BR112018013585B1

BR112018013585B1 - Composto, composição farmacêutica, método para sintetizar um composto, uso de um composto e kit

Info

Publication number: BR112018013585B1
Application number: BR112018013585-2A
Authority: BR
Inventors: Patrick Naxos Page; Matthias Schwarz; Catherine Jorand-Lebrun; Anna Quattropani; Vincent Pomel
Original assignee: Merck Serono S.A
Priority date: 2017-01-04
Filing date: 2017-01-04
Publication date: 2024-03-26

Abstract

A invenção fornece o éster de L-valinato de um derivado de hidroxipropiltiazolidina carboxamida de fórmula (I), (2S)-3-([1,1'-bifenil]-4-ilsulfonil)-N-[(1S)-3-hidróxi-1-fenilpropil]-1,3- tiazolidina-2-carboxamida, assim como os sais e polimorfos cristalinos dos mesmos. O composto inibe o receptor da prostaglandina F (PGF2alfa) e é útil no tratamento de distúrbios como trabalho de parto prematuro no estágio inicial da gestação ou dismenorreia.

Description

Campo da Invenção

[001] A invenção se refere a composições químicas, como compostos, sais e polimorfos cristalinos, que são capazes de se ligar e inibir a atividade do receptor de prostaglandina F2α (PGF2α), bem como métodos para impedir o trabalho de parto prematuro no estágio inicial da gestação pela administração destas composições para um paciente com necessidade de tratamento.

Antecedentes da Invenção

[002] O parto prematuro representa uma causa prevalente de mortalidade perinatal no mundo desenvolvido e ocorre em aproximadamente 7% a 10% de todos os partos (Berkowitz et al. Epidemiol. Rev. 15: 414-443 (1993)). A morbidade severa, especialmente a síndrome do desconforto respiratório, a hemorragia intraventricular, a displasia broncopulmonar e a enterocolite necrosante, são muito mais comuns em bebês prematuros que em bebês que nascem no tempo certo. O comprometimento de longo prazo, como paralisia cerebral, deficiência visual e perda auditiva, também é mais comum em bebês prematuros. Atualmente, o nascimento prematuro continua sendo uma das principais causas de mortalidade e morbidade infantil nos Estados Unidos, onde, apesar das melhorias significativas na medicina obstétrica, a taxa de mortalidade infantil é maior do que em muitos outros países industrializados, causando custos superiores a US $5 bilhões por ano para cuidados intensivos neonatais de bebês com baixo peso ao nascer. Os custos reais associados a esse atendimento são ainda maiores quando se leva em consideração a prestação de cuidados de saúde relacionados ao parto prematuro, como síndrome do desconforto respiratório, problemas cardíacos, diminuiu drasticamente. A prevenção do trabalho de parto prematuro é difícil e, embora a terapia tocolítica continue sendo o principal método de controle do trabalho de parto prematuro, não há concordância universal quanto ao seu valor nessa condição. Os agentes tocolíticos disponíveis por si só não prolongam o trabalho de parto por mais de 48 horas, e a maioria desses agentes não tem seletividade uterina e pode, portanto, causar efeitos colaterais potencialmente graves, tanto para a mãe quanto para o feto.

Fundamentalmente, o trabalho de parto no tempo certo e o prematuro são processos semelhantes já que eles compartilham um ponto final fisiológico comum, caracterizado por contrações uterinas, dilatação cervical e ativação das membranas fetais. As diferenças estão na idade gestacional em que esses processos ocorrem e nos mecanismos pelos quais eles são ativados. Acredita- se que o trabalho de parto no tempo correto resulte da ativação fisiológica da via terminal, enquanto que o trabalho de parto prematuro é uma condição patológica caracterizada por múltiplas etiologias nas quais um ou mais componentes dessa via são ativados de forma aberrante.

A contratilidade uterina é estimulada ou inibida por vários receptores nas células miometriais. É hipotetizado que a ativação do miométrio resulta da expressão coordenada de proteínas associadas à contração (CAPs), incluindo actina, miosina, conexina-43 e os receptores para oxitocina e prostaglandinas. Em geral, os receptores que provocam a entrada de cálcio ou a liberação de cálcio das reservas intracelulares estimulam a contratilidade. No entanto, os receptores acoplados à produção de nucleotídeos cíclicos, como o monofosfato de adenosina cíclico (cAMP), relaxam o útero. Por exemplo, os receptores de oxitocina e prostaglandina F (FP) são estimuladores, enquanto os receptores adrenérgicos β2 e receptores de prostaglandinas E2 acoplados à formação de cAMP são inibidores.

Nos tecidos uterinos, as prostaglandinas E2 (PGE2) e F2α (PGF2α) demonstraram induzir alterações cervicais e induzir a contratilidade uterina, dois eventos chaves na fisiologia do parto e parturição. A ativação do receptor de FP no miométrio humano por PGF2α resulta na elevação da concentração intracelular de cálcio, que, por sua vez, leva à contração do músculo da célula lisa uterina (Abramovitz et al. J. Biol. Chem. 269:2632-2636 (1994) e Senior et al. Br. J. Pharmacol. 108:501-506 (1993)). Os receptores de FP são sobrerregulados nos tecidos uterinos em direção para o parto em tempo certo (Al-Matubsi et al. Biol. Reprod. 65: 1029-1037 (2001)). Os inibidores da síntese de prostaglandinas (como indometacina e nimesulida) mostraram algum efeito tocolítico mas não estão desprovidos de efeitos secundários e o seu uso não licenciado na clínica aumentou as preocupações sobre segurança fetal (Norton et al. New Engl. J. Med. 329:1602-1067 (1993) e Peruzzi et al. New Engl. J. Med. 354:1615 (1999)). Permanece a necessidade de desenvolver terapêuticas com seletividade miometrial que permitam a inibição duradoura das contrações uterinas que levam ao trabalho de parto e que prolongam a gravidez até um estágio em que o aumento da maturação fetal aumenta as chances de sobrevivência.

Sumário da Invenção

A invenção abrange alfa-amino ésteres de um derivado de hidroxipropiltiazolidina carboxamida, bem como os seus sais, que são capazes de antagonizar a interação entre a prostaglandina F2α (PGF2α) e o receptor da prostaglandina F. Estes compostos podem ser administrados a um indivíduo, tal como um indivíduo do sexo feminino humana grávida, a fim de tratar ou impedir o trabalho de parto prematuro. A invenção fornece adicionalmente métodos para sintetizar estes compostos, bem como métodos para preparar as suas formas cristalinas.

Em um primeiro aspecto, a invenção fornece um composto representado pela fórmula (I),(3S)-3-({[(2S)-3-(bifenil-4-ilsulfonil)-1,3-tiazolidin-2-il]carbonil}-amino)-3- (4-fluorofenil)propil L-valinato, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, o composto é representado pela fórmula (III), cloridrato de (3S)-3-({[(2S)-3-(bifenil-4-ilsulfonil)-1,3-tiazolidin-2-il]carbonil}-amino)-3-(4-fluorofenil)propil L-valinato.

Em algumas modalidades, o composto se liga ao receptor da prostaglandina F2α humana com uma afinidade de cerca de 1 nM. Os compostos da invenção demonstram a capacidade de se ligar seletivamente aos receptores da prostaglandina F, como prostaglandina F2α, diante de outros subtipos de receptores de prostaglandinas. Por exemplo, os compostos da invenção apresentam uma afinidade para receptor de prostaglandina F2α que é cerca de 10-vezes maior que a observada para receptor de prostaglandina E2. Adicionalmente, os compostos da invenção apresentam uma afinidade para receptor de prostaglandina F2α que é cerca de 100-vezes ou acima (por exemplo, de cerca de 100-vezes a cerca de 1.000-vezes, como cerca de 100- vezes, 110-vezes, 120-vezes, 130-vezes, 140-vezes, 150-vezes, 160-vezes,170-vezes, 180-vezes, 190-vezes, 200-vezes, 210-vezes, 220-vezes, 230-vezes, 240-vezes, 250-vezes, 260-vezes, 270-vezes, 280-vezes, 290-vezes,300-vezes, 310-vezes, 320-vezes, 330-vezes, 340-vezes, 350-vezes, 360- vezes, 370-vezes, 380-vezes, 390-vezes, 400-vezes, 410-vezes, 420-vezes, 430-vezes, 440-vezes, 450-vezes, 460-vezes, 470-vezes, 480-vezes, 490- vezes, 500-vezes, 510-vezes, 520-vezes, 530-vezes, 540-vezes, 550-vezes, 560-vezes, 570-vezes, 580-vezes, 590-vezes, 600-vezes, 610-vezes, 620- vezes, 630-vezes, 640-vezes, 650-vezes, 660-vezes, 670-vezes, 680-vezes, 690-vezes, 700-vezes, 710-vezes, 720-vezes, 730-vezes, 740-vezes, 750- vezes, 760-vezes, 770-vezes, 780-vezes, 790-vezes, 800-vezes, 810-vezes, 820-vezes, 830-vezes, 840-vezes, 850-vezes, 860-vezes, 870-vezes, 880- vezes, 890-vezes, 900-vezes, 910-vezes, 920-vezes, 930-vezes, 940-vezes, 950-vezes, 960-vezes, 970-vezes, 980-vezes, 990-vezes, 1.000-vezes, ou acima) maior que para outros subtipos de receptores de prostaglandinas, como subtipos de receptor de prostaglandina E1, E3, E4, D1, D2, I1, e I2. Em algumas modalidades, o composto é solúvel em solução aquosa a uma concentração de cerca de 300 μg/mL a cerca de 500 μg/mL, como a uma concentração de cerca de 380 μg/mL.

Em algumas modalidades, o composto inibe a síntese de trifosfato de inositol em uma célula, como uma célula de mamífero. Em algumas modalidades, a célula de mamífero é uma célula humana, como uma célula miometrial. Em algumas modalidades, a célula miometrial é um miócito uterino. Em algumas modalidades, o composto induz uma redução na amplitude das contrações uterinas em um indivíduo após administração do composto ao indivíduo. Por exemplo, o composto pode induzir uma redução de cerca de 40% a cerca de 50% em relação a uma medição da amplitude das contrações uterinas no indivíduo registrada antes da administração. Em algumas modalidades, o composto apresenta uma meia vida em um indivíduo de cerca de 1 a cerca de 4 horas após a administração do composto ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto atinge uma concentração plasmática máxima em um indivíduo dentro de cerca de 0,25 a cerca de 2 horas após a administração do composto ao indivíduo.

Em algumas modalidades, o indivíduo é um mamífero. Em algumas modalidades, o mamífero é um humano. Em algumas modalidades, o mamífero é um não humano, como canino ou um rato. Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo oralmente. Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo intravenosamente.

Em um outro aspecto, a invenção abrange um composto representado pela fórmula (III) em que o composto está em um estado cristalino.

Em algumas modalidades, o composto apresenta picos de difração de raios-X de pó característicos a cerca de 7,0° 2θ, cerca de 8,1° 2θ, cerca de 10,0° 2θ, cerca de 20,1° 2θ, cerca de 21,0° 2θ, e cerca de 23,5° 2θ. Em algumas modalidades, o composto adicionalmente apresenta Picos de difração de raios-X de pó a cerca de 12,0° 2θ, cerca de 13,1° 2θ, cerca de 14,1° 2θ, cerca de 16,4° 2θ, cerca de 18,4° 2θ, e cerca de 29,5° 2θ. Em algumas modalidades, o composto é caracterizado por um espectro de difração de raios- X de pó substancialmente como descrito em qualquer uma das Figuras 19, 22, 29, 45-49, e 54. Por exemplo, em algumas modalidades, o composto é caracterizado por um espectro de difração de raios-X de pó substancialmente como descrito na Figura 49.

Em algumas modalidades, o composto apresenta picos de ressonância magnética nuclear 1H (NMR) centrados a cerca de 1,1 ppm, cerca de 3,3 ppm, cerca de 4,9 ppm, cerca de 5,4 ppm, cerca de 7,1 ppm, cerca de 7,7 ppm, cerca de 7,9 ppm, e cerca de 8,0 ppm. Em algumas modalidades, o composto é caracterizado por a 1H NMR espectro de substancialmente como descrito na Figura 21.

Em algumas modalidades, o composto apresenta uma endoterma de cerca de 145°C a cerca de 147°C como medido por calorimetria de varredura diferencial. Em algumas modalidades, o composto apresenta uma endoterma adicional a cerca de 214°C como medido por calorimetria de varredura diferencial. Em algumas modalidades, o composto é caracterizado por uma curva de calorimetria de varredura diferencial substancialmente como descrito na Figura 20, Em algumas modalidades, o composto apresenta uma endoterma adicional a cerca de 228°C como medido por calorimetria de varredura diferencial. Em algumas modalidades, o composto é caracterizado por uma curva de calorimetria de varredura diferencial substancialmente como descrito na Figura 23.

Em algumas modalidades, o composto apresenta uma perda de peso de cerca de 0,2% a cerca de 0,6% quando aquecido de 25°C a 100°C como medido por análise termogravimétrica. Em algumas modalidades, o composto apresenta uma perda de peso de cerca de 2,5% a cerca de 3,5% quando aquecido de 100°C a 160°C como medido por análise termogravimétrica. Em algumas modalidades, o composto apresenta uma curva de análise termogravimétrica substancialmente como descrito na Figura 24.

Em um aspecto adicional, a invenção fornece uma composição farmacêutica contendo o composto de qualquer um dos aspectos descritos acima. A composição farmacêutica pode, opcionalmente, conter um ou mais excipientes. Em algumas modalidades, o composto tem uma pureza de pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 99,9%, por exemplo, como determinado por cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) ou espectroscopia de NMR. Em algumas modalidades, o composto e/ou composição farmacêutica é formulado para administração oral a um indivíduo. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é um comprimido, cápsula, cápsula de gel, pó, solução líquida ou suspensão líquida. Em algumas modalidades, o composto e/ou composição farmacêutica é formulado para administração intravenosa a um indivíduo.

Em algumas modalidades, a composição farmacêutica contém dois ou mais agentes terapêuticos, como um composto da invenção (por exemplo, um composto representado pela fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como um composto representado pela fórmula (III)) e um agente terapêutico adicional. Por exemplo, a composição farmacêutica pode conter dois ou mais agentes terapêuticos misturados uns com os outros para coadministração a um paciente, como para tratar ou impedir de parto prematuro. Uma composição farmacêutica da invenção pode ser administrada a um indivíduo para retardar o início do parto em um indivíduo, por exemplo, por um ou mais dias ou semanas, como de cerca de 1 dia a cerca de 16 semanas (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, ou 30 dias, ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, ou 16 semanas). Em algumas modalidades, o indivíduo está passando por trabalho de parto prematuro. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é administrada ao indivíduo (por exemplo, um indivíduo humana) antes do início do trabalho de parto prematuro. Uma composição farmacêutica da invenção pode ser administrada a um indivíduo (por exemplo, um indivíduo humana) para impedir o parto antes do parto cesariana. Uma composição farmacêutica da invenção pode ser administrada a um indivíduo (por exemplo, um indivíduo humana) para o tratamento ou prevenção da dismenorreia. Uma composição farmacêutica da invenção pode ser administrada a um indivíduo, como um indivíduo humana do sexo feminino grávida, para aliviar um ou mais sintomas associados ao trabalho de parto, como sangramento vaginal e ruptura das membranas uterinas.

Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um agente tocolítico adicional.

Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um agente tocolítico adicional. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (III) e um agente tocolítico adicional.

Em algumas modalidades, o agente tocolítico adicional é um antagonista do receptor de oxitocina, como atosibana, retosibana, barusibana, epelsibana e nolasibana, ou uma ou mais variantes, formulações, formas cristalinas, ou derivados das mesmas.

Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e atosibana. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (III) e atosibana. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e uma variante de atosibana, como uma variante descrita no documento de Patente US 4.504.469 ou 4.402.942, as divulgações de cada um dos quais sendo incorporadas aqui por referência. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (III) e uma variante de atosibana, como uma variante descrita no documento de Patente US 4.504.469 ou 4.402.942.

Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e retosibana. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (III) e retosibana. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e uma variante de retosibana, como uma variante descrita no documento de Patente US 7.514.437; 8.367.673; 8.541.579; 8.071.594; 8.357.685; 8.937.179; ou US 2016/0074413, as divulgações de cada um dos quais sendo incorporadas aqui por referência. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (III) e uma variante de retosibana, como uma variante descrita no documento de Patente US 7.514.437; 8.367.673; 8.541.579; 8.071.594; 8.357.685; 8.937.179; ou US 2016/0074413.

Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e barusibana. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (III) e barusibana. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e uma variante de barusibana, como uma variante descrita no documento de Patente US 6.143.722; 7.091.314; 7.816.489; ou US 2016/0175283, as divulgações de cada um dos quais sendo incorporadas aqui por referência. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (III) e uma variante de barusibana, como uma variante descrita no documento de Patente US 6.143.722; 7.091.314; 7.816.489; ou US 2016/0175283.

Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e epelsibana. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (III) e epelsibana. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e uma variante de epelsibana, como uma variante descrita no documento de Patente US 7.514.437; 8.367,673; 8.541.579; 7.550.462; 7.919.492; 8.202,864; 8.742.099; 9.408.851; 8.716.286; ou 8.815.856, as divulgações de cada um dos quais sendo incorporadas aqui por referência. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (III) e uma variante de epelsibana, como uma variante descrita no documento de Patente US 7.514.437; 8.367.673; 8.541.579; 7.550.462; 7.919.492; 8.202.864; 8.742.099; 9.408.851; 8.716.286; ou 8.815.856.

Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e nolasibana. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (III) e nolasibana. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e uma variante, formulação, forma cristalina de nolasibana, como uma variante, formulação, forma cristalina descrita na Patente US 7.115.754 ou Publicação de Pedido de Patente US 2015/0073032; 2015/0164859; ou 2016/0002160, as divulgações de cada um dos quais sendo incorporadas aqui por referência. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (III) e uma variante, formulação, forma cristalina de nolasibana, como uma variante, formulação, forma cristalina descrita na Patente US 7.115.754 ou Publicação de Pedido de Patente US 2015/0073032; 2015/0164859; ou 2016/0002160.

Em algumas modalidades, o agente tocolítico adicional é um betamimético, como terbutalina, ritodrina, hexoprenalina, albuterol, fenoterol, nilidrina, ou orciprenalina.

Em algumas modalidades, o agente tocolítico adicional é um inibidor dos canais de cálcio, como a di-hidropiridina. Em algumas modalidades, o inibidor de canais de cálcio é nifedipina. Em algumas modalidades, o inibidor de canais de cálcio é nicardipina.

Em algumas modalidades, o agente tocolítico adicional é um sal de magnésio, como sulfato de magnésio.

Em algumas modalidades, o agente tocolítico adicional é um doador de óxido nítrico, como nitroglicerina.

Em algumas modalidades, o agente tocolítico adicional é um antagonista do receptor de oxitocina, como atosibana, retosibana, barusibana, epelsibana, nolasibana, ou uma variante, formulação, forma cristalina, ou derivado das mesmas, por exemplo, como descrito aqui.

Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é formulado para administração oral, e o agente tocolítico adicional é formulado para administração oral. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é formulado para administração intravenosa, e o agente tocolítico adicional é formulado para administração intravenosa. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é formulado para administração oral, e o agente tocolítico adicional é formulado para administração intravenosa. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é formulado para administração intravenosa, e o agente tocolítico adicional é formulado para administração oral. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é formulado para administração oral, e o agente tocolítico adicional é formulado para administração intramuscular. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é formulado para administração intravenosa, e o agente tocolítico adicional é formulado para administração intramuscular.

Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (III) é formulado para administração oral, e o agente tocolítico adicional é formulado para administração oral. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (III) é formulado para administração intravenosa, e o agente tocolítico adicional é formulado para administração intravenosa. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (III) é formulado para administração oral, e o agente tocolítico adicional é formulado para administração intravenosa. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (III) é formulado para administração intravenosa, e o agente tocolítico adicional é formulado para administração oral. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (III) é formulado para administração oral, e o agente tocolítico adicional é formulado para administração intramuscular. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (III) é formulado para administração intravenosa, e o agente tocolítico adicional é formulado para administração intramuscular.

Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é progesterona ou uma variante ou derivado da mesma, como caproato de 17-α- hidroxprogesterona.

Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e progesterona ou caproato de 17-α-hidroxiprogesterona. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é formulado para administração oral e a progesterona ou caproato de 17-α-hidroxiprogesterona é formulada para administração intravaginal. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é formulado para administração intravenosa e a progesterona ou caproato de 17-α-hidroxiprogesterona é formulada para administração intravaginal. Em algumas modalidades, ambos dentre o composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e a progesterona ou caproato de 17-α-hidroxiprogesterona são formulados para administração oral. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é formulado para administração intravenosa e a progesterona ou caproato de 17-α-hidroxiprogesterona é formulada para administração oral.

Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (III) e progesterona ou caproato de 17-α- hidroxiprogesterona. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (III) é formulado para administração oral e a progesterona ou caproato de 17-α-hidroxiprogesterona é formulada para administração intravaginal. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (III) é formulado para administração intravenosa e a progesterona ou caproato de 17-α- hidroxiprogesterona é formulada para administração intravaginal. Em algumas modalidades, ambos dentre o composto representado pela fórmula (III) e a progesterona ou caproato de 17-α-hidroxiprogesterona são formulados para administração oral. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (III) é formulado para administração intravenosa e a progesterona ou caproato de 17-α-hidroxiprogesterona é formulada para administração oral.

Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um corticosteroide. Em algumas modalidades, o corticosteroide é betametasona. Em algumas modalidades, o corticosteroide é dexametasona. Em algumas modalidades, o corticosteroide é hidrocortisona. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é formulado para administração oral e o corticosteroide (por exemplo, betametasona, dexametasona, ou hidrocortisona) é formulado para administração intramuscular. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é formulado para administração intravenosa e o corticosteroide (por exemplo, betametasona, dexametasona, ou hidrocortisona) é formulado para administração intramuscular. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é formulado para administração oral e o corticosteroide (por exemplo, betametasona, dexametasona, ou hidrocortisona) é formulado para administração oral. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é formulado para administração intravenosa e o corticosteroide (por exemplo, betametasona, dexametasona, ou hidrocortisona) é formulado para administração oral. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (III) é formulado para administração oral e o corticosteroide (por exemplo, betametasona, dexametasona, ou hidrocortisona) é formulado para administração intramuscular. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (III) é formulado para administração intravenosa e o corticosteroide (por exemplo, betametasona, dexametasona, ou hidrocortisona) é formulado para administração intramuscular. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (III) é formulado para administração oral e o corticosteroide (por exemplo, betametasona, dexametasona, ou hidrocortisona) é formulado para administração oral. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (III) é formulado para administração intravenosa e o corticosteroide (por exemplo, betametasona, dexametasona, ou hidrocortisona) é formulado para administração oral.

Em um outro aspecto, a invenção fornece um método para sintetizar um composto representado pela fórmula (I)ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo através da reação de um precursor representado pela fórmula (IV) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo através da reação de precursor representado pela fórmula (V) para formar um amino éster, em que X é um grupo de proteção. Em algumas modalidades, o método inclui a desproteção do amino éster. Em algumas modalidades, o composto é representado pela fórmula (III).

Em algumas modalidades, o método inclui reagir o amino éster com o reagente capaz de desproteger o amino éster. Em algumas modalidades, o grupo de proteção é selecionado do grupo que consiste em terc-butoxicarbonil, tritil, 4-monometoxitritil, 4-metiltritil, 3,5-dimetoxifenilisopropoxicarbonil, 2-(4- bifenil)isopropoxicarbonil, 2-nitrofenilsulfenil, 9-fluorenilmetoxicarbonil, 2-(4 nitrofoneilsulfonil)etoxicarbonil, (1,1-dioxobenzo[b]tiofeno-2-il)metoxicarbonil, 1- (4,4-dimetil-2,6-dioxociclo-hex-1-ilideno)-3-metilbutil, 2,7-di-terc-butil-9- fluorenilmetoxicarbonil, 2-fluoro-9-fluorenilmetoxicarbonil, 2-monoiso-octil-9- fluorenilmetoxicarbonil, 2,7-di-iso-octil-9-fluorenilmetoxicarbonil, tetracloroftaloil, tetrafluoroborato de 2-[fenil(metil)sulfônio]etiloxicarbonil, etanossulfoniletoxicarbonil, 2-(4-sulfofenilsulfonil)etoxicarbonil, benziloxicarbonil, aliloxicarbonil, o-nitrobenzenossulfonil, 2,4- dinitrobenzenossulfonil, benzotiazol-2-sulfonil, 2,2,2-tricloroetiloxicarbonil, ditiasuccinoil, p-nitrobenziloxicarbonil, um ácido de α-azido, propargiloxicarbonil, 9-(4-bromofenil)-9-fluorenil, azidometoxicarbonil, hexafluoroacetona, 2-clorobenziloxicarbonil, trifluoroacetil, 2- (metilsulfonil)etoxicarbonil, fenildissulfaniletiloxicarbonil, e 2- piridildissulfaniletiloxicarbonil.

Em algumas modalidades, o reagente é selecionado do grupo que consiste em ácido metanossulfônico, ácido clorídrico, ácido trifluoroacético, ácido acético, piperidina, 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno, morfolina, hexametilenoimina, amônia, dietilamina, piperazina, tris(2-aminoetil)amina, hidrazina, 1-metilpirrolidina, carbonato hidrogenado de sódio, hidróxido de sódio, hidróxido de bário, carbonato de sódio, hidrogênio molecular, ácido bromídrico, tribrometo de boro, tetraquis(trifenilfosfina)paládio, tiofenol, β- mercaptoetanol, ácido 2-mercapto acético, amálgama de alumínio, zinco, ácido hipofosforoso, boro-hidreto de sódio, N-mercaptoacetamida, cloreto de estanho (II), trimetilfosfina, tributilfosfina, trifenilfosfina, tetratiomolibdato de benziltrietilamônio, acetato de paládio(II), ácido hidrossulfúrico, cloreto de trimetilsilila, trifluorometanossulfonato de trimetilsilila, e ácido trifluorometanossulfônico.

Em algumas modalidades, o grupo de proteção é terc-butoxicarbonil e o reagente é selecionado do grupo que consiste em ácido metanossulfônico, ácido clorídrico, e ácido trifluoroacético, como ácido metanossulfônico.

Em algumas modalidades, o método inclui expor o amino éster à radiação eletromagnética. Em algumas modalidades, o grupo de proteção é selecionado do grupo que consiste em o-nitrobenziloxicarbonil, 4- nitroveratriloxicarbonil, 2-(2-nitrofenil)propiloxicarbonil, e 2-(3,4-metilenodioxi-6- nitrofenil)propiloxicarbonil. Em algumas modalidades, a radiação eletromagnética é caracterizada por um comprimento de onda de cerca de 300 a cerca de 400 nm.

Em algumas modalidades, o método inclui reagir o precursor representado pela fórmula (IV) com o precursor representado pela fórmula (V) e uma di-imida. Em algumas modalidades, a di-imida é selecionada do grupo que consiste em 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodi-imida, N,N’-di- isopropilcarbodi-imida, e N,N’-diciclo-hexilcarbodi-imida. Em algumas modalidades, a di-imida é 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodi-imida. Em algumas modalidades, o método inclui reagir o precursor representado pela fórmula (IV) com o precursor representado pela fórmula (V) e um derivado de benzotriazol, como um derivado de benzotriazol selecionado do grupo que consiste em 1-hidroxibenzotriazol, 6-cloro-1-hidroxibenzotriazol, e 1-hidróxi-7- azabenzotriazol. Em algumas modalidades, o derivado de benzotriazol é 1- hidroxibenzotriazol.

Em algumas modalidades, o método inclui reagir o precursor representado pela fórmula (IV) com o precursor representado pela fórmula (V) e uma base, como N,N-dimetilaminopiridina.

Em algumas modalidades, o método inclui sintetizar o precursor representado pela fórmula (IV) através da reação de um precursor representado pela fórmula (VI) com um precursor representado pela fórmula (VII).

Em algumas modalidades, o método inclui reagir o precursor representado pela fórmula (VI) com o precursor representado pela fórmula (VII) e uma ou mais bases. Em algumas modalidades, as uma ou mais bases são selecionadas do grupo que consiste em di-isopropiletilamina, trietilamina, e N,N-dimetilaminopiridina.

Em algumas modalidades, o método inclui reagir o precursor representado pela fórmula (VI) com o precursor representado pela fórmula (II), di-isopropiletilamina, e N,N-dimetilaminopiridina.

Em um aspecto adicional, a invenção fornece um método para preparar um composto representado pela fórmula (III), em que o método inclui misturar um composto representado pela fórmula (I)

Em algumas modalidades, o ácido clorídrico é ácido clorídrico aquoso. O ácido clorídrico aquoso pode ser preparado, por exemplo, por diluição do ácido clorídrico em água, como água diluída ou desionizada. Em algumas modalidades, o método inclui preparar o composto representado pela fórmula (III) em um estado cristalino.

Em algumas modalidades, o método inclui dissolver o composto representado pela fórmula (I) em etanol. Em algumas modalidades, o método inclui misturar o ácido clorídrico com etanol. Em algumas modalidades, o método inclui misturar o ácido clorídrico com acetato de etila. Em algumas modalidades, o método inclui adicionar o composto representado pela fórmula (I) ao ácido clorídrico durante um período de cerca de 20 a cerca de 30 minutos para formar uma mistura. Em algumas modalidades, o método inclui manter a temperatura da mistura a cerca de 15°C a cerca de 25°C durante a adição. Em algumas modalidades, o método inclui reduzir a temperatura da mistura a cerca de 5°C após a adição. Em algumas modalidades, o método inclui agitar a mistura durante cerca de 50 minutos a cerca de 70 minutos a cerca de 0°C a cerca de 5°C após a redução.

Em algumas modalidades, o método inclui misturar o composto representado pela fórmula (I) e o ácido clorídrico em quantidades equimoleculares.

Em um outro aspecto, a invenção abrange um composto produzido por qualquer um dos métodos descritos acima.

Em um aspecto adicional, a invenção fornece um método para tratar trabalho de parto prematuro em um indivíduo através da administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto ou composição farmacêutica de qualquer um dos aspectos da invenção descritos acima.

Em um aspecto adicional, a invenção fornece um método para impedir trabalho de parto prematuro em um indivíduo através da administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto ou composição farmacêutica de qualquer um dos aspectos da invenção descritos acima.

Em um outro aspecto, a invenção fornece um método para impedir o trabalho de parto antes do parto cesariana em um indivíduo através da administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto ou composição farmacêutica de qualquer um dos aspectos da invenção descritos acima.

Em um outro aspecto, a invenção fornece um método para tratar ou impedir a dismenorreia em um indivíduo através da administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto ou composição farmacêutica de qualquer um dos aspectos da invenção descritos acima.

Em um outro aspecto, a invenção fornece um método para tratar ou impedir a endometriose em um indivíduo através da administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto ou composição farmacêutica de qualquer um dos aspectos da invenção descritos acima.

Em algumas modalidades, o indivíduo é caracterizado por uma idade gestacional de cerca de 24 a cerca de 34 semanas. Em algumas modalidades, o indivíduo apresenta uma redução da amplitude das contrações uterinas após a administração, como uma redução de cerca de 40% a cerca de 50% (por exemplo, cerca de 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, ou 50%) em relação a uma medição da amplitude das contrações uterinas em um indivíduo registrada antes da administração. Em algumas modalidades, o composto apresenta uma meia vida de cerca de 1 a cerca de 4 horas no indivíduo (por exemplo, cerca de 1 hora, 1,1 hora, 1,2 hora, 1,3 hora, 1,4 hora, 1,5 hora, 1,6 hora, 1,7 hora, 1,8 hora, 1,9 hora, 2,0 horas, 2,1 horas, 2,2 horas, 2,3 horas, 2,4 horas, 2,5 horas, 2,6 horas, 2,7 horas, 2,8 horas, 2,9 horas, 3,0 horas, 3,1 horas, 3,2 horas, 3,3 horas, 3,4 horas, 3,5 horas, 3,6 horas, 3,7 horas, 3,8 horas, 3,9 horas, ou 4,0 horas). Em algumas modalidades, o composto atinge uma concentração plasmática máxima no indivíduo dentro de cerca de 0,25 a cerca de 2 horas da administração (por exemplo, cerca de 0,25 hora, 0,3 hora, 0,4 hora, 0,5 hora, 0,6 hora, 0,7 hora, 0,8 hora, 0,9 hora, 1,0 hora, 1,1 hora, 1,2 hora, 1,3 hora, 1,4 hora, 1,5 hora, 1,6 hora, 1,7 hora, 1,8 hora, 1,9 hora, ou 2,0 horas). Em algumas modalidades, o indivíduo é um mamífero, como um humano.

Em algumas modalidades, o método inclui administrar oralmente o composto ou composição farmacêutica ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método inclui administrar intravenosamente o composto ou composição farmacêutica ao indivíduo.

Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo em combinação com um agente terapêutico adicional. Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo em combinação com um agente tocolítico adicional.

Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo em combinação com um antagonista do receptor de oxitocina. Em algumas modalidades, o método inclui administrar oralmente o antagonista do receptor de oxitocina ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método inclui administrar intravenosamente o antagonista do receptor de oxitocina ao indivíduo. O composto pode ser administrado ao indivíduo ao mesmo tempo que o antagonista do receptor de oxitocina é administrado. Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo antes da administração do antagonista do receptor de oxitocina ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo após a administração do antagonista do receptor de oxitocina ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto é misturado com o antagonista do receptor de oxitocina, e esses agentes são administrados ao indivíduo ao mesmo tempo. Em algumas modalidades, o antagonista do receptor de oxitocina é atosibana, retosibana, barusibana, epelsibana, ou nolasibana, ou uma variante, formulação, forma cristalina, ou derivado das mesmas.

Em algumas modalidades, o antagonista do receptor de oxitocina é atosibana, ou uma variante de atosibana, como uma variante descrita no documento de Patente US 4.504.469 ou 4.402.942, as divulgações de cada um dos quais sendo incorporadas aqui por referência.

Em algumas modalidades, o antagonista do receptor de oxitocina é retosibana, ou uma variante de retosibana, como uma variante descrita no documento de Patente US 7.514.437; 8.367.673; 8.541.579; 8.071.594; 8.357.685; 8.937.179; ou US 2016/0074413, as divulgações de cada um dos quais sendo incorporadas aqui por referência.

Em algumas modalidades, o antagonista do receptor de oxitocina é barusibana, ou uma variante de barusibana, como uma variante descrita no documento de Patente US 6.143.722; 7.091.314; 7.816.489; ou US 2016/0175283, as divulgações de cada um dos quais sendo incorporadas aqui por referência.

Em algumas modalidades, o antagonista do receptor de oxitocina é epelsibana, ou uma variante de epelsibana, como uma variante descrita no documento de Patente US 7.514.437; 8.367.673; 8.541.579; 7.550.462; 7.919.492; 8.202.864; 8.742.099; 9.408.851; 8.716.286; ou 8.815.856, as divulgações de cada um dos quais sendo incorporadas aqui por referência.

Em algumas modalidades, o antagonista do receptor de oxitocina é nolasibana, ou uma variante, formulação, forma cristalina de nolasibana, como uma variante, formulação, forma cristalina descrita na Patente US 7.115.754 ou Publicação de Pedido de Patente US 2015/0073032; 2015/0164859; ou 2016/0002160, as divulgações de cada um dos quais sendo incorporadas aqui por referência.

Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo em combinação com um betamimético, como terbutalina, ritodrina, hexoprenalina, albuterol, fenoterol, nilidrina, ou orciprenalina. Em algumas modalidades, o método inclui administrar oralmente o betamimético ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método inclui administrar intravenosamente o betamimético ao indivíduo. O composto pode ser administrado ao indivíduo ao mesmo tempo que o betamimético é administrado. Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo antes da administração do betamimético ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo após administração do betamimético ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto é misturado com o betamimético, e esses agentes são administrados ao indivíduo ao mesmo tempo.

Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo em combinação com um inibidor dos canais de cálcio, como a di-hidropiridina. Em algumas modalidades, o inibidor de canais de cálcio é nifedipina. Em algumas modalidades, o inibidor de canais de cálcio é nicardipina. Em algumas modalidades, o método inclui administrar oralmente o inibidor de canais de cálcio ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método inclui administrar intravenosamente o inibidor de canais de cálcio ao indivíduo. O composto pode ser administrado ao indivíduo ao mesmo tempo que o inibidor de canais de cálcio é administrado. Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo antes da administração do inibidor de canais de cálcio ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo após a administração do inibidor de canais de cálcio ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto é misturado com o inibidor de canais de cálcio, e esses agentes são administrados ao indivíduo ao mesmo tempo.

Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo em combinação com um sal de magnésio, como sulfato de magnésio. Em algumas modalidades, o método inclui administrar intravenosamente o sal de magnésio ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método inclui administra intramuscularmente o sal de magnésio ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método inclui administrar oralmente o sal de magnésio ao indivíduo. O composto pode ser administrado ao indivíduo ao mesmo tempo que o sal de magnésio é administrado. Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo antes da administração do sal de magnésio ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo após a administração do sal de magnésio ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto é misturado com o sal de magnésio, e esses agentes são administrados ao indivíduo ao mesmo tempo.

Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo em combinação com um doador de óxido nítrico, como nitroglicerina. Em algumas modalidades, o método inclui administrar oralmente o doador de óxido nítrico ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método inclui administrar intravenosamente o doador de óxido nítrico ao indivíduo. O composto pode ser administrado ao indivíduo ao mesmo tempo que o doador de óxido nítrico é administrado. Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo antes da administração do doador de óxido nítrico ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo após a administração do doador de óxido nítrico ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto é misturado com o doador de óxido nítrico, e esses agentes são administrados ao indivíduo ao mesmo tempo.

Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo em combinação com progesterona ou uma variante ou derivado da mesma, como caproato de 17-α-hidroxprogesterona. Em algumas modalidades, o método inclui administrar oralmente a progesterona ou uma variante ou derivado da mesma, como caproato de 17-α-hidroxprogesterona, ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método inclui administrar intravaginalmente a progesterona ou uma variante ou derivado da mesma, como caproato de 17-α- hidroxprogesterona, ao indivíduo. O composto pode ser administrado ao indivíduo ao mesmo tempo que a progesterona ou uma variante ou derivado da mesma, como caproato de 17-α-hidroxprogesterona, é administrada. Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo antes da administração de progesterona ou uma variante ou derivado da mesma, como caproato de 17-α-hidroxprogesterona, ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo após a administração da progesterona ou uma variante ou derivado da mesma, como caproato de 17-α- hidroxprogesterona, ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto é misturado com a progesterona ou uma variante ou derivado da mesma, como caproato de 17-α-hidroxprogesterona (por exemplo, em uma formulação oral, entre outras), e esses agentes são administrados ao indivíduo ao mesmo tempo.

Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo em combinação com um corticosteroide. Em algumas modalidades, o corticosteroide é betametasona. Em algumas modalidades, o corticosteroide é dexametasona. Em algumas modalidades, o método inclui administrar oralmente o corticosteroide ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método inclui administra intramuscularmente o corticosteroide ao indivíduo. O composto pode ser administrado ao indivíduo ao mesmo tempo que o corticosteroide é administrado. Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo antes da administração do corticosteroide ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto é administrado ao indivíduo após a administração do corticosteroide ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto é misturado com o corticosteroide (por exemplo, em uma formulação oral, entre outras), e esses agentes são administrados ao indivíduo ao mesmo tempo.

Em algumas modalidades, a invenção fornece um kit contendo o composto ou composição farmacêutica de qualquer um dos aspectos da invenção descritos acima, bem como uma bula. Em algumas modalidades, a bula ensina a usuária do kit a administrar o composto ou composição farmacêutica a um indivíduo que apresenta trabalho de parto prematuro ou está em risco de passar por trabalho de parto prematuro, como um indivíduo que apresenta um ou mais sintomas do trabalho de parto prematuro descritos aqui. Em algumas modalidades, o indivíduo é caracterizado por uma idade gestacional de cerca de 24 a cerca de 34 semanas. Em algumas modalidades, a bula ensina a usuária do kit uma mistura o composto ou composição farmacêutica com uma solução aquosa. Em algumas modalidades, a bula ensina a usuária do kit a administrar oralmente o composto ao indivíduo. Em algumas modalidades, a bula ensina a usuária do kit a administrar intravenosamente o composto ao indivíduo.

Em um aspecto adicional, a invenção fornece uma composição farmacêutica contendo um composto representado pela fórmula (II), 3-([1,1'-bifenil]-4-ilsulfonil)-N-[1-(4-fluorofenil)-3-hidroxipropil]-1,3- tiazolidina-2-carboxamida. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica contém o composto representado pela fórmula (II) e um agente terapêutico adicional. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica contém o composto representado pela fórmula (II) e um agente tocolítico adicional. A composição farmacêutica pode, opcionalmente, conter um ou mais excipientes. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) tem uma pureza de pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 99,9%, por exemplo, como determinado por cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) ou espectroscopia de NMR. Em algumas modalidades, o composto e/ou composição farmacêutica é formulado para administração oral a um indivíduo. Em algumas modalidades, o composto e/ou composição farmacêutica é um comprimido, cápsula, cápsula de gel, pó, solução líquida ou suspensão líquida. Em algumas modalidades, o composto e/ou composição farmacêutica é formulado para administração intravenosa a um indivíduo.

Em algumas modalidades, a composição farmacêutica contém dois ou mais agentes terapêuticos, como o composto representado pela fórmula (II) e um agente terapêutico adicional. Por exemplo, a composição farmacêutica pode conter dois ou mais agentes terapêuticos misturados uns com os outros para coadministração a um paciente, como para tratar ou impedir de parto prematuro. A composição farmacêutica pode ser administrada a um indivíduo para retardar o início do parto em um indivíduo, por exemplo, por um ou mais dias ou semanas, como de cerca de 1 dia a cerca de 16 semanas (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, ou 30 dias, ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, ou 16 semanas). Em algumas modalidades, o indivíduo está passando por trabalho de parto prematuro. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é administrada ao indivíduo (por exemplo, um indivíduo humana) antes do início do trabalho de parto prematuro. A composição farmacêutica pode ser administrada a um indivíduo (por exemplo, um indivíduo humana) para impedir o parto antes do parto cesariana. A composição farmacêutica pode ser administrada a um indivíduo (por exemplo, um indivíduo humana) para o tratamento ou prevenção da dismenorreia. A composição farmacêutica pode ser administrada a um indivíduo, como um indivíduo humana do sexo feminino grávida, para aliviar um ou mais sintomas associados ao trabalho de parto, como sangramento vaginal e ruptura das membranas uterinas.

Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (II) e atosibana. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (II) e uma variante de atosibana, como uma variante descrita no documento de Patente US 4.504.469 ou 4.402.942, as divulgações de cada um dos quais sendo incorporadas aqui por referência.

Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (II) e retosibana. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (II) e uma variante de retosibana, como uma variante descrita no documento de Patente US 7.514.437; 8.367.673; 8.541.579; 8.071.594; 8.357.685; 8.937.179; ou US 2016/0074413, as divulgações de cada um dos quais sendo incorporadas aqui por referência.

Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (II) e barusibana. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (II) e uma variante de barusibana, como uma variante descrita no documento de Patente US 6.143.722; 7.091.314; 7.816.489; ou US 2016/0175283, as divulgações de cada um dos quais sendo incorporadas aqui por referência.

Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (II) e epelsibana. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (II) e uma variante de epelsibana, como uma variante descrita no documento de Patente US 7.514.437; 8.367.673; 8.541.579; 7.550.462; 7.919.492; 8.202.864; 8.742.099; 9.408.851; 8.716.286; ou 8.815.856, as divulgações de cada um dos quais sendo incorporadas aqui por referência.

Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (II) e nolasibana. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (II) e uma variante, formulação, forma cristalina de nolasibana, como uma variante, formulação, forma cristalina descrita na Patente US 7.115.754 ou Publicação de Pedido de Patente US 2015/0073032; 2015/0164859; ou 2016/0002160, as divulgações de cada um dos quais sendo incorporadas aqui por referência.

Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é formulado para administração oral, e o agente tocolítico adicional é formulado para administração oral. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é formulado para administração intravenosa, e o agente tocolítico adicional é formulado para administração intravenosa. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é formulado para administração oral, e o agente tocolítico adicional é formulado para administração intravenosa. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é formulado para administração intravenosa, e o agente tocolítico adicional é formulado para administração oral. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é formulado para administração oral, e o agente tocolítico adicional é formulado para administração intramuscular. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é formulado para administração intravenosa, e o agente tocolítico adicional é formulado para administração intramuscular.

Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é progesterona ou uma variante ou derivado da mesma, como caproato de 17-α- hidroxiprogesterona.

Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende um composto representado pela fórmula (II) e progesterona ou caproato de 17-α- hidroxiprogesterona. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é formulado para administração oral e a progesterona ou caproato de 17-α-hidroxiprogesterona é formulada para administração intravaginal. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é formulado para administração intravenosa e a progesterona ou caproato de 17-α- hidroxiprogesterona é formulada para administração intravaginal. Em algumas modalidades, ambos dentre o composto representado pela fórmula (II) e a progesterona ou caproato de 17-α-hidroxiprogesterona são formulados para administração oral. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é formulado para administração intravenosa e a progesterona ou caproato de 17-α-hidroxiprogesterona é formulada para administração oral.

Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um corticosteroide. Em algumas modalidades, o corticosteroide é betametasona. Em algumas modalidades, o corticosteroide é dexametasona. Em algumas modalidades, o corticosteroide é hidrocortisona. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é formulado para administração oral e o corticosteroide (por exemplo, betametasona, dexametasona, ou hidrocortisona) é formulado para administração intramuscular. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é formulado para administração intravenosa e o corticosteroide (por exemplo, betametasona, dexametasona, ou hidrocortisona) é formulado para administração intramuscular. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é formulado para administração oral e o corticosteroide (por exemplo, betametasona, dexametasona, ou hidrocortisona) é formulado para administração oral. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é formulado para administração intravenosa e o corticosteroide (por exemplo, betametasona, dexametasona, ou hidrocortisona) é formulado para administração oral.

Em um aspecto adicional, a invenção fornece um método para tratar o trabalho de parto prematuro em um indivíduo fornecendo (por exemplo, administrando) ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto representado pela fórmula (II),3-([1,1'-bifenil]-4-ilsulfonil)-N-[1-(4-fluorofenil)-3-hidroxipropil]-1,3- tiazolidina-2-carboxamida, ou uma composição farmacêutica contendo o composto representado pela fórmula (II) de acordo com qualquer um dos aspectos da invenção descritos acima.

Em um aspecto adicional, a invenção fornece um método para impedir trabalho de parto prematuro em um indivíduo fornecendo (por exemplo, administrando) ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto representado pela fórmula (II) ou uma composição farmacêutica contendo o composto representado pela fórmula (II) de acordo com qualquer um dos aspectos da invenção descritos acima.

Em um outro aspecto, a invenção fornece um método para impedir o trabalho de parto antes do parto cesariana em um indivíduo fornecendo (por exemplo, administrando) ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto representado pela fórmula (II) ou uma composição farmacêutica contendo o composto representado pela fórmula (II) de acordo com qualquer um dos aspectos da invenção descritos acima.

Em um outro aspecto, a invenção fornece um método para tratar ou impedir a dismenorreia em um indivíduo fornecendo (por exemplo, administrando) ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto representado pela fórmula (II) ou uma composição farmacêutica contendo o composto representado pela fórmula (II) de acordo com qualquer um dos aspectos da invenção descritos acima.

Em um outro aspecto, a invenção fornece um método para tratar ou impedir a endometriose em um indivíduo fornecendo (por exemplo, administrando) ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto representado pela fórmula (II) ou uma composição farmacêutica contendo o composto representado pela fórmula (II) de acordo com qualquer um dos aspectos da invenção descritos acima.

Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo em combinação com um agente terapêutico adicional. Em algumas modalidades, o composto é fornecido ao indivíduo em combinação com um agente tocolítico adicional. Em algumas modalidades, o composto é fornecido ao indivíduo através da administração o composto ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto é fornecido ao indivíduo através da administração ao indivíduo um pró-fármaco que é metabolizado in vivo, de modo a produzir o composto representado pela fórmula (II).

Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo em combinação com um antagonista do receptor de oxitocina. Em algumas modalidades, o método inclui administrar oralmente o antagonista do receptor de oxitocina ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método inclui administrar intravenosamente o antagonista do receptor de oxitocina ao indivíduo. O composto representado pela fórmula (II) pode ser fornecido ao indivíduo ao mesmo tempo que o antagonista do receptor de oxitocina é administrado. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo antes da administração do antagonista do receptor de oxitocina ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo após a administração do antagonista do receptor de oxitocina ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) ou um pró-fármaco do mesmo é misturado com o antagonista do receptor de oxitocina, e esses agentes são administrados ao indivíduo ao mesmo tempo. Em algumas modalidades, o antagonista do receptor de oxitocina é atosibana, retosibana, barusibana, epelsibana, ou nolasibana, ou uma variante, formulação, forma cristalina, ou derivado das mesmas.

Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo em combinação com um betamimético, como terbutalina, ritodrina, hexoprenalina, albuterol, fenoterol, nilidrina, ou orciprenalina. Em algumas modalidades, o método inclui administrar oralmente o betamimético ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método inclui administrar intravenosamente o betamimético ao indivíduo. O composto representado pela fórmula (II) pode ser fornecido ao indivíduo ao mesmo tempo que o betamimético é administrado. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo antes da administração do betamimético ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo após administração do betamimético ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) ou um pró-fármaco do mesmo é misturado com o betamimético, e esses agentes são administrados ao indivíduo ao mesmo tempo.

Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo em combinação com um inibidor dos canais de cálcio, como a di-hidropiridina. Em algumas modalidades, o inibidor de canais de cálcio é nifedipina. Em algumas modalidades, o inibidor de canais de cálcio é nicardipina. Em algumas modalidades, o método inclui administrar oralmente o inibidor de canais de cálcio ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método inclui administrar intravenosamente o inibidor de canais de cálcio ao indivíduo. O composto representado pela fórmula (II) pode ser fornecido ao indivíduo ao mesmo tempo que o inibidor de canais de cálcio é administrado. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo antes da administração do inibidor de canais de cálcio ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo após a administração do inibidor de canais de cálcio ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) ou um pró-fármaco do mesmo é misturado com o inibidor de canais de cálcio, e esses agentes são administrados ao indivíduo ao mesmo tempo.

Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo em combinação com um sal de magnésio, como sulfato de magnésio. Em algumas modalidades, o método inclui administrar intravenosamente o sal de magnésio ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método inclui administra intramuscularmente o sal de magnésio ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método inclui administrar oralmente o sal de magnésio ao indivíduo. O composto representado pela fórmula (II) pode ser fornecido ao indivíduo ao mesmo tempo que o sal de magnésio é administrado. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo antes da administração do sal de magnésio ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo após a administração do sal de magnésio ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) ou um pró-fármaco do mesmo é misturado com o sal de magnésio, e esses agentes são administrados ao indivíduo ao mesmo tempo.

Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo em combinação com um doador de óxido nítrico, como nitroglicerina. Em algumas modalidades, o método inclui administrar oralmente o doador de óxido nítrico ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método inclui administrar intravenosamente o doador de óxido nítrico ao indivíduo. O composto representado pela fórmula (II) pode ser fornecido ao indivíduo ao mesmo tempo que o doador de óxido nítrico é administrado. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo antes da administração do doador de óxido nítrico ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo após a administração do doador de óxido nítrico ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) ou um pró- fármaco do mesmo é misturado com o doador de óxido nítrico, e esses agentes são administrados ao indivíduo ao mesmo tempo.

Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo em combinação com progesterona ou uma variante ou derivado da mesma, como caproato de 17-α-hidroxprogesterona. Em algumas modalidades, o método inclui administrar oralmente a progesterona ou uma variante ou derivado da mesma, como caproato de 17-α-hidroxprogesterona, ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método inclui administrar intravaginalmente a progesterona ou uma variante ou derivado da mesma, como caproato de 17-α-hidroxprogesterona, ao indivíduo. O composto representado pela fórmula (II) pode ser fornecido ao indivíduo ao mesmo tempo que a progesterona ou uma variante ou derivado da mesma, como caproato de 17-α-hidroxprogesterona, é administrado. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo antes da administração de progesterona ou uma variante ou derivado da mesma, como caproato de 17-α-hidroxprogesterona, ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo após a administração da progesterona ou uma variante ou derivado da mesma, como caproato de 17-α-hidroxprogesterona, ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) ou um pró-fármaco do mesmo é misturado com a progesterona ou uma variante ou derivado da mesma, como caproato de 17-α-hidroxprogesterona (por exemplo, em uma formulação oral, entre outras), e esses agentes são administrados ao indivíduo ao mesmo tempo.

Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo em combinação com um corticosteroide. Em algumas modalidades, o corticosteroide é betametasona. Em algumas modalidades, o corticosteroide é dexametasona. Em algumas modalidades, o método inclui administrar oralmente o corticosteroide ao indivíduo. Em algumas modalidades, o método inclui administra intramuscularmente o corticosteroide ao indivíduo. O composto representado pela fórmula (II) pode ser fornecido ao indivíduo ao mesmo tempo que o corticosteroide é administrado. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo antes da administração do corticosteroide ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) é fornecido ao indivíduo após a administração do corticosteroide ao indivíduo. Em algumas modalidades, o composto representado pela fórmula (II) ou um pró-fármaco do mesmo é misturado com o corticosteroide (por exemplo, em uma formulação oral, entre outras), e esses agentes são administrados ao indivíduo ao mesmo tempo.

Em algumas modalidades, o indivíduo é caracterizado por uma idade gestacional de cerca de 24 a cerca de 34 semanas. Em algumas modalidades, o indivíduo apresenta uma redução da amplitude das contrações uterinas após a administração, como uma redução de cerca de 40% a cerca de 50% (por exemplo, cerca de 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, ou 50%) em relação a uma medição da amplitude das contrações uterinas em um indivíduo registrada antes da administração. Em algumas modalidades, o indivíduo é um mamífero, como um humano.

Definições

Como usado aqui, o termo “cerca de” se refere a um valor que está dentro de 10% acima ou abaixo do valor que está sendo descrito.

Como usado aqui, o termo “afinidade” se refere a resistência de uma interação de ligação entre duas moléculas, como um ligante e um receptor. O termo “Ki”, como usado aqui, pretende se referir à inibição da constante de um antagonista para uma molécula de interesse particular, e é expressa como uma concentração molar (M). Os valores Ki para interações de antagonista-alvo podem ser determinados, por exemplo, usando métodos estabelecidos na técnica. Os métodos que podem ser usados para determinar e a Ki de um antagonista para um alvo molecular incluem experimentos de ligação competitivas, como ensaios de ligação competitivos ao radioligante, por exemplo, como descrito no documento US 8.415.480. O termo “Kd”, como usado aqui, pretende se referir à constante de dissociação, que pode ser obtida, por exemplo, a partir da razão entre a constante de taxa e a dissociação das duas moléculas (Kd) e a constante de taxa de associação entre as duas moléculas (ka) e é expresso como uma concentração molar (M). Os valores de Kd para as interações de receptor-ligante podem ser determinados, por exemplo, usando métodos estabelecidos na técnica. Os métodos que podem ser usados para determinar o Kd de uma interação de receptor-ligante incluem ressonância de plásmon de superfície, por exemplo, através do uso de um sistema biossensor como um sistema BIACORE®.

Como usado aqui, o termo “corticosteroide” se refere a qualquer um dos hormônios esteroides produzidos pelo córtex adrenal ou os seus equivalentes sintéticos. Corticosteroides exemplificadores incluem betametasona, dexametasona e hidrocortisona, entre outros, assim como suas variantes. Os corticosteroides para uso em conjunto com as composições e métodos aqui descritos incluem aqueles capazes de induzir a maturação pulmonar fetal, por exemplo, de modo a prevenir o desenvolvimento da síndrome de dificuldade respiratória em crianças prematuras. Corticosteroides exemplificadores para uso em conjunto com as composições e métodos aqui descritos incluem aqueles descritos em Jobe et al. Am. J. Obstet. Gynecol. 190:878-881 (2004) and Miracle et al. J. Perinat. Med. 36:191-196 (2008), as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência.

Como usado aqui, o termo “cristalino” ou “forma cristalina” significa ter um estado físico que é um arranjo tridimensional regular de átomos, íons, moléculas ou conjuntos moleculares. As formas cristalinas possuem matrizes de rede de blocos de construção chamadas unidades assimétricas que são organizadas de acordo com simetrias bem definidas em células unitárias que são repetidas em três dimensões. Em contraste, o termo “amorfo” ou “forma amorfa” se refere a uma estrutura desorganizada (não ordenada). O estado físico de um composto terapêutico pode ser determinado por técnicas exemplificadoras, como difração de raios-X, microscopia de luz polarizada e/ou calorimetria de varredura diferencial.

Como usado aqui, o termo “endógeno” descreve uma molécula (por exemplo, um polipeptídeo, ácido nucléico ou cofator) que é encontrada naturalmente em um organismo particular (por exemplo, um humano) ou em uma localização particular dentro de um organismo (por exemplo, um órgão, um tecido ou uma célula, como uma célula humana).

Como usado aqui, o termo “exógeno” descreve uma molécula (por exemplo, um polipeptídeo, ácido nucléico ou cofator) que não é encontrado naturalmente em um organismo particular (por exemplo, um humano) ou em uma localização particular dentro de um organismo (por exemplo, um órgão, um tecido ou uma célula, como uma célula humana). Os materiais exógenos incluem aqueles que são fornecidos a partir de uma fonte externa a um organismo ou à matéria cultivada extraída do mesmo.

Como usado aqui, o termo “idade gestacional” descreve o quão longe se encontra ao longo de uma gravidez particular, e é medida desde o primeiro dia do último ciclo menstrual de um paciente do sexo feminino grávida até a data atual. Como usado aqui, o termo “trabalho de parto” (que também pode ser denominado nascimento) se refere a expulsão do feto e da placenta do útero de um indivíduo do sexo feminino grávida. Para uma gravidez normal, o trabalho de parto pode ocorrer em uma idade gestacional de cerca de 40 semanas. “Trabalho de parto prematuro” como usado aqui, se refere a uma condição na qual o trabalho de parto começa mais de três semanas antes do período de gestação completo, que é tipicamente cerca de 40 semanas. Isto é, o trabalho de parto prematuro ocorre em qualquer estágio antes, por exemplo, de 38 semanas de gestação. O trabalho de parto prematuro tipicamente leva à ocorrência de trabalho de parto, ou alterações fisiológicas associadas com trabalho de parto em um indivíduo do sexo feminino grávida, se não for tratado. O trabalho de parto prematuro pode ou não estar associado a sangramento vaginal ou ruptura das membranas uterinas. O trabalho de parto prematuro também pode ser chamado de parto prematuro. A prevenção do trabalho de parto prematuro em um indivíduo irá prolongar o prazo de gravidez e pode, portanto, evitar o parto prematuro, reduzindo assim o risco de mortalidade e morbidade neonatal.

Como usado aqui, o termo “IC50” se refere a concentração de uma substância (antagonista) que reduz a eficácia de um agonista de referência ou a atividade constitutiva de um alvo biológico por 50%, por exemplo, como medido em um ensaio de ligação ao ligante competitivo. Os ensaios de ligação ao ligante competitivos exemplificadores incluem ensaios de ligação de radioligante competitivo, ensaio imunosorvente ligado a enzima competitivo (ELISA) e ensaios baseados em anisotropia de fluorescência, entre outros conhecidos na técnica.

Como usado aqui no contexto de fornecer ou administrar dois ou mais agentes terapêuticos a um indivíduo, a frase "em combinação com" se refere ao fornecimento de dois ou mais agentes terapêuticos a um indivíduo (por exemplo, um indivíduo mamífero, como um humano em questão), por exemplo, simultaneamente ou em momentos diferentes. Por exemplo, um agente terapêutico pode ser administrado a um indivíduo em combinação com outro por administração de ambos os agentes ao indivíduo ao mesmo tempo, como em uma composição farmacêutica única ou em composições separadas que são administradas simultaneamente ao indivíduo (por exemplo, por diferentes vias de administração). Em outro exemplo um agente terapêutico pode ser administrado a um indivíduo em combinação com outro administrando primeiro ao indivíduo um agente terapêutico e subsequentemente administrando o outro agente terapêutico, quer pela mesma via quer por via diferente.

Como usado aqui, o termo “nolasibana” se refere a (3Z,5S)-5- (hidroximatil)-1-[(2'-metil-1,1'-bifenil-4-il)carbonil]pirrolidin-3-ona O-metiloxima,representado pela seguinte fórmula estrutural:

As variantes, formulações e a forma cristalina de nolasibana são descritas, por exemplo, na Patente US 7.115.754 e nas Publicações do Pedido de Patente US 2015/0073032; 2015/0164859; e 2016/0002160, as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência.

Como usado aqui, o termo “biodisponibilidade oral” se refere à fração de um composto administrado a um indivíduo, como um mamífero (por exemplo, um humano) que atinge a circulação sistêmica no indivíduo e que não está sequestrado em um órgão não alvo ou excretado sem absorção através do trato gastrointestinal. O termo se refere a uma concentração no plasma sanguíneo que está integrada ao longo do tempo e é tipicamente expressa como uma percentagem da dose administrada oralmente.

Como usado aqui, o termo “antagonista do receptor de oxitocina” ou “antagonista da oxitocina” se refere a um composto capaz de inibir a interação entre a oxitocina e o receptor da oxitocina, por exemplo, de tal forma que a atividade de uma ou mais moléculas de sinalização a jusante na cascata de transdução do sinal da oxitocina é inibida. Os antagonistas de oxitocina para uso com as composições e métodos aqui descritos incluem compostos que se ligam e inibem o receptor de oxitocina, como atosibana, retosibana, barusibana, epelsibana e nolasibana, bem como variantes, formulações, formas cristalinas e derivados das mesmas, incluindo as aqui descrito, entre outras.

Como usado aqui, o termo “farmaceuticamente aceitável” se refere aos compostos, materiais, composições e/ou formas de dosagem, que são adequados para contato com os tecidos de um indivíduo, como um mamífero (por exemplo, um humano) sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica e outras complicações do problema, forneceis a uma relação de risco/benefício razoável.

Como usado aqui, o termo “composição farmacêutica” significa uma mistura contendo um composto terapêutico a ser administrado a um indivíduo, como um mamífero, por exemplo, um humano, para impedir, tratar ou controlar uma doença ou condição particular que afete o mamífero, como trabalho de parto prematuro ou dismenorreia, entre outros, por exemplo, como aqui descrito.

Como usado aqui, o termo “grupo de proteção” se refere a uma fração química que, quando ligada a um grupo funcional, torna o grupo funcional inerte a uma ou mais reações químicas. Tais reações podem modificar um ou mais substituintes do composto e, na ausência de um grupo de proteção, pode resultar em modificação química indesejável (por exemplo, adição eletrofílica, solvólise, oxidação, redução, ou interconversão de grupo funcional) de uma fração de interesse (por exemplo, uma fração amino, hidroxila, carboxila ou carboxamida). Os grupos de proteção podem, no momento apropriado, ser quimicamente reagidos de modo a regenerar a funcionalidade original. A identidade do grupo de proteção pode ser selecionada de modo a ser compatível com o resto da molécula, por exemplo, de tal modo que o grupo de proteção não seja removido durante outras etapas da síntese ou modificação da molécula, e, opcionalmente, de tal modo que as condições de reação usadas para efetuar a remoção do grupo de proteção não resultam na remoção de diferentes grupos de proteção localizados em outros substituintes na molécula. Exemplos de grupos de proteção incluem aqueles que podem ser covalentemente ligados a, por exemplo, um substituinte amino, como o grupo amino de um amino éster. A remoção subsequente de um grupo de proteção, chamado aqui “desproteção” de uma fração química, pode ser obtida com o uso de reagentes e condições conhecidos na técnica. Exemplos de grupos de proteção incluem, sem limitação, benzil, acetil, oxiacetil, carboxibenzil, 9- fluoreniloxicarbonil, 2-cloro-1-indanilmetoxi-carbonil, benz [f] indeno-3- metoxicarbonil, 2-(terc-butilsulfonil)-2-propeniloxicarbonil, benzotiofeno sulfona- 2-metilcarbonil, terc- butoxicarbonil, terc-amiloxicarbonil, β- trimetilsililetiloxicarbonil, adamantiloxicarbonil, 1-metilciclobutiloxicarbonil, 2-(p- bifenilil)propil-2-oxicarbonil, 2-(p-fenilazofenil)propil-2- oxicarbonil, 2-2-dimetil- 3,5- dimetiloxibenziloxicarbonil, 2-fenilpropil-2-oxicarbonil, benziloxicarbonil, p- toluenossulfonilaminocarbonil, o-nitrofenilsulfenil, ditiasuccinoil, ftaloil, piperidinooxicarbonil, formil, trifluoroacetil, 2,4,6-trimetoxibenzil, 2,3,6-trimetil-4 metoxibenzenossulfonil, terc-butoximatil, pentametilcromanossulfonil, adamantil, β-trimetilsililetil, β-trimetilililetiloxicarbonil, terc-butil, terc-butilbenzil, ciclopentil, trifenilmetil, benziloxicarbonil, formil, e trifluoroacetil, entre outras. Os grupos de proteção podem ser adequados para um determinado substituinte químico. Por exemplo, exemplos de grupos de proteção hidroxila incluem, sem limitação, benzil, p-metoxibenzil, p-nitrobenzil, alil, tritil, dialquilsililéteres, como dimetilsilil éter, e trialquilsilil éteres como trimetilsilil éter, trietilsilil éter, e t-butildimetilsilil éter; ésteres como benzoil, acetil, fenilacetil, formil, mono-, di-, e tri-haloacetil como cloroacetil, dicloroacetil, tricloroacetil, trifluoroacetil; e carbonatos como metil, etil, 2,2,2-tricloroetil, alil, benzil, e p-nitrofenil. Exemplos adicionais de grupos de proteção podem ser encontrados, por exemplo, em Greene e Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d Ed., 1991, John Wiley & Sons, bem como em McOmie, Protective Groups in Organic Chemistri, 1975, Plenum Press, as divulgações de cada um dos quais sendo incorporadas aqui por referência. Outros exemplos de grupos de proteção são descritos, por exemplo, nas Patentes US 3.835.175; 4.508.657; 3.839.396; 4.581.167; 4.460.501; e 4.108.846, as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência.

Como usado aqui no contexto do tratamento terapêutico, os termos "fornece" e "fornecimento" se referem ao fornecimento de um agente terapêutico a um indivíduo (por exemplo, um indivíduo mamífero, como um humano) necessitado de tratamento, como um indivíduo experimentando ou em risco de passar por trabalho de parto prematuro. Um agente terapêutico pode ser fornecido a um indivíduo com necessidade do mesmo, por exemplo, por administração direta do agente terapêutico ao indivíduo ou por administração de um pró-fármaco que é convertido in vivo no agente terapêutico após administração do pró-fármaco ao indivíduo. Os pró-fármacos exemplificadores incluem, sem limitação, ésteres, fosfatos e outras funcionalidades químicas suscetíveis à hidrólise na administração a um indivíduo. Os pró-fármacos incluem aqueles conhecidos na técnica, como e descrito, por exemplo, em Vig et al., Adv. Drug Deliv. Rev. 65:1370-1385 (2013), e Huttunen et al., Pharmacol. Rev. 63:750-771 (2011), as divulgações de cada uma das quais está aqui incorporada por referência.

Como usado aqui, o termo "amostra" se refere a uma amostra (por exemplo, sangue, componente sanguíneo (por exemplo, soro ou plasma), urina, saliva, líquido amniótico, líquido cefalorraquidiano, tecido (por exemplo, placentário ou dérmico), fluido pancreático, amostra de vilosidades coriônicas e células) isoladas de um indivíduo.

Como usado aqui, as frases “se liga especificamente” e “se liga” se referem a uma reação de ligação que é determinante da presença de uma proteína particular em uma população heterogênea de proteínas e outras moléculas biológicas que é reconhecida, por exemplo, por um ligante com particularidade. Um ligante (por exemplo, uma proteína, proteoglicano ou glicosaminoglicano) que se liga especificamente a uma proteína se ligará à proteína, por exemplo, com um KD menor que 100 nM. Por exemplo, um ligante que se liga especificamente a uma proteína pode se ligar à proteína com um KD de até 100 nM (por exemplo, entre 1 pM e 1 00 nM). Um ligante que não apresenta ligação específica a uma proteína ou um domínio da mesma apresentará um KD maior que 100 nM (por exemplo, maior que 200 nM, 300 nM, 400 nM, 500 nM, 600 nm, 700 nM, 800 nM, 900 nM, 1 μM, 100 μM, 500 μM, ou 1 mM) para essa proteína particular ou domínio da mesma. Uma variedade de formatos de ensaio pode ser usada para determinar a afinidade de um ligante para uma proteína específica. Por exemplo, os ensaios de ELISA de fase sólida são usados rotineiramente para identificar ligantes que se ligam especificamente a uma proteína alvo. Ver, por exemplo, Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, New York (1988) e Harlow & Lane, Using Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, New York (1999), para uma descrição dos formatos e condições do ensaio que podem ser usados para determinar a ligação específica às proteínas.

Como usado aqui, os termos “indivíduo” e “paciente” são intercambiáveis e se referem a um organismo que recebe tratamento para uma doença ou condição particular como descrito aqui (como parto prematuro ou dismenorreia) ou que é diagnosticado como tendo uma doença ou condição de acordo com os métodos aqui descritos. Exemplos de indivíduas e pacientes incluem mamíferos, como humanos, que recebem tratamento para doenças ou condições, por exemplo, trabalho de parto prematuro em uma idade gestacional precoce (por exemplo, 24-34 semanas).

Um composto, forma de sal, polimorfo cristalino, agente terapêutico ou outra composição aqui descrita pode ser chamado como sendo caracterizado por dados gráficos. "substancialmente como representado em" uma figura. Tais dados podem incluir, sem limitação, difratogramas de raios-X de pó, espectros de NMR, curvas de calorimetria de varredura diferencial e curvas de análise termogravimétrica, entre outras. Como é conhecido na técnica, tais dados gráficos podem fornecer informação técnica adicional para definir adicionalmente o composto, a forma de sal, polimorfo cristalino, agente terapêutico ou outra composição. Como é entendido por um versado na técnica, tais representações gráficas de dados podem estar sujeitas a pequenas variações, por exemplo, em intensidades relativas de pico e posições de pico devido a fatores como variações na resposta do instrumento e variações na concentração e pureza da amostra. No entanto, um versado na técnica vai facilmente ser capaz de comparar os dados gráficos nas figuras aqui com dados gráficos gerados por um composto, forma de sal, polimorfo cristalino, agente terapêutico, ou outra composição e confirmar se os dois conjuntos de dados gráficos estão caracterizando o mesmo material ou dois diferentes materiais. Por exemplo, uma forma cristalina de cloridrato de (3S)-3- ({[(2S)-3-(bifenil-4-ilsulfonil)-1,3-tiazolidin-2-il]carbonil}-amino)-3-(4- fluorofenil)propil L-valinato aqui referido como sendo caracterizado por dados gráficos “substancialmente como representado em” uma figura irá, assim, ser entendido para incluir qualquer forma de cristal de cloridrato de (3S)-3-({[(2S)- 3-(bifenil-4-ilsulfonil)-1,3-tiazolidin-2-il]carbonil}-amino)-3-(4-fluorofenil)propil L- valinato, caracterizado pelos dados gráficos, tendo opcionalmente uma ou mais de pequenas variações, por exemplo, uma ou mais variações descritas acima ou conhecidas de um versado na técnica.

Como usado aqui, os termos “tratar” ou “tratamento” se referem ao tratamento terapêutico, no qual o objetivo é prevenir ou retardar (diminuir) uma alteração ou distúrbio fisiológico indesejado, como a progressão do trabalho de parto prematuro em uma idade gestacional precoce (por exemplo, 24-34 semanas). Os resultados clínicos benéficos ou desejados incluem, mas não estão limitados a, o alívio dos sintomas, como sangramento vaginal ou ruptura de membrana, e o atraso ou lentidão do trabalho de parto. Aqueles que necessitam de tratamento incluem, por exemplo, mulheres grávidas que já experimentam trabalho de parto prematuro, bem como aquelas propensas a desenvolver essa condição.

Como usado aqui, o termo “agente tocolítico” se refere a uma substância capaz de retardar o início do trabalho de parto em um indivíduo (por exemplo, um indivíduo mamífero, como um indivíduo humano). Os agentes tocolíticos podem funcionar para suprimir a contratilidade uterina, por exemplo, aumentando os níveis de cAMP citoplasmático e inibindo a mobilização de Ca2+ intracelular. Agentes tocolíticos exemplificadores são descritos, por exemplo, em Haas et al. Int. J. Womens Health. 6:343-349 (2014), cuja divulgação é aqui incorporada por referência. Os agentes tocolíticos para uso em conjunto com as composições e métodos aqui descritos incluem, sem limitação, as 5 substâncias listadas na Tabela 1, abaixo.

Breve Descrição das Figuras

A Figura 1 é um gráfico que demonstra o efeito do composto II e do composto III na contratilidade uterina espontânea em ratas prenhes tardias após administração intravenosa.

A Figura 2 é um gráfico que mostra o efeito reversível e dependente da dose do composto I na contração uterina espontânea em ratas prenhes tardias.

A Figura 3 é um gráfico que demonstra o efeito do composto II e do composto III na contratilidade uterina espontânea em ratas prenhes tardias após administração oral.

A Figura 4 é uma tabela que resume vários métodos usados para gerar a base livre do composto I, bem como observações referentes às características físicas e espectros de NMR do composto I como gerado por cada método.

A Figura 5 é uma tabela que resume vários métodos usados para gerar sais do composto I, bem como observações relativas às características físicas e espectros de NMR destes sais como gerados por cada método.

A Figura 6 é uma tabela que resume características físicas, bem como espectros de difração de raios-X de pó (XRPD) de vários sais do composto I.

A Figura 7 é uma tabela que resume os métodos usados para gerar formas cristalinas de vários sais do composto I, bem como observações relativas às propriedades físicas e espectros de XRPD de cada forma cristalina.

A Figura 8 é uma tabela que resume a solubilidade de vários sais do composto I em solução aquosa.

A Figura 9 é uma tabela que resume a estabilidade das formas cristalinas de vários sais do composto I à umidade relativa (RH) indicada.

A Figura 10 é uma tabela que resume várias características do composto III como determinado por difração de raios-X de pó (XRPD), calorimetria de varredura diferencial (DSC), análise termogravimétrica (TG), absorção/dessorção (MB) de umidade e ressonância magnética nuclear de 1H. (NMR).

A Figura 11 é uma tabela que resume várias características do sal de hidrossulfato do composto I como determinado por difração de raios-X de pó (XRPD), calorimetria de varredura diferencial (DSC), análise termogravimétrica (TG) e ressonância magnética nuclear de 1H (NMR).

A Figura 12 mostra um espectro de XRPD do sal de mesilato do composto I.

A Figura 13 mostra um espectro de 1H NMR do sal de mesilato do composto I.

A Figura 14 mostra um espectro de XRPD da base livre do composto I.

A Figura 15 mostra um espectro de 1H NMR da base livre do composto I.

A Figura 16 mostra um espectro de infravermelho de Raman da base livre do composto I.

A Figura 17 mostra um espectro de 1H NMR do sal de mesilato do composto I. O sal de mesilato foi preparado por adição de ácido metanossulfônico a uma solução da base livre do composto I em éter dietílico.

A Figura 18 mostra uma série de espectros de 1H NMR da base livre do composto I registrados durante experimentos de desacoplamento homonucleares.

A Figura 19 mostra uma série de espectros de XRPD do sal de cloreto do composto I produzido a partir de uma suspensão de acetona (topo), da evaporação de uma mistura de cloreto de metileno: éter etílico (segundo do topo) e da evaporação lenta de 1:1 de mistura de acetona:tolueno (segundo do fundo e fundo).

A Figura 20 mostra uma sobreposição de uma curva de calorimetria de varredura diferencial (variando de cerca de -0,5 a cerca de 1,3 W/g) e uma curva de análise termogravimétrica (variando de cerca de 0% a cerca de 100% em peso) registrada para o sal de cloreto do composto I como produzido a partir de uma suspensão de acetona.

A Figura 21 mostra um espectro de 1H NMR do sal de cloreto do composto I, produzido a partir de uma mistura acetona:tolueno de 1:1.

A Figura 22 mostra uma série de espectros de XRPD do sal de cloreto do composto I como produzido a partir de uma suspensão de acetona (topo) e após ser seco em vácuo a cerca de 50°C durante 1 dia (fundo).

A Figura 23 mostra uma sobreposição de uma curva de calorimetria de varredura diferencial (variando de cerca de - 1,0 a cerca de 0,2 W/g) e uma curva de análise termogravimétrica (variando de cerca de 30% a cerca de 100% em peso) registrada para o sal de cloreto do composto I depois foi seco a vácuo a cerca de 50°C durante 1 dia.

A Figura 24 mostra uma sobreposição de curvas de análise termogravimétrica do sal de cloreto do composto I como produzido a partir de uma suspensão de acetona (topo) e depois de ser seco sob vácuo a cerca de 50°C durante 1 dia (fundo).

A Figura 25 mostra uma sobreposição das curvas de calorimetria de varredura diferencial registrada para o sal de cloreto do composto I como produzido a partir de uma pasta fluida de acetona (topo) e depois sendo seco à vácuo a cerca de 50°C durante 1 dia (fundo).

A Figura 26 mostra uma curva de sorção/dessorção de umidade registrada para o sal de cloreto do composto I. Os valores no eixo-Y mostram a variação percentual no peso do sal de cloreto como uma função da umidade relativa (RH) na atmosfera ao redor do sal.

A Figura 27 é uma tabela que reporta os dados obtidos a partir de experimentos de absorção/dessorção de umidade realizados com o sal de cloreto do composto I.

A Figura 28 mostra uma curva de sorção/dessorção de umidade registrada para o sal de cloreto do composto I. Os valores no eixo-Y mostram a variação percentual no peso do sal de cloreto em função do tempo durante o qual a umidade relativa na atmosfera em torno do sal foi alterada.

A Figura 29 mostra uma sobreposição de espectros de XRPD do sal de cloreto do composto I após (topo) e antes da realização de experimentos de absorção/dessorção de umidade (fundo).

A Figura 30 mostra uma sobreposição de um espectro de XRPD do sal de fumarato do composto I produzido por evaporação lenta de uma mistura de 1:1 de metanol:tolueno (topo) e um XRPD de ácido fumárico (fundo).

A Figura 31 mostra uma sobreposição de um espectro de XRPD do sal de di-hidrofosfato do composto I (topo) e um XRPD do sal de hidrossulfato do composto I (fundo).

A Figura 32 mostra uma sobreposição de uma curva de calorimetria de varredura diferencial (variando de cerca de -1,9 a cerca de 0 W/g) e uma curva de análise termogravimétrica (variando de cerca de 25% a cerca de 95% em peso) registrada para o sal de hidrossulfato do composto I.

A Figura 33 mostra um espectro de 1H NMR do sal de hidrossulfato de composto I.

A Figura 34 mostra um espectro de 1H NMR do sal de sulfato do composto I.

A Figura 35 mostra um espectro de XRPD do sal de mesilato do composto I.

A Figura 36 mostra um espectro de XRPD do sal de citrato do composto I.

A Figura 37 mostra um espectro de XRPD do sal de edisilato do composto I.

A Figura 38 mostra um espectro de XRPD do sal de hidrossulfato do composto I.

A Figura 39 mostra um espectro de XRPD do sal de citrato do composto I como produzido por evaporação lenta de uma mistura de 1:2 de metanol:tolueno.

A Figura 40 mostra um espectro de XRPD do sal de hidrossulfato do composto I, como produzido por evaporação lenta de uma mistura de 6:1 de acetato de etila: heptano.

A Figura 41 mostra um espectro de XRPD do sal de hidrossulfato do composto I, produzido por evaporação lenta de uma mistura de acetato de etila.

A Figura 42 mostra um espectro de XRPD do sal de di-hidrofosfato do composto I, como produzido por evaporação lenta de uma mistura 1:2 de metanol:acetonitrila.

A Figura 43 mostra um espectro de XRPD do sal de di-hidrofosfato do composto I como produzido por evaporação lenta de uma mistura de 1:1 de metil etil cetona: acetato de n-butila.

A Figura 44 mostra um espectro de XRPD registrado a partir de um experimento de XRPD em duplicata do sal de di-hidrofosfato do composto I, produzido por evaporação lenta de uma mistura de 1:1 de metil etil cetona: acetato de n-butila.

A Figura 45 mostra um espectro de XRPD do sal de cloreto do composto I como produzido por evaporação lenta de uma mistura de 1:1 de acetona:tolueno.

A Figura 46 mostra um espectro de XRPD registrado a partir de um experimento de XRPD em duplicata do sal de cloreto do composto I, como produzido por evaporação lenta de uma mistura de 1:1 de acetona:tolueno.

A Figura 47 mostra um espectro de XRPD do sal de cloreto do composto I como produzido por evaporação lenta de uma mistura de éter dietílico:cloreto de metileno.

A Figura 48 mostra um espectro de XRPD do sal de cloreto do composto I, produzido a partir de uma suspensão de acetona.

A Figura 49 mostra um espectro de XRPD do sal de cloreto do composto I depois de ser seco a vácuo.

A Figura 50 mostra um espectro de XRPD do sal de fumarato do composto I, produzido por evaporação lenta de uma mistura de 1:1 de metanol:tolueno.

A Figura 51 mostra um espectro de XRPD do sal de fumarato do composto I, produzido por evaporação lenta de uma mistura de 1:1 de metanol:acetato de etila.

A Figura 52 mostra um espectro de XRPD do sal de fumarato do composto I produzido por secagem a vácuo de uma mistura de 1:1 de metanol:tolueno.

A Figura 53 mostra um espectro de XRPD do sal de edisilato do composto I como produzido por evaporação lenta de uma mistura de 1:1:1 de metanol:metil etil cetona:tolueno.

A Figura 54 mostra uma sobreposição de espectros de XRPD do sal de cloreto do composto I antes de (fundo) e após armazenagem (topo) a 40°C e 75% de umidade relativa.

A Figura 55 é uma tabela que resume a estabilidade do sal de mesilato do composto I e do composto II no tampão usado nos experimentos de penetração de Caco-2: tampão de solução salina balanceada de Hank (HBSS), 2% da concentração final de DMSO.

A Figura 56a uma tabela que reporta dados obtidos a partir da análise da capacidade do sal de mesilato do composto I passar do compartimento apical para o compartimento basolateral de uma cavidade revestida com uma monocamada de células Caco-2. As células Caco-2 cultivadas foram incubadas com a concentração indicada do sal de mesilato do composto I no compartimento apical da cavidade transversal e as alíquotas do compartimento basolateral foram amostradas nos tempos de amostragem indicados, para determinar a presença do composto I ou do composto. II. Os dados reportam a concentração do composto II no compartimento basolateral como uma percentagem da concentração inicial indicada do sal de mesilato do composto I. A Figura 56b é uma tabela que reporta dados obtidos a partir da análise da capacidade do sal de mesilato do composto I passar do compartimento basolateral para o compartimento apical de uma cavidade revestida com uma monocamada de célula Caco-2. As células Caco-2 cultivadas foram incubadas com a concentração indicada do sal de mesilato do composto I no compartimento basolateral das cavidades, e as alíquotas do compartimento apical foram coletadas foram amostradas nos tempos de amostragem indicados, para determinar a presença do composto I ou do composto II. Os dados reportam a concentração do composto II no compartimento basolateral como uma percentagem da concentração inicial indicada do sal de mesilato do composto I. A Figura 56c é um gráfico que mostra a concentração relativa do composto II no compartimento basolateral como uma percentagem da concentração inicial do sal de mesilato do composto I no compartimento apical. A Figura 56d é um gráfico que mostra a concentração relativa do composto II no compartimento apical como uma percentagem da concentração inicial do sal de mesilato do composto I no compartimento basolateral. O composto I não foi detectado no compartimento basolateral após 60 ou 120 minutos de incubação no compartimento apical. Além disso, o composto I não foi detectado no compartimento apical após 60 ou 120 minutos de incubação no compartimento basolateral. Pelo contrário, o composto II foi detectado em cada caso. A Figura 56e é uma tabela mostrando a recuperação do composto I no compartimento apical após 120 minutos de incubação. O composto inicial foi recuperado principalmente sob a forma da variante desesterificada, o composto II.

A Figura 57a é uma tabela que reporta dados obtidos a partir da análise da capacidade do composto II para passar do lado apical para o compartimento basolateral de uma cavidade transversal revestida com uma célula Caco-2 monocamada. As células Caco-2 cultivadas foram incubadas com a concentração indicada do composto II no compartimento apical da cavidade transversal, e as alíquotas do compartimento basolateral foram amostradas nos tempos de amostragem indicados para determinar a presença do composto II. Os dados reportam a concentração do composto II no compartimento basolateral como uma percentagem da concentração inicial indicada do composto II. A Figura 57b é uma tabela que reporta dados obtidos a partir da análise da capacidade do composto II para passar do compartimento basolateral para o compartimento apical de uma cavidade revestida com uma monocamada de célula Caco-2. As células Caco-2 cultivadas foram incubadas com a concentração indicada do composto II no compartimento basolateral da cavidade transversal e as alíquotas do compartimento basolateral foram amostradas nos tempos de amostragem indicados, para determinar a presença do composto II. Os dados reportam a concentração do composto II no compartimento basolateral como uma percentagem da concentração inicial indicada do composto II. A Figura 57c é uma tabela que mostra a recuperação do composto II no compartimento apical após 60 e 120 minutos de incubação no compartimento basolateral, bem como a taxa de permeabilidade do composto II através da monocamada de células Caco-2. A Figura 57d é um gráfico que mostra a concentração relativa do composto II no compartimento basolateral como uma percentagem da concentração inicial do composto II no compartimento apical. A Figura 57e é um gráfico que mostra a concentração relativa do composto II no compartimento apical como uma percentagem da concentração inicial do composto II no compartimento basolateral.

A Figura 58a é uma tabela que reporta dados obtidos a partir da análise da capacidade do sal de mesilato do composto I para passar do compartimento apical para o compartimento basolateral de uma cavidade revestida com uma monocamada de Células Caco-2. As células Caco-2 cultivadas foram incubadas com a concentração indicada do sal de mesilato do composto I no compartimento apical da cavidade transversal, e as alíquotas do compartimento basolateral foram amostradas nos tempos de amostragem indicados, para determinar a presença do composto I ou do composto II. Os dados reportam a concentração do composto II no compartimento basolateral como uma percentagem da concentração inicial indicada do sal de mesilato do composto I. O composto I não foi detectado no compartimento basolateral após 60 ou 120 minutos de incubação no compartimento apical. A Figura 58b é um gráfico que mostra a concentração relativa do composto II no compartimento basolateral como uma percentagem da concentração inicial do sal de mesilato do composto I no compartimento apical. A Figura 58c uma tabela que mostra a recuperação do composto I no compartimento apical após 120 minutos de incubação. O composto inicial foi recuperado principalmente sob a forma da variante do composto desesterificado, o composto II.

A Figura 59 é uma tabela que resume os parâmetros de cromatografia e espectrometria de massa usados para a análise de concentrações do composto I e do composto II em experimentos de penetração de células Caco- 2 aqui descritas.

A Figura 60a é um gráfico que ilustra a viabilidade fracional da descendência de camundongas CD-1 tratadas com RU486 ou lipopolissacarídeo (LPS) com uma idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto. Os valores representam a média mais/menos erro padrão da média. O asterisco designa um valor p de p <0,05. As análises estatísticas foram conduzidas usando um teste de Mann-Whitney versus o grupo correspondente. A Figura 60b é um gráfico que ilustra a quantidade de descendentes viáveis e não viáveis de camundongas CD-1 tratadas com RU486 ou LPS em uma idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto.

A Figura 61a é um gráfico que ilustra o tempo desde a indução até o parto da primeira cria de camundongas CD-1 tratadas com RU486 ou LPS com uma idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto. Os valores representam a média mais/menos erro padrão da As Figuras 61b e 61c são gráficos que ilustram o tempo de indução para a conclusão do parto de entre camundongas CD-1 tratadas com RU486 ou LPS com uma idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto. Os valores ao longo do eixo-Y denotam a proporção de camundongos CD-1 que completaram o trabalho de parto. Em cada figura, um asterisco designa um valor p <0,05. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Mann-Whitney ou teste de Log-rank versus o grupo correspondente.

A Figura 62a é um gráfico que demonstra os efeitos da atosibana (300 mg/kg, administrado subcutaneamente) e nifedipina (5 mg/kg, administrados oralmente) na viabilidade fracional da descendência de camundongas CD-1 tratadas com RU486 ou lipopolissacarídeo (LPS). uma idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto. Os valores representam a média mais/menos erro padrão da média. O asterisco designa um valor p de p <0,05; “Ns” designa um valor p de p> 0,05. As análises estatísticas foram conduzidas usando um teste de Mann-Whitney ou teste t desemparelhado versus o grupo de veículo correspondente. Figura 62b é um gráfico que demonstra os efeitos da atosibana (300 mg/kg, administrado subcutaneamente) e nifedipina (5 mg/kg, administrados oralmente) na quantidade de descendentes viáveis e não viáveis de camundongas CD-1 tratadas com RU486 ou LPS idade gestacional de 17 dias para induzir o parto.

A Figura 63a é um gráfico que demonstra os efeitos do composto III (10 mg/kg, 30 mg/kg e 100 mg/kg, administrados oralmente) na viabilidade fracional da descendência de camundongas CD-1 tratadas com RU486 ou LPS a uma gestacional idade de 17 dias, de modo a induzir o parto. Os valores representam a média mais/menos erro padrão da média. “ns” designa um valor p de p> 0,05. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Mann-Whitney versus o grupo de veículo correspondente. A Figura 63b é um gráfico que demonstra os efeitos do composto III (10 mg/kg, 30 mg/kg e 100 mg/kg, administrados oralmente) na quantidade de descendentes viáveis e não viáveis de camundongas CD-1 tratadas com RU486 ou LPS na idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto.

A Figura 64a é um gráfico que demonstra os efeitos da nifedipina (5 mg/kg, administrada oralmente), composto III (100 mg/kg, administrado oralmente) e uma combinação destes na viabilidade fracional da descendência de camundongas CD-1 tratadas com RU486 na idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto. Os valores representam a média mais/menos erro padrão da média. “ns” designa um valor p de p> 0,05 versus o grupo correspondente; "NS" designa um valor p de p> 0,05 versus o grupo de veículo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Mann-Whitney versus o grupo de interesse correspondente. A Figura 64b é um gráfico que demonstra os efeitos da nifedipina (5 mg/kg, administrada oralmente), composto III (100 mg/kg, administrado oralmente) e uma combinação dos mesmos na quantidade de descendentes viáveis e não viáveis de camundongas CD-1 tratadas com RU486 na idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto.

A Figura 65a é um gráfico que demonstra os efeitos da nifedipina (5 mg/kg, administrada oralmente), composto III (100 mg/kg, administrado oralmente) e uma combinação dos mesmos no tempo desde a indução até o primeiro parto do filhote para camundongas CD-1 tratadas com RU486 na idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto. Os valores representam a média mais/menos erro padrão da média. Três asteriscos designam um valor p de p <0,001 versus o grupo correspondente; dois asteriscos designam um valor p <0,01 versus o grupo correspondente. Nifedipina, composto III e braços em combinação apresentaram um valor de p de p = 0,0576, p = 0,0601 e p <0,001 (indicado pelo símbolo "$$$"), respectivamente, em relação ao grupo tratado apenas com veículo. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Mann-Whitney ou teste t não pareado versus o grupo de interesse correspondente. A Figura 65b é um gráfico que demonstra os efeitos da nifedipina (5 mg/kg, administrada oralmente), composto III (100 mg/kg, administrado oralmente) e uma combinação dos mesmos no tempo desde a indução até a conclusão do parto entre camundongas CD-1 tratadas com RU486 na idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto. Os valores ao longo do eixo-Y denotam a proporção de camundongos CD-1 que completaram o trabalho de parto. A Figura 65c é um gráfico que mostra o tempo desde a indução até a conclusão do parto da descendência para o veículo e braços em combinação mostrados na Figura 65b. Três asteriscos designam um valor p de p <0,001 versus o grupo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Log-rank versus o grupo de interesse correspondente. A Figura 65d é um gráfico que mostra o tempo desde a indução até a conclusão do parto da descendência para o composto III e braços em combinação mostrados na Figura 65b. Três asteriscos designam um valor p de p <0,001 versus o grupo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Log-rank versus o grupo de interesse correspondente. A Figura 65e é um gráfico que mostra o tempo desde a indução até a conclusão do parto da descendência para a nifedipina e os braços em combinação mostrados na Figura 65b. Dois asteriscos designam um valor p de p <0,01 versus o grupo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Log-rank versus o grupo de interesse correspondente.

A Figura 66a é um gráfico que demonstra os efeitos da atosibana (300 mg/kg, administrado subcutaneamente), composto III (100 mg/kg, administrado oralmente) e uma combinação dos mesmos na viabilidade fracional da descendência de camundongas CD-1 tratadas com RU486 com uma idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto. Os valores representam a média mais/menos erro padrão da média. “ns” designa um valor p de p > 0,05 versus o grupo correspondente; "NS" designa um valor p de p> 0,05 versus o grupo de veículo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Mann-Whitney versus o grupo de interesse correspondente. A Figura 66b é um gráfico que demonstra os efeitos da atosibana (300 mg/kg, administrado subcutaneamente), composto III (100 mg/kg, administrado oralmente) e uma combinação dos mesmos na quantidade de descendentes viáveis e não viáveis de camundongas CD-1 tratadas com LPS na idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto.

A Figura 67a é um gráfico que demonstra os efeitos da atosibana (300 mg/kg, administrado subcutaneamente), composto III (100 mg/kg, administrado oralmente) e uma combinação dos mesmos no tempo desde a indução até o primeiro parto do filhote de camundongas CD-1 tratadas com RU486 na idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto. Os valores representam a média mais/menos erro padrão da média. “ns” designa um valor p de p> 0,05 versus o grupo correspondente; "ns" designa um valor p de p> 0,05 versus o grupo de veículo correspondente. Atosibana, composto III e braços em combinação apresentam valores de p> 0,05, p = 0,0601 e p> 0,05, respectivamente, em relação ao grupo de veículo. As análises estatísticas foram conduzidas usando um teste t desemparelhado versus o grupo de interesse correspondente. A Figura 67b é um gráfico que demonstra os efeitos da atosibana (300 mg/kg, administrado subcutaneamente), composto III (100 mg/kg, administrado oralmente) e uma combinação dos mesmos no tempo desde a indução até a conclusão do parto entre camundongas CD-1 tratadas com RU486 com uma idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto. Os valores ao longo do eixo-Y denotam a proporção de camundongos CD-1 que completaram o trabalho de parto. A Figura 67c é um gráfico que mostra o tempo desde a indução até a conclusão do parto da descendência para o veículo e braços em combinação mostrados na Figura 67b. “ns” designa um valor p de p> 0,05 em relação ao grupo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Log-rank versus o grupo de interesse correspondente. A Figura 67d é um gráfico que mostra o tempo desde a indução até a conclusão do parto da descendência para o composto III e os braços em combinação mostrados na Figura 67b. O braço em combinação apresentou um valor de p de p = 0,0832 em relação ao braço do composto III. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Log-rank versus o grupo de interesse correspondente. A Figura 67e é um gráfico que mostra o tempo desde a indução até a conclusão do parto da descendência para a atosibana e braços em combinação mostrados na Figura 67b. “ns” designa um valor p de p> 0,05 em relação ao grupo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Log-rank versus o grupo de interesse correspondente.

A Figura 68a é um gráfico que demonstra os efeitos da nifedipina (5 mg/kg, administrada oralmente), composto III (10 mg/kg, 30 mg/kg e 100 mg/kg, administrado oralmente) e combinações dos mesmos na viabilidade fracional da descendência de camundongas CD-1 tratadas com LPS na idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto. Os valores representam a média mais/menos erro padrão da média. “ns” designa um valor p de p> 0,05 versus o grupo correspondente; "NS" designa um valor p de p> 0,05 versus o grupo de veículo correspondente. O braço de nifedipina apresentou um valor de p de p = 0,0859 em relação ao grupo tratado com veículo sozinho. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Mann-Whitney ou teste t não pareado versus o grupo de interesse correspondente. A Figura 68b é um gráfico que demonstra os efeitos da nifedipina (5 mg/kg, administrada oralmente), composto III (10 mg/kg, 30 mg/kg e 100 mg/kg, administrado oralmente) e combinações dos mesmos na quantidade de descendentes viáveis e não viáveis de camundongas CD-1 tratadas com LPS na idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto.

A Figura 69a é um gráfico que demonstra os efeitos da nifedipina (5 mg/kg, administrada oralmente), composto III (10 mg/kg, 30 mg/kg e 100 mg/kg, administrados oralmente) e combinações dos mesmos no tempo de indução para o parto da primeira cria de camundongas CD-1 tratadas com LPS na idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto. Os valores representam a média mais/menos erro padrão da média. Dois asteriscos designam um valor p de p <0,01 versus o grupo correspondente, avaliado por um teste de Mann-Whitney versus o grupo correspondente; “ns” designa um valor de p> 0,05 versus o grupo correspondente, conforme avaliado por um teste de Mann-Whitney versus o grupo correspondente; "ns" designa um valor de p> 0,05 versus o grupo de veículo correspondente, conforme avaliado por um teste t não emparelhado versus o grupo correspondente; “sem teste” designa que nenhum teste estatístico foi realizado para o par indicado. A Figura 69b é um gráfico que demonstra os efeitos da nifedipina (5 mg/kg, administrada oralmente), composto III (10 mg/kg, administrado oralmente) e combinações dos mesmos no tempo desde a indução até a conclusão do parto entre camundongas CD-1 tratadas com LPS na idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto. A Figura 69c é um gráfico que demonstra os efeitos da nifedipina (5 mg/kg, administrada oralmente), composto III (30 mg/kg, administrado oralmente) e combinações dos mesmos no tempo desde a indução até a conclusão do parto entre camundongas CD-1 tratadas com LPS na idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto. A Figura 69d é um gráfico que demonstra os efeitos da nifedipina (5 mg/kg, administrada oralmente), composto III (100 mg/kg, administrado oralmente) e combinações dos mesmos no tempo desde a indução até a conclusão do parto entre camundongas CD-1 tratadas com LPS na idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto. A Figura 69e é um gráfico que mostra o tempo desde a indução até a conclusão do parto da descendência para o veículo e braços em combinação mostrados na Figura 69b. “ns” designa um valor p de p>0,05 em relação ao grupo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Log-rank versus o grupo correspondente. A Figura 69f é um gráfico que mostra o tempo desde a indução até a conclusão do parto da descendência para o composto III e os braços em combinação mostrados na Figura 69b. Dois asteriscos designam um valor p de p <0,01 versus o grupo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Log-rank versus o grupo de interesse correspondente. A Figura 69g é um gráfico que mostra o tempo desde a indução até a conclusão do parto da descendência para nifedipina e braços em combinação mostrados na Figura 69b. “ns” designa um valor p de p> 0,05 em relação ao grupo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Log-rank versus o grupo correspondente. A Figura 69h é um gráfico que mostra o tempo desde a indução até a conclusão do parto da descendência para o veículo e braços combinados mostrados na Figura 69c. “ns” designa um valor p de p> 0,05 em relação ao grupo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Log-rank versus o grupo correspondente. A Figura 69i é um gráfico que mostra o tempo desde a indução até a conclusão do parto da descendência para o composto III e braços em combinação mostrados na Figura 69c. “ns” designa um valor p de p> 0,05 em relação ao grupo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Log-rank versus o grupo correspondente. A Figura 69j é um gráfico que mostra o tempo desde a indução até a conclusão do parto da descendência para nifedipina e braços em combinação mostrados na Figura 69c. “ns” designa um valor p de p> 0,05 em relação ao grupo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Log-rank versus o grupo correspondente. A Figura 69k é um gráfico que mostra o tempo desde a indução até a conclusão do parto da descendência para o veículo e braços em combinação mostrados na Figura 69d. “ns” designa um valor p de p> 0,05 em relação ao grupo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Log-rank versus o grupo correspondente. A Figura 69l é um gráfico que mostra o tempo desde a indução até a conclusão do parto da descendência para o composto III e braços em combinação mostrados na Figura 69d. “ns” designa um valor p de p> 0,05 em relação ao grupo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Log-rank versus o grupo correspondente. A Figura 69m é um gráfico que mostra o tempo desde a indução até a conclusão do parto da descendência para nifedipina e braços em combinação mostrados na Figura 69d. “ns” designa um valor p de p> 0,05 em relação ao grupo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Log-rank versus o grupo correspondente.

A Figura 70a é um gráfico que demonstra os efeitos da atosibana (300 mg/kg, administrado subcutaneamente), o composto III (100 mg/kg, administrada oralmente), e uma combinação dos mesmos sobre a viabilidade fracional de descendência de camundongas CD-1 tratadas com LPS na idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto. Os valores representam a média mais/menos erro padrão da média. “ns” designa um valor p de p> 0,05 versus o grupo correspondente; "NS" designa um valor p de p> 0,05 versus o grupo de veículo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Mann-Whitney ou teste t não pareado versus o grupo de interesse correspondente. A Figura 70b é um gráfico que demonstra os efeitos da atosibana (300 mg/kg, administrado subcutaneamente), composto III (100 mg/kg, administrado oralmente) e uma combinação dos mesmos na quantidade de descendentes viáveis e não viáveis de camundongas CD-1 tratadas com LPS na idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto.

A Figura 71a é um gráfico que demonstra os efeitos de atosibana (300 mg/kg, administrado subcutaneamente), composto III (100 mg/kg, administrado oralmente) e uma combinação dos mesmos no tempo desde a indução até o primeiro parto do filhote para camundongos CD-1. tratados com LPS na idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto. Os valores representam a média mais/menos erro padrão da média. “ns” designa um valor p de p> 0,05 versus o grupo correspondente; "NS" designa um valor de p> 0,05 versus o grupo de veículo correspondente; "$" Designa um valor p de p <0,05 versus o grupo de veículos correspondente. O braço em combinação apresentou um valor de p de 0,0909 em relação ao braço tratado com a atosibana sozinho. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Mann-Whitney ou teste t não pareado versus o grupo de interesse correspondente. A Figura 71b é um gráfico que demonstra os efeitos da atosibana (300 mg/kg, administrada subcutaneamente), o composto III (100 mg/kg, administrada oralmente), e uma combinação dos mesmos no tempo de indução até a conclusão do parto entre CD-1 camundongas tratadas com LPS na idade gestacional de 17 dias, de modo a induzir o parto. A Figura 71c um gráfico que mostra o tempo de indução até a conclusão do parto da descendência para o veículo e os braços em combinação mostrados na Figura 71b. Dois asteriscos designam um valor p < 0,01versus o grupo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Log-rank versus o grupo de interesse correspondente. A Figura 71d é um gráfico que mostra o tempo de indução até a conclusão do parto da descendência para o composto III e com braços em combinação mostrados na Figura 71b. O braço em combinação apresentou um valor p de p = 0,0964 em relação ao braço do composto III. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Log-rank versus o grupo de interesse correspondente. A Figura71e é um gráfico que mostra o tempo desde a indução até a conclusão do parto da descendência para atosibana e os braços em combinação mostrados na Figura 71b. O asterisco designa um valor p de p < 0,05 versus o grupo correspondente. As análises estatísticas foram realizadas usando um teste de Log-rank versus o grupo de interesse correspondente.

A Figura 72a é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis do composto II (6 nM, 60 nM, 600 nM e 6000 nM) sobre a frequência de contrações de músculos lisos induzida por PGF2α em prazo de N = 6, biópsias miometriais coletadas pré-trabalho de parto de fêmeas humanas submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base da frequência de contração espontânea foram registradas. A medida da frequência de contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou composto II foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle ou composto II na frequência contrátil foram medidos durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como “Composto II”. Os efeitos do composto II sobre a frequência contrátil na presença de PGF2α foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de PGF2α (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “PGF2α 1 nM,” “PGF2α 10 nM,” e “PGF2α 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a frequência de contrações como uma percentagem da frequência de contrações de linha de base espontâneas. O símbolo “#” designa o valor de p para p <0,05 versus o controle de DMSO. A Figura 72b é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis do composto II (6 nM, 60 nM, 600 nM e 6000 nM) sobre o trabalho realizado por contração (área sob a curva, ou “AUC”) de contrações do músculo liso induzidas por PGF2α em prazo de N = 6, biópsias miometriais pré-trabalho de parto coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base do trabalho espontâneo realizado por contração foram registradas. A medição do trabalho espontâneo realizado por contração é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou composto II foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle ou composto II no trabalho realizado por contração foram medidos durante o período de 10 minutos que seguiu. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como "Composto II". Os efeitos do composto II no trabalho realizado por contração na presença de PGF2α foram subsequentemente medidos por desafio às amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de PGF2α (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo- X como “PGF2α 1 nM”, “PGF2α 10 nM” e “PGF2α 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam o trabalho realizado por contração como uma percentagem do trabalho realizado por contração para as contrações de linha de base espontâneas. O símbolo “#” designa um valor p de p <0,05 versus o controle de DMSO. A Figura 72c é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis do composto II (6 nM, 60 nM, 600 nM e 6000 nM) na amplitude de pico das contrações do músculo liso induzidas por PGF2α em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de N = 6 indivíduas do sexo feminino humanas submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações normais tinham sido estabelecidos durante pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base de espontâneo amplitude de pico de contração foram registrados. A medição da amplitude de pico de contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou composto II foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos do controle ou composto II na amplitude de pico de contração foram medidos durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como “Composto II”. Os efeitos do composto II na amplitude de pico de contração na presença de PGF2α foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de PGF2α (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo- X como “PGF2α 1 nM”, “PGF2α 10 nM” e “PGF2α 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a amplitude de pico de contração em uma percentagem da amplitude de pico das contrações de linha de base espontâneas. O símbolo “#” designa um valor p de p <0,05 versus o controle de DMSO. A Figura 72d é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis do composto II (6 nM, 60 nM, 600 nM e 6000 nM) na duração das contrações do músculo liso induzidas por PGF2α em prazo de N = 6, biópsias miometriais pré-trabalho de parto coletadas de indivíduas do sexo feminino humanas submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base da duração da contração espontânea foram registradas. A medição da duração da contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou composto II foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos do controle ou composto II na duração da contração foram medidos durante a período de 10 minutos. Este ponto de tempo é representado no eixo- X como "Composto II". Os efeitos do composto II na duração da contração na presença de PGF2α foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de PGF2α (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “PGF2α 1 nM”, “PGF2α 10 nM” e “PGF2α 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a duração da contração como uma percentagem da duração das contrações de linha de base espontâneas. A Figura 72e é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis do composto II (6 nM, 60 nM, 600 nM e 6000 nM) no trabalho total realizado por todas as contrações (soma da área sob a curva para todas as contrações) para contrações do músculo liso induzidas por PGF2α em biópsias miometriais pré-trabalho de parto, prazo de N = 6, coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez estabelecidas as contrações regulares por pelo menos 20 minutos, foram registradas as medições de linha de base do trabalho para todas as contrações espontâneas. A medição do trabalho realizado para todas as contrações espontâneas é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou composto II foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle ou composto II no trabalho total realizado para todas as contrações subsequentes foram medidas durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como “Composto II”. Os efeitos do composto II no trabalho total realizado por contrações na presença de PGF2α foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de PGF2α (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo- X como “PGF2α 1 nM”, “PGF2α 10 nM” e “PGF2α 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam o trabalho total realizado pelas contrações como uma percentagem do trabalho total realizado por contrações de linha de base espontâneas. O símbolo “#” designa um valor p de p <0,05 versus o controle de DMSO.

A Figura 73a é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis do composto II (6 nM, 60 nM, 600 nM e 6000 nM) sobre a frequência de contrações de músculos lisos induzidas por oxitocina (OT) por um prazo de N = 6, biópsias miometriais pré-trabalho de parto coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base da frequência de contração espontânea foram registradas. A medição da frequência de contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou composto II foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos do controle ou composto II na frequência contrátil foram medidos durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como "Composto II". Os efeitos do composto II na frequência contrátil na presença de OT foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nM, e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a frequência de contrações como uma percentagem da frequência de contrações de linha de base espontâneas. O asterisco designa um valor p de p <0,05 versus o controle de DMSO. A Figura 73b é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis do composto II (6 nM, 60 nM, 600 nM e 6000 nM) sobre o trabalho realizado por contração (área sob a curva, ou “AUC”) de contrações do músculo liso induzidas por OT em prazo de N = 6, biópsias miometriais pré-trabalho de parto coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base do trabalho espontâneo realizado por contração foram registradas. A medição do trabalho espontâneo realizado por contração é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou composto II foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle ou composto II no trabalho realizado por contração foram medidos durante o período de 10 minutos que seguiu. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como "Composto II". Os efeitos do composto II no trabalho realizado por contração na presença de OT foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT. (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam o trabalho realizado por contração como uma percentagem do trabalho realizado por contração para contrações basais espontâneas. A Figura 73c é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis do composto II (6 nM, 60 nM, 600 nM e 6000 nM) sobre a amplitude de pico de contrações do músculo liso induzidas por OT em prazo de N = 6, biópsias miometriais pré-trabalho de parto coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base da amplitude de pico de contração espontânea foram registradas. A medição da amplitude de pico de contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou composto II foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos do controle ou composto II na amplitude de pico de contração foram medidos durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como "Composto II". Os efeitos do composto II na amplitude de pico de contração na presença de OT foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a amplitude de pico de contração como uma percentagem da amplitude de pico das contrações de linha de base espontâneas. O asterisco indica um valor p de p <0,05 versus o controle de DMSO. A Figura 73d é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis do composto II (6 nM, 60 nM, 600 nM e 6000 nM) na duração das contrações do músculo liso induzidas por OT em prazo de N = 6, biópsias miometriais pré-trabalho de parto coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, medições de linha de base da duração da contração espontânea foram registradas. A medição da duração da contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou composto II foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos do controle ou composto II na duração da contração foram medidos durante a período de 10 minutos Este ponto de tempo é representado no eixo- X como "Composto II". Os efeitos do composto II na duração da contração na presença de OT foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a duração da contração como uma percentagem da duração das contrações de linha de base espontâneas. A Figura 73e é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis do composto II (6 nM, 60 nM, 600 nM e 6000 nM) no trabalho total realizado por todas as contrações (soma da área sob a curva para todas as contrações) para contrações do músculo liso induzidas por OT em prazo de N = 6, biópsias miometriais pré-trabalho de parto coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base do trabalho para todas as contrações espontâneas foram registradas. A medição do trabalho realizado para todas as contrações espontâneas é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou composto II foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle ou composto II no trabalho total realizado para todas as contrações subsequentes foram medidas durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como "Composto II". Os efeitos do composto II no trabalho total realizado por contrações na presença de OT foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam o trabalho total realizado pelas contrações como uma percentagem do trabalho total realizado por contrações de linha de base espontâneas. O asterisco designa um valor p de p <0,05 versus o controle de DMSO.

A Figura 74a é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis de atosibana (6 nM, 60 nM e 600 nM) na frequência de contrações do músculo liso induzidas por PGF2α em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de N = 6 submetido a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base da frequência de contração espontânea foram registradas. A medição da frequência de contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou atosibana (“Ato”) foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle ou atosibana na frequência contrátil foram medido durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como “Ato”. Os efeitos da atosibana na frequência contrátil na presença de PGF2α foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de PGF2α (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “PGF2α 1 nM”, “PGF2α 10 nM” e “PGF2α 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a frequência de contrações como uma percentagem da frequência de contrações de linha de base espontâneas. O asterisco designa um valor p de p <0,05 versus o controle de DMSO. A Figura 74b é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis de atosibana (6 nM, 60 nM e 600 nM) no trabalho realizado por contração (área sob a curva, ou “AUC”) de contrações do músculo liso induzidas por PGF2α em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 6, coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Assim que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base do trabalho espontâneo feito por contração foi registrado. A medição do trabalho espontâneo realizado por contração é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou atosibana foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle ou atosibana no trabalho realizado por contração foram medidos durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como “Ato”. Os efeitos da atosibana no trabalho realizado por contração na presença de PGF2α foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de PGF2α (1 nM, 10 nM, e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “PGF2α 1 nM”, “PGF2α 10 nM” e “PGF2α 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam o trabalho realizado por contração como uma percentagem do trabalho realizado por contração para as contrações de linha de base espontâneas. A Figura 74c é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis de atosibana (6 nM, 60 nM e 600 nM) na amplitude de pico das contrações do músculo liso induzidas por PGF2α em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 6 coletadas de indivíduas fêmeas humanas submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base da amplitude de pico de contração espontânea foram registradas. A medição da amplitude de pico de contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou atosibana foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle ou atosibana na amplitude de pico de contração foram medidos durante a período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como “Ato”. Os efeitos da atosibana na amplitude de pico de contração na presença de PGF2α foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de PGF2α (1 nM, 10 nM, e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “PGF2α 1 nM”, “PGF2α 10 nM” e “PGF2α 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a amplitude de pico de contração como uma percentagem da amplitude de pico das contrações de linha de base espontâneas. A Figura 74d é um gráfico que demonstra os efeitos da variação das concentrações de atosibana (6 nM, 60 nM, e 600 nM) sobre a duração das contrações dos músculos lisos induzidas por PGF2α em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 6 coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidos a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base da duração da contração espontânea foram registradas. A medição da duração da contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou atosibana foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos do controle ou da atosibana na duração da contração foram medidos durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como “Ato”. Os efeitos da atosibana na duração da contração na presença de PGF2α foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de PGF2α (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “PGF2α 1 nM”, “PGF2α 10 nM” e “PGF2α 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a duração da contração como uma percentagem da duração das contrações de linha de base espontâneas. A Figura 74e é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis de atosibana (6 nM, 60 nM e 600 nM) no trabalho total realizado por todas as contrações (soma da área sob a curva para todas as contrações) para contrações de músculo liso induzidas por PGF2α em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 6 coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez estabelecidas as contrações regulares por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base do trabalho para todas as contrações espontâneas foram registradas. A medição do trabalho realizado para todas as contrações espontâneas é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou atosibana foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos do controle ou da atosibana no trabalho total realizado para todas as contrações subsequentes foram medidos ao longo do período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como “Ato”. Os efeitos da atosibana no trabalho total realizado por contrações na presença de PGF2α foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de PGF2α (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “PGF2α 1 nM”, “PGF2α 10 nM” e “PGF2α 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam o trabalho total realizado pelas contrações como uma percentagem do trabalho total realizado por contrações de linha de base espontâneas. O asterisco designa um valor p de p <0,05 versus o controle de DMSO.

A Figura 75a é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis de atosibana (6 nM, 60 nM e 600 nM) na frequência de contrações do músculo liso induzidas por PGE2 em biópsias de miométrio pré-laboratoriais a termo, prazo de N = 6, coletadas de fêmeas humanas submetido a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Assim que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base de frequência de contração espontânea foram registradas. A medição da frequência de contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou atosibana (“Ato”) foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle ou atosibana na frequência contrátil foram medidos durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como "Ato". Os efeitos da atosibana na frequência contrátil na presença de PGE2 foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de PGE2 (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “PGE2 1 nM”, “PGE2 10 nM” e “PGE2 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a frequência de contrações como uma percentagem da frequência de contrações de linha de base espontâneas. Três asteriscos designam um valor p de p <0,001 versus o controle de DMSO. A Figura 75b é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis de atosibana (6 nM, 60 nM, e 600 nM) sobre o trabalho realizado por contração (área sob a curva, ou “AUC”) de contrações de músculos lisos induzidas por PGE2 em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 6 coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base do trabalho espontâneo realizado por contração foram registradas. A medição do trabalho espontâneo realizado por contração é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou atosibana foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle ou atosibana no trabalho realizado por contração foram medidos durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como “Ato”. Os efeitos da atosibana no trabalho realizado por contração na presença de PGE2 foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de PGE2 (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “PG E 2 1 nM”, “PG E 2 10 nM” e “PG E 2 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam o trabalho realizado por contração como uma percentagem do trabalho realizado por contração para as contrações de linha de base espontâneas. A Figura 75c é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis de atosibana (6 nM, 60 nM, e 600 nM) sobre a amplitude de pico de contrações do músculo liso induzidas por PGE 2- em biópsias miometriais pré-trabalho de parto no tempo correto de N = 6 coletadas de indivíduas do sexo feminino humanas submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base da amplitude de pico de contração espontânea foram registradas. A medição da amplitude de pico de contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou atosibana foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle ou atosibana na amplitude de pico de contração foram medidos durante a período de 10 minutos. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como "Ato". Os efeitos da atosibana na amplitude de pico de contração na presença de PG E2 foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de PGE2 (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo- X como “PGE2 1 nM,” “PGE2 10 nM,” and “PGE2 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a amplitude de pico de contração como uma percentagem da amplitude de pico das contrações de linha de base espontâneas. O asterisco designa um valor p de p <0,05 versus o controle de DMSO. A Figura 75d é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis de atosibana (6 nM, 60 nM, e 600 nM) sobre a duração das contrações de músculos lisos induzidas por PGE2 em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 6 coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base da duração da contração espontânea foram registradas. A medição da duração da contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou atosibana foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle ou atosibana na duração da contração foram medidos no período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como Ato". Os efeitos da atosibana na duração da contração na presença de PGE2 foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de PGE2 (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “PGE2 1 nM”, “PGE 2 10 nM” e “PG E 2 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a duração da contração como uma percentagem da duração das contrações de linha de base espontâneas. A Figura 75e é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis de atosibana (6 nM, 60 nM e 600 nM) no trabalho total realizado por todas as contrações (soma da área sob a curva para todas as contrações) para contrações de músculos lisos induzidas por PGE2 em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 6, coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Assim que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base trabalho realizado para todas as contrações espontâneas foram registradas. A medição do trabalho realizado para todas as contrações espontâneas é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou atosibana foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle ou atosibana no trabalho total realizado para todos as contrações subsequentes foram medidos durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como "Ato". Os efeitos da atosibana no trabalho total realizado por contrações na presença de PGE 2 foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de PGE 2 (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Estes pontos de tempo são representados no eixo-X como “PGE2 1 nM,” “PGE2 10 nM,” e “PGE2 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam o trabalho total realizado pelas contrações como uma percentagem do trabalho total realizado por contrações de linha de base espontâneas. O asterisco designa um valor p de p <0,05 versus o controle de DMSO. Três asteriscos designam um valor p de p <0,001 versus o controle de DMSO.

A Figura 76a é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis do composto II (60 nM e 600 nM), atosibana (6 nM) e combinações de composto II e atosibana na frequência de contrações do músculo liso induzidas por OT em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 3 coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base da frequência de contração espontânea foram registradas. A medição da frequência de contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO, composto II, e/ou atosibana foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle, composto II e/ou atosibana na frequência contrátil foram medidos ao longo do período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como "ANT". Os efeitos do composto II e/ou da atosibana na frequência contrátil na presença de OT foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nMe 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM,” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a frequência de contrações como uma percentagem da frequência de contrações de linha de base espontâneas. A Figura 76b é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis de composto II (60 nM e 600 nM), atosibana (6 nM) e combinações de composto II e atosibana no trabalho realizado por contração (área sob a curva, ou “AUC”) de contrações do músculo liso induzidas por OT em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 3 coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base do trabalho espontâneo realizado por contração foram registradas. A medição do trabalho espontâneo realizado por contração é representada no eixo-X como "Spon". Um controle de DMSO, composto II, e/ou atosibana foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle, composto II e/ou atosibana no trabalho realizado por contração foram medidos ao longo do período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como "ANT". Os efeitos do composto II e/ou da atosibana no trabalho realizado por contração na presença de OT foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nM, e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam o trabalho realizado por contração como uma percentagem do trabalho realizado por contração para as contrações de linha de base espontâneas. A Figura 76c é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis do composto II (60 nM e 600 nM), atosibana (6 nM) e combinações de composto II e atosibana na amplitude de pico das contrações do músculo liso induzidas por OT em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 3, coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base da amplitude de pico de contração espontânea foram registradas. A medição da amplitude de pico de contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO, composto II, e/ou atosibana foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle, composto II, e/ou atosibana na amplitude de pico de contração foram medidos durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como "ANT". Os efeitos do composto II e/ou da atosibana na amplitude de pico de contração na presença de OT foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a amplitude de pico de contração como uma percentagem da amplitude de pico das contrações de linha de base espontâneas. A Figura 76d é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis do composto II (60 nM e 600 nM), atosibana (6 nM) e combinações de composto II e atosibana na duração das contrações do músculo liso induzidas por OT em biópsias miometriais pré- trabalho de parto de tempo correto de N = 3 coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base da duração da contração espontânea foram registradas. A medição da duração da contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO, composto II, e/ou atosibana foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle, composto II e/ou atosibana na duração da contração foram medidos durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como "ANT". Os efeitos do composto II e/ou da atosibana na duração da contração na presença de OT foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nMe 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo- X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a duração da contração como uma percentagem da duração das contrações de linha de base espontâneas. A Figura 76e é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis de composto II (60 nM e 600 nM), atosibana (6 nM) e combinações de composto II e atosibana no trabalho total realizado por todas as contrações (soma da área sob a curva para todas as contrações) para contrações do músculo liso induzidas por OT em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 3 coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez estabelecidas as contrações regulares por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base do trabalho para todas as contrações espontâneas foram registradas. A medição do trabalho realizado para todas as contrações espontâneas é representada no eixo-X como "Spon". Um controle de DMSO, composto II, e/ou atosibana foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle, compostos II, e/ou atosibana no trabalho total realizado para todas as contrações subsequentes foram medidos durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como “ANT. Os efeitos do composto II e/ou da atosibana no trabalho total realizado por contrações na presença de OT foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam o trabalho total realizado pelas contrações como uma percentagem do trabalho total realizado por contrações de linha de base espontâneas. Três asteriscos designam um valor p de Três asteriscos designam um valor p de p <0,001 versus o controle de DMSO. Dois símbolos “#” designam um valor p de p <0,01 versus o tratamento com atosibana a uma concentração de 6 nM.

A Figura 77a é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis de nifedipina (1 nM, 6 nM, 60 nM, 600 nM e 10 μM) na frequência de contrações do músculo liso induzidas por OT em biópsias miometriais pré- trabalho de parto de tempo correto de N = 2 coletadas de indivíduas fêmeas humanas submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base da frequência de contração espontânea foram registradas. A medida da frequência de contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou nifedipina foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle ou nifedipina na frequência contrátil foram medidos no período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como "Nif." Os efeitos da nifedipina na frequência contrátil na presença de OT foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo- X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a frequência de contrações como uma percentagem da frequência de contrações de linha de base espontâneas. A Figura 77b é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis de nifedipina (1 nM, 6 nM, 60 nM, 600 nM e 10 μM) no trabalho realizado por contração (área sob a curva, ou “AUC”) de contrações do músculo liso induzidas por OT em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 2 coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base do trabalho espontâneo realizado por contração foram registradas. A medição do trabalho espontâneo realizado por contração é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou nifedipina foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle ou nifedipina no trabalho realizado por contração foram medidos durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como “Nif.” Os efeitos da nifedipina no trabalho realizado por contração na presença de OT foram subsequentemente medidas desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos de 10 minutos sequenciais. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam o trabalho realizado por contração como uma percentagem do trabalho realizado por contração para as contrações de linha de base espontâneas. A Figura 77c é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis de nifedipina (1 nM, 6 nM, 60 nM, 600 nM e 10 μM) na amplitude de pico das contrações do músculo liso induzidas por OT em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 2 coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base da amplitude de pico de contração espontânea foram registradas. A medida da amplitude de pico de contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou nifedipina foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle ou nifedipina na amplitude de pico de contração foram medidos ao longo do período de 10 minutos. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como "Nif". Os efeitos da nifedipina na amplitude de pico de contração na presença de OT foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a amplitude de pico de contração como uma percentagem da amplitude de pico das contrações de linha de base espontâneas. A Figura 77d é um gráfico que demonstra os efeitos de várias concentrações de nifedipina (1 nM, 6 nM, 60 nM, 600 nM, e 10 μM) sobre a duração concentrações do músculo liso induzidas por OT em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 2 de parto coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base da duração da contração espontânea foram registradas. A medição da duração da contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou nifedipina foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle ou nifedipina na duração da contração foram medidos durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como " Nif". Os efeitos da nifedipina na duração da contração na presença de OT foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a duração da contração como uma percentagem da duração das contrações de linha de base espontâneas. A Figura 77e é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis de nifedipina (1 nM, 6 nM, 60 nM, 600 nM e 10 μM) sobre o trabalho total realizado por todas as contrações (soma da área sob a curva para todas as contrações) para concentrações do músculo liso induzidas por OT em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 2 coletadas de seres humanos do sexo feminino submetidos a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez estabelecidas as contrações regulares por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base do trabalho realizado para todas as contrações espontâneas foram registradas. A medição do trabalho realizado para todas as contrações espontâneas é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO ou nifedipina foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle ou nifedipina no trabalho total realizado para todos as contrações subsequentes foram medidos durante o período de 10 minutos subsequente. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como “Nif”. Os efeitos da nifedipina no trabalho total realizado por contrações na presença de OT foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos de 10 minutos sequenciais. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam o trabalho total realizado por contrações como uma percentagem do trabalho total realizado por contrações de linha de base espontâneas.

A Figura 78a é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis do composto II (60 nM e 600 nM), a nifedipina (6 nM), e combinações de composto II e nifedipina sobre a frequência de concentrações do músculo liso induzidas por OT em biópsias miometriais pré-trabalho de parto em prazo de N = 5, coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base da frequência de contração espontânea foram registradas. A medição da frequência de contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO, composto II e/ou nifedipina foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle, composto II e/ou nifedipina na frequência contrátil foram medidos durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como “ANT”. Os efeitos do composto II e/ou da nifedipina na frequência contrátil na presença de OT foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a frequência de contrações como uma percentagem da frequência de contrações de linha de base espontâneas. A Figura 78b é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis do composto II (60 nM e 600 nM), nifedipina (6 nM), e combinações de composto II e nifedipina no trabalho realizado por contração (área sob a curva, ou “AUC”) de contrações do músculo liso induzidas por OT em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 5 coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas ao parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base do trabalho espontâneo realizado por contração foram registradas. A medição do trabalho espontâneo realizado por contração é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO, composto II, e/ou nifedipina foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle, composto II e/ou nifedipina no trabalho realizado por contração foram medidos durante o período de 10 minutos subsequente. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como “ANT”. Os efeitos do composto II e/ou nifedipina no trabalho realizado por contração na presença de OT foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam o trabalho realizado por contração como uma percentagem do trabalho realizado por contração para as contrações de linha de base espontâneas. A Figura 78c é um gráfico que demonstra os efeitos das concentrações variáveis do composto II (60 nM e 600 nM), nifedipina (6 nM), e combinações de composto II e nifedipina na amplitude de pico da concentrações do músculo liso induzidas por OT em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 5 coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base da amplitude de pico de contração espontânea foram registradas. A medição da amplitude de pico de contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO, composto II e/ou nifedipina foram então adicionados a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle, composto II e/ou nifedipina na amplitude de pico de contração foram medidos durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como “ANT”. Os efeitos do composto II e/ou nifedipina na amplitude de pico de contração na presença de OT foram subsequentemente medidos por desafio das amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a amplitude de pico de contração como uma percentagem da amplitude de pico das contrações de linha de base espontâneas. A Figura 78d é um gráfico que demonstra os efeitos do composto II (60 nM e 600 nM), a nifedipina (6 nM), e combinações de composto II e nifedipina sobre a duração das contrações do músculo liso induzidas por OT em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 5 coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez que as contrações regulares foram estabelecidas por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base da duração da contração espontânea foram registradas. A medição da duração da contração espontânea é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO, composto II e/ou nifedipina foi então adicionado a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle, composto II e/ou nifedipina na duração da contração foram medidos durante o período de 10 minutos subsequente. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como “ANT”. Os efeitos do composto II e/ou nifedipina na duração da contração na presença de OT foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos sequenciais de 10 minutos. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam a duração da contração como uma percentagem da duração das contrações de linha de base espontâneas. A Figura 78e é um gráfico que demonstra os efeitos de composto II (60 nM e 600 nM), nifedipina (6 nM) e combinações de composto II e nifedipina no trabalho total realizado por todas as contrações (soma da área sob a curva para todas as contrações) para contrações do músculo liso induzidas por OT em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 5 coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. Os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Kreb’s oxigenada com o software ADI Powerlab. Uma vez estabelecidas as contrações regulares por pelo menos 20 minutos, as medições de linha de base do trabalho para todas as contrações espontâneas foram registradas. A medição do trabalho realizado para todas as contrações espontâneas é representada no eixo-X como “Spon”. Um controle de DMSO, composto II e/ou nifedipina foram então adicionados a cada amostra miometrial nas concentrações indicadas e os efeitos de controle, composto II e/ou nifedipina no trabalho total realizado para todas as contrações subsequentes foram medidos durante o período de 10 minutos subsequentes. Este ponto de tempo é representado no eixo-X como “ANT”. Os efeitos do composto II e/ou nifedipina no trabalho total realizado por contrações na presença de OT foram subsequentemente medidos desafiando as amostras de tecido miometrial com concentrações crescentes de OT (1 nM, 10 nM e 100 nM) em intervalos de 10 minutos sequenciais. Esses pontos de tempo são representados no eixo-X como “OT 1 nM”, “OT 10 nM” e “OT 100 nM”, respectivamente. Os valores ao longo do eixo-Y representam o trabalho total realizado pelas contrações como uma percentagem do trabalho total realizado por contrações de linha de base espontâneas. O asterisco designa um valor de p < 0,05 versus o controle de DMSO. Dois asteriscos designam um valor p de p <0,01 versus o controle de DMSO. Três asteriscos designam um valor p de p <0,001 versus o controle de DMSO. Três símbolos “+” designam um valor p de p <0,001 versus tratamento com o composto II a uma concentração de 60 nM.

A Figura 79a um Western blot mostrando os efeitos de oxitocina, nolasibana e uma combinação dos mesmos na expressão de p65 (p- p65)fosforilada, p38 fosforilada (p-p38), e quinase regulada por sinal extracelular fosforilada (p-ERK) em biópsias miometriais pré-trabalho de parto coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. As amostras foram ou não estimuladas (“NS”), estimuladas com oxitocina ("OT"), tratadas com nolasibana em uma concentração de 1 mM, ou tratadas com oxitocina e nolasibana em uma concentração de 1 mM para os períodos de tempo indicados. Um blot contra a β-actina foi realizado como um controle. Na Figura 79b é um Western blot mostrando os efeitos de oxitocina e/ou concentração variável do composto II, opcionalmente em combinação com o nolasibana, sobre a expressão de p-p65, p-p38 e p-ERK em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto N = 6 coletadas de indivíduas femininas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. As amostras foram quer não estimuladas (“NS”), ou estimuladas com oxitocina (“OT”), tratadas com o composto II em uma concentração de 3 μM, ou tratadas com oxitocina e o composto II em concentrações variadas do composto II, tanto na presença como na ausência de nolasibana a uma concentração de 1 μM nos períodos de tempo indicados. Um blot contra a β-actina foi realizado como um controle. A Figura 79c é um Western blot mostrando os efeitos da oxitocina, nolasibana e uma combinação deste na expressão dos genes pró- inflamatórios ciclo-oxigenase 2 (COX-2) e fosfolipase A2 dependente de cálcio fosforilada (p-cPLA2) em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto de N = 6 coletadas de indivíduas femininas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. As amostras foram quer não estimuladas ("NS"), ou estimuladas com oxitocina ("OT"), tratadas com nolasibana em uma concentração de 1 mM, ou tratadas com oxitocina e nolasibana em uma concentração de 1 mM para os períodos de tempo indicados. Um blot contra a β-actina foi realizado como um controle. A Figura 79d é um Western blot mostrando os efeitos da oxitocina e/ou variando a concentração do composto II, opcionalmente em combinação com o nolasibana, na expressão dos genes pró-inflamatórios COX-2 e p-cPLA2 em biópsias miometriais pré-trabalho de parto de tempo correto N = 6 coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. As amostras foram quer não estimuladas (“NS”), ou estimuladas com oxitocina (“OT”), tratadas com o composto II em uma concentração de 3 μM, ou tratadas com oxitocina e composto II em concentrações variadas do composto II, tanto na presença como na ausência de nolasibana a uma concentração de 1 μM nos períodos de tempo indicados. Um blot contra a β-actina foi realizado como um controle. A Figura 79e é um gráfico que quantifica a expressão de p-p65 mostrada nas Figuras 79a e 79b. A Figura 79f é um gráfico que quantifica a expressão de p-p38 mostrada nas Figuras 79a e 79b. A Figura 79g é um gráfico que quantifica a expressão de pERK mostrada nas Figuras 79a e 79b. A Figura 79h é um gráfico que quantifica a expressão de COX-2 mostrada nas Figuras 79c e 79d. O asterisco designa um valor p de p <0,05 versus as amostras não estimuladas (“NS”). Dois asteriscos designam um valor p de p <0,01 versus as amostras não estimuladas. Três asteriscos designam um valor p de p <0,001 versus as amostras não estimuladas. Três símbolos “#” designam um valor p de p <0,001 versus as amostras tratadas com oxitocina (OT). A Figura 79i é um gráfico que quantifica a expressão de p-cPLA2 mostrada nas Figuras 79c e 79d. O asterisco designa um valor p de p <0,05 versus as amostras não estimuladas (“NS”). Três asteriscos designam um valor p de p <0,001 versus as amostras não estimuladas.

A Figura 80a é uma Western blot que mostra os efeitos da oxitocina, nolasibana e uma combinação dos mesmos na expressão de p-p65, p-p38 e pERK em biópsias de âmnio pré-trabalho de parto de tempo correto N = 3 coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. As amostras foram quer não estimuladas ("NS"), estimuladas com oxitocina ("OT"), tratadas com nolasibana em uma concentração de 1 mM, ou tratadas com oxitocina e nolasibana em uma concentração de 1 mM para os períodos de tempo indicados. Um blot contra a β-actina foi realizado como um controle. A Figura 80b é um Western blot mostrando os efeitos da oxitocina e/ou variando a concentração do composto II, opcionalmente em combinação com nolasibana, na expressão de p-p65, p-p38 e p-ERK em biópsias de âmnio pré- trabalho de parto de tempo correto N = 3 coletadas de indivíduas do sexo feminino submetidas a parto cesariana. As amostras foram ou não estimuladas (“NS”), estimuladas com oxitocina (“OT”), tratadas com o composto II em uma concentração de 3 μM, ou tratadas com oxitocina e composto II em concentrações variadas do composto II, tanto na presença ausência de nolasibana a uma concentração de 1 μM nos períodos de tempo indicados. Um blot contra a β-actina foi realizado como um controle. A Figura 80c é um Western blot mostrando os efeitos da oxitocina, nolasibana e uma combinação dos mesmos na expressão dos genes pró-inflamatórios COX-2 e p-cPLA2 em biópsias de âmnio pré-trabalho de parto de tempo correto N = 3 coletadas de indivíduas fêmeas humanas submetidas a parto cesariana. As amostras foram quer não estimuladas ("NS"), ou estimuladas com oxitocina ("OT"), tratadas com nolasibana em uma concentração de 1 mM, ou tratadas com oxitocina e nolasibana em uma concentração de 1 mM para os períodos de tempo indicados. Um blot contra a β-actina foi realizado como um controle. A Figura 80d é um Western blot que mostra os efeitos da oxitocina e/ou concentração variável do composto II, opcionalmente, em combinação com o nolasibana, na expressão dos genes pró-inflamatórios COX-2 e p-cPLA2 em biópsias de âmnio pré-trabalho de parto de tempo correto N = 3 coletadas de indivíduas fêmeas humanas submetidas a parto cesariana. As amostras foram quer não estimuladas (“NS”), ou estimuladas com oxitocina (“OT”), tratadas com o composto II em uma concentração de 3 μM, ou tratadas com oxitocina e composto II em concentrações variadas do composto II, tanto na presença como na ausência de nolasibana a uma concentração de 1 μM nos períodos de tempo indicados. Um blot contra a β-actina foi realizado como um controle.

Descrição Detalhada

A invenção fornece α-amino ésteres de uma tiazolidina carboxamida, como (3S)-3-({[(2S)-3-(bifenil-4-ilsulfonil)-1,3-tiazolidin-2-il]carbonil}-amino)-3- (4-fluorofenil)propil L-valinato, bem como formas de sal e polimorfos cristalinos dos mesmos. Estes compostos são capazes de inibir a atividade de proteínas da família do receptor da prostaglandina F (FP-R), tal como o receptor da prostaglandina F2α (PGF2α). Os compostos, sais e polimorfos cristalinos aqui descritos podem ser usados para inibir a atividade do receptor da prostaglandina F in vitro e in vivo, e representam composições terapêuticas eficazes para o tratamento de trabalho de parto prematuro. Os compostos, sais e polimorfos de cristais aqui descritos podem ser administrados o indivíduos (por exemplo, um indivíduo mamífera, tal como um humano) que está sofrendo ou correr o risco de sofrer parto em uma idade gestacional precoce, por exemplo, antes de 38 semanas (por exemplo, de cerca de 20 a cerca de 37 semanas, como uma idade gestacional de cerca de 20 semanas, 21 semanas, 22 semanas, 23 semanas, 24 semanas, 25 semanas, 26 semanas, 27 semanas, 28 semanas, 29 semanas, 30 semanas, 31 semanas, 32 semanas, 33 semanas, 34 semanas, 35 semanas, 36 semanas, ou 37 semanas, de preferência de cerca de 24 a cerca de 34 semanas, como uma idade gestacional de cerca de 24 semanas, 25 semanas, 26 semanas, 27 semanas, 28 semanas, 29 semanas, 30 semanas, 31 semanas, 32 semanas, 33 semanas, ou 34 semanas). A invenção adicionalmente fornece métodos para sintetizar (3S)-3-({[(2S)-3-(bifenil-4-ilsulfonil)-1,3-tiazolidin-2-il]carbonil}-amino)- 3-(4-fluorofenil)propil L-valinato, bem como processos para preparar formas de sal e polimorfos cristalinos dos mesmos. A invenção abrange também métodos de tratamento de trabalho de parto prematuro em um indivíduo através da administração de um alfa-amino éster da invenção a um indivíduo com necessidade de tal tratamento, como um indivíduo que sofre de parto prematuro ou um indivíduo em risco de sofrer trabalho de parto prematuro, opcionalmente em combinação com um ou mais agentes terapêuticos adicionais como aqui descrito.

Além do acima, a invenção abrange composições e métodos relacionados com 3-([1,1'-bifenil]-4-ilsulfonil)-N-[1-(4-fluorofenil)-3-hidroxipropil]- 1,3-tiazolidina-2-carboxamida. Como descrito aqui, este composto pode ser fornecido a um indivíduo (por exemplo, um indivíduo mamífera, como um humano) que está sofrendo ou em risco de sofrer parto em uma idade gestacional precoce, por exemplo, antes de 38 semanas (por exemplo, de cerca de 20 a cerca de 37 semanas, como uma idade gestacional de cerca de 20 semanas, 21 semanas, 22 semanas, 23 semanas, 24 semanas, 25 semanas, 26 semanas, 27 semanas, 28 semanas, 29 semanas, 30 semanas, 31 semanas, 32 semanas, 33 semanas, 34 semanas, 35 semanas, 36 semanas, ou 37 semanas, de preferência de cerca de 24 a cerca de 34 semanas, como uma idade gestacional de cerca de 24 semanas, 25 semanas, 26 semanas, 27 semanas, 28 semanas, 29 semanas, 30 semanas, 31 semanas, 32 semanas, 33 semanas, ou 34 semanas), opcionalmente em combinação com um ou mais agentes terapêuticos adicionais como descrito aqui.

(3S)-3-({[(2S)-3-(bifenil-4-ilsulfonil)-1,3-tiazolidin-2-il]carbonil}- amino)-3-(4-fluorofenil)propil L-valinato (Composto I)

A invenção baseia-se na verificação de que o composto I ((3S)-3-({[(2S)- 3-(bifenil-4-ilsulfonil)-1,3-tiazolidin-2-il]carbonil}-amino)-3-(4-fluorofenil)propil L- valinato, representado pela fórmula I, abaixo) e sais dos mesmos são convertidos in vivo para 3-([1,1'-bifenil]-4-ilsulfonil)-N-[1-(4-fluorofenil)-3- hidroxipropil]-1,3-tiazolidina-2-carboxamida (representado pela fórmula II, abaixo). O composto II, anteriormente descrito no documento US 8.415.480, é um antagonista de receptor de prostaglandina F, já que este composto apresenta uma constante de inibição (Ki) de 6 nM para FP-R humana como determinado por ensaios competitivos de ligação ao radioligante (detalhes experimentais de ensaios competitivos de ligação ao radioligante para a determinação dos valores de Ki são descritos, por exemplo, no documento US 8.415.480, Exemplo 51). Após a administração a um indivíduo, constatou-se que o composto I desesterificou-se in vivo, de modo a formar o composto devido à atividade das esterases endógenas, como aquelas presentes no trato gastrointestinal.

Tem sido verificado que o composto I é um inibidor do receptor da prostaglandina F, já que o composto I inibe FP-R humana com uma Ki de 1 nM. O composto I apresenta melhorias em várias características físico-químicas 10 relativas ao composto II, incluindo a solubilidade em água, bem como em meios que simulam os pequenos conteúdos intestinais em estados alimentado (FeSSIF) e em jejum (FaSSIF). Esses dados estão resumidos na Tabela 2 abaixo. Tabela 2. Comparação das propriedades físico-químicas do composto I 15 e composto II

Além de apresentar solubilidade aquosa melhorada, o Composto I e os sais do mesmo apresentam um mecanismo de absorção surpreendente e benéfico. Como descrito nos Exemplos abaixo, o composto I é desesterificado por esterases habitantes no intestino delgado e subsequentemente penetra passivamente no epitélio do intestino delgado. Surpreendentemente, o Composto I e os sais do mesmo não são substratos para a proteína transportadora Pept1, um co-transportador acoplado a prótons que medeia a absorção de nutrientes peptídicos. Esta descoberta representa uma propriedade inesperada e farmacologicamente benéfica. Pept1 é conhecido por mediar a absorção de uma variedade de ésteres de valinato, como descrito, por exemplo, em Vig et al., Adv. Drug Deliv. Rev. 65: 1370-1385 (2013), cuja divulgação é aqui incorporada por referência. Pept1 exibe uma ampla especificidade de substrato, como evidenciado pela diversidade estrutural de compostos que são transportados através do epitélio intestinal por esta proteína. Apesar da presença da funcionalidade de éster de valinato, o Composto I e os sais do mesmo não são dependentes deste transportador para absorção através do epitélio do intestino delgado. Esta é uma propriedade vantajosa, já que o Composto I e os sais do mesmo (por exemplo, o composto III) portanto, não competem com substratos naturais de Pept1, como nutrientes peptídicos, para ligação e transporte por essa proteína. Pelo contrário, o Composto I e os sais do mesmo são convertidos in vivo em uma forma que é prontamente absorvida de uma maneira independente da energia e do gradiente de prótons locais. Esta propriedade inesperada, associada à elevada solubilidade aquosa do composto I e seus sais, fornece coletivamente um perfil farmacocinético benéfico pelo qual os compostos da invenção se dissolvem facilmente em um ambiente aquoso e são, por sua vez, convertidos em uma forma capaz de absorção independente do transportador.

Cloridrato de (3S)-3-({[(2S)-3-(bifenil-4-ilsulfonil)-1,3-tiazolidin-2- il]carbonil}-amino)-3-(4-fluorofenil)propil L-valinato (Composto III)

Foi verificado que o salde cloreto do composto I cloridrato de ((3S)-3- ({[(2S)-3-(bifenil-4-ilsulfonil)-1,3-tiazolidin-2-il]carbonil}-amino)-3-(4- fluorofenil)propil L-valinato, designado como fórmula III abaixo) é facilmente cristalizado usando vários procedimentos experimentais distintos, conforme descrito nos Exemplos abaixo. O composto III assume uma forma de cristal única e reproduzível após a cristalização a partir de uma variedade de meios e sob diferentes condições ambientais. Além disso, esta forma cristalina do composto III apresenta estabilidade prolongada sob condições ambientais e na presença de umidade relativa elevada. Como é descrito em maiores detalhes nos Exemplos apresentados abaixo, o composto III apresenta uma baixa higroscopicidade e, portanto, não demonstra uma propensão para absorver a umidade da atmosfera local. O Composto III, portanto, apresenta uma resistência a alterações químicas, como hidrólise, bem como resistência à incorporação de impurezas. Por exemplo, as impurezas associadas à água atmosférica não são prontamente integradas na forma cristalina de composto III. O composto III pode ser administrado a um indivíduo, como um indivíduo humana do sexo feminino grávida, para retardar o início do parto prematuro em um indivíduo, por exemplo, por um ou mais dias ou semanas, como de cerca de 1 dia a cerca de 16 semanas (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, ou 30 dias, ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, ou 16 semanas). O composto III também pode ser administrado a um indivíduo, como um indivíduo humana do sexo feminino grávida, para aliviar um ou mais sintomas associados ao trabalho de parto, como sangramento vaginal e ruptura das membranas uterinas.

O composto I, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como composto III, pode ser administrado sozinho ou em combinação com um ou mais agentes adicionais, como um agente terapêutico adicional. Agentes terapêuticos adicionais exemplificadores incluem agentes tocolíticos adicionais, como um antagonista do receptor de oxitocina descrito aqui, incluindo, por exemplo, atosibana, retosibana, barusibana, epelsibana e nolasibana, que é (3Z, 5S)-5-(hidroximatil)-1-[(2’-metil-1,1’-bifenil-4-il)carbonil]pirrolidin-3-ona O- metil oxima, ou uma variante, formulação, forma cristalina, ou derivado das mesmas. Ao suprimir a transdução de sinal da oxitocina, os antagonistas do receptor de oxitocina podem sinergizar com os antagonistas dos receptores da prostaglandina F2α aqui descritos para retardar ou parar as contrações uterinas, por exemplo, em um paciente que sofre ou está em risco de sofrer (por exemplo, apresentando um ou mais sintomas de) trabalho de parto prematuro. Agentes tocolíticos adicionais exemplificadores incluem betamiméticos, como terbutalina, ritodrina, hexoprenalina, albuterol, fenoterol, nilidrina, e orciprenalina, que podem funcionar para inativar a miosina-quinase de cadeia leve e/ou para esgotar as reservas de Ca2+ miometriais por suprarregulação de cAMP, suprimindo assim a contratilidade uterina. Os inibidores de canais de cálcio, como di-hidropiridinas (por exemplo, nifedipina e nicardipina), podem adicionalmente ou alternativamente ser administrados em conjunto com um composto da invenção, por exemplo, para modular a ativação mediada por [Ca2+] miometrial e Ca2+ supressivo por filamentos de miosina que levam a contrações miometriais. Os sais de magnésio, como o sulfato de magnésio, podem adicionalmente ou alternativamente ser administrados em conjunto com um composto da invenção, por exemplo, para hiperpolarizar a membrana plasmática e/ou para competir com Ca2+ por ligação à cadeia leve da miosina. Adicionalmente ou alternativamente, aos doadores de óxido nítrico, como nitroglicerina, podem ser administrados em conjunto com um composto descrito aqui, por exemplo, para aumentar os níveis de monofosfato de guanosina cíclico miometrial, inativando assim os filamentos de cadeia leve de miosina.

Um composto da invenção, como o composto I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como o composto III, pode adicionalmente ou alternativamente ser administrado em conjunção com progesterona ou uma variante ou derivado do mesmo, como 17-α- hidroxiprogesterona, para suprimir a contratilidade uterina em um indivíduo submetido ou em risco de (por exemplo, apresentar um ou mais sintomas de) ter trabalho de parto prematuro.

Adicionalmente ou alternativamente, um composto da invenção pode ser administrado em conjunção com um corticosteroide aqui descrito ou conhecido na técnica, por exemplo, para promover a maturação pulmonar fetal de modo a impedir a ocorrência da síndrome do desconforto respiratório, entre outros distúrbios infantis.

Adicionalmente, o composto III pode ser formulado em uma composição farmacêutica, como uma composição farmacêutica formulada como descrito abaixo.

Métodos de tratamento

O composto I, assim como os seus sais, representam inibidores robustos do receptor da prostaglandina F e podem ser usados para antagonizar a interação entre os membros da família da prostaglandina F, como prostaglandina F2α, com o correspondente receptor de prostaglandina F in vivo para atenuar as contrações uterinas. O Composto I e os sais do mesmo podem ser administrados a um indivíduo, como um indivíduo fêmea humana grávida, para tratar ou impedir o trabalho de parto prematuro. A prostaglandina endógena F2α é sintetizada e liberada pelas células epiteliais uterinas em resposta às cascatas de transdução de sinal iniciadas pela oxitocina. Após ligação de PGF2α a PGF2α-R na superfície extracelular de um miócito uterino, a fosfolipase C cliva o fosfatidilinositol-4,5-bisfosfato (PIP2), para se obter diacilglicerol (DAG) e inositol-1,4,5-trifosfato (IP3). O IP3, por sua vez, potencializa a liberação de retículo sarcoplasmático de cálcio intracelular (Ca2+). O súbito aumento das reservas de cálcio leva, em última instância, às contrações do músculo uterino e à necrose das células endoteliais do corpo lúteo, uma estrutura secretora de progesterona que sustenta um feto em desenvolvimento. A iniciação aberrante das contrações uterinas e a degradação do corpo lúteo causada pela regulação dupla da secreção de PGF2α podem levar ao trabalho de parto prematuro. O Composto I e os sais do mesmo, como o composto III, podem atenuar a formação mediada por fosfolipase C de IP3, e a mobilização subsequente do cálcio intracelular armazena, através da inibição da associação de PGF2α com o PGF2αR. O composto I ou um sal do mesmo, como o composto III, pode assim ser administrado a indivíduos, como indivíduas humanos fêmeas grávidas, a fim de retardar o início do trabalho de parto em um indivíduo, por exemplo, por um ou mais dias ou semanas, como de cerca de 1 dia a cerca de 16 semanas (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30 dias, ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16 semanas). Por exemplo, o composto I ou sal do mesmo, como o composto III, pode ser administrado a um indivíduo de modo a impedir o parto antes do parto cesariana. Adicionalmente, o composto I ou sal do mesmo, como o composto III, pode ser administrado a um indivíduo para a profilaxia e/ou tratamento da dismenorreia. O composto I ou sal do mesmo, como o composto III, pode também ser administrado a um indivíduo, como um indivíduo humana fêmea grávida, de modo a aliviar um ou mais sintomas associados ao trabalho de parto, como hemorragia vaginal e ruptura das membranas uterinas.

Além disso, os compostos da invenção podem ser usados para tratar a endometriose em um paciente (por exemplo, um paciente humano). A superexpressão do receptor da prostaglandina F2α tem sido correlacionada com o crescimento aberrante do endométrio. Como antagonistas da atividade do receptor da prostaglandina F2α, os compostos da invenção (por exemplo, composto (I) ou sal do mesmo, como o composto (III)) podem ser administrados a um paciente que sofre de endometriose para tratar esta indicação. Os compostos da invenção também podem ser administrados a um paciente, a fim de aliviar um ou mais sintomas de endometriose, tais sintomas dolorosos incluindo dismenorreia, dispareunia, dor pélvica, disúria e disquezia durante e/ou após a menstruação. O sucesso do tratamento da endometriose por administração de um composto da invenção a um paciente pode ser indicado por, por exemplo, uma redução no crescimento do tecido endometrial e/ou uma redução nos sintomas da dor durante e/ou após a menstruação.

Além do acima, a presente invenção fornece métodos para tratamento terapêutico, fornecendo o composto II a um indivíduo com necessidade de tratamento para as condições aqui descritas. Por exemplo, o composto II pode ser fornecido a um indivíduo, como um indivíduo fêmea humana grávida, a fim de tratar ou impedir o trabalho de parto prematuro. O composto II é um antagonista competente do receptor de PGF2α e pode, assim, inibir a associação deste receptor com PGF2α. O composto II pode assim, ser fornecido o indivíduos, como indivíduas humanas grávidas a fim de retardar o início do trabalho de parto em um indivíduo, por exemplo, por um ou mais dias ou semanas, como de 1 dia a 16 semanas (por exemplo, 1, 2, 3 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30 dias, ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16 semanas). Por exemplo, o composto II pode ser fornecido a um indivíduo para impedir o trabalho de parto antes do parto cesariana. Além disso, o composto II pode ser fornecido a um indivíduo para a profilaxia e/ou tratamento da dismenorreia. O composto II também pode ser fornecido a um indivíduo, como um indivíduo humana fêmea grávida para aliviar um ou mais sintomas associados ao trabalho de parto, como sangramento vaginal e ruptura de membranas uterinas.

Adicionalmente, o composto II pode ser fornecido a um indivíduo para tratar a endometriose em um paciente (por exemplo, um paciente humano). Como uma antagonista do receptor de PGF2α, o composto II pode ser fornecido a um paciente que sofre de endometriose para tratar esta indicação. O composto II pode ser fornecido a um paciente para aliviar um ou mais sintomas de endometriose, tais sintomas de dor incluindo dismenorreia, dispareunia, dor pélvica crônica, disúria e disquezia durante e/ou após a menstruação. O tratamento bem-sucedido da endometriose, fornecendo o composto II ao indivíduo, pode ser indicado, por exemplo, por uma redução no crescimento do tecido endometrial e/ou uma redução nos sintomas da dor durante e/ou após a menstruação.

Combinação Terapêutica

Embora os processos envolvidos no início de trabalho de parto não sejam ainda completamente definidos, há evidências crescentes do suporte do significado da inflamação tanto no parto no período correto como no parto prematuro. Durante o início do parto, existe um aumento sistêmico em número de fatores pró-inflamatórios incluindo prostaglandinas, citocinas, e superóxido dismutase de manganês. Além disso, a inflamação tem sido fortemente implicada no trabalho de parto prematuro causado por infecção.

Acredita-se que a citocina inicia o trabalho de parto, exercendo dois efeitos distintos: indução diretamente da contração do miométrio uterino, e potencialização da síntese e liberação de prostaglandinas contráteis a partir do endométrio/decídua. Ao inibir a transdução do sinal de oxitocina, os efeitos diretos (contráteis) e indiretos (síntese potencializada da prostaglandina) da oxitocina no útero podem ser alcançados. Além disso, o tratamento de decídua humana com oxitocina resulta na estimulação da produção de prostaglandina F2α. Isso sugere que um papel complementar para sinalização de oxitocina em tecidos uterinos existe, pelo qual a oxitocina pode interagir não só quer diretamente com o miométrio uterino na estimulação das contrações, mas também indiretamente, através da formação de prostaglandinas em outros tecidos.

Há evidências recentes correlacionando a atividade do receptor contrátil da prostaglandina F com o início e durante a progressão do trabalho de parto. Relatos recentes também indicam que a oxitocina induz a produção de prostaglandinas nas células do miométrio humano através de potencialização de ciclo-oxigenase 2 (COX-2). Tal mecanismo pode explicar a liberação sustentada de prostaglandinas no tecido uterino que promove o trabalho de parto. Uma terapia de combinação incluindo um antagonista do receptor de prostaglandina F2α, como o composto I ou sal do mesmo (por exemplo, composto III) e um antagonista do receptor de oxitocina pode, portanto, ser útil para o tratamento e/ou prevenção do trabalho de parto prematuro. Além disso, a combinação de um antagonista de receptor de oxitocina e um antagonista do receptor de prostaglandina F2α podem ser mais eficazes para o tratamento de trabalho de parto prematuro do que os regimes atuais. Os efeitos sinérgicos podem ser observados, e são aqui descritos, na prevenção tanto dos processos contráteis como inflamatórios que sustentam o trabalho de parto prematuro já que a(s) dose(s) de um antagonista do receptor de oxitocina administradas a um paciente pode ser menor quando administrada(s) em combinação com um antagonista do receptor de prostaglandina F em relação às doses que podem ser administradas a um paciente que recebe um antagonista do receptor de oxitocina sozinho.

O composto I ou sal do mesmo, como o composto III, pode ser administrado com um ou mais agentes adicionais, como um antagonista do receptor de oxitocina, a fim de reduzir a ocorrência de contrações uterinas e para retardar o início do trabalho de parto. Por exemplo, o composto I ou sal do mesmo, como o composto III, pode ser administrado simultaneamente com, misturado com, ou administrado separadamente de um antagonista do receptor de oxitocina. Os antagonistas de receptores de oxitocina exemplificadores para uso em conjunção com as composições e métodos da invenção incluem atosibana, retosibana, barusibana, epelsibana e nolasibana, ou uma variante, formulação, forma cristalina, ou derivado das mesmas. Por exemplo, o composto I ou sal do mesmo, como o composto III, pode ser administrado antes, depois, simultaneamente com nolasibana, ou uma variante, formulação, forma cristalina, ou derivado da mesma, a fim de retardar o início do trabalho de parto em um indivíduo, por exemplo, por um ou mais dias ou semanas, como cerca de 1 dia a 16 semanas (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30 dias, ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16 semanas).

Adicionalmente ou alternativamente, um composto da invenção (por exemplo, composto I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como o composto III) pode ser administrado a um paciente submetida ou em risco de (por exemplo, apresentar um ou mais sintomas de) ter trabalho de parto prematuro em conjunto com um betamimético. Os betamiméticos, como a erbutalina, ritodrina, hexoprenalina, albuterol, fenoterol, nilidrina e orciprenalina, podem funcionar para reduzir os níveis intracelulares de Ca2+ (por exemplo, níveis intracelulares de Ca2+ miometrial) através da potencialização dos receptores adrenérgicos β-2, assim sobrerregulando cAMP e reservas de Ca2+ intracelular exaustivas que, de outra forma, estariam disponíveis para estimular a contratilidade uterina. Os betamiméticos exemplificadores para uso em conjunto com as composições e métodos aqui descritos, bem como métodos exemplificadores para a administração de betamiméticos em conjunção com as composições e métodos aqui descritos, são descritos, por exemplo, em Gyetvai et al. Obstet. Gynecol. 94:869-877 (1999), cuja divulgação é aqui incorporada por referência.

Adicionalmente ou alternativamente, um composto da invenção (por exemplo, composto I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como o composto III) pode ser administrado a um paciente que sofre de, ou está em risco de (por exemplo, apresentar um ou mais sintomas de) ter de parto prematuro em conjunto com um inibidor dos canais de cálcio, como um inibidor dos canais de cálcio do tipo L. Os inibidores dos canais de cálcio, incluindo as di-hidropiridinas, como a nifedipina e a nicardipina, podem funcionar suprimindo a liberação de Ca2+ dos retículos sarcoplasmáticos, impedindo a mobilização de Ca2+ que estimula as contrações do músculo uterino. Os inibidores de canais de cálcio exemplificadores para uso em conjunção com as composições e métodos aqui descritos, assim como métodos exemplificadores para a administração de inibidores dos canais de cálcio em conjunção com as composições e métodos aqui descritos, são descritos, por exemplo, em Wojcieszek et al. Cochrane Database Syst. Rev. 6:CD002255 (2014), cuja revelação é aqui incorporada por referência.

Adicionalmente ou alternativamente, um composto da invenção (por exemplo, composto I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como composto III) pode ser administrado a um paciente que sofre de, ou está em risco de ter (por exemplo, apresentar um ou mais sintomas de) trabalho de parto prematuro em conjunção com um sal de magnésio, como sulfato de magnésio. Os sais de magnésio, como o sulfato de magnésio, podem modular a contratilidade uterina através de múltiplos mecanismos, como induzir a hiperpolarização da membrana plasmática e/ou competir com Ca2+ pela ligação à cadeia leve da miosina, suprimindo a contração dos filamentos de miosina em miócitos uterinos.

Adicionalmente ou alternativamente, um composto da invenção (por exemplo, composto I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como composto III) pode ser administrado a um paciente que sofre de, ou está em risco de ter (por exemplo, apresentar um ou mais sintomas de) trabalho de parto prematuro em conjunção com um doador de óxido nítrico. Óxido nítrico, um vasodilatador essencial para a manutenção do tônus normal dos músculos lisos, é produzido em várias células. O óxido nítrico é sintetizado durante a oxidação da L-arginina em L-citrulina. Esta reação é catalisada pela óxido nítrico sintase, que existe em várias isoformas. Ambas as sintases do óxido nítrico indutível (tipo 2) e cerebral (tipo 1) são expressas em células miometriais e células endoteliais de vasos sanguíneos, enquanto a sintase do óxido nítrico endotelial (tipo 3) é expressa exclusivamente em células endoteliais de vasos sanguíneos. A interação entre o óxido nítrico e a guanilil ciclase solúvel, que está presente em células efetoras próximas, representa um mecanismo de transdução de sinal amplamente difundido que acopla diversos estímulos extracelulares de formação de óxido nítrico à síntese de monofosfato de guanosina cíclico (cGMP) em células alvos. O aumento do teor de cGMP nas células do músculo liso, como os miócitos uterinos, inativa as quinases da cadeia leve da miosina, levando ao relaxamento do músculo liso. Os efeitos tocolíticos dos doadores de óxido nítrico, como a nitroglicerina, são descritos, por exemplo, em Simhan et al. New Engl. J. Med. 357: 477-487 (2007), cuja divulgação é aqui incorporada por referência.

Adicionalmente ou alternativamente, um composto da invenção (por exemplo, composto I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como composto III) pode ser administrado a um paciente que sofre de, ou está em risco de ter (por exemplo, apresentar um ou mais sintomas de) trabalho de parto prematuro em conjunto com progesterona ou uma variante da mesma, como caproato de 17-α-hidroxiprogesterona. A progesterona é um hormônio esteroide secretado pelo corpo lúteo e pela placenta após cerca de 8 semanas de gestação. A progesterona e as variantes da mesma, como o caproato de 17- α-hidroxiprogesterona, podem regular a quiescência uterina pela modulação diretamente da síntese miometrial [Ca2+] e de prostaglandina, como descrito, por exemplo, em Muglia et al. New Engl. J. Med. 362:529-535 (2010); Simhan et al. New Engl. J. Med. 357:477-487 (2007); Smith et al. Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 142:3-11 (2009); Bernal. Sem. Cell Dev. Biol. 18:340- 347 (2007); e Hubinont et al. J. Pregnancy. 941057 (2011), as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência.

Adicionalmente ou alternativamente, um composto da invenção (por exemplo, composto I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como o composto III) pode ser administrado a um paciente que sofre de, ou está em risco de (por exemplo, apresentar um ou mais sintomas de) ter de parto prematuro em conjunto com um corticosteroide. Os corticosteroides pré-natais, como betametasona, dexametasona e hidrocortisona, representam uma classe de agentes terapêuticos que podem ser administrados a um indivíduo, como uma mulher grávida durante o trabalho de parto prematuro ou a um indivíduo em risco de ter trabalho de parto prematuro (por exemplo, um ou mais sintomas de trabalho de parto prematuro, como hemorragia vaginal e ruptura de membranas uterinas) para acelerar a maturação pulmonar fetal celerada. O tratamento com corticosteroide pré-natal está associado com uma redução global de morte neonatal, síndrome de diestresse respiratória, hemorragia intraventricular, enterocolite necrosante, suporte respiratório, admissões de cuidados intensivos, e infecções sistêmicas nas primeiras 48 h de vida. Adicionalmente, a terapia corticosteroide pré-natal é eficaz em mulheres com ruptura de membranas prematura (PROM) e com síndromes de hipertensão relacionadas a gravidez. Há evidências que sugerem benefícios em uma ampla faixa de idades gestacionais, como entre cerca de 26 e cerca de 34 semanas, entre outras (Miracle et al. J. Perinat. Med. 36:191-196 (2008), cuja divulgação é aqui incorporada por referência).

Em adição ao exposto acima, de acordo com os métodos aqui descritos, o composto II pode ser fornecido (por exemplo, por administração direta ou por administração de um pró-fármaco do mesmo) a um indivíduo com necessidade de tratamento (por exemplo, um indivíduo humana que sofra ou esteja em risco de sofrer de trabalho de parto prematuro, ou um ser humano que sofre de dismenorreia ou endometriose) com um ou mais agentes adicionais, como um antagonista do receptor de oxitocina, por exemplo, para reduzir a ocorrência de contrações uterinas e retardar o início do trabalho de parto. Por exemplo, o composto II pode ser fornecido simultaneamente com, misturado com, ou fornecido separadamente a partir de um antagonista do receptor de oxitocina. Os antagonistas de receptores de oxitocina exemplificadores para uso em conjunto com as composições e métodos da invenção incluem atosibana, retosibana, barusibana, epelsibana e nolasibana, ou uma variante, formulação, forma cristalina ou derivado da mesma. Por exemplo, o composto II pode ser fornecido antes, depois ou simultaneamente com nolasibana, ou uma variante, formulação, forma cristalina ou derivado da mesma, a fim de retardar o início do trabalho de parto em um indivíduo, por exemplo, por um ou mais dias ou semanas, como de cerca de 1 dia a cerca de 16 semanas (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30 dias, ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16 semanas).

Adicionalmente ou alternativamente, o composto II pode ser fornecido a um paciente que sofre de, ou está em risco de ter (por exemplo, apresentar um ou mais sintomas de) trabalho de parto prematuro em conjunto com um betamimético. Como descrito acima, os betamiméticos, como a erbutalina, ritodrina, hexoprenalina, albuterol, fenoterol, nilidrina e orciprenalina, podem funcionar para reduzir os níveis intracelulares de Ca2+ (por exemplo, níveis de Ca2+ miometrial intracelular) por meio da potencialização de receptores β-2 adrenérgicos, aumentando assim o cAMP e esgotando as reservas de Ca2+ intracelular que de outra forma estariam disponíveis para estimular a contratilidade uterina. Os betamiméticos exemplificadores para uso em conjunto com as composições e métodos aqui descritos, bem como métodos exemplificadores para a administração de betamiméticos em conjunção com as composições e métodos aqui descritos, são descritos, por exemplo, em Gyetvai et al. Obstet. Gynecol. 94:869-877 (1999), cuja divulgação é aqui incorporada por referência.

Adicionalmente ou alternativamente, o composto II pode ser fornecido a um paciente que sofre de, ou está em risco de ter (por exemplo, apresentar um ou mais sintomas de) trabalho de parto prematuro em conjunção com um inibidor dos canais de cálcio, como um inibidor dos canais de cálcio do tipo L. Como descrito acima, os inibidores dos canais de cálcio, incluindo as di- hidropiridinas, como a nifedipina e a nicardipina, podem funcionar suprimindo a liberação de Ca 2+ dos retículos sarcoplasmáticos, evitando assim a mobilização de Ca2+ que estimula as contrações do músculo uterino. Inibidores dos canais de cálcio exemplificadores para uso em conjunção com as composições e métodos aqui descritos, assim como métodos exemplificadores para a administração de inibidores dos canais de cálcio em conjunção com as composições e métodos aqui descritos, são descritos, por exemplo, em Wojcieszek et al. Cochrane Database Syst. Rev. 6:CD002255 (2014), cuja divulgação é aqui incorporada por referência.

Adicionalmente ou alternativamente, o composto II pode ser fornecido a um paciente que sofre de, ou está em risco de ter (por exemplo, apresentar um ou mais sintomas de) trabalho de parto prematuro em conjunção com um sal de magnésio, como sulfato de magnésio. Como descrito acima, os sais de magnésio, como o sulfato de magnésio, podem modular a contratilidade uterina através de múltiplos mecanismos, como induzindo hiperpolarização da membrana plasmática e/ou competindo com Ca2+ pela ligação à cadeia leve da miosina, suprimindo assim a contração de filamentos de miosina nos miócitos uterinos.

Adicionalmente ou alternativamente, o composto II pode ser fornecido a um paciente que sofre de, ou está em risco de ter (por exemplo, apresentar um ou mais sintomas de) trabalho de parto prematuro em conjunção com um doador de óxido nítrico. Como descrito acima, o óxido nítrico, um vasodilatador essencial para a manutenção do tônus normal do músculo liso, é produzido em várias células, e o aumento do conteúdo de cGMP induzido pelo óxido nítrico nas células do músculo liso, como o útero miócitos leva ao relaxamento do músculo liso. Os efeitos tocolíticos dos doadores de óxido nítrico, como a nitroglicerina, são descritos, por exemplo, em Simhan et al. New Engl. J. Med. 357:477-487 (2007), cuja divulgação é aqui incorporada por referência.

Adicionalmente ou alternativamente, o composto II pode ser fornecido a um paciente que sofre de, ou está em risco de ter (por exemplo, apresentar um ou mais sintomas de) trabalho de parto prematuro em conjunção com progesterona ou uma variante da mesma, como caproato de 17-α- hidroxiprogesterona. Como descrito acima, a progesterona ou variantes da mesma, como o caproato de 17-α-hidroxiprogesterona, podem regular a quiescência uterina pela modulação direta da síntese miometrial [Ca2+] e de prostaglandina, como descrito, por exemplo, em Muglia et al. New Engl. J. Med. 362:529-535 (2010); Simhan et al. New Engl. J. Med. 357:477-487 (2007); Smith et al. Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 142:3-11 (2009); Bernal. Sem. Cell Dev. Biol. 18:340-347 (2007); and Hubinont et al. J. Pregnancy. 941057 (2011), as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência.

Adicionalmente ou alternativamente, o composto II pode ser fornecido a um paciente que sofre de, ou está em risco de ter (por exemplo, apresentar um ou mais sintomas de) trabalho de parto prematuro em conjunção com um corticosteroide. Como descrito acima, um corticosteroide pré-natal, como betametasona, dexametasona e hidrocortisona, representa uma classe de agentes terapêuticos que podem ser administrados a um indivíduo, como uma mulher grávida durante o trabalho de parto prematuro ou a um indivíduo em risco de ter trabalho de parto prematuro (por exemplo, um indivíduo exibindo um ou mais sintomas de trabalho de parto prematuro, como hemorragia vaginal, e ruptura de membranas uterinas) para acelerar profundamente a maturação pulmonar fetal, e o tratamento com corticosteroides é associado com uma redução global de morte neonatal, síndrome de diestresse respiratório, hemorragia intraventricular, enterocolite necrosante, suporte respiratório, admissões de cuidados intensivos, e infecções sistêmicas nas primeiras 48 horas de vida.

Composições Farmacêuticas

O composto I ou sal do mesmo, como o composto III, pode ser formulado em uma composição farmacêutica para administração a um indivíduo, como um indivíduo humana fêmea grávida, em uma forma biologicamente compatível adequada para administração in vivo. Portanto, em um aspecto, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica contendo o composto I ou sal do mesmo, como o composto III, em mistura com um diluente, veículo ou excipiente adequado. O composto I ou sal do mesmo, como o composto III, pode ser administrado, por exemplo, oralmente ou por injeção intravenosa.

A presente invenção fornece adicionalmente composições farmacêuticas contendo o composto II. Tais composições podem incluir o composto II em mistura com um diluente, veículo ou excipiente adequado.

Sob condições normais de armazenamento e uso uma composição farmacêutica pode conter um conservante, por exemplo, para impedir o crescimento de microrganismos. Os procedimentos e ingredientes convencionais para a seleção e preparação de formulações adequadas são descritos, por exemplo, em Remington: The Science and Practice of Pharmacy (2012, 22a ed.) e em The United States Pharmacopeia: The National Formulary (2015, USP 38 NF 33).

As composições farmacêuticas podem incluir soluções aquosas estéreis, dispersões ou em pó, por exemplo, para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões estéreis. Em todos os casos, a forma pode ser esterilizada com o uso de técnicas conhecidas na técnica e pode ser fluidizada na medida em que pode ser facilmente administrada a um indivíduo com necessidade de tratamento.

Uma composição farmacêutica pode ser administrada a um indivíduo, por exemplo, um indivíduo humana, sozinha ou em combinação com veículos farmaceuticamente aceitáveis, como aqui observado, cuja proporção pode ser determinada pela solubilidade e/ou natureza química do composto, rota de administração escolhida e prática farmacêutica padrão.

Composições para Terapia de Combinação

O composto I ou sal do mesmo, como o composto III, pode ser usado isoladamente ou em combinação com um ou mais agentes adicionais úteis para a inibição de contrações uterinas e/ou luteólise, como atosibana, retosibana, barusibana, epelsibana e nolasibana, ou uma variante, formulação, forma cristalina ou derivado das mesmas, entre outros agentes terapêuticos (por exemplo, agentes tocolíticos) aqui descritos. O composto I ou sal do mesmo, como o composto III, pode ser misturado com um agente ativo adicional, como um antagonista do receptor de oxitocina, betamimético, inibidor de canal de cálcio, sal de magnésio, doador de ácido nítrico, progesterona ou variante da mesma, ou corticosteroide descrito aqui e administrado a um paciente em uma composição única ou composto I ou sal do mesmo, como composto III, podem ser administrados para um paciente separadamente de um agente ativo adicional. Por exemplo, o composto I ou sal do mesmo, como o composto III, e um agente ativo adicional podem ser administrados sequencialmente a um paciente.

Além do acima referido, o composto II pode ser fornecido a um indivíduo sozinha ou em combinação com um ou mais agentes adicionais úteis para a inibição de contrações uterinas e/ou luteólise, como atosibana, retosibana, barusibana, epelsibana e nolasibana, ou uma variante, formulação, forma cristalina, ou derivado da mesma, entre outros agentes terapêuticos (por exemplo, agentes tocolíticos) aqui descritos. O composto II pode ser misturado com um agente ativo adicional, como um antagonista do receptor de oxitocina, betamimético, inibidor dos canais de cálcio, sal de magnésio, doador de ácido nítrico, progesterona ou variante da mesma ou corticosteroide aqui descrito, e administrado a um paciente em uma composição única. ou o composto II pode ser fornecido a um paciente separadamente de um agente ativo adicional. Por exemplo, o composto II e um agente ativo adicional podem ser fornecidos sequencialmente a um paciente, por exemplo, fornecendo o composto II ao paciente seguido da administração do agente ativo adicional ao paciente.

Uma composição para terapia de combinação aqui descrita, como uma composição farmacêutica aqui descrita, pode ser administrada a um indivíduo para retardar o início do trabalho de parto no indivíduo, por exemplo, por um ou mais dias ou semanas, como de cerca de 1 dia a cerca de 16 semanas (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30 dias, ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16 semanas). Em algumas modalidades, o indivíduo está em trabalho de parto prematuro. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é administrada ao indivíduo (por exemplo, um ser humano) antes do início do trabalho de parto prematuro. Uma composição farmacêutica da invenção pode ser administrada a um indivíduo (por exemplo, um indivíduo humana) para prevenir o trabalho de parto antes do parto cesariana. Uma composição farmacêutica da invenção pode ser administrada a um indivíduo (por exemplo, um indivíduo humana) para o tratamento ou prevenção de dismenorreia. Uma composição farmacêutica da invenção pode ser administrada a um indivíduo, como um indivíduo humana fêmea grávida, de modo a aliviar um ou mais sintomas associados ao trabalho de parto, como hemorragia vaginal e ruptura de membranas uterinas.

Um agente terapêutico adicional presente em uma composição para terapia de combinação pode ser, por exemplo, outro agente tocolítico. O agente tocolítico adicional pode ser, por exemplo, um antagonista do receptor de oxitocina, como a atosibana, a retosibana, a barusibana, a epelsibana e a nolasibana, bem como uma ou mais variantes, formulações, formas cristalinas ou derivados das mesmas. Por exemplo, a atosibana e as suas variantes são descritas, por exemplo, nas Patentes US 4.504.469 e 4.402.942, cujas divulgações são aqui incorporadas por referência. Retosibana e variantes das mesmas são descritas, por exemplo, nas Patentes US 7.514.437; 8.367.673; 8.541.579; 8.071.594; 8.357.685; 8.937.179; e US 2016/0074413, as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência.

Barusibana e variantes das mesmas são descritos, por exemplo, nas Patentes US 6.143.722; 7.091.314; 7.816.489; e US 2016/0175283, as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência. Epelsibana e variantes da mesma são descritas, por exemplo, nas Patentes US 7.514.437; 8.367.673; 8.541.579; 7.550.462; 7.919.492; 8.202.864; 8.742.099; 9.408.851; 8.716.286; e 8.815.856, as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência. Nolasibana e variantes, formulações e formas cristalinas das mesmas são descritas, por exemplo, nas Patentes US 7.115.754 e na Publicação do Pedido de Patente US 2015/0073032; 2015/0164859; e 2016/0002160, as divulgações de cada uma das quais são aqui incorporadas por referência.

Em algumas modalidades, o agente tocolítico adicional é um betamimético, como erbutalina, ritodrina, hexoprenalina, albuterol, fenoterol, nilidrina ou orciprenalina. Em algumas modalidades, o agente tocolítico adicional é um inibidor dos canais de cálcio, como uma di-hidropiridina, como nifedipina ou nicardipina. Em algumas modalidades, o agente tocolítico adicional é um sal de magnésio, como sulfato de magnésio. Em algumas modalidades, o agente tocolítico adicional é um doador de óxido nítrico, como a nitroglicerina.

Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um corticosteroide. Em algumas modalidades, o corticosteroide é betametasona. Em algumas modalidades, o corticosteroide é dexametasona. Em algumas modalidades, o corticosteroide é hidrocortisona.

Em tratamentos combinados, as dosagens de um ou mais dos compostos terapêuticos podem ser reduzidas a partir de dosagens padrões quando administradas isoladamente. Por exemplo, as doses podem ser determinadas empiricamente a partir de combinações e permutações de fármacos ou podem ser deduzidas por um médico versado na técnica.

Exemplos

Os exemplos seguintes são apresentados de modo a fornecer aos versados na técnica uma descrição de como as composições e métodos aqui descritos podem ser usados, realizados e avaliados, e pretendem ser puramente exemplificadores da invenção e não se destinam a limitar o escopo do que os inventores consideram como sua invenção.

Exemplo 1. Preparação dos compostos I e III

O Composto I e o sal de cloreto do mesmo (composto III) foram preparados de acordo com o Esquema 1, apresentado abaixo. Este Exemplo descreverá cada uma das etapas realizadas para sintetizar o composto I, designado Estágios 1-6. Esquema 1. Preparação do composto I e do sal de cloreto do mesmo Estágio 1: Preparação terc-butil éster de ácido 2-[1-(4-fluorofenil)-3- hidroxipropilcarbamoil]tiazolidina-3-carboxílico

A um frasco de tamanho adequado (vaso A), ácido 3-(butoxicarbonil)- 1,3-tiazolidina-(2S)-carboxílico (1% p) foi adicionado, seguido por tetra- hidrofurano e os conteúdos do frasco foram subsequentemente resfriados para -35°C a cerca de -45°C. N-metilmorfolina (1,18 vol) foi, então, adicionado ao frasco mantendo a temperatura entre -30°C e -40°C. Cloroformato de isobutila (0,58 vol) foi, então, adicionado ao frasco mantendo a temperatura entre -30°C e -40°C.

A um vaso separado (vaso B), (3S)-amino-3-(4-fluorofenil)propan-1-ol (0,76% p) e THF foram adicionados e o vaso foi misturado completamente até os sólidos em massa se dissolverem.

A solução de (3S)-amino-3-(4-fluorofenil)propan-1-ol do vaso B foi então adicionada ao vaso de reação A mantendo a temperatura entre -30°C e -40°C. Os conteúdos dos fracos foram então deixados aquecer a 15°C a 25°C durante um período de 1 h a 24 h. A mistura de reação foi agitada a 15°C a 25°C até que a reação tenha sido observada como completa. A mistura de reação foi concentrada até a secura, e acetato de etila foi subsequentemente adicionado ao resíduo, seguido por cloreto de amônio aquoso saturado. A fase orgânica foi separada e lavada com solução aquosa saturada de cloreto de amônio. A fase orgânica foi então separada e lavada com solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio. A fase orgânica foi então seca com sulfato de sódio, filtrada, e o concentrado foi filtrado a 35°C a 40°C até que o teor de acetato de etila foi < 10% em peso (p/p) para produzir terc-butil éster de 2-[1-(4- fluorofenil)-3-hidroxipropilcarbamoil]tiazolidina-3-carboxílico ácido.Estágio 2: Preparação [1-(4-fluorofenil)-3-hidroxipropil]-amida de ácido 3-(bifenil-4-sulfonil)tiazolidina-2-carboxílico

A um frasco de tamanho adequado (vaso A), terc-butil éster de ácido 2- [1-(4-fluorofenil)-3-hidroxipropilcarbamoil]tiazolidina-3-carboxílico (1% p) foi adicionado, seguido por diclorometano. Os conteúdos do frasco foram subsequentemente resfriados para -15°C a -20°C. Ácido clorídrico (3,3 vol) foi então adicionado ao frasco mantendo a temperatura entre -15°C e -20°C até que a reação tenha sido observada como completa. A mistura de reação foi então resfriada a -35°C a -40°C e tetra-hidrofurano foi adicionado à mistura mantendo a temperatura entre -30°C e -40°C. N,N-di-isopropiletilamina foi então adicionado à mistura (8,16 vol) mantendo a temperatura entre -15°C e - 45°C. 4-dimetilaminopiridina (0,032% p) foi então adicionado ao vaso mantendo a temperatura entre -15°C e -45°C.

Em um vaso separado (vaso B), o cloreto de 4-bifenilsulfonil (0,85% p) foi adicionado, seguido por THF.

A solução de cloreto de 4-bifenilsulfonil do vaso B foi adicionada ao vaso de reação A mantendo a temperatura entre -15°C e -45°C. Os conteúdos da mistura de reação foram então deixados aquecer a 15°C a 25°C durante um período de 1 h a 24 h. acetato de etila foi subsequentemente adicionado ao frasco, seguido por solução aquosa saturada de cloreto de amônio. A fase orgânica foi separada e lavada com solução aquosa saturada de cloreto de amônio seguido por solução aquosa saturada de carbonato de hidrogênio. A fase orgânica foi então seca sobre sulfato de sódio e filtrada. O filtrado foi concentrado a 35°C a 40°C até se obter um resíduo sólido. O diclorometano foi então adicionado ao resíduo e misturado a 30°C a 35°C. Após a evaporação, o acetato de etila foi então adicionado ao resíduo e a suspensão foi transferida para um vaso adequado. A suspensão agitada foi então aquecida até o refluxo e depois resfriada a 0°C a 5°C. O sólido precipitado foi coletado por filtração. O bolo de filtração foi lavado com acetato de etila seguido de terc-butil metil éter e o bolo de filtração foi seco por 1 h a 24 h sob nitrogênio para produzir [1-(4- fluorofenil)-3-hidroxipropil]-amida de ácido 3-(bifenil-4-sulfonil) tiazolidina-2- carboxílico.Estágio 3A: Preparação de 3-{[3-(bifenil-4-sulfonil)tiazolidina-2-carbonil]amino}-3-(4-fluorofenil)-3-propil éster de ácido 2-terc-butoxicarbonilamino-3-metilbutírico

A um frasco de tamanho adequado (vaso A), Boc-L-valina (0,48% p), diclorometano, e N,N-dimetilformamido foram adicionados e a mistura foi subsequentemente agitada sob nitrogênio a 15°C a 25°C. Adicionou-se então 1-hidroxibenzotriazol (HOBt, 0,3% em peso) e cloridrato de 1-(3- dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (EDCl, 0,42% em peso) ao vaso enquanto se mantinha a temperatura a 15°C a 25°C. A mistura foi subsequentemente agitada de 15°C a 25°C até os sólidos em massa serem dissolvidos para produzir a solução A.

A um vaso separado (vaso B), [1-(4-fluorofenil)-3-hidroxipropil]amida de ácido 3-(bifenil-4-sulfonil)tiazolidina-2-carboxílico (1,0 em peso), e N,N- dimetilformamida foram adicionados e a mistura foi subsequentemente agitada a uma temperatura entre 15°C e 25°C sob nitrogênio. Adicionou-se então 4- dimetilaminopiridina (0,27 em peso) ao vaso enquanto se mantinha a temperatura entre 15°C e 25°C. Agitou-se a mistura a esta temperatura até os sólidos em massa se dissolverem (tipicamente 5 a 15 minutos) para produzir a solução B.

A solução A foi então adicionada à solução B mantendo a temperatura entre 15°C e 30°C. A mistura foi agitada a esta temperatura até se observar que a reação estava completa. A mistura de reação foi concentrada para remover os solventes voláteis. O acetato de etila foi subsequentemente adicionado ao frasco, seguido de uma solução aquosa de ácido cítrico a 10% p/p. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etila. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com uma mistura de solução aquosa de ácido cítrico a 10% p/p e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seguido por solução aquosa saturada de cloreto de amônio, solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica foi então seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e o bolo de filtração foi lavado com acetato de etila. Os filtrados foram concentrados até se obter um resíduo sólido para produzir 3-{[3-(bifenil-4- sulfonil)tiazolidina-2-carbonil]amino}-3-(4-fluorofenil)-3-propil éster de ácido 2- terc-butoxicarbonilamino-3-metilbutírico bruto.Estágio 3B: Purificação de 3-{[3-(bifenil-4-sulfonil)tiazolidina-2-carbonil]amino}-3-(4-fluorofenil)-3-propil éster de ácido 2-terc-butoxicarbonilamino-3-metilbutírico

Para purificar o 2-terc-butoxicarbonilamino-3-metilbutírico ácido 3-{[3- (bifenil-4-sulfonil)tiazolidina-2-carbonil]amino}-3-(4-fluorofenil)-3-propil éster, o produto bruto (1% p) e diclorometano foram misturados em um vaso até os sólidos em massa se dissolverem. A solução foi então carregada sobre sílica seguindo a adição de diclorometano. O produto foi eluído com acetato de etila:heptanos. As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas até secura sob vácuo a uma temperatura do banho de água de 35°C a 40°C para produzir 3-{[3-(bifenil-4-sulfonil)tiazolidina-2-carbonil]amino}- 3-(4-fluorofenil)-3-propil éster de ácido 2-terc-butoxicarbonilamino-3-metilbutírico purificado.Estágio 4: Preparação de 3-{[3-(bifenil-4-sulfonil)tiazolidina-2-carbonil]amino}-3-(4-fluorofenil) propil éster metanossulfonato de ácido 2- amino-3-metilbutírico

A um frasco de tamanho adequado, o 2-terc-butoxicarbonilamino-3- metilbutírico ácido 3-{[3-(bifenil-4-sulfonil)tiazolidina-2-carbonil]amino}-3-(4-fluorofenil)-3-propil éster (1% p) foi adicionado, seguido de 1,4-dioxano e a mistura foi agitada sob nitrogênio. Adicionou-se subsequentemente ácido metanossulfônico (0,18% p) e aqueceu-se o conteúdo do frasco a uma temperatura entre 68°C e 73°C. A mistura de reação foi agitada a esta temperatura até se verificar que a reação estava completa por análise de 1H NMR. A mistura de reação foi subsequentemente resfriada a 35°C a 40°C e concentrada até secura a esta temperatura. O resíduo foi então dissolvido em THF e concentrado até secura a 35°C a 40°C. Este ciclo de azeo-secagem foi repetido até o teor em 1,4-dioxano ser inferior a 1,0% p/p para produzir 3-{[3-(bifenil-4-sulfonil)tiazolidina-2-carbonil]amino}-3-(4-fluorofenil) propil ester metanossulfonato de ácido 2-amino-3-metilbutírico.Estágio 5: Preparação de 3-{[3-(bifenil-4-sulfonil)tiazolidina-2-carbonil]amino}-3-(4-fluorofenil) propil éster de ácido 2-amino-3-metilbutírico (Composto I)

A um frasco de tamanho adequado, 3-{[3-(bifenil-4-sulfonil)tiazolidina-2- carbonil]amino}-3-(4-fluorofenil) propil éster de ácido 2-amino-3-metilbutírico metanossulfonato (1% p) foi adicionado, seguido por diclorometano. O conteúdo do frasco foi subsequentemente resfriado a 5°C a 15°C. Solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio foi adicionada à mistura, mantendo a temperatura entre 5°C e 25°C. As fases foram subsequentemente separadas, e a fase orgânica foi adicionada novamente ao vaso, seguido por uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio, mantendo a temperatura entre 5°C e 25°C. As camadas aquosa e orgânica foram então separadas, e a fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e bolo de filtração foi lavado com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram então concentradas até secura a 40°C a 45°C até que o teor de diclorometano fosse < 2% p/p para produzir 3-{[3-(bifenil-4-sulfonil)tiazolidina-2-carbonil]amino}-3-(4- fluorofenil) propil éster de ácido 2-amino-3-metilbutírico (composto I).Estágio 6: Preparação de 3-{[3-(bifenil-4-sulfonil)tiazolidina-2-carbonil]amino}-3-(4-fluorofenil) propil éster cloridrato de ácido 2-amino-3- metilbutírico (Composto III)

A um frasco de tamanho adequado, foi adicionada água (1,66 vol), seguida de ácido clorídrico (0,18 vol) e a temperatura da mistura foi ajustada para 15°C a 25°C. A solução foi então filtrada e a solução filtrada foi adicionado a um frasco de tamanho adequado (vaso A) seguido por etanol e acetato de etila. A mistura resultante foi agitada sob nitrogênio a 15°C a 25°C durante pelo menos 5 minutos.

Um vaso de tamanho adequado (vaso B), 3-{[3-(bifenil-4-sulfonil)tiazolidina-2-carbonil]amino}-3-(4-fluorofenil) propil éster de ácido 2- amino-3-metilbutírico (1% p) foi adicionado, seguido por etanol. O conteúdo do frasco foi subsequentemente misturado para dissolver os sólidos em massa e clarificar a solução.

A solução do vaso B foi então adicionada ao vaso A enquanto se mantinha a temperatura entre 15°C e 25°C. A mistura agitada foi resfriada a 0°C a 5°C e agitada a esta temperatura durante 50 a 70 minutos. O sólido foi coletado por filtração e o bolo de filtração foi seco sob nitrogênio durante pelo menos 12 horas para produzir cloridrato de 3-{[3-(bifenil-4-sulfonil)tiazolidina-2- carbonil]amino}-3-(4-fluorofenil) propil éster de ácido 2-amino-3-metilbutírico.

Exemplo 2. Propriedades farmacodinâmicas do composto I e sais do mesmo Farmacologia não clínica

O Composto I e os sais do mesmo são rapidamente convertidos para o composto II após administração do trato gastrointestinal. O composto II é um antagonista de receptor da prostaglandina F2α competitivo e reversível (receptor FP2α humano de Ki = 6 nM), que está em desenvolvimento para o controle do trabalho de parto prematuro através da inibição das contrações uterinas prematuras. A eficácia farmacológica (efeito tocolítico) foi demonstrada em um modelo de atividade uterina espontânea em ratas prenhes tardias.

Farmacologia In Vitro

A potência de inibição do composto I e do composto II no receptor da prostaglandina F2α foi avaliada por análise da afinidade destes compostos para o receptor FP recombinante expresso em células HEK293-EBNA. Os resultados mostram uma elevada afinidade de ligação do composto I e do composto II ao receptor humano (ver Tabela 2).

A seletividade do composto II foi testada contra todos os oito subtipos de receptores de prostaglandina. A seletividade foi aproximadamente 10 vezes contra o receptor de prostaglandina E2 (EP2) e maior que 100 vezes contra outros receptores. O teste do efeito de 1 μM de composto II contra um painel de 50 sítios de ligação a receptores, enzimas e canais apresentaram uma elevada seletividade para FP.

A caracterização funcional do composto II em FP humana foi realizada em células HEK293-EBNA transfectadas. O composto II foi capaz de inibir de modo dependente de dose a síntese de IP3 com valor de IC50 de 60 nM. Quando adicionado sozinho às células FP/HEK293-EBNA, o composto II testado até 10 μM não induziu qualquer síntese de IP3, indicando que o composto é desprovido de atividade agonista.

Farmacologia in vivo

Os efeitos tocolíticos do composto I e do composto II foram investigados em um modelo de atividade uterina espontânea em ratas prenhes anestesiadas tardias Kawarabayashi et al. Am. J. Obstet. Gynecol. 175:1348-1355 (1996) e Shinkai et al. J. Pharm. Pharmacol. 52:1417-1423 (2000)). Resumidamente, ratas fêmeas prenhes tardias foram anestesiadas com uretano. Um corno uterino prenhe foi exposto e um cateter de polietileno portando na ponta um balão de látex preenchido com solução salina foi inserido no lúmen. O cateter foi conectado a um sistema de amplificação/gravação por meio de um transdutor de pressão. Doses crescentes do composto I (como sal mesilato) ou do composto II foram administradas ou injetadas oralmente por uma infusão i.v. de 10 minutos. Para a administração i.v., a atividade contrátil uterina foi quantificada pelo cálculo da AUC durante o período de injeção de 10 minutos.

A variação percentual dos valores da AUC em relação à resposta uterina espontânea observada após a administração de cada composto foi calculada em comparação com o valor antes da primeira administração da dose (valor basal). O efeito do composto I ou do composto II foi avaliado pela comparação dos valores de pressão uterina luminal pré e pós-tratamento. Para a administração oral, o mesmo procedimento de cálculo foi aplicado em diferentes pontos no tempo após o tratamento. Diferenças estatísticas entre os grupos de tratamento em cada momento foram determinados utilizando ANOVA unidirecional seguida do teste de Tukey. Ambos os compostos administrados intravenosamente ou oralmente foram capazes de reduzir marcadamente as contrações uterinas espontâneas em cerca de 40-50% (efeito máximo obtido a 30 mg/kg por via i.v. e 60 mg/kg oralmente). A atividade intravenosa foi comparável ou ligeiramente superior à do fármaco tocolítico atosibana licenciado na União Europeia.

O efeito inibidor após a administração oral apareceu com um início rápido (5-15 min após a administração) e permaneceu no nível sustentado até o final do período de observação de 3h. (Figura 3)

Por dose oral única, a inibição significativa das contrações uterinas é alcançada em 30 mg/kg.

Estudos de farmacologia in vitro mostraram assim a elevada afinidade do composto I e do composto II para o receptor FP humano. Quando administrados por via intravenosa ou oral, estes compostos foram capazes de reduzir marcadamente as contrações uterinas espontâneas em cerca de 4050% quando investigados num modelo de atividade uterina espontânea em ratazanas prenhes anestesiadas no final do período (19-21 dias de gestação).

Exemplo 3. Telas de cristal de sais de compostos I

Este exemplo descreve experimentos conduzidos para gerar e caracterizar formas de sal cristalino do composto I.

Sumário

O sal de mesilato do composto I foi determinado como sendo amorfo por XRPD. Tentativas de cristalizar o material não foram bem-sucedidas. A base livre foi sintetizada a partir do sal de mesilato e foi usada na preparação de uma variedade de sais. Um sal de hidrossulfato cristalino foi obtido diretamente da síntese de sal. Três sais foram cristalizados usando diferentes misturas de solventes e técnicas de cristalização: cloridrato, fumarato e di-hidrofosfato. O sal de cloreto pareceu apresentar baixa higroscopicidade, estabilidade prolongada a umidade relativa elevada (HR) e assume uma forma cristalina única quando cristalizado a partir de uma variedade de condições experimentais distintas.

O sal de HCl cristalino foi obtido em dois experimentos de evaporação e um experimento com suspensão. O mesmo padrão de XRPD foi observado em cada caso. Com base em dados térmicos, o material tinha algum solvente residual; um ponto de fusão provável foi de aproximadamente 146-147°C. A decomposição parcial provavelmente ocorreu durante a fusão. O sal de cloridrato não era higroscópico com base em dados de balanço de umidade.

O sal de hidrossulfato cristalino foi provavelmente solvatado e decomposto acima de aproximadamente 100°C. O material era estável em umidades relativas de até aproximadamente 65%.

O di-hidrofosfato cristalino e o sal de fumarato foram higroscópicos a aproximadamente 65% de HR. Tentativas de aumentar os sais não foram bem- sucedidas devido à alta umidade do laboratório. Assim, apenas a caracterização parcial estava disponível para estes sais.

O sal de cloreto, hidrossulfato e fumarato mostrou solubilidades aquosas comparáveis (inferiores a 1 mg/mL, ver Figura 8).

Experimental

As análises de difração de raios-X de pó descritas aqui foram realizadas num difratômetro de raios-X de pó Shimadzu XRD-6000 utilizando radiação Cu Kα. O instrumento é equipado com um tubo de raios-X de foco longo e fino. A tensão e amperagem do tubo foram ajustadas em 40 kV e 40 mA, respectivamente. As fendas de divergência e de dispersão foram ajustadas em 1° e a fenda de recepção foi ajustada em 0,15 mm. A radiação difratada foi detectada por um detector de cintilação de NaI. Utilizou-se uma varredura contínua de teta dois teta a 3°/min (0,4 seg 0,02° de passo) de 2,5 a 40° 2θ. Um padrão de silício foi analisado a cada dia para verificar o alinhamento do instrumento. As amostras foram analisadas com um suporte de amostras de silício.

As análises de difração de raios-X em pó aqui descritas foram também realizadas num difratômetro Inel XRG-3000, equipado com um detector sensível à posição curvo com uma faixa de 2θ de 120°. Os dados em tempo real foram coletados usando radiação Cu Kα começando em aproximadamente 4° 2θ em uma resolução de 0,03° 2θ. A tensão e a amperagem do tubo foram ajustadas para 40 kV e 30 mA, respectivamente. A fenda do monocromador foi ajustada em 5 mm por 160 μm. Os padrões são exibidos de 2,5 a 40° 2θ. As amostras foram preparadas para análise, embalando-as em capilares de vidro de paredes finas. Cada capilar foi montado em uma cabeça de goniômetro que é motorizada para permitir a rotação do capilar durante a aquisição de dados. As amostras foram analisadas durante 5 ou 10 minutos. A calibração do instrumento foi realizada diariamente usando um padrão de referência de silício.

As análises de DSC aqui descritas foram realizadas em um calorímetro de varredura diferencial TA Instruments 2950. O instrumento foi calibrado utilizando índio como material de referência. As amostras foram colocadas em um recipiente de DSC de alumínio padrão, o recipiente foi prensado e o peso foi registrado com precisão. As amostras foram equilibradas a 25°C e aquecidas sob uma purga de nitrogênio a uma taxa de 10°C/min até 350°C. O metal índio foi usado como padrão de calibração.

As análises de TG aqui descritas foram realizadas num analisador termogravimétrico TA Instruments 2950. Os padrões de calibração eram níquel e ALUMEL™. As amostras foram colocadas em um recipiente de amostra de alumínio e inseridas no forno TG. As amostras foram primeiro equilibradas a 25°C, depois aquecidas sob uma corrente de nitrogênio a uma taxa de aquecimento de 10°C/min até 350°C.

A solução de espectros de ressonância magnética nuclear (NMR) de 1H aqui descritos foram adquiridas à temperatura ambiente com um espectrômetro Varian UNITYINOVA-400, em um uma frequência de Larmor 1H de 399,8 MHz. As amostras foram dissolvidas em metanol-d4, cloreto de metileno-d2 ou clorofórmio-d3. Os espectros foram adquiridos com uma Largura de pulso 1H de 7,8 ou 8,6 μs, tempo de aquisição de 2,50 segundos, atraso de 5 segundos entre varreduras, largura espectral de 4095 ou 6400 Hz com 20474 ou 32000 pontos de dados e 16 ou 40 varreduras de- coadição. O decaimento de indução livre (FID) foi processado usando o software Varian VNMR 6.1C com 65536 pontos e um fator de amplificação de linha exponencial de 0,2 Hz para melhorar a razão de sinal-ruído. Os espectros foram referenciados ao tetrametilsilano interno (TMS) a 0,0 ppm ou ao pico do solvente residual.

Os espectros de FT-Raman aqui descritos foram adquiridos num espectro FT-Raman 960 ou 860 (Thermo Nicolet). Este espectrômetro usa um comprimento de onda de excitação de 1064 nm. Aproximadamente 0,5-0,7W da potência do laser Nd:YVO4 foi usada para irradiar as amostras. Os espectros de Raman foram medidos com um detector de arsenieto de índio e gálio (InGaAs). As amostras foram preparadas para análise, colocando o material em um capilar de vidro e, em seguida, em um suporte de capilar revestido de ouro no acessório. Um total de 256 amostras foram coletadas de 3600 a 100 cm-1 com uma resolução espectral de 4 cm-1, usando a apodização de Happ-Genzel. A calibração do comprimento de onda foi realizada utilizando enxofre e ciclo-hexano.

Os dados de sorção/dessorção de umidade (MB) foram coletados em um analisador de sorção de vapor VTI SGA-100. Os dados de sorção e dessorção foram coletados ao longo de uma faixa de 5% a 95% de umidade relativa (RH) em intervalos de 10% de RH sob uma purga de nitrogênio. As amostras não foram secas antes da análise. Os critérios de equilíbrio usados para análise foram menos de 0,0100% de alteração de peso em 5 minutos, com um tempo máximo de equilíbrio de 3 horas se o critério de peso não fosse atingido. Os dados não foram corrigidos para o teor inicial de umidade das amostras. NaCl e PVP foram usados como padrões de calibração.

Preparação do composto I

Múltiplas tentativas foram feitas para gerar a base livre do composto I a partir do sal mesilato, cujos resultados são descritos na Figura 4. Inicialmente, um equivalente de hidróxido de sódio foi usado por equivalente do sal. A NMR de prótons indicou a presença de picos de ácido metanossulfônico. Uma reação completa foi conseguida quando o sal de mesilato em cloreto de metileno e uma solução de NaOH em água foram misturados em uma razão sal:base de 1:2. A camada orgânica foi separada após várias lavagens e evaporada. O material oleoso pastoso ou viscoso resultante foi seco a vácuo para originar um sólido amorfo. A base livre foi analisada por Espectroscopia 1H NMR e de Raman (Figura 15 e Figura 16, respectivamente). Estudos subsequentes da tela de sal usaram a base livre como material de partida (resumido nas Figuras 5-7).

Tela de sal do composto I

Doze sais do composto I foram preparados. Um sal de hidrossulfato cristalino foi precipitado pela adição de aproximadamente 25 molar de excesso de ácido sulfúrico a uma solução de base livre em acetona. Os outros sais da etapa de síntese pareciam não ser birrefringentes por microscopia ou amorfos por XRPD (Figuras 5-7). Os sais de benzenossulfonato, citrato, etanossulfonato, cloridrato, hidrogenossulfato e sulfato foram analisados por NMR de prótons.

Os experimentos de cristalização dos sais do composto I encontram-se resumidos nas Figuras 5-7. Os seguintes sais foram cristalizados: cloridrato, fumarato e di-hidrofosfato.

O sal de cloreto foi cristalizado a partir de uma mistura de 1:1 de acetona: tolueno, uma mistura de cloreto de metileno:éter etílico e uma mistura de acetona. O mesmo padrão de XRPD foi observado em todos os experimentos e foi designado como forma A (Figura 7). O sal de fumarato cristalino foi obtido a partir de evaporação lenta de uma solução 1:1 de metanol: tolueno. O padrão de raios-X foi designado como padrão B. O sal de hidrossulfato e di-hidrofosfato exibiu padrões de XRPD muito semelhantes (designados como padrão X). Os contraíons HSO4 e H2PO4 são semelhantes em tamanho e pequenos em comparação com a molécula de base livre, portanto, as estruturas de cristais semelhantes são prováveis para o sal de hidrossulfato e di-hidrofosfato. As tentativas de cristalizar o sal de mesilato produziram materiais sólidos viscosos ou vítreos.

Caracterização da base livre e sal de mesilato do composto I

O espectro de NMR de próton da base livre mostrou dois dupletos a aproximadamente 1 ppm correspondendo aos grupos metila do fragmento de valina. Os grupos metila estão no centro de carbono quiral e, portanto, não são equivalentes em NMR de prótons. Dois dupletos para os grupos metila foram observados para os seguintes sais do composto I: besilato, citrato, esilato, hidrossulfato (mais sobreposto) e sulfato (mais sobreposto). No espectro de 1H NMR do sal de mesilato e o cloreto de sal, o dupleto a ~ 1 ppm correspondente a seis átomos de hidrogênio resultou a partir de uma sobreposição completa de dois dupletos dos grupos metila (Figura 13 e Figura 21).

Um experimento de desacoplamento homonuclear de 1H NMR na base livre confirmou o multipleto de hidrogênio metino (CH) a aproximadamente 2 ppm (Figura 18). Um espectro de 1H NMR da base livre gravado na ausência de pré-irradiação de ambos os grupos metila é mostrado na parte inferior da Figura 18. A irradiação de cada grupo metila (topo, meio) resultou em um multipleto metino simplificado com o mesmo número de linhas (5). Se os dois dupletos correspondessem a diferentes diastereoisômeros, dois tipos de multipletos, o original e o simplificado, seriam observados.

Caracterização do sal de cloreto do composto I (composto III)

O sal de cloreto cristalino foi analisado por meio de técnicas térmicas, 1H NMR e análise de sorção/dessorção de umidade automatizada. A endoterma a aproximadamente 147°C em DSC pareceu mais ampla do que é tipicamente observado para a endoterma de fusão. Uma perda de peso de aproximadamente 4% foi observada entre o 25 a 160°C (amostra de suspensão de acetona analisada, Figura 20). O 1H NMR de sal de cloreto foi consiste com a estrutura (Figura 21). No entanto, os dados não podem ser correlacionados com a perda de peso nas análises térmicas porque uma amostra diferente foi analisada (evaporação lenta de uma mistura de acetona: tolueno de 1:1). O sal de cloreto de uma suspensão de acetona foi seco a vácuo a aproximadamente 50°C durante 1 dia. A amostra resultante foi semelhante ao sal original por XRPD (Figura 22). Os dados térmicos são apresentados na Figura 23. Com base na comparação dos dados térmicos, o material seco teve menores perdas de peso entre 25 e 100°C (0,2% vs. 0,6% para o sal de cloreto original) e 100 e 160°C (2,5% vs. 3,5%) (Figura 24). Isto indicou que algum solvente tinha sido removido na secagem a vácuo. No entanto, a endoterma a aproximadamente 146-147°C em DSC ainda foi ampla (Figura 25). A decomposição parcial provavelmente ocorreu durante a fusão (observe a linha de base de degradação e a perda de peso correspondente no TG).

O sal de cloreto do composto I não se deliquesce após 2 dias a aproximadamente 95% de RH. Os dados de sorção/dessorção de umidade são resumidos na Figura 27 e apresentados nas Figuras 26 e 28. A perda de peso mínima foi observada no equilíbrio a 5% de RH. Aproximadamente 0,9% de ganho de peso ocorreu na sorção de 5 a 95% de umidade relativa. A amostra exibiu aproximadamente 0,7% de perda de peso após a dessorção. A análise de XRPD na amostra pós-MB exibiu um padrão de raios-X semelhante ao do material de partida (Figura 29).

Caracterização dos sais hidrossulfato e sulfato do composto I

Tanto o sal de hidrossulfato como o sulfato do composto I foram preparados. O sal de hidrossulfato foi precipitado a partir de uma solução de acetona da base livre por adição de aproximadamente de excesso de 25 molar de ácido sulfúrico. Verificou- se que o precipitado era cristalino por XRPD (Figura 38). Dados térmicos para o sal de hidrossulfato são dados na Figura 32. Uma endoterma ampla a aproximadamente 68°C correspondeu a uma perda de peso de aproximadamente 1% e foi provavelmente devido à dessolvatação (desidratação). A decomposição ocorreu em temperaturas mais altas. Não se deliquesceu após 3 dias a aproximadamente 65% de RH (Figura 32). O sal de sulfato foi preparado usando dois equivalentes da base livre por um equivalente do ácido. Os pontos de ataque para cristalizar o sal de sulfato do composto I não foram bem-sucedidos (Figuras 5-7). O hidrossulfato e o sal de sulfato foram analisados por NMR de prótons (Figura 33 e Figura 34). As diferenças foram observadas nos espectros de NMR. Por exemplo, os grupos metila do fragmento de valina pareciam ter diferentes acoplamentos.

Caracterização do sal de di-hidrofosfato do composto I

O sal de di-hidrofosfato foi cristalizado a partir de uma mistura de 1:1 de metiletilcetona: acetato de n-butila (Figuras 5-7). Exibiu um padrão de raios-X semelhante ao do sal de hidrossulfato (Figura 43). A caracterização do sal de di-hidrofosfato foi limitada a XRPD devido à perda de amostra durante a análise. As tentativas para preparar quantidades adicionais do sal cristalino não foram bem-sucedidas. Um material com baixo teor cristalino foi gerado durante a primeira tentativa (Figuras 5-7). Uma recristalização do sal com baixo teor cristalino produziu um sólido viscoso. O material permaneceu viscoso depois de ter sido seco a vácuo. A umidade do laboratório foi de aproximadamente 62% de umidade relativa (RH) durante o aumento da cristalização e provavelmente afetou o material devido à sua higroscopicidade. Nenhuma tentativa adicional de cristalizar o sal de di-hidrofosfato foi realizada.

Caracterização do sal de fumarato do composto I

Uma pequena quantidade do sal de fumarato foi cristalizada a partir de uma mistura de metanol: tolueno de 1:1 (Figuras 5-7). As tentativas de aumentar o sal cristalino foram realizadas à umidade do laboratório de aproximadamente 62% de RH e não foram bem-sucedidas. Materiais principalmente oleosos resultaram, embora algum sólido cristalino estivesse presente por microscopia. A secagem do sólido viscoso em vácuo produziu principalmente o material amorfo. O sal cristalino originalmente preparado foi usado para experimentos de semeadura. No entanto, nenhum material cristalino foi gerado. A natureza higroscópica do sal de fumarato foi confirmada em estudos de umidade relativa.

O sal de fumarato pareceu ser sensível à umidade. O sal cristalino era estável a aproximadamente 43 e 53% de umidade relativa, e começou a deliquescer no primeiro dia a aproximadamente 65% de RH. O óleo amarelo formou-se após 3 dias a 65% de RH (aproximadamente 4% de umidade obtida).

Conclusões

O sal de mesilato do composto I foi encontrado como sendo amorfo por XRPD. Tentativas de cristalizar o material não foram bem-sucedidas.

A base livre do composto I foi sintetizada a partir do sal de mesilato e usada na preparação de 12 sais. Um sal de hidrossulfato cristalino foi obtido diretamente da síntese de sal. Três sais foram cristalizados usando diferentes misturas de solventes e técnicas de cristalização: cloridrato, fumarato e di- hidrofosfato. O sal de cloreto parecia ser o melhor candidato para desenvolvimento posterior. O sal de hidrossulfato cristalino foi provavelmente solvatado e decomposto acima de aproximadamente 100°C. O material foi estável com umidade relativa de até aproximadamente 65%. O sal de HCl cristalino foi obtido em dois experimentos de evaporação e um experimento de suspensão. O mesmo padrão de XRPD foi observado. Com base nos dados térmicos, o material tinha algum solvente residual; um ponto de fusão provável foi de aproximadamente 146-147°C. Provável decomposição parcial ocorreu durante a fusão. O sal de cloreto foi não higroscópico baseado em dados de balanço de umidade. O di-hidrofosfato cristalino e o sal de fumarato eram higroscópicos a aproximadamente 65% de RH. Tentativas de aumentar os sais não foram bem-sucedidas devido à alta umidade do laboratório. Assim, apenas a caracterização parcial estava disponível para estes sais.

Exemplo 4. Monitoramento da permeabilidade das células Caco-2 do sal de mesilato do composto I

A biodisponibilidade de fármacos administrados oralmente depende em grande parte da capacidade de serem transportados através das barreiras intestinais. As células Caco-2, derivadas de um adenocarcinoma do cólon humano, estabelecidas por J. Fogh por sua capacidade de alcançar um maior grau de diferenciação enterocítica, podem ser usadas como um modelo in vitro para a investigação do transporte de fármacos através do epitélio intestinal. Essas células formam uma monocamada de células epiteliais polarizadas quando crescidas em membrana de policarbonato revestida com colágeno. A monocamada de células diferenciadas representa um modelo relevante para o epitélio do intestino delgado. O processo de diferenciação começando na confluência celular leva à formação de uma borda em escova com microvilosidades bem desenvolvidas, junções apicais estreitas e uma distribuição polarizada dos componentes da membrana, incluindo enzimas, receptores, sistemas de transporte, canais iônicos e moléculas lipídicas.

O propósito do estudo foi o de uma primeira etapa para avaliar a ligação não específica de composto I no sistema de teste de células Caco-2 (sem células) e, em uma segunda etapa, para avaliar a conversão do composto I no composto II e para determinar se o transporte do composto I através das monocamadas de células Caco-2 é mediado pela proteína transportadora PepT1.

Materiais

A linhagem de células Caco-2 (células de adenocarcinoma do cólon humano) foi obtida a partir de bancos de células controladas (Biosearch SpA, Gerenzano-Itália). Meio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM), soro fetal bovino, solução de aminoácidos não essenciais, L-Glutamina 200 mM, solução de Penicilina/Estreptomicina, solução de tripsina-EDTA sem Cálcio e Magnésio foram adquiridos de Celbio (Milão, Itália). HEPES, Solução Salina Balanceada de Hank (HBSS), Solução Salina Tamponada com Fosfato de Dulbecco (PBS), Dimetil Sulfóxido (DMSO), Glicina-Sarcosina (Gly-Sar) foram adquiridos junto à Sigma (Milão, Itália).

Experimental

As células Caco-2 foram cultivadas em DMEM suplementado com 10% de Soro Fetal Bovino, 2% de L-Glutamina 200 mM e solução de aminoácidos não essenciais a 1%.

As células foram armazenadas congeladas em criotubos sob nitrogênio líquido, como volumes de 1 mL de células em suspensão em Soro Bovino Fetal contendo 10% de DMSO. As células usadas para os experimentos serão mantidas em cultura por não mais do que um mês.

Quando necessário, os frascos congelados de células Caco-2 foram rapidamente descongelados a 37°C em banho-maria agitando suavemente até descongelamento semicompleto. Em seguida, a suspensão celular foi adicionada gota a gota a 10 mL de meio de cultura. A suspensão de células foi então centrifugada durante 7 minutos a 900-1000 rpm, o sobrenadante foi removido e o pélete de células foi reconstituído no meio e distribuídos em frascos de 75 cm2 contendo o meio. Os frascos foram incubados a 37°C em uma atmosfera de 5% de CO2. As células foram subcultivadas em série quando monocamadas quase confluentes foram obtidas. O meio de cada frasco foi removido e a monocamada foi lavada com 10-15 mL de solução tampão de fosfato de Dulbecco (PBS).

A solução de tripsina-EDTA foi adicionada à monocamada de células, incubada a 37°C e batia-se suavemente nos intervalos para desalojar as células. A separação e a desagregação completas da monocamada de célula foi confirmada pelo exame de microscopia. As células foram então ressuspensas em 10 mL de meio completo e centrifugado por 7 minutos a 900-1000 rpm. O sobrenadante foi descartado; as células foram ressuspensas em meio de cultura e plaqueadas a 2,5x105 cel/mL em frascos de 175 cm2.

As células de frascos de culturas quase confluentes foram separadas e desagregadas por tratamento com tripsina como descrito acima. As células foram ressuspensas em meio de cultura e contadas. A suspensão de células foi diluída com meio para se obter cerca de 1x106 células/mL e 300μL de suspensão de células foram colocados no compartimento apical de cada cavidade transversal (6,5 mm de diâmetro, 0,4 μm tamanho do poro). 600 μL de meio de cultura foram colocados no compartimento basolateral. As placas foram incubadas a 37°C em uma atmosfera umidificada de 5% de CO2 em ar durante 15-21 dias, mudando o meio a cada 48-72 horas.

A integridade de cada monocamada de células Caco-2 foi avaliada pela resistência elétrica transepitelial (TEER), tanto antes do experimento como no final do tempo de incubação. A TEER, expressa como ohm x cm2, foi medida nas cavidades transversais usando o Millicell-ERS (Millipore). A monocamada é considerada bem diferenciada quando o valor de TEER é maior que 800 ohms x cm2.

A integridade de cada monocamada de células Caco-2 foi avaliada no final do período de incubação por Lucifer Amarelo. Após o experimento, as cavidades transversais foram lavadas duas vezes com tampão de transporte. 200 μL de Lucifer Amarelo na concentração de 100 μM em HBSS foram distribuídos no compartimento apical, enquanto 400 μL de HBSS foram adicionados ao compartimento basolateral. As cavidades transversais foram incubadas a 37°C durante 1 hora. A quantidade de Lucifer Amarelo foi quantificada no compartimento basolateral a 535 nm de comprimento de onda contra uma curva padrão de Lucifer Amarelo na mesma solução salina, utilizando um espectrofluorômetro de microplacas (EG & G WALLAC). A monocamada é considerada não danificado se <1% de Lucifer Amarelo for detectado no compartimento basolateral.

A recuperação e ligação não específica foram avaliadas ao longo das cavidades transversais livres de células

A ligação não específica e a recuperação foram avaliadas através de cavidades transversais livres de células. O composto I foi testado em 1,5, 3 e 6 μM em cavidades transversais livres de células duplicadas. O teste foi realizado em um gradiente de pH entre o compartimento apical e basolateral. O compartimento apical (doador) tinha um pH de tampão de 6,5 enquanto o compartimento basolateral (receptor) tinha um pH de tampão de 7,4. Foram realizados os seguintes tempos de amostragem: 60 e 120 min para o compartimento basolateral (receptor) e 120 min para o compartimento apical (doador). As amostras obtidas foram analisadas por LC-MS, tanto o composto I como o composto II foram monitorados para avaliar a percentagem de recuperação.

Avaliação da estabilidade do composto I e do composto II

A estabilidade do composto I e do composto II foi avaliada durante o teste. Estes compostos foram dissolvidos em tampão HBSS (concentração final de 1% de DMSO) nas concentrações de 1,5, 3 e 6 μM. Uma alíquota de cada solução foi amostrada no tempo zero (t = 0) para avaliar as concentrações iniciais dos compostos. As soluções foram incubadas a 37°C durante a duração do experimento de transporte. Uma alíquota de cada solução foi amostrada no final do experimento (t = 120) para avaliar as concentrações finais do composto I e composto II. As amostras foram analisadas por LC-MS.

Avaliação da permeabilidade bidirecional do composto I

O composto I foi dissolvido em tampão HBSS (concentração final de 1% de DMSO) nas concentrações de 1,5, 3 e 6 μM. Cada tempo de concentração/amostragem foi executado em duplicata também. O teste foi realizado em um gradiente de pH: o compartimento apical (mucosa) estava com pH 6,5, o compartimento basolateral (serosal) estava com pH 7,4.

Transporte apical para basolateral (A ^ B, mucosal para serosal): 200 μL de cada concentração de composto I foram adicionados ao compartimento apical e 400 μL de HBSS foram adicionados ao compartimento basolateral. As placas foram incubadas a 37°C. Uma alíquota do compartimento basolateral foi amostrada após 60 e 120 min (t = 60 e t = 120). Uma alíquota do compartimento apical foi amostrada no tempo inicial (t = 0) e após 120 min. (t = 120).

Transporte basolateral para apical (B ^ A, serosal para mucosal): 400 μL de cada concentração de composto I foram adicionados ao compartimento basolateral e 200 μL de HBSS foram adicionados ao compartimento apical. As placas foram incubadas a 37°C. Uma alíquota do compartimento apical foi amostrada após 60 e 120 min (t = 60 e t = 120). Uma alíquota do compartimento basolateral foi amostrado no tempo inicial (t = 0) e depois de 120 minutos. (t = 120). Todas as amostras foram analisadas por LC/MS monitorando tanto o composto I quanto a aparência do composto II.

Avaliação da permeabilidade bidirecional do composto II

O composto II foi dissolvido em tampão HBSS (concentração final de 1% de DMSO) nas concentrações de 1,5, 3 e 6 μM. Cada tempo de concentração/amostragem foi executado em duplicata também. O teste foi realizado em um gradiente de pH: o compartimento apical (mucosa) estava com pH 6,5, o compartimento basolateral (serosal) estava com pH 7,4.

Transporte Apical para basolateral (A ^ B, mucosal para serosal): 200 μL de cada concentração de composto II foram adicionados ao compartimento apical e 400 μL de HBSS foram adicionados ao compartimento basolateral. As placas foram incubadas a 37°C. Uma alíquota do compartimento basolateral foi amostrada após 60 e 120 min (t = 60 e t = 120). Uma alíquota do compartimento apical foi amostrada no tempo inicial (t = 0) e após 120 min. (t = 120).

Transporte basolateral para apical (B ^ A, serosal para mucosal): 400 μL de cada concentração de composto II foram adicionados ao compartimento basolateral e 200 μL de HBSS foram adicionados ao compartimento apical. As placas foram incubadas a 37°C. Uma alíquota do compartimento apical foi amostrada após 60 e 120 min (t = 60 e t = 120). Uma alíquota do compartimento basolateral foi amostrada no tempo inicial (t = 0) e após 120 min. (t = 120). Todas as amostras foram analisadas por LC/MS monitorando o composto II.

Inibição do transporte mucosal para serosal do composto I pelo substrato PepT1 (Gly-Sar)

As células diferenciadas foram pré-tratadas por 30 minutos com 10 mM de Gly-Sar para bloquear o transportador ativo PepT1.

O composto I foi dissolvido em tampão HBSS (concentração final de 1% de DMSO) nas concentrações de 1,5, 3 e 6 μM. Cada tempo de concentração/amostragem foi executado em duplicata também. O teste foi realizado em um gradiente de pH: o compartimento apical (mucosal) estava com pH 6,5, o compartimento basolateral (serosal) estava com pH 7,4.

Transporte Apical para basolateral (A ^ B, mucosal para serosal): 200 μL de cada concentração de composto I foram adicionados ao compartimento apical e 400 μL de HBSS foram adicionados ao compartimento basolateral. As placas foram incubadas a 37°C. Uma alíquota do compartimento basolateral foi amostrada após 60 e 120 min (t = 60 e t = 120). Uma alíquota do compartimento apical foi amostrada no tempo inicial (t = 0) e após 120 min. (t = 120). Todas as amostras foram analisadas por LC/MS monitorando tanto o composto I quanto a aparência do composto II.

Determinações analíticas

A concentração do composto II e do composto I nas amostras pós- incubação foi determinada por um método de cromatografia líquida de alto rendimento/espectrometria de massa (LC/MS) descrito nos apêndices (seção 7.1), sem qualquer diluição adicional.

Resultados

Os valores de TEER pré-experimentos das monocamadas de células Caco-2 usadas variaram de 1160 Ox cm2, indicando monocamada confluente com junções firmes. No final dos experimentos os valores de TEER diminuíram em média de 170 O x cm2 (de 680 a 990 O x cm2) sem influência da integridade da monocamada celular. O teste de Lucifer Amarelo confirmou a integridade de todos os pós-experimentos monocamadas, de fato, a quantidade de Lucifer Amarelo detectada nos compartimentos basolaterais pós-experimentos sempre foi <1% em todas as cavidades. A Figura 55 relata dados obtidos no teste de ligação não específica no composto I. Nas condições do teste, o composto I provou ser recuperado no compartimento apical em todas as doses testadas. O composto I não foi detectado no compartimento basolateral em qualquer dose testada. A ligação não específica do composto I foi excluída. O composto II não foi detectado em nenhum compartimento. A Figura 55 reporta os dados obtidos no teste de estabilidade no composto I e no composto II. Ambos os compostos mostraram-se estáveis nas condições de teste: tampão HBSS (concentração final de 2% de DMSO) a 37°C durante 60 e 120 minutos. As Figuras 56a-56e reportam os dados obtidos no teste de permeabilidade bidirecional no composto I. Este composto não passou através da monocamada de células. No teste apical para basolateral, o composto I não foi detectado no compartimento de recepção após 60 e 120 minutos, enquanto as concentrações crescentes do composto II foram detectadas no final do experimento no compartimento basolateral. A percentagem de passagem do composto II é relatada na tabela. No final do experimento apical para basolateral, no compartimento apical observou-se baixa recuperação do composto I, enquanto as concentrações aumentadas do composto II foram detectadas (alta recuperação). O aumento da concentração do composto II após 120 minutos no compartimento apical pode ser explicado pela presença de esterases extra- e intracelulares nas células Caco-2 capazes de desesterificar os compostos (Kern et al. J. Agric. Food Chem. 51: 7884-7891 (2003)). No teste basolateral para apical o composto I não foi detectado no compartimento receptor, enquanto baixas concentrações do composto II foram detectadas. Portanto, o composto I é provavelmente transferido e transportado como composto II através da monocamada de Caco-2. As Figuras 57a-57e reportam dados obtidos no teste de permeabilidade bidirecional do composto II. Este composto apresentou uma boa percentagem de passagem apical ao basolateral e uma baixa taxa de permeabilidade do compartimento basolateral ao apical. O Papp foi calculado porque a concentração nos compartimentos doadores era conhecida. Composto II tem uma boa passagem passiva através da monocamada Caco-2. Nenhum efluxo foi detectado. As Figuras 58a-58c relatam dados obtidos no teste de inibição, em que a monocamada de células Caco-2 foi pré-tratada com Gli-Sar a 10 mM (a fim de saturar o transportador PepT1). O composto I não foi detectado no compartimento de recepção, enquanto se observou uma passagem do composto II. A percentagem de passagem não foi linear neste teste.

Discussão

Neste estudo de ligação não específica do composto I em células Caco- 2 o sistema de teste (sem células) foi avaliado e excluído. O composto I ficou estável nas condições de teste. A conversão do composto I para o composto II foi avaliada e confirmada no teste de permeabilidade bidirecional. O composto I não passou através da monocamada de células sob as condições testadas. O composto I é, portanto, provavelmente transferido e transportado como composto II desesterificados através da monocamada de células Caco-2.

No teste de permeabilidade bidirecional, o composto II mostrou uma boa passagem passiva através da monocamada de células Caco-2. Não foi encontrada evidência de que o composto II possa ser um substrato para um transportador de efluxo.

O teste com pré-tratamento com Gly-Sar (para saturar o transportador PepT1) não mostrou nenhuma passagem do composto I e uma taxa de passagem do composto II. O transporte do composto I através de monocamadas de células Caco-2 provavelmente não é mediado por PepT1.

Estes experimentos indicam que a absorção intestinal do composto I e sais do mesmo não é mediada pela proteína transportadora Pept1. Em vez disso, os resultados anteriores demonstram que o composto I é desesterificado por esterases habitantes do intestino delgado e subsequentemente penetra passivamente no epitélio do intestino delgado. O composto I e os sais do mesmo não são substratos para Pept1 e representa uma propriedade surpreendente e farmacologicamente benéfica. A Pept1 é um co-transportador dependente do pH conhecido por mediar a absorção de uma variedade de ésteres de valinate, como descrito, por exemplo, em Vig et al., Adv. Drug Deliv. Rev. 65:1370-1385 (2013), cuja divulgação é aqui incorporada por referência. Pept1 exibe uma ampla especificidade de substrato, como evidenciado pela diversidade estrutural de compostos que são transportados através do epitélio intestinal por esta proteína. Inesperadamente, apesar da presença da funcionalidade éster de valinato, o composto I e os sais do mesmo não são dependentes deste transportador para absorção através do epitélio do intestino delgado. Esta é uma propriedade vantajosa, uma vez que o Composto I e os sais do mesmo, assim, não competem com os substratos naturais de Pept1, tais como nutrientes peptídicos, para ligação e transporte por esta proteína. Ao contrário, o composto I e os sais do mesmo são convertidos in vivo em uma forma que é prontamente absorvida de uma maneira independente da energia e do gradiente de prótons locais. Esta propriedade inesperada, juntamente com a elevada solubilidade aquosa do composto I e os sais do mesmo, fornecem coletivamente um perfil farmacocinético benéfico pelo qual estes agentes terapêuticos se dissolvem facilmente em um ambiente aquoso e são por sua vez convertidos em uma forma capaz de absorção independente do transportador.

Exemplo 5. Terapia de combinação incluindo um agente tocolítico adicional

O composto I ou um sal do mesmo, como o composto III, pode ser administrado a um indivíduo, como um indivíduo humana, em combinação com um ou mais agentes adicionais, tais como um antagonista do receptor de oxitocina, betamimético, inibidor dos canais de cálcio, sal de magnésio, ou doador de óxido nítrico, por exemplo, a fim de reduzir a ocorrência de contrações uterinas e retardar o início do trabalho de parto.

Um médico versado na técnica pode administrar o composto I ou um sal do mesmo, como o composto III, simultaneamente com, como uma mistura com, ou separadamente de um antagonista do receptor de oxitocina. Os antagonistas de receptores de oxitocina exemplificadores para uso em conjunção com as composições e métodos da invenção incluem atosibana, retosibana, barusibana, epelsibana e nolasibana, ou uma variante, formulação, forma cristalina, ou derivado das mesmas. Por exemplo, o composto I ou um sal do mesmo, como o composto III, pode ser administrado antes, depois ou simultaneamente com nolasibana, ou uma variante, formulação, forma cristalina, ou derivado da mesma, a fim de retardar o início do parto em um indivíduo, por exemplo, por um ou mais dias ou semanas, como de cerca de 1 dia a cerca de 16 semanas (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30 dias, ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16 semanas).

Adicionalmente ou alternativamente, um médico versado na técnica pode administrar o composto I ou um sal do mesmo, como o composto III, simultaneamente com, como uma mistura com, ou separadamente de um betamimético, como um betamimético aqui descrito. Por exemplo, o composto I ou um sal do mesmo, como o composto III, pode ser administrado antes, depois ou simultaneamente com um betamimético aqui descrito ou conhecido na técnica, a fim de retardar o início do trabalho de parto em num indivíduo, por exemplo, um ou mais dias ou semanas, como de cerca de 1 dia a cerca de 16 semanas (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30 dias, ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16 semanas).

Adicionalmente ou alternativamente, um médico versado na técnica pode administrar o composto I ou um sal do mesmo, como o composto III, simultaneamente com, como uma mistura com, ou separadamente de um inibidor dos canais de cálcio, como um inibidor dos canais de cálcio aqui descrito. Por exemplo, o composto I ou um sal do mesmo, como o composto III, pode ser administrado antes, depois ou simultaneamente com um inibidor dos canais de cálcio aqui descrito ou conhecido na técnica, a fim de retardar o início do trabalho de parto em um indivíduo, por exemplo, por um ou mais dias ou semanas, como de cerca de 1 dia a cerca de 16 semanas (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30 dias, ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16 semanas).

Adicionalmente ou alternativamente, um médico versado na técnica pode administrar o composto I ou um sal do mesmo, como o composto III, simultaneamente com, como uma mistura com, ou separadamente de um sal de magnésio, como sulfato de magnésio. Por exemplo, o composto I ou um sal do mesmo, como o composto III, pode ser administrado antes, depois ou simultaneamente com sulfato de magnésio de forma a retardar o início do trabalho de parto em um indivíduo, por exemplo, por um ou mais dias ou semanas, como cerca de 1 dia a cerca de 16 semanas (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30 dias, ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16 semanas).

Adicionalmente ou alternativamente, um médico versado na técnica pode administrar o composto I ou um sal do mesmo, como o composto III, simultaneamente com, como uma mistura com, ou separadamente de um doador de óxido nítrico, como nitroglicerina. Por exemplo, o composto I ou um sal do mesmo, como o composto III, pode ser administrado antes, depois ou simultaneamente com nitroglicerina de forma a retardar o início do trabalho de parto em um indivíduo, por exemplo, por um ou mais dias ou semanas, de cerca de 1 dia a cerca de 16 semanas (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30 dias, ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16 semanas).

Adicionalmente ou alternativamente, um médico versado na técnica pode administrar o composto I ou um sal do mesmo, como o composto III, simultaneamente com, como uma mistura com, ou separadamente da progesterona ou um derivado ou variante da mesma, como um derivado ou variante aqui descrito ou conhecido na técnica. Por exemplo, o composto I ou um sal do mesmo, como o composto III, pode ser administrado antes, depois ou simultaneamente com progesterona ou um derivado ou variante da mesma aqui descrito ou conhecido na técnica, a fim de retardar o início do trabalho de parto em um indivíduo, por exemplo, por um ou mais dias ou semanas, como cerca de 1 dia a cerca de 16 semanas (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30 dias, ou cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16 semanas).

Exemplo 6. Efeitos tocolíticos do composto I de sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo em combinação com nifedipina e atosibana em modelos de camundongo com trabalho de parto prematuro

Para investigar os efeitos terapêuticos do composto I em combinação com um bloqueador de canais de cálcio ou um antagonista do receptor de oxitocina em modelos animais com parto prematuro, camundongas CD-1 prenhes primigestas foram tratadas com indutores estabelecidos de trabalho de parto em uma idade gestacional inicial de 17 dias e foram subsequentemente administradas várias dosagens do sal de cloreto do composto I (composto III; 10 mg/kg, 30 mg/kg ou 100 mg/kg, cada uma administrada oralmente) sozinho ou em combinação com nifedipina (5 mg/kg, administrada oralmente) ou atosibana (300 mg/kg, administrada subcutaneamente). Os efeitos tocolíticos foram avaliados medindo o tempo desde a indução até o parto do primeiro filhote para cada camundongo nos coortes de tratamento e controle, o tempo desde o momento da indução até a conclusão do parto entre todas as camundongas em cada coorte, e a viabilidade da descendência entre as camundongas em cada coorte. Os indutores de parto prematuro usados neste estudo foram o RU486 (também referido como mifepristona), uma antiprogestina esteroidal que promove a dilatação cervical e provoca o aumento da contratilidade uterina e da sensibilidade às prostaglandinas, e lipopolissacarídeo (LPS), um mediador de inflamação.

Para induzir o parto em uma idade gestacional precoce, uma dose única de RU486 foi administrada a cada camundongo subcutaneamente a 2,5 mg/kg (t = 0). As camundongas tratadas com LPS receberam uma única injeção intraperitoneal de LPS a 2 mg/kg (t = 0). Atosibana foi administrada a camundongas CD-1 por injeção subcutânea a 300 mg/kg em dois locais distintos. Estas injeções foram realizadas às 5 horas (t = 5) e às 29 horas (t = 29) após tratamento com o agente indutor RU486 ou LPS. Nifedipina foi administrada a camundongas CD-1 oralmente a 5 mg/kg em 5 horas (t = 5), 19 horas (t = 19), 29 horas (t = 29) e 43 horas (t = 43) após tratamento com o agente indutor RU486 ou LPS. O composto III foi administrado a camundongas CD-1 oralmente em qualquer um dentre 10 mg/kg, 30 mg/kg ou 100 mg/kg a 5 horas (t = 5), 19 horas (t = 19), 29 horas (t = 29) e 43 horas (t = 43) após tratamento com o agente indutor RU486 ou LPS. Após a indução com RU486 ou LPS e administração subsequente do atosibana, nifedipina, e/ou o composto III, os coortes de camundongo foram indivíduos a monitoramento visual contínuo para avaliar o tempo decorrido entre a indução e o parto do primeiro filhote para cada camundongo, bem como a proporção de camundongas em cada coorte que haviam sido submetidas ao parto em função do tempo. A viabilidade dos filhotes paridos em cada coorte foi avaliada pela docimasia pulmonar hidrostática galênica.

A capacidade de RU486 e LPS para induzir o parto prematuro foi confirmada, já que o tratamento de camundongas CD-1 com RU486 na idade gestacional de 17 dias resultou em um tempo médio de parto de cerca de 21 horas após a indução (t = 21 ; média calculada = 21 ± 1,00 hora), enquanto camundongas CD-1 tratadas com LPS na idade gestacional de 17 dias exibiram um tempo médio de parto de cerca de 26 horas após a indução (t = 26 ; média calculada = 26 ± 2,34 horas). Em contraste, o parto no tempo correto em camundongas CD-1 ocorre com uma idade gestacional de cerca de 19 dias a cerca de 21 dias, mais de 50 horas após o dia 17 de gestação. Entre os filhotes paridos de camundongas tratadas com RU486, 96% foram paridos vivos, e 48% dos filhotes paridos de camundongas tratadas com LPS foram paridos vivos (Figuras 60 e 61). 3% das camundongas tratadas com RU486 foram excluídas desta investigação devido a morte ou sacrifício durante o estudo; 34% das camundongas tratadas com LPS foram excluídas desta investigação devido a morte ou sacrifício durante o estudo.

Durante a investigação, observou-se que o tratamento com nifedipina sozinha induziu um aumento significativo no tempo médio de parto em comparação com o veículo (23,53 ± 0,99 horas versus 21,19 ± 1,00 hora; Figura 65) em camundongas tratadas com RU486. O tratamento com nifedipina sozinha promoveu adicionalmente um aumento no tempo de parto e aumentou significativamente a viabilidade fracional da descendência em camundongas tratadas com LPS em comparação com o veículo (90,39 % ± 5,34 % versus 48,20% ± 16,45%; Figuras 68 e 69). A administração de atosibana originou, de um modo semelhante, um aumento no tempo de parto em camundongas tratadas com LPS (Figura 70). Verificou-se que o Composto III promove um aumento no tempo de parto em comparação com o veículo em camundongas tratadas com RU486 (Figuras 65 e 67). Particularmente, as camundongas tratadas com RU486 administradas com o composto III oralmente a 30 mg/kg e 100 mg/kg exibiram aumentos no tempo de parto em relação ao veículo (p = 0,0871 e p = 0,0601, respectivamente). Adicionalmente, a administração do composto III a camundongas tratadas com LPS resultou em um aumento dependente da dose na viabilidade fracional da descendência (69,41 % ± 15,76 % de viabilidade observada em resposta a 100 mg/kg de composto III versus 48,20% ± 16,45% observado em resposta ao veículo; Figura 68).

A combinação de nifedipina e composto III resultou em um efeito tocolítico particularmente pronunciado (Figuras 65 e 69). A administração oral de nifedipina (5 mg/kg) e composto III (100 mg/kg) a camundongas tratadas com RU486 resultou em um efeito sinérgico claro, já que essa combinação induziu um aumento significativo no tempo de parto em relação ao veículo (27,91 ± 0,35 horas versus 21,19 ± 1,00 horas), a mesma dosagem de nifedipina sozinha (27,91 ± 0,35 horas versus 23,53 ± 0,99 horas), e a mesma dosagem do composto III sozinho (27,91 ± 0,35 horas versus 23,70 ± 0,60 horas). Adicionalmente, a administração oral de nifedipina (5 mg/kg) e o composto III (10 mg/kg) a camundongas tratadas com LPS resultou em um aumento significativo no tempo de parto em relação ao coorte tratado com 10 mg/kg de composto III sozinho (31,01 ± 1,89 horas contra 23,98 ± 0,66 horas). A administração oral de 10 mg/kg do composto III em combinação com 5 mg/kg de nifedipina também promoveu um aumento na viabilidade de filhotes paridos por camundongas tratadas com LPS em relação às camundongas que receberam a mesma dosagem do composto III sozinho (94,23% ± 3,68 % versus 57,80% ± 14,89%) e em relação às camundongas que foram administradas apenas por veículo (94,23% ± 3,68% versus 48,20% ± 16,45%; Figura 68).

A combinação do atosibana e do composto III potencializou adicionalmente o efeito tocolítico de cada composto usado sozinho. A administração subcutânea de atosibana (300 mg/kg) e a administração oral do composto III (100 mg/kg) a camundongas tratadas com LPS induziu um aumento significativo no tempo de administração em relação às camundongas aos quais foram administradas com veículo isolado (33,23 ± 2,95 horas versus 26,17 ± 1,98 horas) e em relação às camundongas que receberam a mesma dosagem de atosibana sozinha (33,23 ± 2,95 horas versus 28,41 ± 2,99 horas; Figura 71). Esta combinação também exibiu uma propensão para aumentar a viabilidade fracional da descendência em comparação com camundongas tratadas com veículo sozinho, a mesma dosagem do atosibana sozinha, ou a mesma dosagem de composto III sozinho (Figura 70).

Este estudo ilustra ainda mais o efeito tocolítico de um sal de composto I antagonista de FP, em dois modelos animais distintos com parto prematuro e suporta o uso do Composto I e dos sais do mesmo, para tratar e impedir o trabalho de parto prematuro, independentemente da etiologia bioquímica subjacente. Esta investigação sustenta adicionalmente o uso de antagonistas de FP, tais como do composto I e de seus sais (por exemplo, composto III) em combinação com cada um dentre um antagonista do canal de cálcio e um antagonista do receptor de oxitocina para a prevenção de nascimento prematuro. O uso do composto III em combinação com cada um dentre nifedipina e atosibana excedeu significativamente os efeitos terapêuticos de componentes individuais, e demonstra que o Composto e os sais do mesmo, tais como o composto III, pode sinergizar com agentes tocolíticos adicionais.

Exemplo 7. Efeitos tocolíticos do composto II em combinação com nifedipina, atosibana e nolasibana em amostras de tecido humano

Para investigar os efeitos terapêuticos do composto II, o metabólito ativo do Composto I e os sais do mesmo (como o composto III), em combinação com antagonistas do receptor de oxitocina e dos bloqueadores dos canais de cálcio, biópsias miometriais foram obtidas a partir de indivíduas fêmeas humanas com pré-trabalho de parto no tempo correto submetidas a parto cesariana. Entre os objetivos desta investigação estava a caracterização dos efeitos do composto II, sozinho e em combinação com agentes tocolíticos adicionais, na frequência, amplitude de pico e duração das contrações miometriais, bem como no trabalho realizado por contração e no trabalho total realizado por todas as contrações. Para este fim, os experimentos foram realizados usando um DMT Myograph 800 MS (ADINSTRUMENTSTM) em solução de Krebs oxigenada com o software ADI Powerlab, que facilitou a medição simultânea de múltiplas preparações musculares em paralelo.

Os experimentos em biópsias miometriais foram iniciados permitindo contrações do músculo liso para estabelecer uma linha de base por pelo menos 20 minutos. Após este período de tempo, as medições da linha de base de frequência de contração espontânea, amplitude de pico, duração, trabalho feito por contração e o trabalho total feito por todas as contrações foram registradas. As amostras de biópsia miometrial foram subsequentemente tratadas com um controle de DMSO, composto II, atosibana, nifedipina, uma combinação do composto II e atosibana, ou uma combinação do composto II e nifedipina. Os efeitos desses agentes sobre a frequência, amplitude e duração, bem como o trabalho realizado por, contrações miometriais foram posteriormente medidos durante o período de 10 minutos subsequentes. As amostras miometriais foram então desafiadas pela adição de concentrações crescentes de um agente estimulador de contração, como oxitocina, PGF2α ou PGE2, no decurso de intervalos de 10 minutos sequenciais, e a frequência de contração, amplitude de pico, duração, trabalho realizado por contração e o trabalho total feito por todas as contrações foram medidos de acordo. A oxitocina, PGF2α e PGE representam, cada um, moduladores distintos da contratilidade uterina e do parto prematuro. A oxitocina induz diretamente a contração do miométrio uterino e potencializa a síntese e a liberação de prostaglandinas contráteis a partir do endométrio uterino e decídua. A oxitocina também foi implicada na promoção da produção de prostaglandinas em células miometriais humanas através da potencialização da ciclo-oxigenase 2 (COX-2). Foi demonstrado que as prostaglandinas PGF2α e PGE2 induzem alterações cervicais e induzem a contratilidade uterina, dois eventos chaves na fisiologia do parto. A ativação do receptor FP no miométrio humano por PGF2α resulta na elevação da concentração intracelular de cálcio, que, por sua vez, leva à contração do músculo liso da célula uterina. Assim, outro objetivo desta investigação foi avaliar a capacidade do composto II para atenuar a atividade contrátil uterina, induzida por três modalidades bioquímicas distintas.

Os resultados destes experimentos demonstram que o composto II sozinho é capaz de suprimir a contratilidade miometrial induzida por PGF2α e induzida por OT de um modo dependente da dose (Figuras 72 e 73). Além disso, verificou-se presentemente que o composto II exibe um efeito sinérgico surpreendente na redução da contratilidade miometrial quando usado em combinação com o antagonista do receptor de oxitocina atosibana (Figura 76) e com o bloqueador do canal de cálcio nifedipina (Figura 78). Surpreendentemente, as doses do composto II que exibiram menor potência no sentido da redução da contractilidade miometrial quando usadas na ausência de um agente tocolítico adicional (como 60 nM, Figuras 72 e 73) exibiram um aumento marcante na atividade inibidora quando combinadas com o atosibana (Figura 76) e nifedipina (Figura 78). De forma semelhante, as doses de atosibana (6 nM, Figuras 74 e 75) e nifedipina (6 nM, Figura 77) que se revelaram ser sub-ótimas para a redução da contratilidade miometrial quando usadas na ausência do composto II exibiram um aumento inesperado na potência anticontrátil, quando combinado com o composto II (Figuras 76 e 78). Estes dados demonstram que o composto II é capaz de sinergizar com agentes tocolíticos adicionais, tais como antagonistas do receptor de oxitocina e bloqueadores dos canais de cálcio, para suprimir a atividade contrátil uterina que pode levar ao parto prematuro.

Além de suprimir a contratilidade miometrial, os efeitos tocolíticos do composto II são também manifestados na capacidade deste agente para atenuar a expressão de genes pró-inflamatórios a jusante em biópsias miometriais e de âmnio humanas (Figuras 79 e 80). Western blot foram realizados para caracterizar a capacidade do composto II, sozinho e em combinação com agentes tocolíticos adicionais, para modular a expressão de várias proteínas em amostras miometriais e de âmnio isoladas a partir de indivíduo fêmeas submetidas a parto cesariana. Os resultados destes estudos demonstram que o composto II é capaz de reduzir a expressão de várias proteínas pró-inflamatórias e exibe uma sinergia surpreendente quando usado em combinação com nolasibana para a redução da expressão de COX-2.

Coletivamente, os dados gerados a partir destes experimentos demonstram que o composto II é capaz de suprimir a atividade do músculo liso que pode levar ao parto prematuro como induzido por moduladores distintos da contratilidade uterina. Além disso, o composto II exibe um efeito sinérgico inesperado na atenuação das contrações uterinas quando usado em combinação com antagonistas do receptor de oxitocina e bloqueadores dos canais de cálcio. Esta sinergia manifesta-se tanto ao nível da atividade do músculo liso como na redução da expressão gênica pró-inflamatória em biopsias do miometriais e de âmnio, e demonstra vários benefícios do fornecimento do composto II em combinação com um ou mais agentes tocolíticos adicionais a um indivíduo com necessidade de tratamento, como um indivíduo que sofre ou corre risco de sofrer parto prematuro.

Outras modalidades

Todas as publicações, patentes e pedidos de patente mencionados neste relatório descritivo são aqui incorporados por referência na mesma extensão como se cada publicação ou pedido de patente independente fosse especificamente e individualmente indicado para ser incorporado por referência.

Embora a invenção tenha sido descrita em associação com suas modalidades específicas, entende-se que é possível realizar modificações adicionais e este documento se destina a cobrir quaisquer variações, usos ou adaptações da invenção seguindo, em geral, os princípios da presente invenção e incluindo tais desvios da invenção que se enquadram na prática conhecida ou habitual na técnica à qual a invenção se refere e podem ser aplicados às características essenciais aqui apresentadas anteriormente, e seguem no escopo das reivindicações.

Outras modalidades fazem parte das reivindicações.

Claims

1. COMPOSTO, caracterizado pelo fato de que é representado pela fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

2. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é representado pela fórmula (III).

3. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 2, onde o composto é caracterizado pelo fato de que está em um estado cristalino.

4. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o composto exibe picos de difração de raios X característicos de 7,0 ° 2θ, de 8,1 ° 2θ, de 10,0 ° 2θ, de 12,0 ° 2θ, de 13,1 ° 2θ, de 14,1 ° 2θ, de 16,4 ° 2θ, de 18,4 ° 2θ, de 20,1 ° 2θ, de 21,0 ° 2θ, de 23,5 ° 2θ e de 29,5 ° 2θ.

5. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o composto apresenta picos de ressonância magnética nuclear 1H (NMR) centrados a 1,1 ppm, 3,3 ppm, 4,9 ppm, 5,4 ppm, 7,1 ppm, 7,7 ppm, 7,9 ppm e 8,0 ppm.

6. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o composto apresenta uma endoterma de 145°C a 147°C como medido por calorimetria de varredura diferencial.

7. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o composto apresenta uma perda de peso de 0,2% a 0,6% quando aquecido de 25°C a 100°C como medido por análise termogravimétrica.

8. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, caracterizada pelo fato de que compreende o composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7 e um ou mais excipientes.

9. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação. 8, caracterizada pelo fato de que o composto é formulado para administração oral a um paciente humano.

10. COMPOSIÇÃO FARMACEUTICA, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que o composto é formulado como um comprimido, cápsula, cápsula de gel, pó, solução líquida ou suspensão líquida.

11. MÉTODO PARA SINTETIZAR UM COMPOSTO, representado pela fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável, o método é caracterizado pelo fato de que compreende a reação de um precursor representado pela fórmula (IV)com um precursor representado pela fórmula (V) para formar um amino éster, em que X é um grupo de proteção e em que o método compreende adicionalmente reagir o amino éster com um reagente capaz de desproteger o amino éster, em que o grupo de proteção é terc- butoxicarbonil e em que o reagente é ácido metanossulfônico.

12. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o composto é representado pela fórmula (III)

13. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 ou 12, o método caracterizado pelo fato de que compreende a reação do precursor representado pela fórmula (IV) com o precursor representado pela fórmula (V), 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodi-imida, 1-hidroxibenzotriazol, e N,N- dimetilaminopiridina.

14. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 13, o método caracterizado pelo fato de que compreende a síntese do precursorrepresentado pela fórmula (IV) reagindo um precursor representado pela fórmula (VI). com um precursor representado pela fórmula (VII)

15. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 14, o método caracterizado pelo fato de que compreende a reação do precursor representado pela fórmula (VI) com o precursor representado pela fórmula (VII), di-isopropiletilamina, e N,N- dimetilaminopiridina.

16. USO DE UM COMPOSTO, representado pela fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para tratamento ou prevenção de trabalho de parto prematuro em um paciente humano em necessidade do mesmo.

17. USO DE UM COMPOSTO, representado pela fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para prevenção de trabalho de parto antes de um parto cesariana em um paciente humano.

18. USO, de acordo com a reivindicação 16 ou 17, caracterizado pelofato do composto ser representado pela fórmula (III)

19. USO, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato do composto ser em uma forma cristalina.

20. USO, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que: a) o composto exibe picos de difração de raios X característicos de 7,0 ° 2θ, 8,1 ° 2θ, 10,0 ° 2θ, 12,0 ° 2θ, 13,1 ° 2θ, 14,1 ° 2θ, 16,4 ° 2θ, 18,4 ° 2θ, 20,1 ° 2θ, 21,0 ° 2θ e 23,5 ° 2θ e 29,5 ° 2θ; b) o composto apresenta picos de ressonância magnética nuclear 1H (NMR) centrados a 1,1 ppm, 3,3 ppm, 4,9 ppm, 5,4 ppm, 7,1 ppm, 7,7 ppm, 7,9 ppm e 8,0 ppm; c) o composto apresenta uma endoterma de 145°C a 147°C como medido por calorimetria de varredura diferencial; e/ou d) em que o composto apresenta uma perda de peso de 0,2% a 0,6% quando aquecido de 25°C a 100°C como medido por análise termogravimétrica.

21. USO, de acordo com uma qualquer das reivindicações 16 a 20, caracterizado pelo fato de que o paciente está em um estágio gestacional de 24 semanas a 34 semanas.

22. USO, de acordo com uma qualquer das reivindicações 16 a 21, caracterizado pelo fato de que o paciente apresenta uma redução na amplitude de contrações uterinas após a administração do composto ao paciente.

23. USO, de acordo com uma qualquer das reivindicações 16 a 21, caracterizado pelo fato de que o composto é formulado para administração oral ao paciente.

24. KIT, compreendendo um composto representado pela fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e uma bula, caracterizado pelo fato de que a bula ensina a usuária do kit a administrar o composto a um paciente humano que apresenta trabalho de parto prematuro ou está em risco de passar por trabalho de parto prematuro.

25. KIT, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato do composto ser representado pela fórmula (III)

26. KIT, de acordo com a reivindicação 24 ou 25, em que o paciente é caracterizado por ter uma idade gestacional de 24 semanas a 34 semanas.