BR112016000481B1

BR112016000481B1 - Composição compreendendo um composto anti-inflamatório e um composto que tem como alvo uma célula bacteriana, kit de partes e usos dos mesmos

Info

Publication number: BR112016000481B1
Application number: BR112016000481-7A
Authority: BR
Inventors: Mark Leonard Offerhaus; Fritz Eichenseher
Original assignee: Micreos Human Health B.V.
Priority date: 2013-07-11
Filing date: 2014-07-10
Publication date: 2023-09-12

Abstract

TRATAMENTO COMBINADO PARA A DERMATITE ATÓPICA. A invenção refere-se ao campo da medicina, especificamente ao campo de tratamento da dermatite ou eczema, ainda mais especificamente ao campo do tratamento da dermatite atópica. A in-venção refere-se a uma nova composição e um novo kit de partes, ambos compreendendo um composto anti-inflamatório e um composto visando especificamente uma célula bacteriana, de preferência uma célula bacteriana gram positiva. A invenção refere-se ainda à referida composição e/ou o kit de componentes para uso médico, preferivelmente para o tratamento de um indivíduo que sofre de eczema.

Description

Campo da invenção

[001] A invenção refere-se ao campo da medicina, especificamente para o campo de tratamento da dermatite ou eczema, ainda mais especificamente ao campo do tratamento da dermatite atópica. A invenção refere-se a uma nova composição e um novo kit de partes, ambos compreendendo um composto anti-inflamatório e um composto especificamente que tem uma célula bacteriana como alvo, de preferência uma célula bacteriana gram positiva. A invenção refere-se ainda a referida composição e/ou o kit de componentes para utilização médica, preferivelmente para o tratamento de um indivíduo que sofre de eczema.

Antecedentes da invenção

[002] Eczema é uma condição comum da pele caraterizada por bolhas vermelhas, coceira na pele e pequenas, também conhecidas na técnica como erupções cutâneas ou exantema ou dermatite. Não há cura para o eczema, mas existem muitos tratamentos, que vão desde dietas especiais a emolientes e pomadas imunossupressoras, como, por exemplo, pomada de corticosteroide. Embora os corticosteroides, tais como hidrocortisona ou o propionato de clobetasol (administração tópica, oral ou intradérmica) geralmente introduzam melhorias, eles também podem ter efeitos colaterais. A utilização prolongada de corticosteroides tópicos é pensada para aumentar o risco de efeitos secundários, dentre os mais comum está a pele tornando-se frágil e fina (atrofia). Devido a isto, se forem utilizados na face ou outra pele delicada, um esteroide de baixa força deve ser utilizado ou aplicado menos frequentemente. Além disso, os esteroides de alta resistência usados em grandes áreas, ou sob oclusão, podem ser absorvidos pelo corpo, causando a supressão do eixo hipotálamo-pituitária-adrenal (supressão do eixo HPA).

[003] Devido à barreira da pele comprometida em dermatite atópica um aumento de infecções de pele com bactérias tais como Staphylococcus aureus ou fungos pode ser o resultado. Para casos mais graves, os dermatologistas também podem prescrever antibióticos convencionais tópicos ou orais, como a penicilina, estreptomicina e cloranfenicol. Os antibióticos previnem a infecção, que pode resultar da barreira da pele comprometida, tal como pele rachada. A colonização ou infecção por S. aureusé a causa mais comum de aumento da gravidade do eczema. A eficácia dos tratamentos com antibióticos varia de pessoa para pessoa. As desvantagens bem conhecidas de antibióticos convencionais são uma especificidade, ou seja, bactérias também não patogênicas e/ou benéficas são mortas, e o risco de desenvolvimento de resistência, não só pelas células bacterianas alvos, mas possivelmente também por outras bactérias patogênicas. Além disso, o tratamento antibiótico convencional, sistêmico pode interagir com outros medicamentos, incluindo pílulas anticoncepcionais. Certos antibióticos não podem ser combinados com a utilização de álcool. Por conseguinte, existe uma necessidade para a melhoria do tratamento de eczema.

Descrição da invenção

[004] Em um primeiro aspecto, a presente invenção proporciona uma nova composição que compreende um primeiro e um segundo composto, em que o referido primeiro composto é um composto anti-inflamatório, e o referido segundo composto é um composto que tem especificamente uma célula bacteriana como alvo, de preferência uma célula bacteriana gram positiva. Preferencialmente, a referida célula bacteriana gram positiva é uma Staphylococcus, mais preferencialmente uma Staphylococcus aureus. De preferência, a referida composição é de preferência um medicamento para utilização no tratamento de eczema, mais preferencialmente para utilização no tratamento de dermatite atópica, tal como aqui descrito mais detalhadamente. O estado da técnica para o tratamento de eczema está usando agentes imunossupressores como corticoides e se indicado antibióticos tópico ou sistêmico. A presente invenção proporciona uma nova composição que compreende tanto um composto anti-inflamatório e um composto que tem especificamente uma célula bacteriana como alvo, de preferência uma célula bacteriana gram positiva, de um modo preferido uma de Staphylococcus aureus, que combate a maioria, se não todas, as desvantagens do uso de qualquer um regime de dosagem eficaz de um corticosteroide e/ou um antibiótico convencional sozinho ou em combinação, e proporciona uma sinergia inesperada. Em comparação com a utilização de um agente imunossupressor por si só como um só corticosteroide, uma composição da presente invenção diminui o risco e/ou é mais eficaz através do combate às infecções induzidas por corticosteroides e/ou relacionadas com eczema induzidas por uma célula bacteriana, tal como uma célula bacteriana gram positiva, preferivelmente Staphylococcus aureus.Além disso, em comparação com o uso de corticosteroides sozinho, uma composição de acordo com a invenção pode ser tão eficaz como a utilização de um corticosteroide sozinho ao fazer uso de uma dose mais baixa e/ou um regime de administração mais curto, resultando em um tempo de exposição mais curto do corticosteroide, reduzindo, assim, possíveis efeitos colaterais, como o risco de atrofia da pele, supressão do eixo hipotálamo- pituitária-adrenal (supressão do eixo HPA) e/ou infecção de pele (aumentada).

[005] Em comparação com o uso de corticosteroides, em combinação com os antibióticos convencionais e/ou antibióticos convencionais por si só, a composição da presente invenção visa seletivamente especificamente uma célula bacteriana, de preferência uma célula bacteriana gram-positivas, de um modo preferido uma de Staphylococcus, mais preferencialmente uma de Staphylococcus aureus, sem afetar a microflora comensal circundante e/ou benéfica. Além disso, o risco de desenvolvimento de resistência a antibióticos é diminuído ou pelo menos reduzido, uma vez menores quantidades de antibióticos ou mesmo nenhum antibiótico são utilizados.

[006] Um agente que tem como alvo especificamente uma célula bacteriana gram positiva de preferência é um agente que mostra, pelo menos, 2, 5, 10, 50 ou 100 vezes atividade lítica superior para uma célula bacteriana gram positiva, em comparação com uma célula bacteriana gram negativa. De um modo preferido, um agente que tem como alvo especificamente uma célula bacteriana gram-positiva é um agente que não afeta uma célula bacteriana gram-negativa, numa concentração que é afetiva na lise de uma célula bacteriana gram positiva. Um agente que tem como alvo especificamente uma célula bacteriana de Staphylococcus preferencialmente é um agente que mostra, pelo menos, 2, 5, 10, 50 ou 100 vezes atividade lítica superior para uma célula bacteriana de Staphylococcus, em comparação com uma célula bacteriana não Staphylococcus. De um modo preferido, um agente que tem como alvo especificamente uma célula bacteriana de Staphylococcusé um agente que não afeta uma célula bacteriana não Staphylococcus em uma concentração que é eficaz na lise de uma célula bacteriana de Staphylococcus. Um agente que tem como alvo especificamente uma célula bacteriana de Staphylococcus aureusé de preferência um agente que mostra, pelo menos, 2, 5, 10, 50 ou 100 vezes atividade lítica superior para uma célula bacteriana de Staphylococcus aureus, em comparação com uma célula bacteriana não Staphylococcus aureus. De um modo preferido, um agente que tem como alvo especificamente uma célula bacteriana de Staphylococcus aureusé um agente que não afeta uma célula bacteriana não Staphylococcus aureus em uma concentração que é eficaz na lise de uma célula bacteriana de Staphylococcus aureus. Atividade lítica é preferivelmente avaliada, tal como aqui exemplificado.

[007] De preferência, a invenção proporciona uma composição que compreende um primeiro e um segundo composto, em que o referido primeiro composto é um composto anti-inflamatório e o referido segundo composto é um composto que tem como alvo especificamente uma célula bacteriana, de preferência uma célula bacteriana gram positiva, e em que o referido segundo composto compreende pelo menos um domínio de ligação a parede de célula que se liga especificamente a parede celular de peptidoglicano da referida célula bacteriana, de um modo preferido célula bacteriana gram positiva. Um domínio de ligação à parede celular da presente invenção é definido como um elemento, de preferência um polipeptídeo no interior do referido segundo composto que dirige o referido segundo composto para a parede bacteriana de uma célula bacteriana.

[008] Um domínio de ligação englobados dentro da parede celular da presente invenção pode ser qualquer domínio de ligação da parede celular conhecido pelo técnico especialista no assunto. De um modo preferido, um domínio de ligação da parede celular da presente invenção é um elemento, de preferência um polipeptídeo no interior do referido segundo composto, que dirige o referido segundo composto para a parede celular de peptidoglicano de uma célula bacteriana gram-positiva, de preferência na parede celular de peptidoglicano da célula bacteriana de Staphylococcus, mais preferencialmente o peptidoglicano da parede celular de uma célula bacteriana de Staphylococcus aureus.

[009] De preferência, a invenção proporciona uma composição que compreende um primeiro e um segundo composto, em que o referido primeiro composto é um composto anti-inflamatório e o referido segundo composto é um composto que tem como alvo especificamente uma célula bacteriana, de preferência uma célula bacteriana gram positiva, e em que o referido segundo composto compreende pelo menos um domínio de ligação da parede de célula que liga especificamente a parede celular de peptidoglicano de Staphylococcus, mais preferencialmente, um Staphylococcus aureus.

[010] A ligação de um domínio para a parede celular de peptidoglicano de gênero Staphylococcus pode ser avaliada utilizando ensaios bem conhecidos pelo técnico especialista no assunto. Em uma modalidade preferida, uma técnica de imuno-histoquímica e/ou uma técnica de fusão de genes resultando em construções marcadas são usadas para avaliar a ligação específica de compostos tais como peptídeos, polipeptídeos, proteínas ou bacteriófagos para a parede celular de peptidoglicano de gênero de Staphylococcus. Os métodos de quantificação de sinais utilizados nas técnicas de imuno-histoquímica ou de fusão acima mencionadas são bem conhecidos na técnica.

[011] Em uma modalidade, a ligação para a parede celular de peptidoglicano de Staphylococcusé quantificada utilizando uma construção de fusão fluorescente que compreende um domínio da parede celular de interesse. Tal ensaio de células de parede de ligação é descrito em detalhes por Loessner et al (Molecular Microbiology 2002, 44(2): 335-349). Neste ensaio uma solução compreendendo a referida construção de fusão fluorescente ou um controle negativo, preferencialmente Proteína Verde Fluorescente (GFP), é submetida a células de Staphylococcus, de preferência células de S.aureus, mais preferivelmente S. aureus BB255 por um período de tempo indicado após o que as células são sedimentadas por centrifugação, juntamente com as construções de fusão fluorescentes limites. O sinal de fluorescência das células de Staphylococcus expostas a uma construção de fusão fluorescente subtraída do sinal de fluorescência das células de Staphylococcus expostas a um controle negativo, preferencialmente GFP, é uma medida para a ligação celular como significado nesta descrição. De um modo preferido, dentro do contexto da invenção, um domínio é dito para se ligar a parede celular de peptidoglicano de gênero Staphylococcus quando utilizando este ensaio seja detectado um aumento em sinal de fluorescência das células sedimentadas acima do controle negativo, tal como aqui definido. De preferência, a invenção refere-se a um domínio de ligação da parede celular que exibe ligação como aqui definido, de pelo menos 50, 60, 70, 80, 90 ou 100, 150 ou 200% de peptidoglicano da parede celular de ligação de endolisina F2638a de bacteriófago de S. aureus (endolisina Ply2638 definida por SEQ ID NO: 2) preferencialmente codificada pela SEQ ID NO: 1. De um modo preferido, uma construção de fusão, tal como representada pela SEQ ID NO: 95 e codificada pela SEQ ID NO: 96 serve como um controle positivo neste ensaio. Uma visão geral de todas as sequências incluídas e a sua SEQ ID NO é dada na tabela 2.

[012] De preferência, a invenção proporciona uma composição que compreende um primeiro e um segundo composto, em que o referido primeiro composto é um composto anti-inflamatório e o referido segundo composto é um composto que tem como alvo especificamente uma célula bacteriana, de preferência uma célula bacteriana gram positiva, e em que o referido segundo composto compreende pelo menos um domínio de ligação à parede celular que se origina a partir de ou é um homólogo de uma endolisina de fago de Staphylococcus, de preferência a referida endolisina de fago de Staphylococcusé selecionada de entre, mas não se limitando a, endolisina de bacteriófago F2638a de S. aureus, endolisina de bacteriófago F11 de S. aureus, endolisina de bacteriófago FTwort de S. aureus, JCSC1435 de S. haemolyticus, endolisina de fago K de S. aureus, endolisina de fago WMY de S. warneri, endolisina de fago NM3 de S. aureus, e endolisina de S. aureus 80alpha.

[013] Também preferido é um domínio de ligação da parede celular com origem ou um homólogo de lisostafina de S. simulans (representado por SEQ ID NO: 76, de preferência, codificado pela SEQ ID NO: 75). Um homólogo conhecido de lisostafina de S. simulans tendo propriedades de ligação da parede celular é a enzima S. capitis ALE-1.

[014] Preferencialmente, o referido domínio de ligação de parede celular tem pelo menos 80% de identidade com qualquer uma das SEQ ID NO: 4, 6 ou 8, e/ou em que o referido um ou mais domínios ativos enzimáticos possuem pelo menos 80% de identidade com qualquer uma das SEQ ID NO: 10, 12, 14, 16, 18, 98 ou 100. Um domínio de ligação da parede celular preferido da presente invenção é um domínio de ligação da parede celular que tem pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com o domínio de ligação da parede celular de lisostafina de S. simulans aqui definido pela SEQ ID NO: 4 e, de preferência codificado pela SEQ ID NO: 3. Também preferido é um domínio de ligação da parede celular isolado a partir de uma endolisina de bacteriófago de Staphylococcus nativa. Também preferido é um domínio de ligação da parede celular da presente invenção que tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com o domínio de ligação da parede celular de endolisina F2638a de bacteriófago de Staphylococcus aqui definido pela SEQ ID NO: 6 e de preferência codificado pela SEQ ID NO: 5. Também preferido é um domínio de ligação da parede celular isolado a partir de uma endolisina phiNM3 de fago de Staphylococcus aureus nativa. De um modo preferido, um domínio de ligação da parede celular da presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com o domínio de ligação da parede celular de endolisina phiNM3 de fago de S. aureus aqui definido por SEQ ID NO: 8 e de preferência codificado pela SEQ ID NO: 7.

[015] De preferência, a invenção proporciona uma composição que compreende um primeiro e um segundo composto, em que o referido primeiro composto é um composto anti-inflamatório e o referido segundo composto é um composto que tem como alvo especificamente uma célula bacteriana, de preferência uma célula bacteriana gram positiva, em que o referido segundo composto compreende um ou mais domínios ativos enzimáticos exibindo especificidade de ligação alvo. “Um domínio ativo enzimático” é aqui definido é um domínio que tem atividade lítica, de preferência exibindo atividade de hidrolase de peptidoglicano. Atividade lítica pode ser avaliada por métodos bem conhecidos pelo técnico especialista no assunto. Em uma modalidade, a atividade lítica é avaliada espectrofotometricamente por medição da queda da turbidez das suspensões de células de substrato. A turbidez é avaliada por medição da densidade ótica a um comprimento de onda de 595 nm, tipicamente uma cultura como turva quando se apresenta uma densidade ótica de pelo menos 0,3 OD a um comprimento de onda de 595 nm. De um modo preferido, a atividade lítica é avaliada espectrofotometricamente medindo a queda na turbidez de uma suspensão de S. aureus, em que a turbidez é quantificada através da medição de OD595 espectrofotometricamente (Libra S22, Biochrom). Mais preferivelmente, polipeptídeo de 200 nM compreendendo um domínio ativo enzimático da invenção, tal como aqui identificado foi incubado em conjunto com uma suspensão de S. aureus tendo uma OD595 inicial de 1 ± 0,05, avaliada espectrofotometricamente (Libra S22, Biochrom), em tampão PBS, pH 7,4, cloreto de sódio 120 mM durante 30 min a 37°C. A queda da turbidez é calculada subtraindo-se a OD595 após 30 min de incubação a partir da OD595 antes de 30 min de incubação. Dentro do contexto da invenção, um polipeptídeo compreendendo um domínio ativo enzimático da invenção tal como aqui identificado irá ser dito como tendo atividade lítica se, quando se usa este ensaio, uma queda da turbidez de pelo menos 10, 20, 30, 40, 50 ou 60% é detectada. De um modo preferido, uma queda da turbidez de pelo menos 70% é detectada. De preferência, um polipeptídeo compreendendo um domínio ativo enzimático da presente invenção exibe uma atividade lítica de pelo menos 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150 ou 200% ou mais de uma atividade lítica de endolisina F2638a de bacteriófago de S. aureus (endolisina Ply2638 identificada por SEQ ID NO: 2) preferencialmente codificada pela SEQ ID NO: 1.

[016] De preferência, a invenção proporciona uma composição que compreende um primeiro e um segundo composto, em que o referido primeiro composto é um composto anti-inflamatório e o referido segundo composto é um composto que tem como alvo especificamente uma célula bacteriana, de preferência uma célula bacteriana gram positiva, em que o referido segundo composto compreende um ou mais domínios ativos enzimáticos que exibem especificidade de ligação ao alvo, e em que a referida ligação ao alvo é uma ligação essencial em uma camada de peptidoglicano da referida célula bacteriana, de um modo preferido célula bacteriana gram positiva. Uma ligação essencial em uma camada de peptidoglicano de uma célula bacteriana, de preferência uma célula bacteriana gram- positiva é aqui definida como uma ligação no interior do referido peptidoglicano que é essencial para o referido peptidoglicano para proporcionar a referida forma da célula bacteriana e uma resistência à estrutura rígida de choque osmótico. Preferencialmente, a referida ligação essencial em uma camada de peptidoglicano de uma célula bacteriana gram-positiva é uma ligação entre uma D-alanina do peptídeo haste e uma glicina do peptídeo de ponte transversal (aqui definido também como uma ligação entre uma alanina N- terminal e uma glicina), uma ligação em uma ponte cruzada de pentaglicina (aqui definida também como uma ligação glicila-glicila de ponte de pentiglicina, uma ligação entre uma N-acetilmuramoil e uma L-alanina ou uma ligação entre uma N-acetilmuramina e uma N-acetilglicosamina, ou entre uma N-acetilglicosamina e uma N-acetilmuramina. Outras ligações essenciais preferenciais em uma camada de peptidoglicano de uma célula bacteriana gram-positiva são uma ligação em um peptídeo haste gama-glutamila, uma ligação entre um ácido L-alanil-iso-D-glutâmico em um peptídeo haste e uma ligação entre um ácido-L-lisina iso-D- glutâmico em um peptídeo haste.

[017] A maioria das endolisinas de bacteriófago de Staphylococcus nativas que exibem a atividade da hidrolase de peptidoglicano consistem de um domínio de ligação a parede celular do terminal C (TCC), um domínio central de N-acetilmuramoil-L-alanina amidase, e um domínio de endopeptidase alanil-glicil N-terminal com cisteína, homologia de amidoidrolases/peptidase dependente de histidina (CHAP), ou em caso de Ply2638, de um domínio de endopeptidase glicil-glicina de terminal N com homologia de Peptidase_M23, os três últimos domínios que exibem a atividade da hidrolase de peptidoglicano cada um com ligação alvo de especificidade distinta, e em geral aqui designados como domínios ativos enzimaticamente. De preferência, os referidos um ou mais domínios ativos enzimáticos é selecionado a partir de ou é uma permutação de um domínio de um grupo consistindo de uma cisteína, domínio de amidoidrolase/peptidase dependente de histidina, um domínio de endopeptidase, um domínio de amidase e um domínio de glicosilhidrolase. O referido domínio de glicosilhidrolase pode ser um domínio de muramidase ou um domínio de glicosaminidase.

[018] Preferencialmente, o referido domínio CHAP cliva uma ligação entre uma alanila N-terminal e uma glicila dentro de uma camada de peptidoglicano. Mais preferencialmente, o referido domínio de CHAP cliva especificamente uma ligação entre uma alanila N-terminal e uma glicila dentro de uma camada de peptidoglicano. Preferencialmente, o referido domínio de endopeptidase cliva a ligação glicila-glicila de ponte de pentaglicina dentro de uma camada de peptidoglicano. Mais preferencialmente, o referido domínio de endopeptidase cliva especificamente a ligação glicila-glicila de ponte de pentaglicina dentro de uma camada de peptidoglicano. Preferencialmente, o referido domínio de amidase cliva uma ligação entre uma N-acetlimuramoila central e uma L-alanina dentro de uma camada de peptidoglicano. Mais preferencialmente, o referido domínio de amidase cliva especificamente uma ligação entre uma N-acetlimuramoila central e uma L-alanina dentro de uma camada de peptidoglicano. Preferencialmente, o referido domínio de murimidase cliva uma ligação entre uma N-acetilmuramina e uma N-acetilglicosamina dentro de uma camada de peptidoglicano. Mais preferencialmente, o referido domínio de murimidase cliva especificamente uma ligação entre uma N-acetilmuramina e uma N-acetilglicosamina dentro de uma camada de peptidoglicano. Preferencialmente, o referido domínio de glicosaminidase cliva uma ligação entre uma N- acetilglicosamina e uma N-acetilmuramina dentro de uma camada de peptidoglicano. Mais preferencialmente, o referido domínio de glicosaminidase cliva especificamente uma ligação entre uma N-acetilglicosamina e uma N- acetilmuramina dentro de uma camada de peptidoglicano. De preferência, a referida camada de peptidoglicano é de uma célula bacteriana, de preferência uma célula bacteriana gram positiva, de um modo mais preferido, Staphylococcus, mais preferencialmente de um Staphylococcus aureus. De preferência, a clivagem de uma ligação por um domínio ativo enzimático, tal como aqui definido é específica se tal ligação é hidrolisada, pelo menos, 2, 5, 10, 50 ou 100 vezes mais eficiente com o referido domínio ativo enzimático, em comparação com as hidrólises de qualquer outra ligação como aqui definidas anteriormente com o referido domínio ativo enzimático.

[019] De um modo preferido, um domínio de CHAP englobado dentro da presente invenção origina do fago K de Staphylococcus, fago Twort de Staphylococcus e/ou bacteriófago phi 11 de S. aureus. De um modo preferido, um domínio de CHAP englobado dentro da presente invenção, é um domínio que tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 10, 12 ou 98 e/ou é, de preferência codificado pela SEQ ID NO: 9 ou 11. De um modo preferido, um domínio de endopeptidase englobado dentro da presente invenção se origina do bacteriógrafo F2638a de S. aureus e/ou S. simulans. De um modo preferido, um domínio de endopeptidase englobado pela presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 14 ou 16 e/ou é, de preferência codificado pela SEQ ID NO: 13 ou 15. De um modo preferido, um domínio de amidase englobado dentro da presente invenção se origina do bacteriógrafo F2638a de S. aureus e/ou bacteriógrafo phi 11 de S. aureus. De preferência, um domínio de amidase da presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 18 ou 100 e/ou é, de preferência codificado pela SEQ ID NO: 17 ou 99.

[020] De preferência, a invenção proporciona uma composição que compreende um primeiro e um segundo composto, em que o referido primeiro composto é um composto anti-inflamatório e o referido segundo composto é um composto que tem como alvo especificamente uma célula bacteriana, de preferência uma célula bacteriana gram positiva, em que o referido segundo composto é um bacteriófago que ocorre naturalmente ou mutante, uma endolisina que ocorre naturalmente ou um polipeptídeo mutante.

[021] Um bacteriófago que ocorre naturalmente da presente invenção pode ser qualquer bacteriófago que tem como alvo e infecta especificamente uma célula bacteriana, de preferência células bacterianas, de um modo preferido uma Staphylococcus, mais preferencialmente uma Staphylococcus aureus. De um modo preferido, um bacteriófago natural da presente invenção é selecionado a partir de, mas não limitado a, um grupo que consiste em bacteriófago F2638a de S. aureus,bacteriófago F11 de S. aureus, bacteriófago FTwort de S. aureus, JCSC1435 de S. haemolyticus, Fago K de S. aureus, fago WMY de S. warneri, fago NM3 de S. aureus e 80alpha de S. aureus. A referida endolisina de ocorrência natural pode ser sintetizada e/ou purificada. Um bacteriófago de acordo com a invenção pode ser um bacteriófago mutante, quimérico e/ou recombinante. O técnico especialista no assunto pode construir um bacteriófago da presente invenção, colocando mutações no genoma e/ou supressão e/ou inserção de sequências de codificação, ou partes das mesmas no genoma utilizando métodos conhecidos na técnica.

[022] Um endolisina que ocorre naturalmente pode ser qualquer endolisina de tipo selvagem ou nativa exibindo atividade de hidrolase de peptidoglicano. Prefere-se uma endolisina de fago de Staphylococcus, preferencialmente a referida endolisina de fago de Staphylococcusé selecionado de entre, mas não se limitando a, o grupo que consiste em endolisina F2638a de bacteriófago de S. aureus, endolisina F11 de bacteriófago de S. aureus, endolisina FTwort de bacteriófago de S. aureus, JCSC1435 de S. haemolyticus, endolisina de Fago K de S. aureus, endolisina WMY de fago de S. warneri, endolisina NM3 de fago de S. aureus e endolisina 80alfa de S. aureus. Também preferida é lisostafina de S. simulans e/ou um homólogo de lisostafina de S. simulans, tais como enzima ALE-1 de S. capitis. A maioria das endolisinas de bacteriófago de Staphylococcus nativas que exibem a atividade da hidrolase de peptidoglicano consistem de um domínio C-terminal de ligação da parede celular (CDB), um domínio amidase central de N-acetilmuramoil-L-alanina e um domínio de endopeptidase alanil-glicil N-terminal com homologia CHAP, ou no caso de Ply2638, de um domínio da endopeptidase de terminal N com homologia de Peptidase_M23, os três últimos domínios que exibem a atividade da hidrolase de peptidoglicano, cada um com especificidade distinta de ligação alvo e geralmente denominado aqui como domínios enzimaticamente ativos.

[023] Um polipeptídeo mutante, tal como abrangido no escopo da presente invenção pode ser um polipeptídeo de síntese química ou um polipeptídeo recombinante ou adaptado produzido in vitro. Uma construção adaptada é aqui definida como um polinucleotídeo que compreende sequências de nucleotídeos heterólogas. Como aqui utilizado, o termo sequência heteróloga ou polinucleotídeo heterólogo é aquele que não se encontra naturalmente ligado operativamente à sequência vizinha da referida primeira sequência de nucleotídeos. Tal como aqui utilizado, o termo heterólogo pode significar recombinante. Recombinante refere-se a uma entidade genética distinta da geralmente encontrada na natureza. Tal como aplicado a uma sequência de nucleotídeos ou molécula de ácido nucleico, isto significa que a referida sequência de nucleotídeos ou uma molécula de ácido nucleico é o produto de várias combinações de etapas de clonagem, restrição e/ou de ligação, e outros procedimentos que resultam na produção de uma construção que é distinta de uma sequência ou molécula encontrada na natureza. De preferência, um polipeptídeo mutante com a presente invenção compreende pelo menos um domínio ativo enzimático e um domínio de ligação celular, tal como aqui definido.

[024] Um polipeptídeo ou endolisina mutante da presente invenção podem estar sob uma forma purificada ou podem ser compreendidos dentro de uma composição em bruto, de preferência de origem biológica, tal como um lisado bacteriano, lisado de levedura, lisado fúngica, sonicado ou fixado. Alternativamente, o referido polipeptídeo mutante ou endolisina podem ser uma endolisina ou polipeptídeo sintetizados quimicamente, ou um polipeptídeo recombinante produzido in vitro.

[025] Um polipeptídeo mutante ou endolisina da presente invenção compreende preferivelmente ou consiste de pelo menos um domínio ativo enzimático e o pelo menos um domínio de ligação celular e, opcionalmente, um marcador de uma célula para facilitar a purificação. Preferencialmente, o referido marcador é selecionado a partir de, mas não se limita ao grupo consistindo de um FLAG-tag, poly(His)-tag, HA-tag e Myc-tag. Mais preferencialmente o referido marcador é um 6xHis-tag. Ainda mais preferencialmente, o referido marcador é um 6xHis-tag N-terminal (aqui indicado como HXa) idêntico à SEQ ID NO: 74 e, de preferência codificado pela SEQ ID NO: 73).

[026] De um modo preferido, um domínio de ligação da parede celular de acordo com a presente invenção situa-se no lado do C-terminal do domínio ativo enzimático no interior da referida endolisina ou um polipeptídeo mutante de ocorrência natural. De preferência, o referido polipeptídeo mutante ou de ocorrência natural mutante compreende, pelo menos, dois ou mais domínios ativos enzimáticos com especificidades de ligação alvo diferentes como especificidades de ligação alvo diferentes conferem efeitos sinérgicos. Em uma modalidade da invenção, uma composição compreende pelo menos dois compostos distintos que tem como alvo uma célula bacteriana, de preferência uma célula bacteriana gram positiva, de um modo preferido uma de Staphylococcus, mais preferencialmente uma de Staphylococcus aureus. Preferivelmente, os referidos pelo menos dois compostos distintos são endolisina de ocorrência natural, os quais são opcionalmente sintetizados. Preferivelmente, os referidos pelo menos dois compostos distintos são polipeptídeos recombinantes, cada um compreendendo um domínio ativo enzimático diferente e/ou uma multiplicidade diferente de, pelo menos, dois domínios ativos enzimáticos distintos, tal como definido aqui a seguir.

[027] De preferência, a invenção proporciona uma composição que compreende um primeiro e um segundo composto, em que o referido primeiro composto é um composto anti-inflamatório e o referido segundo composto é um composto que tem como alvo especificamente uma célula bacteriana, de preferência uma célula bacteriana gram positiva, em que o referido segundo composto é um polipeptídeo recombinante que compreende uma multiplicidade dos referidos um ou mais domínios ativos enzimáticos exibindo especificidade de ligação alvo. “Multiplicidade” é para ser entendida como um número de cópias e pode ser qualquer número inteiro variando de 1 a 20, de preferência de 1 a 10, mais preferencialmente de 1 até 3, mais preferencialmente a referida multiplicidade é 2, ou seja, uma duplicada. Os polipeptídeos que compreendem uma multiplicidade de domínios ativos enzimáticos mostram atividade lítica superiores em comparação com os polipeptídeos que compreendem um único domínio ativo enzimático.

[028] De preferência, o referido segundo composto é um polipeptídeo que compreende e/ou constituído por um domínio ativo enzimático, uma ligação de uma parede celular e, opcionalmente, um marcador para facilidade de purificação, tal como aqui definido, preferencialmente o referido domínio ativo enzimático sendo uma cisteína, domínio de amidoidrolases/peptidase dependente de histidina, um domínio de endopeptidase ou um domínio de amidase, e de preferência polipeptídeo compreende uma multiplicidade dos referidos domínio ativo enzimáticos, preferencialmente a referida multiplicidade sendo 2, ou seja, uma duplicada. Mais preferencialmente, o referido polipeptídeo compreende e/ou é constituído por um domínio de amidase duplicado e um domínio de ligação de parede celular e, opcionalmente, um marcador para facilidade de purificação, tal como aqui definido, preferencialmente a referida amidase é endolisina de bacteriófago de F2638a de S. aureus, e o referido domínio de ligação da parede celular é lisostafina de S. simulans. Mais preferivelmente, o referido polipeptídeo compreende e/ou é constituído por um domínio de endopeptidase duplicado e um domínio de ligação de parede celular e, opcionalmente, um marcador para facilidade de purificação, tal como aqui definido, de preferência, o referido domínio de endopeptidase é um domínio de Peptidase_M23 de lisostafina de S. simulans, e o referido domínio de ligação de parede celular é lisostafina de S. simulans.

[029] De preferência, o referido segundo composto é um polipeptídeo que tem pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 98 ou 100, e/ou é codificado por um polinucleotídeo possuindo pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com qualquer uma das SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 97 ou 99. De preferência, o referido polipeptídeo tem pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 28, 34, 46, 52, 58 ou 70, mais preferencialmente, o referido polipeptídeo tem pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 28, 46, 52, ou 70, ainda mais preferencialmente, o referido polipeptídeo tem pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 46 ou 70, mais preferencialmente, o referido polipeptídeo tem pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 70.

[030] De preferência, a invenção proporciona uma composição que compreende um primeiro e um segundo composto, em que o referido primeiro composto é um composto anti-inflamatório e o referido segundo composto é um composto que tem como alvo especificamente uma célula bacteriana, de preferência uma célula bacteriana gram positiva, em que o referido primeiro composto é selecionado a partir do grupo que consiste de um corticosteroide, um inibidor da calcineurina, um composto imunoterapêutico, um IFN-gama humano recombinante, um probiótico microbiano, um modulador de citocina, um bloqueador do recrutamento de células inflamatórias, e um inibidor da ativação de células T. Inibidores da calcineurina preferidos são FK506, tacrolimus e pimecrolimus. Um composto imunoterapêutico preferido é o omalizumab, um anticorpo monoclonal IgG1 humanizado contra IgE que reconhece e mascara um epitopo na região CH3 de IgE responsável pela ligação à FceR de alta afinidade em mastócitos e basófilos. Moduladores de citocinas preferidos são um receptor solúvel de IL-4, um anticorpo monoclonal anti-IL-5 e um inibidor de TNF. Bloqueadores do recrutamento de células inflamatórias preferidos são um antagonista de receptor de quimiocina e um inibidor de CLA. Os inibidores da ativação de células T preferidos são alefacept e efalizumab. Os corticosteroides que podem ser utilizados incluem, mas não estão limitados a, dipropionato de betametasona, acetonida de fluocinolona, valerato de betametasona, acetonida de triamcinolona, propionato de clobetasol, desoximetasona, diacetato de diflorasona, amcinonida, flurandrenolida, valerato de hidrocortisona, butirato de hidrocortisona, desonida, hidrocortisona e acetato de metilprednisolona. Um outro composto anti-inflamatório preferido é a dapsona que tem ambas as propriedades anti-microbianas e anti- inflamatórias.

[031] Em todas as modalidades da presente invenção, o segundo composto que tem como alvo especificamente uma célula bacteriana, de preferência uma célula bacteriana gram positiva pode ser constituído por uma combinação de uma fonte de um primeiro domínio ativo enzimático e uma fonte de um segundo domínio ativo enzimático, em que os referidos primeiro e segundo domínios ativos enzimáticos apresentam especificidades de títulos de ligação alvo distintos, e são compostos por um primeiro e segundo polipeptídeo distintos, ou seja, o referido primeiro domínio ativo enzimático está compreendido em um primeiro polipeptídeo, e o referido segundo domínio enzimático é constituído por um segundo polipeptídeo, em que o referido primeiro e segundo polipeptídeo possuem uma sequência de aminoácidos diferente. Além disso, o segundo composto de acordo com a presente invenção pode ser constituído por uma combinação de uma fonte de um primeiro domínio ativo enzimático, uma fonte de um segundo domínio ativo enzimático e uma fonte de um terceiro domínio ativo enzimático, em que o referido primeiro, segundo e terceiro domínios ativos enzimáticos exibem especificidades de ligação alvo distintas, e são compostos de um primeiro, segundo e terceiro polipeptídeo distinto, isto é,o referido primeiro domínio ativo enzimático está compreendido em um primeiro polipeptídeo, o referido segundo domínio enzimático é constituído por um segundo polipeptídeo, e o referido terceiro domínio enzimático é constituído por um terceiro polipeptídeo, em que o referido primeiro, segundo e terceiro polipeptídeo possuem cada um, uma sequência de aminoácidos diferente. Além disso, o segundo composto de acordo com a presente invenção pode ser constituído por uma combinação de uma fonte de um primeiro domínio ativo enzimático, uma fonte de um segundo domínio ativo enzimático, uma fonte de um terceiro domínio ativo enzimático, e uma fonte de um outro domínio ativo enzimático, em que o referido primeiro, segundo, terceiro e outro domínio ativo enzimático exibem diferentes especificidades de ligação alvo e são compostos por um primeiro, segundo, terceiro e outro polipeptídeo distintos, isto é,o referido primeiro domínio ativo enzimático está compreendido em um primeiro polipeptídeo, o referido segundo domínio enzimático é constituído por um segundo polipeptídeo, o referido terceiro domínio enzimático é constituído por um terceiro polipeptídeo, e o referido outro domínio ativo enzimático é constituído por um outro polipeptídeo, em que o referido primeiro, segundo, terceiro e outro polipeptídeos possuem cada um, uma sequência de aminoácido distinta. Um outro domínio ativo enzimático é aqui entendido como um quarto, quinto, sexto, sétimo, oitavo, nono, décimo ou mais domínios ativos enzimáticos, de preferência quarto domínio ativo enzimático. Um outro polipeptídeo é aqui concebido como um quarto, quinto, sexto, sétimo, oitavo, nono, décimo ou mais polipeptídeo, de preferência um quarto polipeptídeo.

[032] Os inventores verificaram surpreendentemente para o segundo composto de acordo com a invenção, que a aplicação simultânea de dois ou mais domínios enzimaticamente ativos com diferentes especificidades de ligação alvo confere efeitos sinérgicos. Surpreendentemente, isto funciona não só quando os domínios enzimaticamente ativos com especificidades diferentes estão localizados na mesma molécula como nas endolisinas de Staphylococcus nativas, mas também funciona quando os domínios enzimaticamente ativos com diferentes especificidades são separados em polipeptídeos distintos.

[033] A vantagem de ter domínios ativos enzimáticos distintos localizados em polipeptídeos individuais separados é que os polipeptídeos resultantes são menores, que podem ser mais facilmente produzidos. Além disso, estes polipeptídeos menores têm melhores propriedades de difusão em ambientes específicos e podem ser mais resistente à degradação e apresentam maior estabilidade térmica. Outra vantagem é que os domínios ativos enzimáticos distintos independentes localizados em moléculas polipeptídicas separadas distintas podem ser misturados e reunidos em composições variáveis, numa proporção que é mais adequada para hidrolisar as células bacterianas alvo específicas. O segundo composto de acordo com a invenção, constituído por uma combinação tal como aqui descrita pode ser suplementado e/ou complementado pelo uso de virtualmente qualquer domínio ativo enzimático funcional do domínio ativo com virtualmente qualquer especificidade de ligação alvo a partir de muitas origens diferentes, incluindo lisinas de fagos, bacteriocinas, autolisinas, ou quaisquer outras enzimas líticas da parede celular.

[034] Dentro do contexto do segundo composto de acordo com a presente invenção 'uma combinação “significa que uma fonte de um primeiro domínio ativo enzimático e uma fonte de um segundo domínio ativo enzimático são contempladas e englobadas. Além disso, no contexto do segundo composto de acordo com a presente invenção “uma combinação” significa que uma fonte de um primeiro domínio ativo enzimático, uma fonte de um segundo domínio ativo enzimático e, opcionalmente, uma fonte de um terceiro e/ou outro domínio ativo enzimático são contempladas e englobadas. Cada fonte pode estar junta ou presente em conjunto ou combinada em conjunto ou fisicamente em contato com a outra fonte formando uma única composição. Cada fonte pode, alternativamente, ser compreendida dentro de uma composição diferente. No entanto, a presente invenção proporciona a percepção de que ambas as fontes de um primeiro e um segundo domínio ativo enzimáticos são preferivelmente necessárias ou são utilizadas a fim de se obter um efeito da presente invenção, tal como aqui definido. Se cada fonte não está presente numa mesma composição única, cada uma das fontes e/ou cada composição distinta compreendendo uma fonte de uma combinação compreendendo o segundo composto de acordo com a presente invenção podem ser utilizados sequencialmente ou simultaneamente.

[035] Uma fonte de um primeiro domínio ativo enzimático, uma fonte de um segundo domínio ativo enzimático, uma fonte de um terceiro domínio ativo enzimático e uma fonte de um outro domínio ativo enzimático compreende, preferencialmente, uma fonte à base de proteínas, ou seja, um polipeptídeo, uma proteína, uma proteína de digestão e/ou fragmento de uma proteína ou digerir, ou uma fonte não sendo base de proteínas, isto é, umácido nucleico que codifica uma proteína ou de peptídeo derivado ou fragmento de proteína. Abaixo nós definimos fontes preferidas de um primeiro domínio ativo enzimático, uma fonte de um segundo domínio ativo enzimático, uma fonte de um terceiro domínio ativo enzimático e uma fonte de um outro domínio ativo enzimático que estão abrangidas pela invenção. Quando o segundo composto de acordo com a invenção refere-se a uma combinação de uma fonte de um primeiro domínio ativo enzimático, uma fonte de um segundo domínio ativo enzimático e, opcionalmente, uma fonte de um terceiro e/ou outro domínio ativo enzimático, cada uma das fontes de um primeiro domínio ativo enzimático aqui definido podem ser combinadas com cada uma das fontes de um segundo e, opcionalmente, terceiro e/ou outro domínio ativo enzimático aqui definido. Também é abrangida pela presente invenção a utilização de uma combinação de uma fonte de um primeiro domínio ativo enzimático sendo à base de proteína com uma fonte de um segundo domínio ativo enzimático e, opcionalmente, um terceiro e/ou outro domínio ativo enzimático não sendo baseado em proteínas, e vice-versa.

[036] “Compreendido em polipeptídeos distintos” é aqui entendido como qualquer um dos referidos primeiro, segundo e opcionalmente terceiro e/ou outro domínio ativo enzimático sendo constituído por um polipeptídeo que é distinto do polipeptídeo que qualquer um dos outros dos referidos primeiro, segundo e opcionalmente terceiro e/ou outro domínio ativo enzimático está compreendido.

[037] Em todas as modalidades de acordo com a invenção, um polipeptídeo pode ser um polipeptídeo natural ou um polipeptídeo isolado, de preferência, um polipeptídeo isolado. Um ácido nucleico de acordo com a presente invenção pode ser um ácido nucleico natural ou um ácido nucleico isolado, de preferência, um ácido nucleico isolado. Uma construção de ácido nucleico de acordo com a presente invenção pode ser uma construção natural ou uma isolada, de preferência, uma construção de ácido nucleico isolada.

[038] De preferência, um primeiro, um segundo e, opcionalmente, um terceiro e/ou outro domínio ativo enzimático em conjunto representando o segundo composto de acordo com a presente invenção é um domínio selecionado a partir do grupo que consiste de uma cisteína, domínio de amidoidrolases/peptidase dependente de histidina (CHAP), um domínio de endopeptidase, e um domínio de amidase; todos de preferência, como descrito anteriormente neste documento.

[039] De preferência, um primeiro, segundo, terceiro e/ou outro polipeptídeo que em conjunto representam o segundo composto de acordo com a presente invenção compreendem uma multiplicidade diferente de um primeiro, segundo, terceiro e/ou outro domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção. Uma “multiplicidade” é aqui definida como um número de cópias. Uma “multiplicidade diferente” é aqui definida como uma multiplicidade ou número de cópias de um domínio ativo enzimático específico de acordo com a invenção, isto é, um primeiro, segundo, terceiro ou outro domínio ativo enzimático, tal como aqui definido, compreendido dentro de um polipeptídeo específico da invenção, ou seja, um primeiro, segundo, terceiro ou outro polipeptídeo como aqui definido, para ser de forma diferente uma multiplicidade ou número de cópias do mesmo domínio ativo enzimático dentro de um outro polipeptídeo de combinação compreendendo o segundo composto da invenção. Por exemplo, uma combinação compreendendo o segundo composto da presente invenção compreende um primeiro polipeptídeo que compreende um determinado número de cópias de um primeiro domínio ativo enzimático, e um segundo polipeptídeo compreendendo um número diferente de cópias do referido primeiro domínio ativo enzimático. Além disso, o referido primeiro polipeptídeo da referida combinação exemplificada englobando o segundo composto da presente invenção pode ainda compreender um determinado número de cópias do segundo domínio ativo enzimático, o qual é diferente do número de cópias do referido segundo domínio ativo enzimático como compreendido no referido segundo polipeptídeo da referida combinação. Além disso, qualquer outro polipeptídeo da referida combinação exemplificada englobando o segundo composto da presente invenção pode compreender um número de cópias de outro domínio ativo enzimático, que é diferente do número de cópias do referido outro domínio ativo enzimático como compreendido no referido primeiro e segundo polipeptídeo da referida combinação. Embora uma combinação de polipeptídeos distintos, cada um compreendendo um único domínio ativo enzimático distinto mostrou atividade lítica sinérgica em comparação com a atividade lítica de cada polipeptídeo separado, foi surpreendentemente verificado pelos presentes inventores que os polipeptídeos que compreendem uma multiplicidade de domínios ativos enzimáticos mostram atividade lítica superior em comparação com os polipeptídeos que compreendem um único domínio ativo enzimático.

[040] Além disso, uma combinação de domínios enzimáticos distintos sobre polipeptídeos distintos, em que pelo menos um dos referidos polipeptídeos distintos compreende uma multiplicidade de domínios ativos enzimáticos foi verificada superior sobre uma combinação em que todos os referidos polipeptídeos distintos compreendem um único domínio ativo enzimático distinto. Além disso, uma combinação compreendendo o segundo composto de acordo com a presente invenção, em que um primeiro, segundo, terceiro e/ou outro polipeptídeo compreendem uma multiplicidade de um primeiro, segundo, terceiro e/ou outro domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção, respectivamente, foi verificada superior sobre uma combinação compreendendo o segundo composto de acordo com a presente invenção, em que o referido primeiro, segundo, terceiro e/ou outro polipeptídeo compreendem uma única cópia do referido primeiro, segundo, terceiro e/ou ainda um domínio ativo enzimático, respectivamente, e de preferência em que a referida multiplicidade, tal como aqui definida, é 2, ou seja, uma duplicata. Em uma modalidade preferida, o efeito sinérgico de uma combinação compreendendo o segundo composto de acordo com a presente invenção, em que um primeiro, segundo, terceiro e/ou outro polipeptídeo de acordo com a presente invenção compreendem uma multiplicidade de um primeiro, segundo, terceiro e/ou ainda um domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção, respectivamente, foi encontrado superior sobre uma combinação compreendendo o segundo composto de acordo com a presente invenção, em que os referidos primeiro, segundo, terceiro e outro polipeptídeo compreendem uma única cópia do referido primeiro, segundo, terceiro e ainda um domínio ativo enzimático, respectivamente, e de preferência em que a referida multiplicidade, tal como aqui definida abaixo, é de 2, isto é, uma duplicata.

[041] De um modo preferido, um primeiro e/ou segundo polipeptídeo de uma combinação compreendendo o segundo composto de acordo com a presente invenção, compreende uma multiplicidade diferente de um primeiro e/ou segundo domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção. A multiplicidade dos referidos primeiro e segundo domínio é definida como aqui anteriormente como um número de cópias de um modo preferido, designado por k, l, n e p, do referido primeiro e segundo domínios indicados como se segue: k indica o número de cópias do referido primeiro domínio ativo enzimático no referido primeiro polipeptídeo; l indica o número de cópias do referido segundo domínio ativo enzimático no referido primeiro polipeptídeo; n indica o número de cópias do referido primeiro domínio ativo enzimático no referido segundo polipeptídeo; p indica o número de cópias do referido segundo domínio ativo enzimático no referido segundo polipeptídeo; e em que k e psão números inteiros independentes de 1-10, 1-9, 1-8, 1-7, 1-6, 1-5, 1-4, 1-3, ou, de preferência 1-2, e l e n são números inteiros independentes de 0-10, 09, 0-8, 0-7, 0-6, 0-5, 0-4, 0-3, ou, de preferência 0-2, e em queké um número inteiro diferente de n e/ou lé um inteiro diferente de p, mais preferivelmente de k e psão 2 e l e nsão 0.

[042] De um modo preferido, um primeiro, segundo e terceiro polipeptídeo compreendendo o segundo composto da presente invenção compreendem uma multiplicidade diferente de um primeiro, segundo e terceiro domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção.

[043] A multiplicidade dos referidos primeiro, segundo e terceiro domínio é definida como aqui anteriormente como um número de cópias, de preferência, designado por k, l, m, n, p, q, r, s e t do referido primeiro, segundo e terceiro domínio indicados do seguinte modo: k indica o número de cópias do referido primeiro domínio ativo enzimático no referido primeiro polipeptídeo; l indica o número de cópias do referido segundo domínio ativo enzimático no referido primeiro polipeptídeo; m indica o número de cópias do referido terceiro domínio ativo enzimático no referido primeiro polipeptídeo; n indica o número de cópias do referido primeiro domínio ativo enzimático no referido segundo polipeptídeo; p indica o número de cópias do referido segundo domínio ativo enzimático no referido segundo polipeptídeo; q indica o número de cópias do referido terceiro domínio ativo enzimático no referido segundo polipeptídeo; r indica o número de cópias do referido primeiro domínio ativo enzimático no referido terceiro polipeptídeo; s indica o número de cópias do referido segundo domínio ativo enzimático no referido terceiro polipeptídeo; t indica o número de cópias do referido terceiro domínio ativo enzimático no referido terceiro polipeptídeo; e em que k, p e tsão números inteiros independentes de 1-10, 1-9, 1-8, 1-7, 1-6, 1-5, 1-4, 1-3, ou, de preferência 1-2, e l, m, n, q, r, e ssão números inteiros independentes de 0-10, 0-9, 0-8, 0-7, 0-6, 0-5, 0-4, 0-3, ou, de preferência 0-2, e em que ké um número inteiro diferente de n e/ou r, e/ou lé um inteiro diferente de p e/ou s, e/ou té um inteiro diferente de m ou q, mais preferivelmente k, p e t são2 e l, m, n, q, r, e ssão 0.

[044] De preferência, um primeiro, segundo, terceiro e outro polipeptídeo compreendendo o segundo composto da presente invenção compreendem uma multiplicidade diferente de um primeiro, segundo, terceiro e outro domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção. Multiplicidade do referido outro domínio ativo enzimático, tendo em conta que o referido primeiro, segundo e terceiro domínios ativos enzimáticos são para serem entendidos aqui de um modo análogo, tal como definido aqui acima para um primeiro, segundo e terceiro domínio ativo enzimático.

[045] De preferência, um primeiro, segundo, terceiro ou outro polipeptídeo englobando o segundo composto de acordo com a presente invenção tem um comprimento de pelo menos 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320 ou 330 aminoácidos e/ou uma duração de, no máximo, 850, 800, 750, 700, 650, 600, 550, 500, 490, 480, 470, 460, 450, 440, 430, 420, 410, 400, 390, 380 ou 370 aminoácidos. Mais de preferência, um primeiro, segundo ou terceiro polipeptídeo compreendendo o segundo composto de acordo com a presente invenção tem um comprimento de 140-850, 140-800, 140-750, 140-700, 140-650, 140-600, 140-550 140-500, 140-490, 140480, 140-470, 140-460, 140-450, 140-440, 140-430, 140-420, 140-410, 140-400, 140-390, 140-380, 140-370, 150-850, 160850, 170-850, 180-850, 190-850, 200-850, 210-850, 220-850, 230-850, 240-850, 250-850, 260-850, 270-850, 280-850, 290850, 300-850, 310-850, 320-850 ou 330-850 aminoácidos.

[046] De preferência, um primeiro e segundo polipeptídeo compreendendo o segundo composto de acordo com a presente invenção, cada um tem um comprimento de pelo menos 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320 ou 330 aminoácidos e/ou uma duração de, no máximo, 800, 850, 700, 650, 600, 550, 500, 490, 480, 470, 460, 450, 440, 430, 420, 410, 400, 390, 380 ou 370 aminoácidos. Mais preferencialmente, um primeiro e um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, possuem cada um, um comprimento de 140-850, 140-800, 140-750, 140-700, 140-650, 140-600, 140-550 140-500, 140 -490, 140-480, 140-470, 140460, 140-450, 140-440, 140-430, 140-420, 140-410, 140-400, 140-390, 140-380, 140-370, 150-850, 160-850, 170-850, 180- 850, 190-850, 200-850, 210-850, 220-850, 230-850, 240-850, 250-850, 260-850, 270-850, 280-850, 290-850, 300-850, 310850, 320-850 ou 330-850 aminoácidos.

[047] De preferência, um primeiro, segundo e terceiro polipeptídeo compreendendo o segundo composto de acordo com a presente invenção, possuem cada um, um comprimento de pelo menos 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320 ou 330 aminoácidos e/ou um comprimento de, no máximo, 800, 850, 700, 650, 600, 550, 500, 490, 480, 470, 460, 450, 440, 430, 420, 410, 400, 390, 380 ou 370 aminoácidos. Mais preferencialmente, um primeiro, segundo e terceiro polipeptídeos que abrangem o segundo composto de acordo com a presente invenção, cada um, tem um comprimento de 140850, 140-800, 140-750, 140-700, 140-650, 140-600, 140- 550 140-500, 140-490, 140-480, 140-470, 140-460, 140-450, 140440, 140-430, 140-420, 140-410, 140-400, 140-390, 140 -380, 140-370, 150-850, 160-850, 170-850, 180-850, 190-850, 200850, 210-850, 220-850, 230-850, 240-850, 250-850, 260-850, 270-850, 280-850, 290-850, 300-850, 310-850, 320-850 ou 330-850 aminoácidos.

[048] De preferência, um primeiro, segundo, terceiro e outro polipeptídeo englobando o segundo composto de acordo com a presente invenção, possuem cada um, um comprimento de pelo menos 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320 ou 330 aminoácidos e/ou um comprimento de, no máximo, 800, 850, 700, 650, 600, 550, 500, 490, 480, 470, 460, 450, 440, 430, 420, 410, 400, 390, 380 ou 370 aminoácidos. Mais de preferência, um primeiro, segundo, terceiro e outro polipeptídeos que abrangem o segundo composto de acordo com a presente invenção, cada um tem um comprimento de 140-850, 140-800, 140-750, 140-700, 140-650, 140-600, 140-550 140500, 140-490, 140-480, 140-470, 140-460, 140-450, 140-440, 140-430, 140-420, 140-410, 140-400, 140-390, 140-380, 140370, 150-850, 160-850, 170-850, 180-850, 190-850, 200-850, 210-850, 220-850, 230-850, 240-850, 250 -850, 260-850, 270850, 280-850, 290-850, 300-850, 310-850, 320-850 ou 330-850 aminoácidos.

[049] Uma modalidade proporciona uma combinação de uma fonte de um primeiro e um segundo domínios ativos enzimáticos englobando o segundo composto de acordo com a presente invenção, em que os referidos primeiro e segundo domínios ativos enzimáticos são compostos dos primeiro e segundo polipeptídeos distintos da presente invenção, em que o referido primeiro polipeptídeo é livre do referida segundo domínio ativo enzimático, e o referido segundo polipeptídeo é livre do referido primeiro domínio ativo enzimático. Além disso, é fornecida uma combinação de acordo com a presente invenção, em que l e nsão 0.

[050] Outra modalidade proporciona uma combinação de uma fonte de um primeiro, segundo e terceiro domínio ativo enzimático englobando o segundo composto de acordo com a presente invenção, em que o referido primeiro, segundo e terceiro domínios ativos enzimáticos são compostos por primeiro, segundo e terceiro polipeptídeos distintos, em que o referido primeiro polipeptídeo é livre do referido segundo e terceiro domínios ativos enzimáticos, o referido segundo polipeptídeo é livre do referido primeiro e terceiro domínios ativos enzimáticos, e o referido terceiro polipeptídeo é livre dos referidos primeiro e segundo domínios ativos enzimáticos. Além disso, é fornecida uma combinação de acordo com a presente invenção, em que l, m, n, q, r e ssão 0. Ainda mais preferivelmente, a presente invenção proporciona uma combinação compreendendo o segundo composto de acordo com a presente invenção, em que l, m, n, q, r e ssão 0 e k, p e tsão 2.

[051] Outra modalidade proporciona uma combinação de uma fonte de um primeiro, segundo, terceiro e outro domínio ativo enzimático englobando o segundo composto de acordo com a presente invenção, em que o referido primeiro, segundo, terceiro e outro domínios ativos enzimáticos são compostos em um primeiro, segundo, terceiro e outro polipeptídeo distinto, respectivamente, em que: de preferência o referido primeiro polipeptídeo é livre do referido segundo, terceiro e outro domínio ativo enzimático; de um modo preferido o referido segundo polipeptídeo é livre do referido primeiro, terceiro e outro domínio ativo enzimático; de preferência o referido terceiro polipeptídeo é livre do referido primeiro, segundo e outro domínio ativo enzimático; e, preferencialmente o referido outro polipeptídeo é livre do referido primeiro, segundo e terceiro domínios ativos enzimáticos.

[052] Preferivelmente, o referido primeiro, segundo, terceiro e outro domínio ativo enzimático estão compreendidos dentro do referido primeiro, segundo, terceiro e outro polipeptídeo, respectivamente, em duplicado, ou seja, em que a multiplicidade como aqui identificada é 2. Também englobada é uma combinação englobando o segundo composto de acordo com a presente invenção, em que um primeiro, segundo e/ou terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção, não estão livres de um primeiro, segundo e/ou terceiro domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção, mas os referidos primeiro, segundo e/ou terceiro polipeptídeo diferem na multiplicidade dos referidos primeiro, segundo e/ou terceiro domínios ativos enzimáticos. Além disso, englobada é uma combinação compreendendo o segundo composto de acordo com a presente invenção, em que pelo menos um de k, l, m, n p, q, r, s ou t é 2, e em que qualquer um dos outros k, l, m, n p, q, r, s e/ou té 1 ou 0.

[053] Prefere-se uma combinação compreendendo o segundo composto de acordo com a presente invenção, em que um primeiro, segundo, terceiro e/ou outro polipeptídeo é um polipeptídeo que tem pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com um polipeptídeo selecionado a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 98 ou 100.

[054] Dentro do contexto da presente invenção, várias combinações preferidas, não limitativas que abrangem o segundo composto de acordo com a invenção estão previstas, que são listadas aqui abaixo.

[055] É preferida uma combinação de uma fonte de primeiro domínio ativo enzimático e um segundo domínio ativo enzimático, em que os referidos primeiro e segundo domínios ativos enzimáticos são compostos em primeiro e segundo polipeptídeos distintos, e em que o referido primeiro domínio ativo enzimático é uma cisteína, domínio de amidoidrolase/peptidase dependente da histidina, e o referido segundo domínio ativo enzimático é um domínio de endopeptidase, ou em que o referido primeiro domínio ativo enzimático é uma cisteína, domínio de amidoidrolase/peptidase dependente de histidina, e o referido segundo domínio ativo enzimático é de domínio de amidase ou em que o referido primeiro domínio ativo enzimático é um domínio de endopeptidase e o referido segundo domínio ativo enzimático é domínio de amidase, em que o referido primeiro e segundo distintos, compreendem cada um ainda um domínio de ligação da parede celular, e em que cada um dos referidos primeiro e segundo polipeptídeos distintos compreendem uma multiplicidade dos referidos primeiro ou segundo domínio ativos enzimáticos, preferencialmente a referida multiplicidade sendo 2, ou seja, uma duplicata.

[056] Também preferida é uma combinação de uma fonte de primeiro e segundo domínios ativos enzimáticos, em que os referidos primeiro e segundo domínios ativos enzimáticos são compostos em primeiro e segundo polipeptídeos distintos, e em que o referido primeiro domínio enzimático é domínio de amidohidrolases/peptidase dependente de histidina e o referido segundo domínio ativo enzimático é um domínio de endopeptidase, ou o referido primeiro domínio ativo enzimático é uma cisteína, domínio de amidohidrolases/peptidase dependente de histidina, o referido segundo domínio ativo enzimático é domínio de amidase, ou o referido primeiro domínio ativo enzimático é um domínio de endopeptidase, e o referido segundo domínio ativo enzimático é domínio de amidase, e em que o referido primeiro e segundo polipeptídeo compreendem cada um, ainda um domínio de ligação da parede celular.

[057] Também preferida é uma combinação de uma fonte de primeiro domínio ativo enzimático, e um segundo domínio ativo enzimático, em que os referidos primeiro e segundo domínios ativos enzimáticos são compreendidos em primeiro e segundo polipeptídeos distintos, e em que o referido primeiro domínio ativo enzimático é uma cisteína, domínio de amidohidrolases/peptidase dependente de histidina e o referido segundo domínio ativo enzimático é um domínio de endopeptidase, e em que a referida combinação compreende adicionalmente uma fonte de um terceiro domínio ativo enzimático compreendido em um terceiro polipeptídeo distinto, em que o referido terceiro domínio ativo enzimático é um domínio de amidase, e o referido primeiro, segundo e terceiro polipeptídeo distintos compreendem cada um, adicionalmente, um domínio de ligação da parede celular, e em que cada um dos referidos primeiro, segundo e terceiro polipeptídeos distintos compreendem uma multiplicidade dos referidos primeiro, segundo ou terceiro domínios ativos enzimátivos, a referida multiplicidade de preferência sendo 2, ou seja, uma duplicata.

[058] Também preferida é uma combinação de uma fonte de primeiro, segundo e terceiro domínio ativo enzimático, em que o referido primeiro, segundo e terceiro , domínios ativos enzimáticos são compostos em primeiro, segundo e terceiro polipeptídeos distintos, e em que o referido primeiro domínio enzimático é domínio de amidoidrolases/peptidase dependente de histidina, o referido segundo domínio ativo enzimático é um domínio de endopeptidase e o referido terceiro domínio ativo enzimático é um domínio de amidase, e em que os referidos primeiro, segundo e terceiro polipeptídeos compreendem cada um, ainda um domínio de ligação da parede celular.

[059] Também preferida é uma combinação em que, em um primeiro domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 10 e um segundo domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 16.

[060] Também preferida é uma combinação em que, em um primeiro domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 10 e um segundo domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 18.

[061] Também preferida é uma combinação em que, em um primeiro domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 16 e um segundo domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 18.

[062] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 34 e um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 46.

[063] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 34 e um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 28.

[064] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 46 e um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 28.

[065] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 58 e um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 70.

[066] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 58 e um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 52.

[067] Mais preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 70 e um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 52.

[068] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 58 e um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 46.

[069] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 58 e um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 28.

[070] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 70 e um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 34.

[071] Mais preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 70 e um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 28.

[072] Também preferida é uma combinação, em que um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 52 e um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 34.

[073] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 52 e um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 46.

[074] Também preferida é uma combinação em que, em um primeiro domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 10, um segundo domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 16 e um terceiro domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 18.

[075] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 34, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 46 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 28.

[076] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 32, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 44 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 26.

[077] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 34, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 46 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 26.

[078] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 36, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 48 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 30.

[079] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 32, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 46 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 26.

[080] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 34, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 44 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 26.

[081] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 32, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 44 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 28.

[082] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 32, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 46 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 28.

[083] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 34, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 44 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 28.

[084] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 58, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 70 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 52.

[085] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 58, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 70 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 50.

[086] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 56, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 68 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 50.

[087] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 60, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 72 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 54.

[088] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 56, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 70 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 50.

[089] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 58, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 68 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 50.

[090] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 56, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 68 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 52.

[091] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 65, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 70 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 52.

[092] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 58, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 68 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 52.

[093] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 58, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 70 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 28.

[094] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 34, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 70 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 52.

[095] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 58, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 46 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 52.

[096] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 34, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 46 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 52.

[097] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 58, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 46 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 28.

[098] Também preferida é uma combinação em que, um primeiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 34, um segundo polipeptídeo de acordo com a presente invenção, tal como pelo menos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 70 e um terceiro polipeptídeo de acordo com a presente invenção tem, pelo menos, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de identidade com a SEQ ID NO: 28.

[099] É para ser entendido que uma combinação tal como aqui descrita compreendendo o segundo composto de acordo com a presente invenção inclui misturas de uma fonte de um primeiro, uma fonte de um segundo e, opcionalmente, uma fonte de um terceiro e/ou ainda um domínio ativo enzimático de acordo com em proporções variadas. De preferência, esta combinação compreende uma fonte de uma primeira e uma segunda fonte de um domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção, em que o referido primeiro e segundo domínios ativos enzimáticos estão presentes em quantidades equimolares. Também preferida é uma combinação compreendendo uma fonte de um primeiro, um segundo e uma fonte de um terceiro domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção, em que o referido primeiro, segundo e terceiro domínios ativos enzimáticos estão presentes em quantidades equimolares. Também preferida é uma combinação compreendendo uma fonte de uma primeira, uma fonte de uma segunda, uma fonte de uma terceira e uma fonte de um outro domínio ativo enzimático de acordo com a presente invenção, em que o referido primeiro, segundo, terceiro e outro domínio ativo enzimático estão presentes em quantidades equimolares.

[0100] Em um segundo aspecto, a invenção proporciona um kit de partes compreendendo: a) um primeiro frasco contendo uma primeira composição compreendendo um primeiro composto tal como definido no primeiro aspecto da invenção; e, b) um segundo frasco contendo uma segunda composição compreendendo um segundo composto conforme definido no primeiro aspecto da invenção; e opcionalmente, c) instruções para uso, de preferência compreendendo um regime de dosagem.

[0101] De um modo preferido, o referido kit de partes, mais especificamente, as referidas primeira e segunda composições do referido kit de partes, é para utilização como um medicamento, preferivelmente para utilização no tratamento de eczema, mais preferivelmente para utilização no tratamento de dermatite atópica, conforme detalhado aqui. Um regime de dosagem é para ser entendido aqui como uma instrução para a administração a um indivíduo em necessidade do mesmo, de preferência, uma instrução que indica uma via de administração, frequência de administração e dosagens de administração, e, opcionalmente, uma instrução para a mistura do referido primeiro e segundo composto imediatamente antes da administração, conforme necessário para o tratamento, de preferência, necessário para o tratamento do eczema, mais preferivelmente para o tratamento da dermatite atópica. Vias de administração, frequências e dosagens preferidas estão detalhadas aqui. Em uma modalidade, a referida primeira composição de acordo com um segundo aspecto e/ou a referida segunda composição de acordo com um segundo aspecto da presente invenção é administrada separadamente, de preferência, como parte de um regime global de tratamento. Em uma modalidade alternativa, a referida primeira composição de acordo com um segundo aspecto e a referida segunda composição de acordo com um segundo aspecto da presente invenção são armazenadas em separado e misturadas imediatamente antes da administração. De um modo preferido, “um pouco antes” é para ser entendido aqui como menos de 120, 60, 30, 15, 5, 4, 3, 2 ou 1 minuto antes da administração, de um modo preferido menos do que 5 minutos antes da administração.

[0102] O referido primeiro e o referido segundo frascos pode ser qualquer frasco pequeno, frasco, tubo, ampola, recipiente, garrafa ou semelhante, adequado para armazenar a referida primeira e segunda composição, tal como aqui definido, respectivamente. Preferencialmente, o referido primeiro e/ou segundo frasco tem um volume de entre 0,1 e 500 ml, de preferência entre 1 e 100 ml, mais preferivelmente de cerca de 5, 10, 50 ou 100 ml.

[0103] Em um terceiro aspecto, a invenção proporciona um método de tratamento compreendendo a administração de uma composição de acordo com o primeiro aspecto da invenção e/ou a administração sequencial ou simultânea de um primeiro e segundo composto de um kit de partes de acordo com o segundo aspecto da presente invenção.

[0104] De um modo preferido, o referido método de tratamento é um método para a prevenção, retardamento e/ou cura de uma doença infecciosa, tal como, mas não limitada a, uma infecção da pele, mastite, pneumonia, meningite, endocardite, síndrome do choque tóxico (TSS), sepse, septicemia, bacteremia, ou osteomielite. De preferência, a referida infecção da pele é selecionada a partir do grupo de acne, rosácea, espinhas, impetigo, bolhas, furúnculos, celulite foliculite, psoríase, carbúnculo, síndrome da pele escaldada e abcessos. De um modo preferido, o referido método de tratamento é um método para a prevenção, retardamento e/ou de cura do eczema, tais como a dermatite atópica, eczema de contato alérgico, eczema de contato, eczema dishidrótico, neurodermatite, eczema numular, eczema seborreico, dermatite de estase, de preferência dermatite atópica. De um modo preferido, o referido método de tratamento é o tratamento tópico de uma infecção da pele e/ou eczema, tal como aqui identificado, a dermatite atópica com maior preferência.

[0105] Englobada na presente invenção é uma composição de acordo com o primeiro aspecto do invento e/ou um kit de partes de acordo com o segundo aspecto da invenção, para utilização como um medicamento. De preferência, a referida composição de acordo com o primeiro aspecto da invenção e ou o referido kit de partes de acordo com o segundo aspecto da invenção é para prevenir, retardar e/ou curar uma doença infecciosa, tal como, mas não limitado a, uma infecção de pele, mastite, pneumonia, meningite, endocardite, síndrome do choque tóxico (TSS), sepse, septicemia, bacteremia, ou osteomielite. De preferência, a referida infecção da pele é selecionada a partir do grupo de acne, rosácea, espinhas, impetigo, bolhas, furúnculos, celulite, foliculite, psoríase, carbúnculo, síndrome da pele escaldada e abcessos. De preferência, a referida composição de acordo com o primeiro aspecto da invenção e/ou o referido kit de partes de acordo com o segundo aspecto da invenção é para uso para prevenir, retardar e/ou curar eczema, tais como dermatite atópica, eczema de contato alérgico, eczema de contato, eczema disidrótico, neurodermatite, eczema numular, eczema seborréica, dermatite de estase, dermatite atópica de preferência.

[0106] Também englobada na presente invenção é a utilização de uma composição de acordo com o primeiro aspecto da invenção e/ou um kit de partes de acordo com o segundo aspecto da invenção para a fabricação de um medicamento. De preferência, o referido medicamento é para a prevenção, retardamento e/ou cura de uma doença infecciosa, tal como, mas não limitada a, uma infecção da pele, mastite, pneumonia, meningite, endocardite, síndrome do choque tóxico (TSS), sepse, septicemia, bacteremia, ou osteomielite. De preferência, a referida infecção da pele é selecionada a partir do grupo de acne, rosácea, espinhas, impetigo, bolhas, furúnculos, celulite, foliculite, psoríase, carbúnculo, síndrome da pele escaldada e abcessos. De preferência, o referido medicamento é um medicamento para a prevenção, retardamento e/ou cura de eczema, tais como a dermatite atópica, eczema de contato alérgico, eczema de contato, eczema dishidrótico, neurodermatite, eczema numular, eczema seborreico, dermatite de estase, de preferência dermatite atópica.

[0107] De preferência, a referida composição de acordo com o primeiro aspecto, uma primeira composição de um kit de partes de acordo com o segundo aspecto e/ou uma segunda composição de um kit de partes de acordo com o segundo aspecto e/ou medicamento, tal como aqui definido é uma formulação tópica aqui entendida como uma formulação, incluindo uma formulação microencapsulada, sendo adequada para administração tópica e pode estar na forma de um creme, pomada, solução, pó, spray, aerossol, cápsula, sólida ou de gel, e/ou pode estar ligada a uma superfície sólida, por exemplo, imobilização com ligantes de afinidade ou por meio de interações iônicas/hidrofóbicas e imobilização covalente.

[0108] Uma composição de acordo com o primeiro aspecto da invenção e/ou uma primeira e/ou segunda composição de um kit de partes de acordo com o segundo aspecto da invenção pode também formar parte de uma lavagem corporal, sabonete, bastão de aplicação ou cosmético.

[0109] Uma composição de acordo com o primeiro aspecto e/ou uma segunda composição de um kit de partes de acordo com o segundo aspecto e/ou uma mistura resultante da mistura da referida primeira e segunda composição de um kit de partes de acordo com o segundo aspecto imediatamente antes da administração como aqui anteriormente indicado, é de preferência dita ser ativa, funcional ou terapeuticamente ativa, quando se diminui a quantidade de células bacterianas, de um modo preferido células bacterianas gram positivas, mais preferencialmente, a quantidade de células bacterianas de Staphylococcus, mais preferencialmente, a quantidade de células bacterianas de Staphylococcus aureus, presente e um paciente ou em uma célula do referido paciente ou em uma linhagem celular ou em um sistema livre de célula in vitro e preferencialmente significa que 99%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30% , 20%, 10%, 5% ou menos da quantidade inicial das referidas células bacterianas é ainda detectável. Mais preferencialmente, nenhuma célula bacteriana, de um modo preferido nenhuma célula bacteriana gram positiva, mais preferencialmente nenhuma célula bacteriana de Staphylococcus, mais preferivelmente nenhuma célula bacteriana de Staphylococcus aureusé detectável. Neste parágrafo, a expressão “quantidade de células bacterianas” significa preferencialmente células bacterianas viáveis. Os estafilococos de todos os gêneros podem ser detectados usando técnicas convencionais conhecidas pelo perito, tais como técnicas de imuno-histoquímica utilizando anticorpos específicos para Staphylococcus, testes de coagulase de tubo que detectam stafilocoagulase ou “coagulase livre”, detecção de proteínas de superfície, tais como fator de aglomeração (teste de deslize da coagulase) e/ou proteína A (ensaios de látex comercial). Os estafilococos viáveis podem ser detectados utilizando técnicas convencionais conhecidas pelo técnico especialista no assunto, tais como técnicas de cultura bacteriana microbiológicas e/ou reação da cadeia de polimerase de transcrição reversa quantitativa em tempo real para mRNA bacteriano. Uma diminuição na quantidade de células bacterianas de acordo com a presente invenção é preferencialmente avaliada em um tecido ou em uma célula de um indivíduo ou de um paciente através da comparação com a quantidade presente no referido indivíduo ou paciente antes do tratamento com a referida composição ou polipeptídeo da invenção. Em alternativa, a comparação pode ser efetuada com um tecido ou células do referido indivíduo ou paciente que ainda não tenha sido tratado com a referida composição ou polipeptídeo no caso do tratamento ser local.

[0110] De preferência, uma composição de acordo com o primeiro aspecto da invenção e/ou de uma segunda composição de um kit de partes do segundo aspecto da invenção, e/ou uma mistura resultante, resultante de mistura da primeira e da segunda composição do kit de partes do segundo aspecto da invenção, imediatamente antes da administração como aqui identificada, antes compreende uma quantidade de um segundo composto, tal como aqui definido, que é terapeuticamente ativo, tal como aqui anteriormente identificado. De preferência, a referida composição é para administração tópica a um indivíduo em necessidade da mesma, de preferência a um paciente que sofre de eczema, e compreende o referido segundo composto, em uma quantidade eficaz, de preferência em uma concentração de 0,001 - 10% em peso da composição total. Dependendo da atividade específica do segundo composto, a quantidade eficaz pode ser tão baixa sobre alguns microgramas/ml, como cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 microgramas/ml a cerca de vários miligramas/ml, tais como cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 mg/ml

[0111] De preferência, uma composição de acordo com o primeiro aspecto da invenção e/ou uma primeira composição de um kit de partes do segundo aspecto da invenção, e/ou uma mistura resultante, resultante de mistura da primeira e da segunda composição do kit de partes do segundo aspecto da invenção, imediatamente antes da administração como aqui identificado, antes é uma composição para aplicação tópica para o tratamento de eczema que compreende um composto anti-inflamatório, selecionado de entre, mas não se limitando a, um corticosteroide um inibidor da calcineurina, um composto imunoterapêutico, um IFN-gama recombinante humano, um probiótico microbiano, um modulador de citocina, um bloqueador do recrutamento de células inflamatórias, um inibidor da ativação de células T, ou uma combinação destes. De preferência, a referida composição é para administração tópica a um indivíduo em necessidade do mesmo, de preferência a um paciente que sofre de eczema, e compreende o referido composto anti-inflamatório composto em uma quantidade eficaz, de preferência no intervalo de 0,01 a 10% em peso da composição total, de preferência em um intervalo de 0,05 a 5%, mais preferencialmente em um intervalo de 0,05 a 2,5%, ainda mais preferivelmente em um intervalo de 0,1 a 1%.

[0112] De preferência, uma composição de acordo com o primeiro aspecto da invenção e/ou uma primeira composição de um kit de partes do segundo aspecto da invenção, e/ou uma mistura resultante, resultante de mistura da primeira e da segunda composição do kit de partes do segundo aspecto da invenção, imediatamente antes da administração como aqui identificado antes é uma composição para aplicação tópica para o tratamento de eczema compreendendo um corticosteroide no intervalo de 0,05 a 5% por peso da composição total, de preferência em um intervalo de 0,05 a 2.5 %, mais preferivelmente em um intervalo de 0,1 a 1%, ainda mais de preferência compreendendo cerca de 0,05% de propionato de clobetasol, cerca de 0,05% de propionato de halobetasol, cerca de 0,1% de fluocinonida, cerca de 0,05% de diacetato de diflorasona, cerca de 0,1% de furoato de mometasona, cerca de 0,1% de halcinonida, cerca de 0,25% de desoximetasona, cerca de 0,05% de fluocinonida, cerca de 0,05% de desoximetasona, cerca de 0,1% de pivalato de clocortolona, cerca de 0,1% de furoato de mometasona, cerca de 0,1% de acetonida de triamcinolona, cerca de 0,1% de valerato de betametasona, cerca de 0,025% de acetonida de fluocinolona, cerca de 0,05% propionato de fluticasona, cerca de 0,1% prednicarbato, cerca de 0,1% de probutato de hidrocortisona, cerca de 0,1% de acetonida de triamcinolona, cerca de 0,05% de dipropionato de alclometasona, cerca de 0,05% de desonida, cerca de 0,025% de acetonida de triamcinolona, cerca de 0,1% de butirato de hidrocortisona, cerca de 0,01% de acetonida de fluocinolona, cerca de 1% de acetato de hidrocortisona, cerca de 2% de hidrocortisona, cerca de 2,5% de hidrocortisona e/ou 0,5-1% de hidrocortisona. Cerca de é aqui definido como um valor de menos ou mais de 10% do valor indicado.

[0113] Uma composição de acordo com o primeiro aspecto, uma primeira composição de um kit de partes de acordo com o segundo aspecto e/ou uma segunda composição de um kit de partes de acordo com o segundo aspecto e/ou medicamento, tal como aqui definido, pode estar na forma líquida, sólida ou semilíquida ou semissólida, de um modo preferido compreendendo ainda um veículo, excipiente e/ou estabilizante farmaceuticamente aceitável. Exemplos de veículos, excipientes e estabilizantes farmaceuticamente aceitáveis, incluem, mas não estão limitados a, tampões tais como fosfato, citrato, e outros ácidos orgânicos; antioxidantes incluindo ácido ascórbico; polipeptídeos de baixo peso molecular; proteínas, tais como albumina do soro e a gelatina; polímeros hidrófilos tais como polivinilpirrolidona; aminoácidos tais como glicina, glutamina, asparagina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos, e outros carboidratos incluindo glicose manose, ou dextrinas; agentes quelantes tais como EDTA; álcoois de açúcar tais como manitol ou sorbitol; contra- íons formadores de sal, tais como sódio; e/ou surfatantes não iônicos tais como polissorbato (TWEENTM), polietilenoglicol (PEG), e PLURONICSTM (poloxâmeros); e espessantes poliméricos, tais como agentes gelificantes hidrofílicos e hidroalcoólicos usados frequentemente nas indústrias cosmética e farmacêutica, de um modo preferido um agente gelificante compreende entre cerca de 0,2% e cerca de 4% por peso de composição. Uma composição de acordo com o primeiro aspecto, uma primeira composição de um kit de partes de acordo com o segundo aspecto e/ou uma segunda composição de um kit de partes de acordo com o segundo aspecto e/ou medicamento, tal como aqui definido, também podem incluir um lubrificante, um agente molhante, um adoçante, um agente aromatizante, um emulsionante, um agente de suspensão, um protetor solar, tais como, mas não limitado a, dióxido de titânio ou de cinamato de metila, e/ou um conservante, além dos ingredientes acima mencionados, de preferência, um conservante está presente como cerca de 0,05% a 0,5% em peso da composição total. Uma composição de acordo com o primeiro aspecto, uma primeira composição de um kit de partes de acordo com o segundo aspecto e/ou uma segunda composição de um kit de partes de acordo com o segundo aspecto e/ou medicamento, tal como definido neste documento também podem incluir um veículo que são conhecidos na técnica (tal como um carboidrato e um álcool de açúcar) para ajudar na exposição da pele a um medicamento.

[0114] De preferência, uma composição de acordo com o primeiro aspecto, uma primeira composição de um kit de partes de acordo com o segundo aspecto e/ou uma segunda composição de um kit de partes de acordo com o segundo aspecto e/ou um medicamento tal como aqui definido compreende ainda um ingrediente ativo adicional. Um ingrediente ativo adicional pode ser qualquer um, mas não está limitado a, um agente anti-inflamatório; um agente antibiótico padrão ou convencional, tal como, mas não limitados a penicilina, as penicilinas sintéticas, bacitracina, meticilina, cefalosporina, polimixina, cefaclor, cefadroxil, nafato de cefamandol, cefazolina, cefixima, cefmetazol, cefonicida, cefoperazona, ceforanida, cefotanme, cefotaxima, cefotetano, cefoxitina, cefpodoxima proxetil, ceftazidima, ceftizoxima, ceftriaxona, ceftriaxona moxalatam, cefuroxima, cefalexina, cefalosporina C, cefalosporina sal de sódio C, cefalotina, cefalotina sal de sódio, cefapirina, cefradina, axetil cefuroxima, cefalotina dihidratada, moxalatam, loracarbef mafate e/ou agentes quelantes; um agente antifúngico, tal como, mas não limitado a, nitrato de oxiconazol, ciclopirox olamina, cetoconazol, nitrato de miconazol e nitrato de butoconazol; um anti-andrógeno, tais como, mas não se limitando a, flutamida e/ou finasterida; um agente anestésico local, tais como, mas não se limitando a tetracaína, cloridrato de tetracaína, lidocaína, cloridrato de lidocaina, diclonina, cloridrato de diclonina, cloridrato de dimetisoquina, dibucaína, cloridrato de dibucaína, butambenpicrato e/ou cloridrato de pramoxina; e dapsona que tem ambas as propriedades anti-microbianas e anti-inflamatórias. Percentagens em peso preferidas de agentes antimicrobianos são 0,1% a 10% em peso da composição total. Percentagens em peso preferidas para os anestésicos locais são de 0,025% a 5% por peso da composição total.

[0115] Uma composição de acordo com o primeiro aspecto, uma primeira composição de acordo com um segundo aspecto e/ou uma segunda composição de acordo com um segundo aspecto e/ou medicamento, tal como aqui definido podem ser utilizados para tratar animais, incluindo seres humanos, sofrendo de qualquer uma de uma doença infecciosa e/ou eczema como identificados aqui acima, de um modo preferido de dermatite atópica.

[0116] Uma via preferida de administração da referida composição e/ou o referido medicamento se qualquer via de administração adequada que pode ser utilizada para administrar a referida composição de acordo com o primeiro aspecto, a referida primeira composição de acordo com um segundo aspecto e/ou a referida segunda composição de acordo com um segundo aspecto e/ou medicamento, tal como definido neste documento, incluindo, mas não se limitado a: por via oral, aerossol ou outro dispositivo para a administração aos pulmões, spray nasal, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intratecal, vaginal, retal, tópica, de punção lombar, intratecal, e aplicação direta para o cérebro e/ou meninges. De preferência, a referida composição de acordo com o primeiro aspecto, a referida primeira composição de acordo com um segundo aspecto e/ou a referida segunda composição de acordo com um segundo aspecto e/ou medicamento, tal como aqui definidos são administrados de forma tópica, de preferência na parte lateral da infecção e/ou lesão e/ou, no caso do eczema, de preferência, no lado do rash cutâneo.

[0117] A frequência de administração preferida da referida composição e/ou o referido medicamento é uma ou duas vezes por dia, de preferência para a área da pele afetada pela doença, ou para o lado da lesão conhecido na técnica como o lado da erupção. Preferencialmente, o referido tratamento é continuado enquanto for necessário para a erupção ser solucionada. Preferivelmente, o referido tratamento é continuado durante 2 a 3 dias, durante 7 a 10 dias e/ou durante 2 a 3 semanas. De preferência, uma quantidade total da composição para aplicação tópica é administrada como aqui identificada, resultando em uma aplicação total de cerca de 1 grama de corticosteroide para a pessoa em necessidade da mesma.

[0118] Uma dosagem preferida de administração da referida composição e/ou o referido medicamento é uma dosagem contendo uma quantidade efetiva total do referido primeiro e segundo composto resultando na prevenção, retardamento e/ou cura de doenças infecciosas e/ou eczema, tal como aqui anteriormente identificado, de preferência o eczema, a dermatite atópica com maior preferência.

Definições

[0119] “Identidade de sequência” ou “identidade” no contexto da sequência de aminoácido ou ácido nucleico é aqui definida como uma relação entre dois ou mais aminoácido (peptídeo, polipeptídeo, ou proteína) ou sequências de dois ou mais de ácido nucleico (nucleotídeos, polinucleotídicas), tal como determinado por comparação das sequências. Na técnica, “identidade” também significa o grau de relação de sequências entre sequências de aminoácidos ou de nucleotídeos, como o caso pode ser, como determinado pela correspondência entre cadeias de tais sequências. No escopo da presente invenção, a identidade de sequência com uma sequência particular significa de preferência de identidade de sequência ao longo de todo o comprimento do referido polipeptídeo particular ou sequência de polinucleotídeo. A informação da sequência como aqui fornecida não deve ser interpretada restritivamente de modo a exigir a inclusão de bases erroneamente identificadas. O técnico especialista no assunto é capaz de identificar tais bases erroneamente identificadas e sabe como corrigir tais erros.

[0120] “Semelhança” entre duas sequências de aminoácidos é determinada através da comparação da sequência de aminoácidos e dos seus substitutos de aminoácido conservados de um peptídeo ou polipeptídeo com a sequência de um segundo peptídeo ou polipeptídeo. Em uma modalidade preferida, a identidade ou semelhança é calculada ao longo de toda a SEQ ID NO como aqui identificada. “Identidade” e “semelhança” podem ser facilmente calculadas por métodos conhecidos, incluindo mas não limitados aos descritos em Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heine, G., Academic Press, 1987; and Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; and Carillo, H., and Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48:1073 (1988).

[0121] Os métodos preferidos para determinar a identidade são projetados para dar a maior correspondência entre as sequências testadas. Métodos para determinar a identidade e semelhança estão codificados em programas de computador disponíveis publicamente. Métodos de programas de computador preferidos para determinar a identidade e semelhança entre duas sequências incluem, por exemplo, o pacote de programas GCG (Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research 12 (1): 387 (1984)), BestFit, BLASTP, BLASTN, and FASTA (Altschul, S. F. et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990). O programa BLAST X está disponível ao público a partir do NCBI e outras fontes (BLAST Manual, Altschul, S., et al., NCBI NLM NIH Bethesda, MD 20894; Altschul, S., et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990). O algoritmo de Smith Waterman bem conhecido pode também ser utilizado para determinar a identidade.

[0122] Os parâmetros preferidos para a comparação de sequência de polipeptídeo incluem o seguinte: Algoritmo: Needleman e Wunsch, J. Mol. Biol. 48: 443-453 (1970); Matriz de comparação: BLOSSUM62 de Hentikoff e Hentikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA. 89: 10915-10919 (1992); Penalidade de Lacuna: 12; e Penalidade de Comprimento de Lacuna: 4. Um programa útil com estes parâmetros está disponível ao público como o programa “Ogap” de Genetics Computer Group, localizada em Madison, WI. Os parâmetros acima referidos são os parâmetros padrão para comparações de aminoácidos (juntamente com nenhuma penalidade para lacunas terminais).

[0123] Os parâmetros preferidos para a comparação de ácido nucleico incluem os seguintes: Algoritmo: Needleman e Wunsch, J. Mol. Biol. 48: 443-453 (1970); Matriz de comparação: compatibilidades = + 10, incompatibilidade = 0; Penalidade de Lacuna: 50; Penalidade de Comprimento de Lacuna: 3. Disponível como o programa Gap de Genetics Computer Group, localizado em Madison, Wis. Dado acima são os parâmetros por omissão para comparações de ácidos nucleicos.

[0124] Opcionalmente, para determinar o grau de semelhança de aminoácidos, o técnico especialista no assunto pode também ter em conta as chamadas substituições de aminoácidos “conservadores”, como será evidente para o técnico da especialista no assunto. As substituições conservadoras de aminoácidos referem-se à intermutabilidade de resíduos possuindo cadeias laterais semelhantes. Por exemplo, um grupo de aminoácidos possuindo cadeias laterais alifáticas é glicina, alanina, valina, leucina, e isoleucina; um grupo de aminoácidos possuindo cadeias laterais hidroxila alifáticas é serina e treonina; um grupo de aminoácidos possuindo cadeias laterais contendo amida é asparagina e glutamina; um grupo de aminoácidos possuindo cadeias laterais aromáticas é fenilalanina, tirosina e triptofano; um grupo de aminoácidos possuindo cadeias laterais básicas é lisina, arginina e histidina; e um grupo de aminoácidos possuindo cadeias laterais contendo enxofre é cisteína e metionina. Grupos de substituição conservativa de aminoácidos preferidos são: valina-leucina-isoleucina, fenilalanina-tirosina, lisina-arginina, alanina-valina e asparagina-glutamina. As variantes de substituição da sequência de aminoácidos aqui divulgadas são aquelas em que pelo menos um resíduo nas sequências reveladas foi removido e um resíduo diferente inserido no seu lugar. De preferência, a alteração de aminoácidos é conservadora. Substituições conservadoras preferidas para cada um dos aminoácidos que ocorrem naturalmente são as seguintes: Ala para ser; Arg para lys; Asn para gln or his; Asp para glu; Cys para ser ou ala; Gln para asn; Glu para asp; Gly para pro; His para asn ou gln; Ile para leu ou val; Leu para ile ou val; Lys para arg; gln ou glu; Met para leu ou ile; Phe para met, leu ou tyr; Ser para thr; Thr para ser; Trp para tyr; Tyr para trp ou phe; e, Val para ile ou leu.

[0125] Um polinucleotídeo é representado por uma sequência de nucleotídeos. Um polipeptídeo é representado por uma sequência de aminoácidos. Uma construção de ácido nucleico é definida como um polinucleotídeo que é isolado a partir de um gene que ocorre naturalmente ou que tenha sido modificado para conter segmentos de polinucleotídeos que são combinados ou justapostos de uma forma que não existiria de outra forma na natureza. Opcionalmente, um polinucleotídeo presente numa construção de ácido nucleico está operativamente ligado a uma ou mais sequências de controle, as quais dirigem a produção ou a expressão do referido peptídeo ou polipeptídeo numa célula ou num indivíduo.

[0126] Tal como aqui utilizado, o termo “sequência heteróloga” ou “ácido nucleico heterólogo” é aquele que não se encontra naturalmente ligado operativamente a vizinha sequência da referida sequência de nucleotídeos em primeiro lugar. Tal como aqui utilizado, o termo “heterólogo” pode significar “recombinante”. “Recombinante” refere-se a uma entidade genética distinta daquela geralmente encontrada na natureza. Tal como aplicado a uma sequência de nucleotídeos ou molécula de ácido nucleico, isto significa que a sequência de nucleotídeos referida ou uma molécula de ácido nucleico é o produto de várias combinações de clonagem, restrição e/ou etapas de ligação, e outros procedimentos que resultam na produção de uma construção que é distinta de uma sequência ou molécula encontrada na natureza.

[0127] “Operacionalmente ligada” é aqui definida como uma configuração na qual uma sequência de controle é adequadamente colocada numa posição em relação à sequência de nucleotídeos que codifica para o polipeptídeo da invenção, de tal modo que a sequência de controle dirige a produção / expressão do peptídeo ou polipeptídeo da invenção em uma célula e/ou em um indivíduo.

[0128] “Operacionalmente ligada” também pode ser usado para definir uma configuração em que uma sequência está apropriadamente colocada numa posição em relação a uma outra sequência que codifica para um domínio funcional, tal que um polipeptídeo quimérico é codificado em uma célula e/ou um indivíduo.

[0129] Expressão será entendida como incluindo qualquer etapa envolvida na produção do peptídeo ou polipeptídeo, incluindo, mas não se limitando a, transcrição, modificação pós-transcrição, tradução, modificação pós-tradução e secreção.

[0130] Opcionalmente, um promotor representado por uma sequência de nucleotídeos presentes numa construção de ácido nucleico está operacionalmente ligado a uma outra sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo ou polipeptídeo, tal como aqui identificado.

[0131] O termo “transformação” refere-se a uma alteração genética permanente ou transitória induzida numa célula a seguir à incorporação de DNA novo (isto é,DNA exógeno à célula). Quando a célula é uma célula bacteriana, tal como se pretende na presente invenção, o termo refere- se normalmente a um vetor extracromossômico, auto- replicante, que abriga uma resistência ao antibiótico selecionável.

[0132] Um vetor de expressão pode ser qualquer vetor que pode ser convenientemente submetido a procedimentos de DNA recombinante e pode provocar a expressão de uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo da invenção em uma célula e/ou em um indivíduo. Tal como aqui utilizado, o termo “promotor” refere-se a um fragmento de ácido nucleico que funciona para controlar a transcrição de um ou mais genes ou ácidos nucleicos, localizados a montante em relação à direção de transcrição do local de iniciação de transcrição do gene. Ele está relacionado com o local de ligação identificado pela presença de um sítio de ligação para a polimerase de RNA dependente de DNA, os sítios de iniciação da transcrição, e quaisquer outras sequências de DNA, incluindo, mas não limitadas a, sítios de ligação ao fator de transcrição, sítios de ligação à proteínas repressoras e ativadoras, e quaisquer outras sequências de nucleotídeos conhecidas por um técnico especialista no assunto para atuar diretamente ou indiretamente, para regular a quantidade de transcrição a partir do promotor. Dentro do contexto da presente invenção, um promotor de preferência termina no nucleotídeo -1 do local de início da transcrição (TSS).

[0133] “Polipeptídeo” tal como aqui utilizado refere- se a qualquer peptídeo, oligopeptídeo, um polipeptídeo, produto do gene, a expressão do produto, ou proteína. Um polipeptídeo é compreendido por aminoácidos consecutivos. O termo “polipeptídeo” engloba moléculas de ocorrência natural ou sintéticas.

[0134] O termo “sequências de controle” é aqui definido para incluir todos os componentes que são necessários ou vantajosos para a expressão de um polipeptídeo. Cada sequência de controle pode ser nativa ou estranha para a sequência de ácido nucleico que codifica o polipeptídeo. Tais sequências de controle incluem, mas não estão limitadas a, sequências líder, ótimas de iniciação da tradução (Kozak, tal como descrito em, 1991, J. Biol. Chem. 266: 19867-19870), uma sequência de poliadenilação, uma sequência de pró-peptídeo, uma sequência de pré-pro- peptídeo, um promotor, uma sequência de sinal, e um terminador de transcrição. No mínimo, as sequências de controle incluem um promotor, e sinais de parada da transcrição e da tradução.

[0135] As sequências de controle podem ser proporcionadas com elementos de ligação com a finalidade de introduzir sítios de restrição específicos que facilitam a ligação das sequências de controle com a região de codificação da sequência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo.

[0136] A sequência de controle pode ser uma sequência promotora adequada, uma sequência de ácido nucleico, que é reconhecida por uma célula hospedeira para expressão da sequência de ácido nucleico. A sequência do promotor contém sequências de controle da transcrição, que medeiam a expressão do polipeptídeo. O promotor pode ser qualquer sequência de ácido nucleico, que mostra atividade transcripcional na célula incluindo promotores mutantes, truncados, e híbridos, e pode ser obtido a partir de genes que codificam polipeptídeos extracelulares ou intracelulares ou heterólogos ou homólogos para a célula.

[0137] A sequência de controle pode também ser uma sequência de terminação da transcrição adequada, uma sequência reconhecida por uma célula hospedeira para terminar a transcrição. A sequência de terminação está operativamente ligada a extremidade 3' da sequência de ácido nucleico que codifica o polipeptídeo. Qualquer terminador, que é funcional na célula, pode ser utilizado na presente invenção.

[0138] A sequência de controle pode também ser uma sequência líder adequada, uma região não traduzida de um mRNA que é importante para a tradução da célula hospedeira. A sequência líder está operativamente ligada a extremidade 5' da sequência de ácido nucleico que codifica o polipeptídeo. Qualquer sequência líder, que é funcional na célula, pode ser utilizada na presente invenção.

[0139] A sequência de controle pode também ser uma sequência de poliadenilação, uma sequência que está operativamente ligada a extremidade 3' da sequência de ácido nucleico e que, quando transcrita, é reconhecido pela célula hospedeira como um sinal para adicionar os resíduos poliadenosina de mRNA transcrito. Qualquer sequência de poliadenilação, que é funcional na célula, pode ser utilizada na presente invenção.

[0140] Neste documento e nas suas reivindicações, o verbo “compreender” e as suas conjugações é usado no seu sentido não limitativo para significar que os itens seguintes ao termo estão incluídos, mas os itens não especificamente mencionados não são excluídos. Além disso, o verbo “consistir” pode ser substituído por “consistir essencialmente em” significando que um produto ou uma composição ou uma molécula de ácido nucleico ou um peptídeo ou polipeptídeo de uma construção de ácido nucleico ou um vetor ou célula como aqui definido, podem compreender componente(s) adicional do que os especificamente identificados; o referido componente(s) adicional não alterando a caraterística única da invenção. Além disso, a referência a um elemento pelo artigo indefinido “um” ou “uma” não exclui a possibilidade de que mais do que um dos elementos está presente, a menos que o contexto claramente exija que haja um e apenas um dos elementos. O artigo indefinido “um” ou “uma”, portanto, geralmente significa “pelo menos um”.

[0141] Todas as referências a patentes e literatura citadas no presente relatório descritivo são aqui incorporadas por referência na sua totalidade.

[0142] Os exemplos que se seguem são oferecidos apenas para fins ilustrativos, e não se destinam a limitar o escopo da presente invenção de qualquer forma.

Exemplos O uso de corticosteróides e um composto que tem especificamente S. aureus (Staphefekt™) como alvo

[0143] Em várias formas de dermatite, cursos de terapia corticosteroide tópica são utilizados para suprimir os sintomas de inflamação local. No entanto, os corticosteroides não tratam a causa subjacente da inflamação, e os sintomas são conhecidos para retornar eventualmente. Postula-se que um segundo composto de acordo com a presente invenção são eficazes em combinação com tratamento com corticosteroides. Como um segundo composto de acordo com a invenção, um composto que tem especificamente S. aureus como alvo foi utilizado. O composto Staphefekt™ (Gladskin™) foi obtido a partir de Micreos Human Health B.V., The Netherlands. Desde Staphefekt™ erradica S. aureus como um fator etiológico da inflamação local, foi especulado que durante o tratamento com Staphefekt™ seria necessário menos corticosteroides para aliviar os sintomas.

[0144] Para estudar o uso de corticosteroide durante o tratamento com Staphefekt™, a utilização de corticosteroides e alívio dos sintomas foi monitorado em oito pacientes, dos quais o tratamento de vários tipos de dermatite com Staphefekt™ foi guiado e observado por um médico (tabela 1). Nos seis casos em que S. aureus foi encontrado, os sintomas diminuíram durante o tratamento com Staphefekt™, e os pacientes relataram menos necessidade de corticosteroides de forma de anamnese. Em um paciente com eczema grave constitucional, a carga de S. aureus foi alta e os sintomas diminuíram apenas moderadamente com Staphefek™, necessitando a utilização inalterada de corticosteroides e eventualmente até mesmo supressão imunológica com Neoral. Em um caso em que não S. aureus foi encontrado, Staphefekt™ não teve nenhum efeito sobre os sintomas e a utilização de corticosteroides permaneceu inalterada.

[0145] O uso de corticosteroides não foi completamente abandonado nos pacientes tratados com sucesso, especialmente com a recorrência dos sintomas após a cessação do uso de Staphefekt™. Isto sugere que um alívio rápido dos sintomas na fase de inflamação local é melhor alcançado pela combinação de corticoterapia sintomática com erradicação da S. aureus carriership etiológica por Staphefekt™.

[0146] A necessidade reduzida de corticosteroides como observado no feedback do cliente, questionários e o presente estudo com Staphefekt™ pelo médico guiada indicam claramente que uma dose mais baixa ou curso mais curto de corticosteroides seria eficaz em terapia de combinação com um segundo composto de acordo com a presente invenção, in casu Staphefekt™. Tabela 1. Casos de Staphefekt™ guiados pelo médico. Tabela 2: Tabela de visão geral SEQ ID NO

Claims

1. Composição compreendendo um primeiro e um segundo composto caracterizada pelo fato de que o referido primeiro composto é um composto anti-inflamatório e o referido segundo composto é um composto que tem como alvo especificamente uma célula bacteriana e em que o referido segundo composto compreende pelo menos um domínio de ligação da parede celular que se liga especificamente à parede celular de peptideoglicano da referida célula bacteriana, em que o referido segundo composto é um polipeptídeo que tem a sequência SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 98 ou 100; e o referido domínio de ligação da parede celular tem a sequência SEQ ID NO: 4, 6 ou 8; e em que um ou mais dos referidos domínios ativos enzimáticos tem a sequência SEQ ID NO: 10, 12, 14, 16, 18, 98 ou 100.

2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o referido segundo composto compreende um ou mais domínios ativos enzimáticos que exibem especificidade de ligação ao alvo.

3. Composição, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que a referida ligação ao alvo é uma ligação essencial em uma camada de peptidoglicano da referida célula bacteriana.

4. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 ou 3, caracterizada pelo fato de que um ou mais dos referidos domínios ativos enzimáticos é selecionado a partir de ou é uma combinação de um domínio de um grupo consistindo de uma cisteína, domínio de amidoidrolases/peptidase dependente de histidina, um domínio de endopeptidase, um domínio de amidase e um domínio de glicosilhidrolase.

5. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a referida célula bacteriana é uma Staphylococcus.

6. Composição, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o referido domínio de ligação a parede celular se origina a partir de, ou é um homólogo de, uma endolisina de fago de Staphylococcus e/ou uma lisostafina de S. simulans e/ou uma bacteriocina de S. capitis ALE-1.

7. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que o referido segundo composto é um bacteriófago que ocorre naturalmente ou mutante, uma endolisina que ocorre naturalmente ou um polipeptídeo mutante.

8. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 7, caracterizada pelo fato de que o referido segundo composto é um polipeptídeo recombinante que compreende uma multiplicidade de um ou mais dos referidos domínios ativos enzimáticos exibindo especificidade de ligação ao alvo.

9. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o referido primeiro composto é selecionado a partir do grupo que consiste em um corticosteroide, um inibidor da calcineurina, um composto imunoterapêutico, um IFN-gama de humano recombinante, um probiótico microbiano, um modulador de citocina, um bloqueador do recrutamento de célula inflamatória, e um inibidor da ativação de célula T.

10. Kit de partes caracterizado pelo fato de que compreende: a) um primeiro frasco contendo uma primeira composição compreendendo um primeiro composto conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9; e, b) um segundo frasco contendo uma segunda composição compreendendo um segundo composto conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9.

11. Uso de uma composição conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 9 caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento, para uso na prevenção, retardamento e/ou cura de dermatite ou eczema.

12. Uso de um kit de partes conforme definido na reivindicação 10 caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para uso na prevenção, retardamento e/ou cura de dermatite ou eczema.