BR112020006121B1 - Métodos para inibir a conversão de colina em trimetilamina (tma) - Google Patents

Abstract

A presente invenção se refere a um método para inibir a conversão de colina em trimetilamina (TMA) e reduzir o TMAO em um indivíduo através do fornecimento de uma composição que compreende um conjunto de compostos exposto na Fórmula (I).

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[0001] A invenção se refere, de modo geral, a materiais e métodos para inibir a produção de trimetilamina em um indivíduo.

ANTECEDENTES

[0002] A trimetilamina (TMA) e seu derivado, N- óxido de trimetilamina (TMAO), são metabólitos ligados a distúrbios como doença renal, diabetes mellitus, obesidade, trimetilaminúria e doença cardiovascular (DCV). A TMA é produzida no intestino por bactérias que são capazes de converter substratos incluindo, mas não se limitando a colina, em TMA. Há uma necessidade não atendida de compostos que inibam a produção de TMA por bactérias.

[0003] DCV é um termo geral que abrange uma série de condições que afetam o coração e vasos sanguíneos, incluindo aterosclerose, doença cardíaca coronariana, doença cerebrovascular, insuficiência cardíaca, cardiomiopatia, doença aterotrombótica, doença aorto-ilíaca e doença vascular periférica. A DCV está geralmente associada a condições que envolvem estreitamento, bloqueio, aneurisma ou dissecção de um ou mais vasos sanguíneos, ou trombose (formação de coágulo sanguíneo). As complicações associadas à DCV incluem, mas não se limitam a, infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, angina pectoris, síndrome coronária aguda, ataque isquêmico transitório, insuficiência cardíaca congestiva, aneurisma aórtico, fibrilação atrial ou flutter, arritmias ventriculares, anomalias de condução cardíaca, necessidade de revascularização e morte. A revascularização pode incluir, mas não se limita a angioplastia, stent, enxerto para desvio da artéria coronária, reparo ou substituição de anastomose vascular ou acesso como fístula arteriovenosa. As complicações associadas à doença aterotrombótica incluem, mas não se limitam a, infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, embolia pulmonar e trombose venosa profunda. De acordo com a Organização Mundial de Saúde, as DCVs são a principal causa de morte a nível mundial, com mais de 75% das mortes ocorrendo em países de baixo e médio rendimento. Folha Informativa da Organização Mundial de Saúde n° 317, versão atualizada em janeiro de 2015. A Organização Mundial de Saúde prevê que a diabetes seja a sétima causa principal da morte em 2030. Folha Informativa da Organização Mundial de Saúde n° 312, versão atualizada em janeiro de 2015. A prevenção e o gerenciamento de condições associadas à TMA e ao TMAO, incluindo DCV e diabetes, são uma preocupação de saúde pública importante.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0004] A divulgação se baseia, ao menos em parte, na descoberta de que os compostos da Fórmula (I) inibem o metabolismo da colina pela microbiota intestinal resultando em redução na formação de trimetilamina (TMA). A revelação fornece composições e métodos para, por exemplo, inibir a conversão de colina em TMA in vitro e in vivo, para melhorar ou manter a saúde cardiovascular, cerebrovascular ou periferovascular, e para melhorar ou prevenir uma condição associada à TMA e ao TMAO. Em certos aspectos, a invenção fornece um ou mais métodos para inibir a conversão de colina em TMA em um indivíduo.

[0005] Em determinados aspectos, a invenção fornece um ou mais métodos para reduzir a produção de TMAO, que compreende inibir a conversão de colina em TMA por uma bactéria, fornecendo um ou mais compostos conforme apresentados na Fórmula (I). A invenção fornece um método para inibir a conversão de colina em TMA em um indivíduo. O método compreende administrar ao indivíduo uma composição que compreende um composto apresentado na Fórmula (I):

Fórmula (I), sendo que: Y+ = N+; n é 1, 2 ou 3; R1 é selecionado a partir de

m é 0, 1 ou 2; W é CH2 ou O; R2 e R3 são independentemente selecionados a partir de C1 a C4 alquila ou unidos para fazer parte de um sistema de anel; R4 é H, C1 a C4 alquila ou está ausente quando o íon carboxilato existe como um composto; X- é um ânion farmaceuticamente aceitável; e incluindo quaisquer sais ou solvatos aceitáveis dos mesmos.

[0006] O composto da Fórmula (I) pode ser administrado em uma quantidade eficaz para inibir a conversão de colina em TMA e TMAO no indivíduo.

[0007] A invenção fornece adicionalmente um método para melhorar ou manter a saúde cardiovascular. Um método pode compreender administrar ao indivíduo uma composição que compreende um composto conforme apresentado na Fórmula (I) conforme descrito aqui em uma quantidade que melhora ou mantém a saúde cardiovascular. A invenção fornece também um método para melhorar uma condição associada à conversão de colina em trimetilamina (TMA) em um indivíduo. O método compreende administrar ao indivíduo uma composição que compreende um composto, conforme apresentado na Fórmula (I) conforme descrito aqui, em uma quantidade eficaz para melhorar a condição. Em algumas modalidades, a condição pode ser trimetilaminúria, função renal reduzida ou prejudicada, doença renal, doença renal crônica (CKD), doença renal em estágio terminal (ESRD), diabetes mellitus, obesidade ou doença cardiovascular como, angina, arritmia, aterosclerose, cardiomiopatia, insuficiência cardíaca congestiva, doença das artérias coronárias (CAD), doença da artéria carótida, endocardite, trombose coronária, infarto do miocárdio (MI), pressão arterial alta/hipertensão, hipercolesterolemia/hiperlipidemia, doença arterial periférica (PAD) ou acidente vascular cerebral. Em algumas modalidades, a condição é remodelagem ventricular adversa, disfunção sistólica ventricular, disfunção diastólica ventricular, disfunção cardíaca, arritmia ventricular ou doenças cardiovasculares ou aterosclerose devido à formação de biofilme bucal e à doença periodontal.

[0008] A invenção fornece adicionalmente os compostos da Fórmula (I) para uso na inibição da conversão de colina em TMA in vivo ou in vitro, para melhorar ou manter a saúde cardiovascular e para melhorar uma condição associada à conversão de colina em TMA; e o uso dos compostos da Fórmula (I) para inibir a conversão de colina em TMA in vivo ou in vitro, para melhorar ou manter a saúde cardiovascular e para melhorar uma condição associada à conversão de colina em TMA.

[0009] O sumário supracitado não se destina a definir todos os aspectos da invenção, e aspectos adicionais são descritos em outras seções, como na Descrição Detalhada.

Descrição detalhada da invenção

[0010] Os componentes das presentes composições são descritos nos parágrafos a seguir.

[0011] A presente invenção fornece um ou mais métodos de redução da produção de trimetilamina (TMA), que compreende: inibir a conversão de colina em TMA por uma bactéria com o uso de uma composição que compreende um composto apresentado na Fórmula (I). A presente invenção fornece também métodos de síntese para produzir uma série de derivados de ciclopropilamina selecionados, conforme exemplificados na Fórmula (I). Tais compostos podem ser usados para inibir a conversão de colina em TMA in vivo ou in vitro, ou inibir a produção de TMA por bactérias. Os compostos da Fórmula (I) podem ser administrados a um indivíduo em uma quantidade eficaz para inibir a produção de TMA e TMAO por bactérias no trato gastrointestinal de um indivíduo, por exemplo, a partir de substratos incluindo, mas não se limitando a, colina.

[0012] A TMA sintetizada por bactérias residentes no intestino de mamíferos é oxidada no fígado em N-óxido de trimetilamina (TMAO ou TMANO). Precursores exemplificadores de TMA incluem colina, betaína, fosfatidilcolina, fosfocolina, glicerofosfocolina, carnitina, L-carnitina, TMAO, esfingomielina e lecitina, dentre os quais muitos são derivados de fontes dietéticas como, por exemplo, ovos inteiros e fígado bovino. Essas fontes podem agir como substratos para bactérias que podem metabolizá-los em TMA. Sem se ater a um mecanismo ou via bioquímica específico, a conversão anaeróbica de colina para TMA é facilitada por um homólogo de enzima de radical glicila, colina trimetilamina liase (CutC). Craciun et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (2012), 109: 21.307 a 21.312. A redução da conversão de colina em TMA por bactérias no trato gastrointestinal de um indivíduo leva a uma redução na absorção de TMA do trato gastrointestinal, levando a uma redução subsequente no TMAO plasmático após a oxidação de TMA em TMAO pela enzima flavina mono-oxigenase 3 (FMO3) no fígado. Wang et al., Nature (2011), 472: 57 a 63. Os níveis mais baixos de TMAO plasmático estão relacionados a uma menor incidência de eventos cardiovasculares graves em seres humanos. Tang et al., NEJM (2013) 368: 1.575 a 1.584. A conversão de colina em TMA pode ser mediada por uma espécie de bactérias ou pode compreender um processo de múltiplas etapas envolvendo duas, três ou mais espécies de bactérias.

[0013] Conforme descrito anteriormente, a presente invenção se baseia, ao menos em parte, na descoberta de que os compostos da Fórmula (I) interferem no metabolismo da colina pela microbiota do trato gastrointestinal, resultando na redução da formação de TMA e N-óxido de trimetilamina (TMAO). A revelação fornece composições e métodos que, por exemplo, inibem a conversão de colina em TMA in vitro e in vivo, melhoram ou mantêm a saúde cardiovascular, cerebrovascular e periferovascular e melhoram ou evitam uma condição associada a TMA e a TMAO. Outras condições associadas com níveis aumentados de TMA podem incluir a produção de TMA por bactérias na vagina levando a odor vaginal, ou produção de TMA por bactérias no corpo levando a odor corporal, ou produção de TMA por bactérias na boca que levam ao mau hálito ou desenvolvimento de biofilme para tratamento bucal, ou durante a gravidez onde o terceiro trimestre e o período pós-parto são associados a um risco aumentado de trombose, baixando assim os níveis de TMA e TMAO, o que pode reduzir esse risco. A revelação fornece adicionalmente composições e métodos para aumentar a disponibilidade de colina no trato gastrointestinal de um indivíduo com uma condição onde o aumento da disponibilidade de colina seria benéfico, pela inibição do catabolismo da colina. Tal condição é durante a gravidez e após o parto, onde o aumento da disponibilidade de colina no trato intestinal da mãe pode promover o desenvolvimento do cérebro do feto e do recém nascido.

[0014] A conversão de colina em TMA por bactérias intestinais foi atribuída ao homólogo de enzima de radical glicila, colina trimetilamina liase CutC. Craciun et al. (2014) ACS Chem Biol 9: 1408-1413. Foi descrito que nem todos os micróbios intestinais contêm o gene de agrupamento incluindo CutC. Martinez-del Campo et al. (2015) mBio 6(2):e00042-15. doi:10.1128/mBio.00042-15. O aglomerado do gene cut contém um conjunto de genes que codificam a enzima de glicila radicular CutDCutC e uma proteína ativadora de glicila radcular, aglomerado de genes CutC/D. Craciun et al. (2012) PNAS 109:21307-21312.

[0015] Em contraste, a maioria das bactérias sequenciadas converte colina em glicina betaína (GB ou trimetilglicina) que age principalmente como um osmoprotetor. Adicionalmente, algumas bactérias podem converter colina em GB e então em glicina, que podem ser usadas como uma fonte de carbono e nitrogênio. Wargo (2013) Appl. Environ. Microbiol. 79:2112-2120. Pseudomonas aeruginosa é uma dessas espécies de bactérias que podem converter a colina em glicina por meio de GB, dimetil glicina (DMG) e sarcosina.

[0016] Todas as porcentagens e razões usadas a seguir são em peso da composição total, exceto onde indicado em contrário. Todas as porcentagens, razões e teores de ingredientes aqui referidos se baseiam na quantidade real do ingrediente e não incluem solventes, cargas ou outros materiais com os quais o ingrediente pode ser combinado como um produto comercialmente disponível, exceto onde indicado em contrário.

[0017] Todas as medições aqui mencionadas são realizadas a 25°C, exceto onde indicado em contrário.

[0018] Os componentes das presentes composições são descritos nos parágrafos a seguir.

[0019] Como usado aqui, "dose" refere-se a um volume de medicamento, como um medicamento líquido ou unidade de dosagem oral, contendo uma quantidade de um ativo farmacológico adequada para administração em uma única ocasião, de acordo com a boa prática médica. Uma dose pode ser administrada por via oral. Em um exemplo, uma dose pode ser um medicamento líquido e pode ser de cerca de 30 mL, em outro exemplo cerca de 25 mL, em outro exemplo cerca de 20 mL, em outro exemplo cerca de 15 mL, em outro exemplo cerca de 10 mL e outro exemplo cerca de 5 mL. Em outro exemplo, uma dose de medicamento líquido pode ter de cerca de 5 mL a cerca de 75 mL, em outro exemplo de cerca de 10 mL a cerca de 60 mL, em outro exemplo de cerca de 15 mL a cerca de 50 mL, em outro exemplo cerca de 25 mL a cerca de 40 mL e em outro exemplo, cerca de 28 mL a cerca de 35 mL. Em outro exemplo, a dose pode ser uma forma de dosagem sólida e pode ser de cerca de 25 mg a cerca de 5 g, em outro exemplo de cerca de 100 mg a cerca de 3 g, em outro exemplo de cerca de 250 mg a cerca de 2 g, em outro exemplo de cerca de 500 mg a cerca de 1,6 g e, em outro exemplo, de cerca de 750 mg a cerca de 1 g. Além disso, uma dose pode ser uma forma de dosagem sólida em que uma dose é cerca de 3 g ou uma dose pode ser de cerca de 1,6 g. A concentração de ingredientes ativos pode ser ajustada para fornecer as doses adequadas de ativos dado o tamanho da dose líquida ou sólida. Em certas modalidades, uma dose pode ser administrada cerca de a cada 4 horas, cerca de a cada 6 horas, cerca de a cada 8 horas, cerca de a cada 12 horas ou cerca de a cada 24 horas.

[0020] Como usado aqui, "medicamento" refere-se a composições que compreendem um composto da Fórmula (I), como produtos farmacêuticos, incluindo medicamentos com prescrição, medicamentos sem prescrição, medicamentos de venda liberada e combinações dos mesmos. Em alguns exemplos, o medicamento pode ser um suplemento dietário que pode conter vitaminas, minerais e suplementos (VMS) incluindo suplementos ou ingredientes, como componentes botânicos.

[0021] As composições de medicamento podem estar sob qualquer forma adequada, inclusive composições líquidas e formas de dosagem oral sólidas. Alguns exemplos não limitadores de composições líquidas podem incluir xaropes, bebidas, água suplementar, composições em espuma, composições em gel, partículas suspensas em uma formulação líquida, um sólido em uma gelatina ou espuma, solução salina e combinações dos mesmos. Alguns exemplos não limitadores de formas de dosagem oral sólidas podem incluir tabletes, cápsulas, comprimidos, sachês, formas de dosagem sublinguais, formas de dosagem bucais, cápsulas gelatinosas incluindo e outras cápsulas recheadas com líquido, formas de dosagem solúveis incluindo tiras solúveis, filmes, gomas incluindo uma goma com o centro recheado, balas incluindo uma bala com o centro recheado, pastilhas, tabletes com o centro recheado, pó, grânulos, péletes, microesferas, nanoesferas, gotas ou drágeas, e combinações dos mesmos. Os tabletes podem incluir tabletes comprimidos, tabletes mastigáveis, tabletes solúveis e similares. Em alguns exemplos, o medicamento pode ser aplicado à pele, em uma pomada, como uma pomada à base de geleia de petróleo. Em alguns exemplos, o medicamento pode ser fornecido em um dispositivo de aplicação. Em outros exemplos, o medicamento pode ser inalado, como um aspersor nasal ou inalador. Em ainda outros exemplos, o medicamento pode estar em uma bebida, como uma bebida quente. Em mais exemplos, o medicamento pode conter um ativo farmacêutico.

[0022] O medicamento pode estar sob uma forma que é diretamente aplicável à boca, garganta ou pele. Em algumas modalidades, as composições de medicamento podem ser aplicadas por um dispositivo de aplicação selecionado dentre conta gotas, bombas, aspersores, frasco conta gotas, solução salina aplicada através da passagem nasal, copo, frasco, tubo, aspersores pressurizados, atomizadores, dispositivos para inalação de ar, sachês compressíveis, injeções, cartelas blister e outras embalagens e equipamentos, e combinações dos mesmos. Os dispositivos de aspersão, atomização e inalação de ar podem ser associados a fontes de alimentação elétricas ou à bateria.

[0023] Conforme usado no presente documento, o termo "indivíduo" inclui tanto seres humanos como outros tipos de mamíferos que compartilham a via de TMAO, como animais domésticos, incluindo, mas não se limitando a, cães domésticos (caninos), gatos (felinos), cavalos, vacas, furões, coelhos, porcos, ratos, camundongos, gerbos, hamsters, cavalos e similares.

[0024] Uma ampla variedade de indivíduos pode desejar reduzir o nível de TMA produzido pelas bactérias no trato digestivo. Por exemplo, os indivíduos diagnosticados com doença cardiovascular podem ser instruídos por um médico a tomar fármacos com prescrição ou efetuar alterações de estilo de vida a fim de modular os níveis de colesterol sanguíneo para reduzir o risco de eventos cardiovasculares graves. Outros indivíduos não diagnosticados previamente com doença cardiovascular, porém que desejam melhorar ou manter a saúde cardiovascular, podem também desejar reduzir o nível de TMA produzido pelas bactérias do trato digestivo. Conforme adicionalmente descrito neste documento, uma redução em TMA (e, por conseguinte, de TMAO) é alcançada pelas composições descritas aqui, que podem incluir, por exemplo, um suplemento dietário que compreende os compostos da Fórmula (I).

[0025] A revelação inclui um método para inibir a conversão de colina em TMA, um método para melhorar a saúde cardiovascular e um método para melhorar uma condição associada à conversão de colina em TMA que compreende administrar ao indivíduo uma composição compreendendo um composto da Fórmula (I). As características das composições e dos métodos são descritas a seguir. Os títulos da seção são para facilidade de leitura e não se destinam a ser limitadores em si. O documento inteiro tem por objetivo estar relacionado como uma descrição unificada, e deve-se compreender que todas as combinações de características aqui descritas são contempladas, mesmo caso a combinação de recursos não seja encontrada em conjunto na mesma frase, parágrafo ou seção deste documento. Será compreendido que qualquer recurso dos métodos ou compostos descritos aqui pode ser apagado, combinado ou substituído por, no todo ou em parte, qualquer outro recurso descrito na presente invenção.

Compostos

[0026] Os métodos da presente invenção podem compreender administrar ao indivíduo uma composição que compreende um composto apresentado na Fórmula (I):

Fórmula (I), sendo que: Y+ = N+; n é 1, 2 ou 3; R1 é selecionado a partir de

m é 0, 1 ou 2; W é CH2 ou O; R2 e R3 são independentemente selecionados a partir de C1 a C4 alquila, ou unidos para fazer parte de um sistema de anel; R4 é H, C1 a C4 alquila ou está ausente quando o íon carboxilato existe como um composto; X- é um ânion farmaceuticamente aceitável; e incluindo quaisquer sais e solvatos aceitáveis dos mesmos.

[0027] Em certas modalidades, R1 é selecionado a partir de alquinila, carboximetila, alquil carboximetila, acrílico e vinila, e X- é selecionado dentre cloreto, brometo ou iodeto.

[0028] Em várias modalidades, R2 ou R3 são C1 a C4 alquila, alquenila, alquinila.

[0029] n é selecionado a partir de 1, 2 ou 3.

[0030] X- é um ânion farmaceuticamente aceitável de preferência selecionado dentre cloreto, brometo ou iodeto.

[0031] Em certas modalidades, o composto pode ser selecionado do grupo que consiste em iodeto de ciclopropano dimetil etanolamina, brometo de N-alil-N,N- dimetilciclopropanamínio, brometo de N,N-dimetil-N-(prop-2- in-1-il)ciclopropanamínio, brometo de N-(2-metóxi-2- oxoetil)-N,N-dimetilciclopropanamínio, brometo de N-(2- (metóxi oxicarbonil)alil)-N,N-dimetilciclopropanamínio, brometo de N-(3-metóxi-2,3-dioxopropil)-N,N- dimetilciclopropanamínio, brometo de N-(2-cianoalil)-N,N- dimetilciclopropanamínio, iodeto de N-(2-amino2-oxoetil)- N,N-dimetilciclopropanamínio, iodeto de N-(6-etóxi-6-oxo- hexil)-N,N-dimetilciclopropanamínio e brometo de 4- ciclopropil-4-(prop-2-in-1-il)morfolin-4-io, e quaisquer sais aceitáveis e solvatos aceitáveis dos mesmos.

[0032] Em certas modalidades, o composto pode ser selecionado do grupo que consiste em ciclopropano dimetil etanolamina, N-alil-N,N-dimetilciclopropanamínio, N,N- dimetil-N-(prop-2-in-1-il)ciclopropanamínio, N-(2-metóxi- 2-oxoetil)-N,N-dimetilciclopropanamínio ou N-(2- alil(metoxicarbonil))-N,N-dimetilciclopropanamínio e um ânion farmaceuticamente aceitável, e sais e solvatos dos mesmos.

[0033] O composto é administrado em uma quantidade eficaz para alcançar o efeito desejado, por exemplo, inibir a conversão de colina em TMA, melhorar ou manter a saúde cardiovascular ou melhorar uma condição associada à conversão de colina em TMA.

[0034] A invenção fornece adicionalmente métodos para sintetizar derivados de ciclopropilamina selecionados como representantes da Fórmula (I). Tais derivados de compostos podem também ser usados para inibir a produção de TMA por uma bactéria ou para inibir a conversão de colina em TMA in vivo ou in vitro, ao fornecer uma composição que compreende uma composição conforme apresentada na Fórmula (I).

[0035] Os compostos da Fórmula (I) podem ser sintetizados com o uso do Esquema geral 1, mostrado abaixo.

em que X- é um ânion farmaceuticamente aceitável e n é 1, 2 ou 3 e inclui quaisquer sais e solvatos aceitáveis do mesmo; que compreende as etapas de reagir o Composto A:

com um composto da Estrutura B:

sendo que LG é um grupo de saída adequado conhecido pelo versado na técnica; para formar um composto da Fórmula (I).

[0036] Os compostos da Fórmula (I) podem ser alternativamente sintetizados com o uso do Esquema geral 2, mostrado abaixo.

Fórmula (I), em que X- é um ânion farmaceuticamente aceitável e n é 1, 2 ou 3 e inclui quaisquer sais e solvatos aceitáveis dos mesmos; que compreende as etapas de reagir o Composto C:

Composto C com um composto da Estrutura D:

Estrutura D sendo que LG é um grupo de saída adequado conhecido pelo versado na técnica; para formar um composto da Fórmula (I).

[0037] X- pode ser um ânion capaz de formar um sal com um grupo amônio. Em certas modalidades, X- é um ânion farmaceuticamente aceitável selecionado dentre cloreto, brometo, iodeto, fosfato e sais de sulfato. Os sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitável adicionais incluem, por exemplo, succinato, maleato, tartarato, citrato, glicolato e trifluorometanossulfonato ou triflato, dessa forma, X- pode ser selecionado dentre succinato, maleato, tartarato, citrato e glicolato. X- é, de preferência, um cloreto, brometo, iodeto, trifluorometanossulfonato ou triflato na forma de sal. Quando o composto de interesse existe como um sulfóxido, então X- está ausente. Quando o composto de interesse existe como um carboxilato, então X- está ausente.

[0038] "Alquil a" refere-se a grupos hidrocarboneto saturados ramificados e de cadeia linear que contêm de 1 a 30 átomos de carbono (isto é, C1 a C30), por exemplo, de 1 a 20 átomos de carbono (isto é, C1 a C20) ou de 1 a 10 átomos de carbono (isto é, C1 a C10). Em várias modalidades, os grupos alquila da Fórmula (I) são independentemente selecionados a partir de C1 a C4 alquilas, isto é, grupos alquila que têm um número de átomos de carbono que abrange toda a faixa (isto é, de 1 a cerca de 4 átomos de carbono), assim como todos os subgrupos (por exemplo, de 1 a 2, de 1 a 3, de 1 a 4, de 2 a 3, de 2 a 4, de 3 a 4, 1, 2, 3 e 4 átomos de carbono). Alguns exemplos não limitadores de grupos alquila incluem alila, metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, sec-butil(2-metilpropila), t- butil(1,1-dimetiletila) e propargila. Exceto onde indicado em contrário, um grupo alquila pode ser um grupo alquila não substituído ou um grupo alquila substituído. Os grupos alquila podem também ser substituídos, por exemplo, por um ou mais dentre hidróxi (OH), alcóxi, carbóxi, cicloalquila, heterocicloalquila e halo.

[0039] O termo "heteroalquila" é definido de modo igual como cicloalquila, exceto pelo fato de que a cadeia de hidrocarboneto ou a cadeia ramificada contém um a três heteroátomos independentemente selecionados a partir de oxigênio, nitrogênio ou enxofre. Os termos "heterocicloalquila" ou "heterocíclica" são definidos de modo similar como cicloalquila, exceto pelo fato de que o anel contém um a três heteroátomos independentemente selecionados a partir de oxigênio, nitrogênio ou enxofre. Alguns exemplos não limitadores de grupos heterocicloalquila incluem piperdina, tetraidrofurano, tetraidropirano, 4H- pirano, di-hidrofurano, morfolina, tiofeno, 1,4-dioxano, furano, piridina, pirrol, pirrolidina, pirazina, pirano, oxazol, oxazina, tiazina, pirimidina e similares. Os grupos cicloalquila e heterocicloalquila podem ser sistemas de anel saturados ou parcialmente insaturados opcionalmente substituídos, por exemplo, por um a três grupos, independentemente selecionados de alquila, alquenila, OH, C(O)NH2, NH2, oxo (=O), arila, haloalquila, halo e alcóxi. Os grupos heterocicloalquila podem ser adicionalmente N- substituídos com alquila, hidroxialquila, alcoxiarila, alquilenoarila e alquileno-heteroarila.

[0040] Os termos "cicloalquila" ou "carbocíclico" se referem a um grupo hidrocarboneto cíclico alifático contendo de 3 a 8 átomos de carbono (por exemplo, de 3 a 5, de 5 a 8, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 átomos de carbono). Alguns exemplos não limitadores de grupos cicloalquila incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila e ciclo-octila. Exceto onde indicado em contrário, um grupo cicloalquila pode ser um grupo cicloalquila não substituído ou um grupo cicloalquila substituído.

[0041] O termo "hidróxi" ou "hidroxila" se refere a um grupo "-OH". O termo "amino" ou "amina" se refere a um grupo -NH2 ou a um grupo -NH-, sendo que cada hidrogênio na Fórmula (I) pode ser substituído por um grupo alquila, cicloalquila, arila, heteroarila ou heterocicloalquila. O termo "amina" inclui aminas cíclicas opcionalmente substituídas por um ou mais heteroátomos adicionais. O termo "carbóxi" ou "carboxila" se refere a um grupo "-COOH". O termo "tiol" ou "sulfidrila" se refere a um grupo "-SH". O termo "ciano" se refere a um grupo - C=N também designado com -CN.

[0042] Uma alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, cicloalquenila, arila, heteroarila ou alcoxila "substituída" se refere a uma alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, cicloalquenila, arila, heteroarila ou alcoxila que tem ao menos um radical de hidrogênio que é substituído por um radical não hidrogênio (isto é, um substituinte). Exemplos de radicais não hidrogênio (ou substituintes) incluem, mas não se limitam a, alquila, cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, éter, arila, heteroarila, heterocicloalquila, hidroxila, óxi (ou oxo), alcoxila, éster, tioéster, acila, carboxila, ciano, nitro, amino, amido ou enxofre. Quando um grupo alquila substituído inclui mais de um radical não hidrogênio, os substituintes podem estar ligados ao mesmo carbono ou a dois ou mais átomos de carbono diferentes.

[0043] Os sais fisiologicamente aceitáveis de ciclopropilamina são contemplados e podem ser formados pela reação de uma ciclopropilamina com um agente alquilante que contém um grupo de saída. Os grupos de saída comumente empregados em reações de alquilação com ciclopropilamina são conhecidos na técnica. Os grupos de saída como, mas não se limitando aos conhecidos na técnica, incluem os haletos (cloro, bromo, iodo, etc.) e ésteres de sulfonato de álcoois (tosilato, mesilato, cumenessulfonato, triflato etc.). Os sais fisiologicamente aceitáveis podem ser formados diretamente da reação de alquilação de enxofre com um agente alquilante ou podem ser preparados por um processo de troca iônica. Os sais fisiologicamente aceitáveis incluem, mas não se limitam a, haletos de ciclopropilamina, fosfatos, carboxilatos e sulfonatos.

[0044] Sais como sais fisiologicamente aceitáveis dos compostos revelados são contemplados e podem ser preparados reagindo-se a base ou ácido adequado com um equivalente estequiométrico do composto. Os ácidos comumente empregados para formar sais fisiologicamente aceitáveis incluem ácidos inorgânicos como bissulfeto de hidrogênio, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido iodídrico, ácido sulfúrico e ácido fosfônico, assim como ácidos orgânicos, como ácido para-toluenossulfônico, ácido salicílico, ácido tartárico, ácido bitartárico, ácido ascórbico, ácido maleico, ácido besílico, ácido fumárico, ácido glucônico, ácido glucurônico, ácido fórmico, ácido glutâmico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido benzenossulfônico, ácido cumenessulfônico, ácido lático, ácido oxálico, ácido para-bromofenilssulfônico, ácido carbônico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido benzoico e ácido acético assim como ácidos inorgânicos e orgânicos relacionados. Os sais fisiologicamente aceitáveis incluem sulfato, pirossulfato, bissulfato, sulfito, bissulfito, fosfato, mono-hidrogenofosfato, di-hidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, cloreto, brometo, iodeto, trifluorometanossulfonato ou triflato, acetato, propionato, decanoato, caprilato, acrilato, formiato, isobutirato, caprato, heptanoato, propiolato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, butina- 1,4-dioato, hexina-1,6-dioato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, ftalato, tereftalato, sulfonato, sulfonato de xileno, fenilacetato, fenilpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato, O-hidroxibutirato, glicolato, maleato, tartrato, bitartrato, metanossulfonato, propanossulfonato, naftaleno-1-sulfonato, naftaleno-2-sulfonato, mandelato e outros sais. Os sais de adição de ácido fisiologicamente aceitáveis incluem, por exemplo, aqueles formados com ácidos minerais como ácido clorídrico e ácido bromídrico, e aqueles formados com ácidos orgânicos, como ácido maleico.

[0045] Os sais de adição de base fisiologicamente aceitáveis podem ser formados com metais ou aminas, como metais alcalinos e alcalino-terrosos ou aminas orgânicas. Os sais fisiologicamente aceitáveis dos compostos podem também ser preparados com um cátion fisiologicamente aceitável. Os cátions fisiologicamente aceitáveis que podem ser usados são bem conhecidos na técnica e incluem cátions alcalinos, alcalino-terrosos, de amônio e de amônio quaternário. Os carbonatos ou carbonatos de hidrogênio também são opções nesse sentido. Os exemplos de metais usados como cátions são sódio, potássio, magnésio, amônio, cálcio, férrico e similares. Exemplos de aminas que podem ser usadas incluem, mas não se limitam a, isopropilamina, histidina, N,N'- dibenziletilenodiamina, cloroprocaína, dietanolamina, diciclo-hexilamina, etilenodiamina, N-metilglucamina e procaína.

[0046] Em outra modalidade, o composto é uma variante de isótopo estável, por exemplo nas quais deutério é substituído por um ou mais dos hidrogênios.

[0047] Em várias modalidades, o composto da Fórmula (I) demonstra um IC50 de 1x10-3 ou menos, 5x10-3 ou menos, 1x10-4 ou menos, 5x10-4 ou menos, 1x10-5 ou menos, 5x10-5 ou menos, ou 1x10-6 ou menos, ou 1x10-7 ou menos ou 1x10-8 ou menos, ou 1x10 -9 ou menos, ou 1x10-10 ou menos ou 1x10-11 ou menos ou 1x10-12 ou menos, ou entre 1x10-9 e 1x10-3, ou entre 1x10-12 e 1x10-9, ou entre 1x10-9 e 1x10-6, ou entre 1x10-8 e 1x10-6, ou entre 1x10-6 e 1x10-3, entre 1x10-6 e 1x10-4, entre 1x10-6 e 1x10-5, entre 1x10-5 e 1x10-3, ou entre 1x10-4 e 1x10-3, ou entre 1,7x10-11 e 1x10-7, (50% de inibição observada da formação de TMA (ou TMAO) a partir de colina; mol/L) nos ensaios descritos no EXEMPLO 2 ou EXEMPLO 5. Em várias modalidades, o composto da Fórmula (I) demonstra um IC50 entre 1x10-11 e 1x10-7, ou entre 1x10-8 e 1x10-3, ou entre 1,2x10-6 e 2x10-3, ou entre 1x10-6 e 1x10-4 (50% de inibição observada de formação de TMA a partir de colina; mol/L) conforme medido nos ensaios descritos no EXEMPLO 2 ou EXEMPLO 5.

[0048] Em várias modalidades, o composto da Fórmula (I) demonstra um IC50 de 1x10-3 ou menos, 5x10-3 ou menos, 1x10-4 ou menos, 5x10-4 ou menos, 1x10-5 ou menos, 5x10-5 ou menos, ou 1x10-6 ou menos, ou 1x10-7 ou menos ou 1x10-8 ou menos, ou 1x10 -9 ou menos, ou 1x10-10 ou menos ou 1x10-11 ou menos ou 1x10-12 ou menos, ou entre 1x10-9 e 1x10-3, ou entre 1x10-12 e 1x10-9, ou entre 1x10-9 e 1x10-6, ou entre 1x10-8 e 1x10-6, ou entre 1x10-6 e 1x10-3, entre 1x10-6 e 1x10-4, entre 1x10-6 e 1x10-5, entre 1x10-5 e 1x10-3, ou entre 1x10-4 e 1x10-3, ou entre 1,7x10-11 e 1x10-7, (50% de inibição observada da formação de TMA (ou TMAO) a partir de colina; mol/L) nos ensaios descritos no EXEMPLO 6. Em várias modalidades, o composto da Fórmula (I) demonstra um IC50 entre 1x10-11 e 1x10-7, ou entre 1x10-8 e 1x10-3, ou entre 1,2x10-6 e 2x10-3, ou entre 1x10-6 e 1x10-4 (50% de inibição observada de formação de TMA a partir de colina; mg/kg) conforme medido nos ensaios descritos no EXEMPLO 6.

[0049] A invenção inclui um método de inibição da conversão de colina em TMA em um indivíduo que pode compreender a administração, a um indivíduo, de uma composição que compreende um composto apresentado na Fórmula (I), conforme descrito anteriormente. Em certas modalidades, conforme descrito aqui, um indivíduo pode precisar de níveis de TMA reduzidos, aprimoramento da saúde cardiovascular e similares. Um indivíduo pode exibir um nível elevado de TMA ou um metabólito do mesmo (por exemplo, TMAO, dimetilamina (DMA) ou monometilamina ou (MMA)) antes da administração. Em várias modalidades, um indivíduo sofre de doença cardiovascular, ingere uma dieta com alto teor de colina ou exibe um ou mais fatores de risco CVD (por exemplo, tabagismo, estresse, colesterol total elevado, colesterol LDL alto, colesterol HDL baixo, idade, hipertensão, história familiar de CVD, obesidade, pré-diabetes, diabetes ou similares).

[0050] Um método de inibição da conversão de colina em TMA in vitro também é contemplado. Por exemplo, um método pode compreender o contato de uma bactéria, como uma bactéria que é representada na microflora do trato gastrointestinal, ou um lisado bacteriano que metaboliza colina para produzir TMA com um composto da Fórmula (I), conforme descrito anteriormente. Em várias modalidades, uma bactéria pode ser selecionada dentre Proteus mirabilis, Desulfovibrio alaskensis, Clostridium ljungdahlii, C. scindens, C. aldenense, C. aminobutyricum, Collinsella tanakaei, Anaerococcus vaginalis, Streptococcus dysgalactiae, Desultitobacterium hafniense, Klebsiella variicola, K. pneumonia, Proteus penneri, Eggerthella lenta, Edwardsiella tarda, Escherichia coli, E. fergussonii, ou uma combinação das mesmas. Em certas modalidades, a bactéria pode ser uma que expressa o agrupamento de genes cutC/D. A descrição fornece adicionalmente um método de identificação de um composto que inibe a produção de TMA. O método compreende o contato de uma bactéria, como uma bactéria que faz parte da microflora do trato gastrointestinal, ou um lisado bacteriano que metaboliza colina para produzir TMA com um composto candidato, como um composto da Fórmula (I), e detectar TMA (ou um metabólito da mesma). Em certas modalidades, o nível de TMA (ou metabólito do mesmo) produzido pela bactéria em contato com o composto candidato é comparado ao (a) nível de TMA produzido por uma bactéria ou lisado não colocado em contato com um composto candidato ou inibidor de TMA conhecido ou ao (b) nível de TMA produzido pela bactéria antes do contato com o composto candidato. Uma redução no nível de TMA produzido pela bactéria ou lisado indica que o composto candidato inibe a conversão de colina em TMA.

[0051] Um método de inibição da conversão de colina em TMA in vitro também é contemplado. O método compreende colocar as bactérias ou lisados bacterianos em contato com um ou mais compostos da Fórmula (I). Em várias modalidades, as bactérias compreendem uma única espécie ou cepa bacteriana ou contêm uma mistura de duas ou mais (por exemplo, três, quatro, cinco ou mais) espécies bacterianas ou cepas bacterianas diferentes. De modo similar, um lisado bacteriano pode ser produzido a partir de uma única espécie ou cepa bacteriana, ou de uma mistura de duas ou mais (por exemplo, três, quatro, cinco ou mais) espécies bacterianas ou cepas bacterianas diferentes.

[0052] Será entendido que "inibir a conversão de colina em TMA" não exige a eliminação completa da produção de TMA por meio do metabolismo de colina. Qualquer redução na formação de TMA a partir de colina ou um metabólito relacionado a colina como um precursor é contemplada, por exemplo, pelo menos 1%, pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou 100% de redução; e incluindo também de cerca de 1% a cerca de 100%, de cerca de 10% a cerca de 90%, de cerca de 20% a cerca de 80%, de cerca de 30% a cerca de 70%, de cerca de 40% a cerca de 60%, e quaisquer combinações dos mesmos.

[0053] Em várias modalidades, a inibição da conversão de colina em TMA pelos compostos da Fórmula (I) não é provocada por um mecanismo de ação antibiótica, por exemplo não é provocada por um mecanismo de ação antibacteriana ou por um mecanismo de ação que reduz a viabilidade celular para 10% ou mais baixa, quando comparada a veículo de controle.

[0054] Em uma modalidade da invenção, a quantidade de composto necessária para fornecer 50% de inibição da conversão de colina em TMA é menor que a quantidade de composto que reduz a viabilidade celular para 10% ou mais baixa, quando comparada ao veículo de controle.

[0055] Qualquer método adequado para medir TMA in vitro ou in vivo pode ser usado no contexto da invenção. TMA, metabólitos de TMA (incluindo TMAO, DMA ou MMA), isótopos estáveis de TMA (como, TMA marcado com deutério, como d3-, d6- ou d9-TMA), isótopos estáveis de TMAO (como, TMAO marcado com deutério, como d3-, d6- ou d9-TMAO), isótopos estáveis de DMA (como, DMA marcado com deutério, como d3- ou d6-DMA), isótopos estáveis de MMA (como, MMA marcado com deutério, como d3-MMA) ou colina (incluindo isótopos estáveis de colina, por exemplo, d9- colina) podem ser avaliados quantitativamente ou qualitativamente. Os métodos exemplificadores de detecção e quantificação de TMA são descritos, por exemplo, na publicação US n° 2010/00285517, cuja descrição está aqui incorporada a título de referência, em sua totalidade. Por exemplo, os níveis de TMA (ou N-óxido de trimetilamina (TMAO), DMA ou MMA) ou colina são opcionalmente medidos por meio de espectrometria de massa, espectroscopia ultravioleta ou espectroscopia por ressonância magnética nuclear. Os espectrômetros de massa incluem uma fonte ionizante (como, ionização por eletroaspersão), um analisador para separar os íons formados na fonte de ionização de acordo com as razões entre massa e carga (m/z) dos mesmos e um detector para os íons carregados. Na espectrometria de massa em tandem, estão incluídos dois ou mais analisadores. Tais métodos são padrão na técnica e incluem, por exemplo, HPLC com ionização por eletroaspersão (ESI) em linha e espectrometria de massa em tandem.

[0056] Em várias modalidades, a TMA ou TMAO são medidas em uma amostra biológica de um indivíduo. As amostras biológicas incluem, mas não se limitam a, sangue total, plasma, soro, urina, fezes, saliva, suor, fluido vaginal, fluido ou tecido crevicular gengival. A amostra pode ser coletada com o uso de qualquer prática clinicamente aceitável e, caso desejado, diluída em uma solução tampão adequada, heparinizada, concentrada ou fracionada. Pode-se usar qualquer uma dentre várias soluções tampão aquosas em pH fisiológico, como fosfato, Tris ou similares. Tampões acidificados podem também ser usados. Por exemplo, o pH final após a adição do tampão à amostra pode, opcionalmente, estar entre pH 1 e pH 6 ou entre pH 1,5 e pH 3,0.

[0057] Além disso, os níveis de TMA (ou um metabólito ou isótopo estável da mesma) ou colina na amostra biológica podem ser comparados a um valor de controle. O valor de controle utilizado dependerá da modalidade da invenção. Em certas modalidades, o valor de controle pode ser o nível de TMA ou TMAO produzido no indivíduo (ou pela bactéria) antes da administração ou exposição a um composto da Fórmula (I). Além disso, o valor de controle pode se basear em níveis medidos em amostras comparáveis obtidas de um grupo de referência como um grupo de indivíduos da população geral, indivíduos diagnosticados com uma CVD ou outra condição associada à TMA, indivíduos não previamente diagnosticados com uma condição associada à TMA, não fumantes e similares, que não foram expostos a um composto da Fórmula (I). Os níveis de TMA ou TMAO ou colina podem ser comparados a um único valor de controle ou a uma faixa de valores de controle. Um indivíduo é opcionalmente identificado como tendo um nível elevado de TMA antes da administração comparando-se a quantidade de TMA em uma amostra biológica do indivíduo com um valor de controle.

[0058] A invenção fornece adicionalmente um método para melhorar a saúde cardiovascular de um indivíduo. O método compreende administrar ao indivíduo uma composição que compreende um composto estabelecido na Fórmula (I), conforme descrito acima sob o subtítulo "Compostos", em uma quantidade eficaz para melhorar a saúde cardiovascular. A saúde cardiovascular é avaliada através do teste da elasticidade arterial, pressão arterial, índice tornozelo-braquial, eletrocardiograma, ultrassom ventricular, função plaquetária (por exemplo, agregação plaquetária) e testes de sangue/de urina para medir, por exemplo, colesterol, excreção de albumina, proteína C reativa ou concentração de peptídeo do tipo B plasmático (BNP). Em vários aspectos da invenção, a administração do composto da Fórmula (I), otimiza ou mantém um ou mais dos resultados do ensaio dentro de faixas normais. As faixas normais de resultados de cada teste são conhecidas na técnica. A melhoria da saúde cardiovascular é, em algumas modalidades, marcada por uma redução na circulação de níveis de colesterol total, redução na circulação de lipoproteínas de baixa densidade (LDL), redução na circulação de triglicerídeos ou redução na pressão arterial.

[0059] A invenção inclui também um método para melhorar uma condição associada à conversão de colina em TMA em um indivíduo que precisa do mesmo. O método compreende administrar a um indivíduo uma composição que compreende um composto de Fórmula (I), em uma quantidade eficaz para melhorar a condição. "Melhorar uma condição" se refere a qualquer redução na gravidade ou início dos sintomas associados a um distúrbio causado, ao menos em parte, pela TMA. O versado na técnica compreenderá que qualquer grau de proteção contra, ou melhora de, um distúrbio ou sintoma relacionado à TMA associado ao mesmo é benéfico para um indivíduo, como um ser humano. A qualidade de vida de um indivíduo é melhorada reduzindo-se para qualquer grau a gravidade dos sintomas em um indivíduo ou atrasando o aparecimento dos sintomas. Consequentemente, um método em um aspecto é realizado o mais rápido possível após ter sido determinado que um indivíduo está em risco de desenvolver um distúrbio relacionado à TMA ou logo que possível após ser detectado um distúrbio relacionado à TMA.

[0060] A condição associada à conversão de colina em trimetilamina é, em vários aspectos da invenção, uma doença cardiovascular, trimetilaminúria, função renal reduzida ou prejudicada, doença renal, doença renal crônica, doença renal em estágio terminal, trimetilaminúria, obesidade ou diabetes mellitus. O termo "doença cardiovascular" (DCV) é usado na técnica em referência a condições que afetam o coração, válvulas e vasculatura cardíaca (como, artérias e veias) do corpo e engloba doenças e condições que incluem, mas não se limitam a, arteriosclerose, aterosclerose, infarto do miocárdio, síndrome coronariana aguda, angina, insuficiência cardíaca congestiva, aneurisma da aorta, dissecção aórtica, aneurisma ilíaco ou femoral, embolia pulmonar, hipertensão primária, fibrilação atrial, acidente vascular cerebral, ataque isquêmico transitório, disfunção sistólica, disfunção diastólica, miocardite, taquicardia atrial, fibrilação ventricular, endocardite, arteriopatia, vasculite, placa aterosclerótica, placa vulnerável, síndrome coronariana aguda, ataque isquêmico agudo, morte súbita cardíaca, doença vascular periférica, doença arterial coronariana (DAC), doença arterial periférica (DAP), doença cerebrovascular, remodelagem ventricular adversa, disfunção sistólica ventricular, disfunção diastólica ventricular, disfunção cardíaca, arritmia ventricular e similares.

[0061] Uma condição pode ser aterosclerose. A aterosclerose envolve a formação de placas ateromatosas que levam ao estreitamento ("estenose") da vasculatura, que pode, por fim, levar à oclusão ou ruptura parcial ou completa (aneurisma) do vaso, insuficiência cardíaca, dissecção aórtica e eventos isquêmicos como infarto do miocárdio e acidente vascular cerebral. Em várias modalidades não limitadoras, um método da invenção inibe, reduz ou reverte (no todo ou em parte) o início ou a progressão de aterosclerose (por exemplo, reduzindo ou impedindo o endurecimento ou espessamento das artérias, a formação de placa, lesão do endotélio ou inflamação arterial).

[0062] Uma condição pode ser trimetilaminurina. A trimetilaminúria (TMAU) é uma condição caracterizada por uma incapacidade de indivíduos para converter TMA em TMAO, sendo que indivíduos afetados podem ter um odor corporal semelhante a peixe presente na urina, suor ou respiração dos mesmos. (Yamazaki et al. Life Sciences (2004) 74: 2.739 a 2.747). Tais indivíduos podem se beneficiar de uma redução no metabolismo de substratos, incluindo mas não se limita a colina, para TMA por bactérias no trato gastrointestinal. Os indivíduos com TMAU ou aqueles que desejam reduzir seus níveis de TMA e TMAO podem também consumir carvão vegetal ativado ou clorofilina cúprica, que atuam como agentes sequestrantes, por exemplo, para tornar a TMA indisponível para transferência à corrente sanguínea de um indivíduo. Tais agentes sequestrantes podem adsorver a TMA, que é então excretada do trato digestivo juntamente com o agente sequestrante.

[0063] A invenção fornece adicionalmente os compostos da Fórmula (I), para uso na inibição da conversão de colina em TMA in vivo ou in vitro, para melhorar ou manter uma condição associada à conversão de colina em TMA; e o uso dos compostos da Fórmula (I) para inibir a conversão de colina em TMA in vivo ou in vitro, para melhorar ou manter uma condição associada à conversão de colina em TMA. Conforme descrito anteriormente, a presente invenção se baseia, ao menos em parte, na descoberta de que os compostos da Fórmula (I) inibem o metabolismo de colina e carnitina pela microbiota do trato gastrointestinal resultando na redução na formação de trimetilamina (TMA) e N-óxido de trimetilamina (TMAO). A revelação fornece composições e métodos que, por exemplo, inibem a conversão de colina em TMA in vitro e in vivo, melhoram ou mantêm a saúde cardiovascular, cerebrovascular e periferovascular e melhoram ou evitam uma condição associada a TMA e a TMAO.

[0064] Em várias modalidades, a administração do composto da Fórmula (I), resulta em níveis reduzidos de TMA ou TMAO, níveis reduzidos de colesterol total, níveis reduzidos de LDL, níveis aumentados de HDL, níveis reduzidos de triglicerídeos ou níveis normalizados de outros biomarcadores associados à CVD (por exemplo, albumina excretada, proteína C reativa ou peptídeo do tipo B plasmático (BNP)). Em algumas modalidades, o composto da Fórmula (I) reduz o risco de doença cardiovascular, trimetilaminúria, função renal reduzida ou prejudicada, doença renal, doença renal crônica, doença renal em estágio terminal, trimetilaminúria, obesidade ou diabetes mellitus, quando administrado a um indivíduo. Regimes de administração e composições

[0065] A quantidade de composto administrada ao indivíduo é suficiente para inibir (total ou parcialmente) a formação de TMA a partir de colina. Em vários aspectos da revelação, a quantidade melhora a saúde cardiovascular ou alcança uma resposta biológica benéfica em relação a uma condição indesejada associada à TMA (por exemplo, a quantidade é suficiente para atenuar, retardar a progressão ou evitar uma condição (como CVD)). O efeito pode ser detectado, por exemplo, por uma melhoria na condição clínica, redução nos sintomas ou por qualquer um dos ensaios ou testes de diagnóstico clínico descritos aqui. A quantidade eficaz precisa para um indivíduo pode depender do peso corporal, do tamanho e da saúde do indivíduo; da natureza e da extensão da condição; e do composto ou combinação de agentes selecionados para administração. Em vários aspectos, a quantidade de composto administrada a um indivíduo é de cerca de 0,001 mg/kg a cerca de 1.000 mg/kg. As faixas específicas de doses em mg/kg incluem cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 500 mg/kg, cerca de 0,5 mg/kg a cerca de 200 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a cerca de 100 mg/kg, cerca de 2 mg/kg a cerca de 50 mg/kg e cerca de 5 mg/kg a cerca de 30 mg/kg. Uma quantidade eficaz pode ser administrada a um indivíduo como uma única implantação do composto ou como uma dose dividida (como uma dose única administrada em múltiplas subunidades ao mesmo tempo ou próximas no tempo). Uma quantidade de composto pode ser fornecida uma, duas ou três vezes ao dia; uma, duas ou três vezes por semana; ou uma, duas, três ou quatro vezes por mês. O composto pode ser aplicado como um pró-fármaco que é convertido em um fármaco ativo in vitro ou in vivo.

[0066] Uma composição que compreende o composto é administrada por qualquer rota que permita a inibição da conversão de colina em TMA. Uma composição que compreende o composto é, em vários aspectos da invenção, aplicada a um indivíduo por via parenteral (por exemplo, por via intravenosa, intraperitoneal, intrapulmonar, subcutânea ou intramuscular), intratecal, tópica, transdérmica, retal, oral, sublingual, nasal ou por inalação. Em várias modalidades, um composto ou uma composição compreendendo um composto é administrada à via do trato gastrointestinal, como por ingestão. As formulações de liberação sustentada podem também ser empregadas para se obter uma liberação controlada do composto quando em contato com fluidos corpóreos no trato gastrointestinal. As formulações de liberação sustentada são conhecidas na técnica, e tipicamente incluem uma matriz polimérica de um polímero degradável biológico, um polímero solúvel em água ou uma mistura de ambos, opcionalmente com tensoativos adequados.

[0067] A invenção fornece uma composição que compreende o composto da Fórmula (I), formulado com um ou mais excipientes, veículos, estabilizantes, agentes de formação de tabletes ou diluentes fisiologicamente aceitáveis para uso nos métodos aqui descritos. Os excipientes incluem, mas não se limitam a, moléculas carreadoras que incluem macromoléculas grandes, lentamente metabolizadas como proteínas, polissacarídeos, ácidos poliláticos, ácidos poliglicólicos, aminoácidos poliméricos, copolímeros de aminoácido, antioxidantes (por exemplo, ácido ascórbico), agentes quelantes (por exemplo, EDTA), carboidratos (por exemplo, dextrina, hidroxialquilcelulose ou hidroxialquilmetilcelulose), lipossomas, ácido esteárico, líquidos (por exemplo, óleos, água, solução salina, glicerol e/ou etanol) agentes umectantes ou emulsificantes, substâncias tamponantes de pH e similares.

[0068] As composições, como para administração parenteral ou oral, são tipicamente sólidas (por exemplo, um pó ou torta liofilizada), soluções líquidas, emulsões ou suspensões, desde que as formulações inaláveis para administração pulmonar sejam geralmente líquidas ou pós. As formas de dosagem exemplificadoras incluem, mas não se limitam a, comprimidos, pastilhas, drágeas, pastilhas, suspensões aquosas ou oleosas, soluções não aquosas, pós, pós ou grânulos dispersíveis (incluindo partículas micronizadas ou nanopartículas), emulsões, cápsulas duras ou macias, cápsulas duras ou macias preenchidas com líquido, cápsulas de gel, xaropes e elixires. As composições de dose sólida, por exemplo, comprimidos ou cápsulas preenchidas com líquido, podem ser não revestidas ou podem ser revestidas por técnicas conhecidas, incluindo microencapsulação para atrasar a desintegração e adsorção no trato gastrointestinal. As composições de dose sólida podem ser revestidas para a aplicação alvo a uma região específica do trato digestivo. Por exemplo, a composição pode ter revestimento entérico para programar a liberação da composição no intestino delgado, no intestino grosso ou no cólon. As formas de dosagem exemplificadoras adicionais podem compreender microcápsulas revestidas ou microesferas revestidas em uma suspensão ou chassi líquido. Em algumas modalidades, o composto da Fórmula (I), é fornecido como um suplemento dietário (por exemplo, alimentos ou bebidas). Os suplementos dietéticos são administrados por via oral e compreendem, tipicamente, vitaminas, minerais, ervas ou outros componentes botânicos, aminoácidos, enzimas, tecidos de órgãos, tecidos de glândulas ou metabólitos. Por exemplo, um composto de Fórmula (I), pode ser fornecido como um alimento sob a forma de uma barra.

[0069] Em algumas modalidades, os compostos aqui descritos podem ser formulados para administração oral em uma composição à base de lipídios adequada para compostos de baixa solubilidade. As composições à base de lipídios podem, em geral, melhorar a biodisponibilidade oral de tais compostos. Como tal, a composição compreende, em alguns aspectos, uma quantidade de um composto aqui descrito juntamente com ao menos um excipiente selecionado a partir de ácidos graxos de cadeia média e ésteres de propilenoglicol do mesmo (por exemplo, ésteres de propilenoglicol de ácidos graxos comestíveis, como ácidos graxos caprílicos e cápricos) e tensoativos fisiologicamente aceitáveis, como óleo de rícino hidrogenado polioxil 40.

[0070] Em algumas modalidades, os compostos descritos aqui podem ser fornecidos em uma composição de liberação retardada e são opcionalmente liberados em uma região específica do trato digestivo de um indivíduo. Por exemplo, a composição pode ser fornecida de modo que os compostos sejam liberados de uma composição dosada por via oral na porção distal do trato digestivo, como o íleo ou o cólon. Em certas modalidades, a composição de liberação retardada libera os compostos em um pH específico, ou em uma faixa de pH para aplicação direcionada no trato digestivo de um indivíduo. Os compostos podem ser libertados, por exemplo, entre pH 6,0 e pH 9,0, entre pH 6,5 e pH 8,0, entre pH 6,5 e pH 7,5, entre pH 7,0 e pH 7,5 ou entre pH 7,0 e pH 8,0.

[0071] Um método da invenção pode compreender a administração de um segundo agente a um indivíduo. O termo "segundo agente" serve simplesmente para distinguir o agente do composto da Fórmula (I), e não se destina a limitar o número de agentes adicionais usados em um método ou denotar uma ordem de administração. Um ou mais segundos agentes são opcionalmente incorporados na composição com o composto da Fórmula (I) administrados concomitantemente, mas em formas de dosagem separadas, ou administrados separadamente no tempo.

[0072] Os segundos agentes exemplificadores incluem, mas não se limitam a: antimicrobianos (como antibióticos que matam bactérias no trato gastrointestinal); agentes que otimizam a motilidade intestinal (como fibra ou plantago); agentes que reduzem ainda mais os níveis de TMA no trato gastrointestinal, incluindo agentes sequestrantes (como carvão ativado ou clorofilina cúprica); agentes que reduzem ainda mais os níveis de TMA ou a produção de metabolitos de TMA; agentes que melhoram um ou mais aspectos da saúde cardiovascular, como agentes que normalizam a pressão arterial, diminuem a inflamação vascular, reduzem a ativação plaquetária ou normalizam as anormalidades de lipídios; agentes que promovem a excreção de TMA do corpo; ou agentes que se ligam a TMA para que ele não possa ser convertido em TMAO. Em várias modalidades, o segundo agente é selecionado do grupo que consiste em óleo Ômega 3, ácido salicílico (aspirina), dimetilbutanol, óleo de alho, extrato de alho, azeite de oliva, óleo de krill, coenzima Q-10, um probiótico, um prebiótico, uma fibra dietética, casca de plantago, sais de bismuto, fitoesteróis, óleo de semente de uva, extrato de chá verde, vitamina D, um antioxidante (como vitamina C e vitamina E), turmérico, curcumina, resveratrol, carvão vegetal ativado ou clorofilina cúprica. Em certas modalidades, a composição compreende dimetilbutanol ou inibidores da formação de TMA de precursores diferentes de colina (por exemplo, betaína, fosfatidilcolina, crotonobetaína ou carnitina). Segundo agentes exemplificadores adicionais são descritos no documento de patente US 2017/0151208, US 2017/0151250, US 2017/0152222 ou US 2018/0000754, que estão incorporados aqui por referência.

[0073] Um método da revelação pode compreender adicionalmente a administração de uma ou mais terapias de doença cardiovascular. Os exemplos de terapias incluem, mas não se limitam a, estatinas (por exemplo, Lipitor™ (atorvastatina), Pravachol™ (pravastatina), Zocor™ (sinvastatina), Mevacor™ (lovastatina) e Lescol™ (fluvastatina)) ou outros agentes que interferem com a atividade de HMGCoA redutase, ácido nicotínico (niacina, que reduz os níveis de colesterol LDL), fibratos (que reduzem os níveis de triglicerídeo no sangue e incluem, por exemplo, Bezafibrato (como Bezalip®), Ciprofibrato (como Modalim®), Clofibrato, Genfibrozila (como Lopid®) e Fenofibrato (como TriCor®)), resinas de ácido biliar (como Colestiramina, Colestipol (Colestid) e Colesevelam (Welchol)), inibidores de absorção de colesterol (como Ezetimiba (Zetia®, Ezetrol®, Ezemibe®)), fitosteróis como sitosterol (Take Control (Lipton)), sitostanol (Benecol) ou estigmastanol), alginatos e pectinas, lecitina e nutracêuticos (como extrato de chá verde e outros extratos que incluem polifenóis, particularmente, galato de epigalocatequina (EGCG), Cholest- Arrest™ (500 mg de alho e 200 mg de lecitina). Cholestaway™ (700 mg de carbonato de cálcio, 170 mg de óxido de magnésio 50 μg de picolinato de cromo), Cholest-Off™ (900 mg de esteróis/estanóis vegetais), Guggul Bolic (750 mg de gugulipídio (resina de goma de commiphora mukul) e Kyolic® (600 mg de extrato de alho e 380 mg de lecitina)).

[0074] Em variações relacionadas das modalidades anteriores, uma composição que compreende um composto da Fórmula (I), aqui descrita, sozinha ou em combinação com um ou mais segundos agentes, pode opcionalmente ser disposta em um kit, embalagem ou dose unitária, como um kit, embalagem ou dose unitária permitindo a coadministração de múltiplos agentes. Em outro aspecto, a composição que compreende um composto de Fórmula (I) e o um ou mais segundos agentes são misturados. Em várias modalidades, o componente (ou componentes) do kit, embalagem ou dose unitária estão embalados com instruções para administrar o componente (ou componentes) a um indivíduo.

[0075] Outros aspectos e vantagens da presente invenção serão compreendidos mediante consideração dos exemplos ilustrativos a seguir que não se destinam a ser limitadores de qualquer maneira.

[0076] As estruturas dos compostos representativos da Fórmula (I) são apresentadas na TABELA 1. Os contraíons farmaceuticamente aceitáveis podem incluir, mas não se limitam a, cloreto, brometo ou iodeto, e sais e solvatos dos mesmos.

[0077] Compostos podem ser selecionados a partir da Tabela 2. O contra-ânion pode ser qualquer contraíon farmaceuticamente aceitável, de preferência selecionado dentre fluoreto, cloreto, brometo ou iodeto. TABELA 2

EXEMPLO 1: Sínteses dos compostos

[0078] Todos os procedimentos de síntese foram realizados à temperatura ambiente (RT) e à pressão atmosférica, exceto onde especificado em contrário.

[0079] Os compostos a seguir são representativos da Fórmula (I): Exemplo 1.1: Síntese de iodeto de N-(2-hidroxietil)-N,N- dimetilciclopropanamínio.

[0080] Em um frasco de fundo redondo de 250 mL equipado com uma barra de agitação, um banho de óleo e um condensador de refluxo, 4 mL de ciclopropilamina (CAS 76530-0) foram adicionados. 20 mL de solução de formaldeído (CAS 50-00-0, 37% em água) foram adicionados por gotejamento com o uso de uma pipeta de vidro durante 10 minutos. 30 mL de ácido fórmico (CAS 64-18-6) foram adicionados por gotejamento com o uso de uma pipeta de vidro ao longo de 10 minutos. A mistura de reação foi refluxada a 110 ◦C durante 10 horas. Após o resfriamento da mistura de reação até a temperatura ambiente, 15 mL de ácido clorídrico concentrado (CAS 7647-01-0, 37%) foram adicionados. Após evaporação rotativa, o produto bruto (sal de ácido clorídrico de N,N- dimetilciclopropanamina) foi recristalizado em 2- propanol/éter dietílico. LC/MS: (ESI+) 86.

[0081] Em um frasco de fundo redondo de 250 mL equipado com uma barra de agitação, 1,2 g de sal de ácido clorídrico de N,N-dimetilciclopropanamina, 0,8 g de hidróxido de sódio (CAS 1310-73-2) e 20 mL de acetonitrila foram adicionados. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. O sal de cloreto de sódio foi removido com o uso de funil com filtro descartável Chemrus. 0,9 mL de 2-iodoetanol (CAS 624-76-0) foi adicionado por gotejamento por uma seringa ao longo de 15 minutos. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. Após evaporação rotativa, o produto cru parecido com óleo foi recristalizado em 2- propanol/éter dietílico e depois secado durante a noite em casa a vácuo (5-10 mm de Hg) para obter 2 g de produto final. LC/MS: (ESI+) 130. Exemplo 1.2: Síntese de brometo de N-alil-N,N- dimetilciclopropamínio. N,N-Dimetilciclopropanamina:

[0082] Um frasco de fundo redondo de 3L secado por chama equipado com um agitador mecânico suspenso, condensador, funil de adição de medição e válvula Firestone (pressão positiva de nitrogênio/vácuo) foi carregado com N,N-dimetilformamida (CAS 68-12-2, 18,88 g, 0,258 moles, 1 eq.), tetraidrofurano anidro (500 mL) e isopropróxido de titânio (IV) (N° CAS 546-68-9, 80,66 g ou 84 mL, 0,2838 moles, 1,10 eq). A reação foi agitada à temperatura ambiente sob pressão positiva de nitrogênio. Duzentos mL de solução a 3 M de brometo de etilmagnésio (CAS 925-90-6) em éter dietílico (79,96 g, 0,60 mol) foram transferidos para um funil de adição de medição e adicionados por gotejamento a uma taxa para manter a temperatura de reação abaixo de 35°C. A solução de reação mudou de uma solução incolor para uma solução âmbar escura/preta. O funil de adição e as paredes do frasco foram enxaguados com um adicional de 50 mL de tetraidrofurano anidro e adicionados ao frasco. A solução de reação foi aquecida a 45°C por 60 minutos e então deixada resfriar lentamente até a temperatura ambiente, com agitação contínua sob nitrogênio durante um período adicional de 18 horas, então transferida com 250 mL de uma solução de cloreto de amônio saturada para um funil de adição. A solução de cloreto de amônio saturada foi adicionada lentamente ao frasco de reação agitado vigorosamente a uma taxa para controle da exotermia e manter uma temperatura abaixo de 35°C. A agitação foi interrompida e as fases deixadas separar, com transferência da fase orgânica superior para um funil separador. Os sólidos precipitados restantes no frasco foram lavados com éter dietílico (2 x 100 mL) e combinados com a camada orgânica no funil separador. A fase orgânica foi lavada com solução saturada de cloreto de sódio (1 x 1 L), então secada com carbonato de potássio e rapidamente filtrada para minimizar o tempo sob vácuo devido à volatilidade do produto. O filtrado foi transferido para um frasco volumétrico de 1 L e o volume foi trazido para a marca de 1L com o uso de uma solução 50:50 v/v de tetraidrofurano-éter dietílico. A solução foi armazenada a 5-10°C. Rendimento 21,96 g (22 mg/mL).

[0083] Iodeto de N, N,N-trimetilciclopropanamínio foi preparado para determinar a concentração real. Iodeto de N, N,N-trimetilciclopropanamínio:

[0084] A um frasco de fundo redondo de 50 mL equipado com um condensador e uma barra de agitação magnética foram adicionados 10 mL de uma solução de éter dietílico de N,N-dimetilciclopropanamina/tetraidrofurano. Iodometano (CAS 74-88-4, 2,28 g, 16 mmol) foi adicionado ao frasco e a solução foi agitada à temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio positiva durante 18 horas. A mistura resultante foi filtrada a vácuo (5-10 mm de Hg) e a torta do filtro enxaguada com éter dietílico anidro (3 x 5 mL) e filtrada seca. A torta foi transferida para um prato de cristalização e adicionalmente secada em um dessecador a vácuo à temperatura ambiente durante 18 h. Um pó branco-sujo foi recuperado, 0,1498 grama (0,66 mmol). MS: (ESI) C6H14N+ 100. Solução de N,N- dimetilciclopropanamina = 0,066 mmol/mL ou 5,6 mg/mL. Brometo de N-alil-N,N-dimetilciclopropanmínio:

[0085] Um frasco de fundo redondo de gargalo único de 100 mL equipado com uma barra de agitação magnética foi carregado com 3-bromoprop-1-eno (CAS 106-956, 0,250 g, 2,07 mmol) e acetona (15 mL) foi adicionada. A solução foi agitada magneticamente à temperatura ambiente enquanto 35 mL de solução de éter de N,N- dimetilciclopropanamina (2,31 mmol)/THF (tetraidrofurano) foi adicionada ao frasco de reação. A solução homogênea foi agitada durante 18 horas à temperatura ambiente. A mistura resultante foi transferida para um frasco de fundo redondo com colutórios de éter dietílico e concentrada a vácuo em um evaporador giratório (5-10 mm de Hg, 38°C). Um sólido branco-sujo foi recuperado, 0,055 g. A amostra foi triturada com filtração a vácuo de acetona (2 x 10 mL) de cada vez, depois secada a vácuo à temperatura ambiente. Um pó branco foi recuperado, 26,5 mg de. MS: (ESI) C8H16N+ 126. Exemplo 1.3: Síntese de brometo de N,N-dimetil-N-(prop-2- in-1-il)ciclopropanamínio.

[0086] Em um frasco de fundo redondo de 2L equipado com uma barra de agitação e 125 mL de funil de adição foi adicionada uma solução de N,N- dimetilciclopropanamina (1000 mL em 3:1 de THF / éter dietílico (Et2O), 8,86 mg/mL, 8,86 g) (25 mL) e acetona. A esta solução foi adicionado brometo de propargila (CAS 106-96-7, 5,88 mmol de, 80% em tolueno (em peso)) por gotejamento ao longo de 20 minutos. A reação foi agitada por 24 h à temperatura ambiente (TA), e então todos os solventes foram removidos por evaporação rotativa sob pressão reduzida (5-10 mm de Hg) a 30°C. A goma resultante foi então triturada com acetona (3 x 1L) e depois filtrada através de um filtro de vidro sinterizado para fornecer o produto como um sólido avermelhado. 5,2 g. LC/MS (ESI). M79 (Br-) 125. Exemplo 1.4: Síntese de brometo de N-(2-metóxi-2-oxoetil)- N,N-dimetil-ciclopropanamínio.

[0087] Em um frasco de fundo redondo de 250 mL equipado com uma barra de agitação foi adicionada uma solução de N,N-dimetilciclopropanamina (500 mg, 50 mL de solução a 3:1 de THF/Et2O) e acetona (50 mL). A essa solução adicionou-se metilacetato de bromo-metila (CAS 9632-3, 0,66 grama) por gotejamento ao longo de 10 minutos à TA. A reação foi agitada à TA por 24h, então o solvente foi removido sob pressão reduzida em um evaporador giratório (5-10 mm de Hg). O resíduo foi triturado com Et2O (3 x 100 mL) e o sólido resultante foi bombeado sob vácuo durante 96 horas. 380 mg de. MS/LC: (ESI) M-79 (Br-): 158. Exemplo 1.5: Síntese de brometo de N-(2- (metoxicarbonil)alil)-N,N-dimetilciclopropanamínio.

[0088] Em um frasco de fundo redondo de 250 mL equipado com uma barra de agitação foi adicionada uma solução de N,N-dimetilciclopropanamina (500 mg, 50 mL de solução a 3:1 de THF/Et2O) e acetona (50 mL). A essa solução adicionou-se bromo metil acrilato de bromo-metila (CAS 422469-5, 1,068 g, 6,00 mmol) por gotejamento ao longo de 10 minutos à TA. A reação foi agitada à TA por 24h, então o solvente foi removido sob pressão reduzida em um evaporador giratório (5-10 mm de Hg). O resíduo foi triturado com Et2O (3 x 100 mL) e o sólido resultante foi bombeado sob vácuo durante 24 horas. 1,06 g. MS/LC: (ESI) M-79 (Br-): 184. Exemplo 1.6: Síntese de brometo de N-(3-metóxi-2,3- dioxopropil)-N,N-dimetilciclopropanamínio.

[0089] Em um frasco de fundo redondo de 500 mL equipado com uma barra de agitação foi adicionada uma solução de N,N-dimetilciclopropanamina (933 mg, 10,98 mmol, 215 mL de solução a 1:1 de THF/Et2O) e acetona (15 mL). A essa solução adicionou-se piruvato de bromo-metila (CAS 7425-63-0, 4,2 g, 10,90 mmol) por gotejamento ao longo de 10 minutos à TA. A reação foi agitada à TA durante 72h, e então o solvente foi removido sob pressão reduzida em um evaporador giratório (5-10 mm de Hg). O resíduo foi triturado com Et2O (3 x 200 mL) e o sólido resultante foi bombeado sob vácuo durante 24 horas. 3,0 g, óleo vermelho-amarelo. Exemplo 1.7: Síntese de brometo de N-(2-cianoalil)-N,N- dimetilciclopropanamínio.

[0090] Em um frasco de fundo redondo de 500 mL equipado com uma barra de agitação foi adicionada uma solução de N,N-dimetilciclopropanamina (0,500 g em 3:1 THF/Et2O, 8,86 mg/mL) e acetona (30 mL). A essa solução adicionou-se bromo-metilacriolonitrila (CAS 17200-53-2, 0,800 grama) por gotejamento ao longo de 10 minutos. A reação foi agitada por 72 h à TA, e o sólido resultante foi filtrado e lavado com acetona (3 x 100 mL). O sólido resultante foi então secado sob vácuo (5-10 mm de Hg) à TA durante 24. Sólido branco, 784 mg. LC/MS (ESI). M-79 (Br-) 152. Exemplo 1.8: Síntese de iodeto de N-(2-amino-2-oxoetil)-N,N- dimetilciclopropanamínio. 2-(ciclopropil(metil)amino)cetamida:

[0091] Um frasco de fundo redondo de gargalo único de 25 mL foi carregado com 2-bromoacetamida (CAS 683-57-8, 1,38 g, 0,010 mol) e 10 mL de diclorometano (grau HPLC). A solução foi agitada à temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio com pressão positiva. N-metilciclopropil amina (CAS 5163-20-2, 1,42 g, 0,020 mol de) foi adicionado mais 3 mL de diclorometano usado para enxaguar as paredes do frasco. A solução de reação foi refluxada durante 18 horas. A solução de reação foi transferida para um funil separador fazendo uma transferência completa com diclorometano (3 x 1 mL). A camada orgânica foi lavada com solução a 1N de NaOH (3 x 150 mL), secada com a fase orgânica com MgSO4 anidro, filtrada a vácuo e concentrada em um evaporador giratório (5-10 mm Hg/30°C). Recuperado: 1,23 g de um óleo amarelo claro, MS: (ESI) C6H12N2O MH+ 129. Iodeto de N-(2-amino-2-oxoetil)-N,N- dimetilciclopropanamínio:

[0092] A um frasco de fundo redondo de gargalo único de 100 mL equipado com uma barra de agitação magnética foram adicionados 2- (ciclopropil(metil)amino)acetamida (1,20 g, 0,01 mol) e acetona de grau HPLC (25 mL). A solução foi agitada à temperatura ambiente e iodometano (10 mL, 0,160 mol) foi adicionado. A solução foi aquecida a refluxo durante 4 horas e então agitada à temperatura ambiente por um período adicional de 18 horas. O solvente foi removido através de evaporador giratório sob vácuo (5-10 mm de Hg/30 °C). Um sólido castanho claro foi recuperado. 0,240 g, MS: (ESI) C7H15N2O+ 143. Exemplo 1.9: Síntese de iodeto de N-(6-etóxi-6-oxo-hexil)- N,N-dimetilciclopropanamínio. Etil-6-(ciclopropil(metil)amino)hexanoato:

[0093] Preparado da mesma maneira que 2- (ciclopropil(metil)amino)acetamida, exceto que 6-bromo- hexanoato de etila CAS 25542-62-5 foi usado no lugar de 2- bromoacetamida: um frasco de fundo redondo de gargalo único de 25 mL foi carregado com 6-bromo-hexanoato de etila (CAS 2554262-5, [x,xx g], 0,010 mol) e 10 mL de diclorometano (grau HPLC). A solução foi agitada à temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio com pressão positiva. N- metilciclopropil amina (CAS 5163-20-2, 1,42 g, 0,020 mol de) foi adicionado mais 3 mL de diclorometano usado para enxaguar as paredes do frasco. A solução de reação foi refluxada durante 18 horas. A solução de reação foi transferida para um funil separador fazendo uma transferência completa com diclorometano (3 x 1 mL). A camada orgânica foi lavada com solução a 1N de NaOH (3 x 150 mL), secada com a fase orgânica com MgSO4 anidro, filtrada a vácuo e concentrada em um evaporador giratório (5-10 mm Hg/30°C).

[0094] O produto foi purificado e isolado por cromatografia em coluna flash com o uso de gel de sílica (Sigma Aldrich 288594-10 kg, malha 200-400, 60 A) e uma fase móvel de 90:10 v/v hexanos:acetato de etila. Recuperado: 0,6322 g. MS: (ESI) C12H23NO2 MH+ 214. Iodeto de N-(6-etóxi-6-oxo-hexila)--N,N- dimetilciclopropanamínio:

[0095] Preparado da mesma maneira como o iodeto de N-(2-aminoácidos 2 oxoetil)-N,N- dimetilciclopropanamínio, exceto que 6- (ciclopropil(metil)amino)hexanoato de etila foi usado no lugar da 2-(ciclopropil(metil)amino)acetamida: A um frasco de fundo redondo de gargalo único de 100 mL equipado com uma barra de agitação magnética foram adicionados 6-(ciclopropil(metil)amino)hexanoato de etila (0,01 mol) e acetona de grau HPLC (25 mL). A solução foi agitada à temperatura ambiente e iodometano (10 mL, 0,160 mol) foi adicionado. A solução foi aquecida a refluxo durante 4 horas e então agitada à temperatura ambiente por um período adicional de 18 horas. O solvente foi removido através de evaporador giratório sob vácuo (5-10 mm de Hg/30°C). Rendimento 0,1997 g. MS: (ESI) C13H26NO2+ 228. Exemplo 1.10: Síntese de brometo de 4-ciclopropil-4-(prop- 2-in-1-il)morfolin-4-io.

[0096] Em um frasco de fundo redondo de 250 mL equipado com uma barra de agitação carregada com 100 mL de acetona foi adicionada 4-ciclopropil morfolina 1 (2,5 g, 19,68 mmol). A essa solução adicionou-se brometo de propargila (CAS 106-96-7, 2,5 g, 80% em tolueno). A reação foi agitada por 24 h à TA, então o solvente foi removido através de evaporador giratório (5-10 mm de Hg). O resíduo foi triturado com acetona (3 x 200 mL) e o sólido resultante foi filtrado e secado por 24 h à TA sob vácuo (5-10 mm de Hg) para fornecer um pó branco. 300 mg. LC/MS (ESI). M+-79 (Br-): 167. 1) Chaplinski, V. et al. Angew. Chem. Int. Ed. Engl.; 1996, 35(4), págs. 413-414.

EXEMPLO 2 Ensaio para identificar e caracterizar compostos que inibem a formação de TMA a partir de colina.

[0097] Esse exemplo fornece um ensaio exemplificador para identificar e caracterizar compostos que inibem a formação de TMA a partir de colina.

[0098] A cepa Proteus mirabilis 29906 (PM) foi cultivada aerobicamente de um dia para o outro em 500 ml do meio de Caldo Nutriente (3 g/l de extrato de carne bovina, 5 g/l de Peptona; Difco n° 234000) a 37°C de agitação com agitação a 250 rpm. A biomassa foi peletizada por centrifugação a 6.000 x g por 12 minutos a 4°C. O pélete celular foi suspenso em 240 mL de solução salina 1x tamponada com fosfato gelada (Ca2+ e Mg2+ livre). Noventa microgramas de Lisozima (Sigma n° L6876 Lote n° SLBG8654V; Sigma Aldrich Corp., St. Louis, Mo, EUA) foram adicionados e incubados com agitação a 320 rpm durante 30 minutos a 4°C. A lise foi obtida por meio de prensa francesa com uma câmara de diâmetro de 2,5 cm (1") pré-resfriada a 4°C a 7 MPa (1.000 psi) (alta razão; PSI interno equivalente a ~16000). O lisado foi centrifugado a 6.000 x g durante 12 minutos a 4°C para peletizar detritos adicionais. Uma concentração de proteína do sobrenadante de lisado centrifugado foi determinada por um Kit de Ensaio de Proteína BCA (Pierce no 23225; Thermo Fisher Scientific Co., Waltham, MA), e a concentração de proteína foi ajustada para 3 mg/ml com 1 x solução salina tamponada com fosfato da Dulbecco (DPBS). O lisado sobrenadante centrifugado foi aliquotado em volumes de 20 ml e armazenado congelado a -80°C.

[0099] O lisado de Proteus mirabilis 29906 (Pm) foi diluído a 1,5 mg/ml de proteína com 1 x DPBS. O cloreto de colina (CC) (estoque 1M) foi adicionado para alcançar uma concentração final de cloreto de colina 2,5 mM. A mistura foi misturada com o uso de um misturador de vórtice por aproximadamente 15 segundos e incubada a 37 °C por 22 horas. Após a incubação, 150 μl de lisado de Pm tratado com CC dispensados em uma placa de cavidade profunda (poplipropileno, 2 ml de volume, catálogo da Corning Axygen n° P-DW-20-C). Os compostos de IC50 candidatos da TABELA 1 e controle de veículo (controle de veículo respectivo de DMSO ou água) ou compostos de controle (controle IC50, sal de hemissulfato de 8-quilonol (Catálogo Sigma n° 55100)) foram adicionados a uma diluição de 1:100 (por exemplo, 1,5 μl por poço). As placas foram agitadas em um agitador de placa por 1 minuto. Cloreto de d9-colina (1,5 μl de 5 mM) foi adicionado a todas as cavidades para atingir uma concentração final de cloreto de d9-colina de 50 μM.

[0100] As placas foram novamente agitadas em um agitador de placa por 1 minuto e incubadas a 37 °C por duas horas. Após a incubação, 1,5 μl de ácido fórmico foi adicionado a cada poço (concentração final = 1% de ácido fórmico). As placas foram agitadas em um agitador de placa durante 1 minuto e colocadas no gelo. As amostras de lisado celular foram reforçadas com o uso de padrão interno marcado com isótopo estável (22,5 μl de 6 μg/ml de 13C3-trimetilamina (13C3-TMA) foi adicionado a cada amostra), então, d9-trimetilamina (d9-TMA), trimetilamina (TMA) e 13C3-TMA foram isolados do lisado após a precipitação de proteína, conforme descrito abaixo. A acetonitrila acidificada com 0,1% de ácido fórmico, 600 μl, foi adicionada a cada amostra que foi, então, centrifugada (2.100 g durante 20 minutos) para formar péletes da proteína e de outros precipitados. O sobrenadante foi removido e analisado, conforme descrito abaixo. A TMA, d9-TMA e 13C3-TMA nas amostras de sobrenadante isolado foram submetidas à análise por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC) em uma coluna Waters Atlantis HILIC de sílica a Waters Corp. Milford, Mass., (2,1 x 50 mm, partículas de 3 μm) com uma pré-coluna Atlantis Silica HILIC Sentry, da Waters Corp., Milford, Mass., (100 Â, 3 μm, 2,1 mm X 10 mm), com formiato de sulfato 10 mM em água com 0,1% de ácido fórmico como fase móvel A e 0,1% de ácido fórmico em acetonitrila como fase móvel B. A detecção e quantificação foram alcançadas por espectrometria de massa em tandem que opera sob múltiplas condições de monitoramento de reação (MRM), MS/MS (m/z 60,1®44,1 para TMA, m/z 69,1®49,1 para d9-TMA, m/z 63,0®46,1 para 13C3-TMA). Os padrões de calibração de TMA e d9-TMA (STD), preparados em 80/20/0,1% de acetonitrila /água/ácido fórmico, foram usados para construir uma curva de regressão plotando-se a resposta (área de pico de TMA/área de pico de 13C3-TMA) versus a concentração para cada padrão. As concentrações de TMA e d9-tMA no lisado celular foram determinadas por interpolação da curva de regressão quadrática (1/x2).

[0101] As medições de IC50 para a inibição da conversão de colina em TMA, conforme descrito no EXEMPLO 2, para compostos representativos da Fórmula (I), são apresentados na TABELA 3. TABELA 3

[0102] O EXEMPLO 2 fornece métodos exemplificadores de identificação e quantificação de TMA em uma amostra, bem como de triagem de compostos inibidores candidatos. Revelou-se que todos os compostos na TABELA 3 inibem a conversão de colina em TMA.

EXEMPLO 3 Método de triagem pré-clínica

[0103] Incubação polimicrobiana de fezes humanas com método de triagem de composto de colina marcado com deutério, incluindo ensaio de viabilidade de célula. Todos os materiais foram pré-reduzidos em uma câmara anaeróbica por 24 horas antes de serem utilizados nos experimentos e os procedimentos experimentais foram realizados sob condições anaeróbicas (câmara purgada com 85% de nitrogênio, 5% de hidrogênio, 10% dióxido de carbono).

[0104] As amostras fecais foram coletadas de voluntários saudáveis do sexo masculino sem nenhuma doença crônica, doença sanguíneas ou infecção ativo. O voluntário não tinha recebido antibióticos no prazo de dois meses antes da doação e forneceu consentimento por escrito. As amostras foram diluídas para fazer uma pasta fluida fecal a 20% (p/v) por ressuspensão das fezes em um meio contendo 3% (p/v) de caldo de triptcaseína de soja, 1% (p/v) de trealose, pH 7,3. A pasta fluida fecal foi homogeneizada e filtrada manualmente com o uso de uma bolsa homogeneizadora de amostras com uma membrana integrada de 17 0 μm. DMSO (5% (p/v)) foi adicionado à pasta fluida filtrada e as alíquotas foram armazenadas em frascos criogênicos a -80°C até o uso. As pastas fluidas fecais congeladas foram diluídas para 0,2% (p/v) com meio M9 (Na2HPO4 (6 g/L), a KH 2PO4 (3 g/L), NaCl (0,5 g/L) com a adição de 0,1 mM de CaCl2 e 1 mM de MgSO4) e dispensadas (1 mL) em placas de 96 poços profundos. As pastas aquosas fecais diluídas contendo 50 μM de cloreto de d9-colina e os compostos em doses na faixa de 500 μM a 3, 81 nM foram vedadas e incubadas a 37°C com agitação. Após 20 horas, uma alíquota da comunidade polimicrobiana fecal foi analisada para viabilidade usando reagente de viabilidade celular PrestoBlue (Thermo Fischer Scientific, EUA) conforme descrito abaixo. As placas de reação foram subsequentemente centrifugadas (4000 x g a uma temperatura 4°C por 12 minutos) para peletizar o material fecal e alíquotas de 150 μl foram transferidas e bruscamente arrefecidas com a adição de ácido fórmico a 1% (v/v). Todas as etapas do ensaio polimicrobiano e de processamento fecal foram realizados em um ambiente anaeróbico. Os produtos foram determinados por LC/MS/MS e os valores IC50 foram calculados conforme descrito anteriormente para detecção e análise de TMA e d9-TMA no EXEMPLO 2.

[0105] As medições de IC50 para a inibição da conversão de colina em TMA, conforme descrito no EXEMPLO 3, para os compostos representativos da Fórmula (I) são apresentadas na TABELA 4. TABELA 4

[0106] Para o ensaio de viabilidade de célula PrestoBlue, uma alíquota de 6 μL da comunidade polimicrobiana fecal foi adicionada ao meio de 84 μL M9 em uma placa de fundo redondo chato, preta de 96 poços. A esta foram adicionados 10 μL de reagente PrestoBlue, coberta e agitada por 1 minuto a 800 rpm. As placas foram incubadas a 37 °C por 30 minutos e a fluorescência lida seguindo as instruções do fabricante. A viabilidade celular foi calculada como % de fluorescência em comparação com o veículo de controle (por exemplo, 1% de DMSO).

[0107] Os dados de viabilidade celular da TABELA 5 conforme determinado no EXEMPLO 3, os compostos representativos da Fórmula (I), no ensaio PrestoBlue. A concentração máxima testada é registrada, juntamente com a menor concentração testada na qual a viabilidade celular foi determinada ser 10% ou mais baixa, em comparação com o veículo de controle. Se a viabilidade celular não foi determinada ser 10% ou mais baixa em qualquer uma das concentrações testadas, a célula é marcada como N/A. TABELA 5

[0108] EXEMPLO 3 fornece métodos exemplificadores de triagem de compostos inibidores candidatos para a conversão de colina em TMA e para o cálculo da viabilidade celular.

EXEMPLO 4 Método de triagem pré-clínica

[0109] Começando no dia 0, os camundongos (C57bl/6, ~19 g, 10 semanas de idade; n=5/grupo) foram mantidos de acordo com as diretrizes do NIH em um ciclo de luz:escuridão de 12:12 h e receberam uma dieta com adição de colina 1% (formulação personalizada Envigo preparada, similar à dieta para roedores Teklad Globa 2018) ad libitum. Concomitante com a introdução da dieta, os camundongos foram alimentados por gavagem uma vez por dia por via oral com o uso de uma agulha de alimentação curva com ponta esférica 1,5" 22G para administrar o composto em 200 μl ou menos de água em um ou múltiplos da dose 0, 1,0, 3,1, 10, 31, 100 ou 310 mg/Kg/dia. A urina foi coletada uma vez por dia de manhã. Os animais foram contidos pela mão e a bexiga foi expressa por palpação suave da região pélvica. As alíquotas de 1-5 μl de urina foram centrifugadas a 1.300 x g durante 5 minutos em um tubo de fundo cônico de 1,5 mL com um topo de pressão, para precipitar quaisquer possíveis restos celulares, e os sobrenadantes foram transferidos para um tubo de tampa de rosca limpa com lacre de anel e armazenados a -80°C até a análise. Sessenta microlitros ou menos de sangue foram coletados 20 horas após a gavagem, em um tubo capilar heparinizado. O sangue foi mantido a 4°C então centrifugado com o uso de uma centrífuga (5 minutos em centrífuga projetada para tubos capilares) para separar o plasma e o hematócrito dentro de 4 horas após a coleta. As amostras de plasma forcam armazenadas a -80°C.

Medições de Metabólitos de Colina:

[0110] P ara a medição de TMA no plasma, as amostras foram acidificadas (HCl 10 mM final) antes do armazenamento a -80°C. TMAO e TMA e seus d9-isotopólogos foram quantificados usando HPLC com diluição de isótopo estável com métodos de espectrometria de massa em tandem de ionização por eletrospray em linha (LC/EST/MS/MS), conforme descrito em (Wang Z, Klipfell E, Bennett B J, et al. (2011) Gut flora metabolism of phosphatidylcholine promotes cardiovascular disease. Nature 472:57-63) com o uso de d4(1,1,2,2)-colina, d3(metil)-TMAO, e d3(metil)-TMA como padrões internos. As concentrações de TMAO na urina foram ajustadas para diluição urinária por análise de concentração de creatinina da urina. Os resultados são mostrados na TABELA 6. Amostras foram tomadas em dias diferentes durante os estudos e doses diferentes foram administradas para evitar efeitos colaterais em doses mais altas de alguns dos compostos.

[0111] EXEMPLO 4 fornece métodos exemplificadores de triagem de compostos inibidores candidatos para a conversão de colina em TMA. TABELA 6: TMAO restante no plasma como porcentagem de TMAO no plasma no veículo de controle no mesmo dia.

EXEMPLO 5: Ensaio in vitro adicional para identificar e caracterizar compostos que inibem a formação de TMA a partir de colina.

[0112] A capacidade dos compostos de inibir a conversão de colina em TMA em lisados celulares ou células inteiras foi determinada com o uso de métodos conforme descritos em Wang, ZTri, Roberts, AB, Buffa JA, et al. (2015) Non-lethal inhibition of gut microbial trimethylamine production for the treatment of atherosclerosis, Cell, 163: 1585-1595. Brevemente, a eficácia foi medida como IC50 (nM) pela inibição da conversão de colina em TMA metabolizada por lisado C/D de Cut de P. mirabils recombinante; lisado C/D de Cut de D. alaskensis recombinante, ou P. mirabils do tipo selvagem de célula inteira.

[0113] As medições de IC50 para a inibição da conversão de colina em TMA, conforme descrito no EXEMPLO 5, para os compostos representativos da Fórmula (I), são apresentados na TABELA 7. TABELA 7

[0114] O EXEMPLO 5 fornece métodos exemplificadores de identificação e quantificação de TMA em uma amostra, bem como de triagem de compostos inibidores candidatos. Revelou-se que todos os compostos na TABELA 7 inibem a conversão de colina em TMA.

EXEMPLO 6: Método clínico rápido para determinar a eficácia do composto.

[0115] De safio: Fêmeas de camundongos C57bl/6 f (8 semanas de idade, ~20 g PC) foram mantidas em conformidade com as orientações de NIH em um ciclo de 12:12 horas de luz:escuro em uma dieta normal com ração e foram colocadas em uma gaiola limpa sem alimentos por ~1 h antes da gavagem. Os camundongos receberam 2 mg de d9-colina + x mg/kg de inibidor (onde x=0 a 310 mg/kg) em água por gavagem oral com o uso de uma agulha de alimentação curva de ponta em esfera de 1,5" 22G para administrar o composto em 200 μl de água. Alimentação foi retornada após um jejum de 2 h (1 horas após a administração por gavagem). Sangue (30 μL) foi coletado em um tubo capilar heparinizado 2, 3 e 4 horas após a gavagem. O sangue foi mantido a 4°C então centrifugado com o uso de uma centrífuga (5 minutos em centrífuga projetada para tubos capilares) para separar o plasma e o hematócrito dentro de 4 horas após a coleta. As amostras de plasma foram armazenadas a -80°C. Concentração de d9-colina, d9TMA e d9TMAO foi medida por LC- MS/MS.

[0116] Normalização da flora: Vinte e quatro horas após a gavagem, os camundongos foram colocados em uma gaiola limpo e o material fecal dos camundongos convencionais foi espalhado em todas as gaiolas.

[0117] O EXEMPLO 6 fornece métodos exemplificadores de triagem dos compostos inibidores candidatos para a conversão de colina em TMA.

[0118] As medições de IC50 para a inibição da conversão de colina em TMA, conforme descrito no EXEMPLO 6, para os compostos representativos da Fórmula (I), são apresentadas na TABELA 8. TABELA 8: EC50 calculado (mg/kg) em comparação com o veículo de controle, conforme descrito no EXEMPLO 6.

EXEMPLO 7

[0119] Em uma modalidade da invenção, o composto é N-(fluorometil)-N,N-dimetilciclopropanamínio com um contraíon aceitável (X-). O contraíon é de preferência um haleto, e com mais preferência selecionado de Cl, Br ou I, por exemplo iodeto de N-(fluorometil)-N,N- dimetilciclopropanamínio. Os compostos representativos são mostrados na TABELA 9.

Síntese de iodeto de N-(2-hidroxietil)-N,N- dimetilciclopropanamínio

[0120] Em um frasco de fundo redondo de 250 mL equipado com uma barra de agitação, um banho de óleo e um condensador de refluxo, 4 mL de ciclopropilamina (CAS 76530-0) foram adicionados. 20 mL de solução de formaldeído (CAS 50-00-0, 37% em água) foram adicionados por gotejamento com o uso de uma pipeta de vidro durante 10 minutos. 30 mL de ácido fórmico (CAS 64-18-6) foram adicionados por gotejamento com o uso de uma pipeta de vidro ao longo de 10 minutos. A mistura de reação foi refluxada a 110°C durante 10 horas. Após o resfriamento da mistura de reação até a temperatura ambiente, 15 mL de ácido clorídrico concentrado (CAS 7647-01-0, 37%) foram adicionados. Após evaporação rotativa, o produto bruto (sal de ácido clorídrico de N,N- dimetilciclopropanamina) foi recristalizado em 2-propanol / éter dietílico. MS (infusão): (ESI+) 86.

[0121] Em um 200 mL de frasco de fundo redondo equipado com uma barra de agitação, 2,0 g de N,N- dimetilciclopropanamina sal de ácido clorídrico, 0,7 g de hidróxido de sódio (N° CAS 1310-73-2) e 20 mL de acetonitrila foram adicionados. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. Cloreto de sódio foi removido por filtração. 1,2 mL de fluoroiodometano (CAS 373-53-5, 4 mL) foram adicionados por gotejamento por uma seringa ao longo de 15 minutos. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. Após evaporação rotativa, o produto cru foi recristalizado em 2-propanol e então secado de um dia para outro sob vácuo (5-10 mm de Hg) para fornecer 3,1 g de produto. MS (infusão): (ESI+) 118.

[0122] As medições de IC50 para a inibição da conversão de colina em TMA, conforme descrito no EXEMPLO dimetilciclopropanamínio são apresentados na TABELA 10. TABELA 10

[0123] As dimensões e os valores aqui revelados não devem ser entendidos como estando estritamente limitados aos valores numéricos exatos mencionados. Em vez disso, exceto onde especificado em contrário, cada uma dessas dimensões se destina a significar tanto o valor mencionado como uma faixa de valores funcionalmente equivalentes em torno daquele valor. Por exemplo, uma dimensão revelada como "40 mm" se destina a significar "cerca de 40 mm".

[0124] Cada documento citado na presente invenção, inclusive qualquer patente ou pedido de patente em referência remissiva ou relacionado, e qualquer pedido de patente ou patente no qual o presente pedido reivindique prioridade ou benefício do mesmo, está desde já integralmente incorporado aqui por referência, exceto quando expressamente excluído ou, de outro modo, limitado. A menção a qualquer documento não é uma admissão de que constitua técnica anterior em relação a qualquer invenção revelada ou reivindicada no presente documento, nem de que ele, por si só ou em qualquer combinação com qualquer outra referência ou referências, ensine, sugira ou revele tal invenção. Além disso, se houver conflito entre qualquer significado ou definição de um termo mencionado neste documento e qualquer significado ou definição do mesmo termo em um documento incorporado por referência, terá precedência o significado ou definição atribuído àquele termo neste documento.

Claims (2)

1. Uso de uma composição, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para inibir a conversão de colina em trimetilamina (TMA) e reduzir o nível de TMAO em um indivíduo, em que a composição compreende iodeto de ciclopropano-dimetil-etanolamina e brometo de N,Ndimetil-N-(prop-2-in-1-il)ciclopropanamínio.

2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que um nível elevado de TMAO está no sangue, plasma, soro ou urina, e combinações destes.