto, esses compostos podem ser caros e podem ser proibidos devido a interações posteriores com células ou tecidos receptores.

[0018] A patente US 6864046 pode ensinar um método para coletar várias amostras celulares de um animal e pode ensinar um método para diluir a referida amostra celular em uma solução que pode ser específico para as referidas espécies. No entanto, isso pode não ensinar um método para modificar a temperatura das referidas células, nem proteger as células contra danos. Do mesmo modo, a Patente US 8685563 (Ostermeier et al.) Pode ensinar um kit contendo componentes necessários para a criopreservação, mas pode não ensinar o transporte das referidas células em preparação para a criopreservação. A patente US 2010/0196872 pode ensinar um método para a criopreservação de células usando fosfolipídios, surfactantes, carboidratos, agentes de congelamento e talvez tampões, mas não trata do transporte ou retenção de células a uma temperatura acima do congelamento.

[0019] A patente US 6982172 pode ensinar um método para a criopreservação de oócitos e embriões, mas não pode discutir o método para obter ou transportar os referidos oócitos ou embriões. A patente 20170367324 pode ensinar um método para usar vitamina B12 e alfa-cetogluterato para uma composição e diluente de células espermáticas que podem ser mantidas por talvez 90 minutos. Infelizmente, na maioria dos casos, esse tempo é insuficiente para o transporte ou transporte de células de um local de coleta.

[0020] A patente US 5358931 pode ensinar um método para proteger células usando polipeptídeos anticongelantes derivados de espécies de peixes polares. Este método pode ser aplicável a células a temperaturas elevadas em relação à célula, o que pode ser prejudicial para alguns tipos de células.

[0021] A patente US 6238920 pode ensinar um método de transporte de embriões bovinos em uma condição não congelada que pode conter compostos tiol. Os referidos compostos tiol podem ser prejudiciais para os embriões em certas concentrações e, portanto, podem não ser ótimos para as células ou tecidos e podem não ser eficazes em todas as espécies.

[0022] A patente US 6395305 pode ensinar um método para aumentar a sobrevivência espermática utilizando fosfolipídios, mas não ensina um método para garantir que as células espermáticas sejam expostas a um ambiente uniforme dos referidos fosfolipídios.

Descrição da invenção

[0023] A presente invenção inclui uma variedade de aspectos que podem ser selecionados em diferentes combinações com base na aplicação específica ou precisam ser abordados. Numa forma básica, as modalidades da presente invenção fornecem abordagens de continuidade sinérgica para o tratamento e até a preservação de células biológicas que podem abranger processos começando na colheita das células biológicas e transportando as células para uso das células. Além disso, as modalidades da presente invenção podem incluir métodos e sistemas que protegem as células biológicas, como o fornecimento de ambientes uniformes ao redor de cada célula.

[0024] Quanto aos objetivos desta invenção, pode ser entendido que as tentativas de enviar células biológicas foram repletas de obstáculos, incluindo, entre outros, induzindo danos e artefatos que podem ser mal interpretados como sendo inerentes à célula e não como uma função de envio. Portanto, um objetivo da presente invenção pode incluir a proteção de células biológicas contra os perigos do transporte, talvez tratando células com base em seu uso final.

[0025] Outro objetivo amplo da presente invenção pode ser fornecer pré-processamento de células biológicas durante o transporte, de modo que, quando as células chegarem ao laboratório de processamento, o processamento restante possa ser reduzido e as células tenham sido protegidas contra os danos do transporte.

[0026] Ainda outro objetivo pode ser fornecer meios de retenção, talvez específicos para o uso final das células, que possam ser adicionados às células biológicas antes ou mesmo durante o transporte.

[0027] Outro objetivo da presente invenção pode ser fornecer processamento apropriado para o transporte de células biológicas que devem ser criopreservadas para uso posterior. Ainda outro objetivo da presente invenção pode incluir o fornecimento de um ambiente celular uniforme para proteger células biológicas.

[0028] Naturalmente, outros objetos, metas e modalidades das invenções são divulgados em outras áreas da especificação, desenhos e reivindicações.

Breve descrição dos desenhos

[0029] FIG. 1 fornece uma representação conceitual de várias modalidades da presente invenção.

[0030] FIG. 2 fornece uma representação conceitual de uma célula biológica em um ambiente uniforme, como pode ser entendido nas várias modalidades da presente invenção.

[0031] FIG. 3 fornece uma representação conceitual de uma célula biológica em um ambiente, como pode ser entendido nas várias modalidades da presente invenção.

[0032] FIG. 4 fornece um gráfico da porcentagem de motilidade do esperma de javali em extensores de remessa, incluindo a motilidade média de esperma de javali resfriado antes do envio ("pré- motilidade de pré-transporte"), a motilidade média de esperma de javali resfriado na chegada a um laboratório (por exemplo, após o envio) ("motilidade pós-transporte") e a motilidade média do esperma de javali após a criopreservação ("motilidade pós-descongelamento).

[0033] FIG. 5 fornece um gráfico da motilidade total e progressiva do esperma de galo mantido por 3 horas a 4 ° C ou 22 ° C em um extensor de controle (BPSE sem aditivos (“Ct”)), suco de 5% em BPSE (“suco -5% ”), 5% de extrato de polpa no BPSE (“ extrato de polpa-5% ”) e 0,25% de extrato de hidroglicerina nas folhas no BPSE (“ hidroglicerina de folha-0,25% ”)

[0034] FIG. 6 mostra um cromatograma de LC-MS demonstrando o tempo de retenção do extrato de Sea Buckthorn indicando a presença de antimicrobianos, anti-inflamatórios e antioxidantes.

[0035] FIG. 7 mostra exemplos não limitativos de representação pictórica de coagulação que podem ocorrer em extensores contendo gema de ovo se a fosfolipase A2 não for inibida.

[0036] FIG. 8 mostra um gráfico de uma comparação da área de coagulação do plasma seminal em um controle (sem inibidor da fosfolipase A2) versus em um plasma seminal mais uma formulação (curcumina) contendo um inibidor que resultou em uma diminuição estatisticamente significativa na coagulação do ovo partículas de gema em comparação com o controle.

[0037] FIG. 9 mostra uma comparação do número de colônias bacterianas no sêmen de javali enviado entre amostras de controle (não tratadas) em comparação com aquelas tratadas com a Formulação 1 ou a Formulação 2.

Formas de realização da invenção

[0038] Como mencionado anteriormente, a presente invenção inclui uma variedade de aspectos, que podem ser combinados de maneiras diferentes. As seguintes descrições são fornecidas para listar elementos e descrever algumas das modalidades da presente invenção.

Esses elementos são listados com modalidades iniciais; no entanto, deve ser entendido que eles podem ser combinados de qualquer maneira e em qualquer número para criar modalidades adicionais. Os exemplos descritos de maneira diversa e modalidades preferidas não devem ser interpretados para limitar a presente invenção apenas aos sistemas, técnicas e aplicações explicitamente descritas. A modalidade específica ou modalidades mostradas são apenas exemplos. A especificação deve ser entendida e pretende apoiar reivindicações amplas, bem como cada modalidade, e até reivindicações em que outras modalidades podem ser excluídas. É importante ressaltar que a divulgação de modalidades meramente exemplares é não se destina a limitar a amplitude de outras reivindicações mais abrangentes que podem ser feitas, quando tal pode ser apenas um dos vários métodos ou modalidades que podem ser empregados em uma reivindicação mais ampla ou similar. Além disso, esta descrição deve ser entendida como suporte e engloba descrições e reivindicações de todas as várias modalidades, sistemas, técnicas, métodos, dispositivos e aplicativos com qualquer número dos elementos divulgados, com cada elemento sozinho e também com todo e qualquer permutações e combinações de todos os elementos nesta ou em qualquer aplicação subsequente.

[0039] Modalidades da presente invenção podem fornecer métodos e sistemas para proteger células biológicas transportadas com continuidade sinérgica. Pode ser um sistema completo, talvez considerando cinco etapas no processamento de células biológicas, o que pode permitir a diminuição do dano das células ao longo do processamento e até o aumento subsequente da saúde celular pós-processamento. A continuidade sinérgica alcançada pelo desenvolvimento de um sistema totalmente integrado, em vez de um sistema por partes, pode permitir maior sucesso das células, tecidos ou órgãos no ponto final de uso. Ao coordenar etapas individuais, pode-se diminuir o tempo de processamento de todo o sistema, limitando, assim, os danos às células. A compatibilidade dentro do sistema pode permitir a proteção em cada etapa individual de componentes ou compostos que mais tarde podem causar uma diminuição na eficácia.

Grande parte dos danos nos sistemas in vitro pode ser cumulativa. Ao limitar o dano inicial, o acúmulo de dano total pode ser diminuído.

[0040] Modalidades da presente invenção podem considerar as etapas individuais para processamento, mas, em vez de otimizar as etapas individuais, otimiza todo o sistema para itens que ocorrem dentro de cada uma das etapas. Como pode ser entendido a partir do diagrama conceitual da FIG. 1, uma primeira etapa em um sistema de processamento pode ser uma etapa de colheita (1) onde uma coleção de células biológicas (6) pode ser colhida a partir de uma fonte in vivo (7), uma segunda etapa pode incluir transportar (2) células biológicas, um terceiro passo pode incluir tratamento hipotérmico (3) das referidas células biológicas, um quarto passo pode incluir aquecimento (4) das células biológicas e talvez até um quinto passo do uso (5) das células biológicas.

[0041] Modalidades da presente invenção podem fornecer um método para proteger células biológicas in vitro com continuidade sinérgica compreendendo as etapas de colheita de uma coleção de células biológicas a partir de uma fonte in vivo; preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base em um regime de limitação de dano celular previsto e um uso predeterminado; proporcionar um meio de retenção aplicável ao referido regime de limitação de dano celular previsto e ao referido uso predeterminado; adicionar o referido meio de retenção à referida coleção das referidas células biológicas; transportar a referida coleção das referidas células biológicas no referido meio de retenção com base no referido regime previsto de limitação de danos às células e no referido uso predeterminado; receber a referida coleção das referidas células biológicas após o referido passo de transportar a referida coleção das referidas células biológicas no referido meio de retenção; preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente; tratamento hipotérmico das referidas células biológicas; aquecer as referidas células biológicas; e talvez até usando as referidas células biológicas para o referido uso predeterminado. Em algumas modalidades, a presente invenção pode fornecer uma composição de preservação de transporte biológico de células compreendendo uma coleção de células biológicas obtidas de uma fonte in vivo; um meio de retenção a ser aplicado à referida coleção de células biológicas antes de transportar a referida coleção de células biológicas, o referido meio de retenção aplicável a um regime antecipado de limitação de danos às células e um uso predeterminado da referida coleção de células biológicas; e talvez até um meio de preparação de tratamento hipotérmico a ser aplicado à referida coleção de células biológicas após o referido passo de transportar a referida coleção de células biológicas.

[0042] Outras modalidades da presente invenção podem fornecer um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas compreendendo as etapas de colheita de uma coleção de células biológicas a partir de uma fonte in vivo; estabelecer um ambiente uniforme em torno de cada célula biológica da referida coleção de células biológicas; e talvez até adicionar um inibidor de fosfolipase à referida coleção de células biológicas. Em ainda outra modalidade da presente invenção, pode fornecer um método para preservar células biológicas colhidas compreendendo as etapas de colheita de uma coleção de células biológicas de uma fonte in vivo; criar um ambiente uniforme em torno de substancialmente cada célula biológica na referida coleção das referidas células biológicas; tratamento hipotérmico das referidas células biológicas; aquecer as referidas células biológicas; e talvez até usando as referidas células biológicas. Modalidades da presente invenção podem fornecer um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas compreendendo as etapas de colheita de uma coleção de células biológicas a partir de uma fonte in vivo; preservar a referida coleção das referidas células biológicas; e mesmo adicionando um inibidor de fosfolipase à referida coleção de células biológicas.

[0043] Modalidades da presente invenção podem fornecer uma composição de preservação de transporte biológico de células compreendendo uma coleção de células biológicas obtidas de uma fonte in vivo; um meio de retenção a ser aplicado à referida coleção de células biológicas antes de transportar a referida coleção de células biológicas, o referido meio de retenção aplicável a um regime antecipado de limitação de danos às células e um uso predeterminado da referida coleção de células biológicas; e mesmo um meio de preparação de tratamento hipotérmico a ser aplicado à referida coleção de células biológicas após a referida etapa de transporte da referida coleção de células biológicas. Outras modalidades da presente invenção podem fornecer uma composição de preservação de células biológicas compreendendo uma coleção de células biológicas obtidas a partir de uma fonte in vivo; um ambiente uniforme estabelecido em torno de cada célula biológica de uma coleção das referidas células biológicas; e talvez até um inibidor da fosfolipase. Em ainda outras modalidades da presente invenção podem fornecer uma composição de preservação de células biológicas compreendendo uma coleção de células biológicas obtidas a partir de uma fonte in vivo; um meio de retenção a ser aplicado à referida coleção de células biológicas, o referido meio de retenção configurado para estabelecer um ambiente uniforme em torno de cada célula biológica; e mesmo um meio de preparação de tratamento hipotérmico a ser aplicado à referida coleção de células biológicas após a referida etapa de transporte da referida coleção de células biológicas.

[0044] Uma coleção de células biológicas (6) pode incluir, mas não está limitada a, células, tecidos, espermatozóides, esperma equino, esperma bovino, esperma caprino, esperma ovino, esperma suína, esperma de aves, ovários, oócitos, embriões, órgãos, haste células, células geneticamente modificadas, células derivadas artificialmente, qualquer combinação dos mesmos ou semelhantes. Uma coleção de células biológicas (6) pode ser colhida de uma fonte in vivo (7) que pode incluir,

mas não está limitada a, mamífero, humano, roedores, eqüinos, bovinos, caprinos, ovinos, porcinos, aves, peixes, conchas peixes, répteis, nephropidae, poiquilotérmicos, vertebrados aquáticos ou semelhantes.

[0045] Uma vez que as células biológicas foram coletadas, as modalidades da presente invenção podem fornecer a preservação de uma coleção de células biológicas, talvez com base em um regime antecipado de limitação de danos às células (8) e até em um uso predeterminado (9). Como um exemplo não limitativo, modalidades da presente invenção podem fornecer a inclusão de um composto anti- inflamatório em um meio de criopreservação (por exemplo, na etapa 3) que pode ser útil apenas quando células espermáticas são introduzidas em um ambiente uterino (por exemplo, na etapa 5) Portanto, modalidades da presente invenção podem considerar a eficácia de tratamentos como a adição de meios, adição de compostos ou similares que podem ser aplicados em uma etapa anterior ou mesmo posterior de um processo, criando assim uma continuidade sinérgica dentro de um total sistema.

[0046] Um uso predeterminado (9) pode ser um uso das células biológicas no final de um processo. Como um exemplo não limitativo, um uso predeterminado pode incluir inseminação, implantação, cultura, pesquisa, teste de diagnóstico, replicação, preservação de gametas, preservação genética, criopreservação, reprodução, qualquer combinação dos mesmos ou similares.

[0047] Modalidades da presente invenção podem incluir um método e formulação para proteger as células durante o processamento adicional antes do processamento para um uso predeterminado, como congelamento. Por exemplo, os sistemas podem incluir células de proteção durante etapas de concentração, como centrifugação ou filtração, durante mudanças ou transições de meio, durante transições de temperatura e similares. Modalidades da presente invenção podem ser utilizadas para liberar oócitos ou mesmo embriões e armazená-los durante o transporte para um laboratório. A invenção também pode incluir dispositivos apropriados para permitir tal utilização. Deve-se entender que tratamentos de continuidade sinérgicos em todas as etapas ou mesmo níveis podem ajudar a melhorar a saúde das células, tecidos ou agregados biológicos para uso futuro e criopreservação.

[0048] Um regime de limitação de dano celular antecipado (9) pode incluir uma expectativa de que tipo de dano celular pode ocorrer a um tipo específico de células biológicas, talvez para um tipo específico de uso e tentando limitar esse dano, modificando o processo.

Exemplos não limitativos de um regime previsto de limitação de dano celular (9) podem incluir uma redução no dano celular, talvez causada por um aspecto como contaminação biológica, contaminação química, contaminação causada por espécies invasoras, resíduos químicos, detergentes, resíduos desinfetantes, compostos solventes , compostos orgânicos, fotoativação, modificação de foto, manuseio inadequado, bactérias, fungos, micoplasma, vírus, qualquer combinação dos mesmos ou semelhantes.

[0049] A presente invenção, nas modalidades, pode fornecer um meio de retenção (10) talvez aplicável a um regime antecipado de limitação de danos às células e até a um uso predeterminado. Um meio de retenção pode incluir componentes que podem ser personalizados para limitar os danos às células de um sistema e podem até ser personalizados para um uso predeterminado. Um meio de retenção (10) pode incluir, mas não está limitado a, ingredientes naturais, componentes não derivados de animais, inibidor microbiano, composto bacteriostático, composto bactericida, um composto que inibe a replicação bacteriana, componente antibacteriano, inibidor da fosfolipase, composto anti-inflamatório , composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão, extensor, antioxidante, nucleador de gelo, meio quimicamente definido, vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos, fenólicos, polifenóis, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, moléculas compostas, fitoquímicos, metabólitos secundários das plantas, extrato vegetal, extrato de espinheiro, extrato de Fagara zanthoxyloides, extrato de Olax subscorpioides, extrato de Tetrapleura tetraptera, silibinina, fosfofructoquinase, carnosina, lignanas, fagaronina, elagitaninos,

eschscholtzidina, saponina, qualquer combinação dos mesmos ou semelhantes. Em algumas modalidades da presente invenção, um meio de retenção pode ser fornecido em um kit de preservação (22).

[0050] Um meio de retenção (10) pode ser adicionado a uma coleção de células biológicas e uma coleção de células biológicas no meio de retenção pode ser transportada. Um meio de retenção pode ser adicionado imediatamente às células biológicas após a colheita ou pode ser adicionado em algum momento após a colheita, talvez antes do transporte.

O transporte de células biológicas pode ser qualquer tipo de transporte, incluindo, entre outros, transporte marítimo, automotivo, transportador ou similar. Um meio de retenção, quando adicionado às células biológicas, pode permitir que as células pré-processem talvez durante uma etapa de preservação ou mesmo de transporte. Em algumas modalidades, um meio de retenção pode ser um meio de pré-processamento (12). Por conseguinte, modalidades da presente invenção podem fornecer um método para encurtar todo o processo, preparando as células ou tecidos para as etapas posteriores, anteriormente no processo. Esta preparação pode incluir a preparação ideal de células para receber processamento a jusante (ou posterior). Por conseguinte, algumas formas de realização da presente invenção proporcionam uma redução de uma quantidade de tempo de laboratório de exposição in vitro gasto na preparação de células para um processamento hipotermicamente preservado ou outro. Isso pode incluir a diminuição do tempo de equilíbrio das células em um laboratório, talvez porque as células tenham sido pré-processadas no início do processo, por exemplo, antes ou mesmo durante o transporte. Em modalidades, a presente invenção pode fornecer que, ao usar as células biológicas, pode ser necessário utilizar apenas uma única coleção de células biológicas, talvez porque mais células biológicas sobreviveram ou estão em uma condição que pode ser usada. No passado, uma única coleção de células pode não ter fornecido o suficiente para processamento ou uso.

[0051] Algumas modalidades da presente invenção podem fornecer um sistema para diminuir o número de células ou a quantidade de tecido que pode ser necessária para a colheita, o armazenamento e, finalmente, o uso que pode fornecer um método para otimizar a saída de qualquer tratamento hipotermicamente determinado, como a criopreservação e sistema de armazenamento de recursos finitos, como células, tecidos ou órgãos produzidos a partir de um ser biológico.

[0052] Modalidades da presente invenção podem se relacionar ao uso de extratos biológicos ou mesmo extratos de plantas que podem funcionar como um anti-inflamatório, um antibacteriano natural, um antioxidante e um nucleador de gelo, ou similares, mas apenas alguns exemplos não limitativos.

[0053] Uma combinação de extratos pode ser adicionada a qualquer variedade de tipos de células ou tecidos, talvez protegendo assim a célula ou tecido no qual as células ou tecidos são transplantados.

Em algumas modalidades, os extratos podem ser derivados de uma fonte vegetal, como uma que produz seiva, frutos, sementes, folhas, flores, caules, cascas, qualquer combinação dos mesmos ou outras partes que possam ser utilizadas para criar um extrato. Estes podem ser derivados de qualquer variedade de plantas, como o gênero Hippophae, Parthenium, cardo de leite ou similares e podem ser derivados de outros gêneros de plantas. Os extratos podem incluir um extrato vegetal bruto, um extrato vegetal de fonte única, uma combinação de extratos de mais de uma fonte, extratos de álcool, componentes de suco, extratos de hidróxido de sódio, extratos aquosos, extratos de hidroglicerina, qualquer combinação dos mesmos ou semelhantes. Além disso, modalidades da presente invenção podem se relacionar ao uso de meios quimicamente definidos que podem atingir um equilíbrio semelhante de compostos ativos ou mesmo bioativos.

Tais compostos bioativos podem ser derivados de qualquer número de fontes.

[0054] Como mencionado acima, modalidades da presente invenção podem fornecer um extrato bruto de planta ou combinação de extratos de múltiplas fontes que podem incluir um composto anti-inflamatório, um composto que suprime o crescimento bacteriano, um composto que inibe a replicação ou reprodução bacteriana, antioxidantes, membranas , ou fosfolipídeo de membrana, compostos estabilizadores, compostos imunossupressores, um composto que pode atuar como um nucleador de gelo ou como compostos antiprotease, ou similares. Em algumas modalidades, um sistema pode incluir compostos derivados de plantas que podem agir nas capacidades acima ou podem até usar compostos quimicamente definidos, ou ainda podem incluir compostos conhecidos por funcionarem nessa capacidade, mas em uma nova combinação de usos ou aplicações, ou mesmo em partes do processo anteriormente não tratadas. Os compostos estabilizadores de membrana podem incluir extratos de zanthoxyloide de Fagara, Olax suhscorpioides, Hippophae rhamnoides e Tetrapleura tetraptera. Eles também podem incluir silibinina, açúcares como trealose, fosfofructoquinase, carnosina e extratos similares. Os compostos bacteriocidas podem incluir lignanas, fagaronina, elagitaninas, eschscholtzidine, saponina e vários outros fitoquímicos, carboidratos ou outros compostos bioativos, como fenólicos e ácidos orgânicos ou similares.

[0055] Modalidades da presente invenção podem incluir compostos como heptadecanoil etanolamida ou triterpenos semelhantes a esteróides que podem não ser prejudiciais ao tecido receptor e que podem até ajudar a aliviar uma resposta inflamatória do tecido receptor.

[0056] Em algumas modalidades, os compostos utilizados podem incluir naturalmente ou artificialmente heptadecanoil etanolamida, triterpenos, triterpenos semelhantes a esteróides,

lipoglicopeptídeos, gomas naturais, resinas naturais, óleos essenciais, óleo de tea tree, hiperenona A, hipercalina B, hiperforina, fenólicos, polifenóis, terpenos flavonóides, alcalóides, própolis, espermidina, rutina, quercetina, cumarinas, kaempferol, estigmasterol, campesterol, tocoferol, carotenóides, extrato de suco de rábano silvestre, tobramicina, qualquer combinação dos mesmos ou semelhantes e que possam funcionar como componentes ou componentes antimicrobianos. Além disso, as modalidades da presente invenção podem incluir uma adição exógena de compostos, talvez para aumentar uma concentração total de antimicrobianos, compostos bacteriostáticos ou bacteriocidas, talvez para funcionar nas várias capacidades. Um inibidor microbiano pode ser um componente derivado de planta.

[0057] Modalidades da presente invenção podem ser entendidas como contendo compostos de ocorrência natural que podem funcionar em mais de uma capacidade. Um composto tal como um composto fenólico pode funcionar também como um composto antimicrobiano.

[0058] Em algumas modalidades, a presente invenção pode incluir uma variedade de meios amplamente utilizados e comumente que podem ser suplementados com extratos de plantas ou outros antioxidantes, lipídios, açúcares e similares para realizar as funções de antimicrobianos, anti-inflamatórios, estabilizadores de membrana e antioxidantes.

[0059] Modalidades da presente invenção podem abordar um meio de adicionar meios de retenção, antioxidantes, antimicrobianos e compostos anti-inflamatórios e porções benéficas semelhantes, ou similares, talvez a uma taxa medida durante o transporte, de modo que a proteção conferida pelas porções não possa ser esgotada ao longo do tempo da remessa. Isso pode incluir liberação do tempo (por exemplo, compostos liberados pelo tempo em um meio de retenção), aumento de quantidades (por exemplo, adição de meios de retenção suficientes para durar durante uma etapa de transporte), adição medida ou mesmo por gotejamento (por exemplo, adição de meios de retenção adicionais durante uma etapa de transporte) e similares para manter a atividade biológica talvez em um nível ideal. Além disso, modalidades da presente invenção podem incluir, dentro do sistema, a adição de vários compostos em todos os pontos dos processos. Em algumas modalidades, a invenção pode limitar as mudanças de meios dentro do processamento, talvez adicionando vários compostos no início para aumentar a eficácia ao longo de todo o processo.

[0060] Nas modalidades da presente invenção, um meio de retenção pode incluir pelo menos dois componentes de: um antioxidante, um inibidor da fosfolipase, agente estabilizador de membrana e um agente antimicrobiano, ou similares.

[0061] Algumas modalidades da presente invenção podem fornecer um inibidor de fosfolipase, talvez em um meio de retenção ou semelhante. Um inibidor de fosfolipase pode ser um inibidor de fosfolipase A2 e pode até ser zinco, manganês, ácido cítrico e qualquer combinação dos mesmos, ou similares. Estes podem ser utilizados em combinação com extratos de plantas e / ou outros aditivos para uma variedade de células, tecidos, órgãos ou similares. As concentrações requeridas podem depender do sinergismo com outros aditivos no sistema e também podem depender da quantidade e tipo de fosfolipase presente no exsudato da coleção celular. Em algumas modalidades, a presente invenção pode fornecer inibidores naturais da fosfolipase, como extratos vegetais, cucurmina, extratos de Gingko biloba, Centella asiatica, extratos de Hippophae, bem como inibidores químicos da fosfolipase, compostos à base de pirrolidona, ácido aristolóquico, espermina e talvez até mesmo sulfato de neomicina. também pode funcionar como um composto antimicrobiano, qualquer combinação dos mesmos ou semelhante.

[0062] Nas modalidades da presente invenção, um agente osmótico pode ser um extrato vegetal.

[0063] Modalidades da presente invenção podem proporcionar que a preservação de células biológicas ou mesmo durante o transporte de células biológicas possa incluir o resfriamento das células biológicas, talvez em um meio de retenção, como com um refrigerador

(11). Isso pode incluir a aceleração do resfriamento, de modo que o processamento das células, tecidos e extratos biológicos esteja disponível imediatamente após a chegada a um determinado local da instalação. Pode incluir métodos especializados para modificar a temperatura das células durante o tratamento, o que pode ativar ou otimizar um processo. As células biológicas podem ser resfriadas a uma temperatura tal como, sem limitação, entre cerca de 0 ° C a cerca de 37 ° C, cerca de 4 ° C, cerca de 10 ° C e cerca de 17 ° C, ou similares. O resfriamento pode estar em uma determinada taxa e talvez até uma determinada temperatura final para facilitar a composição positiva da membrana. O resfriamento das células pode ser um resfriamento suave, talvez de maneira a minimizar os danos às células. Obviamente, a taxa de resfriamento pode variar dependendo do tipo de coleção de células, sua composição de bicamada lipídica, volume ou semelhante. Um exemplo de uma taxa de resfriamento para células biológicas pode estar entre cerca de 0,01 ° C / min e cerca de 1 ° C / min.

Modalidades da presente invenção também podem incluir um método para controlar a taxa de resfriamento, bem como uma taxa de resfriamento prescrita para otimizar a saúde das referidas células. Também pode incluir métodos de resfriamento especializados para ativar ou até otimizar a invenção.

[0064] Modalidades da presente invenção podem fornecer células de retenção a uma dada temperatura, talvez para melhorar ainda mais a funcionalidade dos antimicrobianos, anti-inflamatório, estabilização de membrana e antioxidantes. Algumas modalidades da presente invenção podem incluir compostos que são bacteriostáticos, retardando o crescimento de compostos bacterianos no lugar de ou bacteriocidas, eliminando o crescimento de compostos bacterianos, além de um composto antimicrobiano.

[0065] Modalidades da presente invenção podem proporcionar o recebimento de uma coleção de células biológicas, talvez após o transporte. As células biológicas recebidas podem ter uma característica, como, sem limitação, crescimento bacteriano reduzido, aumento do efeito bacteriostático e aumento dos efeitos bactericidas, ou similares, talvez devido a tratamento anterior. As células biológicas podem então ser preparadas para serem tratadas hipotermicamente, como com um meio de preparação para tratamento hipotérmico (18), que pode incluir vários componentes, como um crioprotetor, quando um tratamento hipotérmico pode ser uma criopreservação. Um meio de preparação de tratamento hipotérmico (18) pode incluir componentes hipotérmicos, tais como, mas não limitados a antibióticos, ingredientes naturais, componentes não derivados de animais, inibidor microbiano, composto bacteriostático, composto bactericida, um composto que inibe a replicação bacteriana, componente antibacteriano, inibidor de fosfolipase , composto anti- inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão, extensor, antioxidante, nucleador de gelo, meio quimicamente definido, vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos , fenólicos, polifenóis, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, moléculas compostas, fitoquímicos, metabólitos secundários de plantas, extrato vegetal, extrato de espinheiro, extrato de Fagara zanthoxyloides, extrato de Olax subscorpioides, extrato de Tetrapleura tetraptera, silibinina, fosfofructoquinase, carnosina, lignans, fagaronine, ellagitannins, eschscholtzid ine, saponina, qualquer combinação dos mesmos ou semelhante. Em algumas modalidades, a presente invenção pode fornecer a adição de um antioxidante a células biológicas que devem ser tratadas hipotermicamente, como em um meio, que pode incluir, mas não está limitado a, óxido de aleno sintase, fenólicos, flavonóides, ácido ascórbico, tocoferóis, carotenóides taninos, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, terc-butil-hidroxiquinona, galato de propila e compostos derivados de plantas ou sintéticos, suficientes para reduzir ou eliminar o superóxido de espécies reativas de oxigênio, hidroxil, peroxil, alcoxi, óxido nítrico, oxigênio singlete, peróxido de hidrogênio, qualquer combinação dos mesmos ou semelhante.

[0066] Modalidades da presente invenção podem fornecer que um tratamento hipotérmico (20) pode incluir, mas não está limitado a resfriamento, criopreservação, liofilização, liofilização,

vitrificação ou similares.

[0067] Ao preparar células biológicas para serem tratadas hipotermicamente, como com um meio de preparação de tratamento hipotérmico, menos antibióticos podem ser utilizados do que para células biológicas que não foram tratadas anteriormente no processo, como antes do transporte ou similares. O uso de menos antibióticos pode incluir, entre outros, menos de 50 UI / ml de penicilina, menos de 1 OOIU / l de penicilina, menos de cerca de SOpg / ml de estreptomicina, menos de cerca de 100 pg / ml de estreptomicina, menos de cerca de 500 pg / ml de estreptomicina ml de estreptomicina, menos do que cerca de 500 UI / ml de penicilina, menos do que cerca de 150 ug / ml de lincomicina, menos do que cerca de 300 ug / ml de espectinomicina, ou similares. Em algumas modalidades, antibióticos que podem ser adicionados a células biológicas, como células que foram transportadas, podem ser substituídos, pelo menos em parte, por um extrato de planta. Isso pode incluir, mas não está limitado a, substituir cerca de 10% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 20% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 30% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 40% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 50% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 60% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 70% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 80% do antibiótico por um extrato vegetal;

substituir cerca de 90% do antibiótico por um extrato vegetal; substituindo cerca de 100% do antibiótico por um extrato vegetal, ou similar.

[0068] Em algumas modalidades, a presente invenção pode fornecer a manutenção de um potencial redox in vivo dentro de células biológicas, talvez durante a preservação ou mesmo as etapas de transporte, ou similares. Isto pode ser conseguido com uma combinação de antioxidantes solúveis em lipídios e aquosos, talvez em um meio de retenção ou semelhante. Esses antioxidantes podem ser um extrato vegetal.

[0069] Em algumas modalidades, a presente invenção pode incluir método e sistemas que podem alavancar uma metodologia de resfriamento e transporte e podem estendê-la a uma metodologia para criopreservação e / ou preparação para criopreservação.

[0070] A combinação de resfriamento adequado, meio de retenção e até antioxidantes pode facilitar o transporte de células ou tecidos para testes de diagnóstico, criopreservação, replicação ou outras metodologias que possam exigir que células, tecidos e materiais biológicos cheguem intactos e biologicamente ativos.

[0071] A presente invenção, em modalidades, pode ser utilizada para preparar otimamente células para receber processos a jusante (ou posteriores), de modo que as células possam se beneficiar ao máximo de outros tratamentos que possam ocorrer. Em algumas modalidades relacionadas à colheita de células para criopreservação, uma pequena quantidade de crioprotetor pode ser adicionada às células biológicas no início do processo, o que pode permitir que as células, tecidos ou órgãos sejam menos danificados, pode ter um período de equilíbrio mais longo, pode exigir menos crioprotetor após o transporte e pode até resultar em melhor saúde celular ao descongelar. Por conseguinte, modalidades da presente invenção podem fornecer uma saúde celular pós-quente melhorada (21) para as células biológicas, talvez após um tratamento hipotérmico.

Uma saúde celular pós-aquecida melhorada pode ser analisada pelas taxas de gravidez, como quando o esperma pode ser congelado e depois descongelado. Uma melhora na saúde celular após o descongelamento pode ser comparada às taxas de gravidez de espermatozóides descongelados que não foram tratados anteriormente em um processo. Por exemplo, uma saúde celular pós-aquecida melhorada pode ser superior a cerca de 25% da taxa de gravidez inseminação artificial de espermatozóides bovinos pós- aquecidos.

[0072] Em modalidades, um crioprotetor pode incluir, mas não se limita a, glicerol, glicina, dimetilsulfóxido, prolina, betaínas modificadas, glicinabetaína, dimetilsulfoniopropionato, ciclo-hexanodiol, metilformamida, dimetilformamida, etileno glicol, trealose, açúcares complexos concentrados, seiva de árvore, açúcares concentrados, crioprotetores penetrantes, crioprotetores não penetrantes, extratos vegetais, qualquer combinação dos mesmos ou semelhantes.

[0073] Modalidades da presente invenção podem proporcionar que um sistema possa ser usado com qualquer etapa para o processamento de células. Por exemplo, uma etapa de preservação pode ser realizada por um sistema (13) tal como, sem limitação, microfluídica, citometria de fluxo ou sistemas semelhantes. Além disso, ou mesmo alternativamente, uma etapa de preparação pode ser realizada por um sistema (13) tal como, sem limitação, microfluídica, citometria de fluxo ou sistemas semelhantes.

[0074] Modalidades da presente invenção podem fornecer uma composição de ácidos graxos talvez na faixa de cerca de 0,5% a cerca de 10% v / v para fornecer estabilização às membranas para proteger as células da exposição a compostos oxidantes, para impedir a ruptura celular, a ruptura celular e expulsão de compostos citoplasmáticos que podem ser prejudiciais para células intactas adjacentes, individualmente e qualquer combinação das mesmas.

[0075] Outras modalidades da presente invenção podem fornecer um método ou dispositivo para limitar a exposição ao oxigênio das células e soluções circundantes.

[0076] Algumas modalidades da presente invenção podem incluir uma etapa pós-coleta que limita o tipo ou a variedade de células. A seleção de células por sexo pode ser um passo entre a coleta e a preservação hipotérmica. Além disso, pode haver alguma seleção de células, incluindo a seleção citométrica de fluxo de células de um tipo específico, como a seleção de células-tronco contendo vários marcadores.

A invenção deve ser entendida como abrangendo o meio no qual as células podem ser coletadas ou processadas como parte da continuidade sinérgica para o produto final ideal.

[0077] Modalidades da presente invenção podem incluir métodos para congelamento ou, alternativamente, liofilização, liofilização, vitrificação ou outras etapas de preservação. Além disso, a invenção também pode incluir a adição do crioprotetor que pode ocorrer em uma adição por etapas ou em uma única etapa, conforme necessário para o tipo específico de célula ou tecido. Essa adição pode permitir ainda mais o congelamento rápido após o transporte. A invenção pode incluir crioprotetores tradicionais, como glicerol, glicina, DMSO (dimetilsulfóxido), metil formamida, dimetil formamida, etileno glicol, ou pode incluir crioprotetores alternativos, como os derivados de plantas ou outros compostos que servem para criar um ambiente hipertônico e talvez dessecar ou preparar as células para a criopreservação, como prolina, betainas modificadas, talvez glicinabetaína, sulfonopropionato de dimetilo, ciclohexanodiol e talvez até trealose ou seiva de árvores.

[0078] Um método e formulação para proteger as células durante a preservação, transporte, processamento, tratamento hipotermicamente ou similares podem incluir métodos para modificar o ambiente imediato ao redor da célula. Modalidades da presente invenção podem fornecer uma capacidade de adicionar extratos específicos, talvez personalizados para uma composição lipídica inata da célula, talvez para ser resfriada e / ou criopreservada, expondo-a à célula de maneira a torná-la mais eficaz, e pode, assim, proteger a integridade da célula ou tecido em relação à sua funcionalidade. Algumas modalidades da presente invenção podem fornecer uma capacidade de alterar a composição da membrana e / ou ajustar o ambiente diretamente ao redor das células para compensar déficits na composição da membrana. Em outras modalidades, a presente invenção pode fornecer um meio circundante à célula que pode ser personalizado para a célula e pode ser uniforme para todas as células.

Modalidades da presente invenção podem fornecer uma capacidade de reter um ambiente uniforme ao redor da célula até o momento em que seja desejável liberar o referido ambiente. Por conseguinte, algumas modalidades da presente invenção podem fornecer a criação de um ambiente uniforme (15). Este ambiente uniforme pode ser criado com um sistema como, sem limitação, microfluídica, encapsulamento, criação de lipossomos, criação de micelas, criação de uma estrutura de gaiola biológica, qualquer combinação dos mesmos ou similares. Um ambiente uniforme (15) pode fornecer encapsulamento de células.

[0079] Como pode ser entendido a partir da representação conceitual fornecida na FIG. 2, uma célula biológica (14)

pode ser encapsulada ou mesmo cercada por um ambiente uniforme (15) que pode ser cercado por um meio (16). FIG. 3 mostra um exemplo de uma representação conceitual de uma estrutura semelhante a uma gaiola (17) em torno de uma célula biológica (14). Uma estrutura tipo gaiola pode ser um complexo tridimensional.

[0080] Modalidades da presente invenção podem se relacionar à capacidade de adicionar compostos que podem compensar os lipídios endógenos (ou nativos) que podem inibir ou, inversamente, permitir a fluidez da membrana. Tais lípidos podem ser externos à célula ou podem estar ligados à célula ou podem ser incorporados na célula. A escolha da interação dos lipídios com a membrana pode depender do tipo de célula, do objetivo final do uso da célula, do tipo de meio de armazenamento, do tipo de dessecação e / ou método de criopreservação utilizado ou de qualquer combinação dos mesmos. Modalidades da presente invenção podem se relacionar com um método de criação e manutenção de um ambiente personalizado, talvez encapsulando as células.

[0081] Algumas modalidades da presente invenção podem incluir quaisquer lipídios da membrana comumente identificados, podem ser ácidos graxos livres, podem conter fosfoglicerídeos, esteróis ou esfingolípidos, e também podem conter proteínas da membrana, sais, agarose ou outros materiais. Tais materiais podem interagir com o grupo principal fosfolipídeo para formar uma estrutura tipo gaiola (17) que pode estabilizar os lipídios e / ou balsas lipídicas nas membranas celulares. Um ambiente uniforme pode incluir um composto tal como, sem limitação, lipídios de membrana, glicolipídios, colesterol, ácidos graxos livres, fosfoglicerídeos, esteróis, esfingolípidos, proteínas de membrana, sais, agarose, qualquer combinação dos mesmos ou semelhantes.

[0082] Modalidades da presente invenção podem conter uma distribuição incomum de lipídios, como ácido linolênico (18:3) em aproximadamente 40%, linoléico (18:2) em cerca de 15% e palmítico em cerca de 20%. Os lipídios podem ser comumente encontrados nas espécies da planta ou animal ou podem ser lipídeos não encontrados na família, gênero ou espécie. Os lipídios também podem ser de um reino filogenético diferente, como plantas com células animais e o inverso.

[0083] Em algumas modalidades, uma mistura de lipídios, ácidos graxos livres, fosfolipídios e colesterol pode ser adicionada às células biológicas que podem ser otimamente benéficas para um tipo de célula individual e uma derivação celular.

[0084] Algumas modalidades da presente invenção podem fornecer a adição de glicolipídios, colesterol e proteínas como parte da adição. Pode ser entendido que a adição pode ser aquosa e / ou à base de lipídios e pode conter uma combinação de compostos.

[0085] A presente invenção, nas modalidades, pode incluir métodos para encapsular os lipídios de modo que eles possam ser integrados na membrana. Esse encapsulamento pode incluir lipossomas ou métodos semelhantes para permitir a separação, a adição e a incorporação dos lipídios, conforme a invenção pode exigir.

[0086] A presente invenção, em algumas modalidades, pode incluir uma energia específica a ser adicionada aos lipídios para permitir que os lipídeos sejam adicionados sem interferir no processo de criopreservação.

[0087] Modalidades da presente invenção podem incluir uma estrutura micelular, uma bicamada lipídica ou monocamada envolvendo um núcleo. O núcleo também pode ser lipídios ou outros materiais benéficos, como antioxidantes. Essa estrutura pode servir para liberar os lipídios para a célula ou melhorar a funcionalidade de tais células.

[0088] Algumas modalidades da presente invenção podem fornecer um método para análise antes da criopreservação para permitir a otimização individual da formulação. Essa otimização pode ocorrer na família filogenética, gênero, espécie ou nível animal individual.

[0089] A presente invenção, nas modalidades, pode incluir uma variedade de sais ou outros compostos ou grupo de compostos, lipídios, sais, proteínas, proteínas BSA, combinações dos mesmos ou semelhantes, que funcionam para criar um complexo que pode funcionar como uma gaiola, um suporte ou uma estrutura tridimensional para estabilizar a membrana de modo que os componentes da membrana não sejam externalizados prematuramente. Os exemplos podem incluir fosfatidil serina, agarose, que normalmente pode ser encontrada no folheto interno da membrana, mas externalizada durante a criopreservação.

[0090] A presente invenção, em algumas modalidades, pode incluir a criação de "bolha" ou "manta" de compostos benéficos ao redor da célula que podem limitar as alterações na composição da membrana da própria célula.

[0091] Modalidades da presente invenção podem fornecer um método especializado para otimizar ou padronizar o ambiente ao redor das células durante o tratamento ou a exposição à invenção. Esse método pode incluir um método para encapsular um pequeno agrupamento de células em um ambiente uniforme limitado. Tais métodos podem incluir um sistema do tipo microfluídico para criar um microambiente. Encapsular uma célula biológica pode ser realizado por mi estrutura celular; uma camada lipídica, uma monocamada lipídica, uma bicamada lipídica ou semelhante. O microambiente pode incluir antioxidantes, lipídios vegetais, gema de ovo e / ou qualquer número de uma variedade de porções que se sabe serem benéficas para as células, além dos lipídios nos quais as células serão expostas. O microambiente pode incluir qualquer um dos atributos acima mencionados, de modo que a continuidade do sistema e, de fato, do ambiente celular ou tecidular seja mantida durante todo o curso do processamento. A criação do microambiente pode ser alcançada por métodos semelhantes ou incluindo o 'Sistema de Gotículas de Microfluídica Dolomita' ou talvez um sistema como o 'Elveflow'. Embora esse sistema possa não ter sido usado anteriormente para encapsular células como espermatozóides para uso em inseminação artificial, esse sistema pode fornecer um método para o desenvolvimento de um microambiente apropriado para encapsular um pequeno número de células.

[0092] Um agrupamento dos referidos microambientes pode então ser cercado ainda mais pelos meios apropriados para criar um ambiente adequado para o processamento. Esse microambiente pode incluir algum tipo de suporte externo que pode fornecer um método para manter o microambiente até um momento em que seja desejável liberar as células do referido microambiente. Como apenas um exemplo, o microambiente (15) pode ser mantido por agarose. O microambiente pode estar intacto a temperaturas resfriadas, como cerca de 4 ° C ou a temperaturas congeladas, como cerca de -20 ° C, ou talvez tão frio quanto cerca de -96 ° C, como pode ser conferido pelo armazenamento de nitrogênio líquido. Modalidades da presente invenção podem fornecer processamento de um microambiente incluindo, mas não limitado a, resfriar o referido microambiente entre cerca de 0 ° C a cerca de 37 ° C, resfriar o referido microambiente a cerca de 4 ° C, resfriar o referido microambiente a cerca de 10 ° C, resfriar o referido microambiente a cerca de 17 ° C, congelando o referido microambiente,

congelando o referido microambiente a cerca de -20 ° C e congelando o referido microambiente a cerca de -96 ° C, ou similares. O microambiente pode ser liberado a temperaturas como cerca de 20 ° C ou pode estar intacto até que a temperatura atinja cerca de 37 ° C.

[0093] Modalidades da presente invenção podem ser aplicáveis a uma ampla variedade de meios, tampões ou extensores comumente utilizados para criopreservação, transporte, descongelamento, células de preservação de tecidos, tecidos ou órgãos.

[0094] A presente invenção, nas modalidades, pode incluir um método para promover a integração dos lipídios nos lipídios celulares ou pode permitir a separação distinta dos lipídios. Tais métodos podem incluir a criação de lipossomos que aumentam a fusão de lipídios com membranas, ou podem incluir métodos para injetar lipídios na membrana, talvez por meio de um método molecular.

[0095] Os lipídios podem incluir lipídios, ácidos graxos livres, fosfolipídios, proteínas, glicoproteínas, lipoproteínas e outros compostos contendo lipídios e similares, como pode ser descrito acima. Os compostos podem incluir lipídios e componentes lipídicos, mas também podem incluir como açúcares, sais, proteínas, moléculas de compostos, fitoquímicos, metabolitos secundários de plantas e porções semelhantes que podem funcionar de maneira semelhante ou substancialmente semelhante.

[0096] Modalidades da presente invenção podem fornecer um sistema para análise de células, tecidos ou órgãos, para verificar o uso antes do uso ou para uma subamostra retida para análise após a utilização da maioria das células. Essa análise pode incluir análise de motilidade, análise da qualidade da membrana, análise de oxidação dentro da célula, tecido ou órgão.

[0097] Modalidades da presente invenção podem ser alcançadas usando um sistema microfluídico que trata células ou pequenos grupos de células quase individualmente, garantindo assim a exposição ideal a um ambiente uniforme. A invenção divulgada também pode utilizar um sistema microfluídico para encapsular as células em um ambiente discreto e ideal.

[0098] Como mencionado anteriormente, modalidades da invenção podem fornecer um método para encurtar todo o processo, preparando as células ou tecidos para as etapas posteriores, anteriormente no processo. Esta preparação pode incluir a preparação ideal de células para receber processamento a jusante (ou posterior). Por exemplo, se a fosfolipase puder ser inibida, a exposição das células e componentes celulares à gema de ovo posteriormente no processo pode não ter reação negativa. A exposição de células e componentes celulares não tratados com um inibidor da fosfolipase até a presença de gema de ovo (na etapa 3) pode causar uma redução de 50% da coagulação, enquanto o tratamento na etapa

1 pode causar uma redução de 80% na coagulação de gema de ovo.

Exemplo 1

[0099] O primeiro passo na criação de continuidade sinérgica é o tratamento imediato da célula, que transita de um ambiente in vivo para um ambiente in vitro. Este experimento demonstra a importância desse tratamento imediato com compostos antimicrobianos, antioxidantes e anti-inflamatórios no produto final (motilidade pós-degelo na Fig. 4). Esse impacto demonstra a necessidade de continuidade sinérgica (manutenção de um alto nível de antioxidantes, compostos antimicrobianos e anti- inflamatórios) dentro do sistema para obter uma célula pronta para seu uso predeterminado. Todas as células foram congeladas com a presença desses compostos e, portanto, isso demonstra a importância da continuidade desses compostos.

[00100] Foi realizado um experimento para avaliar a eficácia da adição de extratos de plantas em um extensor de expedição para avaliar a qualidade do esperma pós-descongelamento de 10 varrascos. Para cada um dos 10 javalis, o esperma foi coletado e diluído em 1 de 2 soluções a uma taxa de 1: 1 (v / v), em qualquer extensor sozinho (Controle (“CT”): extensor comercial AndroStar® Plus; Minitube) ou em um extensor contendo extrato de suco de Sea Buckthorn a 1% (v / v) no extensor AndroStar Plus ™ (suco a 1%). A motilidade foi analisada primeiro, depois o esperma foi resfriado a 17 ° C e transportado aproximadamente 6 horas

(por exemplo, cerca de 330 milhas). Na chegada ao laboratório, as amostras foram avaliadas quanto à motilidade, depois centrifugadas, o sobrenadante removido e o sedimento de esperma foi ressuspenso no mesmo meio de congelamento (extensor de gema de ovo de lactose USDA). O esperma foi congelado de acordo com o protocolo do USDA. Uma palha congelada de cada tratamento foi descongelada a 70 ° C por 8 segundos e depois analisada quanto à motilidade usando um CASA. Isso foi replicado duas vezes.

[00101] Na FIG. 4, a motilidade média do esperma de javali é mostrada graficamente para o esperma de javali resfriado antes do envio, após o envio e após o descongelamento por congelamento. Como esperado, a motilidade não difere antes do transporte. No laboratório, no entanto, abordando o ambiente inicial de forma compatível com o produto final e limitando os oxidantes e a carga bacteriana durante o transporte, o produto final é aprimorado. Melhorar a saúde de pré-congelamento do espermatozóide com a adição de extratos vegetais causa uma melhora estatisticamente significativa no produto final (motilidade pós- descongelamento). Os extratos vegetais proporcionaram efeitos antimicrobianos, anti-inflamatórios e antioxidantes. Ao avaliar a saúde dos espermatozóides pós-degelo, a melhoria proporcionada pelo transporte do suco de Sea Buckthorn também é estatisticamente significativa. A adição do extrato antes do transporte resultou em melhor saúde do esperma pós-

descongelamento.

Exemplo 2

[00102] A continuidade sinérgica é importante nas células congeladas (Exemplo 1), bem como nas células resfriadas (neste exemplo).

Este experimento avaliou o impacto de antioxidantes, antimicrobianos e compostos anti-inflamatórios no meio inicial de espera ou transporte (etapa 1). A presença de antioxidantes e antimicrobianos resulta em uma melhoria de 11 a 14% (dependendo da combinação de antioxidantes e antimicrobianos) sobre o controle, que não contém antioxidantes ou compostos antimicrobianos. Presumivelmente, as células saudáveis antes do tratamento hipotérmico final resultarão em células finais saudáveis.

[00103] Para avaliar a eficácia de três extratos na retenção de células para armazenamento hipotérmico futuro, o sêmen de um galo foi coletado por mensagem abdominal e estendido 1: 1 (v: v) com o extensor de sêmen de aves domésticas Beltsville (“BPSE”) e depois transportado de volta ao laboratório. O esperma foi estendido para tratamentos a uma concentração de 2xl09 de esperma / ml. Os tratamentos incluíram 5% de suco em BPSE ("suco-5%"), 5% de extrato de polpa em BPSE ("extrato de polpa-5%"), 0,25% de extrato de hidroglicerina em folha em BPSE ("hidroglicérina de folha-0,25%") e controle BPSE sem aditivos ("Ct").

Alíquotas de cada amostra foram armazenadas por 3 horas a 4 ° C ou 22 ° C e depois analisadas quanto à motilidade e motilidade progressiva usando um analisador de espermatozóides assistido por computador (CASA). FIG.

5 e Tabela 1 ilustram a melhoria da motilidade em comparação com o controle demonstrando que a melhoria com uma variedade de meios de transporte contendo compostos antioxidantes, anti-inflamatórios e antimicrobianos. Presumivelmente, a melhoria na primeira etapa do processo contínuo resultará em melhoria no produto final.

TABELA 1: Alterações na motilidade pós-degelo, dependendo do tratamento de remessa.

Exemplo 3

[00104] Os extratos de espinheiro marítimo utilizados em algumas das experiências acima mencionadas foram analisados quanto a antioxidantes, compostos anti-inflamatórios e compostos antimicrobianos. Além dos antioxidantes, sabe-se que os espinheiro marítimos contém triterpenos, que são moléculas semelhantes aos esteróides que podem funcionar como agentes antimicrobianos (veja Baoru Yang, Riina M. Karlsson, Pentti H. Oksman e Kallio, HP, “Phytosterols in Sea Bagas de espinheiro (Hippophae rhamnoides L.): identificação e efeitos de diferentes origens e épocas de colheita ”(2001), doi: 10.110 / JF0l08l3M, 5620-5629 e Mokoka, TA et ah,“ Atividade antimicrobiana e citotoxicidade de triterpenos isolados de folhas de Maytenus undata (Celastraceae), "BMC Complement. Altern. Med. 13, 111 (2013), 9 páginas, cada uma aqui incorporada por referência aqui). De fato, as bagas de espinheiro marítimo têm propriedades antimicrobianas que podem ser em parte devido aos triterpenos (ver Michel, T., Destandau, E., Le Floch, G., Lucchesi, ME e Elfakir, C., “Antimicrobiano, antioxidante e fitoquímico. investigações de folha, caule, raiz e semente de espinheiro marinho (Hippophae rhamnoides L.), "Food Chem. 131, 754-760 (2012), aqui incorporado por referência aqui).

[00105] A pesquisa de LC-MS sobre Sea Buckthorn identificou um conjunto de compostos que suportam as propriedades acima mencionadas, como mostrado na FIG. 6 e Tabela 2. Um número de compostos potencialmente anti-inflamatórios também foi identificado neste conjunto de dados. A partir desses dados e dos dados presentes na literatura, os extratos de Sea Buckthorn podem ser descritos como tendo atividades antioxidantes, antimicrobianas e até anti-inflamatórias que podem ser úteis na continuidade sinérgica do processamento de células, incluindo o transporte.

TABELA 2: Compostos identificados em extratos preparados em laboratório com atividades biológicas (ver FIG. 6 para o cromatograma).

Exemplo 4

[00106] Foi conduzida uma experiência para avaliar os efeitos da adição de compostos para inibir porções prejudiciais que são inadvertidamente coletadas quando uma coleção de células biológicas é obtida. Uma porção da continuidade sinérgica está antecipando o uso final da célula, a fim de determinar quais compostos podem ser prejudiciais ao produto final, inibindo ou diminuindo os efeitos desses compostos prejudiciais nas etapas iniciais do processamento in vitro, resultando em uma final superior. produtos. Apenas um exemplo de um composto prejudicial é a presença de fosfolipase A2 no plasma seminal de esperma de cabra expelido durante a ejaculação. A experiência a seguir demonstra os efeitos da inibição precoce da fosfolipase A2 e o impacto positivo a longo prazo. Uma segunda porção da continuidade sinérgica é a utilização de compostos que podem ter múltiplos efeitos dentro do sistema. Deve ser entendido que os fosfolipídios funcionam tanto na inflamação quanto no estresse oxidativo, portanto, a inibição da fosfolipase A2 está diminuindo duas das porções prejudiciais coletivas que podem afetar o uso celular predeterminado com sucesso.

[00107] Um extensor de gema de ovo foi preparado substituindo a lactose (Trizma base 131,5 mM, lactose 73 mM 40% v: v de gema de ovo), sem ácido cítrico e o pH foi ajustado para um extensor padrão de pH de 7. O sêmen de 3 dólares foi coletado usando um vagina. O ejaculado foi centrifugado por 5 min a 10OOxg. O sobrenadante (plasma seminal) foi removido e, em seguida, 1 parte de plasma seminal foi adicionada a 1 parte de extensor para criar uma solução de gema a 20%. O extensor era extensor de gema de lactose sozinho ou extensor de geose de lactose modificado para conter a curcumina inibidora da fosfolipase, como encontrado em Sea Buckthorn (ver Gupta et al. Bioquímica Molecular e Celular, outubro de 2006: 290: 193, aqui incorporado por referência).

Foram tiradas fotografias representativas de cada solução e, em seguida, as soluções de plasma seminal a 22 ° C e os vários extensores foram congelados a -80 ° C e deixados permanecer congelados por> 24 horas. As amostras foram descongeladas por incubação em banho-maria a 37 ° C por 1 minuto, depois foram tiradas fotos representativas. Para cada imagem, o espaço negativo (a área branca visível entre as gotas) foi medido usando o software ImageJ, ajustando o limiar da imagem usando a configuração "Auto" e analisando o tamanho das partículas (consulte Rasband, WS, ImageJ, Institutos Nacionais de Saúde dos EUA, Bethesda, Maryland, EUA, https://imagej.nih.gov/ij/, 1997-2018, aqui incorporado por referência). O tamanho médio das partículas foi registrado e as imagens foram analisadas em triplicado. FIG. 7 mostra figuras representativas da coagulação que podem ocorrer na gema de ovo contendo extensores se a fosfolipase A2 não for inibida. A coluna da esquerda é um exemplo não limitativo de uma representação pictórica da solução de gema de lactose sem pré-congelamento e pós-congelamento no plasma seminal (controle).

Observa-se que não há alteração significativa no tamanho das gotículas lipídicas da gema de ovo e não ocorreu coagulação. A coluna da direita mostra um exemplo não limitativo de solução de lactose na gema de ovo à qual foi adicionado plasma seminal. Antes do congelamento, não há coagulação e, no entanto, como pode ser observado na Tabela 3, o plasma seminal de pré-congelamento tratado com curcumina derivada de plantas a 0,2% é menos coagulado do que aqueles sem curcumina e não é diferente do controle. O pós-congelamento (coagulação (partículas grandes e escuras) é visível (veja o exemplo não limitativo na coluna da direita na Fig

7.) Esta é uma representação visual da coagulação que pode ocorrer na gema de ovo que contém extensores se a fosfolipase A2 não for inibida. A quantidade de coagulação da gema de ovo induzida pela fosfolipase endógena no plasma seminal é significativamente maior se nenhum inibidor estiver presente (Fig. 8).

TABLE 3: Dados agregados de um macho pigmeu demonstrando aumento da coagulação quando a cucurmina está ausente. (*: /K0.05)

[00108] O exemplo acima demonstra a importância da inibição de porções prejudiciais coletadas in vivo no início do processo de preservação hipotérmica. O tratamento das células in vitro imediatamente após a coleta tem um impacto positivo tanto no meio de coleta (pré- congelamento, Tabela 3) quanto no meio de criopreservação (pós- descongelamento na tabela 3 e na Fig. 8), demonstrando novamente a importância da sinergia. continuidade, consideração do produto final e partes prejudiciais, durante todo o processo.

Exemplo 5

[00109] A consideração de porções prejudiciais presentes no meio celular é essencial no sistema sinérgico e fornece continuidade a um produto final produtivo. Uma dessas porções prejudiciais pode incluir bactérias. As bactérias levam tempo para replicar, portanto, a supressão do crescimento bacteriano ou a eliminação das bactérias, através de alguns meios no início do processo, resultará em um melhor uso das células. Os compostos bioativos isolados do Sea Buckthorn foram testados quanto à eficácia na saúde pós-degelo quando usados imediatamente após a coleta in vitro das células.

[00110] O manuseio das células pode aumentar, causar ou coletar inadvertidamente contaminação bacteriana. Como exemplo não limitativo, foi realizado um estudo de ejaculação dividida usando sêmen de javali resfriado. O sêmen foi coletado de 12 varrascos pelo método da pressão digital e a fração de gel foi removida. O sêmen foi estendido para 1 25xl09 de esperma / dose (doses de 75 ml) em 3 tratamentos diferentes: AndroStar Plus (MOFA global) (Controle), AndroStar Plus com polímeros fenólicos complexos de 300 ppm como compostos antimicrobianos isolados de bagas (Formulação 1) e AndroStar Plus com a Formulação 2, contendo polímeros fenólicos complexos de 200 ppm mais 100 ppm de ácidos orgânicos isolados de bagas (Formulação 2). As amostras foram seladas e enviadas a 17 ° C durante a noite para um laboratório para análise.

[00111] Após o envio, as amostras foram semeadas em placas de ágar-sangue em duplicado e incubadas a 37 ° C por 48 horas. O número total de colônias para cada tratamento foi contado. Os tratamentos foram comparados estatisticamente usando ANOVA de comparação pareada. Como mostrado na FIG. 9, ambos os tratamentos com extrato vegetal (Formulação 1 e 2) foram melhorados estatisticamente em comparação com o controle, indicando uma supressão do crescimento microbiano nas amostras tratadas.

[00112] A supressão do crescimento microbiano no início do processo resultará em espermatozóides que não reagem com o acrossoma, têm maior membrana intacta e menos oxidantes na solução.

Tudo isso resulta em uma maior concentração de células saudáveis após preservação hipotérmica. Esses dados demonstram a eficácia da continuidade sinérgica.

Exemplo 6

[00113] Para demonstrar ainda mais a importância da continuidade sinérgica, foi realizado um estudo de ejaculação dividida usando sêmen buck. A adição de extratos vegetais foi avaliada ao longo de cada etapa do processo de criopreservação para comparar a importância de proteger as células em um sistema completo.

[00114] O esperma foi coletado de 2 machos (Etapa 1) e imediatamente diluído em um meio padrão (Controle), ou um meio contendo antioxidantes, protetores de membrana e compostos bacteriostáticos (Tratado). As células foram mantidas por 24 horas a 17 ° C para simular o transporte (Etapa 2) e depois criopreservadas (Etapa 3). O meio de criopreservação foi o meio Controle (Citrato de gema de ovo padrão da indústria) ou Meio tratado (Citrato de gema de ovo mais antioxidantes, protetores de membrana e compostos bacteriostáticos). As amostras foram carregadas em canudos de 0,25 cc e congeladas sobre vapor de nitrogênio por 20 minutos antes de mergulhar em nitrogênio líquido. Os canudos foram armazenados por um período mínimo de 24 horas, descongelados em banho-maria a 37 ° C por 1 minuto e analisados quanto à motilidade nas 0 e 3 horas após o degelo. As amostras também foram analisadas por citometria de fluxo às 0 e 3 horas após o descongelamento para integridade da membrana e do acrossoma usando SYBR Green / Propidium Iodide e AlexaFluor 647, respectivamente.

Observe que este experimento não incluiu a Etapa 5, uso ou inseminação, pois não estava disponível para o pesquisador.

[00115] A tabela 4 demonstra o efeito da continuidade sinérgica nos dados cumulativos. O esperma tratado com antioxidantes, protetores de membrana e compostos bacteriostáticos foi 7% mais saudável (motilidade melhorada (% móvel) e melhor qualidade de membrana e acrossoma (% membrana% de acrossoma intacto)). Isso indica que essas células teriam uma chance maior de realizar a conseqüência pretendida (fertilização de um oócito) do que as células tratadas com apenas parte do sistema ou não tratadas.

Tabela 4

[00116] Embora a invenção tenha sido descrita em conexão com algumas modalidades preferidas, não se destina a limitar o escopo da invenção à forma específica estabelecida, mas, pelo contrário, destina-se a cobrir as alternativas, modificações e equivalentes que puderem ser incluído dentro do espírito e escopo da invenção, conforme definido pelas declarações de invenções. Exemplos de reivindicações alternativas podem incluir:

[00117] 1. Método para proteger células biológicas in vitro com continuidade sinérgica, compreendendo as etapas de: colher uma coleção de células biológicas de uma fonte in vivo; preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base em um regime de limitação de dano celular previsto e um uso predeterminado; fornecer um meio de retenção aplicável para o referido regime de limitação de dano celular previsto e o referido uso predeterminado, em que o referido meio de retenção compreende pelo menos dois componentes selecionados a partir de um antioxidante, um inibidor da fosfolipase, agente estabilizador de membrana e um agente antimicrobiano; adicionar o referido meio de retenção à referida coleção das referidas células biológicas; transportar a referida coleção das referidas células biológicas no referido meio de retenção com base no referido regime previsto de limitação de danos às células e no referido uso predeterminado; receber a referida coleção das referidas células biológicas após o referido passo de transportar a referida coleção das referidas células biológicas no referido meio de retenção; preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente; tratamento hipotérmico das referidas células biológicas; aquecer as referidas células biológicas; e utilizando as referidas células biológicas para o referido uso predeterminado.

[00118] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que a referida coleção de células biológicas é selecionada de um grupo que consiste em células, tecidos, espermatozóides, esperma equino, esperma bovino, esperma caprino, esperma ovino, esperma suíno, esperma de aves, ovários, oócitos, embriões, órgãos, células-tronco, células geneticamente modificadas, células derivadas artificialmente e qualquer combinação dos mesmos.

[00119] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que a referida fonte in vivo é selecionada a partir de um grupo que consiste em mamífero, humano, roedores, equinos, bovinos, caprinos, ovinos, porcinos, aves, peixes , mariscos, répteis, nefropídeos, vertebrados poiquotérmicos e aquáticos.

[00120] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que o referido uso predeterminado é selecionado a partir de um grupo que consiste em inseminação, implantação, cultura, pesquisa, teste de diagnóstico, replicação, preservação de gametas, preservação genética, criopreservação , reprodução e qualquer combinação dos mesmos.

[00121] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende pelo menos um componente adicional selecionado de um grupo que consiste em ingredientes naturais, componentes de origem não animal, inibidor microbiano, composto bacteriostático, composto bactericida, um composto que inibe a replicação bacteriana, componente antibacteriano, inibidor da fosfolipase, inibidor da fosfolipase A2, composto anti-inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão, extensor, antioxidante, nucleador de gelo, meio quimicamente definido, vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos, fenólicos, polifenol, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, composto moléculas, fitoquímicos, metabólitos secundários das plantas, extrato vegetal, extrato de espinheiro marinho, extrato de Fagara zanthoxyloides, extrato de Olax subscorpioides, Hippophae rhamnoides ou extrato de Tetrapleura tetraptera, silibinina, fosfofructoquinase, carnosina, lignanas, fagaronina, eslagitolina, ellagitolina, eslagitolina, eslagitolina, eslagitolina, eslagitolina combinação dos mesmos.

[00122] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 5, ou qualquer outra cláusula, em que o referido extrato vegetal compreende um extrato vegetal derivado de uma fonte selecionada de um grupo que consiste em seiva, bagas, sementes, folhas, flores, caules, cascas e qualquer combinação dos mesmos.

[00123] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 5, ou qualquer outra cláusula, em que o referido extrato vegetal é selecionado a partir de um grupo que consiste em um extrato vegetal bruto, um extrato vegetal de fonte única, uma combinação de extratos de mais de uma fonte, extratos de álcool, componentes de suco, extratos de hidróxido de sódio, extratos aquosos, extratos de hidroglicerina e qualquer combinação dos mesmos.

[00124] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou em qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende um componente antimicrobiano selecionado a partir de um grupo que consiste em heptadecanoil etanolamida, triterpenos, triterpenos do tipo esteróide, lipoglicopeptídeos, gomas naturais, resinas naturais, óleos essenciais, óleo de tea tree, hiperenona A, hipercalina B, hiperforina, fenólicos, polifenóis, terpenos, flavonóides, alcaloides, própolis, espermidina, rutina, quercetina, cumarinas, kaempferol, estigmasterol, campesterol, tocoferol, carotenóides,

suco de rábano extrato, tobramicina e qualquer combinação dos mesmos.

[00125] Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase compreende um inibidor de fosfolipase A2.

[00126] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase é selecionado a partir de um grupo que consiste em zinco, manganês, ácido cítrico e qualquer combinação dos mesmos.

[00127] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase é selecionado a partir de um grupo que consiste em um extrato vegetal, cucurmina, extrato de Gingko biloba, extrato de Centella asiatica, extrato de Hippophae, uma fosfolipase química inibidor, compostos à base de pirrolidona, ácido aristolóquico, sulfato de espermina neomicina e qualquer combinação dos mesmos.

[00128] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de adição do referido meio de retenção à referida coleção das referidas células biológicas compreende a etapa de adição de meio de retenção suficiente à referida coleção das referidas células biológicas para por último, durante o referido passo de transporte da referida coleção das referidas células biológicas.

[00129] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou em qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de fornecer o referido meio de retenção aplicável ao referido regime de limitação de dano celular previsto e o referido uso predeterminado compreende a etapa de fornecer compostos liberados no tempo na referida exploração meios de comunicação.

[00130] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda uma etapa de adição de meios de retenção adicionais à referida coleção de células biológicas durante a referida etapa de transporte da referida coleção das referidas células biológicas.

[00131] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 5, ou em qualquer outra cláusula, em que o referido crioprotetor é selecionado a partir de um grupo que consiste em glicerol, glicina, dimetilsulfóxido, prolina, betainas modificadas, glicinabetaína, dimetilsulfonopropionato, ciclohexanodiol, metil formamida, dimetil formamida, etileno glicol, trealose, açúcares complexos concentrados, seiva de árvores, açúcares concentrados, crioprotetores penetrantes, crioprotetores não penetrantes, extratos vegetais e qualquer combinação dos mesmos.

[00132] Um método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base no referido regime de limitação de dano celular previsto e o referido uso predeterminado compreendem o passo de resfriamento do referido coleção de células biológicas.

[00133] Um método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de transporte da referida coleção das referidas células biológicas no referido meio de retenção compreende a etapa de resfriamento da referida coleção das referidas células biológicas na referida exploração meios de comunicação.

[00134] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito nas cláusulas 16, 17 ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de resfriamento da referida coleção de células biológicas compreende a etapa de resfriamento da referida coleção de células biológicas a uma temperatura selecionada de um grupo consistindo entre cerca de 0 ° C a cerca de 37 ° C, cerca de 4 ° C, cerca de 10 ° C e cerca de 17 ° C.

[00135] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito nas cláusulas 16, 17 ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de resfriamento da referida coleção de células biológicas compreende a etapa de resfriamento da referida coleção de células biológicas a uma taxa de resfriamento entre aproximadamente 0,01 ° C /

min a cerca de 1 ° C / min.

[00136] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou em qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base no referido regime de limitação de dano celular previsto e o referido uso predeterminado compreendem o passo de pré- processar a referida coleção de células biológicas durante a referida etapa de transporte da referida coleção de células biológicas com base no referido regime de limitação de dano celular previsto e no referido uso predeterminado.

[00137] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou em qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de preservação da referida coleção das referidas células biológicas com base no referido regime de limitação de dano celular previsto e no referido uso predeterminado compreende a etapa de manutenção em potencial redox vivo dentro das referidas células biológicas.

[00138] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 21, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de manutenção do referido potencial redox in vivo dentro das referidas células biológicas compreende a etapa de utilização de uma combinação de antioxidantes solúveis em lipídios e aquosos na referida exploração meios de comunicação.

[00139] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 22, ou qualquer outra cláusula, em que os referidos antioxidantes solúveis em lipídios e aquosos compreendem um extrato vegetal. 24.

[00140] Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou em qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base no referido regime de limitação de dano celular previsto e o referido uso predeterminado compreendem o passo de utilizar um sistema selecionado de um grupo que consiste em microfluídica e citometria de fluxo.

[00141] Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou em qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base no referido regime de limitação de dano celular previsto e o referido uso predeterminado compreendem o passo de utilizar um sistema para criar um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas, o referido sistema selecionado a partir de um grupo que consiste em microfluídicos, encapsulamento, criação de lipossomos, criação de uma micela, criação de uma estrutura de gaiola biológica e qualquer combinação dos mesmos.

[00142] Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de receber a referida coleção das referidas células biológicas após a referida etapa de transportar as referidas células biológicas no referido meio de retenção compreende a etapa de fornecer remessas células biológicas com uma característica selecionada de um grupo que consiste em crescimento bacteriano reduzido, efeito bacteriostático aumentado e efeitos bactericidas aumentados.

[00143] Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de preparação das referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente compreende a etapa de adicionar componentes hipotérmicos às referidas células biológicas transportadas. 28. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 27, ou qualquer outra cláusula, em que os referidos componentes hipotérmicos são selecionados de um grupo que consiste em antibióticos, ingredientes naturais, componentes de origem não animal, inibidor microbiano, composto bacteriostático, bactericida composto, um composto que inibe a replicação bacteriana, componente antibacteriano, inibidor da fosfolipase, inibidor da fosfolipase A2, composto anti-inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão, extensor, antioxidante,

nucleador de gelo, quimicamente meio definido, vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos, fenólicos, polifenol, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, moléculas compostas, fitoquímicos, metabólitos secundários das plantas, extrato vegetal, extrato de espinheiro , Extrato de Fagara zanthoxy loides, extrato de Olax subscorpioides, Hippophae rhamnoides, Tetra extrato de pleura tetraptera, silibinina, fosfofructoquinase, camosina, lignanas, fagaronina, elagitaninas, eschscholtzidine, saponina e qualquer combinação dos mesmos.

[00144] Um método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula, ou qualquer outra cláusula, 1 em que a referida etapa de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente compreende a etapa de utilizar menos antibióticos com as referidas células biológicas, em que os referidos menos antibióticos são selecionado a partir de um grupo que consiste em menos de cerca de 50 UI / ml de penicilina, menos de cerca de 100 UI / ml de penicilina, menos de cerca de 50pg / ml de estreptomicina, menos de cerca de 100 pg / ml de estreptomicina, menos do que cerca de 500 µg / ml de estreptomicina, menos do que cerca de 500 µg / ml de estreptomicina 500 UI / ml de penicilina, menos do que cerca de 150 µg / ml de lincomicina e menos do que cerca de 300 µg / ml de espectinomicina.

[00145] Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente compreende a etapa de adicionar antibióticos às referidas células biológicas enviadas e substituir pelo menos parte de disse antibióticos com um extrato de planta.

[00146] Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 30, ou em qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de substituição de pelo menos parte dos referidos antibióticos por um extrato vegetal é selecionada a partir de um grupo que consiste em: substituir cerca de 10% da antibiótico com extrato de planta; substituir cerca de 20% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 30% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 40% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 50% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 60% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 70% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 80% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 90% do antibiótico por um extrato vegetal; e substituindo cerca de 100% do antibiótico por um extrato vegetal.

[00147] Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente compreende o passo de adicionar um antioxidante às referidas células biológicas.

[00148] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 32, ou em qualquer outra cláusula, em que o referido antioxidante é selecionado de um grupo que consiste em óxido de aleno sintase, fenólicos, flavonóides, ácido ascórbico, tocoferóis, carotenóides, taninos, hidroxianisol butilado, butilado hidroxitolueno, terc- butil-hidroxiquinona, galato de propila e compostos, derivados de plantas ou sintéticos, suficientes para reduzir ou eliminar o superóxido de espécies reativas de oxigênio, hidroxil, peroxil, alcoxil, óxido nítrico, oxigênio singlete, peróxido de hidrogênio e qualquer combinação dos mesmos.

[00149] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito nas cláusulas 1, 20 ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de reduzir uma quantidade de tempo de laboratório de exposição in vitro gasto na referida etapa de preparação das referidas células biológicas para serem preservadas hipotermicamente.

[00150] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que o referido regime de limitação de dano celular previsto compreende uma redução no dano celular, o referido dano celular causado a partir de um aspecto selecionado de um grupo que consiste em contaminação biológica, química contaminação, contaminação causada por espécies invasoras, resíduos químicos, detergentes, resíduos desinfetantes, compostos solventes,

compostos orgânicos, fotoativação, modificação fotográfica, manuseio inadequado, bactérias, fungos, micoplasma, vírus e qualquer combinação dos mesmos.

[00151] 36. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 34, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de redução da referida quantidade de tempo de laboratório de exposição in vitro gasto na referida etapa de preparação das referidas células biológicas para serem preservadas hipotermicamente compreende a etapa de diminuir o tempo de equilíbrio das referidas células biológicas no referido laboratório em preparação para criopreservação e exposição a um agente osmótico

[00152] 37. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 28, ou qualquer outra cláusula, em que o referido agente osmótico compreende um extrato vegetal.

[00153] 38. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de preparação das referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente e a referida etapa de tratamento hipotermático das referidas células biológicas compreende um tratamento hipotérmico selecionado a partir de um grupo consistindo em resfriamento, criopreservação, liofilização, liofilização e vitrificação.

[00154] 39. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente compreende o passo de preparar as referidas células biológicas para serem criopreservadas; em que o referido passo de tratamento hipotérmico das referidas células biológicas compreende o passo de criopreservação das referidas células biológicas; e em que o referido passo de aquecimento das referidas células biológicas compreende o passo de descongelamento das referidas células biológicas.

[00155] 40. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de utilizar uma única coleção de células biológicas para a referida etapa de usar as referidas células biológicas para o referido uso predeterminado.

[00156] 41. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de utilização das referidas células biológicas para o referido uso predeterminado compreende a etapa de proporcionar uma saúde celular pós-quente melhorada.

[00157] 42. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 41, ou qualquer outra cláusula, em que a referida saúde celular pós-quente melhorada compreende mais do que cerca de 25% de inseminação artificial da taxa de gravidez de espermatozóides bovinos pós-aquecidos.

[00158] 43. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas compreende o passo de encapsular as referidas células biológicas.

[00159] 44. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas compreende o passo de limitar a exposição ao oxigênio às referidas células biológicas.

[00160] 45. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas compreende o passo de criar um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas.

[00161] 46. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 45, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de criação de um ambiente semelhante à gaiola em torno de cada uma das referidas células biológicas.

[00162] 47. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 46, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação de um ambiente semelhante a uma gaiola em torno de cada uma das referidas células biológicas compreende a etapa de interação de compostos com um grupo principal fosfolipídeo da referida células biológicas.

[00163] 48. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 45, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação de um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de adição de compostos à referida coleção de células biológicas, os referidos compostos selecionados a partir de um grupo que consiste em lipídios da membrana, glicolipídios, colesterol, ácidos graxos livres, fosfoglicerídeos, esteróis, esfingolípidos, proteínas da membrana, sais, agarose e qualquer combinação dos mesmos.

[00164] 49. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 45, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação de um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de encapsular as referidas células biológicas em um microambiente.

[00165] 50. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 49, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de encapsular as referidas células biológicas em um microambiente compreende a etapa de adição de lipossomas ou micelas à referida coleção de células biológicas.

[00166] 51. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 49, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de encapsular as referidas células biológicas em um microambiente compreende a etapa de utilização de um sistema microfluídico.

[00167] 52. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 49, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente compreende um componente selecionado de um grupo que consiste em antioxidante, lipídio vegetal, gema de ovo e qualquer combinação dos mesmos.

[00168] 53. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 49, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de circundar o referido microambiente com um meio.

[00169] 54. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 53, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio compreende agarose.

[00170] 55. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 49, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente é processado selecionado a partir de um grupo que consiste em resfriar o referido microambiente entre cerca de 0 ° C a cerca de 37 ° C, resfriando o referido microambiente a cerca de 4 ° C, resfriando o referido microambiente a cerca de 10 ° C, resfriando o referido microambiente a cerca de 17 ° C, congelando o referido microambiente, congelando o referido microambiente a cerca de -20 ° C e congelando o referido microambiente a cerca de - 196 ° C.

[00171] 56. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 49, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de liberar o referido microambiente a 20 ° C ou até 37 ° C.

[00172] 57. Um método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 43, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de encapsular as referidas células biológicas compreende um passo selecionado de um grupo que consiste em fornecer uma estrutura micelular em torno das referidas células biológicas; fornecer uma camada lipídica em torno das referidas células biológicas, e fornecer uma monocamada lipídica em torno das referidas células biológicas e fornecer uma bicamada lipídica em torno das referidas células biológicas.

[00173] 58. Um método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 46, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente tipo gaiola compreende um encapsulamento das referidas células biológicas com um complexo tridimensional.

[00174] 59. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 49, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente pode ser alcançado utilizando microfluídicos para criar o referido microambiente.

[00175] 60. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 46, ou em qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente tipo gaiola compreende compostos selecionados a partir de um grupo que consiste em lipídios, sais, proteínas, proteína BSA, fosfatidil serina, agarose e qualquer combinação dos mesmos.

[00176] 61. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 45, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de adição de ácidos graxos à referida coleção de células biológicas.

[00177] 62. Um método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 61, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de adição de ácidos graxos à referida coleção de células biológicas compreende a etapa de adição de cerca de 0,5% a cerca de 10% v / v de ácidos graxos à referida coleção de células biológicas.

[00178] 63. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 45, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de adição de lipídios contendo cerca de 40% de ácido linolênico (18: 3) , cerca de 15% de linoléico (18: 2) e cerca de 20% de palmítico à referida coleção de células biológicas.

[00179] 64. Um método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 45, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de fornecer lipídios e células biológicas encapsulados juntos em uma célula celular ou lipossômica estrutura.

[00180] 65. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 45, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de adicionar uma mistura de lipídios, ácidos graxos livres, fosfolipídios e colesterol idealmente benéfico para um tipo de célula individual e uma derivação celular.

[00181] 66. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 1, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de fornecer o referido meio de retenção em um kit de preservação para células biológicas.

[00182] 67. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 66, ou qualquer outra cláusula, em que o referido kit de preservação compreende pelo menos dois componentes selecionados a partir de um antioxidante, um inibidor da fosfolipase e um agente antimicrobiano.

[00183] 68. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito nas cláusulas 5, 22, 28, 48, 60, 64 ou qualquer outra cláusula, em que o referido lipídeo é selecionado a partir de um grupo que consiste em lipídios, ácidos graxos livres, fosfolipídios, proteínas, glicoproteínas e lipoproteínas.

[00184] 69. Método para proteger células biológicas in vitro com continuidade sinérgica que compreende as etapas de: - olher uma coleção de células biológicas de uma fonte in vivo; - preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base em um regime de limitação de dano celular previsto e um uso predeterminado; - proporcionar um meio de retenção aplicável ao referido regime de limitação de dano celular previsto e ao referido uso predeterminado; - adicionar o referido meio de retenção à referida coleção das referidas células biológicas; - transportar a referida coleção das referidas células biológicas no referido meio de retenção com base no referido regime previsto de limitação de danos às células e no referido uso predeterminado;

- receber a referida coleção das referidas células biológicas após o referido passo de transportar a referida coleção das referidas células biológicas no referido meio de retenção; - preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente; - tratamento hipotérmico das referidas células biológicas; - aquecer as referidas células biológicas; e utilizando as referidas células biológicas para o referido uso predeterminado.

[00185] 70. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que a referida coleção de células biológicas é selecionada de um grupo que consiste em células, tecidos, espermatozóides, esperma equino, esperma bovino, esperma caprino, ovino esperma, esperma suíno, esperma de aves, ovários, oócitos, embriões, órgãos, células-tronco, células geneticamente modificadas, células derivadas artificialmente e qualquer combinação dos mesmos.

[00186] 71. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que a referida fonte in vivo é selecionada a partir de um grupo que consiste em mamífero, humano, roedores, equinos, bovinos, caprinos, ovinos, suínos, aves. , peixes, moluscos, répteis, nefropídeos, vertebrados poiquotérmicos e aquáticos.

[00187] 72. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que o referido uso predeterminado é selecionado a partir de um grupo que consiste em inseminação, implantação, cultura, pesquisa, teste de diagnóstico, replicação, preservação de gametas, preservação genética , criopreservação, reprodução e qualquer combinação dos mesmos.

[00188] 73. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende pelo menos um componente selecionado de um grupo que consiste em ingredientes naturais, componentes de origem não animal, inibidor microbiano, composto bacteriostático , composto bactericida, um composto que inibe a replicação bacteriana, componente antibacteriano, inibidor da fosfolipase, inibidor da fosfolipase A2, composto anti-inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão, extensor, antioxidante, nucleador de gelo , meios quimicamente definidos, vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos, fenólicos, polifenol, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, moléculas compostas, fitoquímicos, metabólitos secundários de plantas, extrato de plantas, mar extrato de espinheiro, extrato de Fagara zanthoxyloides, extrato de Olax subscorpioides, Hippophae rhamnoides , Extrato de Tetrapleura tetraptera,

silibinina, fosfofructoquinase, camosina, lignanas, fagaronina, elagitaninas, eschscholtzidine, saponina e qualquer combinação dos mesmos.

[00189] 74. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na seção 73, ou qualquer outra cláusula, em que o referido extrato vegetal compreende um extrato vegetal derivado de uma fonte selecionada de um grupo que consiste em seiva, frutos, sementes, folhas, flores, caules, casca e qualquer combinação dos mesmos.

[00190] 75. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na seção 73, ou qualquer outra cláusula, em que o referido extrato vegetal é selecionado a partir de um grupo que consiste em um extrato vegetal bruto, um extrato vegetal de fonte única, uma combinação de extratos de mais de uma fonte, extratos de álcool, componentes de suco, extratos de hidróxido de sódio, extratos aquosos, extratos de hidroglicerina e qualquer combinação dos mesmos.

[00191] 76. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende um componente antimicrobiano selecionado a partir de um grupo que consiste em heptadecanoil etanolamida, triterpenos, triterpenos do tipo esteróide, lipoglicopeptídeos naturais gomas, resinas naturais, óleos essenciais, óleo de tea tree, hiperenona A, hipercalina B, hiperforina, fenólicos, polifenóis, terpenos, flavonóides, alcalóides, própolis, espermidina, rutina, quercetina,

cumarinas, kaempferol, estigmasterol, campesterol, tocoferol, carotenóides, extrato de suco de rábano, tobramicina e qualquer combinação dos mesmos.

[00192] 77. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende pelo menos dois componentes selecionados a partir de um antioxidante, um inibidor da fosfolipase, agente estabilizador de membrana e um agente antimicrobiano.

[00193] 78. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na seção 73, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase compreende um inibidor de fosfolipase A2.

[00194] 79. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na seção 73, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase é selecionado a partir de um grupo que consiste em zinco, manganês, ácido cítrico e qualquer combinação dos mesmos.

[00195] 80. Método para proteger células biológicas in vitro, conforme descrito na seção 73, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase é selecionado a partir de um grupo que consiste em um extrato vegetal, cucurmina, extrato de Gingko biloba, extrato de Centella asiatica, extrato de Hypophae, um inibidor de fosfolipase química, compostos à base de pirrolidona, ácido aristolóquico,

sulfato de espermina neomicina e qualquer combinação dos mesmos.

[00196] 81. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito nas cláusulas 73, 77 ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor microbiano é um componente derivado de planta.

[00197] 82. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de adicionar o referido meio de retenção à referida coleção das referidas células biológicas compreende o passo de adicionar suficiente meio de retenção à referida coleção do referido biológico células para durar ao longo do referido passo de transporte da referida coleção das referidas células biológicas.

[00198] 83. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou em qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de fornecer o referido meio de retenção aplicável ao referido regime de limitação de dano celular previsto e o referido uso predeterminado compreende a etapa de fornecer compostos liberados no tempo dito segurando o meio.

[00199] 84. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda uma etapa de adição de meios de retenção adicionais à referida coleção de células biológicas durante a referida etapa de transporte da referida coleção das referidas células biológicas.

[00200] 85. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 73, ou em qualquer outra cláusula, em que o referido crioprotetor é selecionado a partir de um grupo que consiste em glicerol, glicina, dimetilsulfóxido, prolina, betainas modificadas, glicinabetaína, dimetilsulfonopropionato, ciclohexanodiol, metilformaida , dimetil formamida, etileno glicol, trealose, açúcares complexos concentrados, seiva de árvores, açúcares concentrados, crioprotetores penetrantes, crioprotetores não penetrantes, extratos vegetais e qualquer combinação dos mesmos.

[00201] 86. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base no referido regime previsto de limitação de danos às células e o referido uso predeterminado compreendem o passo de resfriamento do referido coleção de células biológicas.

[00202] 87. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de transporte da referida coleção das referidas células biológicas no referido meio de retenção compreende a etapa de resfriamento da referida coleção das referidas células biológicas na referida exploração meios de comunicação.

[00203] 88. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito nas cláusulas 86, 87 ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de resfriamento da referida coleção de células biológicas compreende a etapa de resfriamento da referida coleção de células biológicas a uma temperatura selecionada de um grupo consistindo entre cerca de 0 ° C a cerca de 37 ° C, cerca de 4 ° C, cerca de 10 ° C e cerca de 17 ° C.

[00204] 89. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito nas cláusulas 86, 87 ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de resfriamento da referida coleção de células biológicas compreende a etapa de resfriamento da referida coleção de células biológicas a uma taxa de resfriamento entre aproximadamente 0,01 ° C / min a cerca de 1 ° C / min.

[00205] 90. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou em qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base no referido regime de limitação de dano celular antecipado e o referido uso predeterminado compreende o passo de pré- processar a referida coleção de células biológicas durante a referida etapa de transporte da referida coleção de células biológicas com base no referido regime de limitação de dano celular previsto e no referido uso predeterminado.

[00206] 91. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou em qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base no referido regime de limitação de dano celular previsto e o referido uso predeterminado compreende o passo de manter em potencial redox vivo dentro das referidas células biológicas.

[00207] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 91, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de manutenção do referido potencial redox in vivo dentro das referidas células biológicas compreende a etapa de utilização de uma combinação de antioxidantes solúveis em lipídios e aquosos nos referidos meios de retenção.

[00208] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 92, ou qualquer outra cláusula, em que os referidos antioxidantes solúveis em lipídios e aquosos compreendem um extrato vegetal.

[00209] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base no referido regime de limitação de dano celular previsto e o referido uso predeterminado compreendem o passo de utilizar um sistema selecionado de um grupo constituído por microfluídicos e citometria de fluxo.

[00210] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou em qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de preservação da referida coleção das referidas células biológicas com base no referido regime de limitação de dano celular previsto e no referido uso predeterminado compreendem a etapa de utilização de um sistema para criar um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas, o referido sistema selecionado a partir de um grupo que consiste em microfluídicos, encapsulamento, criação de lipossomos, criação de micelas, criação de uma estrutura de gaiola biológica e qualquer combinação dos mesmos.

[00211] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente compreende a etapa de utilizar menos antibióticos com as referidas células biológicas, em que os referidos menos antibióticos são selecionados a partir de um grupo constituído por menos de cerca de 50 UI / ml de penicilina, menos de cerca de 100 UI / ml de penicilina, menos de cerca de 50 pg / ml de estreptomicina, menos de cerca de 100 pg / ml de estreptomicina, menos de cerca de 500 ug / ml de estreptomicina, menos de cerca de 500 UI / ml de estreptomicina / ml de penicilina, menos de cerca de 150 ug / ml de lincomicina e menos de cerca de 300 ug / ml de espectinomicina.

[00212] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente compreende a etapa de adicionar antibióticos às referidas células biológicas transportadas e substituir pelo menos parte dos referidos antibióticos com um extrato de planta.

[00213] 101.Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 100, ou em qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de substituição de pelo menos parte dos referidos antibióticos por um extrato vegetal é selecionada a partir de um grupo que consiste em: substituir cerca de 10% da antibiótico com extrato de planta; substituir cerca de 20% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 30% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 40% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 50% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 60% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 70% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 80% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 90% do antibiótico por um extrato vegetal; e substituindo cerca de 100% do antibiótico por um extrato vegetal.

[00214] 102. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente compreende o passo de adicionar um antioxidante às referidas células biológicas.

[00215] 103. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 102, ou em qualquer outra cláusula, em que o referido antioxidante é selecionado a partir de um grupo que consiste em óxido de aleno sintase, fenólicos, flavonóides, ácido ascórbico, tocoferóis, carotenóides, taninos, hidroxianisol butilado , hidroxitolueno butilado, terc-butil-hidroxiquinona, galato de propil e compostos, derivados de plantas ou sintéticos, suficientes para reduzir ou eliminar o superóxido de espécies reativas de oxigênio, hidroxil, peroxil, alcoxil, óxido nítrico, oxigênio singlete, peróxido de hidrogênio e qualquer combinação dos mesmos.

[00216] 104. Um método para proteger células biológicas in vitro, como descrito nas cláusulas 69, 14 ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de reduzir uma quantidade de tempo de laboratório de exposição in vitro gasto na referida etapa de preparar as referidas células biológicas para serem hipotermicamente preservado.

[00217] 105. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou em qualquer outra cláusula, em que o referido regime limitador de dano celular previsto compreende uma redução no dano celular, o referido dano celular causado a partir de um aspecto selecionado de um grupo que consiste em contaminação biológica ,

contaminação química, contaminação causada por espécies invasoras, resíduos químicos, detergentes, resíduos desinfetantes, compostos solventes, compostos orgânicos, fotoativação, modificação fotográfica, manuseio inadequado, bactérias, fungos, micoplasma, vírus e qualquer combinação dos mesmos.

[00218] 106. Um método de proteção de células biológicas in vitro, conforme descrito na cláusula 104, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de redução da referida quantidade de tempo de laboratório de exposição in vitro gasta na referida etapa de preparação das referidas células biológicas para serem preservadas hipotermicamente compreende a etapa de diminuir o tempo de equilíbrio das referidas células biológicas no referido laboratório em preparação para criopreservação e exposição a um agente osmótico

[00219] 107. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 98, ou qualquer outra cláusula, em que o referido agente osmótico compreende um extrato vegetal.

[00220] 108. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente e a referida etapa de tratar hipotermicamente as referidas células biológicas compreende um tratamento hipotérmico selecionado a partir de um grupo consistindo em resfriamento, criopreservação, liofilização, liofilização e vitrificação.

[00221] 109. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de preparação das referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente compreende a etapa de preparação das referidas células biológicas a serem criopreservadas; em que o referido passo de tratamento hipotérmico das referidas células biológicas compreende o passo de criopreservação das referidas células biológicas; e em que o referido passo de aquecimento das referidas células biológicas compreende o passo de descongelamento das referidas células biológicas.

[00222] 110. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de utilizar uma única coleção de células biológicas para a referida etapa de usar as referidas células biológicas para o referido uso predeterminado.

[00223] 111. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de utilização das referidas células biológicas para o referido uso predeterminado compreende a etapa de proporcionar uma saúde celular pós-aquecida melhorada.

[00224] 112 Um método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 111, ou qualquer outra cláusula, em que a referida saúde celular pós-quente melhorada compreende mais do que cerca de 25% de inseminação artificial da taxa de gravidez de espermatozóides bovinos pós-aquecidos.

[00225] 113. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas compreende o passo de encapsular as referidas células biológicas.

[00226] 114. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas compreende o passo de limitar a exposição ao oxigênio às referidas células biológicas.

[00227] 115. Um método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas compreende o passo de criar um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas. 116. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula

[00228] 115, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de criação de um ambiente semelhante à gaiola em torno de cada uma das referidas células biológicas.

[00229] 117. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 116, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação de um ambiente semelhante a uma gaiola em torno de cada uma das referidas células biológicas compreende a etapa de interação de compostos com um grupo principal de fosfolipídios da referida células biológicas.

[00230] 118. Um método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 115, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação de um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de adição de compostos à referida coleção de células biológicas, os referidos compostos selecionados a partir de um grupo que consiste em lipídios da membrana, glicolipídios, colesterol, ácidos graxos livres, fosfoglicerídeos, esteróis, esfingolípidos, proteínas da membrana, sais, agarose e qualquer combinação dos mesmos.

[00231] 119. Um método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 115, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação de um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de encapsular as referidas células biológicas em um microambiente.

[00232] 120. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 119, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de encapsular as referidas células biológicas em um microambiente compreende a etapa de adição de lipossomos ou micelas à referida coleção de células biológicas.

[00233] 121. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 119, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de encapsular as referidas células biológicas em um microambiente compreende a etapa de utilização de um sistema microfluídico.

[00234] 122. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 119, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente compreende um componente selecionado de um grupo que consiste em antioxidante, lipídio vegetal, gema de ovo e qualquer combinação dos mesmos.

[00235] 123. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 119, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de circundar o referido microambiente com um meio.

[00236] 124. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 123, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio compreende agarose.

[00237] 125. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 119, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente é processado selecionado a partir de um grupo que consiste em resfriar o referido microambiente entre cerca de 0 ° C a cerca de 37 ° C, resfriando o referido microambiente a cerca de 4 ° C, resfriando o referido microambiente a cerca de 10 ° C, resfriando o referido microambiente a cerca de 17 ° C, congelando o referido microambiente, congelando o referido microambiente a cerca de -20 ° C e congelando o referido microambiente a cerca de -96 ° C.

[00238] 126. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 119, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de liberar o referido microambiente a 20 ° C ou até 37 ° C.

[00239] Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 113, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de encapsular as referidas células biológicas compreende um passo selecionado de um grupo que consiste em fornecer uma estrutura micelular em torno das referidas células biológicas; proporcionar uma camada lipídica em torno das referidas células biológicas, proporcionar uma monocamada lipídica em torno das referidas células biológicas e proporcionar uma bicamada lipídica em torno das referidas células biológicas.

[00240] Método para proteger células biológicas in vitro,

como descrito na cláusula 116, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente tipo gaiola compreende um encapsulamento das referidas células biológicas com um complexo tridimensional.

[00241] Método para proteger células biológicas in vitro, conforme descrito na cláusula 119, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente pode ser alcançado utilizando microfluídicos para criar o referido microambiente.

[00242] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 116, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente semelhante à gaiola compreende compostos selecionados a partir de um grupo que consiste em lipídios, sais, proteínas, proteína BSA, fosfatidil serina, agarose e qualquer combinação disso. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 115, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de adição de ácidos graxos à referida coleção de células biológicas.

[00243] Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 131, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de adição de ácidos graxos à referida coleção de células biológicas compreende a etapa de adição de cerca de 0,5% a cerca de 10% v / v de gordura ácidos à referida coleção de células biológicas.

[00244] Método para proteger células biológicas in vitro,

como descrito na cláusula 115, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de adição de lipídios contendo cerca de 40% de ácido linolênico (18: 3), sobre 15% linoléico (18: 2) e cerca de 20% palmítico à referida coleção de células biológicas.

134. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 115, ou em qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de fornecer lipídios e células biológicas encapsulados juntos em uma célula celular ou lipossômica estrutura.

[00245] 135. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 115, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de adicionar uma mistura de lipídios, ácidos graxos livres, fosfolipídios e colesterol idealmente benéfico para um tipo de célula individual e uma derivação celular.

[00246] 136. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 69, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de fornecer o referido meio de retenção em um kit de preservação para células biológicas.

[00247] 137. Um método de proteção de células biológicas in vitro, como descrito na cláusula 136, ou qualquer outra cláusula, em que o referido kit de preservação compreende pelo menos dois componentes selecionados a partir de um antioxidante, um inibidor da fosfolipase e um agente antimicrobiano.

[00248] 138. Um método de proteção de células biológicas in vitro, conforme descrito nas cláusulas 73, 92, 98, 118, 130, 134 ou qualquer outra cláusula, em que o referido lipídeo é selecionado a partir de um grupo que consiste em lipídios, ácidos graxos livres, fosfolipídios, proteínas, glicoproteínas e lipoproteínas.

[00249] 139. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas compreendendo as etapas de: colher uma coleção de células biológicas de uma fonte in vivo; estabelecer um ambiente uniforme em torno de cada célula biológica da referida coleção de células biológicas; e adição de um inibidor de fosfolipase à referida coleção de células biológicas.

[00250] 140. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na cláusula 139, em que a referida coleção de células biológicas é selecionada de um grupo que consiste em células, tecidos, espermatozóides, esperma equino, esperma bovino, esperma caprino, ovino. esperma, esperma suíno, esperma de aves, ovários, oócitos, embriões, órgãos, células-tronco, células geneticamente modificadas, células derivadas artificialmente e qualquer combinação dos mesmos.

[00251] 141. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na cláusula 139, ou em qualquer outra cláusula, em que a referida fonte in vivo é selecionada de um grupo que consiste em mamífero, humano, roedores, eqüinos, bovinos, caprinos. , vertebrados ovinos, suínos, aves, peixes, moluscos, répteis, nefropídeos, poiquilotérmicos e aquáticos.

[00252] 142. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 139, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda as etapas de preservação da referida coleção de células biológicas com base em um regime de limitação de dano celular antecipado e um predeterminado usar; proporcionar um meio de retenção aplicável ao referido regime de limitação de dano celular previsto e ao referido uso predeterminado; adicionar o referido meio de retenção à referida coleção das referidas células biológicas; transportar a referida coleção das referidas células biológicas no referido meio de retenção com base no referido regime de limitação de dano celular previsto e no referido uso predeterminado.

[00253] 143. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na seção 142, ou qualquer outra cláusula, em que o referido uso predeterminado é selecionado a partir de um grupo que consiste em inseminação, implantação, cultura, pesquisa, teste diagnóstico, replicação , preservação de gametas, preservação genética, criopreservação, reprodução e qualquer combinação dos mesmos.

[00254] 144. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na seção 142, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende pelo menos um componente selecionado de um grupo que consiste em ingredientes naturais, componentes não derivados de animais , inibidor microbiano, composto bacteriostático, composto bactericida, um composto que inibe a replicação bacteriana, componente antibacteriano, inibidor de fosfolipase, inibidor de fosfolipase A2, composto anti- inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão, extensor, antioxidante, nucleador de gelo, meio quimicamente definido, vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos, fenólicos, polifenóis, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, moléculas compostas, fitoquímicos, metabolitos secundários de plantas, extrato vegetal, extrato de espinheiro marítimo, extrato de Fagara zanthoxyloides, Olax subscorpi extrato de oides, Hippophae rhamnoides, extrato de Tetrapleura tetraptera, silibinina, fosfofructoquinase, carnosina, lignanas, fagaronina, elagitaninas, eschscholtzidine, saponina e qualquer combinação dos mesmos.

[00255] 145. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na cláusula 144, ou qualquer outra cláusula, em que o referido extrato vegetal compreende um extrato vegetal derivado de uma fonte selecionada de um grupo que consiste em seiva, bagas, sementes , folhas, flores, caules, cascas e qualquer combinação dos mesmos.

[00256] 146. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na cláusula 144, ou qualquer outra cláusula, em que o referido extrato vegetal é selecionado a partir de um grupo que consiste em um extrato vegetal bruto, um extrato vegetal de fonte única, um combinação de extratos de mais de uma fonte, extratos de álcool, componentes de suco, extratos de hidróxido de sódio, extratos aquosos, extratos de hidroglicerina e qualquer combinação dos mesmos.

[00257] 147. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na seção 142, ou em qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende um componente antimicrobiano selecionado de um grupo que consiste em heptadecanoil etanolamida, triterpenos, esteróides. como triterpenos, lipoglicerídeos, gomas naturais, resinas naturais, óleos essenciais, óleo de tea tree, hiperenona A, hipercalina B, hiperforina, fenólicos, polifenóis, terpenos, flavonóides, alcaloides, própolis,

esperidina, rutina, quercetina, cumarinas, kaempferol, estigmasterol, campesterol, tocoferol, carotenóides, extrato de suco de rábano, tobramicina e qualquer combinação dos mesmos.

[00258] 148. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na seção 142, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende pelo menos dois componentes selecionados a partir de um antioxidante, um inibidor da fosfolipase, agente estabilizador de membrana e um agente antimicrobiano.

[00259] Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 139, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase compreende um inibidor de fosfolipase A2. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 139, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase é selecionado a partir de um grupo que consiste em zinco, manganês, ácido cítrico e qualquer combinação dos mesmos.

[00260] Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na cláusula 139, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase é selecionado a partir de um grupo que consiste em um extrato vegetal,

cucurmina, extrato de Gingko biloba, Extrato de Centella asiatica, extrato de Hippophae, um inibidor químico da fosfolipase, compostos à base de pirrolidona, ácido aristolóquico, sulfato de espermina neomicina e qualquer combinação dos mesmos.

[00261] Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito nas cláusulas 144, 148 ou em qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor microbiano é um componente derivado de planta.

[00262] Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na seção 142, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de adição do referido meio de retenção à referida coleção das referidas células biológicas compreende a etapa de adição de meio de retenção suficiente ao referido a recolha das referidas células biológicas para durar ao longo do referido passo de transporte da referida recolha das referidas células biológicas.

[00263] Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 142, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de fornecer o referido meio de retenção aplicável para o referido uso predeterminado compreende a etapa de fornecer compostos liberados no tempo no referido meio de retenção.

[00264] Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na seção 142, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda uma etapa de adição de meios de retenção adicionais à referida coleção de células biológicas durante a referida etapa de transporte da referida coleção das referida células biológicas.

[00265] 156. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na cláusula 144, ou qualquer outra cláusula, em que o referido crioprotetor é selecionado a partir de um grupo que consiste em glicerol, glicina, dimetilsulfóxido, prolina, betainas modificadas, glicinabetaína, dimetilsulfoniopropionato, ciclohexanodiol, metil formamida, dimetil formamida, etileno glicol, trealose, açúcares complexos concentrados, seiva de árvores, açúcares concentrados, crioprotetores penetrantes, crioprotetores não penetrantes, extratos vegetais e qualquer combinação dos mesmos.

[00266] 157. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas como descrito na cláusula 139, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de resfriamento da referida coleção de células biológicas.

[00267] 158. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 157, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de resfriamento da referida coleção de células biológicas compreende a etapa de resfriamento da referida coleção de células biológicas a uma temperatura selecionado de um grupo que consiste entre cerca de 0 ° C a cerca de 37 ° C, cerca de 4 ° C, cerca de 10 ° C e cerca de 17 ° C.

[00268] 159. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 157, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de resfriamento da referida coleção de células biológicas compreende a etapa de resfriamento da referida coleção de células biológicas em um resfriamento taxa entre cerca de 0,0l ° C / min e cerca de l ° C / min.

[00269] 160. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na seção 142, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de preservação da referida coleção das referidas células biológicas com base no referido uso predeterminado compreende a etapa de pré-processamento a referida coleção de células biológicas durante a referida etapa de transporte da referida coleção das referidas células biológicas com base no referido uso predeterminado.

[00270] 161. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na seção 142, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de preservação da referida a coleta das referidas células biológicas com base no referido uso predeterminado compreende a etapa de manutenção do potencial redox in vivo dentro das referidas células biológicas.

[00271] 162. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na cláusula 161, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de manutenção do referido potencial redox in vivo dentro das referidas células biológicas compreende a etapa de utilização de uma combinação de lipídios antioxidantes solúveis e aquosos no referido meio de retenção.

[00272] 163. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas como descrito na cláusula 162, ou qualquer outra cláusula, em que os referidos antioxidantes solúveis em lipídios e aquosos compreendem um extrato vegetal.

[00273] 164. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na seção 142, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de preservação da referida coleção das referidas células biológicas com base no referido uso predeterminado compreende a etapa de utilização de um sistema selecionados de um grupo constituído por microfluídicos e citometria de fluxo.

[00274] 165. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na seção 142, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de preservação da referida coleção das referidas células biológicas com base no referido uso predeterminado compreende a etapa de utilização de um sistema para criar um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas, o referido sistema selecionado a partir de um grupo que consiste em microfluídicos, encapsulamento, criação de lipossomos, criação de uma micela, criação de uma estrutura de gaiola biológica e qualquer combinação dos mesmos.

[00275] 166. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na seção 142, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de receber a referida coleção das referidas células biológicas após a referida etapa de transportar as referidas células biológicas na referida meios de retenção, em que as referidas células biológicas expedidas compreendem uma característica selecionada de um grupo que consiste em crescimento bacteriano reduzido, efeito bacteriostático aumentado e efeitos bactericidas aumentados.

[00276] Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na seção 142, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de adicionar componentes hipotérmicos às referidas células biológicas enviadas.

[00277] Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula

167, ou qualquer outra cláusula, em que os referidos componentes hipotérmicos são selecionados a partir de um grupo que consiste em antibióticos, ingredientes naturais, componentes não derivados de animais,

inibidor microbiano, composto bacteriostático, composto bactericida, um composto que inibe a replicação bacteriana, componente antibacteriano,

inibidor de fosfolipase, inibidor de fosfolipase A2, composto anti-

inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão,

extensor, antioxidante, nucleador de gelo, meio quimicamente definido,

vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos,

carboidratos, fenólicos, polifenol, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal,

proteína, moléculas de compostos, fitoquímicos, metabólitos secundários de plantas, extrato vegetal , extrato de espinheiro, extrato de Fagara zanthoxyloides, extrato de Olax subscorpioides , Hippophae rhamnoides,

extrato de Tetrapleura tetraptera, silibinina, fosfofructoquinase, carnosina,

lignanas, fagaronina, elagitaninas, eschscholtzidina, saponina e qualquer combinação dos mesmos.

Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula

139, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente utilizando menos antibióticos com as referidas células biológicas, em que o referido menos antibióticos é selecionado a partir de um grupo que consiste em menos de 50 UI / ml de penicilina, menos de cerca de 100 UI / ml de penicilina, menos de cerca de 50pg / ml de estreptomicina, menos de cerca de 100 pg / ml de estreptomicina, menos de cerca de 500 ug / ml de estreptomicina, menos do que cerca de 500 UI / ml de penicilina, menos do que cerca de 150 µg / ml de lincomicina e menos do que cerca de 300 µg / ml de espectinomicina. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 139, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente adicionando antibióticos às referidas células biológicas transportadas e substituindo em menos parte dos referidos antibióticos com um extracto de planta.

[00278] Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 167, ou qualquer outra cláusula, em que os referidos componentes hipotérmicos são selecionados a partir de um grupo que consiste em antibióticos, ingredientes naturais, componentes não derivados de animais, inibidor microbiano, composto bacteriostático, composto bactericida, um composto que inibe a replicação bacteriana, componente antibacteriano, inibidor de fosfolipase, inibidor de fosfolipase A2, composto anti- inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão,

extensor, antioxidante, nucleador de gelo, meio quimicamente definido, vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos, fenólicos, polifenol, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, moléculas de compostos, fitoquímicos, metabólitos secundários de plantas, extrato vegetal , extrato de espinheiro, extrato de Fagara zanthoxyloides, extrato de Olax subscorpioides , Hippophae rhamnoides, extrato de Tetrapleura tetraptera, silibinina, fosfofructoquinase, carnosina, lignanas, fagaronina, elagitaninas, eschscholtzidina, saponina e qualquer combinação dos mesmos.

[00279] Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 139, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente utilizando menos antibióticos com as referidas células biológicas, em que o referido menos antibióticos é selecionado a partir de um grupo que consiste em menos de 50 UI / ml de penicilina, menos de cerca de 100 UI / ml de penicilina, menos de cerca de 50pg / ml de estreptomicina, menos de cerca de 100 pg / ml de estreptomicina, menos de cerca de 500 ug / ml de estreptomicina, menos do que cerca de 500 UI / ml de penicilina, menos do que cerca de 150 µg / ml de lincomicina e menos do que cerca de 300 µg / ml de espectinomicina.

[00280] Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 139, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente adicionando antibióticos às referidas células biológicas transportadas e substituindo em menos parte dos referidos antibióticos com um extrato de planta.

[00281] 171. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na cláusula 170, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de substituição de pelo menos parte dos referidos antibióticos por um extrato vegetal é selecionada a partir de um grupo que consiste em: substituir cerca de 10% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 20% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 30% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 40% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 50% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 60% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 70% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 80% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 90% do antibiótico por um extrato vegetal; e substituindo cerca de 100% do antibiótico por um extrato vegetal.

[00282] 172. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 139, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente adicionando um antioxidante às referidas células biológicas.

[00283] 173. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 172, ou qualquer outra cláusula, em que o referido antioxidante é selecionado a partir de um grupo que consiste em óxido de aleno sintase, fenólicos, flavonóides, ácido ascórbico, tocoferóis, carotenóides, taninos, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, terc-butil-hidroxiquinona, galato de propila e compostos derivados de plantas ou sintéticos, suficientes para reduzir ou eliminar o superóxido de espécies reativas de oxigênio, hidroxila, peroxil, alcoxila, óxido nítrico, oxigênio singlete, peróxido de hidrogênio, e qualquer combinação dos mesmos.

[00284] 174. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito nas cláusulas 142, 160 ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de reduzir uma quantidade de tempo de laboratório de exposição in vitro gasto na preparação das referidas células biológicas ser hipotermicamente preservado.

[00285] 175. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na seção

142, ou qualquer outra cláusula, em que o referido regime de limitação de dano celular previsto compreende uma redução no dano celular, o referido dano celular causado a partir de um aspecto selecionado a partir de um grupo que consiste em contaminação biológica, contaminação química, contaminação causada por espécies invasoras, resíduos químicos, detergentes, resíduos desinfetantes, compostos solventes, compostos orgânicos, fotoativação, modificação fotográfica, manuseio inadequado, bactérias, fungos, micoplasma, vírus e qualquer combinação disso.

[00286] 176. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na cláusula 174, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de redução da referida quantidade de tempo de laboratório de exposição in vitro gasto na referida etapa de preparar as referidas células biológicas para ser preservado hipotermicamente compreende a etapa de diminuir o tempo de equilíbrio das referidas células biológicas no referido laboratório, em preparação para a criopreservação e exposição a um agente osmótico

[00287] 177. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas como descrito na cláusula 168, ou qualquer outra cláusula, em que o referido agente osmótico compreende um extrato de planta.

[00288] 178. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na seção

139, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente com um tratamento hipotérmico selecionado a partir de um grupo que consiste em de resfriamento, criopreservação, liofilização, liofilização e vitrificação.

[00289] 179. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na seção 139, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de utilização de uma única coleção de células biológicas.

[00290] 180. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na seção 142, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda as etapas de recebimento da referida coleção das referidas células biológicas após o referido passo de transportar a referida coleção do referido biológico.

células no referido meio de retenção; preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente; tratamento hipotérmico das referidas células biológicas; aquecer as referidas células biológicas; e usando as referidas células biológicas para o referido uso predeterminado.

[00291] 181. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 180, ou em qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de utilização das referidas células biológicas para o referido uso predeterminado compreende a etapa de fornecer uma melhoria celular pós- quente saúde.

[00292] 182. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 181, ou qualquer outra cláusula, em que a referida saúde celular pós-quente melhorada compreende mais do que cerca de 25% de inseminação artificial da taxa de gravidez de bovinos pós-aquecidos espermatozóides.

[00293] 183. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na seção 142, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de preservação da referida coleção das referidas células biológicas compreende a etapa de encapsular as referidas células biológicas.

[00294] 184. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na seção 142, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de preservação da referida coleção das referidas células biológicas compreende a etapa de limitar a exposição ao oxigênio às referidas células biológicas.

[00295] 185. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na seção 142, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar o referido conjunto de células biológicas compreende o passo de criar um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas.

[00296] 186. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 185, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de criação de um ambiente semelhante a uma gaiola em torno de cada uma das referidas células biológicas.

[00297] 187. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na cláusula 186, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação de um ambiente semelhante a uma gaiola em torno de cada uma das referidas células biológicas compreende a etapa de interação de compostos com um grupo principal fosfolípido das referidas células biológicas.

[00298] 188. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 185, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação de um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de adicionar compostos à referida coleção de células biológicas. células, os referidos compostos selecionados de um grupo que consiste em lipídios de membrana, glicolipídios, colesterol, ácidos graxos livres, fosfoglicerídeos, esteróis, esfingolípidos, proteínas de membrana, sais e qualquer combinação dos mesmos.

[00299] 189. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 185, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação de um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de encapsular as referidas células biológicas em um microambiente.

[00300] 190. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 189, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de encapsular as referidas células biológicas em um microambiente compreende a etapa de adicionar lipossomos ou micelas à referida coleção de células biológicas.

[00301] 191. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 189, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de encapsular as referidas células biológicas em um microambiente compreende a etapa de utilização de um sistema microfluídico.

[00302] 192. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 189, em que o referido microambiente compreende um componente selecionado de um grupo que consiste em antioxidante, lipídio vegetal, gema de ovo e qualquer combinação dos mesmos.

[00303] 193. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 189, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de circundar o referido microambiente com um meio.

[00304] 194. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas como descrito na cláusula 193, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio compreende agarose.

[00305] 195. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na cláusula 189, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente é processado selecionado a partir de um grupo que consiste em resfriar o referido microambiente entre cerca de 0 ° C a cerca de 37 ° C, resfriando o referido microambiente a cerca de 4 ° C, resfriando o referido microambiente a cerca de 10 ° C, resfriando o referido microambiente a cerca de 17 ° C, congelando o referido microambiente, congelando o referido microambiente a cerca de -20 ° C e congelando o referido microambiente para cerca de -20 ° C -96 ° C.

[00306] 196. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 189, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de liberar o referido microambiente a 20 ° C ou até 37 ° C.

[00307] 197. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 183, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de encapsular as referidas células biológicas compreende um passo selecionado de um grupo que consiste em fornecer uma estrutura micelular em torno do referido células biológicas; proporcionar uma camada lipídica em torno das referidas células biológicas, proporcionar uma monocamada lipídica em torno das referidas células biológicas e proporcionar uma bicamada lipídica em torno das referidas células biológicas.

[00308] 198. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 186, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente tipo gaiola compreende um encapsulamento das referidas células biológicas com um complexo tridimensional.

[00309] 199. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na cláusula 189, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente pode ser alcançado utilizando microfluídicos para criar o referido microambiente.

[00310] 200 Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na cláusula 186, ou em qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente semelhante a gaiola compreende compostos selecionados a partir de um grupo que consiste em lipídios, sais, proteínas, proteína BSA, fosfatidil serina, agarose e qualquer combinação dos mesmos.

[00311] 201. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na cláusula 185, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de adição de ácidos graxos à referida coleção de células biológicas.

[00312] 202. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 201, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de adição de ácidos graxos à referida coleção de células biológicas compreende a etapa de adição de cerca de 0,5% a cerca de 10% v / v de ácidos gordos à referida coleção de células biológicas.

[00313] 203. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 185, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de adição de lipídios contendo cerca de 40% de linolênico ácido (18: 3), cerca de 15% de linoléico (18: 2) e cerca de 20% de palmítico à referida coleção de células biológicas.

[00314] 204. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 185, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de fornecer lipídios e células biológicas juntos encapsulados em uma estrutura micelular ou lipossômica.

[00315] 205. Um método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 185, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de adição de uma mistura de lipídios, livre ácidos graxos, fosfolipídios e colesterol são benéficos para um tipo de célula individual e uma derivação celular.

[00316] Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, como descrito na cláusula 142, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de fornecer o referido meio de retenção em um kit de preservação para células biológicas.

[00317] Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito na cláusula 206, ou qualquer outra cláusula, em que o referido kit de preservação compreende pelo menos dois componentes selecionados a partir de um antioxidante, um inibidor da fosfolipase e um agente antimicrobiano.

[00318] Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas, conforme descrito nas cláusulas 144, 162, 168, 188, 200, 204 ou qualquer outra cláusula, em que o referido lipídeo é selecionado a partir de um grupo que consiste em lipídios, ácidos graxos livres , fosfolípidos, proteínas, glicoproteínas e lipoproteínas.

[00319] Método para preservar células biológicas colhidas, compreendendo as etapas de: colher uma coleção de células biológicas de uma fonte in vivo; criar um ambiente uniforme em torno de substancialmente cada célula biológica na referida coleção das referidas células biológicas; tratamento hipotérmico das referidas células biológicas; aquecer as referidas células biológicas; e utilizando as referidas células biológicas.

[00320] Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, em que a referida coleção de células biológicas é selecionada a partir de um grupo que consiste em células, tecidos, esperma, esperma equino, esperma bovino, esperma caprino, esperma ovino, porcino espermatozóide, esperma de aves, ovários, oócitos, embriões, órgãos, células-tronco, células geneticamente modificadas, células derivadas artificialmente e qualquer combinação dos mesmos.

[00321] Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, em que a referida fonte in vivo é selecionada a partir de um grupo que consiste em mamífero, humano, roedores, equinos, bovinos, caprinos, ovinos, porcinos, aves, peixes, mariscos, répteis, nefropídeos, vertebrados poiquotérmicos e aquáticos.

[00322] Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda as etapas de preservação da referida coleção das referidas células biológicas com base em um regime de limitação de dano celular previsto e um uso predeterminado.

[00323] Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 212, ou qualquer outra cláusula, em que o referido uso predeterminado é selecionado a partir de um grupo que consiste em inseminação, implantação, cultura, pesquisa, teste de diagnóstico, replicação, preservação de gametas, preservação genética, criopreservação, reprodução e qualquer combinação dos mesmos.

[00324] Um método para preservar as células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 212, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda as etapas de fornecer um meio de retenção aplicável ao referido regime de limitação de dano celular previsto e ao referido uso predeterminado; e adicionar o referido meio de retenção à referida coleção das referidas células biológicas.

[00325] Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 214, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende pelo menos um componente selecionado de um grupo que consiste em ingredientes naturais, componentes de origem não animal, inibidor microbiano, composto bacteriostático, composto bactericida , um composto que inibe a replicação bacteriana, componente antibacteriano, inibidor da fosfolipase, inibidor da fosfolipase A2, composto anti-inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão, extensor, antioxidante, nucleador de gelo, meio quimicamente definido, vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos, fenólicos, polifenóis, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, moléculas compostas, fitoquímicos, metabolitos secundários das plantas, extrato vegetal, extrato de espinheiro, Extrato de Fagara zanthoxyloides, extrato de Olax subscorpioides, Hippophae rhamnoides, Extrato de Tetrapleura tetraptera, silibinina, fosfofructoquinase, camosina, lignanas, fagaronina, ell agi taninos, eschscholtzidine, saponina e qualquer combinação dos mesmos. 216. Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 215, ou qualquer outra cláusula, em que o referido extrato vegetal compreende um extrato vegetal derivado de uma fonte selecionada de um grupo que consiste em seiva, frutos, sementes, folhas, flores, caules, casca e qualquer combinação dos mesmos.

[00326] 217. Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 215, ou qualquer outra cláusula, em que o referido extrato vegetal é selecionado a partir de um grupo que consiste em um extrato vegetal bruto, um extrato vegetal de fonte única, uma combinação de extratos de mais de um fonte, extratos de álcool, componentes de suco, extratos de hidróxido de sódio, extratos aquosos, extratos de hidroglicerina e qualquer combinação dos mesmos.

[00327] 218. Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na seção 214, ou em qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende um componente antimicrobiano selecionado a partir de um grupo que consiste em heptadecanoil etanolamida, triterpenos, triterpenos semelhantes a esteróides, lipoglicopeptídeos, gomas naturais resinas naturais, óleos essenciais, óleo de tea tree, hiperenona A, hipercalina B, hiperforina, fenólicos, polifenóis, terpenos, flavonóides, alcaloides, própolis, espermidina, rutina, quercetina, cumarinas, kaempferol, estigmasterol, campesterol, tocoferol, carotenóides, horseradish extrato de suco, tobramicina e qualquer combinação dos mesmos.

[00328] 219. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 214, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende pelo menos dois componentes selecionados a partir de um antioxidante, um inibidor de fosfolipase, agente estabilizador de membrana e um agente antimicrobiano.

[00329] 220. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 215, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase compreende um inibidor de fosfolipase A2.

[00330] 221. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 215, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase é selecionado a partir de um grupo que consiste em zinco, manganês, ácido cítrico e qualquer combinação dos mesmos.

[00331] Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 215, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase é selecionado a partir de um grupo que consiste em um extrato vegetal, cucurmina, extrato de Gingko biloba, extrato de Centella asiatica, extrato de Hippophae, um inibidor de fosfolipase , compostos à base de pirrolidona, ácido aristolóquico, sulfato de espermina neomicina e qualquer combinação dos mesmos.

[00332] Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito nas cláusulas 215, 219 ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor microbiano é um componente derivado de planta.

[00333] Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 214, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de adição do referido meio de retenção à referida coleção das referidas células biológicas compreende a etapa de adição de meio de retenção suficiente à referida coleção das referidas células biológicas para durar ao longo de uma etapa de transporte da referida coleção das referidas células biológicas.

[00334] Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 215, ou em qualquer outra cláusula, em que o referido crioprotetor é selecionado a partir de um grupo que consiste em glicerol, glicina, dimetilsulfóxido, prolina, betaínas modificadas, glicinabetaína, dimetilsulfononiopopionato, ciclohexanodiol, metilformaida, dimetil formamida , etileno glicol, trealose, açúcares complexos concentrados, seiva de árvores, açúcares concentrados, crioprotetores penetrantes, crioprotetores não penetrantes, extratos vegetais e qualquer combinação dos mesmos.

[00335] 228. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 212, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base no referido uso predeterminado compreende o passo de resfriamento da referida coleção de células biológicas.

[00336] 229. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de transportar a referida coleção das referidas células biológicas e resfriar a referida coleção das referidas células biológicas durante a referida etapa de transporte.

[00337] 230. Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito nas cláusulas 228, 229 ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de resfriamento da referida coleção de células biológicas compreende o passo de resfriamento da referida coleção de células biológicas a uma temperatura selecionada de um grupo que consiste em entre cerca de 0 ° C a cerca de 37 ° C, cerca de 4 ° C, cerca de 10 ° C e cerca de 17 ° C.

[00338] 231. Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito nas cláusulas 228, 229 ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de resfriamento da referida coleção de células biológicas compreende a etapa de resfriamento da referida coleção de células biológicas a uma taxa de resfriamento entre cerca de 0,0 l ° C / min a cerca de l ° C / min.

[00339] 232. Um método para preservar as células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 212, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base no referido uso predeterminado compreende o passo de pré-processar a referida coleção de células biológicas durante uma etapa de transportar a referida coleção das referidas células biológicas com base no referido uso predeterminado.

[00340] 233. Um método para preservar as células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 212, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base no referido uso predeterminado compreende o passo de manter o potencial redox in vivo dentro das referidas células biológicas.

[00341] 234. Um método para preservar as células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 233, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de manutenção do referido potencial redox in vivo dentro das referidas células biológicas compreende a etapa de utilização de uma combinação de antioxidantes aquosos e lipossolúveis na referida exploração meios de comunicação.

[00342] 235. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 234, ou qualquer outra cláusula, em que os referidos antioxidantes solúveis em lipídios e aquosos compreendem um extrato vegetal.

[00343] 236. Um método para preservar as células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 212, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base no referido uso predeterminado compreende o passo de utilizar um sistema selecionado de um grupo que consiste em microfluídica e citometria de fluxo.

[00344] 237. Um método para preservar as células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme ao redor das referidas células biológicas é criado por um sistema selecionado a partir de um grupo que consiste em microfluídica, encapsulamento, criação de lipossomos, criação de micelas, criar uma estrutura de gaiola biológica e qualquer combinação das mesmas.

[00345] 238 . Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda as etapas de transporte das referidas células biológicas compreende a etapa de fornecer células biológicas transportadas e receber as referidas células biológicas após a referida etapa de transporte da referida células biológicas, em que as referidas células biológicas enviadas compreendem uma característica selecionada de um grupo que consiste em crescimento bacteriano reduzido, efeito bacteriostático aumentado e efeitos bactericidas aumentados.

[00346] 239. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente compreende o passo de adicionar componentes hipotérmicos às referidas células biológicas transportadas.

[00347] 240. Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 239, ou em qualquer outra cláusula, em que os referidos componentes hipotérmicos são selecionados de um grupo que consiste em antibióticos, ingredientes naturais, componentes de origem não animal, inibidor microbiano, composto bacteriostático, composto bactericida , um composto que inibe a replicação de bactérias, replicação, componente antibacteriano, inibidor da fosfolipase, inibidor da fosfolipase A2, composto anti-inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão, extensor, antioxidante, nucleador de gelo, meio quimicamente definido, vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos, fenólicos, polifenóis, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, moléculas compostas, fitoquímicos, metabolitos secundários das plantas, extrato vegetal, extrato de espinheiro, extrato de Fagara Zanthoxyloides, Olax subscorpioides extrato, Hippophae rhamnoides, extrato de Tetrapleura tetraptera, silibinina, fosfofructoquinase, camosina, lignanas, fagaronina, elagitaninas, eschscholtzidine, saponina e qualquer combinação dos mesmos.

[00348] Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente compreende a etapa de utilizar menos antibióticos com as referidas células biológicas, em que os referidos menos antibióticos são selecionados a partir de uma grupo constituído por menos de cerca de 50 UI / ml de penicilina, menos de cerca de 100 UI / ml de penicilina, menos de cerca de 50 pg / ml de estreptomicina, menos de cerca de 100 pg / ml de estreptomicina, menos de cerca de 500 ug / ml de estreptomicina, menos de cerca de 500 UI / ml de estreptomicina ml de penicilina, menos do que cerca de 150 µg / ml de lincomicina e menos do que cerca de 300 µg / ml de espectinomicina.

[00349] Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente compreende a etapa de adicionar antibióticos às referidas células biológicas transportadas e substituir pelo menos parte dos referidos antibióticos por um extrato de planta.

[00350] Um método para preservar as células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 242, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de substituição de pelo menos parte dos referidos antibióticos por um extrato vegetal é selecionada a partir de um grupo que consiste em: substituir cerca de 10% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 20% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 30% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 40% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 50% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 60% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 70% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 80% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 90% do antibiótico por um extrato vegetal; e substituindo cerca de 100% do antibiótico por um extrato vegetal.

[00351] 244. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente compreende o passo de adicionar um antioxidante às referidas células biológicas.

[00352] 245. Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 244, ou qualquer outra cláusula, em que o referido antioxidante é selecionado a partir de um grupo que consiste em óxido de aleno sintase, fenólicos, flavonóides, ácido ascórbico, tocoferóis, carotenóides, taninos, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, terc-butil-hidroxiquinona, galato de propil e compostos, derivados de plantas ou sintéticos, suficientes para reduzir ou eliminar o superóxido de espécies reativas de oxigênio, hidroxil, peroxil, alcoxil, óxido nítrico,

oxigênio singlete, peróxido de hidrogênio e qualquer combinação dos mesmos.

[00353] 246. Um método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito nas cláusulas 209, 232 ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de reduzir uma quantidade de tempo de laboratório de exposição in vitro gasto na referida etapa de preparar as referidas células biológicas para serem preservadas hipotermicamente .

[00354] 247. Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 212, ou qualquer outra cláusula, em que o referido regime de limitação de dano celular previsto compreende uma redução no dano celular, o referido dano celular causado a partir de um aspecto selecionado de um grupo que consiste em contaminação biológica contaminação química, contaminação causada por espécies invasoras, resíduos químicos, detergentes, resíduos desinfetantes, compostos solventes, compostos orgânicos, fotoativação, modificação fotográfica, manuseio inadequado, bactérias, fungos, micoplasma, vírus e qualquer combinação dos mesmos.

[00355] 248. Método para preservar as células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 246, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de redução da referida quantidade de tempo de laboratório de exposição in vitro gasto na referida etapa de preparação das referidas células biológicas para ser hipotermicamente preservadas compreendem a etapa de diminuir o tempo de equilíbrio das referidas células biológicas no referido laboratório em preparação para criopreservação e exposição a um agente osmótico

[00356] 249. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 240, ou qualquer outra cláusula, em que o referido agente osmótico compreende um extrato vegetal.

[00357] 250. Um método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente e a referida etapa de tratar hipotermicamente as referidas células biológicas compreende um tratamento hipotérmico selecionado a partir de um grupo que consiste em de resfriamento, criopreservação, liofilização, liofilização e vitrificação.

[00358] 251. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente compreende o passo de preparar as referidas células biológicas para serem criopreservadas; em que o referido passo de tratamento hipotérmico das referidas células biológicas compreende o passo de criopreservação das referidas células biológicas; e em que o referido passo de aquecimento das referidas células biológicas compreende o passo de descongelamento das referidas células biológicas.

[00359] 252. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de utilizar uma única coleção de células biológicas para a referida etapa de usar as referidas células biológicas para o referido uso predeterminado.

[00360] 253. Um método para preservar as células biológicas colhidas como descrito na cláusula 212, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de usar as referidas células biológicas para o referido uso predeterminado compreende o passo de proporcionar uma melhor saúde celular pós-quente.

[00361] 254. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 253, ou qualquer outra cláusula, em que a referida saúde celular pós-quente melhorada compreende mais do que cerca de 25% de inseminação artificial da taxa de gravidez de espermatozóides bovinos pós-aquecidos.

[00362] 255. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação de um ambiente uniforme em torno de substancialmente cada uma das referidas células biológicas compreende a etapa de encapsular as referidas células biológicas.

[00363] 256. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 212, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas compreende o passo de limitar a exposição ao oxigênio às referidas células biológicas.

[00364] 257. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de criação de um ambiente semelhante à gaiola em torno de cada uma das referidas células biológicas.

[00365] 258. Um método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 257, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação de um ambiente semelhante a uma gaiola em torno de cada uma das referidas células biológicas compreende a etapa de interação de compostos com um grupo principal fosfolipídeo do referido grupo biológico. células.

[00366] 259. Um método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação de um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de adição de compostos à referida coleção de células biológicas, os referidos compostos selecionados a partir de uma grupo constituído por lipídios da membrana, glicolipídios, colesterol, ácidos graxos livres, fosfoglicerídeos, esteróis, esfingolípidos, proteínas da membrana, sais, agarose e qualquer combinação dos mesmos.

[00367] 260. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação de um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de encapsular as referidas células biológicas em um microambiente.

[00368] 261. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 260, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de encapsular as referidas células biológicas em um microambiente compreende a etapa de adição de lipossomos ou micelas à referida coleção de células biológicas.

[00369] 262. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 260, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de encapsular as referidas células biológicas em um microambiente compreende a etapa de utilização de um sistema microfluídico.

[00370] 263. Um método para preservar as células biológicas colhidas como descrito na cláusula 260, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente compreende um componente selecionado de um grupo que consiste em antioxidante, lipídio vegetal, gema de ovo e qualquer combinação dos mesmos.

[00371] 264. Um método para preservar as células biológicas colhidas como descrito na cláusula 260, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de circundar o referido microambiente com um meio.

[00372] 265. Um método para preservar as células biológicas colhidas como descrito na cláusula 264, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio compreende agarose.

[00373] 266. Um método para preservar as células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 260, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente é processado selecionado a partir de um grupo que consiste em resfriar o referido microambiente para entre cerca de 0 ° C a cerca de 37 ° C, resfriar o referido microambiente para cerca de 4 ° C, resfriando o referido microambiente a cerca de 10 ° C, resfriando o referido microambiente a cerca de 17 ° C, congelando o referido microambiente, congelando o referido microambiente a cerca de - 20 ° C e congelando o referido microambiente a cerca de -96 ° C.

[00374] 267. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 260, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de liberar o referido microambiente a 20 ° C ou até 37 ° C.

[00375] 268. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 255, ou qualquer outra cláusula, em que o referido passo de encapsular as referidas células biológicas compreende um passo selecionado de um grupo que consiste em fornecer uma estrutura micelular em torno das referidas células biológicas; proporcionar uma camada lipídica em torno das referidas células biológicas, proporcionar uma monocamada lipídica em torno das referidas células biológicas e proporcionar uma bicamada lipídica em torno das referidas células biológicas.

[00376] 269. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 257, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente tipo gaiola compreende um encapsulamento das referidas células biológicas com um complexo tridimensional.

[00377] 270. Um método para preservar as células biológicas colhidas como descrito na cláusula 260, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente pode ser alcançado utilizando microfluídicos para criar o referido microambiente.

[00378] 271. Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 257, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente tipo gaiola compreende compostos selecionados a partir de um grupo que consiste em lipídios, sais, proteínas,

proteína BSA, fosfatidil serina, agarose e qualquer combinação dos mesmos.

[00379] 272. Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de adição de ácidos graxos à referida coleção de células biológicas.

[00380] 273. Um método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na seção 272, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de adição de ácidos graxos à referida coleção de células biológicas compreende a etapa de adição de cerca de 0,5% a cerca de 10% v / v de ácidos gordos à referida coleção de células biológicas.

[00381] 274. Um método para preservar as células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de adição de lipídios contendo cerca de 40% de ácido linolênico (18: 3), cerca de 15% de linoléico (18: 2) e cerca de 20% de palmítico à referida coleção de células biológicas.

[00382] 275. Um método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de fornecer lipídios e células biológicas encapsulados juntos em uma estrutura micelular ou lipossômica.

[00383] 276. Um método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 209, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende a etapa de adicionar uma mistura de lipídios, ácidos graxos livres, fosfolipídios e colesterol idealmente benéficos para um tipo de célula individual e uma derivação celular.

[00384] Um método para preservar células biológicas colhidas como descrito na cláusula 214, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda a etapa de fornecer o referido meio de retenção em um kit de preservação para células biológicas.

[00385] Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito na cláusula 277, ou qualquer outra cláusula, em que o referido kit de preservação compreende pelo menos dois componentes selecionados a partir de um antioxidante, um inibidor da fosfolipase e um agente antimicrobiano.

[00386] Método para preservar células biológicas colhidas, conforme descrito nas cláusulas 215, 234, 240, 259, 271, 275 ou qualquer outra cláusula, em que o referido lipídeo é selecionado a partir de um grupo que consiste em lipídios, ácidos graxos livres, fosfolipídios, proteínas, glicoproteínas, e lipoproteínas.

[00387] Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas compreendendo as etapas de: colher uma coleção de células biológicas de uma fonte in vivo; preservar a referida coleção das referidas células biológicas; e adição de um inibidor de fosfolipase à referida coleção de células biológicas. Composição de preservação de transporte celular biológico, caracterizada pelo fato de que compreende: uma coleção de células biológicas obtidas de uma fonte in vivo; um meio de retenção compreendendo pelo menos dois componentes selecionados a partir de um antioxidante, um inibidor da fosfolipase, agente estabilizador de membrana e um agente antimicrobiano, em que o referido meio de retenção está configurado para ser aplicado à referida coleção de células biológicas antes de transportar a referida coleção de células biológicas, e em que o referido meio de retenção é aplicável a um regime de limitação de dano celular previsto e a um uso predeterminado da referida coleção de células biológicas; e um meio de preparação de tratamento hipotérmico a ser aplicado à referida coleção de células biológicas após a referida etapa de transporte da referida coleção de células biológicas.

[00388] Composição de preservação de transporte biológico de células, conforme descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, em que a referida coleção de células biológicas é selecionada de um grupo que consiste em células, tecidos, espermatozóides, esperma equino, esperma bovino, esperma caprino, esperma ovino, esperma suíno , esperma de aves, ovários, oócitos, embriões, órgãos, células-tronco, células geneticamente modificadas, células derivadas artificialmente e qualquer combinação dos mesmos.

[00389] Composição de preservação de transporte biológico de células, conforme descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, em que a referida fonte in vivo é selecionada a partir de um grupo que consiste em mamífero, humano, roedores, equinos, bovinos, caprinos, ovinos, porcinos, aves, peixes, conchas peixes, répteis, nefropídeos, vertebrados poiquotérmicos e aquáticos.

[00390] Composição de preservação de transporte biológico de células, conforme descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, em que o referido uso predeterminado é selecionado a partir de um grupo que consiste em inseminação, implantação, cultura, pesquisa, teste de diagnóstico, replicação, preservação de gametas, preservação genética, criopreservação, reprodução e qualquer combinação dos mesmos.

[00391] Composição de preservação de transporte biológico de células, conforme descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende pelo menos um componente selecionado de um grupo que consiste em ingredientes naturais, componentes de origem não animal, inibidor microbiano, composto bacteriostático, composto bactericida, um composto que inibe a replicação bacteriana, componente antibacteriano, inibidor da fosfolipase, inibidor da fosfolipase A2, composto anti-inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão, extensor, antioxidante, nucleador de gelo, meio quimicamente definido , vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos, fenólicos, polifenóis, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, moléculas compostas, fitoquímicos, metabólitos secundários das plantas, extrato vegetal, extrato de espinheiro, Fagara Extrato de Zanthoxyloides, extrato de Olax subscorpioides, Hippophae rhamnoides , Extrato de Tetrapleura tetraptera, silibinina, fosfofructoquinase, carnosina, lignanas, fagaronina, elagitaninas, eschscholtzidine, saponina e qualquer combinação dos mesmos.

[00392] 286. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 285, ou qualquer outra cláusula, em que o referido extrato vegetal compreende um extrato vegetal derivado de uma fonte selecionada de um grupo que consiste em seiva, frutos, sementes, folhas, flores, caules, cascas e qualquer combinação dos mesmos.

[00393] 287. Composição de preservação de transporte biológico de células, conforme descrito na cláusula 285, ou qualquer outra cláusula, em que o referido extrato vegetal é selecionado a partir de um grupo que consiste em um extrato vegetal bruto, um extrato vegetal de fonte única, uma combinação de extratos de mais de uma fonte , extratos de álcool, componentes de suco, extratos de hidróxido de sódio, extratos aquosos, extratos de hidroglicerina e qualquer combinação dos mesmos.

[00394] 288. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende um componente antimicrobiano selecionado a partir de um grupo que consiste em heptadecanoil etanolamida, triterpenos, triterpenos semelhantes a esteróides, lipoglicopeptídeos, gomas naturais, resinas naturais, óleos essenciais, óleo de tea tree, hiperenona A, hipercalina B, hiperforina, fenólicos, polifenóis, terpenos, flavonóides, alcaloides, própolis, espermidina, rutina, quercetina, cumarinas, kaempferol, estigmasterol, campesterol, tocoferol, carotenóides, suco de rábano extrato, tobramicina e qualquer combinação dos mesmos.

[00395] 289. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 285, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase compreende um inibidor de fosfolipase A2.

[00396] 290. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 285, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase é selecionado a partir de um grupo que consiste em zinco, manganês, ácido cítrico e qualquer combinação dos mesmos.

[00397] 291. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 285, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase é selecionado a partir de um grupo que consiste em um extrato vegetal, cucurmina, extrato de Gingko biloba, extrato de Centella asiatica, extrato de Hypophae, uma fosfolipase química inibidor, compostos à base de pirrolidona, ácido aristolóquico, sulfato de espermina neomicina e qualquer combinação dos mesmos.

[00398] 292. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 285, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor microbiano é um componente derivado de planta.

[00399] 293. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende compostos liberados no tempo nos referidos meios de retenção.

[00400] 294. Uma composição de preservação de transporte de células biológicas, como descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda meios de retenção adicionais a serem aplicados à referida coleção de células biológicas durante o transporte da referida coleção das referidas células biológicas.

[00401] 295. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 285, ou qualquer outra cláusula, em que o referido crioprotetor é selecionado a partir de um grupo que consiste em glicerol, glicina, dimetilsulfóxido, prolina, betaínas modificadas, glicinabetaína, dimetilsulfonopropionato, ciclohexanodiol, metilformaida, dimetila formamida, etileno glicol, trealose, açúcares complexos concentrados, seiva de árvores, açúcares concentrados, crioprotetores penetrantes, crioprotetores não penetrantes, extratos vegetais e qualquer combinação dos mesmos.

[00402] 296. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, como descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um resfriador da referida coleção das referidas células biológicas.

[00403] 297. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, conforme descrito na cláusula 296, ou qualquer outra cláusula, em que o referido resfriador é configurado para resfriar a referida coleção de células biológicas a uma temperatura selecionada a partir de um grupo que consiste em cerca de 0 ° C a cerca de

37 ° C , cerca de 4 ° C, cerca de 10 ° C e cerca de 17 ° C.

[00404] 298. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, conforme descrito na cláusula 296, ou qualquer outra cláusula, em que o referido resfriador é configurado para resfriar a referida coleção de células biológicas a uma taxa de resfriamento entre cerca de 0,0l ° C / min e cerca de l ° C / min.

[00405] 299. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende um meio de pré- processamento.

[00406] 300. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção está configurado para manter um potencial redox in vivo dentro das referidas células biológicas.

[00407] 301. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 300, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção configurado para manter um potencial redox in vivo dentro das referidas células biológicas compreende uma combinação de antioxidantes aquosos e lipossolúveis no referido meio de retenção.

[00408] 302. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 301, ou qualquer outra cláusula, em que os referidos antioxidantes solúveis em lipídios e aquosos compreendem um extrato vegetal.

[00409] 303. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um sistema selecionado de um grupo que consiste em microfluídica e citometria de fluxo.

[00410] 304. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, como descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um ambiente uniforme criado em torno das referidas células biológicas, em que o referido ambiente uniforme é criado por um sistema selecionado a partir de um grupo que consiste em microfluídica, encapsulamento, criando lipossomas, criando uma micela, criando uma estrutura de gaiola biológica e qualquer combinação dos mesmos.

[00411] 305. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, em que a referida coleção das referidas células biológicas após o transporte compreende uma característica selecionada de um grupo que consiste em crescimento bacteriano reduzido, efeito bacteriostático aumentado e efeitos bactericidas aumentados.

[00412] 306. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de preparação de tratamento hipotérmico é selecionado a partir de um grupo que consiste em antibióticos, ingredientes naturais, componentes de origem não animal, inibidor microbiano, composto bacteriostático, bactericida composto, um composto que inibe a replicação bacteriana, componente antibacteriano, inibidor da fosfolipase, inibidor da fosfolipase A2, composto anti-inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão, extensor, antioxidante, nucleador de gelo, quimicamente meio definido, vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos, fenólicos, polifenol, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, moléculas compostas, fitoquímicos, metabólitos secundários das plantas, extrato vegetal, extrato de espinheiro , Extrato de Fagara Zanthoxyloides, extrato de Olax subscorpioides, Hippop hae rhamnoides, extrato de Tetrapleura tetraptera, silibinina, fosfofructoquinase, carnosina, lignanas, fagaronina, elagitaninas, eschscholtzidina, saponina e qualquer combinação dos mesmos.

[00413] Composição de preservação de transporte biológico de células, conforme descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de preparação de tratamento hipotérmico compreende menos antibióticos, em que os referidos menos antibióticos são selecionados de um grupo que consiste em menos de cerca de 50 UI /

ml de penicilina, menor que em cerca de 10000 / ml de penicilina, menos de cerca de 50pg / ml de estreptomicina, menos de cerca de 100 pg / ml de estreptomicina, menos de cerca de 500 µg / ml de estreptomicina, menos de cerca de 500 UI / ml de penicilina, menos de cerca de 150 µg / ml de lincomicina e menos de cerca de 300 ug / ml de espectinomicina.

[00414] Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de preparação de tratamento hipotérmico compreende antibióticos que foram substituídos pelo menos em parte por um extrato de planta.

[00415] Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 308, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de substituição é selecionada a partir de um grupo que consiste em: cerca de 10% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 20% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 30% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 40% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 50% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 60% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 70% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 80% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 90% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; e cerca de 100% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal.

[00416] 310. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de preparação de tratamento hipotérmico compreende um antioxidante.

[00417] 311. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 310, ou qualquer outra cláusula, em que o referido antioxidante é selecionado a partir de um grupo que consiste em óxido de aleno sintase, fenólicos, flavonóides, ácido ascórbico, tocoferóis, carotenóides, taninos, hidroxianisol butilado, butilado hidroxitolueno, terc-butil-hidroxiquinona, galato de propila e compostos, derivados de plantas ou sintéticos, suficientes para reduzir ou eliminar o superóxido de espécies reativas de oxigênio, hidroxil, peroxil, alcoxil, óxido nítrico, oxigênio singlete, peróxido de hidrogênio e qualquer combinação dos mesmos.

[00418] 312. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, em que o referido regime de limitação de dano celular previsto compreende uma redução no dano celular, o referido dano celular causado a partir de um aspecto selecionado de um grupo que consiste em contaminação biológica, química contaminação, contaminação causada por espécies invasoras, resíduos químicos, detergentes, resíduos desinfetantes,

compostos solventes, compostos orgânicos, fotoativação, modificação fotográfica, manuseio inadequado, bactérias, fungos, micoplasma, vírus e qualquer combinação dos mesmos.

[00419] 313. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 306, ou qualquer outra cláusula, em que o referido agente osmótico compreende um extrato vegetal.

[00420] 314. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, em que o referido tratamento hipotérmico é selecionado a partir de um grupo que consiste em resfriamento, criopreservação, liofilização, liofilização e vitrificação.

[00421] 315. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda uma saúde celular pós-quente melhorada das referidas células biológicas após um tratamento hipotérmico.

[00422] 316. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 315, ou qualquer outra cláusula, em que a referida saúde celular pós-quente melhorada compreende mais do que cerca de 25% de inseminação artificial da taxa de gravidez de espermatozóides bovinos pós-aquecidos.

[00423] 317. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, como descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda células biológicas encapsuladas.

[00424] 318. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, como descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, em que as referidas células biológicas compreendem uma exposição limitada ao oxigênio.

[00425] 319. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 281, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas.

[00426] 320. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, como descrito na cláusula 319, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme ao redor das referidas células biológicas compreende um ambiente semelhante a uma gaiola ao redor de cada uma das referidas células biológicas.

[00427] 321. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 320, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente semelhante a gaiola em torno de cada uma das referidas células biológicas compreende compostos interagindo com um grupo principal fosfolipídeo das referidas células biológicas.

[00428] 322. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 319, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme compreende um composto selecionado de um grupo que consiste em lipídios de membrana, glicolipídios, colesterol, ácidos graxos livres, fosfoglicéridos, esteróis, esfingolípidos, membrana proteínas, sais, agarose e qualquer combinação dos mesmos.

[00429] 323. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 319, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende células biológicas encapsuladas em um microambiente.

[00430] 324. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 323, ou qualquer outra cláusula, em que as referidas células biológicas encapsuladas no referido microambiente compreendem lipossomas.

[00431] 325. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 323, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um sistema microfluídico.

[00432] 326. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 323, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente compreende um componente selecionado de um grupo que consiste em antioxidante, lipídio vegetal, gema de ovo e qualquer combinação dos mesmos.

[00433] 327. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 323, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um meio circundante ao referido microambiente.

[00434] 328. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 327, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio compreende agarose.

[00435] 329. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 323, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente é tratado de acordo com um tratamento selecionado de um grupo que consiste em resfriado a cerca de 4 ° C, congelado a cerca de -20 ° C, e congelado a cerca de -96 ° C.

[00436] 330. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 323, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda uma liberação de microambiente a uma temperatura de cerca de 20 ° C ou até cerca de 37 ° C.

[00437] 331. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 317, ou qualquer outra cláusula, em que as referidas células biológicas encapsuladas compreendem uma estrutura selecionada a partir de um grupo que consiste em uma estrutura micelular; uma camada lipídica, uma monocamada lipídica, uma bicamada lipídica.

[00438] 332. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 320, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente semelhante a gaiola compreende um encapsulamento das referidas células biológicas com um complexo tridimensional.

[00439] 333. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 323, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente pode ser alcançado utilizando microfluídicos para criar o referido microambiente.

[00440] 334. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 323, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente semelhante a gaiola compreende compostos selecionados a partir de um grupo que consiste em lipídios, sais, proteínas, proteína BSA, fosfatidil serina, agarose e qualquer combinação disso.

[00441] 335. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 319, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de ambiente uniforme compreende ácidos graxos.

[00442] 336. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 335, ou qualquer outra cláusula, em que ácidos graxos compreendem cerca de 0,5% a cerca de

10% v / v de ácidos graxos.

[00443] 337. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 319, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme compreende lipídios contendo cerca de 40% de ácido linolênico (18: 3), cerca de 15% de linoléico (18: 2) e cerca de 20 % palmítico.

[00444] 338. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, como descrito na cláusula 319, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme compreende lipídios e células biológicas encapsuladas em conjunto em uma estrutura micelular ou lipossômica.

[00445] 339. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 319, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme compreende uma mistura de lipídios, ácidos graxos livres, fosfolipídios e colesterol, que são benéficos para um tipo de célula individual e uma derivação celular.

[00446] 340. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito nas cláusulas 285, 301, 306, 322, 334, 338, 339 ou qualquer outra cláusula, em que o referido lipídeo é selecionado a partir de um grupo que consiste em lipídeos, ácidos graxos livres, fosfolipídios, proteínas , glicoproteínas e lipoproteínas.

[00447] 341. Composição de preservação de transporte biológico de células, caracterizada pelo fato de que compreende: uma coleção de células biológicas obtidas de uma fonte in vivo; um meio de retenção a ser aplicado à referida coleção de células biológicas antes de transportar a referida coleção de células biológicas, o referido meio de retenção aplicável a um regime antecipado de limitação de danos às células e um uso predeterminado da referida coleção de células biológicas; e um meio de preparação de tratamento hipotérmico a ser aplicado à referida coleção de células biológicas após a referida etapa de transporte da referida coleção de células biológicas.

[00448] 342. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, como descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, em que a referida coleção de células biológicas é selecionada de um grupo que consiste em células, tecidos, esperma, esperma equino, esperma bovino, esperma caprino, esperma ovino, esperma suíno, esperma de aves, ovários, oócitos, embriões, órgãos, células-tronco, células geneticamente modificadas, células derivadas artificialmente e qualquer combinação dos mesmos.

[00449] 343. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, em que a referida fonte in vivo é selecionada de um grupo que consiste em mamífero, humano, roedores, equinos, bovinos, caprinos, ovinos, porcinos, aves, peixes , mariscos, répteis, nefropídeos, vertebrados poiquotérmicos e aquáticos.

[00450] 344. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, em que o referido uso predeterminado é selecionado a partir de um grupo que consiste em inseminação, implantação, cultura, pesquisa, teste de diagnóstico, replicação, preservação de gametas, preservação genética, criopreservação , reprodução e qualquer combinação dos mesmos.

[00451] 345. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende pelo menos um componente selecionado de um grupo que consiste em ingredientes naturais, componentes de origem não animal, inibidor microbiano, composto bacteriostático, bactericida composto, um composto que inibe a replicação bacteriana, componente antibacteriano, inibidor da fosfolipase, inibidor da fosfolipase A2, composto anti-inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão, extensor, antioxidante, nucleador de gelo, quimicamente meio definido, vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos, fenólicos, polifenol, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, moléculas compostas, fitoquímicos, metabólitos secundários das plantas, extrato vegetal, extrato de espinheiro , Extrato de Fagara Zanthoxyloides, extrato de Olax subscorpioides, Hippophae rhamn oides, extrato de Tetrapleura tetraptera, silibinina, fosfofructoquinase, carnosina, lignanas, fagaronina, elagitaninos, eschscholtzidina, saponina e qualquer combinação dos mesmos.

[00452] 346. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 345, ou qualquer outra cláusula, em que o referido extrato vegetal compreende um extrato vegetal derivado de uma fonte selecionada de um grupo que consiste em seiva, frutos, sementes, folhas, flores, caules, cascas e qualquer combinação dos mesmos.

[00453] 347. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 345, ou qualquer outra cláusula, em que o referido extrato vegetal é selecionado a partir de um grupo que consiste em um extrato vegetal bruto, um extrato vegetal de fonte única, uma combinação de extratos de mais de uma fonte , extratos de álcool, componentes de suco, extratos de hidróxido de sódio, extratos aquosos, extratos de hidroglicerina e qualquer combinação dos mesmos.

[00454] 348. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende um componente antimicrobiano selecionado a partir de um grupo que consiste em heptadecanoil etanolamida, triterpenos, triterpenos do tipo esteróide,

lipoglicopeptídeos, gomas naturais, resinas naturais, óleos essenciais, óleo de tea tree, hiperenona A, hipercalina B, hiperforina, fenólicos, polifenóis, terpenos, flavonóides, alcaloides, própolis, espermidina, rutina, quercetina, cumarinas, kaempferol, estigmasterol, campesterol, tocoferol, carotenóides, suco de rábano extrato, tobramicina e qualquer combinação dos mesmos.

[00455] 349. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende pelo menos dois componentes selecionados a partir de um antioxidante, um inibidor da fosfolipase, agente estabilizador de membrana e um agente antimicrobiano.

[00456] 350. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 345, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase compreende um inibidor de fosfolipase A2.

[00457] 351. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 345, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase é selecionado a partir de um grupo que consiste em zinco, manganês, ácido cítrico e qualquer combinação dos mesmos.

[00458] 352. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 345, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase é selecionado a partir de um grupo que consiste em um extrato vegetal, cucurmina, extrato de Gingko biloba, extrato de Centella asiatica, extrato de Hippophae, uma fosfolipase química inibidor, compostos à base de pirrolidona, ácido aristolóquico, sulfato de espermina neomicina e qualquer combinação dos mesmos.

[00459] 353. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito nas cláusulas 345, 349 ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor microbiano é um componente derivado de planta.

[00460] 354. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende compostos liberados no tempo nos referidos meios de retenção.

[00461] 355. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, como descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda meios de retenção adicionais a serem aplicados à referida coleção de células biológicas durante o transporte da referida coleção das referidas células biológicas.

[00462] 356. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 345, ou qualquer outra cláusula, em que o referido crioprotetor é selecionado a partir de um grupo que consiste em glicerol, glicina, dimetilsulfóxido, prolina, betainas modificadas, glicinabetaína, dimetilsulfonopropionato, ciclohexanodiol, metilformaida, dimetila formamida, etileno glicol, trealose, açúcares complexos concentrados, seiva de árvores, açúcares concentrados, crioprotetores penetrantes, crioprotetores não penetrantes, extratos vegetais e qualquer combinação dos mesmos.

[00463] 357. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, como descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um resfriador da referida coleção das referidas células biológicas.

[00464] 358. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, conforme descrito na cláusula 357, ou qualquer outra cláusula, em que o referido resfriador é configurado para resfriar a referida coleção de células biológicas a uma temperatura selecionada de um grupo que consiste entre cerca de 0 ° C a cerca de 37 ° C , cerca de 4 ° C, cerca de 10 ° C e cerca de 17 ° C.

[00465] 359. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, conforme descrito na cláusula 357, ou qualquer outra cláusula, em que o referido resfriador é configurado para resfriar a referida coleção de células biológicas a uma taxa de resfriamento entre cerca de 0,0l ° C / min e cerca de l ° C / min.

[00466] 360. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende um meio de pré- processamento.

[00467] 361. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção está configurado para manter um potencial redox in vivo dentro das referidas células biológicas.

[00468] 362. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 361, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção configurado para manter um potencial redox in vivo dentro das referidas células biológicas compreende uma combinação de antioxidantes solúveis em lipídios e aquosos no referido meio de retenção.

[00469] 363. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 362, ou qualquer outra cláusula, em que os referidos antioxidantes solúveis em lipídios e aquosos compreendem um extrato vegetal.

[00470] 364. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um sistema selecionado de um grupo que consiste em microfluídica e citometria de fluxo.

[00471] 365. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, como descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um ambiente uniforme criado em torno das referidas células biológicas, em que o referido ambiente uniforme é criado por um sistema selecionado a partir de um grupo que consiste em microfluídica, encapsulamento, criando lipossomas, criando uma micela, criando uma estrutura de gaiola biológica e qualquer combinação dos mesmos.

[00472] 366. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, em que a referida coleção das referidas células biológicas após o transporte compreende uma característica selecionada de um grupo que consiste em crescimento bacteriano reduzido, efeito bacteriostático aumentado e efeitos bactericidas aumentados.

[00473] 367. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de preparação de tratamento hipotérmico é selecionado a partir de um grupo que consiste em antibióticos, ingredientes naturais, componentes de origem não animal, inibidor microbiano, composto bacteriostático, bactericida composto, um composto que inibe a replicação bacteriana, componente antibacteriano, inibidor da fosfolipase, inibidor da fosfolipase A2, composto anti-inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão, extensor,

antioxidante, nucleador de gelo, quimicamente meio definido, vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos, fenólicos, polifenol, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, moléculas compostas, fitoquímicos, metabólitos secundários das plantas, extrato vegetal, extrato de espinheiro , Extrato de fagara zanthoxyloides, extrato de Olax subscorpioides, Hippophae rhamnoides, extrato de Tetrapleura tetraptera, silibinina, fosfofructoquinase, camosina, lignanas, fagaronina, elagitaninas, eschscholtzidine, saponina e qualquer combinação dos mesmos.

[00474] 368. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 34, ou qualquer outra cláusula 1, em que o referido meio de preparação para tratamento hipotérmico compreende menos antibióticos, em que os referidos menos antibióticos são selecionados a partir de um grupo que consiste em menos de 50 UI / ml de penicilina, menos do que cerca de 10OO / ml de penicilina, menos do que cerca de 50pg / ml de estreptomicina, menos do que cerca de 100 pg / ml de estreptomicina, menos do que cerca de 500 µg / ml de estreptomicina, menos do que cerca de 500 UI / ml de penicilina, menos do que cerca de 500 UI / ml de penicilina, menos do que cerca de 150 µg / ml de lincomicina, e menos do que cerca de 300 ug / ml de espectinomicina.

[00475] 369. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de preparação de tratamento hipotérmico compreende antibióticos que foram substituídos pelo menos em parte por um extrato vegetal.

[00476] 370. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 369, em que a referida etapa de substituição é selecionada a partir de um grupo que consiste em: cerca de 10% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 20% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 30% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 40% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 50% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 60% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 70% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 80% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 90% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; e cerca de 100% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal.

[00477] 371. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de preparação de tratamento hipotérmico compreende um antioxidante.

[00478] 372. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 371, ou qualquer outra cláusula, em que o referido antioxidante é selecionado a partir de um grupo que consiste em óxido de aleno sintase, fenólicos, flavonóides, ácido ascórbico, tocoferóis, carotenóides, taninos, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, terc-butil-hidroxiquinona, galato de propil e compostos, derivados de plantas ou sintéticos, suficientes para reduzir ou eliminar o superóxido de espécies reativas de oxigênio, hidroxil, peroxil, alcoxil, óxido nítrico, oxigênio singlete, peróxido de hidrogênio e qualquer combinação dos mesmos.

[00479] 373. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, em que o referido regime de limitação de dano celular previsto compreende uma redução no dano celular, o referido dano celular causado a partir de um aspecto selecionado de um grupo que consiste em contaminação biológica contaminação, contaminação causada por espécies invasoras, resíduos químicos, detergentes, resíduos desinfetantes, compostos solventes, compostos orgânicos, fotoativação, modificação fotográfica, manuseio inadequado, bactérias, fungos, micoplasma, vírus e qualquer combinação dos mesmos.

[00480] 374 Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 367, ou qualquer outra cláusula, em que o referido agente osmótico compreende um extrato de planta.

[00481] 375. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, em que o referido tratamento hipotérmico é selecionado a partir de um grupo que consiste em resfriamento, criopreservação, liofilização, liofilização e vitrificação.

[00482] 376. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda uma saúde celular pós-quente melhorada das referidas células biológicas após um tratamento hipotérmico.

[00483] 377. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 376, ou qualquer outra cláusula, em que a referida saúde celular pós-quente melhorada compreende mais de cerca de 25% de inseminação artificial da taxa de gravidez de espermatozóides bovinos pós-aquecidos.

[00484] 378. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, como descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda células biológicas encapsuladas.

[00485] 379. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, como descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, em que as referidas células biológicas compreendem uma exposição limitada ao oxigênio.

[00486] 380. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, como descrito na cláusula 341, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas.

[00487] 381. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 380, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme ao redor das referidas células biológicas compreende um ambiente semelhante a uma gaiola ao redor de cada uma das referidas células biológicas.

[00488] 382. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, como descrito na cláusula 381, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente semelhante a gaiola em torno de cada uma das referidas células biológicas compreende compostos interagindo com um grupo principal fosfolipídeo das referidas células biológicas.

[00489] 383. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 380, ou em qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme compreende um composto selecionado de um grupo que consiste em lipídios de membrana, glicolipídios, colesterol, ácidos graxos livres, fosfoglicerídeos, esteróis, esfingolípidos, membrana proteínas, sais, agarose e qualquer combinação dos mesmos.

[00490] 384. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, como descrito na cláusula 380, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende células biológicas encapsuladas em um microambiente.

[00491] 385. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 384, ou qualquer outra cláusula, em que as referidas células biológicas encapsuladas no referido microambiente compreendem lipossomas.

[00492] 386. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 384, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um sistema microfluídico.

[00493] 387. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 384, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente compreende um componente selecionado de um grupo que consiste em antioxidante, lipídio vegetal, gema de ovo e qualquer combinação dos mesmos.

[00494] 388. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 384, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um meio circundando o referido microambiente.

[00495] 389. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 338, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio compreende agarose.

[00496] 390. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 384, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente é tratado de acordo com um tratamento selecionado de um grupo que consiste em resfriado a cerca de 4 ° C, congelado a cerca de -20 ° C, e congelado a cerca de -96 ° C.

[00497] 391. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 384, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda uma liberação de microambiente a uma temperatura de cerca de 20 ° C ou até cerca de 37 ° C.

[00498] 392 Uma composição de preservação de transporte biológico de células, conforme descrito na cláusula 378, ou qualquer outra cláusula, em que as referidas células biológicas encapsuladas compreendem uma estrutura selecionada a partir de um grupo que consiste em uma estrutura micelular; uma camada lipídica, uma monocamada lipídica, uma bicamada lipídica.

[00499] 393. Uma composição de preservação de transporte biológico de células, como descrito na cláusula 381, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente tipo gaiola compreende um encapsulamento das referidas células biológicas com um complexo tridimensional.

[00500] 394. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 384, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente pode ser alcançado utilizando microfluídicos para criar o referido microambiente.

[00501] 395. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 381, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente semelhante a gaiola compreende compostos selecionados de um grupo que consiste em lipídios, sais, proteínas, proteína BSA, fosfatidil serina, agarose e qualquer combinação disso.

[00502] 396. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 380, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de ambiente uniforme compreende ácidos graxos.

[00503] 397. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 396, ou qualquer outra cláusula, em que os ácidos graxos compreendem cerca de 0,5% a cerca de 10% v / v de ácidos graxos.

[00504] 398. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 380, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme compreende lipídios contendo cerca de 40% de ácido linolênico (18: 3), cerca de 15% de linoléico (18: 2) e cerca de 20 % palmítico.

[00505] 399. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, como descrito na cláusula 380, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme compreende lipídios e células biológicas encapsuladas em conjunto em uma estrutura micelular ou lipossômica.

[00506] 400. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito na cláusula 380, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme compreende uma mistura de lipídios, ácidos graxos livres, fosfolipídios e colesterol, que são benéficos para um tipo de célula individual e uma derivação celular.

[00507] 401. Uma composição biológica de preservação de transporte celular, conforme descrito nas cláusulas 345, 362, 367, 383, 395, 399, 400 ou qualquer outra cláusula, em que o referido lipídeo é selecionado a partir de um grupo que consiste em lipídios, ácidos graxos livres, fosfolipídios, proteínas , glicoproteínas e lipoproteínas.

[00508] Composição de preservação biológica de células, caracterizada pelo fato de que compreende: uma coleção de células biológicas obtidas de uma fonte in vivo; e um ambiente uniforme estabelecido em torno de cada célula biológica de uma coleção das referidas células biológicas; e um inibidor da fosfolipase.

[00509] Composição de preservação biológica de células,

como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, em que a referida coleção de células biológicas é selecionada a partir de um grupo que consiste em células, tecidos, esperma, esperma equino, esperma bovino, esperma caprino, esperma ovina, esperma suína, esperma de aves, ovários, ovócitos, embriões, órgãos, células-tronco, células geneticamente modificadas, células derivadas artificialmente e qualquer combinação dos mesmos.

[00510] Composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, em que a referida fonte in vivo é selecionada a partir de um grupo que consiste em mamífero, humano, roedores, eqüinos, bovinos, caprinos, ovinos, porcinos, aves, peixes, mariscos , répteis, nefropídeos, vertebrados poiquotérmicos e aquáticos.

[00511] Composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um meio de retenção configurado para ser aplicado à referida coleção de células biológicas, em que o referido meio de retenção está configurado para ser aplicável a um regime de limitação de dano celular antecipado e um uso predeterminado da referida coleção de células biológicas.

[00512] Composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 405, ou qualquer outra cláusula, em que o referido uso predeterminado é selecionado a partir de um grupo que consiste em inseminação, implantação, cultura, pesquisa, teste de diagnóstico, replicação, preservação de gametas, preservação genética, criopreservação, reprodução, e qualquer combinação dos mesmos.

[00513] 407. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 405, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende pelo menos um componente selecionado de um grupo que consiste em ingredientes naturais, componentes de origem não animal, inibidor microbiano, composto bacteriostático, composto bactericida , um composto que inibe a replicação bacteriana, componente antibacteriano, inibidor da fosfolipase, inibidor da fosfolipase A2, composto anti-inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão, extensor, antioxidante, nucleador de gelo, meio quimicamente definido, vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos, fenólicos, polifenóis, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, moléculas compostas, fitoquímicos, metabólitos secundários das plantas, extrato vegetal, extrato de espinheiro, Extrato de Fagara zanthoxyloides, extrato de Olax subscorpioides, Hippophae rhamnoides, Te extrato de trapleura tetraptera, silibinina, fosfofructoquinase, camosina, lignanas, fagaronina, elagitaninas, eschscholtzidine, saponina e qualquer combinação dos mesmos.

[00514] 408. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 407, ou qualquer outra cláusula, em que o referido extrato vegetal compreende um extrato vegetal derivado de uma fonte selecionada de um grupo que consiste em seiva, frutos, sementes, folhas, flores, caules, casca, e qualquer combinação dos mesmos.

[00515] 409. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 407, ou qualquer outra cláusula, em que o referido extrato vegetal é selecionado a partir de um grupo que consiste em um extrato bruto de planta, um extrato vegetal de fonte única, uma combinação de extratos de mais de uma fonte, extratos de álcool, componentes de suco, extratos de hidróxido de sódio, extratos aquosos, extratos de hidroglicerina e qualquer combinação dos mesmos.

[00516] 410. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 405, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende um componente antimicrobiano selecionado de um grupo que consiste em heptadecanoil etanolamida, triterpenos, triterpenos semelhantes a esteróides, lipoglicopéptidos, gomas naturais, naturais resinas, óleos essenciais, óleo de tea tree, hiperenona A, hipercalina B, hiperforina, fenólicos, polifenóis, terpenos, flavonóides, alcaloides, própolis, espermidina, rutina, quercetina, cumarinas, kaempferol, estigmasterol, campesterol, tocoferol, carotenóides, suco de rábano , tobramicina e qualquer combinação dos mesmos.

[00517] 411. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 405, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende pelo menos dois componentes selecionados a partir de um antioxidante, um inibidor da fosfolipase, agente estabilizador de membrana e um agente antimicrobiano.

[00518] 412. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase compreende um inibidor de fosfolipase A2.

[00519] 413. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase é selecionado a partir de um grupo que consiste em zinco, manganês, ácido cítrico e qualquer combinação dos mesmos.

[00520] 414. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase é selecionado a partir de um grupo que consiste em um extrato de planta, cucurmina, extrato de Gingko biloba, extrato de Centella asiatica, extrato de Hippophae, um inibidor de fosfolipase , compostos à base de pirrolidona, ácido aristolóquico, sulfato de espermina neomicina e qualquer combinação dos mesmos.

[00521] 415. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor microbiano é um componente derivado de planta.

[00522] 416. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 405, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende compostos liberados no tempo nos referidos meios de retenção.

[00523] 417. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 405, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda meios de retenção adicionais a serem aplicados à referida coleção de células biológicas durante o transporte da referida coleção das referidas células biológicas.

[00524] 418. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 407, ou qualquer outra cláusula, em que o referido crioprotetor é selecionado a partir de um grupo que consiste em glicerol, glicina, dimetilsulfóxido, prolina, betaínas modificadas, glicinabetaína, dimetilsulfoniopropionato, ciclohexanodiol, metil formamida, dimetil formamida, etileno glicol, trealose, açúcares complexos concentrados, seiva de árvores, açúcares concentrados, crioprotetores penetrantes, crioprotetores não penetrantes, extratos vegetais e qualquer combinação dos mesmos.

[00525] 419. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um resfriador da referida coleção das referidas células biológicas.

[00526] 420. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 419, ou qualquer outra cláusula, em que o referido resfriador é configurado para resfriar a referida coleção de células biológicas a uma temperatura selecionada a partir de um grupo que consiste em cerca de 0 ° C a cerca de 37 ° C, cerca de 4 ° C, cerca de 10 ° C e cerca de 17 ° C.

[00527] 421. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 419, ou qualquer outra cláusula, em que o referido resfriador é configurado para resfriar a referida coleção de células biológicas a uma taxa de resfriamento entre cerca de 0,0l ° C / min e cerca de l ° C / min .

[00528] 422. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 405, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende um meio de pré-processamento.

[00529] 423. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 405, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção está configurado para manter um potencial redox in vivo dentro das referidas células biológicas.

[00530] 424. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 423, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção configurado para manter um potencial redox in vivo dentro das referidas células biológicas compreende uma combinação de antioxidantes solúveis em lipídios e aquosos no referido meio de retenção.

[00531] 425. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 424, ou qualquer outra cláusula, em que os referidos antioxidantes solúveis em lipídios e aquosos compreendem um extrato vegetal.

[00532] 426. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um sistema selecionado a partir de um grupo que consiste em microfluídica e citometria de fluxo.

[00533] 427. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme é criado por um sistema selecionado a partir de um grupo que consiste em microfluídica, encapsulamento, criação de lipossomos, criação de uma micela, criação de uma estrutura de gaiola biológica, e qualquer combinação dos mesmos.

[00534] 428. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, em que a referida coleção das referidas células biológicas após o transporte compreende uma característica selecionada de um grupo que consiste em crescimento bacteriano reduzido, efeito bacteriostático aumentado e efeitos bactericidas aumentados.

[00535] 429. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um meio de preparação de tratamento hipotérmico selecionado de um grupo que consiste em antibióticos, ingredientes naturais, componentes de origem não animal, inibidor microbiano, composto bacteriostático, bactericida composto, um composto que inibe a replicação bacteriana, componente antibacteriano, inibidor da fosfolipase, inibidor da fosfolipase A2, composto anti-inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão, extensor, antioxidante, nucleador de gelo, quimicamente meio definido, vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos, fenólicos, polifenol, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, moléculas compostas, fitoquímicos, metabólitos secundários das plantas, extrato vegetal, extrato de espinheiro , Extrato de Fagara zanthoxyloides, extrato de Olax subscorpioides, Hippoph ae rhamnoides, extrato de Tetrapleura tetraptera, silibinina, fosfofructoquinase, camosina, lignanas, fagaronina, elagitaninas, eschscholtzidina, saponina e qualquer combinação dos mesmos.

[00536] 430. Uma composição biológica de preservação de células, conforme descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um meio de preparação de tratamento hipotérmico compreendendo menos antibióticos, em que os referidos menos antibióticos são selecionados a partir de um grupo que consiste em menos de 50 UI / ml de penicilina, menos do que cerca de 10OOIU / ml de penicilina, menos do que cerca de 50pg / ml de estreptomicina, menos do que cerca de 100 pg / ml de estreptomicina, menos do que cerca de 500 µg / ml de estreptomicina, menos do que cerca de 500 UI / ml de penicilina, menos do que cerca de 500 UI / ml de penicilina, menos do que cerca de 150 µg / ml de lincomicina, e menos do que cerca de 300 ug / ml de espectinomicina.

[00537] Uma composição biológica de preservação de células, conforme descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um meio de preparação de tratamento hipotérmico compreendendo antibióticos que foram substituídos pelo menos em parte por um extrato de planta.

[00538] Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 431, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de substituição é selecionada de um grupo que consiste em: cerca de 10% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 20% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 30% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 40% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 50% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 60% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 70% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 80% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 90% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; e cerca de 100% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal.

[00539] Uma composição biológica de preservação de células, conforme descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um meio de preparação de tratamento hipotérmico compreendendo um antioxidante.

[00540] Composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 433, ou qualquer outra cláusula, em que o referido antioxidante é selecionado a partir de um grupo que consiste em óxido de aleno sintase, fenólicos, flavonóides, ácido ascórbico, tocoferóis, carotenóides, taninos, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, terc - butil-hidroxiquinona, galato de propila e compostos, derivados de plantas ou sintéticos, suficientes para reduzir ou eliminar o superóxido de espécies reativas de oxigênio, hidroxil, peroxil, alcoxil, óxido nítrico, oxigênio singlete, peróxido de hidrogênio e qualquer combinação dos mesmos.

[00541] Composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 405, ou qualquer outra cláusula, em que o referido regime de limitação de dano celular previsto compreende uma redução no dano celular, o referido dano celular causado por um aspecto selecionado de um grupo que consiste em contaminação biológica, contaminação química, contaminação causados por espécies invasoras, resíduos químicos, detergentes, resíduos desinfetantes, compostos solventes, compostos orgânicos, fotoativação, modificação fotográfica, manuseio inadequado, bactérias, fungos, micoplasma, vírus e qualquer combinação dos mesmos.

[00542] 436. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 429, ou qualquer outra cláusula, em que o referido agente osmótico compreende um extrato de planta.

[00543] 437. Uma composição biológica de preservação de células, como descrita na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um tratamento hipotérmico é selecionada de um grupo que consiste em resfriamento, criopreservação, liofilização, liofilização e vitrificação.

[00544] 438. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda uma saúde celular pós-quente melhorada das referidas células biológicas após um tratamento hipotérmico.

[00545] 439. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 438, ou qualquer outra cláusula, em que a referida saúde celular pós-quente melhorada compreende mais do que cerca de 25% de inseminação artificial da taxa de gravidez de espermatozóides bovinos pós-aquecidos.

[00546] 440. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme compreende células biológicas encapsuladas.

[00547] 441. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, em que as referidas células biológicas compreendem uma exposição limitada ao oxigênio.

[00548] 442. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme ao redor das referidas células biológicas compreende um ambiente semelhante a uma gaiola ao redor de cada uma das referidas células biológicas.

[00549] 443. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 442, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente semelhante a gaiola em torno de cada uma das referidas células biológicas compreende compostos que interagem com um grupo principal fosfolipídeo das referidas células biológicas.

[00550] 444. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme compreende um composto selecionado a partir de um grupo consistindo em lipídios da membrana, glicolipídios, colesterol, ácidos graxos livres, fosfoglicerídeos, esteróis, esfingolípidos, proteínas da membrana, sais, agarose e qualquer combinação dos mesmos.

[00551] 445. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende células biológicas encapsuladas em um microambiente.

[00552] 446. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 445, ou qualquer outra cláusula, em que as referidas células biológicas encapsuladas no referido microambiente compreendem lipossomas.

[00553] 447. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 445, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um sistema microfluídico.

[00554] 448. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 445, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente compreende um componente selecionado de um grupo que consiste em antioxidante, lipídio vegetal, gema de ovo e qualquer combinação dos mesmos.

[00555] 449. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 445, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um meio circundando o referido microambiente.

[00556] 450. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 449, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio compreende agarose.

[00557] 451. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 445, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente é tratado de acordo com um tratamento selecionado de um grupo que consiste em resfriado a cerca de 4 ° C, congelado a cerca de -20 ° C e congelado a cerca de -96 ° C.

[00558] 452. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 445, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda uma liberação de microambiente a uma temperatura de cerca de 20 ° C ou até cerca de 37 ° C.

[00559] 453. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 440, ou qualquer outra cláusula, em que as referidas células biológicas encapsuladas compreendem uma estrutura selecionada a partir de um grupo que consiste em uma estrutura micelular; uma camada lipídica, uma monocamada lipídica, uma bicamada lipídica.

[00560] 454. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 442, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente tipo gaiola compreende um encapsulamento das referidas células biológicas com um complexo tridimensional.

[00561] 455. Uma composição biológica de preservação de células, conforme descrito na cláusula 445, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente pode ser alcançado utilizando microfluídicos para criar o referido microambiente.

[00562] 456. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 442, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente semelhante a gaiola compreende compostos selecionados a partir de um grupo que consiste em lipídios, sais, proteínas, proteína BSA, fosfatidil serina, agarose e qualquer combinação dos mesmos.

[00563] 457. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de ambiente uniforme compreende ácidos graxos.

[00564] 458. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 457, ou qualquer outra cláusula, em que os ácidos graxos compreendem cerca de 0,5% a cerca de 10% v / v de ácidos graxos.

[00565] 459. Composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme compreende lipídios contendo cerca de 40% de ácido linolênico (18: 3), cerca de 15% de linoléico (18: 2) e cerca de 20% palmítico.

[00566] 460. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme compreende lipídios e células biológicas encapsuladas juntas em uma estrutura micelular ou lipossômica.

[00567] 461. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 402, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme compreende uma mistura de lipídios, ácidos graxos livres, fosfolipídios e colesterol, que são benéficos para um tipo de célula individual e uma derivação celular.

[00568] 462. Uma composição biológica de preservação de células, conforme descrito nas cláusulas 407, 424, 429, 444, 456, 460, 461 ou qualquer outra cláusula, em que o referido lipídeo é selecionado a partir de um grupo que consiste em lipídios, ácidos graxos livres, fosfolipídios, proteínas, glicoproteínas e lipoproteínas.

[00569] 463. Composição de preservação biológica de células, caracterizada pelo fato de que compreende: uma coleção de células biológicas obtidas de uma fonte in vivo; um meio de retenção a ser aplicado à referida coleção de células biológicas, o referido meio de retenção configurado para estabelecer um ambiente uniforme em torno de cada célula biológica; e um meio de preparação de tratamento hipotérmico a ser aplicado à referida coleção de células biológicas após a referida etapa de transporte da referida coleção de células biológicas.

[00570] 464. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que a referida coleção de células biológicas é selecionada de um grupo que consiste em células, tecidos, espermatozóides, esperma equino, esperma bovino, esperma caprino, esperma ovino, porcino espermatozóide, esperma de aves, ovários, oócitos, embriões, órgãos, células-tronco, células geneticamente modificadas, células derivadas artificialmente e qualquer combinação dos mesmos.

[00571] 465. Composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que a referida fonte in vivo é selecionada a partir de um grupo que consiste em mamífero, humano, roedores, equinos, bovinos, caprinos, ovinos, porcinos, aves, peixes, mariscos, répteis, nefropídeos, vertebrados poiquotérmicos e aquáticos.

[00572] 466. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção está configurado para ser aplicável a um regime de limitação de dano celular previsto e um uso predeterminado da referida coleção de células biológicas.

[00573] 467. Composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 466, ou qualquer outra cláusula, em que o referido uso predeterminado é selecionado a partir de um grupo que consiste em inseminação, implantação, cultura, pesquisa, teste de diagnóstico, replicação, preservação de gametas, preservação genética, criopreservação, reprodução e qualquer combinação dos mesmos.

[00574] 468. Composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende pelo menos um componente selecionado de um grupo que consiste em ingredientes naturais, componentes de origem não animal, inibidor microbiano, composto bacteriostático, composto bactericida , um composto que inibe a replicação bacteriana, componente antibacteriano, inibidor da fosfolipase, inibidor da fosfolipase A2, composto anti-inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão, extensor, antioxidante, nucleador de gelo, meio quimicamente definido, vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos, fenólicos, polifenóis, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, moléculas compostas, fitoquímicos, metabolitos secundários das plantas, extrato vegetal, extrato de espinheiro, Extrato de Fagara zanthoxyloides, Extrato de Olax subscorpioides, Tetrapleura Hippophae rha mnoides, extrato de tetráptero, silibinina, fosfofructoquinase, camosina, lignanas, fagaronina, elagitaninas, eschscholtzidine, saponina e qualquer combinação dos mesmos.

[00575] 469. Composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 468, ou qualquer outra cláusula, em que o referido extrato vegetal compreende um extrato vegetal derivado de uma fonte selecionada de um grupo que consiste em seiva, frutos, sementes, folhas, flores, caules, casca, e qualquer combinação dos mesmos.

[00576] 470. Composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 468, ou qualquer outra cláusula, em que o referido extrato vegetal é selecionado a partir de um grupo que consiste em um extrato bruto de planta, um extrato vegetal de fonte única, uma combinação de extratos de mais de uma fonte, extratos de álcool, componentes de suco, extratos de hidróxido de sódio, extratos aquosos, extratos de hidroglicerina e qualquer combinação dos mesmos.

[00577] 471. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende um componente antimicrobiano selecionado de um grupo que consiste em heptadecanoil etanolamida, triterpenos, triterpenos do tipo esteróide, lipoglicopéptidos, gomas naturais, naturais resinas, óleos essenciais, óleo de tea tree, hiperenona A, hipercalina B, hiperforina, fenólicos, polifenóis, terpenos, flavonóides, alcalóides, própolis, espermidina, rutina, quercetina, cumarinas, kaempferol, estigmasterol, campesterol, tocoferol, carotenóides, suco de rábano , tobramicina e qualquer combinação dos mesmos.

[00578] 472. Composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende pelo menos dois componentes selecionados a partir de um antioxidante, um inibidor da fosfolipase, agente estabilizador de membrana e um agente antimicrobiano.

[00579] 473. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 468, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase compreende um inibidor de fosfolipase A2.

[00580] 474. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 468, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase é selecionado a partir de um grupo que consiste em zinco, manganês, ácido cítrico e qualquer combinação dos mesmos.

[00581] 475. Composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 468, ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor de fosfolipase é selecionado a partir de um grupo que consiste em um extrato vegetal, cucurmina, extrato de Gingko biloba, extrato de Centella asiatica, extrato de Hypophae, um inibidor químico de fosfolipase , compostos à base de pirrolidona, ácido aristolóquico, sulfato de espermina neomicina e qualquer combinação dos mesmos.

[00582] 476. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito nas cláusulas 468, 472 ou qualquer outra cláusula, em que o referido inibidor microbiano é um componente derivado de planta.

[00583] 477. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende compostos liberados no tempo nos referidos meios de retenção.

[00584] 478. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda meios de retenção adicionais a serem aplicados à referida coleção de células biológicas durante o transporte da referida coleção das referidas células biológicas.

[00585] 479. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 468, ou qualquer outra cláusula, em que o referido crioprotetor é selecionado a partir de um grupo que consiste em glicerol, glicina, dimetilsulfóxido, prolina, betainas modificadas, glicinabetaína, dimetilsulfoniopropionato, ciclohexanodiol, metil formamida, dimetil formamida, etileno glicol, trealose, açúcares complexos concentrados, seiva de árvores, açúcares concentrados, crioprotetores penetrantes, crioprotetores não penetrantes, extratos vegetais e qualquer combinação dos mesmos.

[00586] 480. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um resfriador da referida coleção das referidas células biológicas.

[00587] 481. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 480, ou qualquer outra cláusula, em que o referido resfriador é configurado para resfriar a referida coleção de células biológicas a uma temperatura selecionada de um grupo que consiste em cerca de 0 ° C a cerca de 37 ° C, cerca de 4 ° C, cerca de 10 ° C e cerca de 17 ° C.

[00588] 482. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 480, ou qualquer outra cláusula, em que o referido resfriador é configurado para resfriar a referida coleção de células biológicas a uma taxa de resfriamento entre cerca de 0,0l ° C / min e cerca de l ° C / min .

[00589] 483. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção compreende um meio de pré- processamento.

[00590] 484. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção está configurado para manter um potencial redox in vivo dentro das referidas células biológicas.

[00591] 485. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 484, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de retenção configurado para manter um potencial redox in vivo dentro das referidas células biológicas compreende uma combinação de antioxidantes aquosos e lipossolúveis no referido meio de retenção.

[00592] 486. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 485, ou qualquer outra cláusula, em que os referidos antioxidantes solúveis em lipídios e aquosos compreendem um extrato vegetal.

[00593] 487. Uma composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um sistema selecionado a partir de um grupo que consiste em microfluídica e citometria de fluxo.

[00594] 488. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme é criado por um sistema selecionado a partir de um grupo que consiste em microfluídica, encapsulamento, criação de lipossomos, criação de micelas, criação de uma estrutura de gaiola biológica e qualquer combinação dos mesmos.

[00595] 489. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que a referida coleção das referidas células biológicas após o transporte compreende uma característica selecionada de um grupo que consiste em crescimento bacteriano reduzido, efeito bacteriostático aumentado e efeitos bactericidas aumentados.

[00596] 490. Composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um meio de preparação de tratamento hipotérmico.

[00597] 491. Composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de preparação de tratamento hipotérmico selecionado de um grupo que consiste em antibióticos, ingredientes naturais, componentes de origem não animal, inibidor microbiano, composto bacteriostático, composto bactericida, um composto que inibe a replicação bacteriana, componente antibacteriano, inibidor da fosfolipase, inibidor da fosfolipase A2, composto anti-inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão, extensor, antioxidante, nucleador de gelo, meio quimicamente definido , vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos, fenólicos, polifenóis, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, moléculas compostas, fitoquímicos, metabólitos secundários das plantas, extrato vegetal, extrato de espinheiro, Fagara extrato de zanthoxyloides, extrato de Olax subscorpioides,

Hippophae rhamnoide s, extrato de Tetrapleura tetraptera, silibinina, fosfofructoquinase, camosina, lignanas, fagaronina, elagitaninas, eschscholtzidina, saponina e qualquer combinação dos mesmos.

[00598] 492. Uma composição biológica de preservação de células, conforme descrito na cláusula 490, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de preparação de tratamento hipotérmico compreende menos antibióticos, em que os referidos menos antibióticos são selecionados de um grupo que consiste em menos de cerca de 50 UI / ml de penicilina, menor que em cerca de 10000 ml de penicilina, menos de cerca de 50 pg / ml de estreptomicina, menos de cerca de 100 pg / ml de estreptomicina, menos de cerca de 500 ug / ml estreptomicina, menos do que cerca de 500 UI / ml de penicilina, menos do que cerca de 150 µg / ml de lincomicina e menos do que cerca de 300 µg / ml de espectinomicina.

[00599] Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 490, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de preparação de tratamento hipotérmico compreende antibióticos que foram substituídos pelo menos em parte por um extrato de planta.

[00600] Uma composição biológica de preservação de células, conforme descrito na cláusula 493, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de substituição é selecionada a partir de um grupo que consiste em: cerca de 10% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 20% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 30% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 40% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 50% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 60% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 70% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 80% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; cerca de 90% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal; e cerca de 100% do antibiótico é substituído por um extrato vegetal.

[00601] Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 490, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio de preparação de tratamento hipotérmico compreende um antioxidante.

[00602] Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 495, ou qualquer outra cláusula, em que o referido antioxidante compreende é selecionado a partir de um grupo que consiste em óxido de aleno sintase, fenólicos, flavonóides, ácido ascórbico, tocoferóis, carotenóides, taninos, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, terc-butil-hidroxiquinona, propil galato e compostos, derivados de plantas ou sintéticos, suficientes para reduzir ou eliminar o superóxido de espécies reativas de oxigênio, hidroxil, peroxil, alcoxil, óxido nítrico, oxigênio singlete, peróxido de hidrogênio e qualquer combinação dos mesmos.

[00603] Composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 466, ou qualquer outra cláusula, em que o referido regime de limitação de dano celular previsto compreende uma redução no dano celular, o referido dano celular causado a partir de um aspecto selecionado de um grupo consistindo de contaminação biológica, contaminação química, contaminação causada por espécies invasoras, resíduos químicos, detergentes, resíduos desinfetantes, compostos solventes, compostos orgânicos, fotoativação, modificação fotográfica, manuseio inadequado, bactérias, fungos, micoplasma, vírus e qualquer combinação dos mesmos.

[00604] 498. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 491, ou qualquer outra cláusula, em que o referido agente osmótico compreende um extrato de planta.

[00605] 499. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 490, ou qualquer outra cláusula, em que o referido tratamento hipotérmico é selecionado a partir de um grupo que consiste em resfriamento, criopreservação, liofilização, liofilização e vitrificação.

[00606] 500. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda uma saúde celular pós-quente melhorada das referidas células biológicas após um tratamento hipotérmico.

[00607] 501. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 500, ou qualquer outra cláusula, em que a referida saúde celular pós-quente melhorada compreende mais do que cerca de 25% de inseminação artificial da taxa de gravidez de espermatozóides bovinos pós-aquecidos.

[00608] 502. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda células biológicas encapsuladas.

[00609] 503. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que as referidas células biológicas compreendem uma exposição limitada ao oxigênio.

[00610] 504. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme ao redor das referidas células biológicas compreende um ambiente semelhante a uma gaiola ao redor de cada uma das referidas células biológicas.

[00611] 505. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 504, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente semelhante a gaiola em torno de cada uma das referidas células biológicas compreende compostos que interagem com um grupo principal fosfolipídeo das referidas células biológicas.

[00612] 506. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme compreende um composto selecionado de um grupo que consiste em lipídios de membrana, glicolipídios, colesterol, ácidos graxos livres, fosfoglicerídeos, esteróis, esfingolípidos, proteínas da membrana , sais, agarose e qualquer combinação dos mesmos.

[00613] 507. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreende células biológicas encapsuladas em um microambiente.

[00614] 508. Uma composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 507, ou qualquer outra cláusula, em que as referidas células biológicas encapsuladas no referido microambiente compreendem lipossomas.

[00615] 509. Uma composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 507, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um sistema microfluídico.

[00616] 510. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 507, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente compreende um componente selecionado de um grupo que consiste em antioxidante, lipídio vegetal, gema de ovo e qualquer combinação dos mesmos.

[00617] 511. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 507, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda um meio circundante ao referido microambiente.

[00618] 512. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 511, ou qualquer outra cláusula, em que o referido meio compreende agarose.

[00619] 513. Composição de preservação biológica de células, conforme descrito na cláusula 507, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente é tratado de acordo com um tratamento selecionado de um grupo que consiste em resfriado a cerca de 4 ° C, congelado a cerca de -20 ° C e congelado a cerca de -96 ° C.

[00620] 514. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 507, ou qualquer outra cláusula, e compreendendo ainda uma liberação de microambiente a uma temperatura de cerca de 20 ° C ou até cerca de 37 ° C.

[00621] 515. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 502, ou qualquer outra cláusula, em que as referidas células biológicas encapsuladas compreendem uma estrutura selecionada a partir de um grupo que consiste em uma estrutura micelular; uma camada lipídica, uma monocamada lipídica, uma bicamada lipídica.

[00622] 516. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 504, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente tipo gaiola compreende um encapsulamento das referidas células biológicas com um complexo tridimensional.

[00623] 517. Uma composição biológica de preservação de células, conforme descrito na cláusula 507, ou qualquer outra cláusula, em que o referido microambiente pode ser alcançado utilizando microfluídicos para criar o referido microambiente.

[00624] 518. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 504, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente semelhante a gaiola compreende compostos selecionados de um grupo que consiste em lipídios, sais, proteínas, proteína BSA, fosfatidil serina, agarose e qualquer combinação dos mesmos.

[00625] 519. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que a referida etapa de ambiente uniforme compreende ácidos graxos.

[00626] 520. Uma composição biológica de preservação de células, conforme descrito na cláusula 519, ou qualquer outra cláusula, em que os ácidos graxos compreendem cerca de 0,5% a cerca de 10% v / v de ácidos graxos.

[00627] 521. Uma composição biológica de preservação de células, conforme descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula,

em que o referido ambiente uniforme compreende lipídios contendo cerca de 40% de ácido linolênico (18: 3), cerca de 15% de linoléico (18: 2) e cerca de 20% palmítico.

[00628] 522. Composição de preservação biológica de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme compreende lipídios e células biológicas encapsuladas em conjunto em uma estrutura micelular ou lipossômica.

[00629] 523. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 463, ou qualquer outra cláusula, em que o referido ambiente uniforme compreende uma mistura de lipídios, ácidos graxos livres, fosfolipídios e colesterol, que são benéficos para um tipo de célula individual e uma derivação celular.

[00630] 524. Composição de preservação biológica de células, como descrito nas cláusulas 485, 491, 506, 518, 522, 523 ou qualquer outra cláusula, em que o referido lipídeo é selecionado a partir de um grupo que consiste em lipídios, ácidos graxos livres, fosfolipídios, proteínas, glicoproteínas e lipoproteínas.

[00631] 530. Uma composição biológica de preservação de células, como descrito na cláusula 472, ou qualquer outra cláusula, em que o referido agente antimicrobiano compreende um composto bacteriostático ou um composto bacteriocida.

[00632] 531. Um sistema substancialmente como aqui descrito com referência a qualquer uma ou mais das Figuras e Descrição.

[00633] Como pode ser facilmente entendido a partir do exposto, os conceitos básicos da presente invenção podem ser incorporados de várias maneiras. Envolve tanto técnicas de preservação de células quanto dispositivos para realizar a preservação de células apropriada. Nesta aplicação, as técnicas de preservação de células são divulgadas como parte dos resultados mostrados para serem alcançados pelos vários dispositivos descritos e como etapas inerentes à utilização. Eles são simplesmente o resultado natural da utilização dos dispositivos conforme planejado e descrito. Além disso, enquanto alguns dispositivos são divulgados, deve-se entender que eles não apenas realizam certos métodos, mas também podem variar de várias maneiras. É importante ressaltar que, em relação a todos os itens anteriores, todas essas facetas devem ser entendidas como abrangidas por esta divulgação.

[00634] A discussão incluída neste aplicativo pretende servir como uma descrição básica. O leitor deve estar ciente de que a discussão específica pode não descrever explicitamente todas as modalidades possíveis; muitas alternativas estão implícitas. Também pode não explicar completamente a natureza genérica da invenção e não pode mostrar explicitamente como cada característica ou elemento pode realmente ser representativo de uma função mais ampla ou de uma grande variedade de elementos alternativos ou equivalentes. Novamente, eles estão implicitamente incluídos nesta divulgação. Onde a invenção é descrita na terminologia orientada a dispositivos, cada elemento do dispositivo executa implicitamente uma função. As reivindicações de aparelhos podem não apenas ser incluídas para o dispositivo descrito, mas também reivindicações de método ou processo podem ser incluídas para abordar as funções que a invenção e cada elemento executa. Nem a descrição nem a terminologia têm como objetivo limitar o escopo das reivindicações que serão incluídas em qualquer pedido de patente subsequente. Também deve ser entendido que uma variedade de alterações pode ser feita sem se afastar da essência da invenção. Tais alterações também estão implicitamente incluídas na descrição.

[00635] Eles ainda se enquadram no escopo desta invenção. Uma ampla divulgação que abrange as modalidades explícitas mostradas, a grande variedade de modalidades alternativas implícitas e os métodos ou processos amplos e similares são abrangidos por esta divulgação e podem ser invocados ao elaborar as reivindicações para qualquer pedido de patente subsequente. Deve-se entender que tais alterações de idioma e reivindicações mais amplas ou detalhadas podem ser realizadas em uma data posterior (como em qualquer prazo exigido) ou no caso em que o solicitante posteriormente solicite um depósito de patente com base nesse depósito. Com esse entendimento, o leitor deve estar ciente de que esta divulgação deve ser entendida como suporte a qualquer pedido de patente arquivado posteriormente que possa buscar o exame de uma base tão ampla de reivindicações quanto ao direito do requerente e possa ser projetado para produzir uma patente que abranja vários aspectos da invenção, independentemente e como um sistema geral.

[00636] Além disso, cada um dos vários elementos da invenção e reivindicações também pode ser alcançado de várias maneiras.

Além disso, quando usado ou implícito, um elemento deve ser entendido como abrangendo estruturas individuais e plurais que podem ou não estar fisicamente conectadas. Esta divulgação deve ser entendida como abrangendo cada uma dessas variações, seja uma variação de uma modalidade de qualquer modalidade de aparelho, um método ou modalidade de processo, ou mesmo apenas uma variação de qualquer elemento destes. Particularmente, deve ser entendido que, como a divulgação se refere a elementos da invenção, as palavras para cada elemento podem ser expressas por termos equivalentes de aparelhos ou termos de métodos - mesmo que apenas a função ou resultado seja o mesmo. Tais termos equivalentes, mais amplos ou até mais genéricos devem ser considerados abrangidos na descrição de cada elemento ou ação.

Tais termos podem ser substituídos quando desejado para tornar explícita a cobertura implicitamente ampla à qual esta invenção tem direito. Apenas como um exemplo, deve-se entender que todas as ações podem ser expressas como um meio para executar essa ação ou como um elemento que a causa. Da mesma forma, cada elemento físico divulgado deve ser entendido como abrangendo uma divulgação da ação que esse elemento físico facilita. Com relação a este último aspecto, como apenas um exemplo, a divulgação de uma "coleção" deve ser entendida como abrangendo a divulgação do ato de "coletar" - discutido explicitamente ou não - e, inversamente, houve divulgação efetiva do ato de "coleta", tal divulgação deve ser entendida como abrangendo a divulgação de uma " coleção" e até mesmo um "meio de coleta".

[00637] Tais mudanças e termos alternativos devem ser entendidos como incluídos explicitamente na descrição. Além disso, cada um desses meios (seja explicitamente descrito ou não) deve ser entendido como abrangendo todos os elementos que podem executar a função especificada e todas as descrições de elementos que executam uma função descrita devem ser entendidas como um exemplo não limitativo de meios para executar essa função.

[00638] Quaisquer patentes, publicações ou outras referências mencionadas neste pedido de patente são aqui incorporadas por referência. Todos os casos prioritários reivindicados por este aplicativo são anexados e incorporados por referência.

[00639] Além disso, quanto a cada termo usado, deve-se entender que, a menos que sua utilização neste aplicativo seja inconsistente com uma interpretação amplamente suportada, as definições comuns de dicionário devem ser entendidas como incorporadas a cada termo e todas as definições, termos alternativos e sinônimos como contidos no Dicionário Unabridged do Random House Webster, a segunda edição é incorporada por referência. Finalmente, todas as referências listadas na lista abaixo de referências ou outras declarações de informações apresentadas com o aplicativo são anexadas e incorporadas por referência, no entanto, como para cada uma das opções acima, na medida em que essas informações ou declarações incorporadas por referência possam ser consideradas inconsistentes com o patenteamento desta (s) invenção (s), essas declarações não devem ser expressamente consideradas como feitas pelo (s) requerente (s).

I – PATENTES NORTE-AMERICANAS II - PUBLICAÇÃO DE PATENTES NORTE-AMERICANAS III – LITERATURA NÃO-PATENTÁRIA

[00640] Assim, deve-se entender que os requerentes têm suporte para reivindicar e fazer uma declaração da invenção para pelo menos: i) cada um dos dispositivos de preservação de células, conforme aqui divulgados e descritos, ii) os métodos relacionados divulgados e descritos, iii) variações similares, equivalentes e até implícitas de cada um desses dispositivos e métodos, iv) os projetos alternativos que cumprem cada uma das funções mostradas como divulgadas e descritas; v) os projetos e métodos alternativos que cumprem cada uma das funções mostradas como são implícito para realizar o que é divulgado e descrito; vi) cada recurso, componente e etapa mostrado como invenções separadas e independentes; vii) as aplicações aprimoradas pelos vários sistemas ou componentes divulgados; viii) os produtos resultantes produzidos por esses processos, métodos , sistemas ou componentes, ix) cada sistema, método e elemento mostrado ou descrito como agora aplicado a qualquer campo ou dispositivos específicos mencionados, x) substância e método de aparelhos conforme descrito anteriormente e com referência a qualquer um dos exemplos anexos, xi) um aparelho para executar os métodos descritos neste documento compreendendo meios para executar as etapas, xii) as várias combinações e permutações de cada um dos elementos divulgados, xiii) cada um potencialmente dependente reivindicação ou conceito como uma dependência de cada uma das reivindicações ou conceitos independentes apresentados e xiv) todas as invenções aqui descritas.

[00641] No que diz respeito às reivindicações apresentadas agora ou mais tarde para exame, deve-se entender que, por razões práticas e para evitar grande expansão da carga de exame, o requerente pode, a qualquer momento, apresentar apenas reivindicações iniciais ou talvez apenas reivindicações iniciais com apenas iniciais.

dependências. O escritório e quaisquer terceiros interessados no potencial escopo deste ou de aplicativos subseqüentes devem entender que reivindicações mais amplas podem ser apresentadas em uma data posterior neste caso, em um caso reivindicando o benefício desse caso ou em qualquer continuação, apesar de qualquer ação preliminar. alterações, outras alterações, linguagem de reivindicações ou argumentos apresentados, portanto, durante toda a pendência de qualquer caso, não há intenção de recusar ou renunciar a qualquer assunto em potencial. Deve-se entender que, se ou quando forem apresentadas reivindicações mais amplas, isso poderá exigir que qualquer arte anterior relevante que possa ter sido considerada em algum momento anterior precise ser visitada novamente, pois é possível que, na medida em que houver alguma alteração, o idioma da reivindicação , ou os argumentos apresentados nesta ou em qualquer aplicação subsequente são considerados como feitos para evitar a arte anterior; esses motivos podem ser eliminados por reivindicações apresentadas posteriormente ou similares. Tanto o examinador quanto qualquer outra pessoa interessada em cobertura potencial existente ou posterior, ou considerando se houve alguma possibilidade de indicação de renúncia ou renúncia a uma cobertura potencial, devem estar cientes de que nenhuma renúncia ou renúncia é pretendida ou já existe nesta ou em qualquer aplicação subsequente.

Limitações como as que surgiram no Hakim v. Cannon Avent Group, PLC, 479 F.3d 1313 (Fed. Cir 2007), ou similares, não são expressamente pretendidas neste ou em qualquer outro assunto relacionado subsequente.

Além disso, deve entender-se que o apoio existe no grau exigido pelas novas leis - incluindo, mas não se limitando, ao Artigo 123 (2) da Convenção Europeia de Patentes e à Lei de Patentes dos Estados Unidos 35 USC 132 ou outras leis desse tipo - para permitir a adição de qualquer uma das várias dependências ou outros elementos apresentados sob uma reivindicação ou conceito independente como dependências ou elementos sob qualquer outra reivindicação ou conceito independente. Ao redigir quaisquer reivindicações a qualquer momento, seja neste requerimento ou em qualquer requerimento subsequente, também deve ser entendido que o solicitante pretendeu capturar um escopo de cobertura tão amplo e amplo quanto legalmente disponível.

[00642] Na medida em que substitutos não substanciais são feitos, na medida em que o requerente de fato não formulou nenhuma reivindicação, de modo a abranger literalmente qualquer modalidade específica, e na extensão aplicável de outra forma, o requerente não deve ser entendido como tendo, de nenhuma maneira, intenção renunciar ou efetivamente renunciar a uma cobertura que o requerente simplesmente pode não ter sido capaz de antecipar todas as eventualidades; um especialista na técnica, não deveria ser razoavelmente esperado que redigisse uma reivindicação que teria literalmente englobado essas modalidades alternativas.

[00643] Além disso, se ou quando usado, o uso da frase de transição "compreendendo" é usado para manter as reivindicações de

"extremidade aberta" aqui, de acordo com a interpretação tradicional de reivindicações.

Assim, a menos que o contexto exija de outra forma, deve-

se entender que o termo "compreender" ou variações como "compreende"

ou "compreender" pretendem implicar a inclusão de um elemento declarado ou etapa ou grupo de elementos ou etapas, mas não a exclusão de qualquer outro elemento ou etapa ou grupo de elementos ou etapas.

Tais termos devem ser interpretados em sua forma mais abrangente, de modo a proporcionar ao solicitante a cobertura mais ampla legalmente permitida.

O uso da frase "ou qualquer outra reivindicação" é usado para fornecer suporte a qualquer reivindicação dependente de qualquer outra reivindicação, como outra reivindicação dependente, outra reivindicação independente, uma reivindicação listada anteriormente, uma reivindicação listada posteriormente e a gostar.

Como um exemplo esclarecedor, se uma reivindicação dependesse "da reivindicação 20 ou de qualquer outra reivindicação" ou similar, ela poderia ser redefinida como dependente da reivindicação 1, reivindicação 15 ou até reivindicação 25 (se existir) se desejado e ainda caem com a divulgação.

Deve ser entendido que esta frase também fornece suporte para qualquer combinação de elementos nas reivindicações e até incorpora qualquer base antecedente adequada desejada para certas combinações de reivindicações, como combinações de método, aparelho, processo e reivindicações semelhantes.

[00644] Finalmente, quaisquer reivindicações apresentadas a qualquer momento são incorporadas por referência como parte desta descrição da invenção, e o requerente reserva-se expressamente o direito de usar todo ou parte do conteúdo incorporado dessas reivindicações como descrição adicional para apoiar qualquer ou todas as reivindicações ou qualquer elemento ou componente das mesmas, e o requerente reserva-se expressamente o direito de mover qualquer parte ou todo o conteúdo incorporado dessas reivindicações ou qualquer elemento ou componente da descrição para as reivindicações ou vice-versa. versa, conforme necessário, para definir a questão para a qual a proteção é solicitada por este aplicativo ou por qualquer aplicação subsequente de continuação, divisão ou continuação em parte, ou para obter qualquer benefício da redução de taxas conforme ou para cumprir com as leis, regras ou regulamentos de patentes de qualquer país ou tratado, e esse conteúdo incorporado por referência deve sobreviver durante toda a pendência deste aplicativo, incluindo quaisquer subsídios continuação, divisão ou aplicação equivalente em parte da continuação ou qualquer reemissão ou extensão da mesma.

Claims

1 / 19 REIVINDICAÇÕES

1. Método para proteger células biológicas in vitro com continuidade sinérgica, caracterizado por compreender as etapas de: colher uma coleção de células biológicas de uma fonte in vivo; preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base em um regime de limitação de dano celular previsto e um uso predeterminado; fornecer um meio de retenção aplicável para o referido regime de limitação de dano celular previsto e o referido uso predeterminado, em que o referido meio de retenção compreende pelo menos dois componentes selecionados a partir de um antioxidante, um inibidor da fosfolipase, agente estabilizador de membrana e um agente antimicrobiano; adicionar o referido meio de retenção à referida coleção das referidas células biológicas; transportar a referida coleção das referidas células biológicas no referido meio de retenção com base no referido regime previsto de limitação de danos às células e no referido uso predeterminado; receber a referida coleção das referidas células biológicas após o referido passo de transportar a referida coleção das referidas células biológicas no referido meio de retenção; preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente; tratamento hipotérmico das referidas células biológicas; aquecer as referidas células biológicas; e utilizando as referidas células biológicas para o referido uso predeterminado.

2. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a referida coleção de células biológicas ser selecionada a partir de um grupo que consiste em células, tecidos, espermatozóides, esperma equino, esperma bovino, esperma caprina, esperma ovina, esperma suína, galinha. esperma, ovários,

2 / 19 oócitos, embriões, órgãos, células-tronco, células geneticamente modificadas, células derivadas artificialmente e qualquer combinação dos mesmos.

3. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a referida fonte in vivo ser selecionada a partir de um grupo que consiste em mamífero, humano, roedores, eqüinos, bovinos, caprinos, ovinos, porcinos, aves, peixes, mariscos, répteis, nefropídeos, vertebrados poiquotérmicos e aquáticos.

4. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o referido uso predeterminado ser selecionado a partir de um grupo que consiste em inseminação, implantação, cultura, pesquisa, teste de diagnóstico, replicação, preservação de gametas, preservação genética, criopreservação, reprodução e qualquer combinação dos mesmos.

5. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o referido meio de retenção compreender pelo menos um componente adicional selecionado de um grupo que consiste em ingredientes naturais, componentes de origem não animal, inibidor microbiano, composto bacteriostático, composto bactericida, um composto que inibe a replicação bacteriana, componente antibacteriano, inibidor da fosfolipase, inibidor da fosfolipase A2, composto anti-inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão, extensor, antioxidante, nucleador de gelo, meio quimicamente definido, vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos, fenólicos, polifenóis, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, moléculas compostas, fitoquímicos, metabolitos secundários das plantas, extrato vegetal, extrato de espinheiro, Fagara zanthoxy extrato de lides, extrato de Olax subscorpioides,

3 / 19 Hippophae rhamnoides ou Tetraple extrato de ura tetraptera, silibinina, fosfofructoquinase, carnosina, lignanas, fagaronina, elagitaninas, eschscholtzidine, saponina e qualquer combinação dos mesmos.

6. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado por o referido extrato vegetal compreender um extrato vegetal derivado de uma fonte selecionada de um grupo que consiste em seiva, frutos, sementes, folhas, flores, caules, cascas e qualquer combinação disso.

7. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado por o referido extrato vegetal é selecionado de um grupo que consiste em um extrato vegetal bruto, um extrato vegetal de fonte única, uma combinação de extratos de mais de uma fonte, extratos de álcool, componentes de suco, extratos de hidróxido de sódio, extratos aquosos, extratos de hidroglicerina e qualquer combinação dos mesmos.

8. Método de proteção de células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o referido meio de retenção compreender um componente antimicrobiano selecionado de um grupo que consiste em heptadecanoil etanolamida, triterpenos, triterpenos semelhantes a esteróides, lipoglicopéptidos, gomas naturais, resinas naturais, óleos essenciais óleo de tea tree, hiperenona A, hipercalina B, hiperforina, fenólicos, polifenóis, terpenos, flavonóides, alcalóides, própolis, espermidina, rutina, quercetina, cumarinas, kaempferol, estigmasterol, campesterol, tocoferol, carotenóides, extrato de suco de rábano e tobramicina combinação dos mesmos.

9. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na reivindicação 1, caracterizado por o referido inibidor de fosfolipase compreender um inibidor de fosfolipase A2.

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10. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o referido inibidor de fosfolipase ser selecionado a partir de um grupo que consiste em zinco, manganês, ácido cítrico e qualquer combinação dos mesmos.

11. Método de proteção de células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o referido inibidor de fosfolipase ser selecionado a partir de um grupo que consiste em um extrato de planta, cucurmina, extrato de Gingko biloba, extrato de Centella asiatica, extrato de Hypophae, um inibidor químico da fosfolipase, à base de pirrolidona compostos, ácido aristolóquico, sulfato de espermina neomicina e qualquer combinação dos mesmos.

12. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a referida etapa de adição do referido meio de retenção à referida coleção das referidas células biológicas compreender a etapa de adição de meios de retenção suficientes à referida coleção das referidas células biológicas para durar ao longo do referido passo de transportar a referida coleção das referidas células biológicas.

13. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a referida etapa de fornecer o referido meio de retenção aplicável ao referido regime de limitação de dano celular antecipado e o referido uso predeterminado compreenderem a etapa de fornecer compostos liberados no tempo no referido meio de retenção.

14. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por compreender ainda uma etapa de adição de meios de retenção adicionais à referida coleção de células biológicas durante a referida etapa de transporte da referida coleção das referidas células biológicas.

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15. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado por o referido crioprotetor ser selecionado a partir de um grupo que consiste em glicerol, glicina, dimetilsulfóxido, prolina, betainas modificadas, glicinabetaína, dimetilsulfoniopropionato, ciclo-hexanodiol, metil formamida, dimetil formamida, etilenoglicol , trealose, açúcares complexos concentrados, seiva de árvores, açúcares concentrados, crioprotetores penetrantes, crioprotetores não penetrantes, extratos vegetais e qualquer combinação dos mesmos.

16. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base no referido regime de limitação de danos às células previsto e o referido uso predeterminado compreenderem o passo de resfriamento da referida coleção de células biológicas.

17. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a referida etapa de transporte da referida coleção das referidas células biológicas nos referidos meios de retenção compreender a etapa de resfriamento da referida coleção das referidas células biológicas nos referidos meios de retenção.

18. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com as reivindicações 16 e 17, caracterizado por a referida etapa de resfriamento da referida coleção de células biológicas compreender a etapa de resfriamento da referida coleção de células biológicas a uma temperatura selecionada a partir de um grupo que consiste em cerca de 0°C a cerca de 37°C, cerca de 4°C, cerca de 10°C e cerca de 17°C.

19. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com as reivindicações 16 e 17, caracterizado por o referido passo de resfriamento da referida coleção de células biológicas compreender o

6 / 19 passo de resfriamento da referida coleção de células biológicas a uma taxa de resfriamento entre cerca de 0,01° C/min a cerca de 1 °C/min.

20. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base no referido regime previsto de limitação de danos às células e o referido uso predeterminado compreender o passo de pré-processar a referida coleção de células biológicas durante a referida etapa de transporte da referida coleção das referidas células biológicas com base no referido regime de limitação de dano celular previsto e no referido uso predeterminado.

21. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base no referido regime de limitação de dano celular previsto e o referido uso predeterminado compreender o passo de manter o potencial redox in vivo dentro do referido biológico células.

22. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado por o referido passo de manter o referido potencial redox in vivo dentro das referidas células biológicas compreender o passo de utilizar uma combinação de antioxidantes solúveis em lipídios e aquosos nos referidos meios de retenção.

23. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado por os referidos antioxidantes solúveis em lipídios e aquosos compreenderem um extrato vegetal.

24. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base no

7 / 19 referido regime de limitação de dano celular previsto e o referido uso predeterminado compreenderem o passo de utilizar um sistema selecionado de um grupo que consiste em microfluídica e citometria de fluxo.

25. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a referida etapa de preservação da referida coleção de células biológicas com base no referido regime de limitação de dano celular previsto e no referido uso predeterminado compreender a etapa de utilização de um sistema para criar um ambiente uniforme ao redor das referidas células biológicas, o referido sistema selecionado a partir de um grupo que consiste em microfluídicos, encapsulamento, criação de lipossomos, criação de micelas, criação de uma estrutura de gaiola biológica e qualquer combinação dos mesmos.

26. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o referido passo de receber a referida coleção das referidas células biológicas após o referido passo de transportar as referidas células biológicas no referido meio de retenção compreender o passo de fornecer às células biológicas transportadas uma característica selecionada de um grupo que consiste em crescimento bacteriano reduzido, efeito bacteriostático aumentado e efeitos bactericidas aumentados.

27. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a referida etapa de preparação das referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente compreender a etapa de adicionar componentes hipotérmicos às referidas células biológicas transportadas.

28. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado por os referidos componentes hipotérmicos serem selecionados a partir de um grupo que consiste em antibióticos, ingredientes naturais, componentes não derivados de animais,

8 / 19 inibidor microbiano, composto bacteriostático, composto bactericida, um composto que inibe replicação bacteriana, componente antibacteriano, inibidor da fosfolipase, inibidor da fosfolipase A2, composto anti- inflamatório, composto imunossupressor, composto antiprotease, composto estabilizador de membrana, crioprotetor, agente osmótico, tampão, extensor, antioxidante, nucleador de gelo, meio quimicamente definido, vitamina E, vitamina C, trealose, colesterol, lecitina, fitoquímicos, carboidratos, fenólicos, polifenóis, ácidos orgânicos, lipídios, açúcar, sal, proteína, moléculas compostas, fitoquímicos, metabolitos secundários de plantas, extrato vegetal, extrato de espinheiro, extrato de Fagara zanthoxyloides, Olax subscorpioides extrato, Hippophae rhamnoides, Tetrapleura tetraptera extrac t, silibinina, fosfofructoquinase, carnosina, lignanas, fagaronina, elagitaninas, eschscholtzidina, saponina e qualquer combinação dos mesmos.

29. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a referida etapa de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente compreender a etapa de utilizar menos antibióticos com as referidas células biológicas, em que os referidos menos antibióticos são selecionados a partir de um grupo que consiste em menos do que cerca de 50 UI/ml de penicilina, menos do que cerca de 100 UI / ml de penicilina, menos do que cerca de 50pg/ml de estreptomicina, menos do que cerca de 100 pg/ml de estreptomicina, menos do que cerca de 500 µg/ml de estreptomicina, menos do que cerca de 500 µg/ml de estreptomicina, menos do que cerca de 500 UI/ml de penicilina, menos do que cerca de 150 µg/ml de lincomicina e menos do que cerca de 300 µg/ml de espectinomicina.

30. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a referida etapa de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas

9 / 19 hipotermicamente compreender a etapa de adicionar antibióticos às referidas células biológicas transportadas e substituir pelo menos parte dos referidos antibióticos por um extrato vegetal.

31. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado por a referida etapa de substituição de pelo menos parte dos referidos antibióticos por um extrato vegetal ser selecionada de um grupo que consiste em: substituir cerca de 10% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 20% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 30% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 40% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 50% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 60% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 70% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 80% do antibiótico por um extrato vegetal; substituir cerca de 90% do antibiótico por um extrato vegetal; e substituindo cerca de 100% do antibiótico por um extrato vegetal.

32. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o referido passo de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente compreender o passo de adicionar um antioxidante às referidas células biológicas.

33. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado por o referido antioxidante ser selecionado a partir de um grupo que consiste em óxido de aleno sintase, fenólicos, flavonóides, ácido ascórbico, tocoferóis, carotenóides, taninos, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, terc- butil- hidroxiquinona, propil galato e compostos, derivados de plantas ou sintéticos, suficientes para reduzir ou eliminar o superóxido de espécies

10 / 19 reativas de oxigênio, hidroxil, peroxil, alcoxil, óxido nítrico, oxigênio singlete, peróxido de hidrogênio e qualquer combinação dos mesmos.

34. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com as reivindicações 1 a 20 caracterizado por compreender ainda a etapa de redução de uma quantidade de tempo de laboratório de exposição in vitro gasto na referida etapa de preparação das referidas células biológicas para serem preservadas hipotermicamente.

35. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o referido regime de limitação de dano celular previsto compreender uma redução no dano celular, o referido dano celular causado por um aspecto selecionado de um grupo que consiste em contaminação biológica, contaminação química, contaminação causada por espécies invasoras, resíduos químicos, detergentes, resíduos desinfetantes, compostos solventes, compostos orgânicos, fotoativação, modificação fotográfica, manuseio inadequado, bactérias, fungos, micoplasma, vírus e qualquer combinação dos mesmos.

36. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 34, caracterizado por o referido passo de reduzir a referida quantidade de tempo de laboratório de exposição in vitro gasto no referido passo de preparar as referidas células biológicas para serem preservadas hipotermicamente compreender o passo de diminuir um tempo de equilíbrio de referidas células biológicas no referido laboratório em preparação para criopreservação e exposição a um agente osmótico

37. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado por o referido agente osmótico compreender um extrato de planta.

38. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a referida etapa de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas

11 / 19 hipotermicamente e a referida etapa de tratar hipotermicamente as referidas células biológicas compreenderem um tratamento hipotérmico selecionado a partir de um grupo que consiste em resfriamento, criopreservação, liofilização e vitrificação.

39. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o referido passo de preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente compreender o passo de preparar as referidas células biológicas para serem criopreservadas; em que o referido passo de tratamento hipotérmico das referidas células biológicas compreende o passo de criopreservação das referidas células biológicas; e em que o referido passo de aquecimento das referidas células biológicas compreende o passo de descongelamento das referidas células biológicas.

40. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por compreender ainda o passo de utilizar uma única coleção de células biológicas para o referido passo de usar as referidas células biológicas para o referido uso predeterminado.

41. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o referido passo de usar as referidas células biológicas para o referido uso predeterminado compreender o passo de proporcionar uma saúde celular pós-quente melhorada.

42. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado por a referida saúde celular pós-quente melhorada compreender mais do que cerca de 25% de taxa de gravidez inseminação artificial de espermatozóides bovinos pós-aquecidos.

43. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o referido passo de

12 / 19 preservar a referida coleção das referidas células biológicas compreender o passo de encapsular as referidas células biológicas.

44. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas compreender o passo de limitar a exposição ao oxigênio às referidas células biológicas.

45. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o referido passo de preservar a referida coleção das referidas células biológicas compreender o passo de criar um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas.

46. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado por a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreender a etapa de criação de um ambiente semelhante a uma gaiola em torno de cada uma das referidas células biológicas.

47. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado por a referida etapa de criação de um ambiente semelhante a uma gaiola em torno de cada uma das referidas células biológicas compreender a etapa de interação de compostos com um grupo principal fosfolipídeo das referidas células biológicas.

48. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado por a referida etapa de criação de um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreender a etapa de adição de compostos à referida coleção de células biológicas, os referidos compostos selecionados a partir de um grupo que consiste em lipídios de membrana , glicolipídios, colesterol, ácidos graxos livres, fosfoglicerídeos, esteróis, esfingolípidos, proteínas de membrana, sais, agarose e qualquer combinação dos mesmos.

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49. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado por a referida etapa de criação de um ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreender a etapa de encapsular as referidas células biológicas em um microambiente.

50. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado por a referida etapa de encapsular as referidas células biológicas em um microambiente compreender a etapa de adição de lipossomos ou micelas à referida coleção de células biológicas.

51. 51. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado por a referida etapa de encapsular as referidas células biológicas em um microambiente compreender a etapa de utilização de um sistema microfluídico.

52. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado por o referido microambiente compreender um componente selecionado de um grupo que consiste em antioxidante, lipídio vegetal, gema de ovo e qualquer combinação dos mesmos.

53. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado por compreender ainda a etapa de circundar o referido microambiente com um meio.

54. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 53, caracterizado por o referido meio compreende agarose.

55. Método, de proteção de células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado por o referido microambiente ser processado selecionado a partir de um grupo que consiste em resfriar o referido microambiente entre cerca de 0 ° C a cerca

14 / 19 de 37 ° C, resfriar o referido microambiente a cerca de 4 ° C, resfriar o referido microambiente a cerca de l0 ° C, resfriar o referido microambiente a cerca de l7 ° C, congelar o referido microambiente, congelar o referido microambiente a cerca de -20 ° C e congelar o referido microambiente a cerca de -l96 ° C.

56. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado por compreender ainda a etapa de liberar o referido microambiente a 20°C ou até 37°C.

57. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado por o referido passo de encapsular as referidas células biológicas compreender um passo selecionado de um grupo que consiste em fornecer uma estrutura micelular em torno das referidas células biológicas; fornecer uma camada lipídica em torno das referidas células biológicas, e fornecer uma monocamada lipídica em torno das referidas células biológicas e fornecer uma bicamada lipídica em torno das referidas células biológicas.

58. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado por o referido ambiente tipo gaiola compreender um encapsulamento das referidas células biológicas com um complexo tridimensional.

59. Método de proteção de células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado por o referido microambiente poder ser alcançado utilizando microfluídicos para criar o referido microambiente.

60. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado por o referido ambiente tipo gaiola compreender compostos selecionados de um grupo que consiste em lipídios, sais, proteínas, proteína BSA, fosfatidil serina, agarose e qualquer combinação dos mesmos.

15 / 19

61. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado por a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreender a etapa de adição de ácidos graxos à referida coleção de células biológicas.

62. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 61, caracterizado por a referida etapa de adição de ácidos graxos à referida coleção de células biológicas compreender a etapa de adição de cerca de 0,5% a cerca de 10% v/v de ácidos graxos à referida coleção de células biológicas.

63. Método para proteger células biológicas in vitro, como descrito na reivindicação 45, caracterizado por a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreender a etapa de adição de lipídios contendo cerca de 40% de ácido linolênico (18:3), cerca de 15% de linoléico (18:2) e cerca de 20% de palmito à referida coleção de células biológicas.

64. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado por a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreender a etapa de fornecer lipídios e células biológicas encapsulados juntos em uma estrutura micelular ou lipossômica.

65. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado por a referida etapa de criação do referido ambiente uniforme em torno das referidas células biológicas compreender a etapa de adicionar uma mistura de lipídios, ácidos graxos livres, fosfolipídios e colesterol de maneira ideal para um indivíduo tipo de célula e uma derivação de célula.

66. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por compreender ainda a

16 / 19 etapa de fornecer o referido meio de retenção em um kit de preservação para células biológicas.

67. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com a reivindicação 66, caracterizado por o referido kit de preservação compreender pelo menos dois componentes selecionados a partir de um antioxidante, um inibidor da fosfolipase e um agente antimicrobiano.

68. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com as reivindicações 5, 22, 28, 48, 60 e 64, caracterizado por o referido lipídeo ser selecionado a partir de um grupo que consiste em lipídios, ácidos graxos livres, fosfolipídios, proteínas, glicoproteínas e lipoproteínas.

69. Método para proteger células biológicas in vitro com continuidade sinérgica caracterizado por compreender as etapas de: colher uma coleção de células biológicas de uma fonte in vivo; preservar a referida coleção das referidas células biológicas com base em um regime de limitação de dano celular previsto e um uso predeterminado; proporcionar um meio de retenção aplicável ao referido regime de limitação de dano celular previsto e ao referido uso predeterminado; adicionar o referido meio de retenção à referida coleção das referidas células biológicas; transportar a referida coleção das referidas células biológicas no referido meio de retenção com base no referido regime previsto de limitação de danos às células e no referido uso predeterminado; receber a referida coleção das referidas células biológicas após o referido passo de transportar a referida coleção das referidas células biológicas no referido meio de retenção;

17 / 19 preparar as referidas células biológicas para serem tratadas hipotermicamente; tratar hipotermicamente as referidas células biológicas; aquecer as referidas células biológicas; e utilizando as referidas células biológicas para o referido uso predeterminado.

70. Método para proteger células biológicas in vitro, de acordo com as reivindicações 73, 92, 98, 118, 130 e 134, caracterizado por o referido lipídeo ser selecionado a partir de um grupo que consiste em lipídios, ácidos graxos livres, fosfolipídios, proteínas, glicoproteínas e lipoproteínas.

71. Método para maximizar a viabilidade de cada célula em uma coleção de células biológicas caracterizado por compreender as etapas de: colher uma coleção de células biológicas de uma fonte in vivo; estabelecer um ambiente uniforme em torno de cada célula biológica da referida coleção de células biológicas; e adicionar um inibidor de fosfolipase à referida coleção de células biológicas.

72. Método para preservar células biológicas colhidas, caracterizado por compreender as etapas de: colher uma coleção de células biológicas de uma fonte in vivo; criar um ambiente uniforme em torno de substancialmente cada célula biológica na referida coleção das referidas células biológicas; tratamento hipotermicamente as referidas células biológicas; aquecer as referidas células biológicas; e utilizar as referidas células biológicas.

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73. Composição de preservação de transporte biológico de células, caracterizada por compreender: uma coleção de células biológicas obtidas de uma fonte in vivo; um meio de retenção compreendendo pelo menos dois componentes selecionados a partir de um antioxidante, um inibidor de fosfolipase, agente estabilizador de membrana e um agente antimicrobiano, em que o referido meio de retenção está configurado para ser aplicado à referida coleção de células biológicas antes de transportar a referida coleção de células biológicas, e em que o referido meio de retenção é aplicável a um regime de limitação de dano celular previsto e a um uso predeterminado da referida coleção de células biológicas; e um meio de preparação de tratamento hipotérmico a ser aplicado à referida coleção de células biológicas após a referida etapa de transporte da referida coleção de células biológicas.

74. Composição de preservação de transporte biológico de células, caracterizada por compreender: uma coleção de células biológicas obtidas de uma fonte in vivo; um meio de retenção a ser aplicado à referida coleção de células biológicas antes de transportar a referida coleção de células biológicas, o referido meio de retenção aplicável a um regime antecipado de limitação de danos às células e um uso predeterminado da referida coleção de células biológicas; e um meio de preparação de tratamento hipotérmico a ser aplicado à referida coleção de células biológicas após a referida etapa de transporte da referida coleção de células biológicas.

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75. Composição de preservação biológica de células, caracterizada por compreender: uma coleção de células biológicas obtidas de uma fonte in vivo; um ambiente uniforme estabelecido em torno de cada célula biológica de uma coleção das referidas células biológicas; e um inibidor da fosfolipase.

76. Composição de preservação biológica de células, caracterizada por compreender: uma coleção de células biológicas obtidas de uma fonte in vivo; um meio de retenção a ser aplicado à referida coleção de células biológicas, o referido meio de retenção configurado para estabelecer um ambiente uniforme em torno de cada célula biológica; e um meio de preparação de tratamento hipotérmico a ser aplicado à referida coleção de células biológicas após a referida etapa de transporte da referida coleção de células biológicas.

77. Composição de preservação biológica de células, de acordo com a reivindicação 72, caracterizada por o referido agente antimicrobiano compreender um composto bacteriostático ou um composto bacteriocida.