BR112015029959B1

BR112015029959B1 - Processo para a produção de uma quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas, quitina ou um derivado das mesmas; e processo para a produção de uma quitosana neutra com baixo teor de endotoxinas, um sal de quitosana ou um derivado de quitosana

Info

Publication number: BR112015029959B1
Application number: BR112015029959-8A
Authority: BR
Inventors: Hardy Craig; Hoggarth Andrew; Gladman June
Original assignee: Medtrade Products Limited
Priority date: 2013-05-29
Filing date: 2014-05-29
Publication date: 2021-11-03
Also published as: GB201309607D0; AU2014272884B2; AU2018253648A1; BR112015029959A2; JP6851823B2; KR102308191B1; CN105408360A; AU2014272884A1; JP2020172660A; CN110396142A; PL3004179T3; JP7339378B2; RU2015155298A3; JP2022068318A; CA2913850C; EP3004179B1; GB2515187A; RU2015155298A; JP2016520156A; KR20160030484A

Abstract

PROCESSO PARA A PRODUÇÃO DE UMA QUITOSANA ALCALINA COM BAIXO TEOR DE ENDOTOXINAS, QUITINA OU UM DERIVADO DAS MESMAS; PROCESSO PARA A PRODUÇÃO DE UMA QUITOSANA NEUTRA COM BAIXO TEOR DE ENDO-TOXINAS, UM SAL DE QUITOSANA OU UM DERIVADO DE QUITOSANA; QUITOSA-NA ALCALINA COM BAIXO TEOR DE ENDOTOXINAS, QUITINA, DERIVADO DE QUITOSANA OU DERIVADO DE QUITINA; QUITOSANA ALCALINA, QUITINA, DERI-VADO DE QUITOSANA OU DERIVADO DE QUITI NA, OU QUITOSANA NEUTRA, UM SAL DE QUITOSANA OU UM DERIVADO DE QUITOSANA; E CURATIVO HEMOS-TÁTICO PARA FERIDA A presente invenção refere- se a um processo para a produção de uma quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas, quitina, derivado de quitosana ou derivado de quitina e também a um processo para a produção de quitosana neutra com baixo teor de endotoxinas, sal de quitosana e derivados de quitosana, e aos produtos de tais processos. O processo compreende colocar em contato a quitosana, quitina, derivado de quitosana ou derivado de quitina, com uma solução alcalina tendo uma concentração de menos do que Q, 25M para formar uma mistura; deixando a mistura durante um período de menos do que 12 horas e, opcionalmente, secando a mistura. A quitosana alcalina com baixo teor (...).

Description

[0001] A presente invenção refere-se a um processo para a produção de uma quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas e também a um processo para a produção de quitosana neutra com baixo teor de endotoxinas, sal de quitosana e derivados de quitosana, e aos produtos de tais processos.

[0002] Quitosana é particularmente utilizável na preparação de materiais hemostáticos para uso no controle do sangramento.

[0003] Quitosana é um derivado de resíduos sólidos de processamento de crustáceos e pode ser extraída a partir da cultura de fungos. A quitosana é um material polimérico catiônico insolúvel em água. Antes de usar a quitosana em materiais hemostáticos, ela é muitas vezes primeiro convertida em um sal solúvel em água. Desta forma, o sal de quitosana é solúvel no sangue para formar um gel, que retém o fluxo sanguíneo.

[0004] Os sais de quitosana são ideais para as aplicações aqui descritas porque a quitosana é facilmente rompida no organismo. A quitosana é convertida em glucosamina pela enzima lisozima sendo, assim, excretada do corpo naturalmente. Não é necessário remover a quitosana do corpo. Além disso, sais de quitosana apresentam propriedades antibacterianas leves e, como tal, o seu uso reduz o risco de infecção.

[0005] A fim de utilizar a quitosana na preparação de materiais hemostáticos que são apropriados para uso em controle de sangramento, é necessário assegurar que a quitosana tenha uma concentração suficientemente baixa de endotoxinas.

[0006] Endotoxina é um lipopolissacarídeo existente sobre a superfície da membrana exterior de bactérias gram-negativas. As endotoxinas são altamente tóxicas para os mamíferos, particularmente humanos, e são notoriamente difíceis de remover dos materiais. Endotoxinas podem tornar-se pirogênicas quando liberadas na corrente sanguínea ou outro tecido em que elas normalmente não são encontradas. Assim, endotoxinas devem ser removidas de produtos farmaceuticamente aceitáveis.

[0007] Tratamentos para remover ou destruir pirogênios, particularmente endotoxina, são referidos como métodos de 'despirogenação'. As técnicas para a despirogenação de materiais contendo endotoxinas incluem cromatografia de troca iônica, ultrafiltração, destilação e vários processos químicos que visam destruir a endotoxina.

[0008] WO2008063503 refere-se a um método de remoção de endotoxina a partir de quitosana, incluindo as seguintes etapas:a) uso de equipamento e materiais estéreis e isentos de pirogênios em um ambiente estéril;b) intumescimento da quitosana contendo endotoxinas em até 24 horas;c) dissolução de 1kg/25L para 1,5 kg/25L da quitosana em 0,01M a 4,0M de uma base hidróxido;d) agitação continua da solução de base de quitosana resultante;e) aquecimento da solução entre 60-100oC durante 45 minutos a 4 horas, com agitação;f) enxágue da solução com até 10x volume de água livre de endotoxina ultra- pura;g) neutralização da solução a um pH entre 6,8 e 7,5;h) formação de uma pasta fluida de quitosana com baixo teor de endotoxinas ultra-pura e transferência para um sistema fechado sem endotoxinas;i) remoção do excesso de água da pasta fluida.

[0009] Este é um processo complicado e dispendioso, especialmente com a necessidade de equipamento estéril e a necessidade de enxaguar a solução com 10 x o volume de água livre de endotoxina.

[0010] US2006293509 refere-se a um método de fabricação de uma quitosana solúvel em água tendo um baixo teor de endotoxinas por:(a) contato de quitosana insolúvel em água com uma solução de base durante um primeiro período de tempo superior a 1 hora;(b) enxágue da quitosana insolúvel em água para remover a solução de base residual, desejavelmente com água isenta de endotoxina;(c) acetilação parcial da quitosana insolúvel em água em uma solução de reação contendo um agente de transferência de fase;(d) dissolução da quitosana solúvel em água parcialmente acetilada em uma solução aquosa contendo um tensoativo e com um pH de cerca de 7,0 a cerca de 7,4;(e) adição de um solvente miscível em água na solução aquosa e ajuste ainda mais o pH da solução aquosa a um pH de pelo menos 8,0 para provocar a precipitação da quitosana solúvel em água tendo um baixo teor de endotoxinas a partir da solução aquosa /mistura de solventes miscíveis em água; e(f) opcionalmente lavar em um não solvente como isopropanol.

[0011] No entanto, este processo é complicado e caro e, desejavelmente, envolve o uso de grandes quantidades de água livre de endotoxinas ou outros líquidos. O processo também requer o uso de agentes de transferência de fase e ocorre durante algumas horas.

[0012] TW593342 refere-se a um método de redução de endotoxinas em quitosana por:(g) dissolução de quitosana contendo endotoxinas em uma solução aquosa;(h) contato da solução aquosa com um tensoativo para formar um sólido insolúvel e uma solução aquosa reduzida no teor de endotoxina;(i) uso de um meio de separação sólido/líquido para separar o sólido a partir da solução aquosa.

[0013] No entanto, este processo requer um tensoativo para reagir com a quitosana dissolvida para dar um sólido insolúvel. O sólido resultante será uma mistura de quitosana e tensoativo ou um produto de reação entre a quitosana e tensoativo.

[0014] A presente invenção visa atenuar as dificuldades acima mencionadas.

[0015] De acordo com um primeiro aspecto da presente invenção, provê-se um processo para a produção de uma quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas, quitina ou um derivado das mesmas, o processo compreendendo as etapas de:(j) contatar quitosana, quitina, um derivado de quitosana ou um derivado de quitina com uma solução alcalina tendo uma concentração de menos do que 0,25M para formar uma mistura; e(k) deixar a mistura durante um período menor do que 12 horas.

[0016] O processo da presente invenção pode compreender ainda a etapa (c) de secar a mistura.

[0017] O processo da presente invenção prevê uma forma eficaz de obtenção de uma quitosana alcalina, quitina, derivado de quitosana ou derivado de quitina tendo uma baixa concentração de endotoxina. Vantajosamente, o processo não necessita de uma etapa de lavagem, uma etapa de enxágue, uso de um tensoativo ou agentes de transferência de fase, equipamento estéril e/ou o uso de água livre de endotoxina. Além disso, também não são necessárias filtração do ar especializada ou condições estéreis. O processo da presente invenção preferivelmente não compreende uma etapa de acetilação da quitosana. Além disso, o processo da presente invenção não usa o equipamento livre de endotoxinas. Isto é particularmente benéfico uma vez que reduz o custo do processo em comparação com processos requerendo tal equipamento.

[0018] Pelo termo "derivado de quitosana" entende-se aqui uma quitina parcialmente deacetilada, que pode ter diferentes percentagens de deacetilação, como desejado. Tipicamente, a quitina parcialmente deacetilada apropriada para uso na presente invenção tem um grau de deacetilação acima de cerca de 50%, mais tipicamente acima de cerca de 75% e mais tipicamente acima de cerca de 85%.

[0019] Também são aqui incluídos dentro do termo 'derivados' os produtos da reação de quitosana ou quitina com outros compostos. Tais produtos de reação incluem, mas não são limitados a, carboximetil quitosana, hidroxil butil quitina, N-acil quitosana, O-acil quitosana, N-alquil quitosana, O-alquil quitosana, N-alquilideno quitosana, O-sulfonil quitosana, quitosana sulfatada, quitosana fosforilada, quitosana nitrada, quitina alcalina, quitosana alcalina ou quelatos de metal com quitosana, etc.

[0020] Embora o primeiro aspecto da presente invenção fornece um processo para a produção de quitosana com baixo teor de endotoxinas, quitina ou um derivado das mesmas, ele é descrito a seguir em relação à quitosana por conveniência e apenas para fins ilustrativos.

[0021] A quitosana pode ser quitosana disponível comercialmente, como quitosana de tipo alimentar, tipo médico ou de tipo farmacêutico. O processo da presente invenção pode, portanto, ser operável para dar uma quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas a partir de quitosana disponível comercialmente. Isto é diferente para determinados processos em que as endotoxinas podem ser removidas ou reduzidas como parte de um processo de produção de quitosana. Vantajosamente, o processo da presente invenção pode ser usado para dar uma quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas preparada a partir de quitosana que seria de outra forma inapropriada para a área médica devido à sua concentração de endotoxinas.

[0022] A termo quitosana alcalina é aqui usado para fazer referência a uma composição de quitosana tendo um valor de pH maior do que pH 7,5.

[0023] O termo solução alcalina é aqui usado para fazer referência a uma solução tendo um valor de pH maior do que pH 7,5.

[0024] Uma vez que o peso molecular de endotoxinas pode variar de forma significativa, a concentração de endotoxinas é medida em unidades de endotoxina (EU) por grama de material. A medição da concentração de endotoxina é uma quantificação de níveis de endotoxina em relação a uma quantidade específica de endotoxina de referência.

[0025] Por exemplo, na presente invenção, a concentração de endotoxina é medida em unidades de endotoxina (EU) por grama de quitosana. O termo "baixo teor de endotoxinas" é aqui usado para fazer referência a uma concentração de endotoxinas menor do que 50 unidades de endotoxina (EU) por grama de quitosana.

[0026] O processo da presente invenção é, portanto, apropriado para fabricar uma quitosana alcalina tendo uma concentração de endotoxinas menor do que 50EU/g.

[0027] Preferivelmente, a quitosana alcalina resultante tem uma concentração de endotoxinas menor do que 30EU/g, mais preferivelmente menor do que 20EU/g, mais preferivelmente menor do que 15EU/g, ainda mais preferivelmente menor do que 10EU/g e mais preferivelmente menor do que 5EU/g.

[0028] Verificou-se que concentrações baixas de solução alcalina produzem um produto com propriedades desejáveis. A concentração de solução alcalina usada no processo pode ser de 0,2M ou menor. Preferivelmente, a concentração de solução alcalina é em torno de 0,01M a 0,2M. Mais preferivelmente, a concentração de solução alcalina é em torno de 0,02M a 0,1M. A concentração de solução alcalina pode ser em torno de 0,04M a 0,06M, tipicamente 0,05M. Concentrações de solução alcalina podem ser de até em torno de 0,01M, 0,05M, 0,10M, 0,15M, 0,20M ou 0,25M. Bons resultados foram observados com uma concentração de solução alcalina de 0,1M.

[0029] Em algumas modalidades, a quantidade de solução alcalina para quitosana pode estar na faixa de cerca de 1 parte de quitosana a cerca de 10 partes de solução alcalina até cerca de 10 partes de solução de quitosana alcalina cerca de 1 parte. Preferivelmente, a quantidade de solução alcalina de quitosana é de cerca de 1 parte de solução alcalina a cerca de 2 partes de quitosana, mais preferivelmente cerca de 1 parte de solução alcalina a cerca de 1 parte de quitosana.

[0030] A solução alcalina pode compreender um componente de metal alcalino ou alcalino-terroso selecionado a partir dos seguintes, sozinhos ou em combinação: hidróxidos de metal, carbonatos de metal, bissulfitos de metal, persilicatos de metal, bases conjugadas e hidróxido de amônio.

[0031] Os metais adequados incluem sódio, potássio, cálcio ou magnésio.

[0032] Preferivelmente, o componente alcalino é hidróxido de sódio, hidróxido de potássio ou carbonato de sódio. Tipicamente, o hidróxido de sódio é usado.

[0033] A solução alcalina pode ser contatada com a quitosana por quaisquer meios apropriados conhecidos na técnica. Por exemplo, a solução alcalina pode ser pulverizada sobre a quitosana ou a quitosana pode ser misturada com a solução alcalina. Preferivelmente, há uma distribuição uniforme da quitosana alcalina contatada.

[0034] Preferivelmente, a quitosana é misturada com a solução alcalina. Com pesos moleculares baixos, a quitosana pode dissolver parcialmente ou completamente na solução alcalina. A quitosana pode ser misturada com a solução alcalina na etapa (a) até cerca de 30 minutos, mais preferivelmente durante cerca de 10 minutos. Em algumas modalidades, a quitosana pode ser misturada com a solução alcalina durante mais de 30 minutos.

[0035] Em algumas modalidades, a quitosana não se dissolve na solução alcalina.

[0036] Em algumas modalidades, a quitosana não intumesce na solução alcalina.

[0037] Em algumas modalidades, a solução alcalina molha a quitosana sem dissolver ou intumescer a quitosana.

[0038] Em algumas modalidades, a mistura de quitosana e solução alcalina pode ser agitada intermitentemente durante a duração da etapa (b).

[0039] A mistura da quitosana e solução alcalina é deixada durante um período de tempo em que suficiente endotoxina é destruída. A mistura de quitosana e solução alcalina é deixada durante um período de menos do que 12 horas. Descobriu-se que deixando a quitosana e solução alcalina tendo uma concentração de menos do que 0,25M durante um período de tempo de menos de 12 horas, antes de subsequente processamento, resulta em uma concentração com teor de endotoxina desejavelmente baixo na quitosana alcalina resultante.

[0040] É uma vantagem do processo da presente invenção que a mistura possa ser deixada sem a necessidade de uma mistura continuada da quitosana com a solução alcalina.

[0041] Em algumas modalidades, a mistura pode ser deixada na etapa (b) durante um período de menos do que 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ou 1 horas. A mistura pode ser deixada na etapa (b) durante um período de menos do que 10 horas, preferivelmente menos do que 8 horas, mais preferivelmente menos do que 6 horas, ainda mais preferivelmente menos do que 4 horas e o mais preferivelmente menos do que 2 horas.

[0042] Em algumas modalidades, a mistura pode ser deixada na etapa (b) durante um período de mais do que 1 mas menos do que 12 horas; mais do que 2 mas menos do que 12 horas; mais do que 3 mas menos do que 12 horas; mais do que 4 mas menos do que 12 horas; mais do que 5 mas menos do que 12 horas; mais do que 6 mas menos do que 12 horas; mais do que 7 mas menos do que 12 horas; mais do que 8 mas menos do que 12 horas; mais do que 9 mas menos do que 12 horas; mais do que 10 mas menos do que 12 horas; or mais do que 11 mas menos do que 12 horas. Em algumas modalidades , a mistura pode ser deixada em etapa (b) durante um período de entre 1 a 11 horas, 1 a 10 horas, 1 a 9 horas, 1 a 8 horas, 1 a 7 horas, 1 a 6 horas, 1 a 5 horas, 1 a 4 horas, 1 a 3 horas or 1 a 2 horas. Assim, em algumas modalidades , a mistura pode ser deixada durante um período de entre 2 a 10 horas, 4 a 8 horas ou 5 a 7 horas.

[0043] Em algumas modalidades, a mistura pode ser deixada na etapa (b) durante um período de menos do que 1 hora, incluindo menos do que 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, ou 5 minutos. A mistura pode ser deixada durante um período de menos do que três minutos, menos do que dois minutos ou menos do que um minuto.

[0044] Em algumas modalidades, a mistura pode ser deixada na etapa (b) durante um período de tempo que leva para preparar a mistura para um estágio subsequente de processamento, por exemplo a etapa de secagem (c). Bons resultados foram observados quando a mistura foi secada imediatamente após contatar a quitosana com a solução alcalina na etapa (a). Neste contexto, imediatamente significa que a mistura é somente deixada na etapa (b) durante o período de tempo que leva para preparar a mistura para a etapa de secagem (c). Tipicamente, isto é menos do que cerca de 30 segundos, preferivlmente menos que 20 segundos, e o mais preferivelmente menos que 10 segundos.

[0045] Assim, de acordo com um aspecto da presente invenção, provê-se um processo para a produção de uma quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas, quitina ou um derivado das mesmas, o processo compreendendo as etapas de:(l) contatar quitosana, quitina, um derivado de quitosana ou um derivado de quitina com uma solução alcalina tendo uma concentração de menos do que 0,25M, para formar uma mistura; e(m) imediatamente secar a mistura.

[0046] Em tal processo, a mistura é deixada na etapa (b) durante tempo que levar para preparar a mesma para a próxima etapa de processamento. Por exemplo, a mistura pode ser deixada na etapa (b) durante o tempo que leva para preparar a mesma para secagem. A mistura pode então ser secada em uma etapa de secagem (c).

[0047] A mistura pode ser deixada em repouso na etapa (b) em temperatura e pressão ambiente. Por temperatura e pressão ambiente, significa-se uma temperatura de cerca de 20-25°C e uma pressão de cerca de 1 atmosfera (atm). Vantajosamente, a mistura não precisa ser deixada em um ambiente estéril.

[0048] A mistura é preferivelmente armazenada em um recipiente limpo. A mistura pode ser armazenada sob uma atmosfera inerte.

[0049] A mistura pode ainda compreender um conservante. De modo benéfico, o conservante pode eliminar o risco de crescimento microbiano que pode desenvolver-se, por exemplo, quando a mistura é deixada durante um período prolongado. O conservante pode ser qualquer conservante que seja biocompatível e apropriado para uso em um ambiente alcalino. Os conservantes apropriados incluem íons prata, íons zinco, clorohexadina, ou suas combinações.

[0050] O processo da presente invenção pode ou não compreender a etapa de secagem. A etapa de secagem pode ser realizada por qualquer um dos meios de secagem convencionais conhecidos na técnica. Preferivelmente, a etapa de secagem é realizada em um forno ou por filtração através de um secador de ar. Novamente, equipamento estéril especializado não é necessário para a etapa de secagem.

[0051] Descobriu-se que, uma vez que a mistura foi secada na etapa de secagem, o nível de endotoxinas da mistura secada não aumenta de modo notável ao longo do tempo. Isso é benéfico em que a mistura pode ser armazenada durante um período de tempo antes do processamento posterior.

[0052] É assim fornecida uma quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas com uma concentração de endotoxinas menor do que 50EU/g. A quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas pode ser insolúvel em água. Com pesos moleculares baixos, a quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas pode mostrar alguma solubilidade em água.

[0053] De acordo com outro aspecto da presente invenção, provê-se uma quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas, quitina ou um derivado das mesmas, que podem ser obtidos pelo processo como aqui descrito.

[0054] De acordo com outro aspecto da presente invenção, provê-se uma quitosana alcalina, quitina ou um derivado das mesmas, compreendendo uma concentração de endotoxinas menor do que 50EU/g.

[0055] A quitosana alcalina, quitina ou um derivado das mesmas preferivelmente têm uma concentração de endotoxinas menor do que 30EU/g, preferivelmente menor do que 20EU/g, mais preferivelmente menor do que 15EU/g, ainda mais preferivelmente menor do que 10EU/g e mais preferivelmente menor do que 5EU/g.

[0056] A quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas, quitina ou um derivado das mesmas compreende álcali tendo uma concentração de menos do que 0,25M. Preferivelmente, a concentração é em torno de 0,2M ou menos, mais preferivelmente em torno de 0,15M ou menos e ainda mais preferivelmente em torno de 0,1M ou menos.

[0057] A quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas pode ser usada como um intermediário na fabricação de outros produtos de quitosana, como, por exemplo, derivados ou copolímeros ou na fabricação de quitosana de baixo peso molecular ou oligossacarídeos de quitosana. A quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas pode também ser útil como uma matéria-prima para a fabricação de outras formas de quitosana ou derivados ou copolímeros, como as fibras, tecidos, revestimentos, películas géis, soluções, folhas ou espumas à base de quitosana.

[0058] Em particular, a quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas pode ser usada na preparação de outros produtos de quitosana úteis tendo baixas concentrações de endotoxina, incluindo quitosana neutra e sais de quitosana e outros derivados de quitosana, por exemplo, carboximetil quitosana, hidroxietil quitosana, acil quitosana, alquil quitosana, sulfonil quitosana, quitosana fosforilada, alquilideno quitosana, quelatos de metal, cloreto de quitosana, lactato de quitosana, acetato de quitosana, malato de quitosana, gluconato de quitosana.

[0059] Assim, de acordo com outro aspecto da presente invenção, prove-se um processo para produzir uma quitosana neutra com baixo teor de endotoxinas, sal de quitosana ou um derivado de quitosana compreendendo a etapa de contato de uma quitosana alcalina preparada pelo processo descrito aqui acima com um ácido.

[0060] O processo pode fornecer quitosana neutra medicamente útil, o sal de quitosana ou outro derivado de quitosana tendo baixas concentrações de endotoxina.

[0061] A etapa de contato da quitosana alcalina com o ácido pode ser realizada antes da etapa de secagem (C) acima descrita no processo para a produção de uma quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas.

[0062] Alternativamente, a etapa de contatar a quitosana alcalina com um ácido pode ser realizada após a etapa de secagem (C) acima descrita no processo para a produção de uma quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas. Em tais modalidades, o processo para a produção de uma quitosana neutra com baixo teor de endotoxinas, sal de quitosana ou um derivado de quitosana pode compreender uma outra etapa de secagem depois da etapa de contatar a quitosana alcalina com um ácido. A etapa de secagem pode ser realizada por quaisquer meios de secagem convencionais conhecidos na técnica. Preferivelmente, a etapa de secagem é realizada em um forno ou por filtração do produto através de um secador de ar.

[0063] O ácido pode ser contatado com a quitosana alcalina por qualquer meio apropriado conhecido na técnica. Por exemplo, o ácido pode ser pulverizado sobre a quitosana alcalina ou a quitosana alcalina pode ser misturada com o ácido.

[0064] Preferivelmente, a quitosana alcalina é misturada com o ácido.

[0065] Uma quitosana neutra é referida aqui para significar uma composição de quitosana tendo um índice de pH entre cerca de 6,5 e cerca de pH 7,5, e preferivelmente cerca de pH 7.

[0066] Assim, a fim de preparar uma quitosana neutra, a quitosana alcalina pode ser misturada com um volume e/ou concentração apropriados de ácido para formar uma solução tendo um pH neutro dentre 6,5 e 7,5. O volume e/ou concentração de ácido necessários para neutralizar a quitosana alcalina será dependente do pH da quitosana alcalina.

[0067] Alternativamente, a fim de preparar um sal de quitosana ou derivado de quitosana, a quitosana alcalina pode ser misturada com um volume e/ou concentração de ácido em excesso da que é requerida para fornecer uma quitosana neutra.

[0068] Um ácido apropriado para uso na presente invenção pode ser selecionado dentre os seguintes, sozinhos ou em combinação: ácidos orgânicos, ácidos carboxílicos, ácidos graxos, aminoácidos, ácidos de Lewis, ácidos monopróticos, ácidos dipróticos, ácidos polipróticos, ácidos nucleicos e ácidos minerais.

[0069] Os ácidos orgânicos apropriados podem ser selecionados dentre os seguintes, sozinhos ou em combinação: ácido acético, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido acetilsalicílico, ácido glucônico e ácido láctico.

[0070] Os ácidos graxos apropriados podem ser selecionados dentre os seguintes, sozinhos ou em combinação: ácido miristoleico, ácido palmitoleico, ácido sapiênico, ácido oleico, ácido elaidico, ácido vacênico, ácido linoleico, ácido linoelaídico, ácido α- linolênico, ácido araquidônico, ácido eicosapentaenóico, ácido erúcico, ácido docosa-hexaenóico, ácido caprílico, ácido cáprico, ácido láurico, ácido mirístico, ácido palmítico, ácido esteárico, ácido araquídico, ácido beênico, ácido lignocérico, ácido cerótico.

[0071] Aminoácidos apropriados podem ser selecionados dentre os seguintes, sozinhos ou em combinação: histidina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, glutamina, glicina, prolina, taurina.

[0072] Ácidos minerais apropriados podem ser selecionados dentre os seguintes, sozinhos ou em combinação: ácido clorídrico, ácido sulfúrico e ácido nítrico. Preferivelmente, o ácido escolhido para a neutralização é ácido clorídrico.

[0073] O ácido pode ter uma concentração de cerca de 0,001M de ácido até a concentração máxima possível de ácido. Por exemplo, a concentração máxima típica para o ácido sulfúrico é em torno de 98% ácido sulfúrico. O ácido pode ter uma concentração de cerca de 0,01M a 5M, 0,01M a 3M ou 0,1M a 2M. Preferivelmente, o ácido tem uma concentração de cerca de 1M. A concentração do ácido pode ser de até cerca de 0,01M, 0,05M, 0,10M, 0,15M, 0,20M, 0,25M, 0,30M, 0,35M, 0,40M, 0,45M, 0,50M, 0,55M, 0,60M, 0,65M, 0,70M, 0,75M, 0,80M, 0,85M, 0,90M, 0,95M ou 1,0M.

[0074] O ácido pode estar presente como um licor ácido compreendendo o ácido e um não solvente. O não solvente pode ser qualquer solvente em que a quitosana é insolúvel. Os não solventes típicos incluem lactato de etila, acetato de etila, acetato de metila, etanol, acetona ou misturas dos mesmos. Preferivelmente, o não solvente compreende acetato de etila ou etanol. Mais preferivelmente, o não solvente compreende 80:20 de etanol em água. Vantajosamente, verificou-se que a reação prossegue a uma taxa mais rápida usando um não solvente compreendendo uma mistura de 80:20 de etanol para água.

[0075] A razão de quitosana para licor de ácido pode ser de cerca de 5 a 1 a cerca de 1 a 5. Preferivelmente, a razão de quitosana para licor de ácido é cerca de 2 a 1.

[0076] Em algumas modalidades, a quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas pode ser misturada com o ácido em até cerca de 30 minutos ou menos, mais preferivelmente durante cerca de 10 minutos ou menos e mais preferivelmente durante cerca de cinco minutos ou menos. A reação pode então ser deixada ocorre à medida que a mistura é secada.

[0077] O produto resultante a partir da mistura de quitosana alcalina com ácido pode conter um sal de ácido. Preferivelmente, a solução alcalina e o ácido são selecionados para assegurar que o sal de ácido formado seja biocompatível. Por exemplo, a solução alcalina pode incluir hidróxido de sódio e o ácido pode compreender ácido clorídrico. Em tal exemplo, o sal do ácido seria o sal biocompatível cloreto de sódio.

[0078] O sal de ácido é formado como um subproduto da reação entre a quitosana alcalina e o ácido.

[0079] Descobriu-se que a presença de um sal de ácido no produto pode afetar a utilidade do produto de quitosana resultante. Por exemplo, foi observado que a quitosana gelifica em uma menor extensão em solução salina do que em água, e em uma extensão ainda menor em solução salina a uma concentração dupla. Solução salina concentrada duas vezes, aqui mencionada, é contemplada como tendo uma quantidade de cloreto de sódio de 1,8%. Portanto, é desejável ter uma quantidade tão baixa de sal de ácido no produto de quitosana resultante quanto possível e, idealmente, um nível de sal do ácido que faz pouca ou substancialmente nenhuma diferença para a eficácia do produto de quitosana.

[0080] Foi surpreendentemente descoberto que usando uma solução alcalina tendo uma concentração baixa, como menos do que 0,25M, e preferivelmente de em torno de 0,01M a em torno de 0,2M, produz a concentração com baixo teor de endotoxinas desejada enquanto também resultando em menos subproduto de sal de ácido sendo produzido no processo subsequente para produzir uma quitosana neutra, sal de quitosana ou um derivado de quitosana. De modo benéfico, menos subproduto de sal de ácido foi encontrado como resultando em um produto de quitosana que apresenta melhorada gelificação em uso sobre produtos contendo uma quantidade maior de sal de ácido. O processo da presente invenção pode fornecer um produto de quitosana com uma quantidade apropriadamente baixa de sal de ácido, sem a necessidade de lavar ou enxaguar o produto de quitosana. Isto também tem a vantagem adicional de não requerer o uso de água isenta de endotoxinas em uma etapa de lavagem ou enxágue.

[0081] Também foi verificado que usando concentrações baixas de solução alcalina, como aqui descrito, produz-se menos de uma redução na viscosidade da quitosana quando produzindo uma quitosana neutra, sal de quitosana ou derivado de quitosana.

[0082] Por baixas concentrações de álcali, significa-se menos do que 0,25M, preferivelmente de em torno de 0,01M a 0,2M. Em algumas modalidades, a concentração de álcali pode ser de 0,02M a 0,1M, preferivelmente 0,05M a 0,1M. Bons resultados foram observados usando uma concentração de álcali de em torno de 0,1M. Em algumas modalidades, a concentração de álcali pode ser como aqui mencionada acima. Beneficamente, assim, o uso de baixas concentrações de solução alcalina no processo é menos nocivo para a quitosana. Portanto, é possível remover endotoxinas a partir da quitosana enquanto causando apenas uma mudança mínima na viscosidade. É desejável que a viscosidade da quitosana para reduzir em menos de cerca de 25% no processo, preferivelmente em menos do que cerca de 15% e mais preferivelmente em menos do que cerca de 10%.

[0083] Onde o processo fornece uma quitosana neutra com baixo teor de endotoxinas, o produto é apropriado para uso como um intermediário na produção de outros produtos à base de quitosana. Um uso particular é na produção de sais de quitosana, cujas propriedades absorvedoras tornam as mesmas desejáveis para uso em preparações hemostáticas para controlar sangramento. É preferível que os sais de quitosana sejam solúveis em água.

[0084] Assim, em uma outra modalidade da presente invenção, um sal de quitosana com baixo teor de endotoxinas pode ser preparado por contato de uma quitosana neutra com baixo teor de endotoxinas produzida pelo processo aqui descrito com um ácido.

[0085] O ácido pode ser qualquer ácido apropriado para fornecer o sal de quitosana desejado. Por exemplo, se o acetato de quitosana for desejado, ácido acético pode ser usado; se for desejado sucinato de quitosana, ácido sucínico pode ser usado, etc. Qualquer um dos ácidos aqui descritos pode ser usado no presente processo para a produção de um sal de quitosana com baixo teor de endotoxinas.

[0086] O processo para a produção de um sal de quitosana com baixo teor de endotoxinas ou um derivado de quitosana pode ainda compreender a etapa de secar a mistura de quitosana neutra com baixo teor de endotoxinas e ácido. A etapa de secagem pode ser realizada por qualquer meio de secagem convencional conhecido na técnica. Preferivelmente, a etapa de secagem é realizada em um forno ou por filtração do produto através de um secador de ar.

[0087] É assim fornecida uma quitosana neutra com baixo teor de endotoxinas, sal de quitosana ou derivado de quitosana tendo uma concentração de endotoxinas menor do que 50EU/g.

[0088] A quitosana neutra com baixo teor de endotoxinas pode ser insolúvel em água.

[0089] O sal de quitosana com baixo teor de endotoxinas pode ser solúvel em água.

[0090] De acordo com outro aspecto da presente invenção, provê-se umaquitosana neutra com baixo teor de endotoxinas, sal de quitosana ou um derivado de quitosana que podem ser obtidos por qualquer um dos processos aqui descritos.

[0091] De acordo com outro aspecto da presente invenção, provê-se umaquitosana neutra, sal de quitosana ou um derivado de quitosana compreendendouma concentração de endotoxinas menor do que 50EU/g.

[0092] A quitosana neutra, sal de quitosana ou um derivado de quitosana podem ter uma concentração de endotoxinas menor do que 30EU/g, preferivelmente menor do que 20EU/g, mais preferivelmente menor do que 15EU/g, ainda mais preferivelmente menor do que 10EU/g, e mais preferivelmente menor do que 5EU/g.

[0093] O sal de quitosana com baixo teor de endotoxinas da presente invenção é apropriado para uso como um hemostático para conter fluxo de sangue.

[0094] Assim, de acordo com outro aspecto da presente invenção, provê-se um sal de quitosana com baixo teor de endotoxinas, como aqui descrito, para uso como um hemostático para conter fluxo de sangue. O sal de quitosana com baixo teor de endotoxinas pode ser usado como um hemostático em hemorragia interna ou externa. Por sais de quitosana usados em cirurgia para hemorragia interna, é desejada uma concentração de endotoxinas menor do que 5EU/g.

[0095] O sal de quitosana com baixo teor de endotoxinas da presente invenção pode ser incorporado em um curativo para feridas para sangramento superficial que não coloca em risco a vida ou hemorragia que coloca em risco a vida.

[0096] Assim, de acordo com outro aspecto da presente invenção, provê-se um sal de quitosana com baixo teor de endotoxinas, como aqui descrito, para uso em um curativo de ferida para sangramento superficial que não coloca em risco a vida ou sangramento que coloca em risco a vida.

[0097] O sal de quitosana com baixo teor de endotoxinas da presente invenção é apropriado para uso na preparação de um curativo hemostático para ferida de modo a conter fluxo sanguíneo. De acordo com outro aspecto da presente invenção, provê-se um curativo hemostático para ferida compreendendo um sal de quitosana com baixo teor de endotoxinas, como aqui descrito.

[0098] De acordo com ainda outro aspecto da presente invenção, provê-se um material hemostático compreendendo um sal de quitosana com baixo teor de endotoxinas, como aqui descrito.

[0099] O material hemostático e/ou sal de quitosana podem ser de qualquer forma apropriada, como formas particuladas, em pó, granulares, em flocos, fibrosas, de gel, espuma, folha, película ou líquida.

[00100] De acordo com ainda outro aspecto da presente invenção, provê-se um método para conter fluxo de sangue compreendendo as etapas de: opcionalmente limpar uma área de ferida, sempre que possível; aplicar na referida área da ferida um curativo hemostático para ferida compreendendo um sal de quitosana com baixo teor de endotoxinas, como aqui descrito; e aplicar pressão constante para a área da ferida até que se forme um coágulo de gel.

[00101] Pressão constante é preferivelmente aplicada à área da ferida durante cerca de três minutos ou mais.

[00102] De modo benéfico, quanto menor a concentração da solução alcalina usada na preparação do material hemostático da presente invenção, melhor é o desempenho do material em penetrabilidade, coagulação do sangue e hemóstase.

[00103] Modalidades da presente invenção serão agora descritas ainda nos seguintes exemplos não limitativos com referência ao desenho em anexo, em que:

[00104] Figura 1 é um gráfico mostrando o efeito de diferentes concentrações de subproduto de sal de ácido sobre a viscosidade de um produto de quitosana em meios diferentes.Testes de endotoxinas1. Obter uma solução de extração USP (Farmacopeia Americana) conforme detalhado na USP para testes de endotoxinas de quitosana (4,6 ml de HCl 1M e 45,4 ml de água livre de endotoxinas);2. Extrair adicionando 0,1 g do produto de quitosana de teste a 9,9ml de solução de extração USP e deixar durante 48 horas a 37°C;3. Após 48 horas, diluir 100 μk de extrato em 0,9 ml de água livre de endotoxinas; e4. Misturar 100 μl do acima em 100 μl de tampão específico para endotoxina (ES) fornecido por Charles River.

[00105] O extrato resultante é testado usando um espectrofotômetro portátil Endosafe®-PTSTM que usa cartuchos descartáveis licenciados pela FDA. O processo de extração usa uma diluição de 2000x e uma detecção de limite de teste mínima de 10EU/g.EXEMPLOSExemplo 1:

[00106] 50g de quitosana foram misturados com 50g 0,1M NaOH durante 10 min. O fragmento de quitosana alcalina úmida resultante foi secado imediatamente em um secador de leito fluido a 40oC.Endotoxina inicial de quitosana bruta: 64,8 EU/gQuitosana alcalina tratada seca: 16,3 EU/gExemplo 2:

[00107] 50g de quitosana foram misturados com 50g 0,05M NaOH durante 10 min. O fragmento de quitosana alcalina úmida resultante foi secado imediatamente em um secador de leito fluido a 40oC. Endotoxina inicial de quitosana bruta: 64,8 EU/gQuitosana alcalina tratada seca: 20,0 EU/gExemplo 3:

[00108] 50g de quitosana foram misturados com 50g 0,01M NaOH durante 10 min. O fragmento de quitosana alcalina úmida resultante foi secado imediatamente em um secador de leito fluido a 40oC.Endotoxina inicial de quitosana bruta: 64,8 EU/gQuitosana alcalina tratada seca: <30 EU/gExemplo 4:

[00109] 50g de quitosana foram misturados com 50g 0,1M NaOH durante 8 horas. O fragmento de quitosana alcalina úmida resultante foi secado imediatamente em um secador de leito fluido a 40oC.Endotoxina inicial de quitosana bruta: 64,8 EU/gQuitosana alcalina tratada seca: 23,4 EU/g

[00110] O processo pode ser escalonado e usado para fazer tamanhos de bateladas maiores.

[00111] O processo pode ser usado em quitosana em diferentes formas físicas, como uma fibra de quitosana ou tecido de quitosana.

[00112] O processo também pode usar uma base diferente de hidróxido de sódio, como hidróxido de potássio por exemplo.

[00113] Exemplos 1-4 referem-se à produção de quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas. Esta quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas pode ser subsequente usada como uma matéria-prima para fabricar outros produtos à base de quitosana. Por exemplo, quitosana alcalina pode ser neutralizada a pH 7, para formar uma quitosana neutra por adição de um baixo nível de um ácido apropriado, que poderia reagir com a base para obter um sal biocompatível. Por exemplo, se hidróxido de sódio for usado na solução de base, ele pode ser neutralizado pela adição de ácido clorídrico. O produto poderia conter uma quantidade baixa de cloreto de sódio residual.

[00114] A quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas formada nos Exemplos 1-4, também pode ser usada para produzir um sal de quitosana solúvel em água com baixo teor de endotoxinas ou outros derivados de quitosana. De modo benéfico, isto pode ser obtido sem a necessidade de um ambiente estéril, sem o uso de grandes quantidades de água livre de endotoxina onerosa e sem a necessidade de enxágue ou lavagem. Por exemplo, uma quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas pode ser reagida com um maior nível de um ácido apropriado. Uma pequena porção do ácido irá reagir com a base para obter um sal biocompatível.

[00115] Em outro exemplo, quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas também pode ser usada como uma matéria-prima para a fabricação de derivados de quitosana com baixo teor de endotoxinas, como carbóxi metil quitosana.Efeito de sal de ácido sobre a viscosidade

[00116] Reagindo a quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas com ácido, para produzir ou uma quitosana de pH neutro ou um sal de quitosana, produz- se um subproduto de sal de ácido. A presença deste subproduto pode afetar o desempenho do produto de quitosana. Por exemplo, o nível de subproduto pode afetar a viscosidade de um produto de quitosana em solução salina.

[00117] Com referência à Figura 1, mostra-se os resultados da adição de lactato de sódio à solução salina em concentrações diferentes, e o efeito resultante disto sobre a viscosidade de uma amostra de 2 g do produto de quitosana disponível no mercado atual, CELOX®, em uma solução de 20 g dos diferentes meios após três minutos.

[00118] O meio de base era uma solução salina de fluidos corporais, à qual foram adicionados vários níveis de lactato de sódio. O lactato de sódio representou o subproduto da reação entre hidróxido de sódio e ácido láctico.

[00119] Os resultados são apresentados na Tabela 1 e Figura 1.

[00120] É evidente, a partir da Figura 1 que, como o nível de sal adicionado aumenta, a viscosidade de CELOX® no meio cai. Assim, é benéfico que se tenha apenas um baixo nível de subproduto de sal residual resultante nos produtos de quitosana da presente invenção.Efeito de solução alcalina de baixa concentração sobre a viscosidade

[00121] A quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas da presente invenção pode ser testada para demonstrar o efeito do tratamento com ácido sobre a viscosidade do polímero de quitosana, considerado como sendo uma medida de peso molecular. O teste compreende as seguintes etapas de método:a) pesar 5 g de grânulos de quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas;b) pesar 4,95 g de ácido acético em um béquer de 600 ml;c) adicionar 490,05g de água deionizada ao béquer para completar 495 g de uma solução a 1% de ácido acético;d) colocar o béquer na placa agitadora e ligar a agitação (aumentar à medida que a viscosidade da solução aumenta);e) adicionar os grânulos de quitosana à solução de ácido acético;f) verificar a solução regularmente até que todos os grânulos tenham dissolvido e aumentar o nível de agitação à medida que a viscosidade da solução aumenta, se requerido;g) deixar a solução por um total de 24 horas, medido a partir do momento em que os grânulos de quitosana foram introduzidos na solução de ácido acético;h) fixar um fuso 64 a um viscosímetro Brookfieldi) fixar o fuso a 10 rpm;j) inserir o fuso na solução até a marca no fuso e ligar o viscosímetro e deixar estabilizar;k) registar a viscosidade (cPs) a intervalos de tempo selecionados. Efeito de diminuição da concentração de solução alcalina

[00122] O efeito do uso de uma concentração menor de solução alcalina no processo da presente invenção pode ser testado em três experiências, focalizando em (1) a penetrabilidade percentual de solução salina em uma amostra de teste; (2) o período de tempo para coagulação de sangue; e (3) a hemóstase percentual em modelos in vivo de corte epigástrico.

[00123] O método de teste geral para (1) a penetrabilidade percentual em solução salina é como a seguir: 5 ml de água destilada são adicionados a um tubo de teste. Uma gota de corante tipo alimentício vermelho é adicionada à água. 3 g de pó hemostático de amostra são suavemente colocados no topo da água de modo que é formada uma camada. Após 1 minuto, a distância percorrida pela água no pó hemostático é medida e registrada como penetração percentual.

[00124] O método de teste geral para (2) o período de tempo para coagulação do sangue é como a seguir: 0,75 g de pó hemostático de amostra é adicionado a um tubo de teste, em que 5 ml de sangue heparinizado de coelho são adicionados. O tubo de teste é então invertido e o tempo necessário para totalmente coagular o sangue em uma massa de gel é registrado.

[00125] O método de teste geral para (3) a hemóstase percentual em modelos in vivo com corte epigástrico é o seguinte: um corte de 3-5 cm é feito na artéria epigástrica de um modelo de suíno (não heparinizado). O material hemostático em forma granular é aplicado e uma compressão de 1 minuto aplicada. Se ocorrer novo sangramento, outra compressão de 1 minuto é realizada.

[00126] Como evidente, que deve ser entendido que a presente invenção não se destina a ser limitada aos exemplos precedentes que são descritos a título de exemplo apenas.

Claims

1. Processo para a produção de uma quitosana alcalina com baixo teor de endotoxinas, quitina ou um derivado das mesmas, o processo caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de:(a) contatar quitosana, quitina, um derivado de quitosana ou um derivado de quitina com uma solução alcalina tendo uma concentração de 0,01M a 0,2M para formar uma mistura;(b) deixar a mistura durante um período de menos do que 12 horas; e, então, (c) imediatamente secar a mistura.

2. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a solução alcalina compreende um componente de metal alcalino ou alcalino-terroso selecionado dentre os seguintes, sozinhos ou em combinação: hidróxidos de metal, carbonatos de metal, bissulfitos de metal, persilicatos de metal, bases conjugadas e hidróxido de amônio, em que o metal é selecionado dentre sódio, potássio, cálcio ou magnésio e em que o componente alcalino é selecionado dentre hidróxido de sódio, hidróxido de potássio ou carbonato de sódio.

3. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a solução alcalina é pulverizada sobre a quitosana, quitina, derivado de quitosana ou derivado de quitina ou a quitosana, quitina, derivado de quitosana ou derivado de quitina é misturada com a solução alcalina.

4. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a mistura ainda compreende um conservante selecionado dentre íons prata, íons zinco, clorohexadina, ou combinações dos mesmos; e/ou em que a mistura é deixada durante um período de menos do que dez horas.

5. Processo para a produção de uma quitosana neutra com baixo teor de endotoxinas, um sal de quitosana ou um derivado de quitosana, caracterizado pelo fato de compreender a etapa de contatar uma quitosana alcalina preparada pelo processo conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4 com um ácido.

6. Processo para a produção de uma quitosana neutra com baixo teor de endotoxinas, um sal de quitosana ou um derivado de quitosana, caracterizado pelo fato de compreender a etapa de contatar uma quitosana alcalina preparada pelo processo conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4 com um ácido; e ainda compreendendo a etapa de secar o produto de reação.

7. Processo de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a etapa de contatar a quitosana alcalina com um ácido é realizada antes da etapa de secagem (c), conforme definido em qualquer uma das reivindicações 2 a 6.

8. Processo de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o ácido é pulverizado sobre a quitosana alcalina ou a quitosana alcalina é misturada com o ácido.

9. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 ou 7, caracterizado pelo fato de que o ácido é selecionado dentre os seguintes, sozinhos ou em combinação: ácidos orgânicos selecionados dentre os seguintes, sozinhos ou em combinação: ácido acético, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido acetilsalicílico, ácido glucônico e ácido láctico; ácidos carboxílicos; ácidos graxos selecionados dentre os seguintes, sozinhos ou em combinação: ácido miristoleico, ácido palmitoleico, ácido sapiênico, ácido oleico, ácido elaidico, ácido vacênico, ácido linoleico, ácido linoelaídico, ácido α- linolênico, ácido araquidônico, ácido eicosapentaenóico, ácido erúcico, ácido docosa-hexaenóico, ácido caprílico, ácido cáprico, ácido láurico, ácido mirístico, ácido palmítico, ácido esteárico, ácido araquídico, ácido beênico, ácido lignocérico, ácido cerótico, aminoácidos selecionados dentre os seguintes, sozinhos ou em combinação: histidina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, glutamina, glicina, prolina, taurina; ácidos de lewis; ácidos monopróticos; ácidos dipróticos; ácido polipróticos; ácidos nucleicos; e ácidos minerais selecionados dentre os seguintes, sozinhos ou em combinação: ácido clorídrico, ácido sulfúrico e ácido nítrico.

10. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 9, caracterizado pelo fato de ter uma concentração de 1M; e/ou em que o ácido está presente como um licor de ácido compreendendo o ácido e um não solvente, selecionado dentre lactato de etila, acetato de etila, acetato de metila, etanol, acetona, mistura de 80:20 de etanol:água ou misturas dos mesmos.

11. Processo de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a razão de quitosana para licor de ácido é de 5:1 a 1:5; e/ou em que a quitosana alcalina é misturada com o ácido em torno de 5 minutos.

12. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a mistura é deixada durante um período de menos do que 1 hora.

13. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a mistura é deixada durante um período de menos do que 3 minutos.

14. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que as etapas (b) e (c) compreendem a secagem imediata da mistura após a etapa (a).