BR112016023458B1

BR112016023458B1 - Método para fertilizar ou bioestimular plantas e uso de ao menos um frutooligossacarídeo (fos)

Info

Publication number: BR112016023458B1
Application number: BR112016023458-8A
Authority: BR
Inventors: Javier ERRO GARCES; Oscar Urrutia Sagardia; Maria GARNICA OCHOA; Diane Lemenager; Esther CASANOVA PORTILLO; José Maria Garcia-Mina Freire; Jean-Claude Yvin
Original assignee: Agro Innovation International
Priority date: 2014-04-09
Filing date: 2015-04-08
Publication date: 2022-06-07
Also published as: PL3128840T3; FR3019715B1; ES2933905T3; EP3128840A1; WO2015155476A1; PT3128840T; EP3128840B1; BR112016023458A2; HUE060565T2; FR3019715A1; HRP20221365T1; US20170020132A1; US20190183120A1

Abstract

PRODUTO FERTILIZANTE E BIOESTIMULANTE CONTENDO FRUTOOLIGOSSACARÍDEOS, MÉTODOS DE APLICAÇÃO E USOS A presente invenção se refere ao uso de um frutooligossacarídeo (FOS) que compreende entre 2 e 10 unidades de monossacarídeos, como um elicitador dos mecanismos de absorção de elementos minerais do solo, e dos mecanismos de defesa contra os patógenos. Também se refere a uma composição fertilizante e bioestimulante contendo os frutooligossacarídeos, bem como o uso da mesma em um método de tratamento de plantas cultivadas.

Description

[001] A presente invenção se refere ao uso de frutooligossacarídeos para produzir mecanismos para a absorção de nutrientes inorgânicos e que atuam como agentes na estimulação das defesas das plantas contra os patógenos.

[002] A invenção também se refere aos produtos de fertilização e bioestimulação que contêm tais frutooligossacarídeos, bem como a um método de espalhamento dos frutooligossacarídeos cultivados.

[003] A necessidade de aumentar a eficácia das práticas agrícolas está vinculada às condições econômicas e ambientais.

[004] Uma das estratégias para aumentar a colheita dos frutooligossacarídeos consiste, por exemplo, na produção de fertilizantes mais eficazes com a redução da perda de elementos nutritivos no solo. Por esta razão, têm sido utilizados os inibidores de urease e de nitrificação com a finalidade de reduzir a volatilização da amônia e a lixiviação dos nitratos.

[005] Outra estratégia suplementar consiste no desenvolvimento de moléculas que aumentam a capacidade da planta ao absorver os nutrientes do solo, ou estimular as defesas naturais da planta contra os patógenos. Recentemente, o frutooligossacarídeo que compreende treze unidades de frutose foi descrito como um ativador de crescimento das plantas em diferentes estágios de crescimento (CN 2007/101006777 et J. Phytopathol., 157, pp 201-207, 2009). Este efeito é atribuído à ativação da produção de ácido salicílico e do seu homólogo glicosilado nas folhas das plantas tratadas. O frutooligossacarídeo é obtido pela extração da fase aquosa das raízes de bardana (Arctium lappa) seguida da deprotonação enzimática, da precipitação do etanol e da purificação pela cromatografia.

[006] A invenção se refere aos futooligossacarídeos de peso molecular inferior aos descritos no estado da técnica. De fato, os inventores descobriram que os frutooligossacarídeos produzem uma melhor taxa na absorção de nutrientes pelas raízes das plantas, e, adicionalmente, estimular as defesas naturais delas. Este efeito está relacionado a todos os nutrientes inorgânicos, em particular, nitrogênio, fósforo e cálcio. De fato, os frutooligossacarídeos utilizados no contexto da invenção apresentam uma melhor solubilidade na água do que os frutooligossacarídeos do estado da técnica. Os inventores também observaram que a inulina não pode ser aplicada na forma de um fertilizante em uma solução aquosa, visto que o referido composto não permanece estável na solução de reserva antes de ser aplicado em seu cultivo.

[007] O objetivo da invenção é propiciar uma maior produção de nitrogênio orgânico na planta em resposta às condições de crescimento do cultivo, que se manifesta em seu maior rendimento. A invenção também tem como objetivo aumentar o conteúdo da proteína e do valor nutricional dos produtores da proteína e da forragem. Além disso, o objetivo da invenção é reduzir os riscos de toxicidade oriundos do acúmulo excessivo dos íons de amônio nas folhas ou o acúmulo de nitratos nelas.

[008] Neste sentido, a invenção propõe uma composição fertilizante e/ou bioestimulante que contém frutooligossacarídeos e um processo de tratamento das plantas e dos solos que os utiliza.

[009] No contexto da invenção, a expressão “composição fertilizante” significa qualquer produto com a finalidade de garantir ou aprimorar a nutrição das plantas.

[010] O termo “frutooligossacarídeo” significa um composto que compreende diversas unidades de frutose e, opcionalmente, outra unidade de monossacarídeo.

[011] No contexto da invenção, a expressão “composição bioestimulante” significa qualquer produto com a finalidade de garantir a capacidade das plantas e estimular o metabolismo de suas folhas ou raízes.

[012] De acordo com um primeiro aspecto, a invenção propõe uma composição fertilizante e/ou bioestimulante que contém ao menos um frutooligossacarídeo (FOS) compreendendo entre 2 e 10 unidades de monossacarídeo, cujo frutooligossacarídeo é opcionalmente sulfatado. A composição pode conter o frutooligossacarídeo combinado com um ou mais materiais fertilizantes. O frutooligossacarídeo apresenta, preferivelmente, uma quantidade eficaz na composição para produzir o efeito necessário.

[013] A quantidade de FOS fornecida às plantas deve ser suficiente para estimular a produção de mecanismos na absorção de nutrientes inorgânicos. A quantidade pode variar dependendo da natureza da planta a ser tratada e da forma de tratamento (pelas folhas ou raízes). Especificamente, a quantidade pode ser determinada com base em cada caso na utilização de testes de microarranjo, na definição abaixo.

[014] Os frutooligossacarídeos utilizados no contexto da invenção são polímeros que compreendem ao menos uma unidade de frutose e ao menos uma unidade de C3-C6 monossacarídeo, preferivelmente uma unidade de C6 monossacarídeo, exceto frutose, escolhida, por exemplo, da glucose, manose e xilose.

[015] O frutooligossacarídeo (FOS) utilizado no contexto da invenção compreende entre 2 e 10 unidades de monossacarídeo (incluindo 2 e 10 unidades), as referidas unidades de monossacarídeo compreendem ao menos uma frutose. Preferivelmente, o frutooligossacarídeo (FOS) utilizado no contexto da invenção compreende entre 2 e 9 unidades de monossacarídeo (incluindo 2 e 9), ou entre 2 e 8 unidades de monossacarídeo (incluindo 2 e 8), ou mesmo entre 2 e 7 unidades de monossacarídeo (incluindo 2 e 7), ou mesmo entre 2 e 6 unidades de monossacarídeo (incluindo 2 e 6), por exemplo, entre 2 e 6 unidades de monossacarídeo (incluindo 2 e 6), entre 2 e 5 unidades de monossacarídeo (incluindo 2 e 5), entre 2 e 4 unidades de monossacarídeo (incluindo 2 e 4). O frutooligossacarídeo (FOS) utilizado no contexto da invenção pode ser uma mistura dos frutooligossacarídeos supracitados.

[016] O frutooligossacarídeo (FOS) utilizado no contexto da presente invenção correspondente vantajosamente:

[017] - a fórmula Glucose-(Frutose)n ou Manose-(Frutose)n, também denominada GFn, em que n varia entre 1 e 9, preferencialmente entre 1 e 8, e preferivelmente entre 1 e 3, ou

[018] - a fórmula (Frutose)m, também denominada Fm, em que m varia entre 2 e 10.

[019] São preferidos os compostos da fórmula GFn em que n=1, 2 ou 3. O frutooligossacarídeo (FOS) utilizado no contexto da invenção pode ser uma mistura dos compostos de Glucose-(Frutose)n ou Manose-(Frutose)n em que n varia entre 1 e 3 (1 e 3 sendo incluídos).

[020] Os frutooligossacarídeos podem ser escolhidos do grupo que consiste dos compostos de nistose (GF3), questose (GF2), frutosilnistose (GF4), bifurcose (GF3), em que G=glucose, inulobiose (F2), inulotriose (F3) e inulotetraose (F4).

[021] Os FOSs podem ser obtidos das espécies supracitadas por um método que compreende as etapas de lavagem, moagem, extração, (separação sólido-líquido) e, opcionalmente, fracionamento e concentração.

[022] Os FOSs também podem ser obtidos pela hidrolise de ácidos ou enzimas, a partir dos extratos supracitados.

[023] De acordo com uma modalidade da invenção, os frutooligossacarídeos são obtidos pela hidrólise da inulina ou dos oligossacarídeos obtidos da inulina. A hidrólise pode ser executada por meios enzimáticos, químicos ou microbióticos (por exemplo, pela Bifidobacterium).

[024] De acordo com uma modalidade específica da invenção, os frutooligossacarídeos são obtidos pela hidrólise enzimática da inulina.

[025] A inulina é um polissacarídeo que consiste em unidades de D- frutose unidas por ligações de β(2,1) e em um grupo com terminação D- glucose unido por uma ligação de a(1,2). O grau de polimerização da inulina é, geralmente, da ordem de 40 a 60 unidades de monossacarídeo.

[026] A inulina pode ser extraída das raízes de várias plantas, particularmente da alcachofra de Jerusalém e da chicória.

[027] O extrato da planta que contém FOSs obtidos de acordo com um dos métodos supradescritos pode ser mais ou menos concentrado, dependendo do uso pretendido. A desidratação total do extrato confere a ele uma forma pulverulenta e solúvel em água. A desidratação pode ser obtida pelo tambor de secagem ou secagem por spray.

[028] Alternativamente, os frutooligossacarídeos podem ser obtidos pela síntese química.

[029] De acordo com uma variante, os frutooligossacarídeos podem ser obtidos pela transfrutosilação da sucrose, por exemplo, pela ação da transfrutosilação de Aspergillus niger β-fructosidase na sucrose.

[030] Os frutooligossacarídeos, por exemplo, podem ser sulfatados pela reação de um FOS supradescrito com ácido sulfúrico na presença da piridina.

[031] Os FOSs supradescritos podem ser utilizados sozinhos ou misturados com fertilizantes inorgânicos no preparo do produto fertilizante e/ou bioestimulante da invenção.

[032] É sabido que os fertilizantes são conhecidos como materiais de fertilização, cuja função principal é fornecer às plantas elementos diretamente úteis para sua nutrição (elementos de fertilização principais, elementos de fertilização secundários e elementos vestigiais).

[033] Para este fim, os fertilizantes de raízes ou folhas utilizam, geralmente, fontes de nitrogênio, fósforo e potássio, bem como elementos vestigiais e aminoácidos.

[034] As plantas absorvem, principalmente, nitrogênio, que é um elemento de nutrição essencial ao seu crescimento. O nitrogênio é fornecido na forma de nitrato ou amônio, cujo uso em grandes quantidades é problemático do ponto de vista ecológico.

[035] Na invenção, o produto fertilizante e/ou bioestimulante dos FOSs pode ser utilizado como um suplemento nas composições fertilizantes convencionais, como os próprios fertilizantes, para ativar a absorção de nitrogênio inorgânico e sua assimilação na forma de proteínas.

[036] Além disso, o produto fertilizante e/ou bioestimulante pode conter um ou mais materiais fertilizantes escolhidos de ureia, amônio, nitrato de amônio, fosfato natural, cloreto de potássio, sulfato de amônio, nitrato de magnésio, nitrato de manganês, nitrato de zinco, nitrato de cobre, ácido fosfórico e ácido bórico.

[037] O produto da invenção pode conter agentes bioestimulantes escolhidos de ácidos húmicos, extratos de algas marinhas, aminoácidos, hormônios de plantas ou sua mistura.

[038] O frutooligossacarídeo (FOS) representa, por exemplo, entre 0,1 e 10% por peso, por exemplo, 1% por peso, do peso da composição.

[039] Ao ser formulado na forma líquida, o produto da invenção contém, por exemplo, entre 0,1 e 5% por peso de FOS. Quando formulado na forma sólida, o produto contém, por exemplo, entre 1 e 10% por peso de FOS.

[040] O produto da invenção pode ser na forma de um produto escolhido de agentes enriquecedores de calcário, agentes enriquecedores orgânicos e reforços de cultivo, fertilizantes de raízes do tipo NP, PK, NPK, fertilizantes de folhas ou mesmo soluções nutritivas para as raízes.

[041] Outro objetivo da invenção é propor um método para fertilizar plantas aprimorando sua absorção de nutrientes inorgânicos, que compreende a aplicação nas referidas plantas ou sólidos de uma quantidade eficaz de frutooligossacarídeo (FOS) compreendendo entre 2 e 10 unidades de monossacarídeo na composição já descrita.

[042] A invenção também propõe um método referente à bioestimulação das plantas que compreende a aplicação, nas referias plantas ou solos, de uma quantidade eficaz de frutooligossacarídeo (FOS) entre 2 e 10 unidades de monossacarídeo do produto supracitado.

[043] De acordo com outro aspecto, o pedido de patente da invenção visa proteger um método de tratamento de plantas ou solos para ativar reações que produzem mecanismos na absorção de nutrientes inorgânicos, caracterizado por compreender a aplicação, nas referidas plantas ou solos, de uma quantidade eficaz de FOS.

[044] Em um dos três métodos acima, o produto da invenção ou o FOS pode ser aplicado nas plantas pelas folhas ou raízes.

[045] Geralmente, a quantidade de FOS fornecida às plantas é entre 0,1 g e 100 g por litro, e, preferencialmente, da ordem de 1 g por litro, quando na forma líquida, pelas folhas ou em soluções nutritivas nas raízes (hidroponicamente ou gota a gota).

[046] A quantidade de FOS fornecida às plantas é, por exemplo, entre 10 e 1000 g/ha, preferivelmente da ordem de 200 g/ha, quando em estado sólido, por exemplo, em fertilizantes pulverulentos ou granulados.

[047] O produto da invenção pode ser utilizado em um dos métodos que compõem os objetos da invenção, nas doses recomendas abaixo:

[048] - Aplicação nas folhas: entre 0,5 e 5 kg/ha em um grau de diluição entre 0,1-0,5%,

[049] - Aplicação nas raízes - aplicação no solo: 10-50 kg/ha,

[050] - Aplicação nas raízes - fertirrigação: 10-20 kg/ha por irrigação gota a gota em um grau de diluição entre 0,1-0,5%.

[051] Além disso, a invenção pode ser utilizada no tratamento de inúmeras variedades de plantas. Entre elas, são citadas especificamente as seguintes:

[052] - plantas cultivadas em larga escala, como cereais (trigo, milho),

[053] - plantas produtoras de proteína (ervilha),

[054] - plantas produtoras de óleo (soja, girassol),

[055] - pastagens utilizadas na alimentação de animais,

[056] - culturas especializadas, como, especificamente, de horticultura (alface, espinafre, tomate, melão), videiras, cultivo de árvores (pereiras, macieiras, nectarineiras) ou horticultura (roseiras).

[057] Na invenção, o termo “planta” significa a planta considerada por inteiro, incluindo seu sistema de raiz, sistema vegetativo, grãos, sementes e frutos.

[058] De acordo com mais um aspecto, a invenção propõe abranger o uso de FOSs, compreendendo entre 2 e 10 unidades de monossacarídeos, para produzir mecanismos de absorção de nutrientes inorgânicos nas plantas, além de atuar como agentes na estimulação das defesas naturais das plantas. Os nutrientes inorgânicos são, especificamente, nitrogênio, fósforo e cálcio.

[059] A presente invenção é ilustrada pelas figuras e os exemplos não limitantes. Nos exemplos, salvo indicado em contrário, as porcentagens são expressas por peso e a temperatura é a temperatura ambiente.

Descrição das figuras

[060] Figura 1 representa a concentração de ácido salicílico (expressa como pmol/gPF) nos caules das plantas jovens de tabaco que apresentam uma solução nutritiva contendo um frutooligossacarídeo de acordo com a invenção (FOS) ou a mesma solução nutritiva sem FOS (C).

[061] Figura 2 representa a concentração de ácido jasmônico (expressa como pmol/gPF) nos caules das plantas jovens de tabaco que apresentam uma solução nutritiva contendo um frutooligossacarídeo de acordo com a invenção (FOS) ou a mesma solução nutritiva sem FOS (C).

[062] Figura 3 representa a concentração de ácido salicílico (expressa como pmol/gPF) nos caules das plantas que apresentam uma solução nutritiva contendo um frutooligossacarídeo não de acordo com a invenção (FOS comparativo) ou a mesma solução nutritiva sem FOS (Controle).

[063] Figura 4 representa a concentração de ácido jasmônico (expressa como pmol/gPF) nos caules das plantas que apresentam uma solução nutritiva contendo um frutooligossacarídeo não de acordo com a invenção (FOS comparativo) ou a mesma solução nutritiva sem FOS (Controle).

Exemplo 1: Fertilizante de sólido granulado NPK contendo um frutooligossacarídeo

[064] 10 kg de frutooligossacarídeos, vendidos com a marca Profeed® L95, foram misturados com 250 kg de sulfato de amônio, 50 kg de ureia, 300 kg de superfosfato e 300 kg de cloreto de potássio em um cilindro de granulação na presença de 125 l de água em 45°C. Todas as matérias-primas, incluindo os frutooligossacarídeos, foram trituradas anteriormente.

[065] Os grânulos foram secos em um secador de tambor em 90°C por 15 min.

Exemplo 2: Fertilizante líquido e solúvel em água NPK contendo um frutooligossacarídeo

[066] 100 l de água foram misturados com 10 kg de frutooligossacarídeo, fabricado e vendido com a marca Profeed® L95. A mistura foi agitada de forma contínua por 2-6 horas. A temperatura ficou, preferivelmente, entre 25-70°C.

[067] O líquido que contém o frutooligossacarídeo foi misturado com 10 kg de ureia e 25 kg de fosfato de monopotássio. A mistura foi agitada de forma contínua em 25°C por 24 h., e o produto final foi filtrado.

Exemplo 3: Efeito de um frutooligossacarídeo na taxa de absorção de elementos nutritivos com plantas jovens de alface Metodologia:

[068] Os testes foram realizados em plantas jovens de alface com 15 dias de vida (Lactuca sativa) cultivadas hidroponicamente. Os testes foram efetuados em uma estufa com temperaturas de 22°C/16°C dia/noite, 60% de umidade e em um fotoperíodo de 10 horas.

[069] As mudas de alface (oriundas de um viveiro) foram lavadas para remover o composto ao redor da raiz e crescidas hidroponicamente em água por dois dias, para remover os elementos nutritivos oriundos do pré-cultivo.

[070] A taxa de absorção dos minerais foi comparada e condicionada à existência ou não (controle) de FOS (tratamento) contido na solução nutritiva.

[071] 9 plantas jovens de alface (cada uma dos três lotes compreendendo três plantas jovens) foram transferidas para uma solução fresca e nutritiva contendo 100 mg.l-1 de um frutooligossacarídeo vendido pela Beghin Meiji, com a referência Profeed® L95.

[072] 9 plantas jovens de alface (cada uma dos três lotes compreendendo três plantas jovens) foram transferidas para a mesma solução fresca e nutritiva não contendo FOS (controle).

[073] Conteúdo da solução nutritiva: 2 mM de NO3-, 2 mM de PO42-, 4 mM de K+, 1 mM de Ca2+, 2 mM de Mg2+, 100 μM de Fe, 14 μM de B, 16 μM de Mn, 4 μM de Mo e 0,8 μM de Cu. O pH da solução foi ajustado para 6 com KOH.

[074] A quantidade dos elementos inorgânicos absorvidos foi calculada ao ser monitorada a redução dos elementos na solução nutritiva por um período de 30 horas. As medições do nitrato foram executadas pela cromatografia iônica (Dionex 120) e as medições dos outros elementos (P, Ca, Mg, K, Fe) pelo ICP ótico (IRIS Intrepid II xdl, Thermo-Electron).

[075] As plantas foram então colhidas. A raiz e a parte aérea foram separadas, pesadas e secadas em um forno de exaustão forçada em 45°C, por 48 h., para determinar seu peso seco. Resultados:

[076] Os resultados foram analisados estatisticamente (ANOVA) com a utilização do programa STATISTICA 6.0, tornando P<0,05 significativo.

[077] Os graus de absorção na raiz do nitrato, fosfato e cálcio nos alfaces são apresentados na tabela abaixo. Os resultados são expressos como % em relação ao controle (100%).

Exemplo 4: Comparação entre o efeito de um frutooligossacarídeo de acordo com a invenção e um frutooligossacarídeo não de acordo com a invenção

[078] Na bioestimulação, o impacto do frutooligossacarídeo de acordo com a invenção e o impacto do frutooligossacarídeo não de acordo com a invenção foram comparados na medição do conteúdo de ácido jasmônico (hormônio da planta) nos caules das plantas jovens de tabaco.

[079] O processo acima ocorre em razão da trajetória metabólica do ácido jasmônico (JA) atuar na resistência a insetos e doenças. O aumento do conteúdo de ácido jasmônico nos tecidos é um bom indicador do aumento do potencial das plantas jovens na resistência aos agentes patogênicos.

[080] O efeito de um frutooligossacarídeo (FOS) que compreende entre 2 e 10 unidades de monossacarídeo (vendidas como Profeed® L95) foi comparado ao efeito de um FOS comparativo (vendido como Probiofeed®, contendo 95% de inulina e 5% de monossacarídeos).

Crescimento das Plantas

[081] As plantas jovens de tabaco germinaram em uma mistura de turfa/areia (proporção de 1/1) e foram transplantadas em um estágio de cinco folhas para um pote de um litro em uma estufa. As plantas foram tratadas com a aplicação radicular de uma solução aquosa de FOS a 0,3%, uma solução aquosa de inulina e chicória a 0,3% (Sigma I2255), ou a mesma solução aquosa não contendo FOS ou inulina. O experimento foi realizado com cinco plantas em cada tratamento aplicado.

[082] Outros oligossacarídeos, como betamune (B), bio- mananoligossacarídeos (MS), mananoligossaarídeo (M), foram testados em solução aquosa (10 min., em 100°C) (B20, MS20, M20) ou em solução ácida (0,1N HCl, 10 min., em 100°C, cujo pH foi neutralizado antes da aplicação nas plantas) (BCl, MSCl, MCl). Análises

[083] As plantas colhidas, após a aplicação do tratamento, foram congeladas e moídas com nitrogênio líquido para a realização da análise quantitativa do ácido jasmônico e ácido salicílico que elas contêm, de acordo com o protocolo a seguir. Reagentes e Materiais

[084] Os padrões do ácido jasmônico (JAS) e do ácido salicílico (SAL) foram fornecidos pela Sigma-Aldrich (St Louis, USA). O ácido dihidrojasmônico (DHJAS), utilizado como um padrão interno do ácido jasmônico, foi fornecido pela OlChemin Ltd (Olomouc, República Checa), e o ácido salicílico 2H4- (D-SAL), utilizado como um padrão interno do ácido salicílico, foi fornecido pela Sigma-Aldrich (St Louis, EUA).

[085] As agitações foram executadas no sistema Multi Reax da Heidolph Instruments (Schwabach, Alemanha) e as centrifugações na centrífuga Centrikon T-124 da Kontron Instruments (Zurique, Suíça). As evaporações foram realizadas no evaporador de vórtice, modelo 432-2100, da Labconco Corporation (Kansas City, MO, EUA).

Método de Extração

[086] 0,25 gramas do tecido de uma planta (peso fresco) foram pesados, sendo neles acrescentados 100 μl de uma solução de D-SAL e DHJAS (1.000 ng/ml, em metanol) e 2 ml de MeOH/H2O/HCOOH (90/9/1 por volume) contendo 2,5 mM de dietilditiocarbamato de sódio com -20°C. Todos os ingredientes foram agitados por 60 minutos em velocidade máxima, 2.000 min.-1, e a centrifugação foi realizada em 11.000 min.-1, por 10 minutos, em 20°C. 0,5 ml de sobrenadante foram introduzidos em um tubo de teste já contendo 0,5 ml de 0,4% de ácido acético, agitados e centrifugados em 12.000 min.-1 por 10 minutos. Uma porção do sobrenadante é derramada em um frasco de cromatografia, pelo qual ela é injetada no sistema LC/MS/MS. Método Cromatográfico

[087] O cromatógrafo da Waters AllianceHT (Milford, MA, EUA) foi utilizado, implantado com um módulo de separação 2795 XE, um módulo de coluna ALLCOLHTR com regulagem de temperatura e uma coluna cromatográfica de 4 μm da Hydro-RP Synergi (15 x 0,2 cm) (Phenomenex, Torrance, CA, EUA). O gradiente e as condições aplicadas são os seguintes:

[088] Volume da injeção: 40 μl.

[089] Temperatura da amostra: 20°C.

[090] Temperatura da coluna: 30°C.

Método da Espectrometria de Massa

[091] Foi utilizado um detector de espectrometria de massa 3200 Q TRAP LC/MS/MS System (Applied Biosystems/MDS Sciex, Ontário, Canadá), equipado com uma interface Turbo Ion Spray (ionização por eletrospray) operando em modo negativo.

[092] Parâmetros da fonte:

[093] CUR (taxa de fluxo da cortina de gás): 22,00 psi.

[094] IS (voltagem da ionização por eletrospray): -4000 V.

[095] TEM: 550°C.

[096] GS1 (taxa de fluxo do gás de nebulização): 45,00 psi.

[097] GS2 (taxa de fluxo do gás de reaquecimento): 55,00 psi.

[098] Parâmetros do analisador da massa:

[099] Modo do scan: MRM (monitoramento de reações múltiplas).

[0100] Resolução de Q1: baixa.

[0101] Resolução de Q3: 1.

[0102] Gás de CAD (dissociação ativada por colisão): médio.

[0103] CXP (potencial de saída da célula de colisão): -4,00 V.

[0104] Parâmetros do detector:

[0105] CEM (multiplicador de elétron multicanal): -2800,0 V.

[0106] Os dados obtidos são processados pelo software Analyst 1.4.2, da Applied Biosystems. Resultados

[0107] Os resultados são apresentados na tabela abaixo

[0108] amu = unidade de massa atômica

[0109] Ácido jasmônico (JAS)

[0110] Ácido salicílico (SAL)

[0111] Ácido dihidrojasmônico (DHJAS)

[0112] 2H4-Ácido salicílico (D-SAL)

[0113] O rendimento total, incluindo o efeito da matriz, foi calculado de duas formas. Primeiro, as plantas foram dopadas com concentrações de hormônios diferentes, e a subtração da planta não dopada foi comparada com os padrões inseridos entre as amostras como controles. Nas tabelas indicadas, a dopagem foi executada com concentrações diferentes que dependiam do hormônio em questão, levando em conta as diferenças de sensibilidade entre elas e as diferenças de concentração observadas na planta utilizada, por exemplo, pepino. O rendimento obtido também foi calculado pelo padrão internacional, em razão do cociente entre a média das áreas de cada padrão internacional nas amostras a serem examinadas e nos padrões inseridos entre as amostras como controles. Os resultados são os seguintes: Rendimento total nas folhas:

Rendimento total nas raízes:

[0114] Os valores do limite de detecção (LOD) e do limite de quantificação (LOQ) foram calculados considerando 10 vezes o nível médio do extrato das plantas, em ng/g da planta. Os resultados são os seguintes: Limite de detecção (LOD) e limite de quantificação (LOQ):

Conclusão

[0115] Os resultados são apresentados nas figuras 1 a 4. Observa-se que a inulina - que compreende mais de 10 unidades de monossacarídeo - não induz o aumento da concentração de ácido jasmônico.

[0116] Em contrapartida, de acordo com a invenção, o frutooligossacarídeo compreende entre 2 a 10 unidades de monossacarídeo induzindo uma concentração de hormônio 4 a 8 vezes maior, dependendo dos tecidos.

Claims

1. Uso de ao menos um frutooligossacarídeo (FOS), caracterizado por compreender entre 2 e 10 unidades de monossacarídeos para obter mecanismos de absorção dos nutrientes inorgânicos em plantas e como um agente para estimular as defesas naturais das plantas.

2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o pelo menos um FOS ser uma mistura de Glicose- (Frutose) n ou uma mistura de Manose- (Frutose) n em que n varia de 1 a 3.

3. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o pelo menos um FOS corresponder à fórmula Glicose- (Frutose) n ou Manose- (Frutose) n, também denominado GFn, em que n varia de 1 a 9, ou até a fórmula (Frutose) m, também denotada Fm, na qual m varia de 2 a 10.

4. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o pelo menos um FOS ser derivado da hidrólise enzimática da inulina.

5. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o pelo menos um FOS ser escolhido do grupo que consiste nos compostos nistose (GF3), cestose (GF2), frutosilnystose (GF4), bifurcose (GF3), inulobiose (F2) , inulotriose (F3) e inulotetraose (F4).

6. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o pelo menos um FOS ser sulfatado.

7. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o pelo menos um FOS ser aplicado às plantas através das folhas ou através das raízes.

8. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o pelo menos um FOS ser utilizado em uma quantidade: - de 0,1 a 100 g por litro, e de preferência da ordem de 1 g por litro, quando fornecido na forma líquida pelas folhas ou em soluções nutritivas para as raízes, - de 10 a 1000 ge de preferência na ordem dos 200 g por hectare, quando fornecidos na forma sólida, por exemplo, fertilizantes pulverulentos ou granulados.