BR112018012866B1

BR112018012866B1 - Composição e uso de streptococcus thermophilus ou lactococcus lactis

Info

Publication number: BR112018012866B1
Application number: BR112018012866-0A
Authority: BR
Inventors: Muriel Derrien; Mathilde LEBAS; Peggy Garault
Original assignee: Compagnie Gervais Danone
Priority date: 2015-12-23
Filing date: 2015-12-23
Publication date: 2023-04-18
Also published as: CA3008932A1; WO2017108126A1; RU2018122457A; CA3008932C; EP3394294A1; MX2018007533A; US10960033B2; US20190000893A1; RU2018122457A3; BR112018012866A2; EP3394294B1; ES2806424T3; RU2712568C2

Abstract

USOS DE PELO MENOS UMA BACTÉRIA DO ÁCIDO LÁCTICO ECOMPOSIÇÃO. A presente invenção se refere ao uso de pelo menos uma bactéria do ácido láctico, ou uma composição compreendendo a mesma ou condicionada pela mesma, para aumentar ou manter uma população de Faecalibacterium prausnitzii.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção se refere a composições e métodos para aumentar ou manter populações de Faecalibacterium prausnitzii.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] A Faecalibacterium prausnitzii (F. prausnitzii) é a bactéria mais abundante no intestino humano de adultos saudáveis, representando mais de 5% do total da população bacteriana. Nos últimos anos, um número crescente de estudos descreveu a importância desta bactéria comensal metabolicamente ativa como um componente da microbiota humana saudável. Os principais produtos finais da fermentação da glicose por cepas de F. prausnitzii são formiato, pequenas quantidades de D-lactato e quantidades substanciais de butirato. De fato, a F. prausnitzii é uma das bactérias produtoras de butirato mais abundantes no trato gastrointestinal. O butirato desempenha um papel importante na fisiologia do intestino e tem efeitos pleiotrópicos no ciclo de vida das células intestinais. Mudanças na abundância de F. prausnitzii têm sido associadas à disbiose em várias doenças humanas.

[003] A este respeito, a publicação internacional WO 2014/070014 relata que a administração oral de riboflavina, isto é, vitamina B2, é capaz de aumentar a concentração absoluta e relativa de F. prausnitzii, bem como aumentar a produção de butirato, em voluntários humanos.

[004] No entanto, a vitamina B2 é notavelmente sensível à luz, calor e oxigênio, o que limita os processos de produção de alimentos em que ela pode ser usada. Além disso, nem todos os produtos alimentícios podem ser suplementados por uma vitamina.

[005] Assim, ainda há necessidade de alternativas à riboflavina para aumentar ou manter as populações de F. prausnitzii.

DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO

[006] A presente invenção segue da descoberta inesperada de que uma cultura de Streptococcus thermophilus ou Lactococcus lactis subsp. lactis pode ser usada para aumentar o crescimento de Faecalibacterium prausnitzii ou a produção de butirato por esta bactéria.

[007] Por conseguinte, a presente invenção se refere ao uso, em particular ao uso não terapêutico, de pelo menos uma bactéria do ácido láctico, ou uma composição compreendendo a mesma ou condicionada pela mesma, para aumentar ou manter uma população de Faecalibacterium prausnitzii, em particular uma população intestinal de Faecalibacterium prausnitzii em um indivíduo e/ou para aumentar ou manter a produção de butirato, em particular a produção de butirato intestinal em um indivíduo.

[008] A presente invenção também se refere a um método, em particular um método não terapêutico, para aumentar ou manter uma população intestinal de Faecalibacterium prausnitzii em um indivíduo e/ou para aumentar ou manter a produção intestinal em um indivíduo, compreendendo suprir, fornecer ou administrar ao indivíduo uma composição como definida acima, em particular em uma quantidade eficaz.

[009] A presente invenção também se refere a uma composição compreendendo, ou condicionada por, pelo menos uma bactéria do ácido láctico para uso em um método para aumentar ou manter uma população de Faecalibacterium prausnitzii, em particular uma população intestinal de Faecalibacterium prausnitzii em um indivíduo, e/ou para aumentar ou manter a produção de butirato, em particular a produção de butirato intestinal em um indivíduo.

[010] A presente invenção também se refere ao uso de pelo menos uma bactéria do ácido láctico, ou uma composição compreendendo a mesma ou condicionada pela mesma para a fabricação de um produto alimentar destinado a aumentar ou manter uma população de Faecalibacterium prausnitzii, em particular uma população intestinal de Faecalibacterium prausnitzii em um indivíduo e/ou para aumentar ou manter a produção de butirato, em particular a produção de butirato intestinal em um indivíduo.

[011] A presente invenção também se refere a uma cepa de Streptococcus thermophilus depositada no CNCM sob o número de referência CNCM I-3862.

[012] A presente invenção também se refere a um produto lácteo fermentado compreendendo uma cepa de Streptococcus thermophilus depositada no CNCM sob o número de referência CNCM I-3862.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[013] Como pretendido aqui, “pelo menos uma bactéria do ácido láctico ou uma composição compreendendo a mesma” deve ser entendido como significando uma composição compreendendo pelo menos uma bactéria do ácido láctico.

[014] Como pretendido aqui, uma composição “condicionada pela mesma” significa que a composição compreende secreções de bactérias do ácido láctico de acordo com a invenção. A título de exemplo, a composição condicionada por bactérias do ácido láctico de acordo com a invenção pode compreender o sobrenadante de uma cultura de bactérias do ácido láctico ou pode ser um produto lácteo fermentado por bactérias do ácido láctico, a partir dos quais as bactérias do ácido láctico foram removidas.

[015] Tal como aqui utilizado, o termo “sobrenadante” deve ser entendido como significando o meio de cultura no qual a bactéria foi cultivada sob condições adequadas para o crescimento. O meio de cultura pode ser separado das células bacterianas e fragmentos das mesmas por meio de centrifugação.

[016] Tal como aqui utilizado, o termo “composição estável” deve ser entendido como significando uma composição que não apresenta sedimentação e/ou separação do soro.

[017] Tal como aqui utilizado, o termo “x% (p/p)” é equivalente a “x g por 100 g”.

[018] Tal como aqui utilizado, o termo “leite fermentado” deve ser entendido como significando um produto ou composição derivados do leite pela ação acidificante de pelo menos uma bactéria do ácido láctico.

[019] Tal como aqui utilizado, o termo “tomar de colher” deve ser entendido como significando um sólido ou semissólido que pode ser consumido por meio de uma colher ou outro utensílio.

[020] Tal como aqui utilizado, o termo “fermentação” deve ser entendido como significando o metabolismo de uma substância por bactérias, leveduras ou outros microrganismos.

[021] Tal como aqui utilizado, o termo “ufc” ou “UFC” deve ser considerado como uma abreviação do termo “unidade formadora de colônia”.

[022] Tal como aqui utilizado, o termo “CNCM I-” seguido por um número de 4 dígitos deve ser considerado com se referindo a uma cepa depositada na Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM) 25 rue du Docteur Roux, Paris, França sob o Tratado de Budapeste com um número de acesso correspondente ao dito número de 4 dígitos, por exemplo CNCM I3862.

[023] Tal como aqui utilizado, a referência a uma cepa ou espécie bacteriana deve incluir as bactérias funcionalmente equivalentes derivadas delas, tais como, mas não se limitando a, mutantes, variantes ou bactérias geneticamente transformadas. Estas cepas mutantes ou geneticamente transformadas podem ser cepas em que um ou mais genes endógenos da cepa parental foram mutados, por exemplo, para modificar algumas das suas propriedades metabólicas (por exemplo, a sua capacidade de fermentar açúcares, a sua resistência a acidez, a sua sobrevivência para transportar no trato gastrointestinal, as suas propriedades de pós-acidificação ou a sua produção de metabolitos). Podem também ser cepas resultantes da transformação genética da cepa parental para adicionar um ou mais genes de interesse, por exemplo, para dar às referidas cepas geneticamente transformadas características fisiológicas adicionais, ou para permitir que elas expressem proteínas de interesse terapêutico ou profilático que se deseja administrar através das referidas cepas. Estas cepas mutantes ou geneticamente transformadas podem ser obtidas a partir da cepa parental por meio de técnicas convencionais para mutagênese aleatória ou sítio-dirigida e transformação genética de bactérias, ou por meio da técnica conhecida como “mistura de genoma” (genome shuffling). No presente texto, as cepas, mutantes e variantes derivadas de uma espécie ou cepa parental serão consideradas como sendo abrangidas por referência à referida espécie ou cepa parental, por exemplo, as frases “S. thermophilus” e “cepa CNCM I-3862” devem incluir as cepas, mutantes e variantes derivadas delas.

[024] Consequentemente, tal como aqui utilizado, a referência a uma cepa bacteriana especificada por um número de acesso ou depósito deve ser considerada como abrangendo as suas variantes possuindo pelo menos 80% de identidade com a sequência 16S rRNA da referida cepa especificada, de preferência pelo menos 85% de identidade, mais preferencialmente pelo menos 90% de identidade, ainda mais preferencialmente pelo menos 95% de identidade (ver: Stackebrandt & Goebel, 1994, Int. J. Syst. Bacteriol. 44: 846-849). Em uma forma de realização particularmente preferida, a referida variante tem pelo menos 97% de identidade com a sequência 16S rRNA da referida cepa especificada, de um modo mais preferido, pelo menos 98% de identidade, de um modo mais preferido, pelo menos 99% de identidade.

[025] As bactérias do ácido láctico compreendidas na composição de acordo com a invenção podem ser bactérias vivas ou mortas. De preferência, pelo menos algumas das bactérias do ácido láctico compreendidas na composição de acordo com a invenção são bactérias vivas. Mais preferivelmente, a composição de acordo com a invenção compreende de 105 a 1010 unidades formadoras de colônia de bactérias do ácido láctico por grama de composição (UFC/g), mais preferivelmente pelo menos 107, 108, 109 unidades formadoras de colônia de bactérias do ácido láctico por grama de composição (UFC/g).

[026] A composição de acordo com a invenção é preferencialmente uma composição alimentar ou nutricional, isto é, um produto alimentar, mais preferivelmente um produto lácteo, e mais preferivelmente um produto lácteo fermentado, em particular fermentado pelas bactérias do ácido láctico de acordo com a invenção.

[027] Como pretendido aqui, um produto lácteo fermentado é o produto de fermentação de uma composição à base de leite por uma cultura inicial de microrganismos de fermentação, em particular bactérias, mais particularmente bactérias do ácido láctico. O produto lácteo fermentado de acordo com a invenção pode assim ser um leite fermentado, um iogurte, em particular um iogurte tradicional, batido ou em bebida, ou um queijo fresco tal como um queijo branco ou um petit-Suisse. Pode ser também um produto lácteo fermentado coado, como um iogurte coado, também chamado de iogurte concentrado ou iogurte ao estilo grego.

[028] Os termos “leite fermentado” e “iogurte” têm os seus significados usuais no campo da indústria de lacticínios, isto é, produtos destinados ao consumo humano e originários da fermentação láctica acidificante de um substrato de leite. Estes produtos podem conter ingredientes secundários, como frutas, vegetais, açúcar, etc.

[029] A expressão “leite fermentado” é assim reservada no presente pedido para um produto lácteo preparado com um substrato de leite que foi submetido a um tratamento pelo menos equivalente à pasteurização, semeado com microrganismos pertencentes às espécies características ou espécies de cada produto.

[030] O termo “iogurte” é reservado para o leite fermentado obtido, de acordo com o uso local e constante, pelo desenvolvimento de bactérias lácticas termofílicas específicas conhecidas como Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus e Streptococcus thermophilus, que devem estar no estado vivo no produto acabado, a uma taxa mínima. Em certos países, os regulamentos exigem a adição de outras bactérias lácticas à produção de iogurte, e especialmente o uso adicional de cepas de Bifidobacterium e/ou Lactobacillus acidophilus e/ou Lactobacillus casei. Estas cepas lácticas adicionais destinam- se a conferir várias propriedades ao produto acabado, tais como o favorecimento do equilíbrio da flora intestinal ou a modulação do sistema imune.

[031] Na prática, a expressão “leite fermentado” é, portanto, geralmente usada para designar leites fermentados que não sejam iogurtes. Pode também, segundo o país, ser conhecido por nomes tão diversos como, por exemplo, “Kefir”, “Kumtss”, “Lassi”, “Dahi”, “Leben”, “Filmjolk”, “Villi”, “Leite acidófilo”.

[032] Por último, o nome “queijo branco” ou “petit-Suisse” é, no presente pedido, reservado a queijos não salgados não refinados, que tenham sido fermentados apenas por bactérias do ácido láctico (e nenhuma fermentação além da fermentação láctica).

[033] O produto lácteo fermentado pode ser feito a partir de leite integral e/ou leite total ou parcialmente desnatado, que pode ser usado em forma de pó que pode ser reconstituído por adição de água. Podem ser adicionados outros componentes lácteos, tais como creme, caseína, caseinato (por exemplo, caseinato de cálcio ou sódio), proteínas de soro de leite, particularmente sob a forma de um concentrado (WPC), proteínas do leite, particularmente sob a forma de um concentrado (MPC), hidrolisados de proteínas do leite e suas misturas. Os componentes do leite e o leite têm, tipicamente, uma origem animal, tal como, uma origem de vaca, cabra, ovelha, búfalo, jumento ou camelo.

[034] Como pretendido aqui, uma “bactéria do ácido láctico” é uma bactéria Gram-positiva, tolerante a ácidos, geralmente não esporulante e não respiratória, tanto em forma de bastonete ou cocos, que é capaz de fermentar açúcares em ácido láctico.

[035] De preferência, a pelo menos uma bactéria do ácido láctico de acordo com a invenção pertence a um gênero selecionado a partir do grupo que consiste nos gêneros Lactobacillus, Lactococcus, Streptococcus e Bifidobacterium, mais preferencialmente a pelo menos uma bactéria do ácido láctico de acordo com a invenção é do gênero Streptococcus ou Lactococcus.

[036] De um modo preferido, a pelo menos uma bactéria do ácido láctico de acordo com a invenção é Streptococcus thermophilus ou Lactococcus lactis, em particular Lactococcus lactis subsp. lactis.

[037] De preferência, a bactéria do ácido láctico é Streptococcus thermophilus CNCM I-3862.

[038] A cepa Streptococcus thermophilus CNCM I-3862 foi depositada na Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM) (Institut Pasteur, 25 Rue du Docteur Roux, Paris, França) sob o Tratado de Budapeste em 31 de outubro de 2007 sob o número de referência CNCM I-3862.

[039] De preferência, a bactéria do ácido láctico é Lactococcus lactis subsp. lactis CNCM I-1631. A cepa Lactococcus lactis subsp. lactis CNCM I-1631 foi depositada na Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM) (Institut Pasteur, 25 rue du Docteur Roux, Paris, França) sob o Tratado de Budapeste em 24 de outubro de 1995 sob o número de referência CNCM I1631.

[040] Como pretendido aqui, “aumentar ou manter” uma população de Faecalibacterium prausnitzii, em particular uma população intestinal da mesma, significa proteger, favorecer ou estimular o crescimento de bactérias Faecalibacterium prausnitzii de modo que a contagem de bactérias Faecalibacterium prausnitzii, ou o número relativo de bactérias Faecalibacterium prausnitzii em relação a outras bactérias, é mantido ou aumenta.

[041] Como pretendido aqui, uma população intestinal de Faecalibacterium prausnitzii se refere bactérias Faecalibacterium prausnitzii presentes no intestino ou na tripa, em particular no cólon, de um indivíduo.

[042] A determinação da quantidade de bactérias Faecalibacterium prausnitzii em uma amostra pode ser realizada por numerosos métodos bem conhecidos pelos técnicos no assunto. A determinação da quantidade intestinal de bactérias Faecalibacterium prausnitzii em um indivíduo pode ser realizada cultivando amostras de fezes do indivíduo.

[043] Como pretendido aqui, o butirato inclui ambas as suas formas ácida e básica, isto é, o ácido butírico e o butirato sensu stricto. O butirato é também chamado butanoato e tem a fórmula CH3CH2CH2-COO-.

[044] Como pretendido aqui, “aumentar ou manter” a produção de butirato, em particular a produção intestinal do mesmo, significa proteger, favorecer ou estimular a produção de butirato de modo que seja mantido ou aumente. De preferência, dentro da estrutura da presente invenção, o butirato é produzido pelas bactérias Faecalibacterium prausnitzii, em particular no intestino de um indivíduo.

[045] De preferência, o indivíduo de acordo com a invenção é um indivíduo humano. Em uma forma de realização, o indivíduo de acordo com a invenção é um indivíduo saudável ou um indivíduo que não sofre de doenças intestinais ou doenças do trato gastrointestinal.

[046] Como pretendido aqui, “não terapêutico” significa que o indivíduo que recebe ou consome a composição de acordo com a invenção não é tratado para uma doença pela composição. Em outras palavras, dentro da estrutura dos usos e métodos não terapêuticos de acordo com a invenção, a composição de acordo com a invenção não é um medicamento nem uma composição farmacêutica.

USOS E MÉTODOS

[047] Em um aspecto, a presente invenção proporciona o uso de pelo menos uma bactéria do ácido láctico, ou uma composição compreendendo a mesma ou condicionada pela mesma, para aumentar ou manter uma população de Faecalibacterium prausnitzii. Tipicamente, a população de Faecalibacterium prausnitzii é a população intestinal em um indivíduo.

[048] Em um outro aspecto, a presente invenção proporciona o uso de pelo menos uma bactéria do ácido láctico, ou uma composição compreendendo a mesma ou condicionada pela mesma, para aumentar ou manter a produção de butirato em um indivíduo. Normalmente, a produção de butirato é a produção de butirato intestinal em um indivíduo.

[049] Em uma forma de realização alternativa, a presente invenção também proporciona um método para aumentar ou manter uma população de Faecalibacterium prausnitzii compreendendo suprir, fornecer ou administrar ao indivíduo uma composição tal como definida acima, em particular em uma quantidade eficaz da mesma. Tipicamente, a população de Faecalibacterium prausnitzii é a população intestinal em um indivíduo.

[050] Em uma forma de realização alternativa adicional, a presente invenção também proporciona um método para aumentar ou manter a produção de butirato em um indivíduo, compreendendo suprir, fornecer ou administrar ao indivíduo uma composição tal como definida acima, em particular em uma quantidade eficaz da mesma. Normalmente, a produção de butirato é a produção de butirato intestinal em um indivíduo. A determinação de uma quantidade eficaz pode ser realizada pelo técnico no assunto, particularmente tendo em vista a divulgação aqui fornecida.

[051] De preferência, pelo menos uma bactéria do ácido láctico de acordo com a invenção pertence a um gênero selecionado a partir do grupo que consiste nos gêneros Lactobacillus, Lactococcus, Streptococcus e Bifidobacterium, mais preferencialmente pelo menos uma bactéria do ácido láctico de acordo com a invenção é do gênero Streptococcus ou Lactococcus.

[052] De um modo preferido, a pelo menos uma bactéria do ácido láctico de acordo com a invenção é Streptococcus thermophilus ou Lactococcus lactis, em particular Lactococcus lactis subsp. lactis.

[053] De preferência, a bactéria do ácido láctico é Streptococcus thermophilus CNCM I-3862. A cepa Streptococcus thermophilus CNCM I-3862 foi depositada na Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM) (Institut Pasteur, 25 Rue du Docteur Roux, Paris, França) sob o Tratado de Budapeste em 31 de outubro de 2007 sob o número de referência CNCM I-3862.

[054] De preferência, a bactéria do ácido láctico é Lactococcus lactis subsp. lactis CNCM I-1631. A cepa Lactococcus lactis subsp. lactis CNCM I-1631 foi depositada na Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM) (Institut Pasteur, 25 Rue du Docteur Roux, Paris, França) sob o Tratado de Budapeste em 24 de outubro de 1995 sob o número de referência CNCM I1631.

[055] É particularmente preferido que os usos e métodos aqui descritos sejam usos e métodos não terapêuticos.

COMPOSIÇÕES E CEPAS

[056] A presente invenção também se refere a uma composição compreendendo, ou condicionada por, pelo menos uma bactéria do ácido láctico para uso no aumento ou manutenção de uma população de Faecalibacterium prausnitzii, em particular uma população intestinal de Faecalibacterium prausnitzii em um indivíduo, e/ou para aumentar ou manter a produção de butirato, em particular a produção de butirato intestinal em um indivíduo.

[057] A composição para uso de acordo com formas de realização da invenção é adequada para consumo ou ingestão, preferivelmente por via oral. Por conseguinte, a composição compreende ou consiste em matéria comestível. É particularmente preferido que as composições de formas de realização da invenção estejam substancialmente isentas de matéria patogênica ou toxicogênica. A composição de acordo com formas de realização da invenção pode ser um medicamento ou composição farmacêutica. Em uma forma de realização particularmente preferida, a composição de acordo com a invenção pode ser uma composição não terapêutica, de preferência uma composição nutracêutica, uma composição nutricional e/ou uma composição alimentar.

[058] A presente invenção também se refere uso pretendido de pelo menos uma bactéria do ácido láctico como aqui proporcionada para a fabricação de uma composição alimentar para aumentar ou manter uma população de Faecalibacterium prausnitzii, em particular uma população intestinal de Faecalibacterium prausnitzii em um indivíduo e/ou para aumentar ou manter a produção de butirato, em particular a produção de butirato intestinal em um indivíduo. É particularmente preferido que a composição alimentar seja uma composição alimentar fermentada, de preferência uma composição de leite fermentado. Outras composições de acordo com formas de realização da invenção também incluem alimentos para bebês, fórmulas de leite para lactentes e fórmulas de transição para lactentes.

[059] De preferência, a composição compreende pelo menos 106, mais preferivelmente pelo menos 107 e mais preferivelmente pelo menos 108 unidades formadoras de colônia (UFC) de bactérias do ácido láctico, preferivelmente Streptococcus thermophilus ou Lactococcus lactis (preferivelmente subsp. lactis), de acordo com formas de realização da invenção, por grama (g) de composição, de acordo com formas de realização da invenção. Preferivelmente, também a composição, de acordo com formas de realização da invenção, compreende pelo menos cerca de 1011, mais preferivelmente pelo menos 1010 e mais preferencialmente pelo menos 109 unidades formadoras de colônia (UFC) de bactérias do ácido láctico, preferivelmente Streptococcus thermophilus ou Lactococcus lactis (preferencialmente subsp. lactis), de acordo com formas de realização da invenção, por grama (g) de composição, de acordo com formas de realização da invenção. Em uma outra forma de realização, as bactérias do ácido láctico são selecionadas a partir do grupo que consiste em CNCM I-1631 e CNCM I-3862.

[060] Em formas de realização, a composição compreende 106 a 1011 unidades formadoras de colônia (UFC) de bactérias do ácido láctico, preferencialmente Streptococcus thermophilus ou Lactococcus lactis (preferivelmente subsp. lactis), de acordo com formas de realização da invenção, por grama (g) de composição, de acordo com formas de realização da invenção. Em formas de realização, a composição compreende 107 a 1011 unidades formadoras de colônia (UFC) de bactérias do ácido láctico, preferivelmente Streptococcus thermophilus ou Lactococcus lactis (preferivelmente subsp. lactis), de acordo com formas de realização da invenção, por grama (g) de composição, de acordo com formas de realização da invenção. a invenção. Em formas de realização, a composição compreende 108 a 1011 unidades formadoras de colônia (UFC) de bactérias do ácido láctico, preferivelmente Streptococcus thermophilus ou Lactococcus lactis (preferivelmente subsp. lactis), de acordo com formas de realização da invenção, por grama (g) de composição, de acordo com formas de realização da invenção. Em formas de realização, a composição compreende 109 a 1011 unidades formadoras de colônia (UFC) de bactérias do ácido láctico, preferivelmente Streptococcus thermophilus ou Lactococcus lactis (preferencialmente subsp. lactis), de acordo com formas de realização da invenção, por grama (g) de composição, de acordo com formas de realização da invenção. Em formas de realização, a composição compreende 1010 a 1011 unidades formadoras de colônia (UFC) de bactérias do ácido láctico, preferivelmente Streptococcus thermophilus ou Lactococcus lactis (preferencialmente subsp. lactis), de acordo com formas de realização da invenção, por grama (g) de composição, de acordo com formas de realização da invenção.

[061] Em formas de realização, a composição compreende 106 a 1010 unidades formadoras de colônia (UFC) de bactérias do ácido láctico, preferencialmente Streptococcus thermophilus ou Lactococcus lactis (preferencialmente subsp. lactis), de acordo com formas de realização da invenção, por grama (g) de composição, de acordo com formas de realização da invenção. Em formas de realização, a composição compreende 106 a 109 unidades formadoras de colônia (UFC) de bactérias do ácido láctico, preferivelmente Streptococcus thermophilus ou Lactococcus lactis (preferivelmente subsp. lactis), de acordo com formas de realização da invenção, por grama (g) de composição, de acordo com formas de realização da invenção. Em formas de realização, a composição compreende 106 a 108 unidades formadoras de colônia (UFC) de bactérias do ácido láctico, preferivelmente Streptococcus thermophilus ou Lactococcus lactis (preferencialmente subsp. lactis), de acordo com formas de realização da invenção, por grama (g) de composição, de acordo com formas de realização da invenção. Em formas de realização, a composição compreende 106 a 107 unidades formadoras de colônia (UFC) de bactérias do ácido láctico, preferivelmente Streptococcus thermophilus ou Lactococcus lactis (preferivelmente subsp. lactis), de acordo com formas de realização da invenção, por grama (g) de composição, de acordo com formas de realização da invenção. É particularmente preferido que as bactérias do ácido láctico sejam selecionadas a partir do grupo que consiste em CNCM I-1631 e CNCM I-3862.

[062] De um modo preferido, a composição adequada para os usos e métodos de formas de realização da invenção compreende leite, de um modo mais preferido, leite fermentado. De preferência, a composição compreende pelo menos cerca de 30% (p/p) de leite, mais preferencialmente pelo menos cerca de 50% (p/p) de leite e ainda mais preferencialmente pelo menos cerca de 70% (p/p) de leite. Em formas de realização, a composição compreende de 30% a 100% (p/p) de leite. Em formas de realização, a composição compreende de 50% a 100% (p/p) de leite. Em formas de realização, a composição compreende de 70% a 100% (p/p) de leite. De um modo preferido, o referido leite é leite vegetal e/ou animal, mais preferivelmente leite de soja, amêndoa, aveia, cânhamo, espelta, coco, arroz, cabra, ovelha, camelo, égua ou vaca e, mais preferencialmente, leite de vaca. De preferência, o(s) referido(s) leite(s) é(são) tratado(s) termicamente, tipicamente pasteurizados, para assegurar a esterilidade. De um modo preferido, o referido tratamento térmico é realizado antes da preparação da composição de leite fermentado.

[063] De um modo preferido, o referido leite compreende um ou mais dentre leite desnatado, parcialmente desnatado ou não desnatado. De um modo preferido, o referido leite ou leites pode estar na forma líquida, em pó e/ou concentrada. Em uma forma de realização, o referido leite compreende ainda componentes lácteos preferencialmente selecionados a partir do grupo que consiste em creme, caseína, caseinato (por exemplo caseinato de cálcio ou sódio), proteínas de soro de leite particularmente na forma de um concentrado (WPC), proteínas do leite particularmente na forma de um concentrado (MPC), hidrolisados de proteína do leite, e misturas dos mesmos. Em uma forma de realização, a referida mistura compreende ainda sumos de vegetais e/ou frutos. Em uma forma de realização, o referido leite ou leites pode ser enriquecido ou fortificado com outros componentes do leite ou outros nutrientes, tais como, mas não limitados a vitaminas, minerais, elementos traço ou outros micronutrientes.

[064] De preferência, a composição compreende acima de cerca de 0,3 g por 100 g em peso de ácido láctico livre, mais preferivelmente acima de cerca de 0,7 g ou 0,6 g por 100 g em peso de ácido láctico livre. Em formas de realização, a composição compreende 0,3 g a 0,7 g por 100 g em peso de ácido láctico livre.

[065] De preferência, a composição compreende um teor de proteína pelo menos equivalente ao do leite ou leites a partir do qual é derivada, de preferência pelo menos cerca de 2,5%, mais preferivelmente pelo menos cerca de 3% ou 3,5% (p/p). De um modo preferido, a composição tem um pH igual ou inferior a 5, de um modo preferido, entre cerca de 3 e cerca de 4,5 e, de um modo mais preferido, entre cerca de 3,5 e cerca de 4,5.

[066] De um modo preferido, a composição tem uma viscosidade inferior a 200 mPa.s, de um modo mais preferido, inferior a 100 mPa.s e, de um modo muito preferido, inferior a 60 mPa.s, a 10 °C, a uma taxa de cisalhamento de 64 s-1. Em formas de realização, a composição tem um intervalo de viscosidade de 1 a 200 mPa.s, 1 a 100 mPa.s, ou 1 a 60 mPa.s, a 10 °C, a uma taxa de cisalhamento de 64 s-1. Em formas de realização, a composição tem um intervalo de viscosidade de 10 a 200 mPa.s, 10 a 100 mPa.s, ou 10 a 60 mPa.s, a 10 °C, a uma taxa de cisalhamento de 64 s-1. Em formas de realização, a composição tem um intervalo de viscosidade de 30 a 200 mPa.s, 30 a 100 mPa.s, ou 30 a 60 mPa.s, a 10 °C, a uma taxa de cisalhamento de 64 s-1.

[067] A composição de acordo com formas de realização da invenção é preferencialmente um produto selecionado a partir do grupo que compreende iogurte, iogurte tradicional, iogurte batido, iogurte fluido, bebida de iogurte, iogurte congelado, kefir, leitelho, quark, nata ácida, queijo fresco e queijo. Em uma forma de realização, a composição de acordo com formas de realização da invenção é uma composição de beber, de um modo mais preferido, uma bebida de leite fermentada, tal como, mas não limitada a uma bebida de iogurte, kefir etc. Em uma forma de realização alternativa, a composição de acordo com formas de realização da invenção é uma composição que é para tomar de colher, tal como um iogurte tradicional ou batido ou equivalente do mesmo.

[068] De preferência, a composição, de acordo com formas de realização da invenção, pode ser armazenada, transportada e/ou distribuída a uma temperatura de 1 °C a 10 °C, durante pelo menos cerca de 30 dias, pelo menos cerca de 60 dias ou pelo menos cerca de 90 dias da embalagem e permanece adequado para consumo.

[069] De preferência, a composição é um produto embalado que compreende pelo menos 106, mais preferencialmente pelo menos 107 e mais preferencialmente pelo menos 108 unidades formadoras de colônia (UFC) de bactérias do ácido láctico, preferencialmente Streptococcus thermophilus ou Lactococcus lactis (preferencialmente subsp. lactis), de acordo com formas de realização da invenção, por grama (g) de composição, de acordo com formas de realização da invenção, subsequente ao armazenamento, transporte e/ou distribuição a uma temperatura de 1 °C a 10 °C durante pelo menos cerca de 30 dias, pelo menos cerca de 60 dias ou pelo menos cerca de 90 dias da embalagem. É particularmente preferido que as bactérias do ácido láctico sejam selecionadas a partir do grupo que consiste em CNCM I-1631 e CNCM I-3862.

[070] Em formas de realização, a composição é um produto embalado que compreende 106 a 108 ou 106 a 107 unidades formadoras de colônia (UFC) de bactérias do ácido láctico, preferivelmente Streptococcus thermophilus ou Lactococcus lactis (preferivelmente subsp. lactis), de acordo com formas de realização da invenção, por grama (g) da composição, de acordo com formas de realização da invenção, subsequentes ao armazenamento, transporte e/ou distribuição a uma temperatura de 1 °C a 10 °C durante pelo menos cerca de 30 dias, pelo menos cerca de 60 dias ou pelo menos cerca de 90 dias a partir da embalagem. É particularmente preferido que as bactérias do ácido láctico sejam selecionadas a partir do grupo que consiste em CNCM I-1631 e CNCM I-3862.

[071] De acordo com uma outra forma de realização, a composição compreende ainda uma preparação intermediária compreendendo uma preparação de frutos e/ou cereais e/ou aditivos, tais como aromatizantes e/ou corantes. A referida preparação intermediária pode conter, em particular, espessantes (fibras solúveis e insolúveis, alginatos, carragenanas, goma xantana, pectina, amido, em particular gelatinizado, goma gelana, celulose e seus derivados, goma guar e alfarroba, inulina) ou edulcorantes (aspartame, acessulfame-K, sacarina, sucralose, ciclamato) ou conservantes. Exemplos de aromatizantes são: maçã, laranja, morango, kiwi, aroma de cacau, etc. Exemplos de corantes são: beta-caroteno, carmesim, vermelho de cochonilha. Além disso, a preparação dos frutos acima mencionados pode compreender frutos inteiros ou em pedaços ou em gelatina ou em geleia, tornando possível, por exemplo, obter iogurtes de frutas.

[072] De um modo preferido, a composição de acordo com formas de realização da invenção compreende até cerca de 30% (p/p) da referida preparação intermediária, por exemplo, até cerca de 10%, 15%, 20%, 25% (p/p). Em uma forma de realização, a composição de acordo com formas de realização da invenção compreende 1% a 30% (p/p) da referida preparação intermediária. Em formas de realização alternativas, a composição de acordo com formas de realização da invenção compreende 1% a 25% (p/p) da referida preparação intermediária. Em outras formas de realização alternativas, a composição de acordo com formas de realização da invenção compreende 1% a 20% (p/p) da referida preparação intermediária. Em formas de realização adicionais, a composição de acordo com formas de realização da invenção compreende 1% a 15% (p/p) da referida preparação intermediária. Em outras formas de realização adicionais, a composição de acordo com formas de realização da invenção compreende 1% a 10% (p/p) da referida preparação intermediária.

[073] De preferência, a composição, de acordo com formas de realização da invenção, é fornecida em um recipiente vedado ou vedável contendo cerca de 50 g, 60 g, 70 g, 75 g, 80 g, 85 g, 90 g, 95 g, 100 g, 105 g, 110 g, 115 g, 120 g, 125 g, 130 g, 135 g, 140 g, 145 g, 150 g, 200 g, 300 g, 320 g ou 500 g ou cerca de 1 oz, 2 oz, 3 oz, 4 oz, 5 oz, 6 oz ou 12 oz de produto em peso.

[074] Em formas de realização, a composição, de acordo com formas de realização da invenção, é fornecida em um recipiente vedado ou vedável contendo cerca de 50 g a 500 g, 60 g a 500 g, 70 g a 500 g, 75 g a 500 g, 80 g a 500 g, 85 g a 500 g, 90 g a 500 g, 95 g a 500 g, 100 g a 500 g, 105 g a 500 g, 110 g a 500 g, 115 g a 500 g, 120 g a 500 g, 125 g a 500 g, 130 g a 500 g, 135 g a 500 g, 140 g a 500 g, 145 g a 500 g, 150 g a 500 g, 200 g a 500 g, 300 g a 500 g, 320 g a 500 g ou 500 g de produto em peso. Em formas de realização, a composição, de acordo com formas de realização da invenção, é fornecida em um recipiente vedado ou vedável contendo cerca de 1 oz a 12 oz, 2 oz a 12 oz, 3 oz a 12 oz, 4 oz a 12 oz, 5 oz a 12 oz, 6 oz a 12 oz ou 12 oz de produto em peso.

MÉTODOS PARA A PREPARAÇÃO DE PRODUTOS LÁCTEOS FERMENTADOS

[075] Métodos para a preparação de produtos lácteos fermentados, tais como iogurtes ou seus equivalentes, são bem conhecidos na técnica.

[076] De preferência, os produtos lácteos fermentados são preparados utilizando leite que foi submetido a tratamento térmico pelo menos equivalente à pasteurização. De preferência, o referido tratamento térmico é realizado antes da preparação da composição.

[077] Normalmente, o leite é pasteurizado por meio das seguintes etapas sucessivas: 1) padronização de substâncias graxas da matéria-prima, de modo a obter uma substância padronizada, 2) enriquecimento com matéria seca da substância padronizada obtida na etapa anterior, de modo a obter uma substância enriquecida, 3) pré-aquecimento da substância enriquecida obtida na etapa anterior, de modo a obter uma substância de partida; 4) pasteurização e retenção da substância de partida obtida na etapa anterior, de modo a obter uma substância pasteurizada e retida (held); 5) uma etapa opcional de homogeneização da substância pasteurizada e retida obtida na etapa anterior, de modo a obter uma substância pasteurizada, retida e opcionalmente homogeneizada, 6) arrefecimento inicial da substância pasteurizada, retida e opcionalmente homogeneizada obtida na etapa precedente, de modo a obter uma substância de partida pasteurizada que foi retida, opcionalmente homogeneizada e arrefecida.

[078] Tal como aqui utilizado, a “padronização de substâncias graxas” significa uma fase de levar a quantidade de gorduras presentes na substância de partida a um nível predeterminado. O enriquecimento com matéria seca envolve a adição de proteínas e substância graxas para modificar a firmeza da coalhada.

[079] Tal como aqui utilizado, “retenção” significa uma rápida termalização do leite e torna possível destruir a flora microbiana vegetativa, incluindo formas patogênicas. Sua duração típica é de 4 a 10 minutos, em particular de 5 a 8 minutos, e em particular aproximadamente 6 minutos.

[080] Como aqui utilizado, “homogeneização” significa a dispersão das substâncias graxas na substância do tipo leite em pequenos glóbulos de gordura. A homogeneização é realizada, por exemplo, a uma pressão de 107 a 2,8 x 107 Pa (100 a 280 bar), em particular de 107 a 2,5 x 107 Pa (100 a 250 bar), em particular de 107 a 2 x 107 Pa (100 a 200 bar), em particular de aproximadamente 2 x 107 Pa (200 bar). Este estágio de homogeneização é puramente opcional. Está em particular ausente do processo de produção de produtos com 0% de substâncias graxas.

[081] Tipicamente, um produto de leite fermentado é preparado por cultura de leites a uma temperatura adequada com microrganismos adequados para proporcionar uma redução no pH, de um modo preferido, a um pH igual ou inferior a 5, de um modo preferido, entre cerca de 3 e 4,5; mais preferivelmente entre cerca de 3,5 e cerca de 4,5. O pH pode ser ajustado controlando a fermentação pelo microrganismo e parando-a quando apropriado, por exemplo, por arrefecimento.

[082] A seleção de cepas de bactérias do ácido láctico adequadas está no escopo do técnico no assunto e é tipicamente uma bactéria do ácido láctico termofílica. Exemplos de bactérias do ácido láctico que podem ser utilizadas incluem, mas não se limitam a Lactobacilli (por exemplo Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus buchneri, Lactobacillus delbruckei, em particular L. delbruckei supsb. bulgaricus ou lactis, Lactobacillus casei, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus rhamnosus); Estreptococos (por exemplo, Streptococcus thermophilus); Lactococos (por exemplo Lactococcus lactis, tipicamente Lactococcus lactis subsp. lactis ou Lactococcus lactis subsp. cremoris). Tipicamente, pode ser utilizada uma mistura ou associação de uma pluralidade de espécies de bactérias do ácido láctico, tipicamente uma mistura ou associação de Lactobacillus e Streptococcus. Para a preparação de iogurte, esta inclui tipicamente Lactobacillus bulgaricus (também referido como Lactobacillus delbruckei subsp. bulgaricus) e Streptococcus thermophilus, opcionalmente com microrganismos adicionais tais como, mas não limitados a espécies probióticas ou outras espécies que podem proporcionar qualidades organolépticas ou outras desejáveis à composição, por exemplo Lactococcus lactis. É particularmente preferido que as bactérias do ácido láctico sejam selecionadas a partir do grupo que consiste em CNCM I-1631 e CNCM I-3862.

[083] As temperaturas adequadas para a fermentação do leite são tipicamente de cerca de 36 °C a cerca de 44 °C e a temperatura é mantida durante um período de incubação suficiente para proporcionar a desejada redução do pH.

[084] Para a preparação de um produto lácteo fermentado a temperatura no início da fermentação é tipicamente de cerca de 36 °C a cerca de 43 °C, em particular de cerca de 37 °C a cerca de 40 °C, a temperatura no final da fermentação é tipicamente de cerca de 37 °C a cerca de 44 °C, em particular cerca de 38 °C a cerca de 41 °C. O tempo de fermentação é tipicamente de cerca de 6 a cerca de 11 horas.

[085] Após a fermentação, o leite fermentado é resfriado. Opcionalmente, pode ser realizada uma etapa de arrefecimento intermediário do leite fermentado para proporcionar um leite fermentado pré-arrefecido com uma temperatura entre cerca de 22 °C e cerca de 4 °C. Tipicamente o tempo de arrefecimento intermediário é de cerca de 1 hora a cerca de 4 horas, em particular cerca de 1 hora e 30 minutos a cerca de 2 horas. O leite fermentado pré-arrefecido é tipicamente armazenado durante até 40 horas ou menos.

[086] De preferência, realiza-se uma etapa de arrefecimento final do leite fermentado de tal modo que a temperatura no início do arrefecimento final seja inferior a cerca de 22 °C e a temperatura no final do arrefecimento final seja de cerca de 4 °C a cerca de 10 °C. O produto arrefecido pode então ser armazenado, transportado e/ou distribuído a uma temperatura de cerca de 1 °C a cerca de 10 °C durante pelo menos cerca de 30 dias, pelo menos cerca de 60 dias ou pelo menos cerca de 90 dias.

[087] De acordo com uma outra forma de realização, o processo para a preparação de um produto lácteo fermentado, como definido acima, compreende opcionalmente uma etapa de agitação a uma pressão de pelo menos 2 x 106 Pa (20 bar), ou realização de uma suavização dinâmica para obter uma composição tendo a viscosidade desejada, tipicamente uma viscosidade até 20 mPa.s. As operações de agitação ou suavização dinâmica fornecem algum cisalhamento à composição que normalmente permite uma queda de viscosidade. Tais operações são conhecidas pelo técnico no assunto e podem ser operadas com equipamento apropriado convencional. Esta etapa é tipicamente realizada a temperatura fria, por exemplo, a uma temperatura de 1 °C a 20 °C. Sem pretender estar vinculado a qualquer teoria, acredita-se que a aplicação de algum cisalhamento a temperatura fria, tipicamente por agitação a alta pressão ou realizando uma suavização dinâmica, pode levar a uma formação de gel fluido dentro da composição, que proporciona estabilidade melhorada mesmo a uma baixa viscosidade de até 20 mPa.s.

[088] De acordo com uma outra forma de realização, o processo para a preparação de um produto lácteo fermentado, como definido acima, compreende opcionalmente uma etapa de adição de uma preparação intermediária antes ou após a fermentação, dita preparação intermediária compreendendo uma preparação de frutas e/ou cereais e/ou aditivos, tais como aromatizantes e/ou corantes.

[089] Em um aspecto, a presente invenção também proporciona uma cepa de Streptococcus thermophilus depositada na CNCM sob o número de referência I-3862. A presente invenção também proporciona um produto lácteo fermentado compreendendo uma cepa de Streptococcus thermophilus depositada na CNCM sob o número de referência I-3862.

[090] A invenção será ainda ilustrada pelas seguintes figuras e exemplos não limitativos.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS FIGURA 1:

[091] A figura 1 representa a densidade óptica (DO) a 600 nm (eixo vertical) de uma cultura de Faecalibacterium prausnitzii sem (barra preta, controle) ou com a adição de um sobrenadante de cultura de Lactococcus lactis subsp. lactis (barra pontilhada) ou de Streptococcus thermophilus (barra tracejada), após um tempo de cultura de 40 horas e 65 horas (eixo horizontal).

FIGURA 2:

[092] A Figura 2 representa a concentração de butirato (em mmol/L, eixo vertical) de uma cultura de Faecalibacterium prausnitzii sem (barra preta, controle) ou com a adição de um sobrenadante de cultura de Lactococcus lactis subsp. lactis (barra pontilhada) ou de Streptococcus thermophilus (barra tracejada), após um tempo de cultura de 40 horas (eixo horizontal).

EXEMPLO MATERIAL E MÉTODOS PRODUÇÃO DE CEPAS BACTERIANAS, MEIOS E SOBRENADANTES:

[093] As cepas bacterianas utilizadas neste estudo estão listadas na Tabela 1. A pureza de todas as cepas foi avaliada regularmente por observação microscópica após coloração das células. A Faecalibacterium prausnitzii foi adquirida da Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ) (DSM 17677). Todas foram cultivadas em meio de infusão Brain-heart (Becton Dickinson) suplementado com 0,5% de extrato de levedura (Becton Dickinson) e 5 mg/L de cloreto de hemina (Calbiochem), suplementado com celobiose (1 g/L; Sigma-Aldrich), maltose (1 g/L; Sigma-Aldrich) e cisteína (0,5 g/L; Sigma-Aldrich) em câmara anaeróbia, com a seguinte mistura gasosa, 80% N2 - 10% CO2 - 10% H2. Quando a cultura foi cultivada, foi adicionada uma solução de glicerol (16 g/L; Sigma-Aldrich). Alíquotas de 2 mL de estoque foram preparadas e mantidas a -20 °C. Para cada experimento, uma nova alíquota foi usada. Para os testes de interação probióticos - Faecalibacterium prausnitzii, todas as cepas foram cultivadas em meio YCFA (pH 6), que foi otimizado para permitir o crescimento de todas as cepas bacterianas (Tabela 2). Este meio consistia em glicose (20 g/L, Sigma-Aldrich), triptona (10 g/L, Becton Dickinson), extrato de levedura (5 g/L, Becton Dickinson), acetato de sódio (5 g/L, Sigma- Aldrich), monohidrato de lactose (5 g/L, Sigma-Aldrich), bicarbonato de sódio (4 g/L, Sigma-Aldrich), celobiose (2 g/L, Sigma-Aldrich), cloreto de sódio (0,9 g/L, Sigma- Aldrich), sulfato de amônio (0,9 g/L, Sigma-Aldrich), cisteína (0,5 g/L, Sigma-Aldrich), fosfato de potássio dibásico (0,45 g/L, Sigma-Aldrich), sulfato de magnésio (0,09 g/L, Sigma-Aldrich), cloreto de cálcio (0,09 g/L, Sigma-Aldrich), cloreto de hemina (0,01 g/L Sigma-Aldrich), sal sódico de resazurina (0,001 g/L, Alfa Aesar). Este meio foi reduzido em câmara anaeróbica e autoclavado antes do uso. TABELA 1: LISTA DE CEPAS UTILIZADAS NESTE ESTUDO

TABELA 2: COMPOSIÇÃO DE YCFA OTIMIZADO PARA ESTE ESTUDO

PREPARAÇÃO DE SOBRENADANTES BACTERIANOS:

[094] Os sobrenadantes bacterianos foram produzidos como se segue: As cepas foram cultivadas em 2 mL de meio de cultura usual e atmosfera (Tabela 1) a 37 °C. Após 24h de crescimento, as células foram inoculadas a 1% em 10 mL de meio de cultura usual e atmosfera (Tabela 1) a 37 °C. Por fim, essas culturas foram inoculadas a 1% em 50 mL de YCFA, previamente reduzido como descrito acima, a 37 °C durante 24 horas. As culturas foram peletizadas a 7500 g durante 10 min, os sobrenadantes foram filtrados a 0,2 μm e congelados diretamente a -20 graus.

TESTES DE ESTIMULAÇÃO DE FAECALIBACTERIUM PRAUSNITZII DSM 17677 POR BACTÉRIAS DO ÁCIDO LÁCTICO:

[095] Antes da utilização, os sobrenadantes bacterianos foram deixados a reduzir na câmara anaeróbica durante 2 horas. Em seguida, 4 ml de sobrenadantes reduzidos das cepas bacterianas foram adicionados a 50 ml de YCFA. Como controle, adicionaram-se 4 ml de YCFA estéril a 50 ml de YCFA. Subsequentemente, uma cultura de 48 horas de F. praunistzii foi inoculada a 1% no meio YCFA. O crescimento foi monitorizado ao longo de 72 horas. A DO e o pH foram medidos em intervalos regulares durante o crescimento (horas). As amostras foram coletadas e armazenadas para extração de DNA (veja abaixo). Amostras adicionais foram coletadas para outras análises (DNA, análise de SCFA, metabolômica e transcriptômica).

ANÁLISE DE METABOLITOS:

[096] Foram coletados 2 mL de cultura fresca e centrifugados a 10 000 g durante 15 minutos. Os sobrenadantes foram filtrados (0,2 μm) e armazenados a -20 °C até à análise.

[097] Amostras para análise de ácidos graxos de cadeia curta (SCFA - short-chain fatty acid) e ácidos graxos de cadeia ramificada (BCFA - branched chain fatty acids) foram coletadas após 16, 22 e 40 horas. Elas foram medidas quantitativamente. Ácidos graxos de cadeia curta (SCFA) Acetato, propionato, butirato, valerato, caproato e ácidos graxos de cadeia ramificada (BCFA) isobutirato, isovalerato e isocaproato, assim como lactato foram medidos no Prodigest como segue: SCFA foram extraídos das amostras com éter dietílico, após a adição de ácido 2-metilhexanóico como padrão interno. Os extratos foram analisados usando um cromatógrafo a gás GC-2014 (Shimadzu, 'S-Hertogenbosch, Países Baixos), equipado com uma coluna Econo-Cap EC-1000 livre de ácidos graxos capilar (dimensões: 25mm 0,53 mm, espessura de filme 1,2 mM; Alltech, Laarne, Bélgica), um detector de ionização em chama e um injetor split. O volume de injeção foi de 1 mL e o perfil de temperatura foi ajustado de 110 a 160 °C, com um aumento de temperatura de 6 °C/min. O gás transportador foi nitrogênio e a temperatura do injetor e do detector foi de 100 e 220 °C, respectivamente. A produção de SCFA não ramificado e ramificado foi calculada somando as concentrações molares de acetato, propionato, butirato, valerato e caproato, e somando concentrações molares de isobutirato, isovalerato e isocaproato, respectivamente. A produção total de SCFA foi definida como a soma de SCFA não ramificado e ramificado. O lactato foi medido utilizando um kit D- lactato/L-lactato (R-Biopharm, Mannheim, Alemanha), de acordo com os protocolos do fabricante.

RESULTADOS

[098] Os resultados da estimulação do crescimento de F. prausnitzii pelos sobrenadantes das culturas de S. thermophilus e Lactococcus lactis subsp. lactis são mostrados na Figura 1. Pode-se observar que ambos os sobrenadantes produzem um aumento do crescimento de F. prausnitzii após 40 horas e 65 horas de cultura.

[099] Os resultados da estimulação da produção de butirato por crescimento de F. prausnitzii pelos sobrenadantes de cultura de S. thermophilus e Lactococcus lactis subsp. lactis são mostrados na Figura 2. Após 40 horas de incubação, houve um aumento de 15% na produção de butirato na presença de sobrenadante de S. thermophilus e L. lactis lactis em comparação com a cultura única (19,2 mmol/L ± 3,6 mmol/L, 19,0 mmol/L ± 0,8 mmol/L e 16,7 mmol/L ± 1 mmol/L, respectivamente).

Claims

1. COMPOSIÇÃO, caracterizada por compreender uma cepa de Streptococcus thermophilus, depositada no CNCM sob o número de referência I-3862, e uma matéria comestível ou produto alimentar.

2. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por compreender pelo menos 106 unidades formadoras de colônia (UFC), por grama da composição, de Streptococcus thermophilus ou Lactococcus lactis.

3. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por ser um produto lácteo fermentado.

4. USO DE STREPTOCOCCUS THERMOPHILUS OU LACTOCOCCUS LACTIS, ou de uma composição compreendendo o mesmo ou condicionada pelo mesmo, caracterizado por ser para a fabricação de um produto nutracêutico para aumentar ou manter a população de Faecalibacterium prausnitzii.

5. USO, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por Streptococcus thermophilus ser Streptococcus thermophilus CNCM I-3862.

6. USO, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por Lactococcus lactis ser Lactococcus lactis subsp. lactis CNCM I-1631.