BR112014008167B1

BR112014008167B1 - Adenovírus ou vetor adenoviral e composição os compreendendo

Info

Publication number: BR112014008167B1
Application number: BR112014008167-0A
Authority: BR
Inventors: Jason G.D. Gall; Duncan L. Mcvey; Douglas E. Brough
Original assignee: Genvec Inc
Priority date: 2011-10-05
Filing date: 2012-10-05
Publication date: 2022-05-24
Also published as: US10260074B2; WO2013052799A2; US9233153B2; EP2764012B1; CN103974969B; EP2764012A2; CN103974969A; US9725738B2; US20140248307A1; US20180066281A1; IN2014DN03005A; JP6970059B2; WO2013052799A3; CA2850629C; JP6757119B2; JP2014530604A; CA2850629A1; BR112014008167A2; US20190316152A1; JP2018198602A

Abstract

ADENOVÍRUS OU VETOR ADENOVIRAL E COMPOSIÇÃO OS COMPREENDENDO A invenção fornece um adenovírus ou vetor adenoviral caracterizado por compreender uma ou mais sequências de ácidos nucleicos particulares, ou uma ou mais sequências de aminoácidos particulares, ou porções das mesmas, que pertencem a, por exemplo, uma proteína pIX adenoviral, proteína polimerase de ADN, proteína penton, proteína hexon e/ou proteína de fibra.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA PARA APLICAÇÕES RELACIONADAS

[001] Este pedido de patente reivindica o benefício do Pedido de Patente Provisório dos EUA No 61/543.638, depositado em 5 de Outubro de 2011, que é incorporada por referência.

INCORPORAÇÃO POR REFERÊNCIA DE MATERIAL SUBMETIDO ELETRONICAMENTE

[002] Incorporado por referência na sua totalidade aqui é uma listagem de sequência de nucleotídeos/aminoácido legível por computador apresentada simultaneamente em anexo e identificada da seguinte forma: Um arquivo ASCII (texto) de 285,228 Bytes chamado "711248SequenceListing_ST25.TXT", criado em 5 de outubro de 2012.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[003] A entrega in vivo de proteínas em formas e quantidades biologicamente relevantes tem sido um obstáculo para o desenvolvimento de fármacos e vacinas por décadas. Uma solução que tem provado ser uma alternativa bem sucedida a abordagem de entrega de proteína tradicionais é o fornecimento de sequências de ácidos nucleicos exógenos para a produção de proteínas in vivo. Os vetores de transferência de genes idealmente introduzem uma ampla variedade de tipos de células, têm a capacidade de aceitar grandes sequências de ácidos nucleicos, são seguros, e podem ser produzidos em quantidades necessárias para o tratamento de pacientes. Os vetores virais são vetores de transferência de genes com estas propriedades vantajosas (ver, por exemplo, Thomas et al., Nature Review Genetics, 4:346-358 (2003)). Além disso, enquanto que muitos vetores virais são concebidos para infectar uma ampla gama de tipos de células, os vetores virais podem também ser modificados para atingir tipos específicos de células, que podem melhorar a eficácia terapêutica do vetor (ver, por exemplo, Kay et al., Nature Medicine, 7 (1): 33-40 (2001).

[004] Os vetores virais que têm sido utilizados com algum sucesso para administrar proteínas exógenas em células de mamíferos para fins terapêuticos incluem, por exemplo, retrovírus (ver, por exemplo, Cavazzana-Calvo et al., Science, 288 (5466):669-672 (2000)), Lentivírus (ver, por exemplo, de Cartier et al., Science, 326:818-823 (2009)), vírus adenoassociado (AAV) (ver, por exemplo, Mease et al., Journal of Rheumatology, 27 (4):692-703 (2010)), vírus herpes simplex (HSV) (ver, por exemplo, Goins et al., Gene Ther., 16(4):558-569 (2009)), Vírus Vaccinia (ver, por exemplo, Mayrhofer et al., J. Virol., 83 (10):5.192-5.203 (2009)), e adenovírus (ver, por exemplo, Lasaro e Ertl, Molecular Therapy, 7(8):1333-1339 (2009)).

[005] Apesar de suas propriedades vantajosas, o uso disseminado de vetores de transferência de genes virais é dificultado por vários fatores. A este respeito, algumas células não são facilmente recuperáveis para a entrega do gene por vetores virais atualmente disponíveis. Por exemplo, os linfócitos são prejudicados na captação de adenovírus (Silver et al., Virology, 165:377-387 (1988) e Horvath et al., J. Virology, 62(1):341-345 (1988)). Além disso, os vetores virais que se integram no genoma da célula hospedeira (por exemplo, vetores retrovirais) têm o potencial de causar mutações de inserção de oncogenes (ver, por exemplo, Cavazzana-Calvo et al., supra, e Hacein-Bey- Abina et al., N. Engl J. Med., 348:255-256 (2003)).

[006] A utilização de vetores virais para a transferência de genes é também dificultada pela imunogenicidade de vetores virais. A maioria da população dos EUA tem sido exposta a formas do tipo selvagem de muitos dos vírus atualmente em desenvolvimento como vetores de transferência de genes (por exemplo, adenovírus). Como resultado, grande parte da população dos EUA desenvolveu imunidade pré-existente para certos vetores de transferência de genes baseados em vírus. Tais vetores são rapidamente eliminados da corrente sanguínea, reduzindo assim a eficácia do vetor no fornecimento de quantidades biologicamente relevantes de um produto de gene. Além disso, a imunogenicidade de alguns vetores virais evita a repetição da dose eficaz, o que pode ser vantajoso para "aumentar" o sistema imunológico contra agentes patogênicos, quando os vetores virais são utilizados em aplicações de vacina, resultando assim em apenas uma pequena fração de uma dose de vetor viral que entrega sua carga útil para as células hospedeiras.

[007] Deste modo, continua a haver uma necessidade de vetores virais melhorados que podem ser utilizados para entregar eficientemente genes para células de mamífero in vivo. A invenção fornece esses vetores virais.

BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[008] A invenção fornece um adenovírus ou vetor adenoviral. O adenovírus ou vetor adenoviral compreende uma ou mais das sequências de ácido nucleico selecionadas de entre o grupo consistindo de (a) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 1, (b) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos 98,5% idêntica à SEQ ID NO: 2, (c) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 90% idêntica à SEQ ID NO: 3, (d) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 80% idêntica à SEQ ID NO: 4, e (e) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 89% idêntica à SEQ ID NO: 5.

[009] A invenção fornece um adenovírus ou vetor adenoviral compreendendo uma ou mais das sequências de ácido nucleico selecionadas de entre o grupo consistindo de (a) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 98,6% idêntica à SEQ ID NO: 6, (b) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 99,06% idêntica à SEQ ID NO: 7, (c) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 97,13% idêntica à SEQ ID NO: 8, (d) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 90,7% idêntica à SEQ ID NO: 9, e (e) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 96,6% idêntica à SEQ ID NO: 10.

[010] A invenção fornece um adenovírus ou vetor adenoviral compreendendo uma ou mais das sequências de ácido nucleico selecionadas de entre o grupo consistindo de (a) uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 121 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 6, (b) uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 462 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 7, (c) uma sequência de ácido nucleico, que compreende, pelo menos, 234 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 8, (d) uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 606 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 9, e (e) uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 188 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 10.

[011] A invenção fornece um adenovírus ou vetor adenoviral compreendendo uma ou mais das sequências de aminoácidos selecionadas a partir do grupo que consiste de (a) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, (b) uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 82% idêntica à SEQ ID NO: 13, (c) uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 80% idêntica à SEQ ID NO: 14, e (d) uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 83% idêntica à SEQ ID NO: 15.

[012] A invenção fornece um adenovírus ou vetor adenoviral compreendendo uma ou mais das sequências de ácido nucleico selecionadas de entre o grupo consistindo de (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, (b) um sequência de ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 99% idêntica à SEQ ID NO: 12, (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 82% idêntica à SEQ ID NO: 13, (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 80% idêntica à SEQ ID NO: 14, e (e) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 83% idêntica à SEQ ID NO: 15.

[013] A invenção fornece um adenovírus ou vetor adenoviral compreendendo uma ou mais das sequências de aminoácidos selecionadas a partir do grupo que consiste de (a) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16, (b) uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 97,8% idêntica à SEQ ID NO: 18, (c) um aminoácido que é, pelo menos, 93,4% idêntica à SEQ ID NO: 19, e (d) uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 98,2% idêntica à SEQ ID NO: 20.

[014] A invenção fornece um adenovírus ou vetor adenoviral compreendendo uma ou mais das sequências de ácido nucleico selecionadas de entre o grupo consistindo de (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16, (b) uma nucleico sequência de ácido que codifica uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 99,78% idêntica à SEQ ID NO: 17, (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 97,8% idêntica à SEQ ID NO: 18, (d) uma sequência de ácido nucleico que codifica um aminoácido que é, pelo menos 93,4% idêntica à SEQ ID NO: 19, e (e) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 98,2% idêntica à SEQ ID NO: 20.

[015] A invenção fornece um adenovírus ou vetor adenoviral compreendendo uma ou mais das sequências de aminoácidos selecionadas a partir do grupo que consiste de (a) uma sequência de aminoácidos compreendendo pelo menos 89 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 16, (b) uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 247 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 18, (c) uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 370 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 19, e (d) uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 192 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 20.

[016] A invenção fornece um adenovírus ou vetor adenoviral compreendendo uma ou mais das sequências de ácido nucleico selecionadas de entre o grupo consistindo de (a) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos compreendendo, pelo menos, 89 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 16, (b) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 428 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 17, (c) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 247 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 18, (D) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 370 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 19, e (e) uma sequência de ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 192 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 20.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[017] Os adenovírus são geralmente associados a patologias benignas em humanos, e os genomas de adenovírus isolados a partir de uma variedade de espécies, incluindo os seres humanos, foram extensamente estudados. Adenovírus é um vírus icosaédrico não encapsulado de tamanho médio (90-100 nm), contendo aproximadamente 36 kb de DNA de cadeia dupla. O capsídeo do adenovírus medeia as interações chave das fases iniciais da infecção de uma célula pelo vírus, e é necessário para o empacotamento de genomas de adenovírus no final do ciclo de vida do adenovírus. O capsídeo é composto por 252 capsômeros, que inclui 240 héxons, 12 proteínas de penton-base e 12 fibras (Ginsberg et al., Virology, 28:782-83 (1966)). O héxon compreende três proteínas idênticas, ou seja, polipeptídeo II (Roberts et al., Science, 232: 1.148-51 (1986)). A penton-base é composta por cinco proteínas idênticas e a fibra compreende três proteínas idênticas. Proteínas IIIa, VI, e IX estão presentes no revestimento de adenovírus e acredita-se estabilizar o capsídeo viral (Stewart et al., Cell, 67:14554 (1991), e Stewart et al., EMBO J., 12(7):2589-99 (1993)). A expressão das proteínas de capsídeo, com a exceção de pIX, é dependente da proteína polimerase do adenovírus. Portanto, os componentes principais de uma partícula de adenovírus são expressos a partir do genoma de apenas quando o gene da proteína polimerase está presente e expresso.

[018] Várias características do adenovírus os torna veículos ideais para a transferência de material genético para as células para aplicações terapêuticas (ou seja, "terapia genética"), ou para uso como sistemas de entrega de antígeno para aplicações de vacinas. Por exemplo, os adenovírus podem ser produzidos em títulos elevados (por exemplo, cerca de 1013 unidades de partículas (PU)), e podem transferir material genético para as células de não replicação e replicação. O genoma adenoviral pode ser manipulado para transportar uma grande quantidade de ADN exógeno (até cerca de 8 kb), e o capsídeo de adenovírus pode potencializar a transferência de sequências ainda mais longas (Curiel et al., Hum. Gene Ther., 3:147-154 (1992)). Adicionalmente, os adenovírus, geralmente não se integram no cromossoma da célula hospedeira, mas em vez disso são mantidos como um epissoma linear, minimizando assim a probabilidade de um adenovírus recombinante interferir com a função normal da célula.

[019] A invenção baseia-se, pelo menos em parte, na descoberta e isolamento de um adenovírus que não tenha sido previamente identificado ou isolado. O adenovírus aqui descrito foi isolado a partir de um gorila. Há quatro subespécies de gorilas amplamente reconhecidas dentro das duas espécies de Gorila Oriental (Gorilla beringei) e Gorila Ocidental (Gorilla gorilla). A espécie Gorilla Ocidental inclui as subespécies do gorila da planície ocidental (Gorilla gorilla gorilla) e Gorilla do rio Cross (Gorilla gorilla diehli). A espécie de Gorila oriental inclui as subespécies do gorila da montanha (Gorilla beringei beringei) e gorila da planície oriental (Gorilla beringei graueri) (ver, por exemplo, Wilson e Reeder, eds., Mammalian Species of the World (Espécies Mamíferas do Mundo), 3a ed., editora Johns Hopkins University, Baltimore, Maryland (2005)). O adenovírus do invento foi isolado a partir do gorila da montanha (Gorilla beringei beringei).

[020] Os genomas de vários destes adenovírus foram analisados, e determinou-se que o adenovírus pode ter a sequência de ácido nucleico de, por exemplo, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 ou SEQ ID NO: 25, cada uma das quais inclui um certo número de subsequências que servem para definir unicamente o adenovírus, ou seja, as sequências de ácidos nucleicos SEQ ID NOs: 1-10, e as sequências de aminoácidos SEQ ID NOs: 1 1-20. As SEQ ID NOs: 6-10 codificam as sequências de aminoácidos de SEQ ID NO: 16-20, respectivamente. As SEQ ID NOs: 1-5 são um subconjunto das sequências de ácidos nucleicos das SEQ ID NOs: 6-10, respectivamente. As ID SEQ NOs: 11-15 são um subconjunto das sequências de aminoácidos de SEQ ID NO: 16-20, respectivamente.

[021] O adenovírus pode ser modificado, do mesmo modo como os adenovírus anteriormente conhecidos para ser usado como um vetor adenoviral, por exemplo, um veículo de entrega de genes.

[022] O termo "adenovírus", tal como é aqui utilizado, refere-se a um adenovírus que retém a capacidade de participar no ciclo de vida do adenovírus e não tenha sido fisicamente inativado por, por exemplo, desestruturação (por exemplo, ultrassons), desnaturação (por exemplo, utilização de calor ou solventes), ou reticulação (por exemplo, através de reticulação da formalina). O "ciclo de vida do adenovírus" inclui (1) ligação e entrada do vírus nas células, (2) a transcrição do genoma adenoviral e tradução de proteínas de adenovírus, (3) a replicação do genoma adenoviral e (4) a montagem da partícula viral (ver, por exemplo, Fields Virology, 5a ed., Knipe et al. (Eds.), Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA (2006)).

[023] O termo "vetor adenoviral," tal como aqui utilizado, refere-se a um adenovírus, em que o genoma adenoviral tem sido manipulado para acomodar uma sequência de ácido nucleico que não é nativa no que diz respeito ao genoma adenoviral. Tipicamente, um vetor adenoviral é gerado através da introdução de uma ou mais mutações (por exemplo, uma deleção, inserção ou substituição) no genoma adenoviral do adenovírus, de modo a acomodar a inserção de uma sequência não-nativa de ácido nucleico, por exemplo, para transferência de genes, no adenovírus.

[024] O adenovírus e vetor adenoviral podem ser competentes para replicação, condicionalmente competentes para replicação, ou deficiente para replicação.

[025] Um adenovírus ou vetor adenoviral competente para replicação pode replicar-se em células hospedeiras típicas, ou seja, células, tipicamente capazes de serem infectadas por um adenovírus. Um adenovírus ou vetor adenoviral competente para replicação pode ter uma ou mais mutações em comparação com o adenovírus do tipo selvagem (por exemplo, uma ou mais deleções, inserções e/ou substituições) no genoma adenoviral que não inibem a replicação viral em células hospedeiras. Por exemplo, o adenovírus ou vetor adenoviral pode ter uma deleção parcial ou inteira da região adenoviral precoce conhecida como a região de E3, que não é essencial para a propagação do adenovírus ou genoma adenoviral.

[026] Um adenovírus condicionalmente-replicante ou vetor adenoviral é um adenovírus ou vetor adenoviral que foi projetado para replicar sob condições pré-determinadas. Por exemplo, as funções de gene essencial para a replicação, por exemplo, funções de genes codificadas pelas regiões precoces adenovirais, podem ser operacionalmente ligadas a uma sequência de controle de transcrição induzível, reprimível, ou específica de tecido, por exemplo, promotora. Em tal forma de realização, a replicação requer a presença ou a ausência de fatores específicos que interagem com a sequência de controle da transcrição. Os vetores adenovirais condicionalmente replicantes são ainda descritos na Patente dos EUA 5.998.205.

[027] Um adenovírus ou vetor adenoviral deficiente em replicação é um adenovírus ou vetor adenoviral que requer a complementação de uma ou mais funções de genes ou regiões do genoma adenoviral que são necessárias para a replicação, como resultado de, por exemplo, uma deficiência em uma ou mais funções ou regiões do gene essencial para a replicação, de tal modo que o adenovírus ou vetor adenoviral não replica em células hospedeiras típicas, especialmente aquelas em que um ser humano ser infectado pelo adenovírus ou vetor adenoviral.

[028] Uma deficiência na função do gene ou região genômica, tal como aqui utilizada, é definida como uma desestruturação (por exemplo, supressão) de material genético suficiente do genoma adenoviral para destruir ou prejudicar a função do gene (por exemplo, de tal forma que a função do produto do gene é reduzida em pelo menos cerca de 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 30 vezes, ou 50 vezes), cuja sequência de ácido nucleico foi interrompida (por exemplo, excluída) no todo ou em parte. A deleção de uma região do gene inteiro, muitas vezes, não é necessária para a desestruturação de uma função do gene essencial para a replicação. No entanto, com o propósito de fornecer espaço suficiente no genoma adenoviral, para um ou mais transgenes, a remoção de uma parte de uma ou mais regiões de genes pode ser desejável. Embora a eliminação do material genético seja preferida, uma mutação no material genético através da adição ou substituição também é adequada para destruir a função do gene. As funções dos genes essenciais para replicação são aquelas funções de genes que são necessárias para a replicação do adenovírus (por exemplo, propagação) e são codificadas por, por exemplo, regiões adenovirais precoces (por exemplo, as regiões E1, E2 e E4), regiões tardias (por exemplo, regiões LI, L2, L3, L4 e L5), genes envolvidos no empacotamento viral (por exemplo, o gene IVa2) e RNAs associados a vírus (por exemplo, VA-RNA-1 e/ou VA-RNA-2).

[029] Se o adenovírus ou vetor adenoviral é competente para a replicação ou deficiente em replicação, o adenovírus ou vetor adenoviral retém pelo menos uma parte do genoma adenoviral. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender qualquer porção do genoma adenoviral, incluindo codificação de proteínas e regiões codificadoras de não- proteínas. Desejavelmente, o adenovírus ou vetor adenoviral compreende, pelo menos, uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína de adenovírus. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de ácido nucleico que codifica qualquer proteína adequada de adenovírus, tais como, por exemplo, uma proteína codificada por qualquer um dos genes da região precoce (isto é, regiões E1A, E1B, E2A, E2B e E3 e/ou E4), ou uma proteína codificada por qualquer um dos genes da região tardia, que codificam as proteínas estruturais do vírus (isto é, regiões L1, L2, L3, L4 e L5).

[030] O adenovírus ou vetor adenoviral compreende, desejavelmente, uma ou mais sequências de ácidos nucleicos que codificam a proteína pIX, a proteína polimerase de ADN, a proteína penton, a proteína héxon, e/ou a proteína de fibra. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de ácido nucleico de comprimento total que codifica uma sequência de aminoácidos de comprimento total de uma proteína de adenovírus. Alternativamente, o adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma porção de uma sequência de ácido nucleico de comprimento total que codifica uma porção de uma sequência de aminoácidos de comprimento total de uma proteína de adenovírus.

[031] Uma "porção" de uma sequência de ácido nucleico compreende, pelo menos, dez nucleotídeos (por exemplo, cerca de 10 a cerca de 5000 nucleotídeos). De preferência, uma "porção" de uma sequência de ácido nucleico compreende 10 ou mais (por exemplo, 15 ou mais, 20 ou mais, 25 ou mais, 30 ou mais, 35 ou mais, 40 ou mais, 45 ou mais, 50 ou mais, ou 100 ou mais nucleotídeos), mas menos do que 5,000 (por exemplo, 4900 ou menos, ou menos de 4000, ou menos de 3000, 2000 ou menos, 1,000 ou menos, 800 ou menos, 500 ou menos, 300 ou menos ou 100 ou menos nucleotídeos). De preferência, uma porção de uma sequência de ácido nucleico é de cerca de 10 a cerca de 3500 nucleotídeos (por exemplo, cerca de 10, 20, 30, 50, 100, 300, 500, 700, 1000, 1500, 2000, 2500 ou 3000 nucleotídeos), cerca de 10 a cerca de 1000 nucleotídeos (por exemplo, cerca de 25, 55, 125, 325, 525, 725 ou 925 nucleotídeos) ou cerca de 10 a cerca de 500 nucleotídeos (por exemplo, cerca de 15, 30, 40, 50, 60, 70, 80 , 90, 150, 175, 250, 275, 350, 375, 450, 475, 480, 490, 495, ou 499 nucleotídeos), ou uma faixa definida por quaisquer dois dos valores precedentes. Mais de preferência, uma "porção" de uma sequência de ácido nucleico compreende não mais do que cerca de 3200 nucleotídeos (por exemplo, cerca de 10 a cerca de 3200 nucleotídeos, cerca de 10 a cerca de 3000 nucleotídeos, ou cerca de 30 a cerca de 500 nucleotídeos, ou um intervalo definido por qualquer um dos dois valores anteriores).

[032] Uma "porção" de uma sequência de aminoácidos compreende, pelo menos, três aminoácidos (por exemplo, cerca de 3 a cerca de 1.200 aminoácidos). De preferência, uma "porção" de uma sequência de aminoácidos compreende três ou mais (por exemplo, 5 ou mais, 10 ou mais, 15 ou mais, 20 ou mais, 25 ou mais, 30 ou mais, 40 ou mais, ou 50 ou mais aminoácidos), mas menos do que 1.200 (por exemplo, 1.000 ou menos, 800 ou menos, 700 ou menos, 600 ou menos, 500 ou menos, 400 ou menos, 300 ou menos, 200 ou menos ou 100 ou menos) aminoácidos. De preferência, uma porção de uma sequência de aminoácidos é cerca de 3 a cerca de 500 aminoácidos (por exemplo, cerca de 10, 100, 200, 300, 400, ou 500 aminoácidos), cerca de 3 a cerca de 300 aminoácidos (por exemplo, cerca de 20, 50, 75, 95, 150, 175, ou 200 aminoácidos), ou cerca de 3 a cerca de 100 aminoácidos (por exemplo, cerca de 15, 25, 35, 40, 45, 60, 65, 70, 80, 85, 90, 95, ou 99 aminoácidos), ou uma faixa definida por quaisquer dois dos valores precedentes. Mais de preferência, uma "porção" de uma sequência de aminoácidos não compreende mais do que cerca de 500 aminoácidos (por exemplo, cerca de 3 a cerca de 400 aminoácidos, cerca de 10 a cerca de 250 aminoácidos, ou cerca de 50 a cerca de 100 aminoácidos, ou um intervalo definido por qualquer um dos dois valores anteriores).

[033] A proteína pIX de adenovírus está presente no capsídeo do adenovírus, tem sido mostrada reforçar as interações héxon nonâmeros, e é essencial para o empacotamento de genomas de comprimento total (ver, por exemplo, Boulanger et al., J. Gen. Virol, 44: 783-800 (1979); Horwitz M.S., "Adenoviridae and their replication" (Adenoviridae e sua replicação) em Virology, 2a ed., BN Fields et al. (eds.), Editora Raven, Ltd., New York, páginas 1679-1721 (1990), Ghosh-Choudhury et al., EMBO J., 6:1733-1739 (1987) e van Oostrum et al., J. Virol., 56:439- 448 (1985)). Em adição à sua contribuição para a estrutura do adenovírus, pIX também tem sido demonstrado exibir propriedades de transcrição, tais como a estimulação da atividade do promotor tardio principal de adenovírus (MLP) (ver, por exemplo, Lutz et al., J. Virol., 7(1):5102-5109 (1997)). As sequências de ácidos nucleicos que codificam a totalidade ou uma porção de uma proteína pIX de adenovírus incluem, por exemplo, SEQ ID NO: 6 e SEQ ID NO: 1. Sequências de aminoácidos que formam uma proteína pIX de comprimento total, ou uma porção da mesma, incluem, por exemplo, SEQ ID NO: 16 e SEQ ID NO: 11.

[034] A proteína polimerase de ADN de adenovírus é essencial para a replicação do ADN viral, tanto in vitro como in vivo. A polimerase co-purifica em um complexo com o precursor (pTP) da proteína terminal (TP), que está ligada de forma covalente às extremidades 5' do ADN de adenovírus (Field et al., J. Biol. Chem., 259:9487-9495 (1984)). Tanto a DNA-polimerase de adenovírus e pTP são codificadas pela região E2. A proteína polimerase é necessária para a expressão de todos as proteínas estruturais, exceto para pIX. Sem a sequência do gene para a proteína polimerase, a proteína polimerase não é produzida. Como resultado, o genoma viral não é replicado, o promotor tardio principal não é ativado, e as proteínas do capsídeo não são expressas. As sequências de ácidos nucleicos que codificam a totalidade ou uma porção de uma proteína polimerase de ADN de adenovírus incluem, por exemplo, SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 2. As sequências de aminoácidos que compreendem uma polimerase de ADN de adenovírus de comprimento total, ou uma sua porção, incluem, por exemplo, SEQ ID NO: 17 e SEQ ID NO: 12.

[035] A proteína héxon de adenovírus é a maior e mais abundante proteína no capsídeo do adenovírus. A proteína héxon é essencial para a montagem do capsídeo do vírus, a determinação da simetria icosaédrica do capsídeo (que por sua vez, define os limites para o volume do capsídeo e tamanho de empacotamento de ADN), e integridade do capsídeo. Além disso, héxon é um alvo primário para modificação, a fim de reduzir a neutralização dos vetores adenovirais (ver, por exemplo, Gall et al., J. Virol., 72:10.260-264 (1998), e Rux et al., J. Virol., 77(17):9553-9566 (2003)). Asprincipais características estruturais das proteínas héxon são compartilhadas por adenovírus através de sorotipos, mas a proteína héxon difere em tamanho e propriedade imunológica entre os sorotipos (Jornvall et al., J. Biol. Chem., 256 (12):6181-6186 (1981)). Uma comparação de 15 proteínas héxon de adenovírus revelou que as região antigênicas e específicas do sorotipo predominantes do héxon parecem estar nos loops 1 e 2 (isto é LI ou l1, e LII ou l2, respectivamente), dentro das quais estão sete regiões hipervariáveis discretas (HVR1 a HVR7) variando em comprimento e sequência entre sorotipos adenovirais (Crawford-Miksza et al., J. Virol., 70 (3):1836-1844 (1996)). As sequências de ácidos nucleicos que codificam para toda ou uma porção das proteínas héxon de adenovírus incluem, por exemplo, SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 4. Sequências de aminoácidos que compõem a proteína héxon de adenovírus de comprimento total, ou uma porção das mesmas, incluem, por exemplo, SEQ ID NO: 19 e SEQ ID NO: 14.

[036] A proteína fibra de adenovírus é um homotrímero do polipeptídeo adenoviral IV, que consiste de três domínios: a cauda, haste e globo (Devaux et al., J. Molec. Biol., 215:567-88 (1990), Yeh et al., Virus Res., 33:179-98 (1991)). A proteína fibra medeia primeiro a ligação viral aos receptores na superfície celular através dos domínios globular e de haste (Henry et al., J. Virol., 68 (8):5239- 46 (1994)). As sequências de aminoácidos para trimerização estão localizadas na região globular, a qual parece ser necessária para o terminal amino da fibra (cauda) para se associar devidamente com a penton-base (Novelli et al., Virology, 185:365-76 (1991)). Além de reconhecer receptores celulares e ligação a penton-base, a fibra contribui para a identidade de sorotipo. As proteínas fibra de diferentes sorotipos adenovirais são consideravelmente diferentes (ver, por exemplo, Green et al., EMBO J., 2:1357-1365 (1983), Chroboczek et al., Virology, 186: 280-85 (1992), e Signas et al., J. Virol., 53:672-78 (1985)). Assim, a proteína fibra tem múltiplas funções chave para o ciclo de vida do adenovírus. As sequências de ácidos nucleicos que codificam a totalidade ou uma porção de uma proteína fibra de adenovírus incluem, por exemplo, SEQ ID NO: 10 e SEQ ID NO: 5. Sequências de aminoácidos que formam uma proteína fibra de adenovírus de comprimento total, ou uma porção da mesma, incluem, por exemplo, SEQ ID NO: 20 e SEQ ID NO: 15.

[037] A proteína penton-base de adenovírus está localizada nos vértices do capsídeo icosaédrico e compreende cinco monômeros idênticos. A proteína pentonbase fornee uma estrutura para a ligação das proteínas héxon em várias facetas do capsídeo icosaédrico, e fornece a interface essencial para a proteína fibra ser incorporada no capsídio. Cada monômero da penton-base contém uma porção de tripeptídeo RGD (Neumann et al., Gene, 69:153-157(1988)). O tripeptídeo RGD medeia a ligação a αv integrinas e adenovírus que têm mutações pontuais na sequência RGD da penton-base são limitados na sua capacidade de infectar células (Bai et al., J. Virol., 67:5198-5205 (1993)). Assim, a proteína penton-base é essencial para a arquitetura do capsídeo e para a máxima eficiência da interação célula- vírus. As sequências de ácidos nucleicos que codificam a totalidade ou uma porção de uma proteína penton-base de adenovírus incluem, por exemplo, SEQ ID NO: 8 e SEQ ID NO: 3. Sequências de aminoácidos que formam uma proteína penton-base adenoviral de comprimento total, ou uma porção da mesma, incluem, por exemplo, SEQ ID NO: 18 e SEQ ID NO: 13.

[038] O ácido nucleico ou sequência de aminoácidos "identidade", tal como aqui descrito, pode ser determinada por comparação de um ácido nucleico ou sequência de aminoácidos de interesse com uma sequência de ácido nucleico ou de aminoácidos de referência. O número de nucleotídeos ou resíduos de aminoácidos, que foram alterados e/ou modificados (como, por exemplo, através de mutações pontuais, inserções ou deleções) na sequência de referência de modo a resultar na sequência de interesse, são contadas. O número total de tais mudanças é subtraído do comprimento total da sequência de interesse, e a diferença é dividida pelo comprimento da sequência de interesse e expressa como uma percentagem. Uma variedade de algoritmos matemáticos para a obtenção do alinhamento ótimo e cálculo da identidade entre duas ou mais sequências são conhecidas e incorporadas em uma variedade de programas disponíveis. Exemplos de tais programas incluem CLUSTAL-W, T-Coffee e ALIGN (para alinhamento de sequências de ácido nucleico e aminoácidos), programas BLAST (por exemplo, BLAST 2.1, BL2SEQ, e versões posteriores do mesmo) e programas FASTA (por exemplo, FASTA3x, FASTM e SSEARCH) (para alinhamento e pesquisas de similaridade de sequência). Algoritmos de alinhamento de sequência também são revelados, por exemplo, Altschul et al., J. Molecular Biol., 215 (3):403-410 (1990), Beigert et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA, 106(10):3770-3775 (2009), Durbin et al., eds.,Biological Sequence Analysis: Probalistic Models of Proteins and Nucleic Acids (Análise de Sequência Biológica: Modelos probabilísticos de proteínas e ácidos nucléicos), Editora Cambridge University, Cambridge, Reino Unido (2009), Soding, Bioinformatics, 21(7):951-960 (2005), Altschul et al., Nucleic Acids Res., 25(17):3389-3402 (1997), e Gusfield, Algorithms on Strings, Trees and Sequences (Algoritmos em fitas, árvores e sequências), Editora Cambridge University, Cambridge, Reino Unido (1997)).

[039] Em uma forma de realização, o adenovírus ou vetor adenoviral compreende um ou mais das seguintes sequências de ácidos nucleicos: (a) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 1, (b) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 98,5% idêntica (por exemplo, pelo menos 98,73%, pelo menos 98,96%, pelo menos 99,18%, pelo menos 99,41%, pelo menos 99,64%, pelo menos 99,87% ou 100% idêntica) a SEQ ID NO: 2, (c) um sequência de ácido nucleico que é,pelo menos, 90% idêntica (por exemplo, pelo menos 92,94%, pelo menos, 95,88%, 98,82% ou 100% idêntica) a SEQ ID NO: 3, (d) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 80% idêntica (por exemplo, pelo menos 80,83%, pelo menos 83,06%, pelo menos 85,28%, pelo menos 87,50%, pelo menos 89,72%, pelo menos 91,94%, pelo menos 94,17%, pelo menos 96,39%, pelo menos 98,61% ou 100% idêntica) a SEQ ID NO: 4, e (e) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 89% idêntica (por exemplo, pelo menos 92,33%, pelo menos 95,67%, pelo menos 99% ou 100% idêntica) a SEQ ID NO: 5.

[040] O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender um, dois, três, quatro, cinco ou todas as sequências acima mencionadas, isoladamente ou em qualquer combinação. A este respeito, o adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender qualquer combinação de quaisquer duas das sequências acima mencionadas, qualquer combinação de quaisquer três das sequências acima mencionadas, qualquer combinação de quaisquer quatro das sequências acima mencionadas ou todas as cinco das sequências acima mencionadas. Por exemplo, o adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 1. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos 98,5% idêntica à SEQ ID NO: 2 e uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 90% idêntica à SEQ ID NO: 3. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 1,uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 90% idêntica à SEQ ID NO: 3, e uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 89% idêntica à SEQ ID NO: 5. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender (a) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 1, (b) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 2, (c) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 3, (d) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 4, ou (e) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 5. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender (a) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 1, (b) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 98,5% idêntica à SEQ ID NO: 2, (c) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 90% idêntica à SEQ ID NO: 3, (d) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 80% idêntica à SEQ ID NO: 4, e (e) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 89% idêntica à SEQ ID NO: 5. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender (a) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 1, (b) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 2, (c) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 3, (d) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 4, e (e) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 5.

[041] Em uma outra forma de realização, o adenovírus ou vetor adenoviral compreende um ou mais das seguintes sequências de ácidos nucleicos: (a) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos 98,6% idêntica (por exemplo, pelo menos 98,85%, pelo menos 99,10%, pelo menos 99,35%, pelo menos 99,60% ou 100% idêntica) a SEQ ID NO: 6, (b) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 99,06% idêntica (por exemplo, pelo menos 99,09%, pelo menos 99,12%, pelo menos 99,15%, pelo menos 99,19%, pelo menos 99,22%, pelo menos 99,25%, pelo menos 99,28%, pelo menos 99,31%, pelo menos 99,34%, pelo menos 99,38%, pelo menos 99,41%, pelo menos 99,44%, pelo menos 99,47%, pelo menos 99,50%, pelo menos 99,53%, pelo menos 99,57%, pelo menos 99,60%, pelo menos 99,63%, pelo menos 99,66%, pelo menos 99,69%, pelo menos 99,72%, pelo menos 99,75%, pelo menos 99,79%, pelo menos 99,82%, pelo menos 99,85%, pelo menos 99,88%, pelo menos 99,91%, pelo menos 99,94%, pelo menos 99,98% ou 100% idêntica) a SEQ ID NO: 7, (c) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 97,13% idêntica (por exemplo, pelo menos 97,18%, pelo menos 97,23%, pelo menos 97,28%, pelo menos 97,33%, pelo menos 97,38%, pelo menos 97,43%, pelo menos 97,48%, pelo menos 97,5%, pelo menos 97,54%, pelo menos 97,59%, pelo menos 97,6%, pelo menos 97,64%, pelo menos 97,69%, pelo menos 97,7%, pelo menos 97,74%, pelo menos 97,79%, pelo menos 97,8%, pelo menos 97,84%, pelo menos 97,89%, pelo menos 97,9%, pelo menos 97,94%, pelo menos 97,99%, pelo menos 98%, pelo menos 98,04%, pelo menos 98,09%, pelo menos 98,1%, pelo menos 98,14%, pelo menos 98,19%, pelo menos 98,2%, pelo menos 98,24%, pelo menos 98,30%, pelo menos 98,35%, pelo menos 98,40%, pelo menos 98,45%, pelo menos 98,50%, pelo menos 98,55%, pelo menos 98,60%, pelo menos 98,70%, pelo menos 98,75%, pelo menos 98,80%, pelo menos 98,85%, pelo menos 98,90%, pelo menos 98,95%, pelo menos 99,00%, pelo menos 99,06%, pelo menos 99,11%, pelo menos 99,16%, pelo menos 99,2%, pelo menos 99,21%, pelo menos 99,26%, pelo menos 99,3%, pelo menos 99,31%, pelo menos 99,36%, pelo menos 99,4%, pelo menos 99,41%, pelo menos 99,46%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,51%, pelo menos 99,56%, pelo menos 99,6%, pelo menos 99,61%, pelo menos 99,66%, pelo menos 99,7%, pelo menos 99,71%, pelo menos 99,76%, pelo menos 99,8%, pelo menos 99,81%, pelo menos 99,87%, pelo menos 99,9%, pelo menos 99,92%, pelo menos 99,95%, pelo menos 99,97% ou 100% idêntica) a SEQ ID NO: 8 (d) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos 90,7% idêntica (por exemplo, pelo menos 90,73%, pelo menos 90,77%, pelo menos 90,80%, pelo menos 90,84%, pelo menos 90,87%, pelo menos 90,91%, pelo menos 90,94%, pelo menos 90,98%, pelo menos 91,01%, pelo menos 91,05%, pelo menos 91,08%, pelo menos 91,12%, pelo menos 91,15%, pelo menos 91,19%, pelo menos 91,22%, pelo menos 91,26%, pelo menos 91,29%, pelo menos 91,33%, pelo menos 91,36%, pelo menos 91,40%, pelo menos 91,43%, pelo menos 91,46%, pelo menos 91,50%, pelo menos 91,53%, pelo menos 91,57%, pelo menos 91,60%, pelo menos 91,64%, pelo menos 91,67%, pelo menos 91,71%, pelo menos 91,74%, pelo menos 91,78%, pelo menos 91,81%, pelo menos 91,85%, pelo menos 91,88%, pelo menos 91,92%, pelo menos 91,95%, pelo menos 91,99%, pelo menos 92,02%, pelo menos 92,06%, pelo menos 92,09%, pelo menos 92,13%, pelo menos 92,16%, pelo menos 92,19%, pelo menos, 92,23%, pelo menos 92,26%, pelo menos 92,30%, pelo menos 92,33%, pelo menos 92,37%, pelo menos 92,40%, pelo menos 92,44%, pelo menos 92,47%, pelo menos 92,51%, pelo menos 92,54%, pelo menos 92,58%, pelo menos 92,61%, pelo menos 92,65%, pelo menos 92,68%, pelo menos 92,72%, pelo menos 92,75%, pelo menos 92,79%, pelo menos 92,82%, pelo menos 92,86%, pelo menos 92,89%, pelo menos 92,92%, pelo menos 92,96%, pelo menos 92,99%, pelo menos 93,03%, pelo menos 93,06%, pelo menos 93,10%, pelo menos 93,13%, pelo menos 93,17%, pelo menos 93,20%, pelo menos 93,24%, pelo menos 93,27%, pelo menos 93,31%, pelo menos 93,34%, pelo menos 93,38%, pelo menos 93,41%, pelo menos 93,45%, pelo menos 93,48%, pelo menos 93,52%, pelo menos 93,55%, pelo menos 93,58%, pelo menos 93,62%, pelo menos 93,65%, pelo menos 93,69%, pelo menos 93,72%, pelo menos 93,76%, pelo menos 93,79%, pelo menos 93,83 pelo menos 93,86%, pelo menos 93,90%, pelo menos 93,93 pelo menos 93,97%, pelo menos 94,00%, pelo menos 94,04 pelo menos 94,07%, pelo menos 94,11%, pelo menos 94,14 pelo menos 94,18%, pelo menos 94,21%, pelo menos 94,25 pelo menos 94,28%, pelo menos 94,31%, pelo menos 94,35 pelo menos 94,38%, pelo menos 94,42%, pelo menos 94,45 pelo menos 94,49%, pelo menos 94,52%, pelo menos 94,56 pelo menos 94,59%, pelo menos 94,63%, pelo menos 94,66 pelo menos 94,70%, pelo menos 94,73%, pelo menos 94,77 pelo menos 94,80%, pelo menos 94,84%, pelo menos 94,87 pelo menos 94,91%, pelo menos 94,94%, pelo menos 94,98 pelo menos 95,01%, pelo menos 95,04%, pelo menos 95,08 pelo menos 95,11%, pelo menos 95,15%, pelo menos 95,18 pelo menos 95,22%, pelo menos 95,25%, pelo menos 95,29 pelo menos 95,32%, pelo menos 95,36%, pelo menos 95,39 pelo menos 95,43%, pelo menos 95,46%, pelo menos 95,50 pelo menos 95,53%, pelo menos 95,57%, pelo menos 95,60 pelo menos 95,64%, pelo menos 95,67%, pelo menos 95,71 pelo menos 95,74%, pelo menos 95,77%, pelo menos 95,81 pelo menos 95,84%, pelo menos 95,88%, pelo menos 95,91 pelo menos 95,95%, pelo menos 95,98%, pelo menos 96,02 pelo menos 96,05%, pelo menos 96,09%, pelo menos 96,12 pelo menos 96,16%, pelo menos 96,19%, pelo menos 96,23 pelo menos 96,26%, pelo menos 96,30%, pelo menos 96,33 pelo menos 96,37%, pelo menos 96,40%, pelo menos 96,44 pelo menos 96,47%, pelo menos 96,50%, pelo menos 96,54 pelo menos 96,57%, pelo menos 96,61%, pelo menos 96,64 pelo menos 96,68%, pelo menos 96,71%, pelo menos 96,75 pelo menos 96,78%, pelo menos 96,82%, pelo menos 96,85 pelo menos 96,89%, pelo menos 96,92%, pelo menos 96,96%, pelo menos 96,99%, pelo menos 97,03%, pelo menos 97,06%, pelo menos 97,10%, pelo menos 97,13%, pelo menos 97,17%, pelo menos 97,20%, pelo menos 97,23%, pelo menos 97,27%, pelo menos 97,30%, pelo menos 97,34%, pelo menos 97,37%, pelo menos 97,41%, pelo menos 97,44%, pelo menos 97,48%, pelo menos 97,51%, pelo menos 97,55%, pelo menos 97,58%, pelo menos 97,62%, pelo menos 97,65%, pelo menos 97,69%, pelo menos 97,72%, pelo menos 97,76%, pelo menos 97,79%, pelo menos 97,83%, pelo menos 97,86%, pelo menos 97,89%, pelo menos 97,93%, pelo menos 97,96%, pelo menos 98,00%, pelo menos 98,03%, pelo menos 98,07%, pelo menos 98,10%, pelo menos 98,14%, pelo menos 98,17%, pelo menos 98,21%, pelo menos 98,24%, pelo menos 98,28%, pelo menos 98,31%, pelo menos 98,35%, pelo menos 98,38%, pelo menos 98,42%, pelo menos 98,45%, pelo menos 98,49%, pelo menos 98,52%, pelo menos 98,56%, pelo menos 98,59%, pelo menos 98,62%, pelo menos 98,66%, pelo menos 98,69%, pelo menos 98,73%, pelo menos 98,76%, pelo menos 98,80%, pelo menos 98,83%, pelo menos 98,87%, pelo menos 98,90%, pelo menos 98,94%, pelo menos 98,97%, pelo menos 99,01%, pelo menos 99,04%, pelo menos 99,08%, pelo menos 99,11%, pelo menos 99,15%, pelo menos 99,18%, pelo menos 99,22%, pelo menos 99,25%, pelo menos 99,29%, pelo menos 99,32%, pelo menos 99,35%, pelo menos 99,39%, pelo menos 99,42%, pelo menos 99,46%, pelo menos 99,49%, pelo menos 99,53%, pelo menos 99,56%, pelo menos 99,60%, pelo menos 99,63%, pelo menos 99,67%, pelo menos 99,70%, pelo menos 99,74%, pelo menos 99,77%, pelo menos 99,81%, pelo menos 99,84%, pelo menos 99,88%, pelo menos 99,91%, pelo menos 99,95%, pelo menos 99 ,98% ou 100% idêntica) a SEQ ID NO: 9, e (e) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos 96,6% idêntica (por exemplo, pelo menos 96,66%, pelo menos 96,71%, pelo menos 96,77%, pelo menos 96,83%, pelo menos 96,89%, pelo menos 96,94%, pelo menos 97,00%, pelo menos 97,06%, pelo menos 97,11%, pelo menos 97,17%, pelo menos 97,23%, pelo menos 97,29%, pelo menos 97,34%, pelo menos 97,40%, pelo menos 97,46%, pelo menos 97,51%, pelo menos 97,57%, pelo menos 97,63%, pelo menos 97,69%, pelo menos 97,74%, pelo menos 97,80%, pelo menos 97,86%, pelo menos 97,92%, pelo menos 97,97%, pelo menos 98,03%, pelo menos 98,09%, pelo menos 98,14%, pelo menos 98,20%, pelo menos 98,26%, pelo menos 98,32%, pelo menos 98,37%, pelo menos 98,43%, pelo menos 98,49%, pelo menos 98,54%, pelo menos 98,60%, pelo menos 98,66%, pelo menos 98,72%, pelo menos 98,77%, pelo menos 98,83%, pelo menos 98,89%, pelo menos 98,94%, pelo menos 99,00%, pelo menos 99,06%, pelo menos 99,12%, pelo menos 99,17%, pelo menos 99,23%, pelo menos 99,29%, pelo menos 99,34%, pelo menos 99,40%, pelo menos 99,46%, pelo menos 99,52%, pelo menos 99,57%, pelo menos 99,63%, pelo menos 99,69%, pelo menos 99,74%, pelo menos 99,80%, pelo menos 99,86%, pelo menos 99,92%, pelo menos 99,97% ou 100% idêntica) a SEQ ID NO: 10.

[042] O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender um, dois, três, quatro, cinco ou todas as sequências acima mencionadas, isoladamente ou em qualquer combinação. A este respeito, o adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender qualquer combinação de quaisquer duas das sequências acima mencionadas, qualquer combinação de quaisquer três das sequências acima mencionadas, qualquer combinação de quaisquer quatro das sequências acima mencionadas, ou todas as cinco das sequências acima mencionadas. Por exemplo, o adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos 98,6% idêntica à SEQ ID NO: 6. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 99,06% idêntica à SEQ ID NO: 7 e uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 97,13% idêntica à SEQ ID NO: 8. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 97,13% idêntica à SEQ ID NO: 8, uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 90,7% idêntica à SEQ ID NO: 9, e uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 96,6% idêntica à SEQ ID NO: 10. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender (a) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 6, (b) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 7, (c) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 8, (d) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 9, ou (e) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 10. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender (a) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 98,6% idêntica à SEQ ID NO: 6, (b) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 99,06% idêntica à SEQ ID NO: 7, (c) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos, 97,13% idêntica à SEQ ID NO: 8, (d) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos 90,7% idêntica à SEQ ID NO: 9, e (e) uma sequência de ácido nucleico que é, pelo menos 96,6% idêntica à SEQ ID NO: 10. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender (a) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 6, (b) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 7, (c) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 8, (d) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 9, e (e) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 10.

[043] Em uma outra forma de realização, o adenovírus ou vetor adenoviral compreende um ou mais das seguintes sequências de ácidos nucleicos: (a) uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 121 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 6, (b) uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 462 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 7, (c) uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 234 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 8, (d) uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 606 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 9, ou (e) uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 188 nucleotídeos contíguos

[044] de SEQ ID NO: 10 O adenovírus ou . vetor adenoviral pode compreender uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 121 (por exemplo, 125 ou mais, 130 ou mais, 150 ou mais, 200 ou mais, 250 ou mais, ou 300 ou mais) nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 6, mas não mais do que 399 (por exemplo, 398 ou menos, 350 ou menos ou 275 ou menos) nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 6. Preferencialmente, o adenovírus ou vetor adenoviral compreende uma sequência de ácido nucleico que compreende de 121 a 300 nucleotídeos contíguos (por exemplo, 125, 150, 175, 200, 250 ou 275 nucleotídeos contíguos), 121 a 200 nucleotídeos contíguos (por exemplo, 130, 140, 145, 160, 165, 170, 180, 185, 190, 195 ou 199 nucleotídeos contíguos), ou 121 a 150 nucleotídeos contíguos (por exemplo, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139 , 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148 ou 149 nucleotídeos contíguos) de SEQ ID NO: 6, ou um intervalo definido por quaisquer dois dos valores acima referidos.

[045] O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 462 (por exemplo, 470 ou mais, 500 ou mais, 600 ou mais, 700 ou mais, 800 ou mais, 900 ou mais ou 1000 ou mais) nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 7, mas não mais do que 3168 (por exemplo, 3.100 ou menos, 3.000 ou menos, 2.500 ou menos, 2.000 ou menos ou 1.500 ou menos) nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 7. Preferencialmente, o adenovírus ou vetor adenoviral compreende uma sequência de ácido nucleico que compreende 462 a 2000 nucleotídeos contíguos (por exemplo, 475, 500, 700, 1.000, 1.200, 1.500 ou 1.700 nucleotídeos contíguos), 462 a 1.000 nucleotídeos contíguos (por exemplo, 490, 525, 575, 600, 650, 675, 725, 750, 800, 850, 900 ou 950 nucleotídeos contíguos), ou 462 a 800 nucleotídeos contíguos (por exemplo, 480, 485, 490, 495, 499 , 510, 515, 530, 540, 550, 560, 565, 570, 580, 585, 590, 595, 615, 625, 630, 640, 660, 665, 670, 680, 685, 690, 695, 705, 715 , 730, 740, 755, 760, 765, 770, 775, 780, 785, 790, 795 ou 799 nucleotídeos contíguos) de SEQ ID NO: 7, ou um intervalo definido por quaisquer dois dos valores acima referidos.

[046] O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 234 (por exemplo, 235 ou mais, 250 ou mais, 300 ou mais, 350 ou mais, 400 ou mais, 450 ou mais ou 500 ou mais) nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 8, mas não mais do que 1.974 (por exemplo, 1.900 ou menos, 1.800 ou menos, 1.500 ou menos, 1.200 ou menos, 1.000 ou menos, 850 ou menos, 800 ou menos, 750 ou menos ou 700 ou menos) nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 8. Preferencialmente, o adenovírus ou vetor adenoviral compreende uma sequência de ácido nucleico que compreende de 234 a 1.500 nucleotídeos contíguos (por exemplo, 290, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, ou 1.200 nucleotídeos contíguos), de 234 a 1.000 nucleotídeos contíguos (por exemplo, 295, 350, 450, 550, 650, 750, 850, ou 950 nucleotídeos contíguos), ou de 234 a 500 nucleotídeos contíguos (por exemplo, 290, 305, 310, 315, 325, 340, 345, 360, 365, 370, 375, 380, 385, 390, 395, 405, 425, 430, 440, 455, 460, 465, 470, 475, 480, 485, 490, 495 ou 499 nucleotídeos contíguos) de SEQ ID NO: 8, ou um intervalo definido por qualquer um dos dois valores anteriores.

[047] O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 606 (por exemplo, 610 ou mais, 650 ou mais, 700 ou mais, 800 ou mais, ou 1.000 ou mais) nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 9, mas não mais do que 2.877 (2.800 ou menos, 2.500 ou menos, 2.000 ou menos, 1.800 ou menos ou 1.500 ou menos) nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 9. De preferência, o adenovírus ou vetor adenoviral compreende uma sequência de ácido nucleico que compreende de 606 a 2000 nucleotídeos contíguos (por exemplo, 615, 650, 700, 800, 900, 1.000, 1.200, 1.500, 1.700 ou 1.900 nucleotídeos contíguos), de 606 a 1.000 nucleotídeos contíguos (por exemplo, 630, 645, 665, 675, 725, 750, 775, 825, 850, 875, 925, 95, ou 975 nucleotídeos contíguos), ou de 606 a 800 nucleotídeos contíguos (por exemplo, 620, 635, 640, 655, 660, 670, 680, 685, 690, 695, 699, 705, 715, 730, 735, 740, 745, 755, 760, 765, 770, 785, 790, 795 ou 799 nucleotídeos contíguos) de SEQ ID NO: 9, ou um intervalo definido por quaisquer dois dos valores acima referidos.

[048] O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 188 (por exemplo, 189 ou mais, 200 ou mais, 300 ou mais, 500 ou mais, 700 ou mais ou 900 ou mais) nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 10, mas não mais do que 1.749 (1.700 ou menos, 1.500 ou menos, 1.200 ou menos, ou 1.000 ou menos) nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 10. Preferencialmente, o adenovírus ou vetor adenoviral compreende uma sequência de ácido nucleico que compreende de 188 a 1.500 nucleotídeos contíguos (por exemplo, 200, 400, 600, 800, 1.000, 1.200 ou 1.400 nucleotídeos contíguos), de 188 a 1.000 nucleotídeos contíguos (por exemplo, 195, 250, 350, 450, 550, 650, 750, 850 ou 950 nucleotídeos contíguos), ou de 188 a 500 nucleotídeos contíguos (por exemplo, 190, 225, 230, 240, 255, 260, 265, 270 , 275, 315, 325, 330, 340, 355, 360, 365, 370, 375, 380, 385, 390, 395, 415, 425, 430, 440, 455, 460, 465, 470, 475, 480, 485, 490, 495 ou 499 nucleotídeos contíguos) da SEQ ID NO: 10, ou um intervalo definido por qualquer um dos dois valores anteriores.

[049] O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender um, dois, três, quatro, cinco ou todas as sequências acima mencionadas sozinhas ou em qualquer combinação. A este respeito, o adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender qualquer combinação de quaisquer duas das sequências acima mencionadas, qualquer combinação de quaisquer três das sequências acima mencionadas, qualquer combinação de quaisquer quatro das sequências acima mencionadas ou todas as cinco das sequências acima mencionadas. Por exemplo, o adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 121 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 6. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 234 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 8, e uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 188 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 10. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 462 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 7, uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 606 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 9, e uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 188 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 10. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 121 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 6, uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 462 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 7, uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 234 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 8, e uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 606 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 9. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender (a) uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 121 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 6, (b) uma sequência de ácido nucleico, que compreende, pelo menos, 462 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 7, (c) uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 234 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 8, (d) uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 606 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 9, e (e) uma sequência de ácido nucleico que compreende, pelo menos, 188 nucleotídeos contíguos de SEQ ID NO: 10.

[050] Em uma outra forma de realização, o adenovírus ou vetor adenoviral compreende um ou mais das seguintes sequências de aminoácidos: (a) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, (b) uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 82 % idêntica (por exemplo, pelo menos 88,67%, pelo menos 95,33% ou 100% idêntica) a SEQ ID NO: 13, (c) uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 80% idêntica (por exemplo, pelo menos 81%, em menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 83,06%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 85,28%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 87,5%, pelo menos 88%, pelo menos 88,67%, pelo menos 89%, pelo menos 89,72%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 91,94%, pelo menos 92%, pelo menos 92,33%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 94,17%, pelo menos 95%, pelo menos 95,33%, pelo menos 95,67%, pelo menos 96%, pelo menos 96,39%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 98,61%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5% ou 100% idêntica) a SEQ ID NO: 14, e (d) uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 83% idêntica (por exemplo, pelo menos 89,67%, pelo menos 96,33% ou 100% idêntica) a SEQ ID NO: 15.

[051] O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma, duas, três ou todas as quatro sequências de aminoácidos acima mencionadas, isoladamente ou em qualquer combinação. A este respeito, o adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender qualquer combinação de quaisquer duas das sequências acima mencionadas, qualquer combinação de quaisquer três das sequências acima mencionadas ou todas os quatro das sequências acima mencionadas. Por exemplo, o adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, e uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 82% idêntica à SEQ ID NO: 13. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 82% idêntica à SEQ ID NO: 13, e um grupo amino sequência de ácido que é, pelo menos, 83% idêntica à SEQ ID NO: 15. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender (a) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, (b) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 13, (c) a sequência de amino ácido de SEQ ID NO: 14, ou (d) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 15. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender (a) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, (b) uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 82% idêntica à SEQ ID NO: 13, (c) uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 80% idêntica à SEQ ID NO: 14, e (d) um grupo amino sequência de ácido que é, pelo menos, 83% idêntica à SEQ ID NO: 15. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender (a) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, (b) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 13, (c) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14, e (d) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 15.

[052] Em uma outra forma de realização, o adenovírus ou vetor adenoviral compreende um ou mais das seguintes sequências de aminoácidos: (a) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16, (b) uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 97,8% idêntica (por exemplo, pelo menos 97,95%, pelo menos 98,10%, pelo menos 98,26%, pelo menos 98,41%, pelo menos 98,56%, pelo menos 98,71%, pelo menos 98,86%, pelo menos 99,02%, pelo menos 99,17%, pelo menos 99,32%, pelo menos 99,47%, pelo menos 99,62%, pelo menos 99,78% ou 100% idêntica) a SEQ ID NO: 18, (c) uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 93,4% idêntica (por exemplo, pelo menos 93,50%, pelo menos 93,61%, pelo menos 93,71%, pelo menos 93,82%, pelo menos 93,92%, pelo menos 94,03%, pelo menos 94,13%, pelo menos 94,23%, pelo menos 94,34%, pelo menos 94,44%, pelo menos 94,55%, pelo menos 94,65%, pelo menos 94,76%, pelo menos 94,86%, pelo menos 94,96%, pelo menos 95,07%, pelo menos 95,17%, pelo menos 95,28%, pelo menos 95,38%, pelo menos 95,49%, pelo menos 95,59%, pelo menos 95,69%, pelo menos 95,80%, pelo menos 95,90%, pelo menos 96,01%, pelo menos, 96,11%, pelo menos 96,22%, pelo menos 96,32%, pelo menos 96,42%, pelo menos 96,53%, pelo menos 96,63%, pelo menos 96,74%, pelo menos 96,84%, pelo menos 96,95%, pelo menos 97,05%, pelo menos 97,15%, pelo menos 97,26%, pelo menos 97,36%, pelo menos 97,47%, pelo menos 97,57%, pelo menos 97,68%, pelo menos 97,78%, pelo menos 97,88%, pelo menos 97,99%, pelo menos 98,09%, pelo menos 98,20%, pelo menos 98,30%, pelo menos 98,41%, pelo menos 98,51%, pelo menos 98,61%, pelo menos 98,72%, pelo menos 98,82%, pelo menos 98,93%, pelo menos 99,03%, pelo menos 99,14%, pelo menos 99,24%, pelo menos 99,34%, pelo menos 99,45%, pelo menos 99,55%, pelo menos 99,66%, pelo menos 99,76%, pelo menos 99,87%, pelo menos, 99,97% ou 100% idêntica) a SEQ ID NO: 19, e (d) uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 98,2% idêntica (por exemplo, pelo menos 98,37%, pelo menos 98,54%, pelo menos 98,71%, pelo menos 98,89%, pelo menos 99,06%, pelo menos 99,23%, pelo menos 99,40%, pelo menos 99,57%, pelo menos 99,74%, pelo menos 99,92% ou 100% idêntica) a SEQ ID NO: 20.

[053] O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma, duas, três ou todas as quatro sequências de aminoácidos acima mencionadas, isoladamente ou em qualquer combinação. A este respeito, o adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender qualquer combinação de quaisquer duas das sequências acima mencionadas, qualquer combinação de quaisquer três das sequências acima mencionadas ou todas as quatro das sequências acima mencionadas. Por exemplo, o adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16, e uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 93,4% idêntica à SEQ ID NO: 19. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16, uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 93,4% idêntica à SEQ ID NO: 19, e uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 98,2% idêntica à SEQ ID NO: 20. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender (a) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16, (b) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 18, (c) a sequência de amino ácido de SEQ ID NO: 19, ou (d) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 20. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender (a) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16, (b) uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 97,8% idêntica à SEQ ID NO: 18, (c) uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 93,4% idêntica à SEQ ID NO: 19, e (d) uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 98,2% idêntica à SEQ ID NO: 20. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender (a) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16, (b) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 18, (c) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19, e (d) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 20.

[054] Em uma outra forma de realização, o adenovírus ou vetor adenoviral compreende uma ou mais das seguintes sequências de aminoácidos: (a) uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 89 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 16, (b) uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 247 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 18, (c) uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 370 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 19, e (d) uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 192 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 20.

[055] O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de aminoácido compreendendo pelo menos 89 (por exemplo, 90 ou mais, 100 ou mais 110 ou mais) resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 16, mas não mais do que 133 (por exemplo, 130 ou menos, 125 ou menos, 120 ou menos ou 115 ou menos) resíduos de aminoácido contíguos de SEQ ID NO: 16. Preferencialmente, o adenovírus ou vetor adenoviral compreende uma sequência de aminoácidos que compreende de 89 a 130 resíduos de aminoácidos contíguos (por exemplo, 90, 100, 110, 115, 120 ou 125 resíduos de aminoácidos contíguos) de SEQ ID NO: 16, de 89 a 115 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 16 (por exemplo, 95, 110 ou 112 resíduos de aminoácidos contíguos), ou de 89 a 100 resíduos de aminoácidos contíguos (por exemplo, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 99 ou resíduos de aminoácidos contíguos) de SEQ ID NO: 16, ou um intervalo definido por quaisquer dois dos valores anteriores.

[056] O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de aminoácido compreendendo, pelo menos 247 (por exemplo, 250 ou mais, 275 ou mais, 300 ou mais ou 400 ou mais) resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 18, mas não mais do que 658 (por exemplo, 650 ou menos, 550 ou menos ou 450 ou menos) resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 18. Preferencialmente, o adenovírus ou vetor adenoviral compreende uma sequência de ácido compreendendo de 247 a 600 resíduos de aminoácidos contíguos (por exemplo, 255, 275, 300, 400 ou 500 resíduos de aminoácidos contíguos) de SEQ ID NO: 18, de 247 a 500 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 18 (por exemplo, 325, 350, 375, 425, 450, ou 475 resíduos de aminoácidos contíguos), ou de 247 a 400 resíduos de aminoácidos contíguos (por exemplo, 265, 280, 285, 290, 295, 360, 365, 380, 385, 390, 395 ou 399 resíduos de aminoácidos contíguos) de SEQ ID NO: 18, ou um intervalo definido por quaisquer dois dos valores anteriores.

[057] O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos 370 (por exemplo, 380 ou mais, 400 ou mais, 500 ou mais) resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 19, mas não mais do que 959 (por exemplo, 950 ou menos, 900 ou menos, 800 ou menos, 700 ou menos ou 600 ou menos) resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 19. Preferencialmente, o adenovírus ou vetor adenoviral compreende uma sequência de aminoácidos compreendendo de 370 a 800 resíduos de aminoácidos contíguos (por exemplo, 390, 400, 500, 600 ou 700 resíduos de aminoácidos contíguos) de SEQ ID NO: 19, de 370 a 600 resíduos de aminoácidos contíguos (por exemplo, 375, 385, 395, 425, 445, 450 , 465, 475, 525, 545, 550, 565 ou 575 resíduos de aminoácidos contíguos) de SEQ ID NO: 19, ou de 370 a 500 resíduos de aminoácidos contíguos (por exemplo, 385, 389, 395, 399, 415, 435, 440 , 460, 470, 480, ou 499 resíduos de aminoácidos contíguos) de SEQ ID NO: 19, ou um intervalo definido por quaisquer dois dos valores anteriores.

[058] O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 192 (por exemplo, 193 ou mais, 200 ou mais ou 300 ou mais) resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 20, mas não mais do que 583 (por exemplo, 580 ou menos, 550 ou menos, 500 ou menos, 450 ou menos ou 400 ou menos) resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 20. Preferencialmente, o adenovírus ou vetor adenoviral compreende uma sequência de aminoácidos compreendendo de 192 a 500 resíduos de aminoácidos contíguos (por exemplo, 198, 200, 300 ou 400 resíduos de aminoácidos contíguos) de SEQ ID NO: 20, de 192 a 300 resíduos de aminoácidos contíguos (por exemplo, 194, 196, 200, 210, 220, 230, 240 , 250, 260, 270, 280 ou 290 resíduos de aminoácidos contíguos) de SEQ ID NO: 20, ou de 192 a 250 resíduos de aminoácidos contíguos (por exemplo, 195, 199, 215, 225, 235 ou 245 resíduos de aminoácidos contíguos) de SEQ ID NO: 20, ou um intervalo definido por quaisquer dois dos valores anteriores.

[059] O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma, duas, três ou todas as quatro sequências de aminoácidos acima mencionadas, isoladamente ou em qualquer combinação. A este respeito, o adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender qualquer combinação de quaisquer duas das sequências acima mencionadas, qualquer combinação de quaisquer três das sequências acima mencionadas ou todas as quatro das sequências acima mencionadas. Por exemplo, o adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de aminoácidos compreendendo, pelo menos, 89 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 16. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 89 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 16, e uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 370 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 19. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 89 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 16, uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 247 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 18, e uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 370 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 19. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 89 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 16, uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 247 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 18, e uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 192 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 20. O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender (a) uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 89 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 16, (b) uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 247 resíduos de aminoácidos contíguos de SEQ ID NO: 18, (c) uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 370 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 19, e (d) uma sequência de aminoácidos que compreende, pelo menos, 192 resíduos de aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 20.

[060] Em outras formas de realização, o adenovírus ou vetor adenoviral compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos que codificam uma ou mais de qualquer uma das sequências de aminoácidos acima mencionadas, por exemplo, as sequências de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 01-20 ou qualquer uma das variantes e/ou porções das mesmas conforme aqui descrito. Por exemplo, o adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender uma sequência de ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 99,78% idêntica (por exemplo, pelo menos 99,87%, pelo menos 99,97% ou 100% idêntica) à SEQ ID NO: 17, ou uma sequência de ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que é, pelo menos, 99% idêntica (por exemplo, pelo menos, 99,68% ou 100% idêntica) à SEQ ID NO: 12.

[061] O adenovírus ou vetor adenoviral pode compreender a sequência de ácido nucleico de, por exemplo, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 ou SEQ ID NO: 25.

[062] Tal como aqui discutido, o adenovírus ou vetor adenoviral pode ser competente para replicação, condicionalmente replicante, ou deficiente em replicação. De preferência, o adenovírus ou vetor adenoviral é deficiente em replicação, de tal forma que o adenovírus ou vetor adenoviral deficiente em replicação requer complementação de, pelo menos, uma função do gene essencial para a replicação de uma ou mais regiões do genoma adenoviral, para propagação (por exemplo, para formar partículas de vetor adenoviral).

[063] O adenovírus ou vetor adenoviral deficiente em replicação pode ser modificado de qualquer modo adequado para causar as deficiências nas funções de um ou mais genes essenciais para a replicação em uma ou mais regiões do genoma adenoviral, para propagação. A complementação das deficiências nas funções de um ou mais genes essenciais para a replicação de uma ou mais regiões do genoma adenoviral refere-se à utilização de meios exógenos para proporcionar as funções do gene essencial para a replicação deficiente. Esta complementação pode ser efetuada de qualquer forma adequada, por exemplo, utilizando células e/ou DNA exógeno de complementação (por exemplo, auxiliar de adenovírus) que codifica para as funções do gene essencial para a replicação desestruturados.

[064] O adenovírus ou vetor adenoviral pode ser deficientes em replicação são divulgados nas Patentes dos EUA 5.837.511; 5.851.806; 5.994.106; 6.127.175; 6.482.616, e 7.195.896, e as Publicações de Pedido de Patente Internacional WO 1994/028152, WO 1995/002697, WO 1995/016772, WO 1995/034671, WO 1996/022378, WO 1997/012986, WO 1997/021826 e WO 2003/022311.

[065] As regiões precoces do genoma adenoviral incluem as regiões E1, E2, E3 e E4. A região E1 compreende as sub- regiões E1A e E1B, e uma ou mais deficiências nas funções de gene essencial para a replicação na região E1 pode incluir uma ou mais deficiências nas funções de gene essencial para a replicação em qualquer uma ou em ambas os sub-regiões E1A e E1B, requerendo, assim, a complementação de uma sub-região E1 e/ou sub-região E1B do genoma adenoviral para o adenovírus ou vetor adenoviral para propagar (por exemplo, para formar partículas de vetores adenovirais). A região E2 compreende as sub-regiões E2A e E2B, e uma ou mais deficiências nas funções de gene essencial para a replicação na região E2 pode incluir uma ou mais deficiências nas funções de gene essencial para a replicação em qualquer uma ou em ambas as sub-regiões E2A e E2B, exigindo assim complementação da sub-região E2A e/ou sub-região E2B do genoma adenoviral do adenovírus ou vetor adenoviral para propagar (por exemplo, para formar partículas de vetores adenovirais).

[066] A região E3 não inclui quaisquer funções de genes essenciais para a replicação, tal que a exclusão da região E3, em parte ou totalmente não necessita de complementação de quaisquer funções de genes na região E3 para o adenovírus ou vetor adenoviral para propagar (por exemplo, para formar partículas de vetores adenovirais). No contexto da invenção, a região E3 é definida como a região que se inicia com o quadro de leitura aberto que codifica uma proteína com elevada homologia com a proteína 12.5K a partir da região E3 do adenovírus humano 5 (sequência de referência NCBI AP_000218) e termina com o quadro de leitura aberto que codifica uma proteína com elevada homologia com a proteína 14.7K a partir da região E3 do adenovírus humano 5 (sequência de referência NCBI AP 000.224,1). A região E3 pode ser suprimida, no todo ou em parte, ou mantida no todo ou em parte. O tamanho da deleção pode ser adaptado de modo a reter um adenovírus ou vetor adenoviral cujo genoma se aproxima do tamanho de empacotamento de genoma ótimo. Uma deleção maior irá acomodar a inserção de sequências de ácidos nucleicos heterólogos maiores do adenovírus ou genoma adenoviral. Em uma forma de realização da invenção, as sequências de sinal de poliadenilação L4, que residem na região E3, são retidas.

[067] A região E4 compreende vários quadros abertos de leitura (ORFs). Um adenovírus ou vetor adenoviral com uma deleção de todos os quadros abertos de leitura da região E4 exceto ORF6, e em alguns casos a ORF3, não requer a complementação de qualquer das funções do gene da região E4 de adenovírus ou vetor adenoviral para propagar (por exemplo, para formar partículas de vetores adenovirais). Por outro lado, um adenovírus ou um vetor adenoviral com a desestruturação ou remoção de ORF6, e em alguns casos, ORF3, da região E4 (por exemplo, com uma deficiência de uma função do gene essencial para a replicação baseada em ORF6 e/ou ORF3 da região E4), com ou sem uma desestruturação ou deleção de qualquer dos outros quadros abertos de leitura da região E4 ou do promotor E4 nativo, sequência de poliadenilação, e/ou o lado direito da repetição terminal invertida (ITR), requer a complementação da região E4 (especificamente, da ORF6 e/ou ORF3 da região E4) para o adenovírus ou vetor adenoviral propagar (por exemplo, para formar partículas de vetores adenovirais). As regiões tardias do genoma adenoviral incluem as regiões L1, L2, L3, L4 e L5. O adenovírus ou vetor adenoviral também pode ter uma mutação no promotor tardio principal (MLP), conforme discutido no pedido de patente internacional WO 2000/000628, o que pode tornar o adenovírus ou vetor adenoviral deficiente na replicação, se desejado.

[068] A uma ou mais regiões do genoma adenoviral que contêm uma ou mais deficiências nas funções de gene essencial para a replicação são desejavelmente uma ou mais regiões precoces do genoma adenoviral, ou seja, as regiões E1, E2 e/ou E4, opcionalmente com a supressão, em parte ou na totalidade da região E3.

[069] O adenovírus ou vetor adenoviral deficiente na replicação também pode ter uma ou mais mutações em comparação com o adenovírus do tipo selvagem (por exemplo, uma ou mais deleções, inserções e/ou substituições) no genoma adenoviral que não inibem replicação viral em células hospedeiras. Assim, além de uma ou mais deficiências de funções do gene essencial para a replicação, o adenovírus ou o vetor adenoviral pode ser deficiente em outros aspectos, que não são essenciais para a replicação. Por exemplo, o adenovírus ou vetor adenoviral pode ter uma deleção parcial ou inteira da região precoce adenoviral conhecida como a região E3, que não é essencial para a propagação de adenovírus ou genoma adenoviral.

[070] Em uma forma de realização, o adenovírus ou vetor adenoviral é deficiente na replicação e requer, no máximo, a complementação da região E1 ou a região E4 do genoma adenoviral, para propagação (por exemplo, para formar partículas de vetores adenovirais). Assim, o adenovírus ou vetor adenoviral deficiente em replicação requer complementação de, pelo menos, uma função do gene essencial para a replicação da sub-região E1A e/ou região E1B do genoma adenoviral (denotado um vetor adenoviral deficiente em E1) ou a região E4 do genoma adenoviral (denotado um vetor adenoviral deficiente em E4) para propagação (por exemplo, para formar partículas de vetores adenovirais). O adenovírus ou vetor adenoviral pode ser deficiente em, pelo menos, uma função de um gene essencial para a replicação (desejavelmente todas as funções do gene essencial para a replicação) da região E1 do genoma adenoviral e, pelo menos, uma função do gene da região não essencial E3 do genoma adenoviral (denotado um vetor adenoviral deficiente em E1/E3). O adenovírus ou vetor adenoviral pode ser deficiente em, pelo menos, uma função de um gene essencial para a replicação (desejavelmente todas as funções do gene essencial para a replicação) da região E4 do genoma adenoviral e, pelo menos, uma função de um gene da região E3 não essencial do genoma adenoviral (denotado um vetor adenoviral deficiente em E3/E4).

[071] Em uma forma de realização, o adenovírus ou vetor adenoviral é deficiente na replicação e requer, no máximo, a complementação da região E2, de preferência a sub-região E2A, do genoma adenoviral, para propagação (por exemplo, para formar partículas de vetores adenovirais). Assim, o adenovírus ou vetor adenoviral deficiente em replicação requer complementação de, pelo menos, uma função do gene essencial para a replicação da sub-região E2A do genoma adenoviral (denotado um vetor adenoviral deficiente em E2A) para propagação (por exemplo, para formar partículas de vetores adenovirais). O adenovírus ou vetor adenoviral pode ser deficiente em, pelo menos, uma função de um gene essencial para a replicação (desejavelmente todas as funções do gene essencial para a replicação) da região E2A do genoma adenoviral e de, pelo menos, uma função do gene da região E3 não essencial do genoma adenoviral (denotado um vetor adenoviral deficiente em E2A/E3).

[072] Em uma forma de realização, o adenovírus ou vetor adenoviral é deficiente na replicação e requer, no máximo, a complementação das regiões E1 e E4 do genoma adenoviral para propagação (por exemplo, para formar partículas de vetores adenovirais). Assim, o adenovírus ou vetor adenoviral deficiente em replicação requer complementação de, pelo menos, uma função do gene essencial para a replicação de ambas as regiões E1 e E4 do genoma adenoviral (denotado um vetor adenoviral deficiente em E1/E4) para propagação (por exemplo, para formar partículas de vetores adenovirais). O adenovírus ou vetor adenoviral pode ser deficiente em, pelo menos, uma função de um gene essencial para a replicação (desejavelmente todas as funções do gene essencial para a replicação) da região E1 do genoma adenoviral, pelo menos, uma função do gene essencial para a replicação da região E4 do genoma adenoviral, e pelo menos uma função do gene da região E3 não essencial do genoma adenoviral (denotado um vetor adenoviral deficiente em E1/E3/E4). O adenovírus ou vetor adenoviral requer preferencialmente, no máximo, a complementação da região E1 do genoma adenoviral para propagação, e não necessita de complementação de qualquer outra deficiência do genoma adenoviral para propagação. Mais preferencialmente, o adenovírus ou vetor adenoviral requer, no máximo, a complementação das regiões E1 e E4 do genoma adenoviral para propagação, e não exige complementação de qualquer outra deficiência do genoma adenoviral para propagação.

[073] O adenovírus ou vetor adenoviral, quando deficiente em várias funções do gene essencial para a replicação do genoma adenoviral (por exemplo, um vetor adenoviral deficiente em E1/E4), pode incluir uma sequência espaçadora para proporcionar o crescimento viral em uma linha celular complementar semelhante ao conseguido por adenovírus ou vetores adenovirais deficientes em uma única função de gene essencial para a replicação (por exemplo, um vetor adenoviral deficiente em E1). A sequência espaçadora pode conter qualquer sequência de nucleotídeos ou sequências que são de um comprimento desejado, tal como as sequências de, pelo menos, cerca de 15 pares de bases (por exemplo, entre cerca de 15 nucleotídeos e cerca de 12.000 nucleotídeos), de preferência cerca de 100 nucleotídeos a aproximadamente 10.000 nucleotídeos, mais preferivelmente cerca de 500 nucleotídeos até cerca de 8.000 nucleotídeos, ainda mais preferivelmente cerca de 1.500 nucleotídeos a cerca de 6.000 nucleotídeos, e mais de preferência cerca de 2.000 a cerca de 3.000 nucleotídeos de comprimento, ou um intervalo definido por quaisquer dois dos valores anteriores. A sequência espaçadora pode ser de codificação ou de não codificação e nativa ou não nativa no que diz respeito ao genoma adenoviral, mas não restaura a função essencial para a replicação para a região deficiente. O espaçador pode também conter uma cassete de expressão. Mais de preferência, o espaçador compreende uma sequência de poliadenilação e/ou um gene que não é nativo com respeito ao adenovírus ou vetor adenoviral. O uso de um espaçador em um vetor adenoviral é descrito mais adiante, por exemplo, Patente dos EUA 5.851.806 e Publicação do Pedido de Patente Internacional WO 1997/021826.

[074] Através da remoção de todo ou parte do genoma adenoviral, por exemplo, as regiões E1, E3 e E4 do genoma adenoviral, o adenovírus ou vetor adenoviral resultante é capaz de aceitar inserções de sequências de ácidos nucleicos exógenos, mantendo a capacidade de ser empacotado em capsídeos adenovirais. Uma sequência de ácido nucleico exógeno pode ser inserida em qualquer posição do genoma adenoviral, desde que a inserção na posição permita a formação de partícula de adenovírus ou vetor adenoviral. A sequência de ácido nucleico exógeno de preferência está posicionada na região de E1, na região E3, ou na região E4 do genoma adenoviral.

[075] O adenovírus ou vetor adenoviral da invenção deficiente na replicação pode ser produzido em linhas celulares de complementação que fornecem funções de genes não presentes nos adenovírus ou vetor adenoviral deficientes em replicação, mas necessária para a propagação viral, a níveis adequados, a fim de gerar altos títulos de lote de vetor viral. Tais linhas celulares complementares são conhecidas e incluem, mas não estão limitadas a, células 293 (descritas em, por exemplo, Graham et al., J. Gen. Virol., 36:59-72 (1977)), células PER.C6 (descrito em, por exemplo, Publicação de Pedido de Patente Internacional WO 1997/000326, e Patentes dos EUA 5.994.128 e 6.033.908), e células 293-ORF6 (descrito em, por exemplo, Publicação do Pedido de Patente Internacional WO 95/34671 e Brough et al., Virol., 71:9206-9213 (1997)). Outras linhas celulares de complementação adequadas para produzir o adenovírus ou vetor adenoviral do invento deficiente em replicação incluem células complementares que foram geradas para propagar vetores adenovirais que codificam transgenes cuja expressão inibe o crescimento viral em células hospedeiras (ver, por exemplo, Publicação de Pedido de Patente EUA No 2008/0233650). Células complementares adequadas adicionais estão descritas em, por exemplo, Patentes dos EUA 6.677.156 e 6.682.929, e Publicação de Pedido de Patente Internacional WO 2003/020879. Em alguns casos, o genoma celular não necessita compreender as sequências de ácidos nucleicos, os produtos dos genes dos quais complementa para todas as irregularidades de um vetor adenoviral deficiente em replicação. Uma ou mais funções do gene essencial para a replicação que faltam em um vetor adenoviral deficiente em replicação podem ser fornecidas por um vírus auxiliar, por exemplo, um vetor adenoviral, que fornece em trans uma ou mais funções dos genes essenciais necessários para a replicação do adenovírus ou vetor adenoviral deficiente em replicação. Alternativamente, o adenovírus ou vetor adenoviral do invento pode compreender um gene essencial para a replicação não nativo que complementa para as funções de um ou mais genes essenciais para a replicação que faltam para o adenovírus ou vetor adenoviral deficiente em replicação do invento. Por exemplo, um vetor adenoviral deficiente em E1/E4 pode ser modificado para conter uma sequência de ácido nucleico que codifica E4 ORF6 que é obtida ou derivada de um adenovírus diferente (por exemplo, um adenovírus de um sorotipo diferente do que o do adenovírus ou vetor adenoviral do invento, ou um adenovírus de uma espécie diferente da do adenovírus ou vetor adenoviral do invento).

[076] O adenovírus ou vetor adenoviral pode ainda compreender um transgene. O termo "transgene" é aqui definido como uma sequência de ácido nucleico não-nativo, que está operacionalmente ligada a elementos reguladores apropriados (por exemplo, um promotor), de tal modo que a sequência não-nativa de ácido nucleico pode ser expressa para produzir uma proteína (por exemplo, peptídeo ou polipeptídeo). Os elementos reguladores (por exemplo, promotor) podem ser nativos ou não-nativos ao adenovírus ou vetor adenoviral.

[077] Uma sequência de ácido nucleico "não nativa" é uma sequência de ácido nucleico (por exemplo, DNA, RNA, ou uma sequência de cDNA) que não é uma sequência de ácido nucleico ocorrendo naturalmente, de um adenovírus, em condições que ocorrem naturalmente. Assim, a sequência não- nativa de ácido nucleico pode ser encontrada naturalmente em um adenovírus, mas localiza-se em uma posição não-nativa no genoma adenoviral e/ou operacionalmente ligada a um promotor não-nativo. Os termos "sequência não-nativa de ácido nucleico", "sequência de ácido nucleico heteróloga", e "sequência de ácido nucleico exógena" são sinônimos e podem ser utilizados indiferentemente no contexto da invenção. A sequência não-nativa de ácido nucleico, de preferência, é DNA e, preferencialmente, codifica para uma proteína (isto é, uma ou mais sequências de ácidos nucleicos que codificam uma ou mais proteínas).

[078] A sequência não-nativa de ácido nucleico pode codificar uma proteína terapêutica que pode ser utilizada para tratar profilaticamente ou terapeuticamente um mamífero para uma doença. Exemplos de proteínas terapêuticas adequadas incluem citocinas, toxinas, proteínas supressoras de tumores, fatores de crescimento, hormonas, receptores, mitogênios, imunoglobulinas, neuropeptídeos, neurotransmissores e enzimas. Alternativamente, a sequência não-nativa de ácido nucleico pode codificar um antígeno de um agente patogênico (por exemplo, uma bactéria ou um vírus), e o adenovírus ou vetor adenoviral pode ser utilizado como uma vacina.

[079] A invenção fornece uma composição que compreende o adenovírus ou vetor adenoviral aqui descritos e um veículo para esse fim (por exemplo, um veículo farmaceuticamente aceitável). A composição, desejavelmente, é uma composição fisiologicamente aceitável (por exemplo, farmaceuticamente aceitável), a qual compreende um veículo, de preferência, um veículo aceitável fisiologicamente (por exemplo, farmaceuticamente), e o adenovírus ou vetor adenoviral. Qualquer veículo adequado pode ser utilizado dentro do contexto da invenção, e tais veículos são bem conhecidos na arte. A escolha de veículo será determinada, em parte, pela utilização particular da composição (por exemplo, a administração a um animal) e o método particular utilizado para administrar a composição. Idealmente, no contexto de vetores adenovirais deficientes em replicação, a composição farmacêutica é de preferência livre de adenovírus competente para replicação. A composição farmacêutica pode opcionalmente ser estéril.

[080] As composições adequadas incluem soluções isotônicas estéreis aquosas e não aquosas, que podem conter antioxidantes, tampões e bacteriostáticos, e suspensões estéreis aquosas e não-aquosas que podem incluir agentes de suspensão, solubilizantes, agentes espessantes, estabilizantes e conservantes. A composição pode ser apresentada em dose unitária ou em contentores selados multidose, tais como ampolas e frascos, e pode ser armazenada em uma condição liofilizada (liofilizado) requerendo apenas a adição do veículo líquido estéril, por exemplo, água, imediatamente antes da utilização. As soluções e suspensões extemporâneas podem ser preparadas a partir de pós estéreis, grânulos e comprimidos. De preferência, o veículo é uma solução salina tamponada. Mais preferencialmente, o adenovírus ou vetor adenoviral é parte de uma composição formulada para proteger o adenovírus ou vetor adenoviral de danos antes da administração. Por exemplo, a composição pode ser formulada para reduzir a perda de adenovírus ou vetor adenoviral em dispositivos utilizados para preparar, armazenar ou administrar o adenovírus ou vetor adenoviral, tal como material de vidro, seringas ou agulhas. A composição pode ser formulada para diminuir a sensibilidade à luz e/ou a sensibilidade à temperatura do adenovírus ou vetor adenoviral. Para este fim, a composição compreende preferencialmente um veículo líquido farmaceuticamente aceitável, tal como, por exemplo, aqueles descritos acima, e um agente de estabilização selecionado de entre o grupo que consiste em polissorbato 80, L-arginina, polivinilpirrolidona, trealose e suas combinações. O uso de tal composição irá prolongar o tempo de armazenamento do adenovírus ou vetor adenoviral, e facilitar a sua administração. As formulações para adenovírus ou composições contendo o vetor adenoviral são descritas mais em, por exemplo, Patente dos EUA 6.225.289, Patente dos EUA 6.514.943, e na Publicação de Pedido de Patente Internacional WO 2000/034444.

[081] A composição pode também ser formulada para melhorar a eficácia de transdução. Além disso, um perito na arte irá apreciar que o adenovírus ou vetor adenoviral pode estar presente em uma composição com outros agentes terapêuticos ou biologicamente ativos. Por exemplo, fatores que controlam a inflamação, tais como ibuprofeno ou esteróides, podem ser parte da composição para reduzir o inchaço e a inflamação associada com a administração in vivo de adenovírus ou vetor adenoviral. Se o adenovírus ou vetor adenoviral é utilizado para fornecer uma sequência de ácido nucleico que codifica o antígeno para um hospedeiro, estimuladores do sistema imune ou adjuvantes, por exemplo, as interleucinas, lipopolissacarídeos, ou RNA de cadeia dupla, podem ser administrados para melhorar ou modificar qualquer resposta imune ao antígeno. Antibióticos, por exemplo, microbicidas e fungicidas, podem estar presentes para tratar a infecção já existente e/ou reduzir o risco de uma futura infecção, tal como infecção associada com os procedimentos de transferência de genes.

[082] Os exemplos seguintes ilustram adicionalmente a presente invenção e, é claro, não devem ser interpretados como, de alguma forma, limitando o seu âmbito.

EXEMPLO 1

[083] Este exemplo demonstra a imunogenicidade de um vetor adenoviral que codifica uma proteína F de Vírus Sincicial Respiratório (RSV) em ratos de algodão.

[084] Um adenovírus de gorila tendo a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 22 foi modificado por engenharia genética para (1) se tornar deficiente em replicação por deleção da região E1, e (2) expressar a glicoproteína de fusão (F) em Vírus Sincicial Respiratório humano (RSV). Devido a RSV replicar no citoplasma das células, o gene que codifica a proteína F foi modificado para expressão em um núcleo celular através da remoção de sinais de processamento de RNA (por exemplo, locais de splicing de RNA), e teve códon otimizado para a expressão em uma célula de mamífero. A expressão da proteína F a partir do vetor adenoviral foi verificada por infecção de células HEK-293, in vitro, e por um ensaio de mancha de Western utilizando extratos de proteínas das células infectadas e um anticorpo policlonal anti-RSV disponível comercialmente (Pab7133P, Maine Biotechnology, Portland, Maine).

[085] Os ratos de algodão (Sigmodon hispidus) foram injetados no músculo tibial com uma administração única de 107 unidades de partículas (PU) do vetor adenoviral de E1 excluída expressando a glicoproteína F de RSV. Os animais foram então desafiados 28 dias depois com RSV humano vivo (106 unidades formadoras de partículas (pfu) administrados por via intranasal). Ao fim de 5 dias após o desafio, a carga viral de RSV nos pulmões dos animais foi medida. Os animais que foram imunizados com o vetor adenoviral expressando a proteína F não tiveram RSV detectável nos pulmões (limite de detecção de 70 pfu/g de tecido pulmonar).

[086] Os resultados deste exemplo demonstram que o vetor adenoviral do invento que codifica uma proteína F de RSV é imunogênico in vivo e pode conferir uma proteção completa contra a infecção de RSV em ratos de algodão.

[087] Todas as referências, incluindo as publicações, pedidos de patentes e patentes aqui citadas são aqui incorporadas por referência na mesma extensão como se cada referência fosse individualmente e especificamente indicada para ser incorporada por referência e foram estabelecidas na sua totalidade neste documento.

[088] O uso dos termos "um" e "uma" e "o" e similares referentes no contexto da descrição do invento (especialmente no contexto das seguintes reivindicações) são para ser interpretados de modo a cobrir ambos o singular e o plural, salvo se aqui ou claramente indicado o contrário pelo contexto. Os termos "compreendendo", "tendo", "incluindo" e "contendo" são para ser interpretados como termos abertos (isto é, significando "incluindo, mas não limitado a"), a menos que indicado de outra forma. Recitação de intervalos de valores aqui apresentados destinam-se meramente a servir como um método abreviado de referir individualmente cada valor separado dentro do intervalo, a menos que de outro modo aqui indicado, e cada valor separado é incorporado na especificação como se fosse aqui descrito individualmente. Todos os métodos aqui descritos podem ser realizados em qualquer ordem adequada, a menos que de outro modo aqui indicado ou de outro modo claramente contradito pelo contexto. O uso de qualquer e todos os exemplos, ou linguagem exemplar (por exemplo, "como") aqui fornecidas, destinam apenas a iluminar melhor a invenção e não representa uma limitação no escopo da invenção, a menos que alegado o contrário. Nenhuma linguagem na especificação deve ser interpretada como indicando qualquer elemento não reivindicado como essencial para a prática da invenção.

[089] Formas de realização preferidas da presente invenção estão aqui descritas, incluindo o melhor modo conhecido pelos inventores para realizar o invento. As variações destas formas de realização preferidas podem tornar-se evidentes para os peritos na arte após a leitura da descrição anterior. Os inventores esperam artesãos especializados para empregar tais variações, conforme o caso, e os inventores pretendem que a invenção seja praticada de modo diferente do aqui especificamente descrito. Assim, esta invenção inclui todas as modificações e equivalentes do assunto recitado nas reivindicações em anexo, conforme permitido pela lei aplicável. Além disso, qualquer combinação dos elementos acima descritos em todas as variações possíveis dos mesmos é englobada pela invenção a menos que de outra forma aqui indicado ou de outra forma claramente contrariada pelo contexto.

Claims

1. Adenovirus ou vetor adenoviral caracterizado pelo fato de que compreende: (a) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 6 e suas sequências degeneradas; (b) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 8 e suas sequências degeneradas; (c) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 9 e suas sequências degeneradas; e (d) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 10 e suas sequências degeneradas, e um transgene adicional.

2. Adenovírus ou vetor adenoviral, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o adenovírus ou vetor adenoviral requer complementação de uma deficiência em uma ou mais regiões precoces do genoma adenoviral para propagação e não requer a complementação de qualquer outra deficiência do genoma adenoviral para propagação.

3. Adenovírus ou vetor adenoviral, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que uma ou mais regiões precoces são selecionadas a partir do grupo que consiste na região E1, na região E2 e na região E4 do genoma do adenovírus.

4. Adenovírus ou vetor adenoviral, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o adenovírus ou vetor adenoviral requer complementação de uma deficiência na região E1 do genoma adenoviral para propagação e não requer a complementação de qualquer outra deficiência do genoma adenoviral para propagação.

5. Adenovírus ou vetor adenoviral, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o adenovírus ou vetor adenoviral requer complementação de uma deficiência na região E1A ou região E1B do genoma adenoviral para propagação e não requer complementação de qualquer outra deficiência do genoma adenoviral para propagação.

6. Adenovírus ou vetor adenoviral, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o adenovírus ou vetor adenoviral requer, no máximo, complementação de uma deficiência na região E4 do genoma adenoviral para propagação e não requer complementação de qualquer outra deficiência do genoma adenoviral para propagação.

7. Adenovírus ou vetor adenoviral, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o adenovírus ou vetor adenoviral requer complementação de uma deficiência na região E1 do genoma adenoviral e uma deficiência na região E4 do genoma adenoviral para propagação e não requer complementação de qualquer outra deficiência do genoma adenoviral para propagação.

8. Composição caracterizada pelo fato de que compreende o adenovírus ou vetor adenoviral, conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, e um veículo farmaceuticamente aceitável.