BR112013001794B1

BR112013001794B1 - Uso de uma composição anti-inflamatória

Info

Publication number: BR112013001794B1
Application number: BR112013001794-5A
Authority: BR
Inventors: Harold David Gunn
Original assignee: Qu Biologics Inc
Priority date: 2010-07-26
Filing date: 2011-07-26
Publication date: 2021-11-23
Also published as: CL2014003297A1; CL2013000244A1; CO6680627A2; BR112013001794A2; ZA201408585B

Abstract

uso de uma composição anti-inflamatória a invenção fornece métodos para formular uma composição anti-inflamatória para tratar condições inflamatórias em um órgão ou tecido específico. o método envolve selecionar pelo menos um patógeno que é patogênico no órgão ou tecido específico; produzir uma composição antigênica compreendendo determinantes antigênicos que juntos são específicos para o patógeno; e formular a composição antigênica para administração como uma composição anti-inflamatória capaz de elicitar uma resposta anti-inflamatória no órgão ou tecido específico, em que a condição caracterizada por inflamação não é um câncer. em modalidades da invenção, um câncer é situado no órgão ou tecido específico.

Description

Campo da invenção

[001] Em vários aspectos, a invenção se refere a terapias imunológicas para tratar uma condição caracterizada pela inflamação. Em modalidades alternativas, a invenção fornece métodos para formular composições antigênicas para tratar condições inflamatórias. Fundamento da invenção

[002] Mais de uma em três pessoas nas naçõesdesenvolvidas são diagnosticadas com câncer. Mais do que uma em quatro morrem disto. As terapias para câncer primariamente se baseiam em tratamentos como cirurgia, quimioterapia e radiação. Estas abordagens, no entanto, enquanto se beneficiam de alguns tipos e estágios de câncer, provaram ser de eficácia limitada em muitos tipos comuns e estágios de cânceres. Por exemplo, tratamento cirúrgico de um tumor requer remoção completa do tecido cancerígeno para prevenir a recorrência. De modo semelhante, a radioterapia requer destruição completa de células cancerígenas. Isto é difícil uma vez que, em teoria, uma única célula maligna pode se proliferar de modo suficiente para causar recorrência do câncer. Ainda, ambos o tratamento cirúrgico e a radioterapia são direcionados a áreas localizadas de câncer, e são relativamente inefetivos quando o câncer entra em metástase. Geralmente cirurgia ou radiação ou ambos são usados em combinação com abordagens sistêmicas como quimioterapia. A quimioterapia, no entanto, tem o problema de não seletividade com o problema concomitante de efeitos colaterais deletérios, bem como a possibilidade de as células de câncer desenvolver resistência às drogas.

[003] As deficiências inerentes da quimioterapia levaram a esforços diferentes para recrutar vários aspectos do sistema imune para tratar cânceres. Um subgrupo deste trabalho se refere à imunização com vacinas microbianas. Embora esta abordagem tenha uma história relativamente longa, como discutido em mais detalhes abaixo, o campo é uma mistura muito confusa de sucesso às vezes intrigante misturado com muitas falhas que juntas falham em produzir uma abordagem terapêutica coesiva responsável para adoção clínica disseminada.

[004] Abordagens alternativas para o tratamento de cânceres incluíram terapias que envolvem aumento da função do sistema imune como terapia com citocina (por exemplo, interleucina 2 recombinante e interferon gama para cânceres renais), terapia de célula dendrítica, terapia de vacina de tumor autólogo, terapia de vacina alterada geneticamente, terapia de linfócito, e terapias de vacinas microbianas, acredita-se que a última encaixe o sistema hospedeiro em um modo não específico. Vacinas microbianas foram usadas para vacinar sujeitos contra patógenos que são associados com câncer, como o papilomavírus humano. Vacinas microbianas imunoestimulatórias que não são direcionadas a organismos que causam câncer, ou seja, vacinas imunoestimulatórias não específicas, como vacinas pirogênicas, têm uma longa história clínica que inclui relatórios de sucessos e falhas no tratamento de uma variedade de cânceres. Por exemplo, vacina de Coley (uma combinação de Streptococcus pyogenes e Serratia marcescens) foi relatada como sendo útil para o tratamento de sarcomas, e linfomas (ver, por exemplo, Nauts HC, Fowler GAA, Bogato FH. Uma revisão da influência da infecção bacteriana e de produtos bacterianos [toxinas de Coley] em tumores malignos nos homens. Acta Med Scand 1953; 145 [Suppl. 276]:5-103). Estudos clínicos reportadamente demonstraram o benefício clínico do tratamento com vacina de Coley para linfoma e melanoma (ver, por exemplo, Kempin S, Cirrincone C, Myers J et al: Combined modality therapy of advanced nodular lymphomas: the role of nonspecific immunotherapy [MBV] as an important determinant of response and survival. Proc Am Soc Clin Oncol 1983;24:56; Kolmel KF, Vehmeyer K. Treatment of advanced malignant melanoma by a pyrogenic bacterial lysate: a pilot study. Onkologie 1991;14:411-17).

[005] Foi sugerido que a efetividade de algumas vacinas de câncer bacterianas não específicas é atribuível aos componentes ou produtos bacterianos particulares, como DNA bacteriano ou endotoxina (LPS), ou porque induzem a expressão de fatores particulares, como fator de necrose tumoral (TNF) ou interleucina-12. Uma ampla faixa correspondentemente de mecanismos fisiológicos foi atribuída a tais tratamentos, variando de efeitos generalizados de febre a mecanismos não angiogênicos. De acordo com estes vários princípios, uma ampla variedade de vacinas microbianas foi testada como estimulantes imunes para o tratamento de câncer. Enquanto a maior parte mostra resultados negativos, algumas mostram alguns intrigantes resultados positivos em certos contextos, como discutido abaixo.

[006] Tratamento com vacina BCG intradérmica (Mycobacterium bovis) foi relatado sendo eficaz para o tratamento de câncer de estômago (ver, por exemplo, Ochiai T, Sato J, Hayashi R, et al: Postoperative adjuvant immunotherapy of gastric cancer with BCG-cell wall endoskeleton. Three- to six-year follow-up of a randomized clinical trial. Cancer Immunol Immunother 1983; 14:167-171) e câncer de cólon (Smith RE, Colangelo L, Wieand HS, Begovic M, Wolmark N. Randomized trial of adjuvant therapy in carcinoma colon: 10-Year results of NSABP protocol C-01. J. NCI 2004;96[15]:1128-32; Uyl-de Groot CA, Vermorken JB, Hanna MG, Verboon P, Groot MT, Bonsel GJ, Meijer CJ, Pinedo HM. Immunotherapy with autologous tumor cell-BCG vaccine in patients with colon cancer: a prospective study of medical and economic benefits Vaccine 2005; 23[17-18]:2379-87).

[007] Terapia de vacina Mycobacterium w, em combinação com quimioterapia e radiação, demonstrou melhorar de modo significativo a qualidade de vida e resposta ao tratamento em pacientes com câncer pulmonar (ver, por exemplo, Sur P, Dastidar A. Role of Mycobacterium w as adjuvant treatment of lung cancer [non-small cell lung cancer]. J Indian Med Assoc 2003 Feb;101[2]:118-120). Da mesma forma, terapia de vacina de Mycobacterium vaccae demonstrou melhorar a qualidade de vida (ver, por exemplo, O’Brien M, Anderson H, Kaukel E, et al. SRL172 [killed Mycobacterium vaccae] in addition to standard chemotherapy improves quality of life without affecting survival, in patients with advanced non-small-cell lung cancer: phase III results. Ann Oncol 2004 Jun;15[6];906-14) e controle de sintoma (Harper-Wynne C, Sumpter K, Ryan C, et al. Addition of SRL 172 to standard chemotherapy in small cell lung cancer [SCLC] improves symptom control. Lung Cancer 2005 Feb;47[2]:289-90) em pacientes de câncer pulmonar.

[008] Vacina de Corynebacterium parvum foi relacionada com uma tendência de sobrevivência melhorada para o tratamento de melanoma (ver, por exemplo, Balch CM, Smalley RV, Bartolucci AA, et al. A randomized prospective trial of adjuvant C. parvum immunotherapy in 260 patients with clinically localized melanoma [stage I]. Cancer 1982 Mar 15;49[6]:1079-84).

[009] Terapia com vacina intradérmica de Streptococcus pyogenes demonstrou ser eficaz para o tratamento de câncer de estômago (ver, por exemplo, Hanaue H, Kim DY, Machimura T, et al. Hemolytic streptococcus preparation OK-432; beneficial adjuvant therapy in recurrent gastric carcinoma. Tokai J Exp Clin Med 1987 Nov;12[4]:209-14).

[010] Vacina de Nocardia rubra demonstrou ser eficaz para o tratamento de câncer pulmonar (ver, por exemplo, Yasumoto K, Yamamura Y. Randomized clinical trial of non-specific immunotherapy with cell-wall skeleton of Nocardia rubra. Biomed Pharmacother 1984;38[1]:48-54; Ogura T. Immunotherapy of respectable lung cancer using Nocardia rubra cell wall skeleton. Gan To Kagaku Ryoho 1983 Feb;10[2 Pt 2]:366-72) e relacionado a uma tendência a sobrevivência melhorada para o tratamento de leucemia mieloide aguda (Ohno R, Nakamura H, Kodera Y, et al. Randomized controlled study of chemoimmunotherapy of acute myelogenous leukemia [AML] in adults with Nocardia rubra cell-wall skeleton and irradiated allogeneic AML cells. Cancer 1986 Apr 15;57[8]:1483-8).

[011] Tratamento com vacina de Lactobacillus casei combinado com radiação demonstrou ser mais efetivo para o tratamento de câncer cervical do que radioterapia isolada. (ver, por exemplo, Okawa T, Kita M, Arai T, et al. Phase II randomized clinical trial of LC9018 concurrently used with radiation in the treatment of carcinoma of the uterine cervix. Its effect on tumor reduction and histology. Cancer 1989 Nov 1;64[9]:1769-76)

[012] Tratamento com vacina de Pseudomonas aeruginosa demonstrou aumentar a efetividade de quimioterapia no tratamento de linfoma e câncer pulmonar (ver, por exemplo, Li Z, Hao D, Zhang H, Ren L, et al. A clinical study on PA_MSHA vaccine used for adjuvant therapy of lymphoma and lung cancer. Hua Xi Yi Ke Da Xue Xue Bao 2000 Sep;31[3]:334-7).

[013] A vacinação infantil com a vacina de varíola (ou seja, vacina de vírus Vaccinia) demonstrou estar associada com um risco reduzido de posterior melanoma na vida (ver, por exemplo, Pfahlberg A, Kolmel KF, Grange JM. et al. Inverse association between melanoma and previous vaccinations against tuberculosis and smallpox: results of the FEBIM study. J Invest Dermatol 2002[119]:570-575) bem como mortalidade reduzida naqueles pacientes que desenvolveram melanoma (ver, por exemplo, Kolmel KF, Grange JM, Krone B, et al. Prior immunization of patients with malignant melanoma with vaccinia or BCG is associated with better survival. European Organization for Research and Treatment of Cancer cohort study on 542 patients. Eur J Cancer 41[2005]:118-125).

[014] O tratamento com vacina do vírus da raiva demonstrou resultar em remissão temporária em 8 de 30 pacientes com melanoma (ver, por exemplo, Higgins G, Pack G. Virus therapy in the treatment of tumors. Bull Hosp Joint Dis 1951;12:379-382; Pack G. Note on the experimental use of rabies vaccine for melanomatosis. Arch Dermatol 1950;62:694-695).

[015] Apesar dos esforços substanciais para engajar o sistema imune para combater cânceres usando vacinas microbianas imunoestimulatórias não específicas, a grande maioria destes esforços falhou e há pouca evidência clínica ou pesquisa de sucesso disseminado na melhora de sobrevivência de populações de pacientes com câncer. Enquanto foi reconhecido que as abordagens de vacina microbiana imunoestimulatório prometera, ainda foi reconhecido que desafios significativos caracterizam o campo (ver, por exemplo, Ralf Kleef, Mary Ann Richardson, Nancy Russell, Cristina Ramirez. "Endotoxin and Exotoxin Induced Tumor Regression with Special Reference to Coley Toxins: A Survey of the Literature and Possible Immunological Mechanisms." Report to the National Cancer Institute Office of Alternative and Complementary Medicine August 1997; DL Mager. “Bacteria and Cancer: Cause, Coincidence or Cure? A Review.”Journal of Translational Medicine 28 March 2006 4[14]:doi:10.1186/1479-5876-4-14).

[016] Doença intestinal inflamatória (IBD) é um nome frequentemente dado a um grupo de condições inflamatórias do cólon e intestino delgado, geralmente caracterizado por sintomas semelhantes e etiologia indeterminada. Os principais sub-tipos de IBD são reconhecidos clinicamente como doença de Crohn e colite ulcerativa. Além da doença de Crohn e colite ulcerativa, IBD pode ainda incluir condições reconhecidas como qualquer uma das seguintes: colite colagenosa, colite linfocítica, colite isquêmica, colite por desvio, síndrome de Behçet ou colite indeterminada. A diferença entre estas condições referem-se principalmente ao local e natureza das alterações inflamatórias no trato gastrointestinal (GIT). A doença de Crohn, por exemplo, é geralmente reconhecida como potencialmente afetando qualquer parte do trato gastrointestinal, desde a boca até o ânus, com uma maioria de casos marcados pela recorrência e remitência de inflamação granulomatosa do trato alimentar no íleo terminal e cólon. Colite ulcerativa, em contraste, é geralmente considerada restrita ao cólon e o reto. As várias regiões do trato gastrointestinal em que estas condições inflamatórias podem apresentar sintomas incluem: os intestinos, incluindo: o intestino delgado (que tem três partes: o duodeno, o jejuno, e o íleo); o intestino grosso (que tem três partes: o ceco, o cólon, que inclui o cólon ascendente, cólon transverso, cólon descendente e o flexo sigmoide; e o reto); e o ânus.

[017] O entendimento de doenças intestinais inflamatórias está evoluindo, mas é ainda incompleto em muitos aspectos (ver, por exemplo, Baumgart DC, Carding SR (2007) "Inflammatory bowel disease: cause and immunobiology" The Lancet 369 (9573): 1627-40; Baumgart DC, Sandborn WJ (2007) "Inflammatory bowel disease: clinical aspects and established and evolving therapies" The Lancet 369 (9573): 1641-57; Xavier RJ, Podolsky DK (2007) "Unravelling the pathogenesis of inflammatory bowel disease" Nature 448 (7152): 427-34; J. H. Cho (2008) "The genetics and immunopathogenesis of inflammatory bowel disease" Nature Reviews Immunology 8, 458-466).

[018] Drogas anti-inflamatórias e supressores do sistema imune podem ser usados no tratamento de IBD, como sulfasalazina (Azulfidine™), mesalamina (Asacol™, Rowasa™), corticosteroides (por exemplo, prednisona), azatioprina (Imuran™), mercaptopurina (Purinethol™), infliximab (Remicade™), adalimumab (Humira™), certolizumab pegol (Cimzia™), metotrexato (Rheumatrex™), ciclosporina (Gengraf™, Neoral™, Sandimmune™) ou natalizumab (Tysabri™).

[019] Tratamentos alternativos para IBD foram sugeridos, incluindo o uso de vários agentes biológicos, ou tratamentos que supostamente ajustam a flora intestinal natural, por vezes chamados de tratamentos probióticos (US 2007/0258953; US 2008/0003207; WO 2007/076534; WO 2007/136719; WO 2010/099824). Foi, por exemplo, reportado que IBD pode ser tratado com uma infestação deliberada de vermes parasitas, por exemplo, pelo consumo de ova vida de helminto Trichuris suis (Summers et al. (2003) "Trichuris suis seems to be safe and possibly effective in the treatment of inflammatory bowel disease". Am. J. Gastroenterol. 98 (9): 2034-41; Büning et al., (2008) "Helminths as governors of inflammatory bowel disease" Gut 57:1182-1183; Weinstock and Elliott (2009) "Helminths and the IBD hygiene hypothesis" Inflamm Bowel Dis. 2009 Jan;15(1):128-33).

Sumário da invenção

[020] Em um aspecto um método de formulação de uma composição anti-inflamatória para tratar uma condição específico é fornecido. O método envolve selecionar pelo menos um patógeno que é patogênico no órgão ou tecido específico; produzir uma composição antigênica compreendendo determinantes antigênicos que juntos são específicos para o patógeno; e formular a composição antigênica para administração como uma composição anti- inflamatória capaz de induzir uma resposta anti- inflamatória no órgão ou tecido específico, em que a condição caracterizada pela inflamação não é um câncer.

[021] O método ainda envolve uma etapa diagnóstica de identificação do órgão ou tecido específico dentro do qual a inflamação é sintomática antes de produzir uma composição antigênica. Opcionalmente, um tumor ou condição proliferativa pode ser situada no órgão ou tecido específico.

[022] Opcionalmente, a composição antigênica pode ser formulada para injeção subcutânea ou injeção intradérmica. Opcionalmente a composição antigênica pode ser formulada para injeção para produzir uma resposta imune na pele localizada em um local de administração. Opcionalmente, o método detalhado aqui é fornecido que quando o tecido específico ou órgão é X, o patógeno é selecionado do grupo que consiste de Y. Mais especificamente, as seguintes combinações são consideradas dentro do escopo deste método:

[023] Ainda, o método detalhado aqui é fornecido que quando o tecido específico ou órgão é X, o patógeno é selecionado do grupo que consiste de Y. Mais especificamente, as seguintes combinações são consideradas dentro do escopo deste método:

[024] Opcionalmente, a composição antigênica podeser formulada para administração repetida subcutânea ou intradérmica. Opcionalmente, a composição antigênica pode ser formulada para administração por uma via que não é entérica. Opcionalmente, o patógeno detalhado aqui é uma bactéria, um vírus, um protozoário, um fungo, ou um helminto. Ainda, o método pode envolver matar o patógeno para formular a composição antigênica como uma composição de patógeno morto completo. Ainda, o patógeno pode ser um membro de uma espécie que é flora endógena do órgão ou tecido específico. Ainda, o patógeno pode ser uma espécie exógena.

[025] Em outro aspecto, um método para tratar um indivíduo para uma condição caracterizada por inflamação em um órgão ou tecido específico é fornecido. O método envolve administrar ao indivíduo uma composição anti-inflamatória compreendendo determinantes antigênicos. Os determinantes antigênicos são selecionados ou formulados de modo que juntos são específicos para pelo menos um patógeno que é patogênico no órgão ou tecido específico. Opcionalmente, a composição anti-inflamatória pode ser administrada em um local de administração em doses sucessivas em um intervalo de dosagem de entre uma hora a um mês, por uma duração de dosagem de pelo menos duas semanas.

[026] Em outro aspecto, uso de uma composição anti-inflamatória para tratar um indivíduo para uma condição caracterizada por inflamação em um órgão ou tecido específico é revelado. A composição anti-inflamatória contém determinantes antigênicos selecionados ou formulados de modo que juntos são específicos para pelo menos um patógeno antigênico que é patogênico no órgão ou tecido específico.

[027] Em outro aspecto, uso de uma composição anti-inflamatória para formular um medicamento para tratar um indivíduo para uma condição caracterizada por inflamação em um órgão ou tecido específico é revelado. A composição anti-inflamatória contém determinantes antigênicos selecionados ou formulados de modo que juntos são específicos para pelo menos um patógeno antigênico que é patogênico no órgão ou tecido específico.

[028] Opcionalmente, os usos revelados aqui incluem aqueles aos quais os indivíduos têm um câncer situado no órgão ou tecido. Ainda, e opcionalmente, a composição anti-inflamatória pode ser administrada em um sítio de administração em doses sucessivas administrados em um intervalo de dosagem de entre uma hora e um mês, pela duração de pelo menos duas semanas.

[029] Em um aspecto, um método para comparar respostas imunes é fornecido. O método envolve administrar a um animal contendo um órgão ou tecido um medicamento contendo uma composição antigênica contendo determinantes antigênicos selecionados ou formulados de modo que juntos os determinantes antigênicos são específicos para pelo menos um patógeno antigênico que é patogênico no órgão ou tecido, extrair uma amostra imune quantificável do órgão ou tecido, medir uma característica da resposta imune no órgão ou tecido na amostra imune quantificável após administração do medicamento, e, comparar a característica da resposta imune na amostra imune quantificável à uma característica correspondente da resposta imune em uma amostra imune de referência obtida de um órgão ou tecido correspondente. Opcionalmente, a amostra imune de referência pode ser obtida a partir do órgão ou tecido correspondente no animal antes da etapa de administrar o medicamento. Opcionalmente, a amostra imune de referência pode ser obtida a partir do órgão ou tecido correspondente em um segundo animal. Opcionalmente, o animal pode ter um câncer situado no órgão ou tecido.

[030] Comparar a característica da resposta imune pode envolver comparar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, uma indicação dos números de qualquer uma ou mais das seguintes células: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Opcionalmente, os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2. Ainda, comparar a característica da resposta imune pode envolver comparar uma mudança em um estado de ativação de macrófagos. Opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Ainda e opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[031] Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, marcadores celulares em qualquer uma ou mais das seguintes células: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2.

[032] Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, citocinas produzidas por qualquer uma ou mais das seguintes células: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Como detalhada aqui, os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2. Opcionalmente, as citocinas são produzidas como um resultado de uma mudança em um estado de ativação dos macrófagos. Opcionalmente, os macrófagos mudam de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Ainda e opcionalmente, os macrófagos mudam de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[033] Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, expressão de gene diferencial produzida por qualquer uma ou mais das seguintes células: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2. Opcionalmente, a expressão de gene diferencial é produzida como um resultado de uma mudança em um estado de ativação dos macrófagos. Opcionalmente, macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Ainda e opcionalmente, os macrófagos mudam de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[034] Opcionalmente, o medicamento pode ser administrado em um local de administração em doses sucessivas administradas em um intervalo de dosagem de entre uma hora e um mês, por uma duração de dosagem de pelo menos uma semana. Opcionalmente, o medicamento pode ser administrado via intradérmica ou subcutânea. Opcionalmente, o medicamento pode ser administrado em uma dose de modo que cada dose é eficaz para causar uma resposta imune inflamatória localizada visível no local da administração. Opcionalmente, o medicamento pode ser administrado de modo administração ocorre dentro de 1 a 48 horas. Ainda e opcionalmente, o animal pode ser um mamífero. Opcionalmente, o animal pode ser um humano ou um camundongo.

[035] Em outro aspecto, um método para selecionar uma preparação terapêutica apropriada para tratar um indivíduo para um câncer em um órgão ou tecido específico é fornecido. O método envolve fornecer a um animal contendo um câncer situado em um órgão ou tecido específico, fornecer uma preparação teste contendo um ou mais determinantes antigênicos de um patógeno microbiano que é patogênico no correspondente órgão ou tecido específico em um indivíduo saudável, medir uma característica da resposta imune em uma amostra imune de referência obtida do órgão ou tecido do animal, administrar a preparação teste ao animal, medir uma característica da resposta imune em uma amostra imune quantificável obtida de um órgão ou tecido correspondente do animal, comparar a característica da resposta imune nas amostras imunes de referência e quantificáveis, e tratar uma característica melhorada da resposta imune na amostra imune quantificável comparada a uma amostra imune de referência como uma indicação da adequabilidade da preparação teste como uma preparação terapêutica. Opcionalmente, o animal é sacrificado antes da amostra imune quantificável ser obtida.

[036] Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver comparar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, uma indicação dos números de qualquer uma ou mais das seguintes células: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Opcionalmente, os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2. Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver comparar uma mudança em um estado de ativação de macrófagos. Opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Ainda e opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[037] Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, marcadores celulares em qualquer uma ou mais das seguintes células: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Opcionalmente, os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2.

[038] Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, citocinas produzidas por qualquer uma ou mais das seguintes células: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2. Opcionalmente, as citocinas são produzidas como um resultado de uma mudança em um estado ativado de macrófagos. Opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Ainda, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[039] Ainda e opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, expressão de gene diferencial produzida por qualquer uma ou mais das seguintes células: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Opcionalmente, os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2. Opcionalmente, a expressão de gene diferencial pode ser produzida como um resultado de uma mudança em um estado de ativação dos macrófagos. Opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Ainda e opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[040] Em outro aspecto, um método para seletivamente direcionar uma resposta imune a um tecido cancerígeno ou um órgão em um sujeito humano é fornecido. O método envolve administrar ao sujeito um medicamento contendo uma quantidade eficaz de uma composição antigênica de patógeno microbiano, em que o patógeno microbiano pode ser patogênico no tecido ou órgão cancerígeno específico do sujeito e uma composição antigênica compreende determinantes antigênicos que juntos são específicos para o patógeno microbiano. Opcionalmente, a composição antigênica pode incluir uma composição de célula bacteriana morta completa. Opcionalmente, o medicamento pode ser administrado ao sujeito em uma quantidade e por um tempo que é efetivo para regular para cima uma resposta imune no órgão ou tecido cancerígeno do sujeito. Opcionalmente, o método pode ainda envolver medir uma característica da resposta imune. O método ainda inclui tratamento de lesões pré-cancerígenas incluindo, entre outros, queratose actínica, displasia cervical, e adenomas colônicas.

[041] Em outro aspecto, um método para tratar um sujeito humano para um câncer situado em um tecido ou um órgão é fornecido. O método envolve administrar ao sujeito um medicamento contendo uma quantidade eficaz de uma composição antigênica de patógeno microbiano compreendendo uma composição de célula bacteriana morta completa, em que o patógeno microbiano é patogênico no órgão ou tecido específico do sujeito dentro do qual o câncer está situado. O medicamento pode ser administrado ao sujeito em uma quantidade e por um tempo que é efetivo para modular uma resposta imune. Opcionalmente, a modulação da resposta imune pode envolver uma mudança no estado de ativação de macrófagos. Opcionalmente, a modulação da resposta imune pode envolver mudança de uma resposta de macrófago tipo M2 para uma resposta de macrófago tipo M1. A modulação da resposta imune pode envolver uma mudança de macrófagos tipo M1 a macrófagos tipo M2, conforme os termos são definidos aqui. Opcionalmente e sem limitação, o método pode ainda envolve medir uma característica da resposta imune.

[042] Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver comparar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, uma indicação dos números de qualquer uma ou mais das seguintes células: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Opcionalmente, os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2. Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver comparar uma mudança em um estado de ativação de macrófagos. Ainda e opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[043] Ainda e sem limitação, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, marcadores celulares em qualquer uma ou mais das seguintes células: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2. Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, citocinas produzidas por qualquer uma ou mais das seguintes células: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Opcionalmente, os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2. Ainda, citocinas podem ser produzidas como um resultado de uma mudança em um estado de ativação dos macrófagos. Os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[044] Ainda e opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, expressão de gene diferencial produzida por qualquer uma ou mais das seguintes células: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2. Opcionalmente, a expressão de gene diferencial pode ser produzida como um resultado de uma mudança em um estado de ativação dos macrófagos. Ainda e opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[045] Em outro aspecto, um método para monitorar eficácia de um regime de tratamento em um indivíduo sendo tratado para um câncer em um órgão ou tecido específico é fornecido. O método envolve medir uma característica de uma resposta imune em uma amostra imune pós-tratamento obtida do órgão ou tecido específico após o indivíduo ser submetido ao regime de tratamento por um período de tempo, em que a presença de uma característica da resposta imune que é maior em magnitude do que poderia ser esperado que o indivíduo não fosse submetido ao regime de tratamento, é indicativo da eficácia do regime de tratamento; e o regime de tratamento envolve administrar uma preparação compreendendo um ou mais determinantes antigênicos de um patógeno microbiano que é patogênico no correspondente órgão ou tecido específico em um sujeito saudável.

[046] O método detalhado aqui pode ainda envolver medir a característica da resposta imune em uma amostra de referência pré-tratamento, em que a amostra de referência pré-tratamento foi obtida do órgão ou tecido específico antes, ao mesmo tempo, ou após início do regime de tratamento, mas antes de obter a amostra imune pós- tratamento, e comparar a característica da resposta imune nas amostras pré-tratamento e pós-tratamento, em que um aumento na magnitude da resposta imune na amostra imune pós-tratamento comparada à amostra de referência pré- tratamento é indicativo da eficácia do regime de tratamento. Opcionalmente, medir a característica da resposta imune pode envolver determinar uma indicação do número de monócitos inflamatórios em uma amostra do órgão ou tecido. Opcionalmente, medir a característica da resposta imune pode envolver determinar uma indicação do número de macrófagos em uma amostra do órgão ou tecido. Os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2.

[047] Opcionalmente, medir a característica da resposta imune pode envolver determinar uma indicação do número de células CD11b+ Gr-1+ em uma amostra do órgão ou tecido ou determinar uma indicação do número de células dendríticas em uma amostra do órgão ou tecido. Ainda e opcionalmente, medir a característica da resposta imune pode envolver determinar uma indicação do número de células CD11c+ MHC classe II+ em uma amostra do órgão ou tecido ou determinar uma indicação do número de células T CD4+ em uma amostra do órgão ou tecido ou determinar uma indicação do número de células T CD8+ em uma amostra do órgão ou tecido.

[048] Opcionalmente, medir a magnitude da resposta imune pode envolver determinar uma indicação do número de células NK em uma amostra do órgão ou tecido. Ainda e opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes e de referência, marcadores celulares em qualquer uma ou mais das seguintes células: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Opcionalmente, os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2.

[049] Ainda e opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes e de referência, citocinas produzidas por qualquer uma ou mais das seguintes células: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2. Opcionalmente, as citocinas podem ser produzidas como um resultado de uma mudança em um estado de ativação dos macrófagos. Os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Ainda e opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[050] Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes e de referência, expressão de gene diferencial produzida por qualquer uma ou mais das seguintes células: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2. A expressão de gene diferencial pode ser produzida como um resultado de uma mudança em um estado de ativação dos macrófagos. Os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[051] Como detalhada aqui em outro aspecto, a invenção fornece métodos para formular uma composição imunogênica para tratar um câncer situado em um órgão ou tecido específico em um mamífero, como um paciente humano. O método pode incluir selecionar pelo menos um patógeno microbiano que é naturalmente patogênico no órgão ou tecido do mamífero dentro do qual o câncer está situado. Uma composição antigênica pode ser produzida que inclui determinantes antigênicos que juntos são específicos para ou características do patógeno microbiano.

[052] Uma etapa diagnóstica pode ser usada para identificar o órgão ou tecido específico dentro do qual o câncer está situado, antes de produzir a composição antigênica direcionada ao local do câncer. O local do câncer pode ser um local primário, ou um local secundário de metástase. A composição antigênica pode ser suficientemente específica que esta poderia ser capaz de induzir uma resposta imune no mamífero específico ao patógeno microbiano. A composição antigênica pode ser uma composição bacteriana, por exemplo, derivada de uma espécie ou espécies bacterianas que são endógenas à flora do paciente ou de uma espécie ou espécies exógenas. Em modalidades alternativas, a composição antigênica pode ser derivada de um ou vírus ou vírus. Assim, o patógeno microbiano do qual a composição antigênica é derivada pode ser um vírus. O patógeno microbiano pode ser morto. Em modalidades alternativas, o patógeno microbiano pode ser vivo ou atenuado. Composições imunogênicas da invenção podem ainda ser formuladas ou administradas com modalidades anti-inflamatórias, como um NSAID. O local de administração pode ser um local distante do local do câncer, por exemplo, em um órgão ou tecido que não é o órgão ou tecido dentro do qual o câncer está situado, por exemplo a pele ou tecido subcutâneo.

[053] A composição antigênica pode, por exemplo, ser formulada para injeção subcutânea, injeção intradérmica ou administração oral. Nas modalidades para injeção subcutânea ou intradérmica, a dosagem ou formulação da composição antigênica pode ser ajustada para produzir uma reação imune localizada visível na pele no local de administração, por exemplo, uma área de inflamação de 2mm a 100mm em diâmetro de aparecimento, por exemplo, 2 - 48 horas após administração e duração, por exemplo, 2 - 72 horas ou mais. A composição antigênica pode ser formulada para administração repetida subcutânea ou intradérmica, por exemplo, em sítios sucessivos alternantes.

[054] Em algumas modalidades, a invenção envolve métodos de tratamento de um mamífero para um câncer situado em um tecido ou um órgão. Em modalidades alternativas, o tratamento pode antecipar o desenvolvimento do câncer no tecido, por exemplo, se o sítio de um tumor primário sugere a probabilidade de metástase a um tecido ou órgão particular, então o paciente pode ser profilaticamente tratado para prevenir ou melhorar a metástase àquele tecido ou órgão. O método pode incluir administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de uma composição antigênica compreendendo determinantes antigênicos que juntos são específicos para pelo menos um patógeno microbiano. Um aspecto da invenção envolve o uso de um patógeno microbiano que é patogênico no órgão ou tecido específico do mamífero dentro do qual o câncer está situado. A composição antigênica pode ser administrada, por exemplo, por injeção subcutânea ou intradérmica em um local de administração, em doses sucessivas administradas em um intervalo de dosagem, por exemplo, de entre uma hora e um mês, durante uma duração da dosagem, por exemplo, de pelo menos 1 semana, 2 semanas, 2 meses, 6 meses, 1, 2, 3, 4, ou 5 anos ou mais. Cada dose de injeção pode, por exemplo, ser medida de modo que seja eficaz para causar inflamação localizada visível no local da administração, aparecendo, por exemplo, 1 - 48 horas após injeção.

[055] Em outro aspecto, métodos são fornecidos para tratar cânceres de um órgão ou tecido específico em um sujeito administrando um ou mais antígenos de um ou mais patógenos microbianos, como espécies bacterianas ou virais que são patogênicos no órgão ou tecido específico.

[056] Em modalidades alternativas, as espécies microbianas patogênicas podem ser capazes de causar infecção naturalmente, (ou seja, sem intervenção humana) no órgão ou tecido específico em um sujeito saudável, ou podem ser ter causado uma infecção no órgão ou tecido específico em um sujeito saudável. Em modalidades alternativas, o antígeno pode ser administrado ao administrar uma espécie microbiana completa. Em modalidades alternativas, o método pode, por exemplo, incluir administrar pelo menos duas ou mais espécies microbianas, ou administrar pelo menos três ou mais espécies microbianas, e os micróbios podem ser bactéria ou vírus. Em modalidades alternativas, o método pode ainda incluir administrar um suplemento ou um adjuvante. Um aspecto da invenção envolve administrar composições antigênicas de modo a induzir uma resposta imune em dito sujeito.

[057] Em modalidades alternativas, o patógeno microbiano na composição antigênica pode ser morto, e assim considerado não infeccioso. Em algumas modalidades, a composição antigênica é administrada em um local distante do local de câncer, e em modalidades selecionadas deste tipo, métodos da invenção podem ser conduzidos de modo que produzem infecção no local do câncer.

[058] Como detalhado aqui, vários aspectos da invenção envolvem tratar os cânceres. Neste contexto, o tratamento pode ser conduzido de modo a fornecer uma variedade de resultados. Por exemplo, o tratamento pode: provocar uma reação imune que é eficaz para inibir ou melhorar o crescimento ou proliferação de um câncer; inibir o crescimento ou proliferação de células de câncer ou tumores; causar remissão de um câncer; melhorar a qualidade de vida; reduzir o risco de recorrência de um câncer; inibir a metástase de um câncer; ou, melhorar as taxas de sobrevivência do paciente em uma população de paciente. Neste contexto, estender a expectativa de vida de um paciente, ou população de paciente, significa aumentar o número de pacientes que sobrevivem por certo período de tempo aumentando um diagnóstico particular. Em algumas modalidades, o tratamento pode ser de pacientes que não responderam a outros tratamentos, como pacientes dos quais uma quimioterapia ou cirurgia não foi um tratamento efetivo. Tratamento em modalidades alternativas pode, por exemplo, ser antes ou após o início de câncer. Por exemplo, tratamento profilático pode ser submetido, por exemplo, em pacientes diagnosticados como em risco de um câncer particular. Por exemplo, um paciente contendo uma genética ou pré-disposição de estilo de vida a câncer de certo tecido ou órgão pode ser tratado com uma composição imunogênica compreendendo determinantes antigênicos de um patógeno que é patogênico naquele órgão ou tecido. De modo semelhante, o tratamento profilático de metástase pode ser submetido, de modo que os pacientes tendo um câncer primário com uma propensão para metástase a um tecido ou órgão particular possam ser tratados com uma composição imunogênica compreendendo determinantes antigênicos de um patógeno que é patogênico naquele órgão ou tecido.

[059] Em outro aspecto, um método para tratar um câncer situado em um pulmão em um sujeito é fornecido. O método envolve administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um antígeno de uma ou mais espécies microbianas que é patogênica no pulmão e administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um agente quimioterápico contendo platina. A espécie microbiana pode ser um patógeno viral ou um patógeno bacteriano ou um patógeno fúngico.

[060] O patógeno viral pode ser, entre outros: influenza, adenovírus, vírus sincicial respiratório, ou parainfluenza. O patógeno bacteriano pode ser, entre outros: Streptococcus pneumoniae, Moraxella catarrhalis, Mycoplasma pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Haemophilus influenza, Staphylococcus aureus, Chlamydia pneumoniae, ou Legionella pneumophila. O patógeno fúngico pode ser, entre outros: Aspergillus fumigatus, Blastomyces sp., Coccidiodes immitis, Coccidiodes posadasii, Cryptococcus neoformans, Cryptococcus gattii, Fusarium sp., Histoplasma capsulatum, Paecilomyces sp., Paracoccidiodes brasiliensis, Penicillium marneffei, Pneumocystis jiroveci, Pseudallescheria boydii, Scedosporium apiospermum, Rhizopus sp., Mucor sp., Absidia sp., Cunninghamella sp., Scedosporium prolificans, Stachybotrys chartarum, Trichoderma longibrachiatium, ou Trichosporon sp. Ainda, o agente quimioterápico contendo platina pode ser, entre outros: Cisplatina, carboplatina ou oxaliplatina.

[061] Em outro aspecto, uso de uma quantidade eficaz de um antígeno de uma ou mais espécies microbianas que é patogênico no pulmão é fornecida para formular um medicamento para uso com um agente quimioterápico contendo platina para tratar câncer pulmonar em um sujeito. Em outro aspecto, uso de uma quantidade eficaz de um antígeno de uma ou mais espécies microbianas que é patogênico no pulmão é fornecido para uso com um agente quimioterápico contendo platina para tratar câncer pulmonar em um sujeito. A espécie microbiana pode ser um patógeno viral ou um patógeno bacteriano ou um patógeno fúngico.

[062] O patógeno viral pode ser, entre outros: influenza, adenovírus, vírus sincicial respiratório, ou parainfluenza. O patógeno bacteriano pode ser, entre outros: Streptococcus pneumoniae, Moraxella catarrhalis, Mycoplasma pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Haemophilus influenza, Staphylococcus aureus, Chlamydia pneumoniae, ou Legionella pneumophila. O patógeno fúngico pode ser, entre outros: Aspergillus fumigatus, Blastomyces sp., Coccidiodes immitis, Coccidiodes posadasii, Cryptococcus neoformans, Cryptococcus gattii, Fusarium sp., Histoplasma capsulatum, Paecilomyces sp., Paracoccidiodes brasiliensis, Penicillium marneffei, Pneumocystis jiroveci, Pseudallescheria boydii, Scedosporium apiospermum, Rhizopus sp., Mucor sp., Absidia sp., Cunninghamella sp., Scedosporium prolificans, Stachybotrys chartarum, Trichoderma longibrachiatium, ou Trichosporon sp. Ainda, o agente quimioterápico contendo platina pode ser, entre outros: Cisplatina, carboplatina ou oxaliplatina.

[063] Em outro aspecto, uma quantidade eficaz de um antígeno de uma ou mais espécies microbianas que é patogênico no pulmão é fornecida para formular um medicamento para uso com um agente quimioterápico contendo platina para tratar câncer pulmonar em um sujeito. Em outro aspecto, uma quantidade eficaz de um antígeno de uma ou mais espécies microbianas que é patogênico no pulmão é fornecido para uso com um agente quimioterápico contendo platina para tratar câncer pulmonar em um sujeito. A espécie microbiana pode ser um patógeno viral ou um patógeno bacteriano ou um patógeno fúngico.

[064] O patógeno viral pode ser, entre outros: influenza, adenovírus, vírus sincicial respiratório, ou parainfluenza. O patógeno bacteriano pode ser, entre outros: Streptococcus pneumoniae, Moraxella catarrhalis, Mycoplasma pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Haemophilus influenza, Staphylococcus aureus, Chlamydia pneumoniae, ou Legionella pneumophila. O patógeno fúngico pode ser, entre outros: Aspergillus fumigatus, Blastomyces sp., Coccidiodes immitis, Coccidiodes posadasii, Cryptococcus neoformans, Cryptococcus gattii, Fusarium sp., Histoplasma capsulatum, Paecilomyces sp., Paracoccidiodes brasiliensis, Penicillium marneffei, Pneumocystis jiroveci, Pseudallescheria boydii, Scedosporium apiospermum, Rhizopus sp., Mucor sp., Absidia sp., Cunninghamella sp., Scedosporium prolificans, Stachybotrys chartarum, Trichoderma longibrachiatium, ou Trichosporon sp. Ainda, o agente quimioterápico contendo platina pode ser, entre outros: Cisplatina, carboplatina ou oxaliplatina.

[065] Em outro aspecto, um kit é fornecido. O kit inclui um antígeno de uma ou mais espécies microbianas que é patogênico no pulmão, um agente quimioterápico contendo platina; e instruções para fornecer o antígeno e o agente quimioterápico contendo platina a um sujeito em necessidade do mesmo. A espécie microbiana pode ser um patógeno viral ou um patógeno bacteriano ou um patógeno fúngico.

[066] O patógeno viral pode ser, entre outros, os seguintes: influenza, adenovírus, vírus sincicial respiratório, ou parainfluenza. O patógeno bacteriano pode ser, entre outros: Streptococcus pneumoniae, Moraxella catarrhalis, Mycoplasma pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Haemophilus influenza, Staphylococcus aureus, Chlamydia pneumoniae, ou Legionella pneumophila. O patógeno fúngico pode ser, entre outros: Aspergillus fumigatus, Blastomyces sp., Coccidiodes immitis, Coccidiodes posadasii, Cryptococcus neoformans, Cryptococcus gattii, Fusarium sp., Histoplasma capsulatum, Paecilomyces sp., Paracoccidiodes brasiliensis, Penicillium marneffei, Pneumocystis jiroveci, Pseudallescheria boydii, Scedosporium apiospermum, Rhizopus sp., Mucor sp., Absidia sp., Cunninghamella sp., Scedosporium prolificans, Stachybotrys chartarum, Trichoderma longibrachiatium, ou Trichosporon sp. Ainda, o agente quimioterápico contendo platina pode ser, entre outros: Cisplatina, carboplatina ou oxaliplatina.

[067] Em vários aspectos, a invenção fornece métodos para formular e usar uma composição imunogênica para tratar uma IBD. A IBD pode, por exemplo, ser uma IBD que é sintomática em uma ou mais regiões do GIT de um paciente humano, como doença de Crohn, colite ulcerativa, colite colagenosa, colite linfocítica, colite isquêmica, colite por desvio, síndrome de Behçet ou colite indeterminada. O tratamento do paciente pode envolver uma etapa diagnóstica de identificação da região do GIT dentro do qual a IBD é sintomático. A formulação pode compreender uma composição antigênica compreendendo determinantes antigênicos que juntos são específicos para pelo menos um patógeno, como uma bactéria, um vírus, um protozoário ou um helminto, que é patogênico na região afetada do GIT. A formulação pode ser preparada para administração como uma composição imunogênica capaz de induzir uma reação imune para tratar a IBD. A composição pode, por exemplo, ser formulada por uma via que não é entérica, como uma injeção subcutânea ou injeção intradérmica, por exemplo, para produzir uma resposta imune de pele localizada, como uma resposta inflamatória, em um local de administração.

Breve descrição dos desenhos

[068] Figura 1 mostra uma curva de sobrevivência para uma série cumulativa de pacientes diagnosticados com câncer pulmonar inoperável estágio 3B ou 4 (todos os pacientes), comparando pacientes tratados com MRV, pacientes não tratados com o MRV, e uma curva de sobrevivência SEER padrão (Sobrevivência de câncer de pulmão e brônquio Fase 3B & 4).

[069] Figura 2 mostra uma curva de sobrevivência para uma série cumulativa de pacientes diagnosticados com câncer pulmonar inoperável estágio 3B ou 4 (pacientes tratados por pelo menos 2 meses com MRV), comparando pacientes tratados com MRV, pacientes não tratados com MRV, e uma curva de sobrevivência SEER padrão (Sobrevivência de câncer de pulmão e brônquio Fase 3B & 4).

[070] Figura 3 mostra uma curva de sobrevivência para uma série cumulativa de pacientes diagnosticados com câncer pulmonar estágio 3B ou 4, ilustrando os benefícios de tratamento com composição MRV da invenção, comparando pacientes tratados com MRV, pacientes não tratados com MRV, e uma curva de sobrevivência SEER padrão (Análise Combinada - Pulmão 2 MRV vs Sem MRV).

[071] Figura 4 mostra uma curva de sobrevivênciapara uma série cumulativa de pacientes diagnosticados com câncer pulmonar estágio 3B ou 4, ilustrando o efeito de tratamentos por pelo menos 2 meses, comparando pacientes tratados com MRV, pacientes não tratados com MRV, e uma curva de sobrevivência SEER padrão (Análise Combinada - > 2 meses MRV vs Sem MRV Pulmão 2).

[072] Figura 5 mostra uma curva de sobrevivência para uma série cumulativa de pacientes diagnosticados com câncer pulmonar estágio 3B ou 4, ilustrando o efeito de tratamentos por pelo menos 6 meses de duração, comparando pacientes tratados com MRV, pacientes não tratados com MRV, e uma curva de sobrevivência SEER padrão (Análise Combinada - > 6 meses MRV vs Sem MRV Pulmão 2).

[073] Figura 6 mostra uma curva de sobrevivência para uma série cumulativa de 52 pacientes com câncer de mama com metástases ao osso e/ou pulmão, comparando pacientes tratados com MRV, pacientes não tratados com MRV, e uma curva de sobrevivência SEER padrão (Câncer de Mama Estágio 4 - Curva de Sobrevivência para mestástase de osso/pulmão).

[074] Figura 7 é uma comparação de sobrevivência de uma série cumulativa de pacientes com câncer de próstata metastático que teve cirurgia ou radiação para destruir sua glândula próstata (e, assim, o tumor primário) e que teve câncer detectável limitado a metástases ósseas, comparando pacientes tratados com MRV, pacientes não tratados com MRV, e uma curva de sobrevivência SEER padrão (sobrevivência de pacientes de câncer de próstata Estágio 4 com Metástase nos ossos - Cirurgia ou Radioterapia para destruir a próstata).

[075] Figura 8 mostra uma curva de sobrevivênciapara uma série cumulativa de pacientes inicialmente diagnosticados com câncer colorretao estágio 4, comparando pacientes tratados com PVF, pacientes tratados com MRV, pacientes não tratados com uma composição antigênica e uma curva de sobrevivência SEER padrão (Câncer colorretal Estágio 4 - Comparação de tratamento).

[076] Figura 9 mostra uma curva de sobrevivência para uma série cumulativa de pacientes inicialmente diagnosticado com câncer colorretal estágio 4, com datas de pacientes que recebem tratamento dentro de 3 meses do diagnóstico, comparando pacientes tratados com PVF, pacientes tratados com MRV, pacientes não tratados com uma composição antigênica e uma curva de sobrevivência SEER padrão (Câncer colorretal estágio 4 - Primeira visita em 3 meses da data de metástase).

[077] Figura 10 mostra uma curva de sobrevivência para uma série cumulativa de pacientes com câncer pulmonar em estágio 3B que foram tratados com uma terapia de antígeno oral, Respivax, comparado aos pacientes que não usam uma composição antigênica (sobrevivência de pacientes de câncer pulmmonar 2 estágio 3B sem vacina vs. respivax).

[078] Figura 11 mostra uma curva de sobrevivência para uma série cumulativa de pacientes diagnosticados com câncer pulmonar estágio 3B, ilustrando os benefícios de tratamento com composição MRV da invenção, comparando pacientes tratados com MRV, pacientes não tratados com MRV, e uma curva de sobrevivência SEER padrão (Câncer de pulmão Estagio 3B & 4 - Sobrevivência para casos diagnosticados em 1992-2000 inclusive).

[079] Figura 12 mostra uma curva de sobrevivênciamedida a partir da data da primeira visita para uma série cumulativa de pacientes diagnosticados com câncer pulmonar estágio 3B, ilustrando os benefícios de tratamento com composição MRV da invenção, comparando pacientes tratados com MRV, pacientes não tratados com MRV, e uma curva de sobrevivência SEER padrão (Câncer de pulmão estagio 3B & 4 - Sobrevivência da primeira visita CIH).

[080] Figura 13 mostra uma curva de sobrevivência para uma série cumulativa de pacientes diagnosticados com câncer pulmonar estágio 3B cuja primeira visita foi dentro de 3 meses do diagnóstico, ilustrando os benefícios de tratamento precoce com composição MRV da invenção, comparando pacientes tratados com MRV e pacientes não tratados com MRV (Câncer de pulmão estagio 3B - Visita CIH em 3 meses após o diagnóstico no estágio 3B).

[081] Figura 14 mostra uma fotografia de pulmões a partir de camundongos tratados (linha 1) e não tratados (linha 2) com vacina contendo somente células K. pneumoniae após desafio com células de carcinoma pulmonar de Lewis, como descrito no Exemplo 4A aqui. A linha inferior (não numerada) descreve pulmões a partir de camundongos que não foram expostos ao modelo de camundongo de câncer pulmonar.

[082] Figura 15 mostra a média de volume de tumor de camundongos tratados [AB1 - AB6] e não tratados [AB-7] com vacinas bacterianas após desafio com células melanoma B16, como descrito no Exemplo 4B aqui.

[083] Figura 16 mostra uma curva de sobrevivência de grupos de modelo de câncer de cólon tratados com ou sem uma variedade de vacinas bacterianas, como descrito no Exemplo 4C aqui (Curvas de sobrevivência de grupos de camundongos de modelo de câncer de cólon tratados com várias vacinas bacterianas mortas).

[084] Figura 17 mostra o número de monócitos inflamatórios e células dendríticas no linfonodo de drenagem, pulmões, e baço após o tratamento com uma composição antigênica de K. pneumoniae ou PBS, como descrito no exemplo 5A aqui.

[085] Figura 18 mostra o número total de monócitos e células dendríticas no pulmão, peritônio e baço de camundongos após tratamento com uma composição antigênica de K. pneumoniae, uma composição antigênica de E. coli, ou PBS, como descrito no exemplo 5B aqui.

[086] Figura 19 mostra o número total de células T CD4+, células T CD8+, e células NK de camundongos tratados com uma composição antigênica de K. pneumoniae, uma composição antigênica de E. coli, ou PBS, como descrito no exemplo 5B aqui.

[087] Figura 20 mostra o número total de (A) monócitos inflamatórios e (B) células T CD4+, células T CD8+, e células NK no dia 9 ou 16 de camundongos tratados com composição antigênica inativada por calor de K. pneumoniae, uma composição antigênica inativada por fenol de K. pneumoniae, ou PBS, como descrito no exemplo 5C aqui.

[088] Figura 21 mostra o número total de (A) monócitos inflamatórios e células dendríticas e (B) células T CD4+, células T CD8+, e células NK de camundongos tratados com uma composição antigênica inativada por calor de K. pneumoniae, uma composição antigênica inativada por fenol de K. pneumoniae, ou PBS, como descrito no exemplo 5D aqui (QB28 3x105 LL2 LP Met).

[089] Figura 22 mostra o número total de nódulos de tumor em camundongos tratados com PBS, ou diferentes dosagens de composição antigênica de K. pneumoniae como descrito aqui.

[090] Figura 23 mostra uma fotografia de pulmões de camundongos tratados com PBS, ou diferentes dosagens de composição antigênica de K. pneumoniae como descrito aqui.

[091] Figura 24 mostra o número total de nódulos de tumor em camundongos tratados com PBS, ou diferentes dosagens de composição antigênica de K. pneumoniae como descrito aqui.

[092] Figura 25 mostra o número total de nódulos de tumor em camundongos tratados com PBS, ou dosagens de composição antigênica de K. pneumoniae em combinação (ou não) com cisplatina como descrito aqui.

[093] Figura 26 mostra uma curva de sobrevivência para camundongos injetados com células de carcinoma pulmonar de Lewis e tratadas com (i) controle veículo; (ii) Cisplatina; (iii) composição antigênica ou (iv) composição antigênica e Cisplatina.

[094] Figura 27 mostra o percentual de célulasmieloide CD11+b no sangue no dia 13 do experimentorelevante detalhado aqui.

[095] Figura 28 mostra (painel esquerdo) afrequência de células CD11b+ NK1.1- de pulmões de camundongos tratados com várias dosagens de composiçõesantigênicas K. pneumoniae ou com controle PBS (painel direito) a frequência de células CD11b+ NK1.1+ de pulmões de camundongos tratados com várias dosagens de pneumoniae composições antigênicas K. ou com controle PBS.

[096] Figura 29 mostra as quantidades de várias citocinas detectada (em pg/g) de tecido pulmonar derivado de camundongos tratados com várias dosagens de composições antigênicas K. pneumoniae ou com controle PBS.

[097] Figura 30 mostra as quantidades de várias citocinas detectadas (em pg/ml) de fluido BAL de camundongos tratados com várias dosagens de composições antigênicas K. pneumoniae ou com controle PBS.

[098] Figura 31 mostra as razões de expressão de gene relativas de NOS2 a Arg1 de camundongos tratados com várias dosagens de composições antigênicas K. pneumoniae ou com controle PBS.

[099] Figura 32 mostra a frequência relativa de expressão de CD206 em macrófagos pulmonares de camundongos tratados com várias dosagens de composições antigênicas K. pneumoniae ou com controle PBS.

[100] Figura 33 mostra a frequência relativa de expressão de F4/80 em macrófagos pulmonares de camundongos tratados com várias dosagens de composições antigênicas K. pneumoniae ou com controle PBS.

[101] Figura 34 mostra a frequência relativa de células CD11b+ Gr-1+ detectadas de cólons de camundongos tratados com composições antigênicas K. pneumoniae ou E. coli ou com controle PBS.

[102] Figura 35 mostra a frequência relativa de células CD11b+ Gr-1+ detectada de pulmões de camundongos tratados com composições antigênicas K. pneumoniae ou E. coli ou com controle PBS.

[103] Figura 36 mostra a frequência relativa de células CD11b+ que foram tipo M1 como isoladas de tumores subQ 4T1 (painel esquerdo) e a frequência relativa de células CD11b+ que foram tipo M2 como isolado de tumores subQ 4T1 (painel direito).

[104] Figura 37 mostra o volume de tumor (mm3) de camundongos tratados com indometacina e PBS; ou indometacina e uma composição antigênica S. aureus; ou EtOH e PBS; ou EtOH e uma composição antigênica S. aureus [painel esquerdo]. O painel direito desta Figura ainda mostra a frequência relativa e composição de células CD11b+ nos tumores no dia 11 do experimento relevante detalhado aqui.

[105] Figura 38 mostra a frequência relativa e composição de células CD11b+ nos tumores no dia 22 do experimento relevante detalhado aqui.

[106] Figura 39 mostra o volume de tumor em coortes de animais tratados com Indometacina, Indometacina + composições antigênicas, veículo isolado, ou composições antigênicas sozinhas.

[107] Figura 40 mostra o percentual de células CD11b+ nos tumores de animais tratados com Indometacina, Indometacina + composições antigênicas, veículo isolado, ou composições antigênicas sozinhas (dados do dia 11).

[108] Figura 41 mostra o percentual de CD11b+ cells nos tumores de animais tratados com Indometacina, Indometacina + composições antigênicas, veículo isolado, ou composições antigênicas isoladas (Dados do dia 22).

[109] Figura 42 mostra o percentual de células CD11b+ CD94+ nos tumores de animais tratados com Indometacina, Indometacina + composições antigênicas, veículo isolado, ou composições antigênicas isoladas (Dados do dia 22).

[110] Figura 43 mostra a expressão relativa de (A) Fizz1 e (B) Ym1 em tumores retirados como descrito aqui.

[111] Figura 44 mostra a expressão relativa de (A) Arg1 e (B) Fizz1 de tumores e baços [(C) e (D)] como descrito aqui.

[112] Figura 45 mostra a expressão relativa de Nos2 e Ym1 de tumores e baços como descrito aqui.

[113] Figura 46 mostra a quantidade de IFN-y produzido nos pulmões de camundongos com e sem tumores e com e sem tratamento de composição antigênica como descrito aqui.

[114] Figura 47 mostra a quantidade de IL-10 produzida a partir de macrófagos de medula óssea cultivados durante a noite com composição antigênica de K. pneumoniae, LPS, e meio isolado.

[115] Figura 48 mostra a expressão relativa de IL- 10 produzido nos tumores de camundongos em condições descritas aqui.

Descrição detalhada da invenção

[116] Em vários aspectos, uma modalidade da invenção se refere à descoberta surpreendente que a administração, por exemplo, em um local distante do câncer, de patógenos microbianos, como patógenos microbianos mortos, que são patogênicos em um tecido ou órgão particular é efetivo no tratamento de câncer situado naquele tecido ou órgão específico. Assim, a invenção fornece composições antigênicas derivadas destes patógenos microbianos, incluindo espécies bacterianas ou virais mortas completas, ou componentes dos mesmos, para tratamento de câncer, e métodos para uso do mesmo.

[117] Baseado nas observações de pacientes em tratamento, foi demonstrado que administrar composições de bactérias mortas que incluiu muitas das espécies bacterianas que comumente causam infecção pulmonar foi surpreendentemente e inesperadamente efetivos na melhora do curso clínico de câncer de pulmão. De modo semelhante, foi demonstrado que administrar composições incluindo Staphylococcus aureus mortos, uma das causas mais comuns de infecção de osso, mama, pele, perineal e linfonodo e septicemia foi surpreendente e inesperadamente efeito na melhora do curso clínico de câncer do osso, mama, pele, períneo, e linfoma (cancer dos linfonodos) e mieloma múltiplo (um tipo de câncer hematológico). De modo semelhante, foi surpreendentemente e inesperadamente demonstrado que administrar uma composição incluindo Escherichia coli, que é uma causa comum de infecção de cólon, rim, peritônio, fígado, abdominal, pancreático e ovariano, foi efetivo na melhora de curso clínico de câncer no cólon, rim, peritônio, fígado, abdominal, linfonodos, pâncreas e ovário.

[118] Estes resultados indicam que uma composição incluindo antígenos de espécies microbianas patogênicas que causam infecção em um tecido ou órgão particular será uma formulação eficaz para tratar um câncer naquele tecido ou órgão. Por exemplo, câncer no pulmão é efetivamente tratado com uma composição microbiana incluindo uma ou mais espécies patogênicas que comumente causam infecção pulmonar, enquanto câncer no cólon é efetivamente tratado patogênicas que comumente causam infecções de cólon.

[119] Composições antigênicas da invenção podem ser produzidas que incluem determinantes antigênicos que juntos são específicos para ou característica de um patógeno microbiano. Neste contexto, por "específico", entende-se que os determinantes antigênicos são suficientemente característicos do patógeno que poderiam ser usados para elevar uma resposta imune, como uma resposta imune adaptativa, contra o patógeno no paciente, se os determinantes antigênicos devessem ser administrados em um modo apropriado para ter aquele efeito. Será reconhecido que os determinantes antigênicos precisam ser específicos que são característicos de somente uma cepa particular ou espécies de patógeno, uma vez que uma resposta imune específica contra um patógeno particular pode ter reação cruzada com outros organismos relacionados intimamente que são ainda naturalmente patogênicos no tecido ou órgão em que o câncer está situado e que a composição antigênica é formulada ou selecionada ao alvo.

[120] Em algumas modalidades, as composições de micróbios patogênicos podem ser usadas para tratar locais de câncer primário e/ou locais de metástase. Assim, por exemplo, as composições microbianas podem ser usadas para o tratamento de um câncer em um local particular, independentemente de se o câncer é um câncer primário ou uma metástase. A composição pode ser direcionada ao tratamento de cada local de câncer, ou pode ser uma composição combinada para ambos câncer primário e o(s) local(is) de metástase. Por exemplo, para tratar câncer renal que entrou em metástase para o pulmão e osso, três composições diferentes, incluindo uma ou mais espécies que são conhecidas aos patógenos renais, uma ou mais espécies que são conhecidas aos patógenos pulmonares e uma ou mais espécies que são conhecidas a patógenos ósseos, ou uma composição combinada das mesmas pode ser usada. Em algumas modalidades, as composições podem ser administrada em diferentes localizações no mesmo tempo ou em diferentes tempos.

[121] Por exemplo, para câncer pulmonar com metástase ao osso, em modalidades alternativas, ambas uma composição microbiana incluindo uma ou mais espécies bacterianas (ou vírus) que comumente causam infecção pulmonar e uma composição microbiana incluindo uma ou mais espécies bacterianas (ou vírus) que comumente causam infecção óssea podem ser usadas. De modo semelhante, para câncer de cólon com metástase aos pulmões, ambas uma composição patogênica bacteriana (ou viral) incluindo uma ou mais espécies bacterianas (ou vírus) que comumente causam infecção de cólon e uma composição microbiana incluindo uma ou mais espécies bacterianas (ou vírus) que comumente causam infecção pulmonar podem ser usadas; para câncer de próstata com metástase aos ossos, ambas uma composição bacteriana patogênica (ou viral) incluindo uma ou mais espécies bacterianas (ou vírus) que comumente causam infecção de próstata e uma composição bacteriana patogênica (ou viral) incluindo uma ou mais espécies bacterianas (ou vírus) que comumente causam infecção óssea podem ser usadas.

[122] A seguinte lista fornece alguns exemplos não limitantes de cânceres primários e seus locais comuns para espalhamento secundário (metástases):Câncer primário Locais comuns para metástasepróstata osso, pulmõesosso, pulmões, pele, fígado, cérebropulmão osso, cérebro, fígado, pulmõescólon fígado, pulmões, osso, cérebrorim pulmões, osso, cérebropâncreas fígado, pulmõesmelanoma pulmões, pele, fígado, cérebroútero pulmões, ossos, ováriosovário fígado, pulmãobexiga osso, pulmão, fígadopescoço e cabeça osso, pulmõessarcoma pulmões, cérebroestômago fígadocérvice osso, pulmõestestículos pulmõestireoide osso, pulmões

[123] Em algumas modalidades, as composiçõesantigênicas podem ser usadas para tratar ou prevenircânceres em sítios primários ou para tratar ou prevenirmetástase. Por exemplo, em fumantes de longo prazo, uma composição antigênica específica para câncer de pulmão (por exemplo, incluindo determinantes antigênicos de uma ou mais espécies bacterianas ou vírus que comumente causam infecção pulmonar) pode ser usada para apropriadamente ser usadas para apropriadamente estimular o sistema imune para defender contra o desenvolvimento de câncer dentro do tecido pulmonar. Como outro exemplo, uma composição antigênica específica para câncer de mama (por exemplo, incluindo determinantes antigênicos de uma ou mais espécies bacterianas que comumente causam infecção de mama) poderia ser usada para prevenir câncer de mama em mulheres com um histórico familiar forte de câncer de mama ou uma predisposição genética. Em modalidades alternativas, uma composição antigênica incluindo uma ou mais espécies bacterianas que comumente causam infecção óssea pode ser usada para prevenir ou tratar metástases ósseas em um paciente com câncer de próstata. Em outras modalidades alternativas, uma composição antigênica incluindo uma ou mais espécies bacterianas ou vírus que comumente causam infecção pulmonar pode ser usada para prevenir ou tratar metástases pulmonares em um paciente com melanoma maligno.

[124] Várias modalidades alternativas e exemplos da invenção são descritas aqui. Estas modalidades e exemplos são ilustrativos e não devem ser interpretados como limitantes do escopo da invenção.

Cânceres

[125] A maioria dos cânceres cai dentro de três classificações histológicas amplas: carcinomas, que são cânceres predominantes e são cânceres de células epiteliais ou células que cobrem as superfícies internas ou externas de órgãos, glândulas ou outras estruturas corporais (por exemplo, pele, útero, pulmão, mama, próstata, estômago, intestino), e que tendem a gera metástase; carcomas, que são derivados de tecido conectivo ou de suporte (por exemplo, osso, cartilagem, tendões, ligamentos, gordura, músculo); e tumores hematológicos, que são derivados de medula óssea e tecido linfático. Carcinomas podem ser adenocarcinomas (que geralmente se desenvolvem em órgãos ou glândulas capazes de secreção, como mama, pulmão, cólon, próstata ou bexiga) ou podem ser carcinomas de célula escamosa (que se originam no epitélio escamoso e geralmente se desenvolve na maioria das áreas do corpo). Sarcomas podem ser osteosarcomas ou sarcomas osteogênicos (osso), condrosarcomas (cartilagem), leiomiosarcomas (músculo liso), rabdomiosarcomas (músculo esquelético), sarcomas mesoteliais ou mesoteliomas (revestimento membranoso de cavidades corporais), fibrosarcomas (tecido fibroso), angiosarcomas ou hemangioendoteliomas (vasos sanguíneos), liposarcomas (tecido adiposo), gliomas ou astrocitomas (tecido conectivo neurogênico encontrado no cérebro), mixosarcomas (tecido conectivo embrionário primitivo), ou tumores mesenquimoso ou mesodermal misto (tipos de tecidos conectivos mistos). Tumores hematológicos podem ser mielomas, que se originam nas células plasmáticas de medula óssea; leucemias que pode ser “cânceres líquidos” e são cânceres da medula óssea e podem ser leucemina mieloide ou granulocítica (células sanguíneas brancas mieloides e granulocíticas), leucamias linfáticas, linfocíticas, ou linfoblásticas (células sanguíneas linfoides e linfocíticas) ou policitemia vera ou eritremia (vários produtos das células sanguíneas, mas com predominância de células vermelhas); ou linfomas, que podem ser tumores sólidos e que se desenvolvem em glândulas ou nodos do sistema linfático, e que podem ser linfomas Hodgkin ou não Hodgkin. Além disso, cânceres de tipo misto, como carcinomas adenoescamoso, tumores mesodermais mistos, carcinosarcomas, ou teratocarcinomas ainda existem.

[126] Cânceres nomeados com base no local primário podem ser correlacionados com classificações histológicas. Por exemplo, cânceres de pulmão são geralmente cânceres pulmonares de célula pequena ou cânceres pulmonares de célula não pequena, que podem ser carcinoma de célula escamosa, adenocarcinoma, ou carcinoma de célula grande; cânceres de pele são geralmente cânceres de célula basal, cânceres de célula escamosa, ou melanomas. Linfomas podem surgir nos linfonodos associados com cabeça, pescoço e peito, bem como linfonodos abdominais ou nos linfonodos axilares ou inguinais. A identificação e a classificação de tipos e estágios de cânceres podem ser realizadas usando, por exemplo, informações fornecidas pelo Surveillance, Epidemiology, and End Results (SEER) Program of the National Cancer Institute, que é uma fonte de informações oficial sobre incidência de câncer e sobrevivência nos Estados Unidos e é reconhecido mundialmente. O programa SEER atulamente coleta e publica dados de incidência de câncer e sobrevivência de 14 registros de câncer baseado em população e três registros complementares que cobrem aproximadamente 26 por cento da população norte-americana. O programa rotineiramente coleta dados sobre demografia dos pacientes, local de tumor primário, morfologia, estágio em diagnóstico, primeiro curso de tratamento, e acompanhamento para estados de vida, e é a única fonte compreensiva de informações com base na população nos Estados Unidos que inclui estágio de câncer no momento do diagnóstico e taxas de sobrevivência dentro de cada estágio. As informações sobre mais de 3 milhões de casos de câncer in situ e invasivos são incluídas na base de dados SEER, e aproximadamente 170.000 novos casos são adicionados a cada ano dentro das áreas cobertas pelo SEER. Os dados de incidência e sobrevivência do Programa SEER podem ser usados para avaliar a sobrevivência padrão para um local e estágio de câncer particular. Por exemplo, para garantir um grupo de comparação ideal, critérios específicos podem ser selecionados a partir da base de dados, incluindo data do diagnóstico e estágio exato (por exemplo, no caso de câncer pulmonar exemplo aqui, os anos foram selecionados para combinar com o quadro de tempo da revisão retrospectiva, e câncer pulmonar em estágio 3B e 4 foram selecionados; e no caso do exemplo de câncer de cólon aqui, os anos foram ainda selecionados para combinar com o quadro de tempo da revisão retrospectiva, e câncer cólon estágio 4 foi selecionado.

[127] Os cânceres podem ainda ser nomeados com base no órgão em que eles se originam, ou seja, o “sítio primário”, por exemplo, câncer de mama, cérebro, pulmão, fígado, pele, próstata, testículo, bexiga, cólon e reto, cérvice, útero, etc. Esta nomeação persiste mesmo se o câncer entre em metástase para outra parte do corpo que é diferente do local primário. Com a presente invenção, o tratamento é direcionado para o local do câncer, não o tipo de câncer, de modo que um câncer de qualquer tipo esteja situado no pulmão, por exemplo, poderia ser tratado com base na sua localização no pulmão.

[128] Um “câncer” ou “neoplasma” é qualquer crescimento indesejado de células que não servem à função fisiológica. Em geral, uma célula de câncer foi liberada de seu controle de divisão celular normal, ou seja, uma célula cujo crescimento não é regulado pela bioquímica normal e influências físicas no ambiente celular. Assim, “câncer” é um termo geral para doenças caracterizadas por crescimento celular anormal não controlado. Na maioria dos casos, uma célula de câncer se prolifera para formar células clonais que são malignas. A massa celular ou informe, “neoplasma” ou “tumor,” é geralmente capaz de invadir e destruir tecido normal circundante. Por “malignidade”, conforme usado aqui, entende-se como um crescimento anormal de qualquer tipo de célula ou tecido que tem um efeito prejudicial no organismo contendo o crescimento anormal. O termo “malignidade” ou “câncer” inclui crescimento celular que é tecnicamente benigno, mas contém o risco de se tornar maligno. Células de câncer podem se espalhar a partir de seu local original do corpo através do sistema linfático ou corrente sanguínea em um processo conhecido como “metástase.” Muitos cânceres são refratários ao tratamento e se provam fatais. Exemplos de cânceres ou neoplasmas incluem, entre outros, células transformadas e imortalizadas, tumores, carcinomas, em vários órgãos e tecidos como descrito aqui ou conhecidos aos especialistas na técnica.

[129] Uma “célula” é a unidade básica estrutural e funcional de um organismo vivo. Em organismos maiores, por exemplo, animais, células contendo estrutura semelhante e funcionam geralmente agregadas em “tecidos” que realizam funções particulares. Assim, um tecido inclui uma coleção de células semelhantes e substâncias intercelulares circundantes, por exemplo, tecido epitelial, tecido conectivo, músculo, nervo. Um “órgão” é uma unidade estrutural e funcional totalmente diferenciada em um organismo superior que podem ser composto de tipos diferentes de tecidos e é especializado para alguma função particular, por exemplo, rim, coração, cérebro, fígado, etc. Assim, por “órgão específico, tecido, ou célula” entende-se aqui por incluir um órgão particular, e para incluir as células e tecidos encontrados naquele órgão.

[130] Agentes "patogênicos" são agentes, como micróbios, como bactéria ou vírus, que são conhecidas por causar infecção em um hospedeiro na natureza, e neste sentido, "patogênico" é usado no contexto da presente invenção para significar "naturalmente patogênico". Embora uma ampla variedade de micróbios possa ser capaz de causar infecção em condições artificiais, como inoculações artificiais de um micróbio em um tecido, a faixa de micróbios que naturalmente causam infecção é necessariamente limitada, e bem estabelecida por prática médica.

[131] Uma “infecção” é o estado ou condição em que o corpo ou uma parte deste é invadido por um agente patogênico (por exemplo, um micróbio, como uma bactéria) que, em condições favoráveis, se multiplica e produz efeitos que são danosos (Taber’s Cyclopedic Medical Dictionary, 14a Ed., C.L. Thomas, Ed., F.A. Davis Company, PA, USA). Uma infecção pode nem sempre estar clinicamente aparente e pode resultar em lesão celular somente localizada. Infecções podem permanecer subclínicas, e temporárias se os mecanismos de defesa do corpo são efetivos. Infecções podem se espalhar localmente ou se tornar clinicamente aparente como uma infecção aguda, subaguda, crônica ou estado de doença. Uma infecção local pode ainda se tornar sistêmica quando o agente patogênico ganha acesso ao sistema linfático ou vascular (On-Line Medical Dictionary, http://cancerweb.ncl.ac.uk/omd/). A infecção é geralmente acompanhada por inflamação, mas a inflamação pode ocorrer sem infecção.

[132] “Inflamação” é uma reação característica do tecido para lesão (marcada por inchaço, vermelhidão, calor, e dor), e inclui alterações sucessivas que ocorrem em tecido vivo quando este é lesado. A infecção e inflamação são condições diferentes, embora qualquer um pode surgir de outro (Taber’s Cyclopedic Medical Dictionary, supra). Assim, a inflamação pode ocorrer sem infecção e infecção pode ocorrer sem inflamação (embora a inflamação tipicamente resulta da infecção por bactéria patogênica ou vírus). Inflamação é caracterizada pelos seguintes sintomas: vermelhidão (rubor), calor (calor), inchaço (tumor), dor (dor). Inflamação visível localizada na pele pode estar aparente a partir de uma combinação destes sintomas, particularmente vermelhidão em um local de administração.

[133] Vários sujeitos podem ser tratados de acordo com aspectos alternativos da invenção. Conforme usado aqui, um “sujeito” é um animal, por exemplo, um mamífero, ao qual a bactéria patogênica específica, antígenos bacterianos, vírus, antígenos virais ou composições dos mesmos da invenção podem ser administrados. Assim, um sujeito pode ser um paciente, por exemplo, um humano, que sofre de um câncer, ou suspeito de ter um câncer, ou em risco de desenvolver um câncer. Um sujeito pode ainda ser um animal experimental, por exemplo, um modelo animal de um câncer, como descrito no exemplo 5. Em algumas modalidades, os termos “sujeito” e “paciente” podem ser usados de modo intercambiável, e podem incluir um humano, um mamífero não humano, um primata não humano, um rato, camundongo, cão, etc. Um sujeito saudável pode ser um humano que não está sofrendo de um câncer ou suspeito de ter um câncer, ou que não está sofrendo de um distúrbio ou condição crônica. Um “sujeito saudável” pode ainda ser um sujeito que não é imunocomprometido. Por imunocomprometido entende-se qualquer condição em que o sistema imune funciona de um modo anormal ou incompleto. Imunocomprometido pode ser devido à doença, certas medicações, ou condições presentes no nascimento. Sujeitos imunocomprometidos podem ser encontrados mais frequentemente entre crianças, os idosos, e indivíduos que passam por droga extensiva ou radioterapia.

[134] Uma “resposta imune” inclui, entre outras, uma ou mais das seguintes respostas em um mamífero: indução ou ativação de anticorpos, neutrófilos, monócitos, macrófagos (incluindo ambos macrófagos tipo M1 e macrófagos tipo M2 como descrito aqui), células B, células T (incluindo células T helper, células natural killer, células T citotóxicas, células yδT), como indução ou ativação pelos antígenos em uma composição ou vacina, após administração da composição ou vacina. Uma resposta imune a uma composição ou vacina assim geralmente inclui o desenvolvimento no animal hospedeiro de uma resposta mediada por célula e/ou anticorpo à composição ou vacina de interesse. Em algumas modalidades, a resposta imune é tal que irá resultar em redução ou interrupção da progressão de um câncer no animal. Uma resposta imune inclui ambas as respostas imunes celulares e respostas imunes humorais como entendido pelos especialistas na técnica.

Bactérias e colonizações e infecções bacterianas

[135] A maioria dos animais é colonizada em algum grau por outros organismos, como bactéria, que geralmente existem em relações simbióticas ou comensais com o animal hospedeiro. Assim, muitas espécies normalmente inofensivas são encontradas em animais saudáveis, e são geralmente localizados à superfície de órgãos e tecidos específicos. Geralmente, estas bactérias auxiliam no funcionamento normal do corpo. Por exemplo, em humanos, bactérias Escherichia coli simbióticas podem ser encontradas no intestino, onde promovem imunidade e reduzem o risco de infecção com patógenos mais virulentos.

[136] Bactérias que são geralmente inofensivas, como Escherichia coli, podem causar infecção em sujeitos saudáveis, com resultados variando de infecção leve a grave até morte. Se uma bactéria é ou não patogênica (ou seja, causa infecção) depende de alguma extensão de fatores como a via de entrada e acesso a células hospedeiras específicas, tecidos, ou órgãos; a virulência intrínseca da bactéria; a quantidade de bactéria presente no local de infecção potencial; ou a saúde do animal hospedeiro. Assim, bactérias que são normalmente inofensivas podem se tornar patogênicas dadas as condições favoráveis para infecção, e mesmo as bactérias mais virulentas requerem circunstâncias específicas para causar infecção. Assim, espécies microbianas que são membros da flora normal podem ser patógenos quando se movem além do papel ecológico normal na flora endógena. Por exemplo, espécies endógenas podem causar infecção fora de seu nicho ecológico em regiões de proximidade anatômica, por exemplo, por espalhamento contíguo. Quando isto ocorre, estas bactérias endógenas normalmente inofensivas são consideradas patogênicas.

[137] Espécies bacterianas específicas e vírus são conhecidos por causar infecções em células específicas, tecidos ou órgãos em sujeitos de alguma forma saudáveis. Exemplos de bactérias e vírus que comumente causam infecções em órgãos e tecidos específicos do corpo são listados abaixo; será entendido que estes exemplos não pretendem ser limitantes e que um especialista poderia ser capaz de prontamente reconhecer e identificar infecções ou bactérias patogênicas que causam infecções, ou comumente causam infecções, em vários órgãos e tecidos em adultos saudáveis (e reconhecem a frequência relativa de infecção com cada espécie bacteriana) baseado no conhecimento no campo como representado, por exemplo, pelas seguintes publicações: Manual of Clinical Microbiology 8th Edition, Patrick Murray, Ed., 2003, ASM Press American Society for Microbiology, Washington DC, USA; Mandell, Douglas, and Bennett‘s Principles and Practice of Infectious Diseases 5th Edition, G. L. Mandell, J.E. Bennett, R. Dolin, Eds., 2000, Churchill Livingstone, Philadelphia, PA, USA, todas das quais são incorporadas por referência aqui.

[138] As infecções de pele são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Staphylococcus aureus, grupo de streptococci beta hemolíticos A, B, C ou G, Corynebacterium diptheriae, Corynebacterium ulcerans, ou Pseudomonas aeruginosa; ou patógenos virais: rubéola, rubéola, varicela-zoster, Ecovírus, coxsackievírus, adenovírus, vaccinia, herpes simplex, ou parvo B19.

[139] Infecções do tecido mole (por exemplo, gordura e músculo) são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus, Clostridium perfringens, ou outros Clostridium spp.; ou patógenos virais: influenza, ou coxsackievírus.

[140] Infecções de mama são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Staphylococcus aureus, ou Streptococcus pyogenes.

[141] Infecções do linfonodos de cabeça e pescoço são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Staphylococcus aureus, ou Streptococcus pyogenes; ou patógenos virais: Epstein-Barr, Citomegalovírus, adenovírus, sarampo, rubéola, herpes simplex, coxsackievírus, ou varicela-zoster.

[142] Infecções do linfonodos do braço/axila são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Staphylococcus aureus, ou Streptococcus pyogenes ou patógenos virais: sarampo, rubéola, Epstein-Barr, citomegalovírus, adenovírus, ou varicela-zoster.

[143] Infecções do linfonodos do mediastino são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: viridans streptococci, Peptococcus spp., Peptostreptococcus spp., Bacteroides spp., Fusobacterium spp., ou Mycobacterium tuberculosis; ou patógenos virais: sarampo, rubéola, Epstein-Barr, citomegalovírus, varicela-zoster, ou adenovírus.

[144] Infecções do linfonodos pulmonares hilares são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Streptococcus pneumoniae, Moraxella catarrhalis, Mycoplasma pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Haemophilus influenza, Chlamydophila pneumoniae, Bordetella pertussis ou Mycobacterium tuberculosis; ou patógenos virais: influenza, adenovírus, rinovírus, coronavírus, parainfluenza, vírus sincicial respiratório, metapneumovírus humano, ou coxsackievírus.

[145] Infecções de linfonodos intra-abdominal são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis, Salmonella spp., Streptococcus pyogenes, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, ou Mycobacterium tuberculosis; ou patógenos virais: sarampo, rubéola, Epstein-Barr, Citomegalovírus, varicela-zoster, adenovírus, influenza, ou coxsackievírus.

[146] Infecções do linfonodos da região da perna/inguinal são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Staphylococcus aureus, ou Streptococcus pyogenes ou patógenos virais: sarampo, rubéola, Epstein-Barr, citomegalovírus, ou herpes simplex.

[147] Infecções do sangue (ou seja, septicemia) são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, staphylococci coagulase-negativos, Enterococcus spp., Escherichia coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp., Proteus spp., Pseudomonas aeruginosa, Bacteroides fragilis, Streptococcus pneumoniae, ou streptococci grupo B; ou patógenos virais: rubéola, rubéola, varicela-zoster, Ecovírus, coxsackievírus, adenovírus, Epstein-Barr, herpes simplex, ou Citomegalovírus.

[148] Infecções do osso são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Staphylococcus aureus, coagulase-negativa staphylococci, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus agalactiae, outros streptococci spp., Escherichia coli, Pseudomonas spp., Enterobacter spp., Proteus spp., ou Serratia spp.; ou patógenos virais: parvovírus B19, rubéola, ou hepatite B.

[149] Infecções de meninges são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus agalactiae, ou Listeria monocytogenes; ou patógenos virais: Ecovírus, coxsackievírus, outros Enterovírus, ou caxumba.

[150] Infecções do cérebro são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Streptococcus spp. (incluindo S. anginosus, S. constellatus, S. intermedius), Staphylococcus aureus, Bacteroides spp., Prevotella spp., Proteus spp., Escherichia coli, Klebsiella spp., Pseudomonas spp., Enterobacter spp., ou Borrelia burgdorferi; ou patógenos virais: coxsackievírus, Ecovírus, Poliovírus, outros Enterovírus, caxumba, herpes simplex, varicela-zoster, flavivírus, ou bunyavírus.

[151] Infecções de medula espinhal são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus agalactiae, Listeria monocytogenes, ou Borrelia burgdorferi; ou patógenos virais: coxsackievírus, Ecovírus, Poliovírus, outros Enterovírus, caxumba, herpes simplex, varicela-zoster, flavivírus, ou bunyavírus.

[152] Infecções do olho/órbita são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus milleri, Escherichia coli, Bacillus cereus, Chlamydia trachomatis, Haemophilus influenza, Pseudomonas spp., Klebsiella spp., ou Treponema pallidum; ou patógenos virais: adenovírus, herpes simplex, varicela-zoster, ou citomegalovírus.

[153] Infecções de glândulas salivares são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Staphylococcus aureus, viridans streptococci (por exemplo, Streptococcus salivarius, Streptococcus sanguis, Streptococcus mutans), Peptostreptococcus spp., ou Bacteroides spp., ou outros anaeróbios orais; ou patógenos virais: caxumba, influenza, enterovírus, ou raiva.

[154] Infecções da boca são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Prevotella melaninogenicus, streptococci anaeróbicos, streptococci viridans, Actinomyces spp., Peptostreptococcus spp., ou Bacteroides spp., ou outros anaeróbios orais; ou patógenos virais: herpes simplex, coxsackievírus, ou Epstein-Barr.

[155] Infecções do tonsilas são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Streptococcus pyogenes, ou streptococci hemolítico grupo C ou G B; ou patógenos virais: Rinovírus, influenza, coronavírus, adenovírus, parainfluenza, vírus sincicial respiratório, ou herpes simplex.

[156] Infecções dos sinos são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenza, Moraxella catarrhalis, α-streptococci, bactérias anaeróbicas (por exemplo, Prevotella spp.), ou Staphylococcus aureus; ou patógenos virais: Rinovírus, influenza, adenovírus, ou parainfluenza.

[157] Infecções de nasofaringe são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Streptococcus pyogenes, ou streptococci hemolítico grupo C ou G B; ou patógenos virais: Rinovírus, influenza, coronavírus, adenovírus, parainfluenza, vírus sincicial respiratório, ou herpes simplex.

[158] Infecções da tireoide são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, ou Streptococcus pneumoniae; ou patógenos virais: caxumba, ou influenza.

[159] Infecções de laringe são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Mycoplasma pneumoniae, Chlamydophila pneumoniae, ou Streptococcus pyogenes; ou patógenos virais: rinovírus, influenza, parainfluenza, adenovírus, corona vírus, ou metapneumovírus humano.

[160] Infecções da traqueia são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Mycoplasma pneumoniae; ou patógenos virais: parainfluenza, influenza, vírus sincicial respiratório, ou adenovírus.

[161] Infecções dos brônquios são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Mycoplasma pneumoniae, Chlamydophila pneumoniae, Bordetella pertussis, Streptococcus pneumoniae, ou Haemophilus influenzae; ou patógenos virais: influenza, adenovírus, rinovírus, coronavírus, parainfluenza, vírus sincicial respiratório, metapneumovírus humano, ou coxsackievírus.

[162] Infecções do pulmão são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Streptococcus pneumoniae, Moraxella catarrhalis, Mycoplasma pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, ou Haemophilus influenza; ou patógenos virais: influenza, adenovírus, vírus sincicial respiratório, ou parainfluenza.

[163] Infecções da pleura são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Bacteroides fragilis, Prevotella spp., Fusobacterium nucleatum, peptostreptococcus spp., ou Mycobacterium tuberculosis; ou patógenos virais: influenza, adenovírus, vírus sincicial respiratório, ou parainfluenza.

[164] Infecções do mediastino são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: viridans streptococci, Peptococcus spp., Peptostreptococcus spp., Bacteroides spp., Fusobacterium spp., ou Mycobacterium tuberculosis; ou patógenos virais: sarampo, rubéola, Epstein-Barr, ou Citomegalovírus.

[165] Infecções do coração são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Streptococcus spp. (incluindo S. mitior, S. bovis, S. sanguis, S. mutans, S. anginosus), Enterococcus spp., Staphylococcus spp., Corynebacterium diptheriae, Clostridium perfringens, Neisseria meningitidis, ou Salmonella spp.; ou patógenos virais: enterovírus, coxsackievírus, Ecovírus, Poliovírus, adenovírus, caxumba, rubéola, ou influenza.

[166] Infecções do esôfago são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Actinomyces spp., Mycobacterium avium, Mycobacterium tuberculosis, ou Streptococcus spp.; ou patógenos virais: Citomegalovírus, herpes simplex, ou varicela-zoster.

[167] Infecções do estômago são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Streptococcus pyogenes ou Helicobacter pylori; ou patógenos virais: Citomegalovírus, herpes simplex, Epstein-Barr, rotavírus, norovírus, ou adenovírus.

[168] Infecções do intestino delgado são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Escherichia coli, Clostridium difficile, Bacteroides fragilis, Bacteroides vulgatus, Bacteroides thetaiotaomicron, Clostridium perfringens, Salmonella enteriditis, Yersinia enterocolitica, ou Shigella flexneri; ou patógenos virais: adenovírus, astrovírus, calicivírus, norovírus, rotavírus, ou citomegalovírus.

[169] Infecções do cólon/reto são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Escherichia coli, Clostridium difficile, Bacteroides fragilis, Bacteroides vulgatus, Bacteroides thetaiotaomicron, Clostridium perfringens, Salmonella enteriditis, Yersinia enterocolitica, ou Shigella flexneri; ou patógenos virais: adenovírus, astrovírus, calicivírus, norovírus, rotavírus, ou citomegalovírus.

[170] Infecções do ânus são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Streptococcus pyogenes, Bacteroides spp., Fusobacterium spp., streptococci anaeróbicas, Clostridium spp., Escherichia coli, Enterobacter spp., Pseudomonas aeruginosa, ou Treponema pallidum; ou patógenos virais: herpes simplex.

[171] Infecções do períneo são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Escherichia coli, Klebsiella spp., Enterococcus spp., Bacteroides spp., Fusobacterium spp., Clostridium spp., Pseudomonas aeruginosa, streptococci anaeróbicas, Clostridium spp., ou Enterobacter spp.; ou patógenos virais: herpes simplex.

[172] Infecções do fígado são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Escherichia coli, Klebsiella spp., Streptococcus (grupo anginoso), Enterococcus, spp. outros viridans streptococci, ou Bacteroides spp.; ou patógenos virais: hepatite A, Epstein- Barr, herpes simplex, caxumba, rubéola, rubéola, varicela- zoster, coxsackievírus, ou adenovírus.

[173] Infecções da vesícula biliar são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Escherichia coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp., enterococci, Bacteroides spp., Fusobacterium spp., Clostridium spp., Salmonella enteriditis, Yersinia enterocolitica, ou Shigella flexneri.

[174] Infecções do trato biliar são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Escherichia coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp., enterococci, Bacteroides spp., Fusobacterium spp., Clostridium spp., Salmonella enteriditis, Yersinia enterocolitica, ou Shigella flexneri; ou patógenos virais: hepatite A, Epstein-Barr, herpes simplex, caxumba, rubéola, rubéola, varicela-zoster, cocsackievírus, ou adenovírus.

[175] Infecções do pâncreas são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Escherichia coli, Klebsiella spp., Enterococcus spp., Pseudomonas spp., Staphylococcal spp., Mycoplasma spp., Salmonella typhi, Leptospirosis spp., ou Legionella spp.; ou patógenos virais: caxumba, coxsackievírus, hepatite B, Citomegalovírus, herpes simplex 2, ou varicela-zoster.

[176] Infecções do baço são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Salmonella spp., Pseudomonas spp., Escherichia coli, ou Enterococcus spp.; ou patógenos virais: Epstein-Barr, Citomegalovírus, adenovírus, sarampo, rubéola, coxsackievírus, ou varicela-zoster.

[177] Infecções da glândula adrenal são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Salmonella spp., Pseudomonas spp., Escherichia coli, ou Enterococcus spp.; ou patógenos virais: varicela-zoster.

[178] Infecções do rim são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Escherichia coli, Proteus mirabilis, Proteus vulgatus, Providentia spp., Morganella spp., Enterococcus faecalis, ou Pseudomonas aeruginosa; ou patógenos virais: Vírus BK, ou caxumba.

[179] Infecções do ureter são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Escherichia coli, Proteus mirabilis, Proteus vulgatus, Providentia spp., Morganella spp., ou Enterococcus spp.

[180] Infecções da bexiga são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Escherichia coli, Proteus mirabilis, Proteus vulgatus, Providentia spp., Morganella spp., Enterococcus faecalis, ou Corynebacterium jekeum; ou patógenos virais: adenovírus, ou Citomegalovírus.

[181] Infecções do peritônio são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumonia, Escherichia coli, Klebsiella spp., Proteus spp., enterococci, Bacteroides fragilis, Prevotella melaninogenica, Peptococcus spp., Peptostreptococcus spp., Fusobacterium spp., ou Clostridium spp.

[182] Infecções da área retroperitônia são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Escherichia coli, ou Staphylococcus aureus.

[183] Infecções da próstata são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Escherichia coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp., Proteus mirabilis, enterococci spp., Pseudomonas spp., Corynebacterium spp., ou Neisseria gonorrhoeae; ou patógenos virais: herpes simplex.

[184] Infecções do testículo são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus spp., Streptococcus spp., ou Salmonella enteriditis; ou patógenos virais: caxumba, coxsackievírus, ou vírus da coriomeningite linfocítica.

[185] Infecções do pênis são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Neisseria gonorrhoeae, ou Treponema pallidum; ou patógenos virais: herpes simplex.

[186] Infecções do ovário/anexos são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Gardenerella vaginalis, Streptococcus spp., ou Escherichia coli.

[187] Infecções do útero são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Gardenerella vaginalis, Prevotella spp., Bacteroides spp., Peptococcus spp., Streptococcus spp., ou Escherichia coli.

[188] Infecções do cérvice são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, ou Treponema pallidum; ou patógenos virais: herpes simplex.

[189] Infecções da vagina são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Gardenerella vaginalis, Prevotella spp., Bacteroides spp., peptococci spp., Escherichia coli, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, ou Treponema pallidum; ou patógenos virais: herpes simplex.

[190] Infecções da vulva são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, ou Treponema pallidum; ou patógenos virais: herpes simplex.

Cepas bacterianas/Subtipos virais

[191] Será entendido por um especialista na técnica que espécies bacterianas são classificadas operacionalmente como coleções de cepas semelhantes (que geralmente referem-se aos grupos de ancestrais comuns presumidos com distinções fisiológicas identificáveis, mas geralmente não morfológicas, e que podem ser identificados usando técnicas sorológicas contra antígenos de superfície bacteriana). Assim, cada espécie bacteriana (por exemplo, Streptococcus pneumoniae) tem várias cepas (ou sorotipos), que podem diferir em sua capacidade de causar infecção ou diferir em sua capacidade de causar infecção em um órgão/tecido particular. Por exemplo, embora há pelo menos 90 sorotipos de Streptococcus pneumoniae, sorotipos 1, 3, 4, 7, 8, e 12 são mais frequentemente responsáveis para doença pneumococcal em humanos.

[192] Como um segundo exemplo, certas cepas de Escherichia coli, referenciadas como patogênico extraintestinal E. coli (ExPEC), são mais prováveis de causar infecção do trato urinário ou outras infecções extraintestinais como meningite neonatal, enquanto outras cepas, incluindo enterotoxigênica E. coli (ETEC), enteropatogênica E. coli (EPEC), enterohemorrágica E. coli (EHEC), E. coli produtora de toxina Shiga (STEC), enteroagregativa E. coli (EAEC), enteroinvasiva E. coli (EIEC) e E. coli de adesão difusa (DAEC) são mais prováveis de causar infecção/diarreia gastrointestinal. Mesmo embora as sub-categorias de cepas ExPEC, fatores de virulência específica (por exemplo, produção de fímbria tipo 1) permitem que certas cepas sejam mais capazes de causar infecção da bexiga, enquanto outros fatores de virulência (por exemplo, produção de fímbria P) permitem outras cepas mais capazes de causar infecção nos rins. De acordo com a presente invenção, uma cepa ExPEC que é mais provável de causar infecção na bexiga pode ser escolhida para uma formulação para direcionar câncer de bexiga, em que uma cepa ExPEC que é mais provável de causar infecção no rim pode ser escolhido para uma formulação para direcionar ao câncer renal. Da mesma forma, um ou mais de uma cepa ETEC, EPEC, EHEC, STEC, EAEC, EIEC ou DAEC de E. coli (ou seja, cepas que causam infecção de cólon), podem ser escolhidas para uma formulação para tratar câncer cólon.

[193] Da mesma forma, há vários subtipos de vírus específicos. Por exemplo, há três tipos de vírus influenza, influenza A, influenza B e influenza C, que diferem em epidemiologia, gama de hospedeiros e características clínicas. Por exemplo, influenza A é mais provável de estar associada com infecção viral pulmonar, enquanto que influenza B é mais provável de estar associada com miosite (ou seja, infecção no músculo). Além disso, cada um destes três tipos de vírus influenza tem vários subtipos, que ainda diferem em epidemiologia, gama de hospedeiro e características clínicas. De acordo com a presente invenção, pode-se escolher um subtipo de influenza A mais comumente associado com infecção pulmonar para direcionar câncer pulmonar, enquanto que pode-se escolher uma cepa de influenza B mais comumente associada com miosite para tratar câncer do músculo/tecido moles.

[194] É entendido que um microbiologista clínico especialista na técnica poderia, portanto, ser capaz de selecionar, baseado na presente revelação e o corpo da técnica relacionada às cepas bacterianas para cada espécie de bactéria (e subtipos virais para cada tipo de vírus), as cepas de espécies bacterianas particulares (ou subtipo de um vírus particular) para direcionar a um órgão ou tecido específico.

Composições bacterianas, dosagens, e administração

[195] As composições da invenção incluem antígenos de espécies microbianas patogênicas (bacteriana ou viral) que são patogênicas em um tecido ou órgão específico. As composições podem incluir espécies bacterianas completas, ou podem incluir extratos ou preparações de espécies bacterianas patogênicas da invenção, como extratos de parede celular ou membrana celular, ou células completas, ou exotoxinas, ou células completas e exotoxinas. As composições podem ainda incluir um ou mais antígenos isolados de uma ou mais das espécies bacterianas patogênicas da invenção; em algumas modalidades, tais composições podem ser úteis em situações onde este pode ser necessário para precisamente administrar uma dose específica de um antígeno particular, ou pode ser útil se administrar as espécies bacterianas completas ou componentes dos mesmos (por exemplo, toxinas) podem ser danosos. Espécies bacterianas patogênicas podem ser comercialmente disponíveis (de, por exemplo, ATCC (Manassas, VA, USA), ou podem ser isolados clínicos de sujeitos tendo uma infecção bacteriana de um tecido ou órgão (por exemplo, pneumonia).

[196] As composições microbianas da invenção podem ser fornecidas isoladas ou em combinação com outros compostos (por exemplo, moléculas de ácido nucleico, moléculas pequenas, peptídeos, ou análogos de peptídeos), na presença de um lipossoma, um adjuvante, ou qualquer carreador farmaceuticamente aceitável, em uma forma apropriada para administração a mamíferos, por exemplo, humanos. Conforme usado aqui “carreador farmaceuticamente aceitável” ou “excipiente” inclui qualquer um e todos os solventes, meio de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos e retardadores de absorção, e semelhantes que são fisiologicamente compatíveis. O carreador pode ser apropriado para qualquer forma apropriada de administração, incluindo administração subcutânea, intradérmica, intravenosa, parenteral, intraperitoneal, intramuscular, sublingual, inalação, intratumoral ou oral. Carreadores farmaceuticamente aceitáveis incluem soluções aquosas estéreis ou dispersões e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injetáveis estéreis. O uso de tal meio e agentes para substâncias farmaceuticamente ativas é bem conhecido na técnica. Exceto na medida em que qualquer meio convencional ou agente é incompatível com o composto ativo (ou seja, a bactéria específica, antígenos bacterianos, ou composições dos mesmos da invenção), uso do mesmo nas composições farmacêuticas da invenção é contemplado. Compostos ativos suplementares podem ainda ser incorporados nas composições.

[197] Se desejado, tratamento com antígenos bacterianos de acordo com a invenção pode ser combinado com mais terapias tradicionais e existentes para câncer, como quimioterapia, radioterapia, cirurgia, etc., ou com qualquer outra terapia para estimular o sistema imune, reduzir inflamação ou de outra forma beneficiar o sujeito, como nutrientes, vitaminas e suplementos. Por exemplo, vitamina A, vitamina D, vitamina E, vitamina C, complexo de vitamina B, selênio, zinco, coenzima Q10, beta caroteno, óleo de peixe, curcumina, chá verde, bromelaina, resveratrol, semente de linhaça moída, alho, licopeno, cardo de leite, melatonina, outros antioxidantes, cimetidina, indometacina, ou Inibidores de COX-2 (por exemplo, CelebrexTM [celecoxib] ou VioxxTM [rofecoxib]) podem ainda ser administrados ao sujeito.

[198] A prática farmacêutica convencional pode ser empregada para fornecer formulações apropriadas ou composições para administrar os compostos ao sujeito que sofre de um câncer. Qualquer via apropriada de administração pode ser empregada, por exemplo, administração parenteral, intravenosa, intradérmica, subcutânea, intramuscular, intracranial, intraorbital, oftálmica, intraventricular, intracapsular, intraespinhal, intratecal, intracisternal, intraperitoneal, intranasal, inalação, aerosol, tópica, intratumoral, sublingual ou oral. Formulações terapêuticas podem estar na forma de soluções líquidas ou suspensões; para administração oral, formulações podem estar na forma de comprimidos ou cápsulas; para formulações intranasal, na forma de pós, gotas nasais, ou aerossóis; e para formulações sublinguais, na forma de gotas, aerossóis ou comprimidos.

[199] Métodos bem conhecidos na técnica para preparar formulações são encontrados em, por exemplo, “Remington’s Pharmaceutical Sciences” (β0a edição), ed. A. Gennaro, 2000, Mack Publishing Company, Easton, PA. Formulações para administração parenteral podem, por exemplo, conter excipientes, água estéril, ou salina, polialquileno glicois como polietileno glicol, óleos de origem vegetal, ou naftalenos hidrogenados. Biocompatíveis, polímero lactida biodegradável, copolímero lactida/glicolida, ou copolímeros polioxietileno- polioxipropileno podem ser usados para controlar a liberação dos compostos. Outros sistemas de liberação parenterais potencialmente úteis incluem partículas de copolímero de etileno-vinil acetato, bombas osmóticas, sistemas de infusão implantáveis, e lipossomas. Formulações para inalação podem conter excipientes, por exemplo, lactose, ou podem ser soluções aquosas contendo, por exemplo, polioxietileno-9-lauril éter, glicocolato e deoxicolato, ou podem ser soluções oleosas para administração na forma de gotas nasais, ou como um gel. Para composições terapêuticas ou profiláticas, as espécies bacterianas patogênicas são administradas a um indivíduo em uma quantidade eficaz para interromper ou reduzir a progressão ou metástase do câncer, ou para aumentar sobrevivência do sujeito (em relação a, por exemplo, prognóstico derivado da base de dados SEER) dependendo do distúrbio.

[200] Uma “quantidade eficaz” das espécies microbianas patogênicas ou antígeno das mesmas de acordo com a invenção inclui uma quantidade terapeuticamente eficaz ou uma quantidade profilaticamente eficaz. Uma “quantidade terapeuticamente eficaz” se refere a uma quantidade eficaz, em dosagens e para períodos de tempo necessários, para obter o resultado terapêutico desejado, como redução ou eliminação das células de câncer ou tumores, prevenção de processos carcinogênicos, reduzir o crescimento do tumor, ou um aumento no tempo de sobrevivência além do qual é esperado usando, por exemplo, a base de dados SEER. A quantidade terapeuticamente eficaz de uma espécie microbiana patogênica (bacteriana ou viral) ou antígenos dos mesmos podem variar de acordo com fatores como o estado da doença, idade, sexo, e peso do indivíduo, e a capacidade de o composto em induzir uma resposta desejada no indivíduo. Regimes de dosagem podem ser ajustados para fornecer a resposta terapêutica ideal. A quantidade terapeuticamente eficaz pode ainda ser uma em que qualquer efeito tóxico ou detrimental das espécies bacterianas patogênicas ou vírus ou antígeno do mesmo são compensados por efeitos terapeuticamente benéficos. Uma “quantidade profilaticamente eficaz” se refere a uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários, para obter o resultado profilático desejado, como prevenção de câncer, prevenção de metástase, reduzir o crescimento do tumor, redução ou eliminação das células de câncer, tecidos, órgãos ou tumores, ou um aumento no tempo de sobrevivência além do qual é esperado usando, por exemplo, a base de dados SEER. Tipicamente, uma dose profilática é usada em sujeitos antes de ou em estágio anterior de câncer, de modo que uma quantidade profilaticamente eficaz pode ser menos do que a quantidade terapeuticamente eficaz.

[201] Para administração por injeção subcutânea ou intradérmica, uma faixa exemplar para quantidades terapeuticamente ou profilaticamente efetivas de uma ou mais espécies bacterianas patogênicas pode ser cerca de 1 milhão a 100,000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 100 milhões a 7000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 500 milhões a 6000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 1000 milhões a 5000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 2000 milhões a 4000 milhões de organismos por ml, ou qualquer inteiro dentro destas faixas. A concentração total de bactérias por ml pode variar de 1 milhão a 100,000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 50 milhões a 7000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 100 milhões a 6000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 500 milhões a 5000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 1000 milhões a 4000 milhões de organismos por ml, ou qualquer inteiro dentro destas faixas. A faixa de quantidades terapeuticamente ou profilaticamente efetivas de antígenos das espécies bacterianas patogênicas pode ser qualquer inteiro de 0,1 nM- 0,1 M, 0,1 nM-0,05M, 0,05 nM- 15μM ou 0,01 nM-10μM.

[202] Deve ser notado que concentrações de dosagem e faixas podem variar com a gravidade da condição a ser aliviada, ou pode variar com a resposta imune do sujeito. Em geral, o objetivo é atingir uma resposta imune adequada. Para administração por injeção subcutânea ou intradérmica, a extensão de uma resposta imune pode ser determinada, por exemplo, por tamanho de reação de pele imune local atrasada no local da injeção (por exemplo, de 0,25 polegadas a 4 polegadas diâmetro). A dose requerida para obter uma resposta imune apropriada pode variar dependendo do indivíduo (e seu sistema imune) e a resposta desejada. Dosagens padronizadas podem ainda ser usadas. No contexto de administração subcutânea ou intradérmica, se o objetivo é conseguir uma reação local de 2 polegadas na pele, a dose da composição bacteriana total pode, por exemplo, variar de 2 milhões de bactérias (por exemplo, 0,001 ml de uma vacina com uma concentração de 2.000 milhões de organismos por ml) a mais do que 20.000 milhões de bactérias (por exemplo, 1 ml de uma vacina com uma concentração de 20.000 milhões de organismos por ml). As concentrações de espécies bacterianas individuais ou antígenos dos mesmos dentro de uma composição podem ainda ser consideradas. Por exemplo, se a concentração de uma espécie bacteriana patogênica particular, tamanho de célula daquela espécie ou carga antigênica do mesmo é muito maior em relação às outras espécies bacterianas patogênicas na vacina, então a reação imune de pele local de um indivíduo pode ser possivelmente devido à sua resposta a esta espécie bacteriana específica. Em algumas modalidades, o sistema imune de um indivíduo pode responder mais fortemente a uma espécie de bactéria dentro de uma composição do que outra, dependendo, por exemplo, do histórico de exposição à infecção por uma espécie particular, de modo que a dosagem ou a composição pode ser ajustada de acordo com aquele indivíduo. No entanto, em algumas modalidades detalhadas aqui, uma resposta imune não será monitorada por meio de uma reação de pele. Por exemplo, em alguns modelos de camundongos utilizados aqui, o tratamento efetivo de tais animais com composições antigênicas pode não resultar em reações de pele correspondentes. Um especialista na técnica entenderá que são vias alternativas em que uma resposta imune pode ser monitorada além de confiar na presença ou ausência de uma reação de pele.

[203] Para qualquer sujeito particular, o tempo e dose de tratamentos podem ser ajustados ao longo do tempo (por exemplo, o tempo pode ser diário, em dias alternados, semanalmente, mensalmente) de acordo com necessidade individual e o julgamento profissional da pessoa a administrar ou supervisionar a administração das composições. Por exemplo, no contexto da administração subcutânea ou intradérmica, as composições podem ser administradas em cada segundo dia. Uma dose inicial de aproximadamente 0,05 ml pode ser administrada por via subcutânea, seguido por aumentos de 0,01-0,02 ml cada segundo dia até uma reação de pele adequada ser conseguida no local da injeção (por exemplo, 1 polegada a 2 polegadas diâmetro de reação atrasada de vermelhidão visível no local de injeção). Uma vez que esta reação imune adequada é conseguida, esta dosagem é continuada como uma dose de manutenção. A dose de manutenção pode ser ajustada de tempo em tempo para conseguir a reação de pele visível desejada (inflamação) no local de injeção. A dosagem pode ser para uma duração de dosagem, por exemplo, de pelo menos 1 semana, 2 semanas, 2 meses, 6 meses, 1, 2, 3, 4, ou 5 anos ou mais.

[204] Dosagens orais podem, por exemplo, variar de 10 milhões a 1.000.000 milhões de organismos por dose, compreendendo determinantes antigênicos de uma ou mais espécies. Dosagens orais podem ser administradas, por exemplo, de 4 vezes ao dia, diariamente ou semanalmente. A dosagem pode ser uma duração de dosagem, por exemplo, de pelo menos 1 semana, 2 semanas, 2 meses, 6 meses, 1, 2, 3, 4, ou 5 anos ou mais.

[205] Em algumas modalidades, a invenção pode incluir composições antigênicas administradas via sublingual ou por inalação, ou administrada a um ou mais tecidos epiteliais (ou seja, pele por injeção intradérmica ou subcutânea; epitélio pulmonar por inalação; mucosa gastrointestinal por ingestão oral; mucosa da boca por administração sublingual) simultaneamente ou sequencialmente. Assim, em algumas modalidades as composições antigênicas da invenção são administradas de modo que provoquem uma resposta imune em um tecido epitelial. Em algumas modalidades, uma ou mais vias epiteliais de administração podem ser combinadas com uma ou mais vias de administração, como administração intratumoral, intramuscular ou intravenosa.

[206] Em vários aspectos da invenção, as composições antigênicas que são administradas a um paciente podem ser caracterizadas como contendo uma assinatura antigênica, ou seja, uma combinação de antígenos de epítopos que são suficientemente específicos que a composição antigênica é capaz de induzir uma resposta imune que é específica a um patógeno particular, como uma resposta imune adaptativa. Um aspecto surpreendente e inesperado da invenção é que a ativação não adaptativa ou não específica da resposta imune que é mediada por estas composições antigênicas específicas é eficaz para tratar cânceres situados em tecidos em que o patógeno particular é patogênico.

[207] Vias de administração e faixas de dosagem estabelecidas aqui são somente exemplares e não limitam a via de administração e faixas de dosagem que podem ser selecionadas por especialistas médicas. A quantidade de composto ativo (por exemplo, espécies bacterianas patogênicas ou vírus ou antígenos dos mesmos) na composição pode variar de acordo com fatores como o estado da doença, idade, sexo, e peso do indivíduo. Regimes de dosagem podem ser ajustados para fornecer a resposta terapêutica ideal. Por exemplo, um bolus único pode ser administrado, várias doses divididas podem ser administradas ao longo do tempo ou a dose pode ser proporcionalmente reduzida ou aumentada como indicado pelas exigências da situação terapêutica. Pode ser vantajoso formular composições parenterais em forma de unidade de dosagem para facilitar administração e uniformidade de dosagem.

[208] No caso de formulações antigênicas (análogos a uma vacina), uma quantidade imunogenicamente eficaz de um composto da invenção pode ser fornecida, isolada ou em combinação com outros compostos, com um adjuvante imunológico. O composto pode ainda ser ligado com uma molécula carreadora, como albumina bovina sérica ou hemocianina de keyhole limpet para aumentar a imunogenicidade. Uma composição antigênica (“vacina”) é uma composição que inclui materiais que induzem uma resposta imune desejada. Uma composição antigênica pode selecionar, ativar ou expandir, entre outros: células B, T de memória, neutrófilos, monócitos ou macrófagos do sistema imune para, por exemplo, reduzir ou eliminar o crescimento ou proliferação de células cancerígenas ou tecido. Em algumas modalidades, o patogênico específico micróbio, vírus, antígenos virais, bactéria, antígenos bacterianos, ou composições dos mesmos da invenção são capazes de induzir a resposta imune desejada na ausência de qualquer outro agente, e podem, portanto, ser considerados como sendo uma composição antigênica. Em algumas modalidades, uma composição antigênica inclui um carreador apropriado, como um adjuvante, que é um agente que atua de modo não específico para aumentar a resposta imune a um antígeno específico, ou a um grupo de antígenos, permitindo a redução da quantidade de antígeno em qualquer dose de vacina administrada, ou a redução da frequência de dosagem requerida para gerar a resposta imune desejada. Uma composição antigênica bacteriana pode incluir bactéria viva ou morta capaz de induzir uma resposta imune contra determinantes antigênicos normalmente associados com a bactéria. Em algumas modalidades, uma composição antigênica pode incluir bactérias vivas que são de cepas menos virulentas (atenuadas), e, portanto, causam uma infecção menos grave. Em algumas modalidades a composição antigênica pode incluir vírus vivos, atenuados ou mortos capazes de induzir uma resposta imune contra determinantes antigênicos normalmente associados com o vírus.

[209] Uma composição antigênica compreendendo bactéria morta para administração por injeção pode ser preparada como a seguir. As bactérias podem ser crescidas em meio apropriado e lavadas com solução salina fisiológica. As bactérias podem então ser centrifugadas, ressuspendidas em solução salina, e mortas com calor. As suspensões podem ser padronizadas por contagem em microscopia direta, misturadas em quantidades requeridas, e armazenadas em recipientes apropriados, que podem ser testados para segurança, tempo de prateleira, e esterilidade em um modo aprovado. Além das espécies bacterianas patogênicas e/ou antígenos dos mesmos, uma vacina de bactérias mortas apropriada para administração a humanos pode incluir 0,4% fenol preservativo e/ou 0,9% cloreto de sódio. A vacina bacteriana pode ainda incluir quantidades traços de infusão cardíaca cerebral (carne), peptonas, extrato de levedura, ágar, sangue de ovelha, dextrose, fosfato de sódio e/ou outros componentes do meio.

[210] Em algumas modalidades, a vacina bacteriana pode ser usada na forma de comprimido ou cápsula ou gotas para ingestão oral, como um aerossol para inalação, ou como gotas, aerossol ou forma de comprimento para administração sublingual.

[211] Nas composições antigênicas compreendendo bactéria, as concentrações de espécies bacterianas específicas nas composições para injeção subcutânea ou intradérmica podem ser de cerca de 1 milhão a 100,000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 100 milhões a 7000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 500 milhões a 6000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 1000 milhões a 5000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 2000 milhões a 4000 milhões de organismos por ml, ou qualquer inteiro dentro destas faixas. A concentração total de bactérias por ml pode variar de 1 milhão a 100,000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 50 milhões a 7000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 100 milhões a 6000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 500 milhões a 5000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 1000 milhões a 4000 milhões de organismos por ml, ou qualquer inteiro dentro destas faixas.

[212] Em algumas modalidades, uma vacina bacteriana morta selecionada para câncer do tecido pulmonar poderia incluir os patógenos pulmonares bacterianos comuns, e podem, por exemplo, ser: Bactérias por ml Streptococcus pneumoniae 600 milhõesHaemophilus influenzae 400 milhõesMoraxella catarrhalis 400 milhões Mycoplasma pneumoniae 300 milhõesKlebsiella pneumoniae 300 milhõestotal: 2.000 milhões ou alternativamente: Bactérias por ml Streptococcus pneumoniae 600 milhõesHaemophilus influenzae 300 milhõesMoraxella catarrhalis 300 milhõesMycoplasma pneumoniae 400 milhõesKlebsiella pneumoniae 400 milhõestotal: 2.000 milhões

[213] Em algumas modalidades selecionadas, uma vacina bacteriana morta selecionada para câncer do tecido pulmonar poderia incluir somente os patógenos pulmonares bacterianos comuns, e podem, por exemplo, ser: Bactérias por ml Streptococcus pneumoniae 800 milhõesHaemophilus influenzae 600 milhõesMoraxella catarrhalis 600 milhõestotal: 2.000 milhõesou alternativamente:Bactérias por mlStreptococcus pneumoniae 800 milhõesMycoplasma pneumoniae 600 milhõesKlebsiella pneumoniae 600 milhõestotal: 2.000 milhões

[214] Em algumas modalidades selecionadas, uma vacina bacteriana morta selecionada para câncer do tecido pulmonar poderia incluir somente os patógenos pulmonares bacterianos comuns, e podem ser: Bactérias por mlStreptococcus pneumoniae 2.000 milhões total: 2.000 milhõesouBactérias por mlKlebsiella pneumoniae 2.000 milhõestotal: 2.000 milhõesouBactérias por mlMycoplasma pneumoniae 2.000 milhõestotal: 2.000 milhões

[215] Em algumas modalidades, uma composição microbiana antigênica para tratar câncer em um sítio particular (por exemplo, câncer do tecido pulmonar) pode incluir micróbios patogênicos que comumente, mais comumente, ou mais comumente causam infecção naquele tecido ou órgão (por exemplo, infecção no tecido pulmonar, ou seja, pneumonia).

[216] Em geral, as espécies bacterianas patogênicas e antígenos dos mesmos da invenção devem ser usados sem causar toxicidade substancial. A toxicidade dos compostos da invenção pode ser determinada usando técnicas padrões, por exemplo, testando em culturas de células ou animais experimentais e determinando o índice terapêutico, ou seja, a razão entre LD50 (a dose letal para 50% da população) e a LD100 (a dose letal para 100% da população).

[217] Em alguns aspectos, a invenção envolve o uso de um anti-inflamatório em conjunto com vacinações. Nestas modalidades, uma ampla variedade de tratamentos anti- inflamatórios pode ser empregada, incluindo quantidades efetivas de drogas anti-inflamatórias não estereoidais (NSAIDs), incluindo entre outros: diclofenaco de potássio, diclofenaco de sódio, etodolac, indometicina, cetorolac trometamina, sulindac, tometin de sódio, celecoxib, meloxicam, valdecoxib, floctafenine, ácido mefenâmico, nabumetone, meloxicam, piroxicam, tenoxicam, fenoprofen de cálcio, flubiprofeno, ibuprofeno, cetoprofeno, naproxeno, naproxen de sódio, oxaprozin, ácido tiaprofenico, ácido acetilsalicílico, diflunisal, trisalicilato de colina e magnésio, salicilato de colina, trietanolamina salicilato, inibidores de COX1, inibidores de COX2 (por exemplo, VioxxTM, e CelebrexTM). Uma variedade de ervas e produtos naturais de saúde pode ainda ser usada para fornecer tratamento anti-inflamatório, incluindo entre outros: chá verde, óleo de peixe, vitamina D, vitaminas e minerais antioxidantes (por exemplo, B caroteno, vitamina A, vitamina C, vitamina D, vitamina E, coenzima Q10, selênio, etc.), resveratrol, turmeric, bromelaina, boswellia, matricária, quercetina, gengibre, alecrim, orégano, pimenta de caiena, cravo da índia, noz-moscada, casca de salgueiro. Modalidades alternativas anti-inflamatórias podem ainda incluir modificações de estilo de vida como: exercícios, perda de peso, interrupção de tabagismo, redução do estresse, busca de suporte social, tratamento de depressão, gerenciamento do estresse, trabalho de respiração abdominal e alteração dietética (como adoção de uma dieta do mediterrâneo, uma dieta com baixo teor glicêmico, ingestão de alimentos não carbonizados, incluindo alimentos contendo ácidos graxos ômega-3).

[218] Como detalhado aqui e em um aspecto dainvenção, um método para comparar resposta imune é fornecido. O método envolve administrar a um animal contendo um órgão ou tecido um medicamento contendo uma composição antigênica, como definido aqui. A composição antigênica pode ter determinantes antigênicos selecionados ou formulados de modo que juntos os determinantes antigênicos são específicos para pelo menos um patógeno antigênico que é patogênico no órgão ou tecido, extrair uma amostra imune quantificável do órgão ou tecido, medir uma característica da resposta imune no órgão ou tecido na amostra imune quantificável após administração do medicamento, e, comparar a característica da resposta imune na amostra imune quantificável à uma característica correspondente da resposta imune em uma amostra imune de referência obtida de um órgão ou tecido correspondente. Conforme usado aqui, uma amostra imune poderia conter material biológico suficiente para determinar uma característica de uma resposta imune. Conforme usado aqui, uma “característica” de uma resposta imune pode incluir, entre outros, o número particular de um tipo de célula imune particular (por exemplo, macrófago), ou um marcador celular particular (por exemplo, regulação para cima de uma integrina) ou produto de gene (por exemplo, uma citocina). O anterior é fornecido como um exemplo e não limitante.

[219] Opcionalmente, a amostra imune de referência pode ser obtida a partir do órgão ou tecido correspondente no animal antes da etapa de administrar o medicamento. Em outro aspecto, a amostra imune de referência pode ser obtida a partir do órgão ou tecido correspondente em um segundo animal de modo que este é especificamente contemplado que pelo menos dois animais (ou seja, um animal do qual uma amostra imune de referência é obtida e um segundo animal do qual uma amostra imune quantificável) poderia ser usada nos métodos descritos aqui. Opcionalmente, o animal pode ter um câncer situado no órgão ou tecido.

[220] Comparar a característica da resposta imune pode envolver comparar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, uma indicação dos números de qualquer uma ou mais das seguintes células conforme as células são conhecidas aos especialistas na técnica: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Opcionalmente, os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2.

[221] Especialistas na técnica apreciarão que macrófagos podem ser definidos como “macrófagos tipo M1” ou “macrófagos tipo Mβ”. Por exemplo, macrófagos tipo M1 são geralmente entendidos por especialistas na técnica para promover uma resposta mediada por célula T Th1 CD4+ (ver, por exemplo, Biswas and Mantovani (2010), Nature Immunology 10:889-96). Além disso, macrófagos tipo M1 são geralmente entendidos por ter uma capacidade de apresentação eficiente, e para ser proficiente em matar patógenos intracelulares (por exemplo, vírus). Além disso, macrófagos tipo M1 são geralmente entendidos como proficientes, pelo menos em comparação com macrófagos tipo M2, em desempenhar um papel imunológico na destruição do tumor. Especialistas na técnica apreciarão que há vários marcadores biológicos que podem ser empregados em se diferenciar entre macrófagos tipo M1 e macrófagos tipo M2. Por exemplo, e como detalhado aqui, a expressão de Nos2 é geralmente entendido por se correlacionarem com um macrófago tipo M1 comparado com um macrófago tipo M2 (ver, por exemplo, Lapele et al. (2010) Annual Rev. Pharmacol. Toxicol. 51: 267-288). Ainda e, por exemplo, macrófagos tipo M1 são geralmente entendidos por produzirem IL-12 e serem efetivamente ativados por IFN-y a IFN- YR (Biswas and Mantovain, supra).

[222] Em contraste aos macrófagos tipo M1, especialistas na técnica irão geralmente entender que macrófagos tipo M2 promovem uma resposta mediada por célula T Th2 CD4+ (ver, geralmente: Biswas and Mantovani (2010), Nature Immunology 10:889-96). Além disso, macrófagos tipo M2 são geralmente entendidos como efetivos e encapsulando e esclarecendo para sítios extracelulares etc. Ainda, e em comparação aos macrófagos tipo M1, macrófagos tipo M2 são geralmente entendidos por especialistas na técnica como desempenhando um papel mais significativo em imunorregulação ambos com células Treg e B (Biswas and Mantovain, supra). Especialistas na técnica apreciarão que há vários marcadores biológicos que podem ser empregados para diferenciar entre macrófagos tipo M2 e macrófagos tipo M1. Por exemplo, e como descrito aqui, uma expressão reduzida de Nos2 irá geralmente ser entendido que se correlacionam com macrófagos tipo M2 comparado com expressão superior sendo com expressão maior sendo geralmente encontrado em macrófagos tipo M1. Ainda, e como detalhado nos experimentos aqui, a expressão de CD206 é geralmente entendida como correlacionada com macrófagos tipo M2 (ver, por exemplo, Choi et al. (2010) Gastroenterology 138(7) 2399-409). Ainda, e como detalhado nos experimentos aqui, a expressão de F4/80 é geralmente entendida por se correlacionar com macrófagos tipo M2. Ainda, e, por exemplo, macrófagos tipo M2 são geralmente entendidos por efetivamente ativados por IL-4 ou por IL-13 a IL-4Rα (Biswas and Mantovain, supra).

[223] Ainda, comparar a característica da resposta imune pode envolver comparar uma mudança em um estado de ativação de macrófagos. A mudança no estado de ativação de macrófagos pode opcionalmente ser caracterizada como uma mudança de macrófagos tipo M2 a macrófagos tipo M1 ou vice versa. Especialistas na técnica apreciarão que há vários marcadores biológicos que podem ser empregados para monitorar a ativação de macrófagos. Como detalhado aqui, especialistas na técnica apreciarão que definir um macrófago como sendo ativado na direção de um fenótipo tipo M1 ou um fenótipo M2 pode ser conseguido por escolha de marcadores que são conhecidos por associar com um dos fenótipos respectivos descritos aqui. Doenças que foram associadas com macrófagos M1 e M2 incluem pelo menos o seguinte: aterosclerose (ver, por exemplo, Hirata et al. (2011) J. Am. Coll. Cardiol. 58(3): 248-255), asma alérgica (ver, por exemplo, Moreira and Hogaboam (2011) J. Interferon. Cytokine Res. 31(6): 485-91), prostatite autoimune (ver, por exemplo, Zhang and Schluesener (2011) Prostate), colite (ver, por exemplo, Waddell et al. (2011) J. Immunol. 186(10): 5993-6003), COPD (ver, por exemplo, Kunz et al. (2011) Respir. Res. 22: 34), glomerulonefrite (ver, por exemplo, Fujita et al. (2010) Am. J. Pathol. 177(3): 1143-54), doença intestinal inflamatória (ver, por exemplo, Wendelsdorf et al. (2010) J. Theor. Biol. 264(4): 1225-39), inflamação pulmonar crônica (ver, por exemplo, Redente et al. (2010) J. Leukoc. BIol. 88(1): 159-68), esteatohepatite (ver, por exemplo, Rensen et al. (2009) Am. J. Pathol. 175(4): 1473-82), pancreatite (ver, por exemplo, Gea-Sorli and Closa (2009) BMC Immunol. 31: 42), micocardite (ver, por exemplo, Li et al. (2009) Circ. Res. 105(4): 353-64), fibrose de fígado (ver, por exemplo, Heymann et al. (2009) Inflamm. Allergy Drug Targets 8(4): 307-18), fibrose cística (ver, por exemplo, Meyer et al. (2009) Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 41(5): 590-602), doença renal inflamatória (ver, por exemplo, Wang et al. (2007) Kidney Int. 72(3): 290-299), e silicose (ver, por exemplo, Misson et al. (2004) J. Leukoc. Biol. 76(5): 926232).

[224] Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, marcadores celulares em qualquer uma ou mais das seguintes células conforme são comumente entendidos aos especialistas na técnica: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2. Especialistas na técnica apreciarão que há vários marcadores celulares (ambos extracelular e intracelular) que podem ser selecionados que podem identificar uma resposta imune. Por exemplo, como descrito aqui, o marcador CD206 é geralmente entendido como correlacionando-se com macrófagos tipo M2 (ver, por exemplo, Choi et al. (2010) Gastroenterology 138(7) 2399-409).

[225] Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, citocinas produzidas por qualquer uma ou mais das seguintes células conforme são comumente entendidos aos especialistas na técnica: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Especialistas na técnica apreciarão que citocinas referem-se a moléculas de proteína de sinalização de célula pequena e que há várias citocinas conhecidas na técnica. Por exemplo, citocinas foram agrupadas em classificações tipo 1 e tipo 2 baseado em seus papeis nas respostas imunológicas. Citocinas comuns tipo 1 incluem IFN-y e TGF-β. Citocinas comuns tipo 2 incluem, entre outros, IL-4 e IL-13. Citocinas podem ser detectadas por várias metodologias conhecidas aos especialistas na técnica. Por exemplo, e como detalhado aqui, experimentos ELISA foram utilizados para determinar a produção de citocina a partir de tecido pulmonar (ver, por exemplo, Figura 27).

[226] Como detalhado aqui, os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2 como foi definido aqui. Opcionalmente, as citocinas são produzidas como um resultado de uma mudança em um estado de ativação dos macrófagos. Opcionalmente, os macrófagos mudam de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Ainda e opcionalmente, os macrófagos mudam de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[227] Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, expressão de gene diferencial produzida por qualquer uma ou mais das seguintes células conforme são comumente entendidos aos especialistas na técnica: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo Mβ. O termo “expressão de gene diferencial” é entendido que significa uma diferença apreciável entre a expressão de um gene particular de interesse de pelo menos duas condições experimentais. Por exemplo, se sob uma primeira condição experimental um gene particular tem um nível de expressão definido como definido pelos métodos de expressão de gene usados por especialistas na técnica e se sob uma segunda condição experimental o mesmo gene tem uma diferença apreciável em seu nível de expressão, então há uma expressão diferencial do gene de interesse. Especialistas na técnica entenderão que há várias metodologias com as quais detectar a expressão de gene diferencial. Por exemplo, técnicas de PCR quantitativa comercialmente disponíveis podem ser usadas como detalhado aqui com relação à determinação de razões relativas de Nos2/Arg1 (ver, por exemplo, Figura 29). Opcionalmente, a expressão de gene diferencial é produzida como um resultado de uma mudança em um estado de ativação dos macrófagos. Opcionalmente, macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1 como os termos definidos aqui.

[228] Em outra modalidade o medicamento pode ser administrado em um local de administração em doses sucessivas administradas em um intervalo de dosagem de entre uma hora e um mês, por uma duração de dosagem de pelo menos uma semana. Opcionalmente, o medicamento pode ser administrado via intradérmica ou subcutânea. Opcionalmente, o medicamento pode ser administrado em uma dose de modo que cada dose é eficaz para causar uma resposta imune inflamatória localizada visível no local da administração. Opcionalmente, o medicamento pode ser administrado de modo que a inflamação localizada visível no local da administração ocorre dentro de 1 a 48 horas. No entanto, uma resposta imune inflamatória localizada visível pode nem sempre estar presente em todas as circunstâncias apesar de uma resposta imune ser iniciada. Especialistas na técnica apreciarão que há outros métodos pelos quais a montagem de uma resposta imune pode ser monitorada. Por exemplo, o perfil (e mudança realtiva em caracterização) de células imune de um sujeito passando por uma reação imune pode ser comparado com aquele de um sujeito que não está passando por uma reação imune.

[229] Ainda e opcionalmente com relação aos métodos revelados aqui, o animal pode ser um mamífero. Opcionalmente, o animal pode ser um humano ou um camundongo. O anterior é fornecido como exemplo e não pretende ser limitante.

[230] Em outro aspecto, um método para selecionaruma preparação terapêutica apropriada para tratar um indivíduo para um câncer em um órgão ou tecido específico é fornecido. O método envolve fornecer um animal contendo um câncer situado em um órgão ou tecido específico, fornecer uma preparação teste contendo um ou mais determinantes antigênicos de um patógeno microbiano que é patogênico no correspondente órgão ou tecido específico em um indivíduo saudável, medir uma característica da resposta imune em uma amostra imune de referência obtida do órgão ou tecido do animal, administrar a preparação teste ao animal, medir uma característica da resposta imune em uma amostra imune quantificável obtida de um órgão ou tecido correspondente do animal, comparar a característica da resposta imune nas amostras imunes quantificáveis e de referência, e tratar uma característica melhorada da resposta imune na amostra imune quantificável comparada com a amostra imune de referência como uma indicação da adequabilidade da preparação teste como uma preparação terapêutica. Opcionalmente, o animal é sacrificado antes de a amostra imune quantificável ser obtida.

[231] Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver comparar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, uma indicação dos números de qualquer uma ou mais das seguintes células conforme são comumente entendidos aos especialistas na técnica: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Opcionalmente, os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2 como os termos foram identificados aqui. Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver comparar uma mudança em um estado de ativação de macrófagos. Opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Ainda e opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[232] Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, marcadores celulares em qualquer uma ou mais das seguintes células conforme são comumente entendidos aos especialistas na técnica: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Opcionalmente, os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2 como os termos foram identificados aqui.

[233] Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, citocinas produzidas por qualquer uma ou mais das seguintes células: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2 como os termos foram identificados aqui. Opcionalmente, as citocinas são produzidas como um resultado de uma mudança em um estado ativo dos macrófagos. Opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1.

[234] Ainda e opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, expressão de gene diferencial produzida por qualquer uma ou mais das seguintes células: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Opcionalmente, os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2 como os termos foram identificados aqui. Opcionalmente, a expressão de gene diferencial pode ser produzida como um resultado de uma mudança em um estado de ativação dos macrófagos. Opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Ainda e opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[235] Em outro aspecto, um método de seletivamente direcionar uma resposta imune a um tecido cancerígeno ou um órgão em um sujeito humano é fornecido. O método envolve administrar ao sujeito um medicamento contendo uma quantidade eficaz de uma composição antigênica de patógeno microbiano, em que o patógeno microbiano pode ser patogênico no tecido ou órgão cancerígeno específico do sujeito e uma composição antigênica compreende determinantes antigênicos que juntos são específicos para o patógeno microbiano. Opcionalmente, a composição antigênica pode incluir uma composição de célula bacteriana morta completa. Opcionalmente, o medicamento pode ser administrado ao sujeito em uma quantidade e por um tempo que é efetivo para regular para cima uma resposta imune no órgão ou tecido cancerígeno do sujeito. Opcionalmente, o método pode ainda envolve medir uma característica da resposta imune.

[236] Em outro aspecto, um método para tratar um sujeito humano para um câncer situado em um tecido ou um órgão é fornecido. O método envolve administrar ao sujeito um medicamento contendo uma quantidade eficaz de uma composição antigênica de patógeno microbiano compreendendo uma composição de célula bacteriana morta completa, em que o patógeno microbiano é patogênico no órgão ou tecido específico do sujeito dentro do qual o câncer está situado. O medicamento pode ser administrado ao sujeito em uma quantidade e por um tempo que é efetivo para modular uma resposta imune. Opcionalmente, a modulação da resposta imune pode envolver uma mudança no estado de ativação de macrófagos. Opcionalmente, a modulação da resposta imune pode envolver mudança de uma resposta de macrófago tipo M2 para uma resposta de macrófago tipo M1. A modulação daresposta imune pode envolver mudança de uma resposta demacrófago tipo M1 a uma resposta de macrófago tipo M2.Opcionalmente, o método pode ainda envolve medir umacaracterística da resposta imune.

[237] Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver comparar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, uma indicação dos números de qualquer uma ou mais das seguintes células conforme são comumente entendidos aos especialistas na técnica: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Opcionalmente, os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2 como os termos foram identificados aqui. Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver comparar uma mudança em um estado de ativação de macrófagos. Ainda e opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[238] Ainda e opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, marcadores celulares em qualquer uma ou mais das seguintes células conforme são comumente entendidos aos especialistas na técnica: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2 como os termos foram identificados aqui. Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, citocinas produzidas por qualquer uma ou mais das seguintes células conforme são comumente entendidos aos especialistas na técnica: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Opcionalmente, os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2. Ainda, citocinas podem ser produzidas como um resultado de uma mudança em um estado de ativação dos macrófagos. Os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[239] Ainda e opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes quantificáveis e de referência, expressão de gene diferencial produzida por qualquer uma ou mais das seguintes células conforme são comumente entendidos aos especialistas na técnica: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2. Opcionalmente, a expressão de gene diferencial pode ser produzida como um resultado de uma mudança em um estado de ativação dos macrófagos. Ainda e opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[240] Em outro aspecto, um método para monitorar eficácia de um regime de tratamento em um indivíduo sendo tratado para um câncer em um órgão ou tecido específico é fornecido. O método envolve medir uma característica de uma resposta imune em uma amostra imune pós-tratamento obtida do órgão ou tecido específico após o indivíduo ser submetido ao regime de tratamento por um período de tempo, em que a presença de uma característica da resposta imune que é maior em magnitude do que poderia ser esperado que o indivíduo não fosse submetido ao regime de tratamento, é indicativo da eficácia do regime de tratamento; e o regime de tratamento envolve administrar uma preparação compreendendo um ou mais determinantes antigênicos de um patógeno microbiano que é patogênico no correspondente órgão ou tecido específico em um sujeito saudável.

[241] O método detalhado aqui pode ainda envolver medir a característica da resposta imune em uma amostra de referência pré-tratamento, em que a amostra de referência pré-tratamento foi obtida do órgão ou tecido específico antes, ao mesmo tempo, ou após início do regime de tratamento, mas antes de obter a amostra imune pós- tratamento, e comparar a característica da resposta imune nas amostras pré-tratamento e pós-tratamento, em que um aumento na magnitude da resposta imune na amostra imune pós-tratamento em comparação a amostra de referência pré- tratamento é indicativo da eficácia do regime de tratamento. Opcionalmente, medir a característica da resposta imune pode envolver determinar uma indicação do número de monócitos inflamatórios em uma amostra do órgão ou tecido. Opcionalmente, medir a característica da resposta imune pode envolver determinar uma indicação do número de macrófagos em uma amostra do órgão ou tecido. Os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2.

[242] Opcionalmente, medir a característica da resposta imune pode envolver determinar uma indicação do número de células CD11b+ Gr-1+ em uma amostra do órgão ou tecido ou determinar uma indicação do número de células dendríticas em uma amostra do órgão ou tecido. Ainda e opcionalmente, medir a característica da resposta imune pode envolver determinar uma indicação do número de células CD11c+ MHC classe II+ em uma amostra do órgão ou tecido ou determinar uma indicação do número de células T CD4+ em uma amostra do órgão ou tecido ou determinar uma indicação do número de células T CD8+ em uma amostra do órgão ou tecido.

[243] Opcionalmente, medir a magnitude da resposta imune pode envolver determinar uma indicação do número de células NK em uma amostra do órgão ou tecido. Ainda e opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes e de referência, marcadores celulares em qualquer uma ou mais das seguintes células conforme são comumente entendidos aos especialistas na técnica: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Opcionalmente, os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2.

[244] Ainda e opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes e de referência, citocinas produzidas por qualquer uma ou mais das seguintes células conforme são comumente entendidos aos especialistas na técnica: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2. Opcionalmente, as citocinas podem ser produzidas como um resultado de uma mudança em um estado de ativação dos macrófagos. Os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Ainda e opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[245] Opcionalmente, comparar a característica da resposta imune pode envolver identificar, nas amostras imunes e de referência, expressão de gene diferencial produzida por qualquer uma ou mais das seguintes células conforme são comumente entendidos aos especialistas na técnica: monócitos inflamatórios, macrófagos, células CD11b+ Gr-1+, células dendríticas, células CD11c+ MHC classe II+, células T CD4+, células T CD8+, ou células NK. Os macrófagos podem incluir qualquer um ou mais dos seguintes: macrófagos tipo M1 ou macrófagos tipo M2. A expressão de gene diferencial pode ser produzida como um resultado de uma mudança em um estado de ativação dos macrófagos. Os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M2 para serem macrófagos tipo M1. Opcionalmente, os macrófagos podem mudar de serem macrófagos tipo M1 para serem macrófagos tipo M2.

[246] Em vários aspectos, modalidades da invenção referem-se a um método para tratar um câncer situado em um pulmão em um sujeito. O método envolve administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um antígeno de uma ou mais espécies microbianas que é patogênico no pulmão e administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um agente quimioterápico contendo platina. A espécie microbiana pode ser um patógeno viral ou um patógeno bacteriano ou um patógeno fúngico.

[247] Conforme usado aqui, a frase “tratar um câncer” pode incluir, entre outros, reduzir a carga de tumor pulmonar em um sujeito ou aumentar a expectativa de vida em um sujeito que tem câncer pulmonar. Deve ser entendido que há várias leituras biológicas que podem ser usadas por um especialista na técnica para determinar se um câncer está sendo tratado ou não.

[248] O patógeno viral utilizado aqui pode ser, entre outros: influenza, adenovírus, vírus sincicial respiratório, parainfluenza, monkeypox, vírus Herpes Simplex (1 e 2), Varicella zoster, Citomegalovírus, Vírus Epstein-Barr, coronavírus, metapneumovírus humano, Vírus Hendra, Vírus Nipah, Hanatvirus, Vírus Lassa, vírus linfotrófico de célula T humana, cocksackievírus, echovírus, enterovírus, ou rinovírus, ou qualquer vírus que é patogênico no pulmão.

[249] O patógeno bacteriano utilizado aqui pode ser, entre outros: Streptococcus pneumoniae, Moraxella catarrhalis, Mycoplasma pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Haemophilus influenza, Staphylococcus aureus, Chlamydia pneumoniae, Legionella pneumophila, ou Bordatella pertussis ou qualquer bactéria que é patogênica no pulmão.

[250] O patógeno fúngico utilizado aqui pode ser, entre outros: Aspergillus fumigatus, Blastomyces sp., Coccidiodes immitis, Coccidiodes posadasii, Cryptococcus neoformans, Cryptococcus gattii, Fusarium sp., Histoplasma capsulatum, Paecilomyces sp., Paracoccidiodes brasiliensis, Penicillium marneffei, Pneumocystis jiroveci, Pseudallescheria boydii, Scedosporium apiospermum, Rhizopus sp., Mucor sp., Absidia sp., Cunninghamella sp., Scedosporium prolificans, Stachybotrys chartarum, Trichoderma longibrachiatium, Trichosporon sp., ou qualquer fungo que é patogênico no pulmão.

[251] Conforme usado aqui, o termo “agente quimioterápico contendo platina” inclui, entre outros: Cisplatina, carboaplatina ou ormaplatina, oxaliplatina, DWA2114R ((-)-(R)-2aminometilpirrolidina (1,1-ciclobutano dicarboxilato) platina), zeniplatina, enloplatina, lobaplatina, CI-973 (SP-43(R)-l,l-ciclobutano-dicarboxilato(2-)-(2-metil-l,4-65 butanodiamina-N,N')platina), 254-S nedaplatina, JM-216 (bis-acetato- amina-dicloro-ciclohexilaminaplatina(IV)), (ver: Weiss,R.B. and Christian, M.C., “New Cisplatine Analogue in Development,” Drugs. 46:(03) 360-377 (1993));CPA)2Pt[DOLYM] e (DACH)Pt[DOLYM] cisplatina (Choi et al., Arch. Pharmacal Res. 22(2):151-156, 1999); análogo 254-S cisplatina (Koga et al., Neurol. Res. 18(3):244-247,1996); análogos de cis-l,4-diaminociclohexano cisplatina (Shamsuddin et al., J. Inorg. Biochem. 61(4): 291-301, 1996); MeOH cisplatina (Shamsuddin et al., Inorg. Chem. 36(25):59695971, 1997); análogo CI-973 cisplatina (Yangetal. Int. J. Oncol. 5(3):597-602, 1994); cis-diaminadicloroplatina (II) e seus análogos cis-l,l- ciclobutanodicarbosilato(2R)2-metil-l,4- butanodiaminaplatina(II) e cis-diamina (glicolato)platina (Claycamp & Zimbrick, J. Inorg. Biochem. 26(4):257-67, 1986; Fan et al. Cancer Res. 48(11): 3135-9, 1988; Heiger- Bernays et al. Biochemistry 29(36): 8461-6, 1990; Kikkawa et al., J. Exp. Clin. Cancer Res. 12(4):233-40, 1993; Murray et al. Biochemistry 31(47):11812-17,1992; Takahashi et al., Cancer Chemother. Pharmacol. 33(l):31-5, 1993), análogos de gem-difosfonate cisplatina (FR 2683529), análogos de cisplatina contendo um grupo dansil teterado (Hartwig et al., J. Am. Chem. Soc. 114(21):8292-3, 1992), análogos de cisplatina derivados de aminoalquilaminoantraquinona (Kitov et al., Eur. J. Med. Chem. 23(4):381-3, 1988), análogos de espiroplatina, carboplatina, iproplatina e JM40 platina (Schroyen et al., Eur. J. Cancer Clin. Oncol. 24(8): 1309-12, 1988), e análogos de JM8 e JM9 cisplatina (Harstrick et al., Int. J. Androl. 10(1); 139-45, 1987).

[252] Em outro aspecto, uso de uma quantidade eficaz de um antígeno de uma ou mais espécies microbianas que é patogênico no pulmão é fornecido para formular um medicamento para uso com um agente quimioterápico contendo platina para tratar câncer pulmonar em um sujeito. Em outro aspecto, uso de uma quantidade eficaz de um antígeno de uma ou mais espécies microbianas que é patogênico no pulmão é fornecido para uso com um agente quimioterápico contendo platina, como detalhado aqui, para tratar câncer pulmonar em um sujeito. A espécie microbiana pode ser um patógeno viral ou um patógeno bacteriano ou um patógeno fúngico, como detalhado aqui.

[253] Em outro aspecto, uma quantidade eficaz de um antígeno de uma ou mais espécies microbianas que é patogênico no pulmão é fornecido para formular um medicamento para uso com um agente quimioterápico contendo platina para tratar câncer pulmonar em um sujeito. Em outro aspecto, uma quantidade eficaz de um antígeno de uma ou mais espécies microbianas que é patogênica no pulmão é fornecida para uso com um agente quimioterápico contendo platina, como detalhado aqui, para tratar câncer pulmonar em um sujeito. A espécie microbiana pode ser um patógeno viral ou um patógeno bacteriano ou um patógeno fúngico, como detalhado aqui. O agente quimioterápico contendo platina pode ser, entre outros: Cisplatina, carboplatina ou oxaliplatina.

[254] Em outro aspecto, um kit é fornecido. O kit inclui um antígeno de uma ou mais espécies microbianas que é patogênico no pulmão, um agente quimioterápico contendo platina; e instruções para fornecer o antígeno e o agente quimioterápico contendo platina a um sujeito em necessidade do mesmo. A espécie microbiana pode ser um patógeno viral ou um patógeno bacteriano ou um patógeno fúngico, como detalhado aqui.

[255] Em vários aspectos, modalidades da invenção se referem às composições compreendendo componentes de organismos que podem causar infecções do trato gastrointestinal, de modo que o organismo pode ser caracterizado como um patógeno. No entanto, um organismo que está em alguns casos patogênicos pode nem sempre causar doença. A maioria dos animais é colonizada em algum grau por outros organismos, como bactéria, que geralmente existem em relações simbióticas ou comensais com o animal hospedeiro. Assim, muitas espécies de bactérias normalmente inofensivas são encontradas em animais saudáveis, e são geralmente localizados à superfície de órgãos e tecidos específicos. Geralmente, estas bactérias auxiliam no funcionamento normal do corpo. Por exemplo, em humanos, bactérias Escherichia coli simbióticas podem ser encontradas no intestino, onde promovem imunidade e reduzem o risco de infecção com patógenos mais virulentos.

[256] Bactérias que são geralmente inofensivas, como Escherichia coli, podem causar infecção em sujeitos saudáveis, com resultados variando de infecção leve a grave até morte. Se um organismo, como uma bactéria é ou não patogênico (ou seja, causa infecção) depende de alguma extensão de fatores como a via de entrada e acesso a células hospedeiras específicas, tecidos, ou órgãos; a virulência intrínseca da bactéria; a quantidade de bactéria presente no local de infecção potencial; ou a saúde do animal hospedeiro. Assim, organismos que são normalmente inofensivos podem se tornar patogênicos dadas as condições favoráveis para infecção, e mesmo organismos mais virulentos requerem circunstâncias específicas para causar infecção. Assim, organismos que são membros da flora normal podem ser patógenos quando se movem além do papel ecológico normal na flora endógena. Por exemplo, espécies endógenas podem causar infecção fora de seu nicho ecológico em regiões de proximidade anatômica, por exemplo, por espalhamento contíguo. Quando isto ocorre e, no contexto, da presente invenção, estes organismos endógenos normalmente inofensivos são considerados patogênicos.

[257] Organismos específicos, como espécies bacterianas, vírus, vermes, e protozoários são conhecidos por causarem infecções em regiões específicas do GIT em sujeitos de alguma forma saudáveis. Exemplos de organismos que comumente causam infecções em regiões específicas do GIT são listados abaixo; será entendido que estes exemplos não pretendem ser limitantes e que uma pessoa especialista poderia ser capaz de prontamente reconhecer e identificar infecções ou organismos patogênicos que causam infecções ou comumente causam infecções, em várias regiões do GIT em adultos saudáveis, com base, por exemplo, no conhecimento sobre populações de paciente particulares, como representado por exemplo, pelas publicações seguintes: Manual of Clinical Microbiology 8th Edition, Patrick Murray, Ed., 2003, ASM Press American Society for Microbiology, Washington DC, USA; Mandell, Douglas, and Bennett ‘s Principles and Practice of Infectious Diseases 5th Edition, G. L. Mandell, J.E. Bennett, R. Dolin, Eds., 2000, Churchill Livingstone, Philadelphia, PA, USA, todas das quais são incorporadas por referência aqui.

[258] Infecções da boca são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Prevotella melaninogenicus, streptococci anaeróbicas, viridans streptococci, Actinomyces spp., Peptostreptococcus spp., ou Bacteroides spp., ou outros anaeróbios orais; ou patógenos virais: herpes simplex, coxsackievírus, ou Epstein-Barr.

[259] Infecções do esôfago são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Actinomyces spp., Mycobacterium avium, Mycobacterium tuberculosis, ou Streptococcus spp.; ou patógenos virais: Citomegalovírus, herpes simplex, ou varicela-zoster.

[260] Infecções do estômago são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Streptococcus pyogenes ou Helicobacter pylori; ou patógenos virais: Citomegalovírus, herpes simplex, Epstein-Barr, rotavírus, norovírus, ou adenovírus.

[261] Infecções do intestino delgado são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Escherichia coli, Clostridium difficile, Bacteroides fragilis, Bacteroides vulgatus, Bacteroides thetaiotaomicron, Clostridium perfringens, Salmonella enteriditis, Yersinia enterocolitica, ou Shigella flexneri; ou patógenos virais: adenovírus, astrovírus, calicivírus, norovírus, rotavírus, ou Citomegalovírus.

[262] Infecções do cólon/reto são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Escherichia coli, Clostridium difficile, Bacteroides fragilis, Bacteroides vulgatus, Bacteroides thetaiotaomicron, Clostridium perfringens, Salmonella enteriditis, Yersinia enterocolitica, ou Shigella flexneri; ou patógenos virais: adenovírus, astrovírus, calicivírus, norovírus, rotavírus, ou Citomegalovírus.

[263] Infecções do ânus são comumente causadas pelas seguintes espécies bacterianas: Streptococcus pyogenes, Bacteroides spp., Fusobacterium spp., streptococci anaeróbicas, Clostridium spp., Escherichia coli, Enterobacter spp., Pseudomonas aeruginosa, ou Treponema pallidum; ou patógenos virais: herpes simplex.

[264] Organismos como bactérias são geralmente classificados operacionalmente como coleções de cepas semelhantes (que geralmente referem-se aos grupos de ancestrais comuns presumidos com distinções fisiológicas distintas, mas geralmente não morfológicas, e que podem ser identificados usando técnicas sorológicas contra antígenos de superfície bacteriana). Assim, cada espécie bacteriana (por exemplo, Escherichia coli) tem várias cepas (ou sorotipos), que podem diferir em suas capacidades de causar infecção ou diferir em suas capacidades de causar infecção em um órgão/tecido particular. Certas cepas de Escherichia coli são mais prováveis de causar infecção/diarreia gastrointestinal, incluindo enterotoxigênica E. coli (ETEC), enteropatogênica E. coli (EPEC), enterohemorrágica E. coli (EHEC), E. coli produtora de toxina Shiga (STEC), enteroagregadora E. coli (EAEC), enteroinvasiva E. coli (EIEC) e E. coli de adesão difusa (DAEC). De acordo com a presente invenção, um ou mais de uma cepa ETEC, EPEC, EHEC, STEC, EAEC, EIEC ou DAEC de E.coli (ou seja, cepas que causam infecção do cólon), pode ser escolhida para uma formulação para tratar uma IBD.

[265] De modo semelhante, pode haver vários subtipos de vírus específicos, vermes, ou protozoários, que são associados com doença em uma população particular, e são, portanto, úteis para uso na presente invenção.

[266] As composições da invenção incluem antígenos de organismos que são patogênicos em uma região específica do GIT. As composições podem incluir os componentes de organismos completos, células completas ou vírios completos, ou podem incluir extratos ou preparações de organismos, como extratos de parede celular ou membrana celular, ou exotoxinas. As composições podem ainda incluir um ou mais antígenos isolados destes organismos. Organismos patogênicos podem ser disponíveis comercialmente (por exemplo, de American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA), ou podem ser isolados clínicos a partir de sujeitos contendo uma infecção.

[267] As composições da invenção derivadas de patógenos podem ser fornecidas isoladas ou em combinação com outros compostos (por exemplo, moléculas de ácido nucleico, moléculas pequenas, peptídeos, ou análogos de peptídeo), na presença de um lipossoma, um adjuvante, ou qualquer carreador farmaceuticamente aceitável, em uma forma apropriada para administração a mamíferos, por exemplo, humanos. Conforme usado aqui “carreador farmaceuticamente aceitável” ou “excipiente” inclui todo e qualquer solvente, meio de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos e retardadores de absorção, e semelhantes que são fisiologicamente compatíveis. O carreador pode ser apropriado para qualquer forma apropriada de administração, incluindo administração subcutânea, intradérmica, intravenosa, parenteral, intraperitoneal, intramuscular, sublingual, inalação, intratumoral ou oral. Carreadores farmaceuticamente aceitáveis incluem soluções aquosas estéreis ou dispersões e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injetáveis estéreis. O uso de tal meio e agentes para substâncias farmaceuticamente ativas é bem conhecido na técnica. Exceto, na medida em que qualquer meio ou agente convencional com o composto ativo (ou seja, uma bactéria específica, antígenos bacterianos, ou composições dos mesmos da invenção), uso dos mesmos nas composições farmacêuticas da invenção é contemplado. Compostos ativos suplementares podem ainda ser incorporados nas composições.

[268] Métodos bem conhecidos na técnica para preparar formulações são encontrados em, por exemplo, “Remington’s Pharmaceutical Sciences” (β0a edição), ed. A. Gennaro, 2000, Mack Publishing Company, Easton, PA. Formulações para administração parenteral podem, por exemplo, conter excipientes, água estéril, ou salina, polialquileno glicois como polietileno glicol, óleos de origem vegetal, ou naftalenos hidrogenados. Polímero biocompatível, biodegradável lactida, copolímero lactida/glicolida, ou copolímeros polioxietileno- polioxipropileno podem ser usados para controlar a liberação dos compostos. Outros sistemas de liberação parenterais potencialmente úteis incluem partículas de copolímero de etileno-vinil acetato, bombas osmóticas, sistemas de infusão implantáveis, e lipossomas. Formulações para inalação podem conter excipientes, por exemplo, lactose, ou podem ser soluções aquosas contendo, por exemplo, polioxietileno-9-lauril éter, glicocolato e deoxicolato, ou podem ser soluções oleosas para administração na forma de gotas nasais, ou como um gel. Para composições terapêuticas ou profiláticas, as formulações podem ser administradas a um indivíduo em uma quantidade effective para interromper ou reduzir a progressão da IBD.

[269] Uma “quantidade eficaz” de uma espécie patogênica ou antígeno do mesmo de acordo com a invenção inclui uma quantidade terapeuticamente eficaz ou uma quantidade profilaticamente eficaz. Uma “quantidade terapeuticamente eficaz” se refere a uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários, para conseguir o resultado terapêutico desejado, como redução ou eliminação de sintomas de IBD. A quantidade terapeuticamente eficaz de uma espécie patogênica ou antígenos dos mesmos pode variar de acordo com fatores como o estado da doença, idade, sexo, e peso do indivíduo, e a capacidade de o composto em induzir uma resposta desejada no indivíduo. Regimes de dosagem podem ser ajustados para fornecer a resposta terapêutica ideal. A quantidade terapeuticamente eficaz pode ainda ser uma em que qualquer efeito tóxico ou detrimental da espécie patogênica ou antígeno do mesmo são compensados pelos efeitos terapeuticamente benéficos. Uma “quantidade profilaticamente eficaz” se refere a uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários, para conseguir o resultado profilático desejado, como prevenção de IBD. Tipicamente, uma dose profilática é usada em sujeitos antes ou em estágio precoce de IBD, de modo que uma quantidade profilaticamente eficaz pode ser menos do que a quantidade terapeuticamente eficaz.

[270] Para administração por injeção subcutânea ou intradérmica, uma faixa exemplar para quantidades terapeuticamente ou profilaticamente efetivas de uma ou mais espécies bacterianas patogênicas pode ser cerca de 1 milhão a 100.000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 100 milhões a 7000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 500 milhões a 6000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 1000 milhões a 5000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 2000 milhões a 4000 milhões de organismos por ml, ou qualquer inteiro dentro destas faixas. A concentração total de bactérias por ml pode variar de 1 milhão a 100.000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 50 milhões a 7000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 100 milhões a 6000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 500 milhões a 5000 milhões de organismos por ml, ou pode ser 1000 milhões a 4000 milhões de organismos por ml, ou qualquer inteiro dentro destas faixas. A faixa para quantidades terapeuticamente ou profilaticamente eficaz de antígenos de espécies bacterianas patogênicas pode ser um inteiro de 0,1 nM- 0,1 M, 0,1 nM-0,05M, 0,05 nM-15μM ou 0,01 nM-10μM.

[271] Deve ser notado que concentrações de dosagem e faixas podem variar com a gravidade da condição a ser aliviada, ou pode variar com a resposta imune do sujeito. Em geral, o objetivo é conseguir uma resposta imune adequada. Para administração por injeção subcutânea ou intradérmica, a extensão de uma resposta imune pode ser determinada, por exemplo, por tamanho de reação de pele imune local atrasada no local da injeção (por exemplo, de 0,25 polegada a 4 polegadas diâmetro). A dose requerida para obter uma resposta imune apropriada pode variar dependendo do indivíduo (e seus sistemas imunes) e a resposta desejada. Dosagens padronizadas podem ainda ser usadas.

[272] No contexto da administração subcutânea ou intradérmica, se o objetivo é conseguir uma reação de pele local de 2 polegadas, usando uma composição bacteriana, a dose total pode, por exemplo, variar de 2 milhões de bactérias (por exemplo, 0,001 ml de uma vacina com uma concentração de 2.000 milhões de organismos por ml) a mais do que 20.000 milhões de bactérias (por exemplo, 1 ml de uma vacina com uma concentração de 20.000 milhões de bacterianas individuais ou antígenos dos mesmos dentro de uma composição podem ainda ser consideradas. Por exemplo, se a concentração de uma espécie bacteriana patogênica particular, tamanho de célula daquela espécie ou carga antigênica do mesmo é muito maior em relação às outras espécies bacterianas patogênicas na vacina, então a reação imune de pele local de um indivíduo pode ser possivelmente devido à sua resposta a esta espécie bacteriana específica. Em algumas modalidades, o sistema imune de um indivíduo pode responder mais fortemente a uma espécie de bactéria dentro de uma composição do que outra, dependendo, por exemplo, do histórico de exposição à infecção por uma espécie particular, de modo que a dosagem ou composição pode ser ajustada de acordo com aquele indivíduo.

[273] Para qualquer sujeito particular, o tempo e dose de tratamentos podem ser ajustados ao longo do tempo (por exemplo, o tempo pode ser diário, em dias alternados, semanalmente, mensalmente) de acordo com necessidade individual e o julgamento profissional da pessoa a administrar ou supervisionar a administração das composições. Por exemplo, no contexto da administração subcutânea ou intradérmica, as composições podem ser administradas em cada segundo dia. Uma dose inicial de aproximadamente 0,05 ml pode ser administrada via subcutânea, seguido por aumentos de 0,01-0,02 ml cada segundo dia até uma reação de pele adequada ser conseguida no local de injeção (por exemplo, uma reação atrasada de 1 polegadas a 2 polegadas de diâmetro de vermelhidão visível no local de injeção). Uma vez que esta reação imune adequada é conseguida, esta dosagem é continuada como uma dose de manutenção. A dose de manutenção pode ser ajustada de tempo em tempo para conseguir a reação de pele visível desejada (inflamação) no local de injeção. A dosagem pode ser uma duração de dosagem, por exemplo, de pelo menos 2 semanas, 2 meses, 6 meses, 1, 2, 3, 4, ou 5 anos ou mais.

[274] Em algumas modalidades, a invenção pode incluir composições antigênicas administradas a um ou mais tecidos epiteliais por uma via não entérica. Por exemplo: à pele por injeção intradérmica ou subcutânea; ao epitélio pulmonar por inalação. Assim, em algumas modalidades as composições antigênicas da invenção são administradas de modo que provoquem uma resposta imune em um tecido não entérico, como um tecido epitelial. Em algumas modalidades, uma ou mais vias não entéricas de administração podem ser combinadas com uma ou mais vias de administração adicionais, como administração intratumoral, intramuscular ou intravenosa.

[275] Em vários aspectos da invenção, as composições antigênicas que são administradas a um paciente podem ser caracterizadas como contendo uma assinatura antigênica, ou seja, uma combinação de antígenos de epítopos que são suficientemente específicos que a composição antigênica é capaz de induzir uma resposta imune que é específica a um patógeno particular, como uma resposta imune adaptativa.

[276] A quantidade de composto ativo (por exemplo, espécie bacteriana, vírus, protozoários ou helmintos, ou antígenos dos mesmos) em composições da invenção pode variar de acordo com fatores como o estado da doença, idade, sexo, e peso do indivíduo. Regimes de dosagem podem ser ajustados para fornecer a resposta terapêutica ideal. Por exemplo, um bolus único pode ser administrado, várias doses divididas podem ser administradas ao longo do tempo ou a dose pode ser proporcionalmente reduzida ou aumentada como indicado pelas exigências da situação terapêutica. Pode ser vantajoso formular composições parenterais em forma de unidade de dosagem para facilitar administração e uniformidade de dosagem.

[277] No caso de formulações antigênicas (análogos a uma vacina), uma quantidade imunogenicamente eficaz de um composto da invenção pode ser fornecida, isolada ou em combinação com outros compostos, com um adjuvante imunológico. O composto pode ainda ser ligado com uma molécula carreadora, como albumina bovina sérica ou hemocianina de keyhole limpet para aumentar a imunogenicidade. Uma composição antigênica (“vacina”) é uma composição que inclui materiais que induzem uma resposta imune desejada. Uma composição antigênica pode selecionar, ativar ou expandir células de memória B, T, neutrófilos, monócitos ou macrófagos do sistema imune para, por exemplo, reduzir ou eliminar os sintomas da IBD. Em algumas modalidades, o patogênico específico micróbio, vírus, antígenos virais, bactéria, antígenos bacterianos, ou composições dos mesmos da invenção são capazes de induzir a resposta imune desejada na ausência de qualquer outro agente, e podem, portanto, ser considerados como sendo uma composição antigênica. Em algumas modalidades, uma composição antigênica inclui um carreador apropriado, como um adjuvante, que é um agente que atua de modo não específico para aumentar a resposta imune a um antígeno específico, ou a um grupo de antígenos, permitindo a redução da quantidade de antígeno em qualquer dose de vacina administrada, ou a redução da frequência de dosagem requerida para gerar a resposta imune desejada. Uma composição antigênica bacteriana pode incluir bactéria viva ou morta capaz de induzir uma resposta imune contra determinantes antigênicos normalmente associados com a bactéria. Em algumas modalidades, uma composição antigênica pode incluir bactérias vivas que são de cepas menos virulentas (atenuadas), e, portanto, causam uma infecção menos grave. Em algumas modalidades a composição antigênica pode incluir vírus vivos, atenuados ou mortos capazes de induzir uma resposta imune contra determinantes antigênicos normalmente associados com o vírus.

[278] Uma composição antigênica compreendendo organismos mortos para administração por injeção pode ser preparada como a seguir. Os organismos podem ser crescidos em meio apropriado e lavados com solução salina fisiológica. Os organismos podem então ser centrifugados, ressuspendidos em solução salina, e mortos com calor. As suspensões podem ser padronizadas por contagem em microscopia direta, misturadas em quantidades requeridas, e armazenadas em recipientes apropriados, que podem ser testados para segurança, tempo de prateleira, e esterilidade em um modo aprovado. Além do organismo e/ou antígenos dos mesmos, uma preparação morta apropriada para administração a humanos pode incluir fenol preservativo (por exemplo, 0,4%) e/ou cloreto de sódio (por exemplo, na ordem de 0,9%). A composição pode ainda, por exemplo, incluir quantidades traços de infusão cardíaca cerebral (carne), peptonas, extrato de levedura, ágar, sangue de ovelha, dextrose, fosfato de sódio e/ou outros componentes do meio.

[279] Em algumas modalidades, a composição antigênica pode ser usada como um aerossol para inalação.

[280] Em geral, as composições da invenção devem ser usadas sem causar toxicidade substancial. A toxicidade dos compostos da invenção pode ser determinada usando técnicas padrões, por exemplo, testando em culturas de células ou animais experimentais e determinando o índice terapêutico, ou seja, a razão entre LD50 (a dose letal para 50% da população) e a LD100 (a dose letal para 100% da população).

[281] Em algumas modalidades, as bactérias que são membros da flora endógena de uma região particular de GIT podem ser usadas para formular composições antigênicas da invenção. As linhas da tabela 1 listam um número de espécie bacteriana, junto com as regiões biológicas em que cada espécie pode formar uma parte da flora endógena. Por exemplo, Abiotrophia spp. são tipicamente membros da flora endógena da boca.Tabela 1: Flora Bacteriana Normal Humana (Patógenos humanos bacterianos endógenos)

[282] Flora microbiana endógena, como bactéria, tem acesso a tecidos para patogênese através de dispersão contígua ou dispersão bacterêmica. Em condições favoráveis, todos os organismos endógenos podem se tornar patogênicas em e invadir localmente e se espalhar por dispersão contígua para tecidos e órgãos adjacentes Flora bacteriana endógena da pele, boca e cólon são as espécies que são entendidas por ainda ser responsáveis por dispersão bacterêmica. Bactérias que são membros de uma flora endógena particular podem portanto causar infecção em tecidos ou órgãos aos quais estas bactérias podem se espalhar. Assim, um aspecto da invenção envolve o uso de patógenos microbianos endógenos para tratar uma IBD contendo sintomas localizados a uma região de GIT em que a bactéria endógena pode se espalhar e causar infecção. As colunas da tabela 2 listam domínios para flora endógena. As linhas da tabela 2 listam regiões do GIT dento das quais IBD pode estar situada. Assim, um aspecto da invenção envolve o uso de patógenos microbianos endógenos para formular composições antigênicas, ou a seleção de formulações existentes contendo os patógenos, para tratar uma IBD situada não região GIT as quais o patógeno pode se espalhar para causar uma infecção. Assim, em modalidades alternativas, uma IBD que é sintomática na região listada na primeira coluna da tabela 2 pode ser tratada com composições antigênicas compreendendo determinantes antigênicos que são específicos para patógenos microbianos que são membros da flora endógena de um ou mais domínios de flora endógena listada na primeira linha da tabela 2 e indicado com um X ou um marcador de verificação na linha apropriada.Tabela 2: Patogenicidade em Tecido/Órgão de Flora Endógena

[283] De acordo com a informação combinada nas tabelas 1 e 2, IBD se manifesta em uma região particular do GIT definida na coluna 1 da tabela 2 pode ser tratada com composições antigênicas compreendendo determinantes antigênicos da espécie bacteriana correspondente da tabela 1, de modo que os títulos da coluna na tabela 2 são em efeito substituídas com a espécie bacteriana da tabela 1.

[284] Em algumas modalidades, patógenos para uso na invenção podem ser patógenos bacterianos exógenos. Por exemplo, os organismos listados na tabela 3 podem ser usados como patógenos microbianos para formular composições antigênicas, ou composições antigênicas contendo aqueles patógenos selecionados, para uso para tratar uma IBD situada na região do GIT listada com o organismo relevante na tabela 3. Em algumas modalidades, determinantes antigênicos de ambas espécies bacterianas endógenas e exógenas direcionadas a um tecido ou órgão específico pode ser usado em combinação. Por exemplo, uma composição antigênica derivada de, ou específica para, Clostridium difficile, pode ser usada para tratar uma IBD situada no cólon.Tabela 3 Patógenos humanos bacterianos exógenos, e seus locais de infecção no GIT

[285] Em algumas modalidades, patógenos para uso na invenção podem ser patógenos virais. Tabela 4 fornece uma lista exemplar de patógenos virais junto com o local do tecido e órgão para o qual cada espécie viral é reportadamente um patógeno. Assim, um aspecto da invenção envolve utilizar composições imunogênicas que são específicos para o vírus nomeado para tratar uma IBD situada na região do GIT que é identificado adjacente ao nome do vírus na tabela 4.Tabela 4 Patógenos humanos virais, e seus locais de infecção

[286] A informação cumulativa em tabelas 1 a 4 fornece uma identificação extensiva de patógenos que podem ser usados na formulação de composições antigênicas da invenção, junto com uma identificação da região do GIT em que estes organismos são patogênicos, e assim identificam a região do GIT em que uma IBD é situada que pode ser tratada com uma formulação antigênica da invenção.

[287] Em algumas modalidades, o patógeno selecionado para uso nas composições antigênicas da invenção pode ser um que é causa comum da infecção aguda na região do GIT em que a IBD a ser tratada está situada. A tabela 5 identifica patógenos bacterianos e virais deste tipo, junto com a região do GIT em que são comumente causam infecção. Assim, em modalidades selecionadas, uma IBD que reside em uma região do GIT identificado na primeira coluna na tabela 5 pode ser tratada com uma composição antigênica que compreende determinantes antigênicos para um ou mais organismos patogênicos listados na segunda coluna da tabela 5.Tabela 5: Causas comuns de infecção aguda (bactéria e vírus) para regiões selecionadas do GIT

[288] Os organismos específicos que comumentecausam infecção em uma região específica do GIT podem variar por localização geográfica. Tabela 5 é então não uma lista exaustiva de patógenos comuns para todas as localizações geográficas e grupos de população. É entendido que um microbiologista clínico especialista na técnica poderia determinar as espécies patogênicas comuns em uma área geográfica particular ou um grupo de população para uma região específica do GIT de acordo com a invenção.

[289] Humanos são hospedeiros a uma ampla faixa de parasitas gastrointestinais, incluindo vários protozoários e helmintos, que para fins da presente invenção constituem patógenos do GIT (Schafer, T.W., Skopic, A. Parasites of the small intestine. Curr Gastroenterol Reports 2006;8:312- 20; Jernigan, J., Guerrant, R.L., Pearson, R.D. Parasitic infections of small intestine. Gut 1994;35:289-93; Sleisenger & Fordtran’s Gastrointestinal and liver disease. 8th ed. 2006; Garcia, L.S. Diagnostic medical parasitology. 5th ed. 2007). Composições da invenção podem assim incluir componentes antigênicos de vários protozoários, incluindo, por exemplo: Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium hominus, Isospora belli, espécies de Sarcocystis, corpos tipo Coccidian (espécies de Ciclospora), Enterocytozoon bieneusi, Entamoeba histolytica, Entamoeba dispar, Entamoeba coli, Entamoeba hartmanni, Endolimax nana, Iodamoeba bütschlii, Dientameoba fragilis, Blastocystis hominus, Ciclospora cayetanensis, Microsporidia, Trypanosoma cruzi, Chilomastix mesnili, Pentatrichomonas hominis, Balantidium coli. Da mesma forma, composições da invenção podem incluir componentes antigênicos de vários helmintos, incluindo, por exemplo: Cestodes (cestoides), Taenia saginata, Taenia solium, espécies Diphyllobothrium, Hymenolepis nana, Hymenolepis diminuta, Dipylidium caninum, Nematodeos (vermes redondos), Ascaris lumbricoides, Strongyloides stercoralis, Necator americanus, Ancylostoma duodenale, Ancylostoma caninum, Tichuris trichiura, Capillaria philippinensis, espécies de Trichostrongylus, espécies de Trichinella, Necator americanus, Anisakis e espécies relacionadas, Angiostrongylus costaricensis, Enterobius vermicularis, Trematoides (trematoides), Fasciolopsis buski, espécies de Heterophyes, espécies de Echinostoma, Clonorchis sinensis, espécies de Opisthorchis, espécies de Fasciola, Metagonimus yokogawi, Schistosoma mansoni, Schistosoma japonicum, Schistosoma mekongi, Schistosoma intercalatum, espécies de Echinostoma e espécies de Paragonimus.

[290] Em modalidades selecionadas, a invenção envolve etapas diagnósticas para avaliar a exposição anterior do paciente a um organismo. Por exemplo, as etapas diagnósticas podem incluir tomar um histórico médico de exposição a patógenos selecionados, e/ou avaliar a resposta imune de um paciente a um patógeno selecionado. Por exemplo, um teste de sorologia pode ser conduzido para anticorpos para patógenos selecionados no soro de um paciente. Em conexão com este aspecto da invenção, determinantes antigênicos de um patógeno selecionado podem ser escolhidos para uso em uma composição imunogênica em um paciente selecionado em uma indicação diagnóstica que o paciente teve ou não exposição anterior ao patógeno, por exemplo, em virtude da presença de anticorpos a determinantes antigênicos daquele patógeno no soro do paciente.

[291] Em outras modalidades selecionadas, a invenção envolve etapas diagnósticas para avaliar a resposta imunológica de um paciente ao tratamento com uma composição imunogênica selecionada. Por exemplo, as etapas diagnósticas podem incluir avaliar a resposta imune do paciente aos determinantes antigênicos daquela composição imunogênica, por exemplo, usando um teste sorológico para detectar anticorpos aos determinantes antigênicos. Em conexão com este aspecto da invenção um tratamento com uma composição imunogênica selecionada pode ser continuada se a avaliação indica que há uma resposta imunológica ativa aos determinantes antigênicos daquela composição, e o tratamento de vacina pode ser descontinuado, e um tratamento alternativo com uma composição imunogênica diferente pode ser iniciado, se a avaliação indica que ha uma resposta imunológica suficientemente ativa aos determinantes antigênicos da composição imunogênica.

[292] Embora várias modalidades da invenção sejam reveladas aqui, muitas adaptações e modificações podem ser preparadas dentro do escopo da invenção de acordo com o conhecimento geral comum dos especialistas na técnica. Tais modificações incluem a substituição de equivalentes conhecidos para qualquer aspecto da invenção para atingir o mesmo resultado substancialmente da mesma forma. Faixas numéricas são inclusivas dos números que definem a faixa. A palavra "compreendendo" é usada aqui como um termo aberto, substancialmente equivalente à frase "incluindo, entre outros", e a palavra "compreende" tem um significado correspondente. Conforme usado aqui, as formas singulares "um", "uma" e "o/a" incluem referentes plurais salvo se o contexto claramente ditar de outra forma. Assim, por exemplo, a referência a "uma coisa" inclui mais do que uma tal coisa. A citação de referências aqui não é uma admissão que tais referências são técnica anterior à presente invenção. Qualquer documento de prioridade e todas as publicações, incluindo entre outros a patentes e pedidos de patentes citados nesta especificação são incorporadas aqui por referência como se cada publicação individual fosse especificamente e individualmente indicada por referência aqui e como se totalmente estabelecida aqui. A invenção inclui todas as modalidades e variações substancialmente como aqui anteriormente descritas e com referência aos exemplos e desenhos.

[293] Em algumas modalidades, a invenção excluietapas que envolvem tratamento médico ou cirúrgico.

[294] Os seguintes exemplos ilustram modalidadesda invenção.

EXEMPLO 1: Estudos clínicosComposições bacterianas

[295] Cinco composições de bactérias mortas foram usadas para tratar uma ampla variedade de tipos de câncer em estudos cegos, como a seguir:1. A Bayer Corporation MRV™ “Bayer MRV” (Hollister-Steir Laboratories, Spokane, WA, U.S.A.), contendo as seguintes espécies bacterianas: Organismos por mlStaphylococcus aureus 1200 milhõesviridans e Streptococci não hemolíticos 200milhõesStreptococcus pneumoniae 150 milhões Moraxella (Neisseria) catarrhalis 150 milhõesKlebsiella pneumoniae 150 milhõesHaemophilus influenzae 150 milhões

[296] Esta vacina foi produzida para as seguintes indicações: rinite, asma infecciosa, sinusite crônica, polipose nasal e otite média serosa crônica. Tratamento de câncer não foi indicado como um uso pretendido para esta vacina. A vacina ainda incluiu os seguintes ingredientes: 0,4% fenol, 0,9% NaCl, quantidades traços de infusão de cérebro e coração (carne), peptonas, extrato de levedura, ágar, sangue de ovelha, dextrose, e fosfatos de sódio.2. Stallergenes MRV “Stallergenes MRV” (Laboratories des Stallergenes, S.A., Fresnes, France), contendo o seguinte:Organismos por mlStaphylococcus aureus 600 milhões Staphylococcus albus 600 milhões Streptococci não hemolítico 200 milhões Streptococcus pneumoniae 150 milhões Moraxella (Neisseria) catarrhalis 150 milhões Klebsiella pneumoniae 150 milhões Haemophilus influenzae 150 milhões

[297] Esta vacina foi produzida para as mesmasindicações que a vacina MRV, ou seja, infecções do trato respiratório recorrente, e câncer listado como uma contraindicação.

[298] Como estabelecido abaixo, de modo surpreendente, estas vacinas MRV, que contêm muitos patógenos pulmonares, demonstraram ser efetivas para o tratamento de câncer pulmonar. 3. Polivaccinum Forte (PVF; Biomed S.A., Krakow, Poland),contendo o seguinte:Organismos por mlStaphylococcus aureus 500 milhõesStaphylococcus epidermidis 500 milhõesEscherichia coli 200 milhõesCorynebacterium pseudodiphtheriticum 200 milhõesStreptococcus pyogenes 100 milhõesStreptococcus salivarius (viridans Streptococci) 100milhõesStreptococcus pneumoniae 100 milhõesMoraxella (Neisseria) catarrhalis 100 milhõesKlebsiella pneumoniae 100 milhõesHaemophilus influenzae 100 milhões

[299] Esta vacina foi produzida para condições inflamatórias crônicas e recorrentes do trato respiratório inferior e superior e trato geniturinário, incluindo rinofaringite, laringite recorrente, traqueite, bronquiosite, otite média, neuralgia crônica e recorrente do nervo trigeminal e occipital, isquialgia, plexite brachial, neuralgia intercostal, cistouretrite crônica, vaginite, adnexite, e inflamação do endométrio. Tratamento de câncer não foi indicado como um uso pretendido para esta vacina.

[300] De nota, embora a concentração total de bactéria em PVF é idêntica àquela de MRVs (Bayer e Stallergenes), os pacientes tipicamente demonstraram uma resposta inflamatória imune à injeção subcutânea da composição PVF em uma dose muito menor do que a dose usual requerida para obter uma resposta de pele semelhante com a composição MRV, indicando que a resposta imune foi possivelmente que ocorreu a um dos novos componentes na vacina Polivaccinum Forte, como E. coli. Como definido abaixo, surpreendentemente, PVF, que contém E. coli um patógeno comum do cólon, abdômen, rim, ovários, peritônio, fígado e pâncreas, demonstrou ser efetivo no tratamento de cânceres no cólon, linfonodos abdominais, rim, ovário, peritônio, fígado e pâncreas.4. Lisado Staphage (Delmont Laboratories Inc., Swarthmore, PA, USA), contendo o seguinte: Staphylococcus aureus

[301] Como definido abaixo, surpreendentemente, lisado Staphage, que contém Staphylococcus aureus um patógeno comum dos seios e osso, demonstrou ser efetivo no tratamento de câncer de mama e osso.Administração de MRV, lisado Staphage e PVF

[302] As composições bacterianas (vacinas) foram uma suspensão de células bacterianas mortas e, portanto, as suspensões foram suavemente agitadas antes do uso para garantir distribuição uniforme antes da retirada da dose do frasco, e administrado via subcutânea três vezes por semana nas Segundas, Quartas, e Sextas. Os pacientes foram aconselhados a continuar o tratamento por pelo menos 6 meses. A dose da vacina requerida foi determinada pela adequação da reação imune à vacina. Começando com uma dose muito pequena (0,05cm3), a dose foi gradualmente aumentada (em 0,01-0,02cm3 cada vez) até uma reação imune adequada ser conseguida. A reação local atrasada no local de injeção apareceu dentro de 2 - 48 horas após injeção e durou por até 72 horas ou mais. O objetivo foi conseguir um fragmento redondo de uma a duas polegadas de diâmetro de rosácea/vermelhidão no local de injeção, indicando estimulação imune adequada. Uma vez esta reação foi conseguida, a dose foi mantida em um nível requerido para conseguir esta reação. Se a reação foi significativamente menos do que duas polegadas (por exemplo, meia polegada) a dose foi aumentada, se esta foi significativamente mais do que duas polegadas (por exemplo, três polegadas), a dose foi reduzida. Esta reação imune local geralmente ocorre dentro das primeiras 24 horas após a injeção. Os pacientes foram solicitados a verificar esta reação e, se presente, medir ou marcar esta. A dose de manutenção requerida para conseguir uma reação imune varia consideravelmente, dependendo da resposta imune do indivíduo - como tão pouco quanto 0,001cm3 para algumas pessoas, tanto quanto 2cc para outros. A vacina deve ser armazenada em um refrigerador (2° a 8°C). O local geral para a injeção é a parte superior dos braços, as coxas ou o abdômen. O local exato de cada injeção foi variado de modo que esta não foi administrada nos locais em que a rosácea/vermelhidão ainda estava presente. Uma contraindicação conhecida às vacinas é a hipersensibilidade a qualquer componente da vacina.

[303] Uma quinta vacina, uma vacina oral polimicrobial, foi usada em aspectos alternativos da invenção, como a seguir:5. Respivax, produzida por BB-NCIPD Ltd (Bulgária). Esta vacina oral continha as seguintes espécies bacterianas mortas liofilizadas:Organismos por mgStreptococcus pneumoniae 25 milhões Neisseria catarrhalis 25 milhõesStreptococcus pyogenes 25 milhõesHaemophilus influenzae 25 milhõesStaphylococcus aureus 25 milhõesKlebsiella pneumoniae 25 milhõesAdministração de Respivax

[304] A vacina oral Respivax foi produzida para o tratamento de infecção respiratória crônica, e contém muitos dos patógenos mais comuns do trato respiratório, incluindo muitas das causas mais comuns de infecção pulmonar. Os pacientes foram tratados com uma dose de um comprimido de 50 mg por dia, fornecendo o equivalente de 1,25 x 109 células de cada espécie por dose. Os pacientes foram prescritas com a dose acima para um período contínuo de pelo menos 6 meses.

[305] Como definido abaixo, surpreendentemente, vacina Respivax oral, que contém muitos patógenos pulmonares comuns, demonstrou ser efetivo para o tratamento de câncer de pulmão. EXEMPLO 1A: Câncer do pulmão

[306] Esta seção se refere ao câncer primário no pulmão, ou metástases ao pulmão, tratado com patógenos microbianos do pulmão, como flora bacteriana respiratória endógena.

[307] Pacientes qualificados para o estudo de câncer pulmonar se foram inicialmente diagnosticados com câncer pulmonar estágio 3B ou 4 (não operáveis). A classificação de câncer pulmonar foi realizada usando métodos padrões como, por exemplo, descrito em AJCC: Cancer Staging Handbook (sixth edition) 2002; Springer-Verlag New York: Editors: Fredrick Greene, David Page and Irvin Fleming, ou in International Union Against Cancer: TNM Classification of Malignant Tumors (sixth edition) 2002; Wiley-Liss Geneva Switzerland: Editors: L.H. Sobin and C.H. Wittekind. Por exemplo, cânceres de pulmão podem ser classificados como a seguir: Classificação patológica e clínica pulmonar TNM T TUMOR PRIMÁRIOTX Tumor primário não pode ser avaliado, ou tumor provado pela presença de células malignas no escarro ou lavagem bronquial mas não visualizado por imagem ou broncoscopiaTis Carcinoma in situT0 Sem evidência de tumor primárioT1 Tumor de 3 cm ou menos na maior dimensão, circundado por pulmão ou pleura visceral, sem evidência bronquioscópica de invasão mais proximal do que o brônquio lobar (ou seja, não no brônquio principal)T2 Tumor com qualquer uma das seguintes características de tamanho ou extensão: Mais do que 3 cm na maior dimensão. Envolve brônquio principal, 2 cm ou mais distal à carina. Invade pleura visceral. Associado com atelectase ou pneumonite obstrutiva que se estende à região hilar, mas não envolve o pulmão inteiroT3 Tumor de qualquer tamanho que diretamente invade qualquer um dos seguintes: parede torácica (incluindo tumores de sulcos superiores), diafragma, pleura mediastinal, pericardio parietal; ou tumor no brônquio principal menos do que 2 cm distal à carina, mas sem envolvimento da carina; ou atelectase associada ou pneumonite obstrutiva do pulmão inteiroT4 Tumor de qualquer tamanho que invade um dos seguintes: mediastino, coração, vasos grandes,traqueia, esôfago, corpo vertebral, carina; ou tumor com uma efusão pleural maligna ou pericardial; ou com nódulo de tumor separado dentro do ipsilateral primário- tumor do lobo do pulmãoN LINFONODOS REGIONAISNX Linfonodos regionais não podem ser avaliadosN0 Sem metástase de linfonodo regionalN1 Metástase em peribronquiosal ipsilateral e/ou linfonodos hilares ipsilaterais e nodos intrapulmonares, incluindo envolvimento por extensão diretaN2 Metástase em ipsilateral mediastinal e/ou linfonodos subcarinaisN3 Metástase em contralateral mediastinal, contralateral hilar, ipsilateral ou escaleno contralateral, ou linfonodos supraclavicularM METÁSTASE DISTANTEMX Metástase distante não pode ser avaliadaM0 Sem metástase distanteM1 Metástase distante; inclui nódulos de tumoresseparados no lobo de tumor não primário (ipsilateral ou contralateral)Agrupamento por estágio a subgrupos TNM:Carcinoma TX N0 M0oculto Estágio 0 Tis N0 M0Stage IA T1 N0 M0Estágio IB T2 N0 M0Estágio IIA T1 N1 M0Estágio IIB T2 N1 M0 T3 N0 M0Estágio IIIA T3 N1 M0 T1 N2 M0 T2 N2 M0 T3 N2 M0Estágio IIIB Qualquer T N3 M0 T4 Qualquer N M0Estágio IV Qualquer T Qualquer N M1

[308] Gráficos com códigos diagnósticos 162,9(câncer pulmonar) e 197 (câncer metastático) foramcoletados manualmente e eletronicamente. Informações foram coletadas nestes pacientes, como data do diagnóstico, data de morte, e estágio do câncer. Gráficos para pacientes foram revisados para confirmar a data do diagnóstico e estágio de câncer. Pacientes foram excluídos da análise pelas seguintes razões: 1) estágio errado; 2) falta de dados; 3) sem gráfico, ou; 4) gráfico não atingiram em tempo para análise de dados. 20 pacientes foram excluídos do estudo porque seus gráficos não chegaram ou houve informação insuficiente dos quais 6 foram usuários MRV. O grupo de estudo inclui 108 pacientes no total: 50 que receberam a vacina MRV e 58 que receberam a vacina MRV.

[309] A comparação da sobrevivência de pacientes inicialmente diagnosticados com estágio 3B e 4 de câncer pulmonar que receberam MRV com pacientes que não receberam MRV e com dados de sobrevivência padrão SEER para pacientes inicialmente diagnosticados com estágio 3B e 4 de câncer pulmonar (Figura 1) como a seguir:SEER não MRV MRVsobrevivência mediana: 5 meses 10,5 meses 12,5 mesessobrevivência em 1 ano: 25% 45% 58%sobrevivência em 3 anos 5% 3% 20%sobrevivência em 5 anos 3% 0% 10%

[310] Uma comparação de sobrevivência (comoacima), incluindo somente aqueles pacientes que receberam MRV por pelo menos 2 meses (Figura 2) é como a seguir: sobrevivência mediana: 16,5 mesessobrevivência em 1 ano: 70%sobrevivência em 3 anos: 27%sobrevivência em 5 anos: 15%

[311] Sobrevivência mediada e sobrevivência em 1 ano, 3 anos e 5 anos, foi substancialmente melhor no grupo que foi tratado com MRV (contendo bactérias que comumente causam infecção pulmonar), evidência de efetividade desta vacina para o tratamento de câncer pulmonar. Pacientes que foram tratados com vacina MRV por mais do que 2 meses teve taxas de sobrevivência maiores, outra evidência da efetividade desta vacina para o tratamento de câncer pulmonar.

[312] Uma análise alternativa foi conduzida sobre os dados que incluíram uma população de paciente a qual a composição MRV não estava disponível, para direcionar um potencial percebido para tendência causada por pacientes mais doentes sendo mais provável de escolher o novo tratamento (com MRV) e pacientes mais saudáveis potencialmente menos prováveis de se submeterem ao uso das composições antigênicas da invenção. A comparação de sobrevivência de pacientes com MRV ao qual a composição MRV estava disponível (designado "Pulmão 1") à sobrevivência de pacientes não MRV ao qual a composição MRV não estava disponível (designado "Pulmão 2") remove alguma desta tendência de seleção, fornecendo uma ilustração mais clara e mais precisa do benefício de tratamento MRV, como ilustrado na Figura 3.

[313] Em algumas modalidades, particularmente benefícios clínicos impressionantes obtidos com composições bacterianas antigênicas usadas nas injeções frequentes repetidas (ou seja, três vezes por semana) por um período prolongado de tempo - como pelo menos 2, 3, 4, 5, 6 ou 12 meses, ou 2, 3, 4 ou 5 anos (no contexto de câncer avançado como câncer pulmonar não operável, os períodos mais longos podem ser mais benéficos). Os tratamentos deste tipo podem ser conduzidos de modo a fornecer estimulação imune sustentada, prolongada. Quando a análise acima é restrita aos pacientes que foram tratados com MRV por um mínimo de 2 meses, a vantagem de sobrevivência de tratamento MRV é ainda mais claramente ilustrado na Figura 4.

[314] Como ilustrado na Figura 4, sobrevivência de um ano de câncer pulmonar estágio 3B ou 4 pacientes tratados com MRV por pelo menos dois meses foi 70%, em comparação a apenas 48% para o grupo não MRV Pulmão 2 e 23% para grupo da base de dados SEER. Sobrevivência de 3 anos do grupo MRV foi mais do que 4 vezes que ambos os pacientes não MRV e o registro SEER. Nenhum dos grupo não MRV grupo no estudo pulmão 2 sobreviveu por 5 anos, enquanto 15% de pacientes tratados com MRV por um período mínimo de dois meses ainda estavam vivas 5 anos após o diagnóstico. No contexto de uma doença como câncer pulmonar inoperável que é considerado terminal e tem uma taxa geral de 5 anos de sobrevivência de somente 3% (registro SEER), os resultados acima são extremamente encorajantes e supreendentes.

[315] Quando a análise de dados do paciente é restrito aos pacientes que foram tratados com MRV por pelo menos 6 meses, a curva de sobrevivência é verdadeiramente marcado, como ilustrado na Figura 5. Mais do que 60% de pacientes estavam vivos em 3 anos, mais do que 10 vezes a sobrevivência em ambos os grupos não MRV e o registro SEER. 36% (5 de 14 pacientes) de pacientes que foram tratados com MRV por pelo menos 6 meses estavam vivos 5 anos após diagnóstico, em comparação com somente 3% na base de dados SEER e 0% no grupo não MRV. Estes resultados notáveis, no contexto de um diagnóstico de câncer que é considerado terminal, são extremamente promissores e surpreendentes. Assim, em algumas modalidades, cânceres, como cânceres avançados, como câncer pulmonar inoperável, podem ser tratados por uma duração de dosagem de pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 meses, 2 anos, 3 anos, 4 anos, 5 anos, ou indefinidamente.

[316] Restringindo a análise àqueles pacientes que foram tratados com MRV por um período mínimo de tempo (por exemplo, 6 meses) introduz uma tendência em favor do grupo MRV, uma vez que pacientes MRV que sobreviveram por menos do que o período de tempo são excluídos do grupo (incluindo aqueles que morreram antes de completarem 6 meses de tratamento). Uma análise estatística detalhada desta tendência, com exclusão compensatória com sobreviventes curto prazo em grupos não MRV e SEER, demonstra que esta tendência desempenhou um papel muito menor na vantagem de sobrevivência verdadeiramente notável de pacientes que foram tratados com MRV pelo menos 6 meses.

[317] No câncer pulmonar estágio 3B, câncer é confinado aos pulmões, e assim, uma resposta de tratamento anticâncer alvo pode ser estimulada, de acordo com vários aspectos da invenção, por uma vacina, como MRV, composta por patógenos pulmonares. No câncer pulmonar estágio 4, o câncer tem metástase para órgãos distantes não passíveis de estimulação direcionada por patógenos pulmonares em conformidade com métodos da invenção. Assim, de acordo com algumas modalidades, pacientes com câncer pulmonar estágio 3B podem ser selecionados para tratamento com vacina MRV, desde que todo o câncer esteja confinado aos pulmões e assim, será direcionado pela vacina MRV. Quando a análise dos dados do paciente é restrita a pacientes com câncer pulmonar estágio 3B, a comparação de curvas de sobrevivência ainda mais claramente ilustra o benefício do tratamento da MRV. Como ilustrado na Figura 11, um ano de sobrevivência de câncer pulmonar estágio 3B em pacientes tratados com MRV foi 76%, em comparação com apenas 53% para o grupo não MRV pulmão 2 e 23% para um grupo de base de dados SEER. Sobrevivência de 3 anos do grupo MRV foi 3 vezes que os pacientes não MRV e mais do que 6 vezes o registro de SEER. Nenhum do grupo não MRV sobreviveu por 5 anos, enquanto 14% de pacientes estágio 3B tratados com MRV estavam ainda vivos 5 anos após diagnóstico. No contexto de uma doença como câncer pulmonar inoperável estágio 3B que é considerado terminal e tem uma taxa geral de sobrevivência de 5 anos de somente 3% (registro SEER), os resultados acima são extremamente encorajantes e supreendentes.

[318] Como alguns pacientes não tiveram a sua primeira visita por muitos meses ou até mesmo um ou dois anos após diagnóstico, sua inclusão em uma curva de sobrevivência inclina a curva em uma direção de maior sobrevivência. A fim de determinar se este viés influenciou a diferença nas curvas de sobrevivência, a sobrevivência foi analisada a partir da data da primeira visita que exclui este viés, como ilustrado na Figura 12. Comparação de curvas de sobrevivência de pacientes com câncer pulmonar estágio 3B na Figura 12 demonstra um benefício de sobrevivência ainda maior para o tratamento com MRV do que o ilustrado na Figura 11, indicando que o benefício do tratamento da MRV foi parcialmente mascarado na Figura 11. Como ilustrado na Figura 12, sobrevivência de 1 ano (a partir de data da primeira visita) de pacientes com câncer pulmonar estágio 3B tratados com MRV foi de 57%, em nó somente 21% para pacientes estágio 3B não tratados com MRV. Enquanto nenhum paciente com câncer pulmonar estágio 3B não tratados com MRV sobreviveu por 3 anos, 3 anos de sobrevivência de pacientes estágio 3B tratados com MRV foi 33% e sobrevivência de 5 anos foi de 14%, um resultado notável e inesperado.

[319] Quando a análise se limitava aos pacientes de câncer pulmonar estágio 3B cuja primeira visita dentro de 3 meses do diagnóstico, os benefícios do tratamento precoce com MRV são claramente ilustrados. Como ilustrado na Figura 13, enquanto todos os pacientes com câncer pulmonar estágio 3B que tiveram a sua primeira visita no prazo de 3 meses do diagnóstico morreram dentro de 1 ano do diagnóstico, 70% de pacientes com câncer pulmonar estágio 3B tratados com MRV dentro de 3 meses do diagnóstico sobreviveram por 1 ano, 40% sobreviveu por 3 anos e 20% sobreviveram por 5 anos, um benefício de sobrevivência verdadeiramente notável para tratamento precoce de MRV.

[320] Um aspecto da invenção envolve o tratamento de câncer pulmonar primário ou metástase para o pulmão com composições antigênicas que compreendem os determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por serem patógenos de pulmão, como patógenos de pulmão exógenos ou patógenos que são membros da flora endógena do sistema respiratório. Por exemplo, determinantes antigênicos das espécies de flora respiratória bacteriana endógena que mais comumente causam infecção no pulmão (ver tabela 5) podem ser usadas para tratar câncer primário e metastático situado no pulmão: Streptococcus pneumoniae, Moraxella catarrhalis, Mycoplasma pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Haemophilus influenza. Da mesma forma, patógenos virais de pulmão comuns da tabela 5 podem ser selecionados para uso em algumas modalidades. Alternativamente, uma lista mais exaustiva de patógenos pulmonares endógenos é selecionada da tabela 1, com base nas informações de patogenicidade, fornecidas na tabela 2. Em outras modalidades alternativas, patógenos virais pulmonares listados na tabela 4 podem ser utilizados. E em outras modalidades alternativas, patógenos bacterianos pulmonares exógenos da tabela 3 podem ser utilizados na formulação de composições antigênicas da invenção, ou seja selecionado do grupo constituído por: Achromobacter spp., Actinomadura spp., Alcaligenes spp., Anaplasma spp., Bacillus anthracis, outros Bacillus spp., Balneatrix spp., Bartonella henselae, Bergeyella zoohelcum, Bordetella holmesii, Bordetella parapertussis, Bordetella pertussis, Borrelia burgdorferi, Borrelia recurrentis, Brucella spp., Burkholderia gladioli, Burkholderia mallei, Burkholderia pseudomallei, Campylobacter fetus, Capnoctyophaga canimorsus, Capnoctyophaga cynodegmi, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia psittaci, Chlamydophila pneumoniae, Chromobacterium violaceum, Chlamydophila psittaci, Chryseobacterium spp., Corynebacterium pseudotuberculosis, Coxiella burnetii, Francisella tularensis, Gordonia spp., Legionella spp., Leptospirosis spp., Mycobacterium avium, Mycobacterium kansasii, Mycobacterium tuberculosis, outros Mycobacterium spp., Nocardia spp., Orientia tsutsugamushi, Pandoraea spp., Pseudomonas aeruginosa, outras Pseudomonas spp., Rhodococcus spp., Rickettsia conorii, Rickettsia prowazekii, Rickettsia rickettsiae, Rickettsia typhi.

[321] Por exemplo, uma vez que as composições MRV contêm muitos dos patógenos pulmonares mais comuns, estas vacinas podem ser usadas para tratar câncer pulmonar primário ou metástase pulmonar, como ilustrado nos dados cumulativos apresentados aqui, e em um número de relatos de casos. De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de câncer pulmonar primário ou metástase para o pulmão com composições antigênicas que compreendem os determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por serem patógenos de pulmão, como patógenos de pulmão exógenos ou patógenos que são membros da flora endógena do sistema respiratório. Em modalidades selecionadas, determinantes antigênicos dos patógenos pulmonares comuns podem ser utilizados para tratar cânceres primários e metastáticos situados no pulmão, por exemplo, determinantes antigênicos de um ou mais das seguintes espécies bacteriana ou virais a seguir: Streptococcus pneumoniae, Moraxella catarrhalis, Mycoplasma pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Haemophilus influenza, vírus da Influenza, adenovírus, vírus sincicial respiratório, e parainfluenza. Em outras modalidades selecionadas, determinantes antigênicos de Streptococcus pneumoniae, a mais comum causa de infecção pulmonar bacteriana, pode ser usado ou sozinho com outros dos patógenos mais comuns do pulmão para tratar o câncer de pulmão.

[322] Câncer pulmonar primário também pode surgir de tecido bronquial e, portanto, em algumas modalidades, composições antigênicas que compõem os determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por causar infecção bronquial podem ser usados para tratar pacientes com câncer localizado no tecido bronquial, incluindo, por exemplo, as seguintes causas comuns de infecção bronquial: Mycoplasma pneumoniae, Chlamydophila pneumoniae, Bordetella pertussis, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, vírus da Influenza, adenovírus, rinovírus, coronavírus, parainfluenza, vírus sincicial respiratório, metapneumovírus humano, ou coxsackievírus. Câncer pulmonar (ou metástases pulmonares) que situam-se no tecido pulmonar e bronquial podem ser tratados com composições antigênicas que compreendem os determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por causarem infecção pulmonar e bronquial (por exemplo, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae e Mycoplasma pneumoniae são todos patógenos comuns de pulmão e bronquial) ou em alternativa, com composições antigênicas que compreendem os determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por causarem infecçãopulmonar e determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecido por causarem infecçãobronquial.EXEMPLO 1B: Câncer de Mama com Metástase ao osso ou pulmão

[323] A causa mais comum de ambas infecção de mama e infecção óssea é Staphylococcus aureus. Assim, em um aspecto da invenção, uma composição antigênica compreendendo determinantes antigênicos de S. aureus pode ser usada para tratar câncer da mama com metástases ao osso. O caso notável de Paciente R (PtR), tratado com uma vacina Staphylococcus aureus, definida abaixo nos relatórios de caso, ilustra a eficácia desta abordagem para o tratamento de câncer de mama com metástases ósseas. Como ilustrado na Figura 6, em uma série cumulativa de 52 pacientes, sobrevivência de pacientes com câncer de mama com metástases ao osso, e/ou pulmão tratados com MRV (n=19), que contém o Staphylococcus aureus, foi melhor do que a sobrevivência de pacientes não tratados com vacina MRV (n=33):sobrevivência pacientes MRV % sobrevivência pacientes não MRV10 meses 95% 76% 5 anos 26% 18%

[324] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de câncer primário em mama o tratamento de câncer primário de mama ou metástase à mama com composições antigênicas que compreendem os determinantes antigênicos de micróbios que são conhecidos por causar infecção de mama, e tratamento de câncer primário do osso ou metástase ao osso com composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de espécie bacteriana ou vírus que são conhecidos por causar infecção óssea. Em modalidades selecionadas, uma vacina compreendendo determinantes antigênicos de Staphylococcus aureus, a causa mais comum de infecção de mama e óssea, pode ser usada sozinha ou em combinação com outro dos patógenos mais comuns de mama para tratar câncer na mama, ou sozinha ou em combinação com outros dos patógenos mais comuns do osso para tratar câncer no osso.EXEMPLO 1C: Metástases ao osso

[325] Um dos locais mais comuns para metástases em pacientes com câncer de próstata é o osso. Em um aspecto da invenção, a composição MRV, que contém determinantes antigênicos de S. aureus, a causa mais comum de infecção óssea, podem ser utilizada para o tratamento de metástases ao osso, por exemplo, em que pacientes que têm ou que tiveram um câncer da próstata primário. O gráfico da Figura 7 é uma comparação de sobrevivência de uma série cumulativa de pacientes com câncer de próstata metastático que teve cirurgia ou radiação para destruir sua glândula próstata (e, assim, o tumor primário) e que teve câncer limitado detectável à metástase óssea. Como ilustrado, a sobrevivência de pacientes tratada com MRV (n=4) é substancialmente melhoro do que de pacientes não tratados com MRV (n=7):% sobrevivência pacientes MRV % sobrevivência pacientesnão MRV 2 anos 100% 57%3 anos 75% 43%5 anos 50% 0%

[326] De acordo com os resultados anteriores, umaspecto da invenção envolve o tratamento de cânceres ósseosprimários ou metástases ao osso com composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por causar infecção óssea, como um patógeno exógeno ou patógenos que são membros da flora endógena da pele, boca ou cólon. Por exemplo, em modalidades selecionadas, determinantes antigênicos de uma ou mais das seguintes espécies microbianas a partir da lista de patógenos comuns podem ser utilizados para o tratamento de cânceres primários e metastáticos situados no osso: Staphylococcus aureus, staphylococci coagulase-negativa, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus agalactiae, outros streptococci spp., Escherichia coli, Pseudomonas spp., Enterobacter spp., Proteus spp., Serratia spp., parvovírus B19, rubéola, hepatite B. Em outras modalidades selecionadas, Staphylococcus aureus, a causa mais comum de infecção óssea, pode ser usada sozinha ou com outros dos patógenos mais comuns do osso para tratar câncer do osso. EXEMPLO 1D: Câncer situado no Cólon

[327] Tratamento com a composição PVF demonstrou melhorar a sobrevivência de pacientes do câncer de cólon (ver Figura 8), como ilustrado por uma comparação entre os seguintes quatro grupos de pacientes de câncer do cólon: Pacientes com câncer de cólon Estágio 4 que foram tratados com a MRV.Pacientes com câncer de cólon Estágio 4 que não foram tratados com uma vacina.Pacientes com câncer de cólon Estágio 4 que foram tratados com vacina PVF.Pacientes com câncer de cólon Estágio 4 de base de dados SEER (Surveillance, Epidemiology and End Results).

[328] Este exemplo ilustra que pacientes com câncer de cólon tratados com PVF, que contém E. coli, a causa mais comum de infecção bacteriana do cólon, tiveram sobrevivência substancialmente melhorada.

[329] Pacientes qualificados para os dois primeiros grupos de estudo se apresentaram com câncer de cólon Estágio 4. Pacientes foram excluídos da análise pelas seguintes razões: diagnóstico incorreto Estágio incorreto falta de dados essenciais (por exemplo, data da morte) nenhum gráfico gráfico não nos chegou a tempo para a análise de dados.

[330] O grupo de pacientes incluiu um total de 136 pacientes com câncer de cólon Estágio 4: 15 que tomaram a vacina PVF, 56, que tomaram a vacina MRV, e 65 que não tomaram a vacina. Os resultados estão ilustrados na Figura 8, como se segue: SEER sem vacina MRV PVFsobrevivência mediana: 8,4 mo. 15,1 mo . 15,0mo. 33,6mo.em 10 meses 45% 69% 71% 100%em 20 meses 24% 42% 36% 67%em 30 meses 14% 29% 23% 52%em 5 anos 5% 6% 7% 10%

[331] A sobrevivência mediada de pacientes comcâncer de cólon estágio 4 tratados com PVF (que contém E.coli, um dos patógenos colônicos mais comuns) foi mais doque duas vezes de pacientes tratados com MRV (que nãocontém patôgenos colônicos) ou paciente s não tratados comuma vacina, e quatro vezes do registro SEER. Todos os 15pacientes tratados com PVF ainda estavam vivos 10 meses após diagnóstico, em comparação a somente 71% do grupo MRV, 69% para o grupo sem vacina e somente 45% para o registro SEER. Sobrevivência em 30 meses para o grupo PFV foi o dobro do grupo MRV e o grupo sem vacina e quase 4 vezes do registro SEER.

[332] O teste de wilcoxon mostra uma diferença de sobrevivência estatisticamente significativa entre pacientes tratados com vacina PVF e ambos o grupo MRV (p = 0,0246) e o grupo sem vacina (p = 0,0433). Isto é notável considerando o tamanho pequeno do grupo PVF (n = 15), indicativo de efeito substancial terapêutico. Como evidenciado por estes resultados, a composição PVF, que contém E. coli a causa mais comum de infecção bacteriana do cólon, é um tratamento efetivo para câncer de cólon.

[333] Sobrevivência destes pacientes que apresentaram tratamento imunológico de acordo com a invenção dentro de 3 meses do diagnóstico (ou seja, excluindo aqueles pacientes que foram sobreviventes de longo prazo antes de se apresentaram para tratamento) também foram analisados. Os resultados desta análise são apresentados na Figura 9. Como ilustrado, as curvas de sobrevivência ‘MRV’ e ‘Sem Vacina’ na Figura 9 são mudadas substancialmente para a esquerda (indicando que um viés de seleção na direção de sobreviventes de ‘longo prazo’ pode artificialmente mudar estas curvas para a direita na Figura 8), enquanto que, notavelmente, a curva PVF na Figura 9 é realmente ainda para a direita do que a curva na Figura 8, indicando que o benefício de tratamento precoce com PVF (ou seja, dentro de 3 meses do diagnóstico) mais do que compensou qualquer tendência de sobrevivência de longo prazo excluído na Figura 9. Esta análise fornece compelir evidência que o benefício de tratamento PVF para câncer de cólon estágio 4 pode ser ainda maior do que o ilustrado na Figura 8, e que quanto mais cedo o tratamento com as composições da invenção é começado após o diagnóstico, maior o benefício.

[334] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de cânceres de cólon com composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos como sendo patógenos de cólon, como patógenos que são membros da flora endógena do cólon ou patôgenos colônicos exógenos. Por exemplo, determinantes antigênicos das espécies microbianas que se seguem podem ser utilizados para tratar cânceres primários e metastáticos situados no cólon: Escherichia coli, Clostridium difficile, Bacteroides fragilis, Bacteroides vulgatus, Bacteroides thetaiotaomicron, Clostridium perfringens, Salmonella enteriditis, Yersinia enterocolitica, Shigella flexneri; adenovírus, astrovírus, calicivírus, norovírus, rotavírus, ou Citomegalovírus. Por exemplo, cânceres situados no cólon podem ser tratados com a composição PVF, que contém E. coli, ou formulações alternativas que incluem somente determinantes antigênicos de patôgenos colônicos. Em modalidades selecionadas, determinantes antigênicos de E. coli, a causa mais comum de infecção bacteriana do cólon, podem ser usados sozinhos ou com determinantes antigênicos de outros patógenos comuns do cólon para tratar o câncer de cólon.EXEMPLO 1E: Uso de Respivax, uma vacina oral para tratar o câncer pulmonar

[335] Vacina oral Respivax foi administrada como descrito acima, com uma dose de um comprimido 50 mg por dia, fornecendo o equivalente de 1,25 x 109 células de cada espécie por dose. Pacientes foram aconselhados a continuar a dose acima por pelo menos 6 meses.

[336] Como ilustrado na Figura 10, a sobrevivência de pacientes com câncer pulmonar estágio 3B que foram tratados com os antígenos orais Respivax foi substancialmente melhor do que pacientes que não foram tratados com a composição antigênica. A sobrevivência média foi de 37 meses para os pacientes tratados com Respivax, em comparação a somente 20 meses para os pacientes não tratados com uma vacina de composição antigênica. 40% de pacientes tratados com Respivax estavam vivos cinco anos após diagnóstico, enquanto que nenhum dos pacientes não tratados sobreviveu por mais do que 2 anos.

[337] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento câncer pulmonar primário ou metástases ao pulmão com administração oral de composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que comumente causam infecção pulmonar. Exemplo 2: Relatos de Casos

[338] Estes relatos de casos são indicativos de pacientes que compõem populações de pacientes refletidas nos estudos cumulativos anteriores, bem como ilustrando aspectos adicionais da invenção. Em particular, relatos individuais de casos de pacientes A - N são ilustrativos dos resultados surpreendentes em alguns pacientes a serem tratados com anti-inflamatórios, enquanto que no caso de relatos de pacientes O - AA são representativos da população de pacientes em geral que inclui muitos exemplos de tratamento com a vacina que foi eficaz na ausência de terapia anti-inflamatória.MRV para o câncer do Pulmão com e sem anti-inflamatórios

[339] Paciente A (PtA): Em setembro do ano 0, PtA desenvolveu dor no peito superior direito com um chiado associado. Estes sintomas persistiram e, em janeiro, de 1 ano, ela teve uma radiografia de tórax que revelou uma grande massa de 7 cm x 8 cm no ápice do pulmão direito. A aspiração com agulha fina foi positiva para o câncer pulmonar de células não-pequenas. Em 27 de janeiro, ano 1, uma ressonância magnética mostrou invasão das artérias subclávias, tornando impossível a ressecção cirúrgica e, portanto, PtA foi diagnosticada com câncer de pulmão estágio 3B inoperável terminal. Ela passou por um pequeno curso de radiação paliativa e diminuiu a quimioterapia. Ela foi informada que tinha câncer terminal com uma expectativa de vida de 3-6 meses.

[340] Em 29 de abril, ano1, PtA começou a terapia com vacina MRV três vezes por semana. Na mesma data, ela também começou com o tratamento com agente anti- inflamatório não-esteroidal (NSAID) indometacina 50 mg quatro vezes ao dia e um regime de suplementos antioxidantes e Vitamina D. 18 meses depois, em outubro, ano 2, o tumor tinha acentuadamente reduzido em tamanho para 3 cm de diâmetro e, até 19 de Maio, ano 5, quatro anos depois de iniciar o tratamento com o regime combinado de vacina MRV, indometacina, vitaminas antioxidantes e Vitamina D, somente cicatrizes residuais permaneceram. PtA continuou com o tratamento desta combinação de vacina MRV e terapias adjuvantes anti-inflamatórias por mais do que 4 anos até o fim de maio, ano 5, momento em que não havia evidência de câncer residual, apesar de um diagnóstico de câncer do pulmão inoperável terminal mais do que 4 anos antes. Mais de 14 anos desde o diagnóstico com câncer do pulmão terminal, PtA continua a sentir-se bem sem nenhuma evidência de câncer residual.

[341] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de câncer pulmonar com administração de composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que comumente causam infecção pulmonar.

[342] De acordo com os resultados anteriores, outro aspecto da invenção envolve a administração das composições imunogênicas repetidamente com relativa frequência durante um período de tempo relativamente longo.

[343] O uso concomitante de agentes anti- inflamatórios, como antioxidantes, vitamina D e indometacina, em conjunto com terapia MRV direcionada, foi associado com sobrevivência substancialmente melhorada, que foi maior do que de outros casos de alguma forma semelhantes, em que estas modalidades adjuvantes anti- inflamatórias não foram usadas em conjunto com as composições da invenção. Por exemplo, paciente B, um caso de alguma forma semelhante em que anti-inflamatórios não foram administrados, foi diagnosticado com câncer pulmonar de célula não pequena estágio 3B inoperável, que foi fatal dentro de 3 meses do diagnóstico. Estes casos fornecem evidência de um efeito sinérgico entre as composições antigênicas da invenção e tratamentos anti-inflamatórios.

[344] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de cânceres com a administração de composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são patogênicos ao órgão ou tecido direcionado, bem como tratamentos adjuvantes anti-inflamatórios, para efeito sinergístico.MRV para o câncer do Pulmão com e sem anti-inflamatórios

[345] Paciente C (PtC): Na primavera do ano 0, PtC começou a sentir dor no lado direito superior da área do peito. Esta dor persistiu e em 5 de outubro, ano 0, ele teve uma radiografia de tórax que revelou uma grande massa de 12 cm x 11 cm ocupando praticamente todo o lobo direito superior. A aspiração com agulha fina foi positiva para o câncer pulmonar de células não-pequenas fracamente diferenciadas. Toracotomia exploratória foi realizada em 7 de dezembro, ano 0, que revelou invasão de tumor da parede torácica e veia cava superior e, portanto, o tumor do PtC era inoperável (ou seja, estágio 3B). PtC sofreu um pequeno curso de radiação paliativa e diminuiu quimioterapia. Ele foi informado que tinha câncer terminal com uma expectativa de vida de 3-6 meses. Em 27 de janeiro, ano 1, o crescimento rápido do tumor tinha aumentado de tamanho para 14 cm x 11,5 cm.

[346] Em 9 de fevereiro, ano1, PtC começou o tratamento com indometacina 50 mg quatro vezes ao dia, vitaminas antioxidantes, e vitamina D. Três Semanas mais tarde, em 1° de março, anol, PtC começou o tratamento com vacina MRV três vezes por semana. Em junho, ano 1, PtC estava se sentindo bem e foi correr oito quilômetros 3-4 vezes por semana. Em 4 de junho, ano 1, um raio-x torácico revelou que o tumor havia reduzido em tamanho para 11 com de diâmetro. PtC continuou a sentir muito bem, levando uma vida plena e ativa com retorno ao pleno emprego e continuou a atividade física completa. PtC continuou com o tratamento de uma combinação da vacina MRV e terapias adjuvantes anti- inflamatórias (indometacina, antioxidantes e Vitamina D) por mais de 16 meses, até 24 de julho, ano 2, tempo em que o tratamento de indometacina foi interrompido (como um resultado de diminuição função renal, um conhecido efeito colateral potencial do uso a longo prazo de indometacina). 6 meses depois, em dezembro, ano 2, após 22 meses de terapia de vacina direcionada, o tratamento com MRV foi interrompido (MRV já não estava mais disponível após esta data). PtC continuou a se sentir bem, até junho, ano 6, momento em que ele foi diagnosticado com uma recorrência de câncer em ambos os pulmões, o que levou à sua morte em 26 de maio, ano 7, mais do que 6,5 anos depois que foi diagnosticado com câncer de pulmão terminal e dito que tinha 3-6 meses de vida.

[347] Neste caso, o uso de agentes adjuvantes anti-inflamatórios, incluindo antioxidantes, vitamina D e indometacina, usado em conjunto com terapia MRV direcionada por mais do que 16 meses, foi associada com sobrevivência substancialmente melhorada em face a um diagnóstico que é geralmente fatal dentro de 1 ano, que foi maior do que daquela de outros casos semelhantes, paciente D, em que estas modalidades adjuvantes modalidades anti-inflamatórias não foram usadas em conjunto com as composições da invenção, e um câncer pulmonar inoperável foi fatal dentro de 8 meses do diagnóstico. Estes casos fornecem evidência de um efeito sinergístico entre as composições antigênicas da invenção e tratamentos anti-inflamatórios.PVF para Câncer do cólon com Metástases ao fígado e pulmão, e sem Anti-inflamatórios

[348] Paciente E (PtE): PtE teve uma ressecção cirúrgica de câncer de cólon em 17 de junho, ano 0, seguido de quimioterapia. Em 15 de agosto, ano 0, foi diagnosticado com câncer estágio 4 com metástases para o fígado e os pulmões, um diagnóstico com um prognóstico muito fraco. Em 20 de outubro, ano 0, PtE começou o tratamento com um antioxidante e vitamina D e, em 10 de dezembro, ano 0, começou o tratamento com a composição PVF três vezes per semana, que ele continuou em combinação com os antioxidantes e vitamina D. Em setembro, ano 1, começou tratamento com CelebrexTM 100 mg duas vezes ao dia. Apesar de um prognóstico inicial muito fraco, PtE estava tranquilo e se sentindo bem no último contato, mais do que 3 anos após diagnóstico com câncer de cólon terminal metastático.

[349] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de câncer de cólon, fígado e pulmão com administração de composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por ser patogênicos no cólon, fígado e pulmão.

[350] Em contraste a PtE, dos 15 pacientes diagnosticados com câncer de cólon estágio 4 e tratados com PVF, o paciente com a sobrevivência mais curta, Paciente F, não foi tratado com anti-inflamatórios. Estes casos fornecem evidências convincentes de que modalidades anti- inflamatórias (ou seja, CelebrexTM, anti-oxidantes e Vitamina D) tomados em conjunto com a terapia PVF direcionada têm um efeito sinérgico, contribuindo para a sobrevivência prolongada de PtE, que era maior do que a de outros casos semelhantes em que estas modalidades adjuvantes anti-inflamatórias não foram utilizadas em conjunto com composições como da invenção.PVF para câncer de cólon com Metástases ao pulmão, com Anti-inflamatórios

[351] Paciente G (PtG): PtG desenvolveu sangramento retal em maio, ano 0, e foi diagnosticado com câncer de cólon. Passou por cirurgia, quimioterapia e radioterapia, mas desenvolveu metástases aos pulmões (câncer estágio 4) em 16 de agosto, ano 1, um diagnóstico terminal com um prognóstico fraco. Ele começou um regime de vitaminas antioxidantes e vitamina D em junho, ano 0, e, em 23 de setembro, ano 1, ele começou a tomar NSAID Celebrex 100 mg duas vezes ao dia. Em março, ano 3, ele começou vacina PVF três vezes per semana, que continuou até abril, ano 4 em cujo tempo desenvolveu metástases cerebrais, que levou a sua morte em 2 de junho, ano 4, quase 3 anos após um diagnóstico de câncer de cólon terminal estágio 4. PtG viveu substancialmente mais do que poderia ser esperado com um diagnóstico de câncer de cólon estágio 4 com metástases aos pulmões. Neste contexto, a invenção fornece para o uso de modalidades anti-inflamatórias em conjunto com composições imunogênicas, como PVF, para efeito sinergístico.

[352] Paciente H (PtH): PtH foi diagnosticado com câncer de cólon com metástases ao fígado e pulmões em 13 de fevereiro, ano 0. Em 11 de Janeiro, ano 1, foi prescrito um regime antioxidante e vitamina D. No entanto, em março, ano 1, entrou em um estudo de pesquisa de quimioterapia e descontinuou estes suplementos no momento da solicitação dos coordenadores do estudo. Ele não foi tratado com qualquer NSAIDs. Em 12 de maio, ano 1, começou tratamento com PVF, que tomou três vezes per semana até sua morte 2,5 meses depois. Quanto contrastado aos casos semelhantes que envolveram o uso de anti-inflamatórios, este caso ilustra que, se modalidades adjuvantes anti-inflamatórias não são administradas concomitantemente com a terapia direcionada antigênica de ativação, há uma falta de efeito sinergístico que poderia de outra forma ocorrer com uso concomitante de modalidades adjuvantes anti-inflamatórias.

[353] Em resumo, em casos de câncer de cólonestágio 4 tratados com terapia de vacina PVF direcionada, o uso de agentes adjuvantes anti-inflamatórios, incluindo antioxidantes, vitamina D e Celebrex, uados em conjunto com terapia de ativação antigênica direcionada, foi associada com sobrevivência substancialmente melhorada, muito maior do que dos dois casos em que estas modalidades adjuvantes anti-inflamatórias não foram usadas em conjunto com a vacina, fornecendo evidência sugestiva de um efeito sinergístico.PVF com e sem Anti-inflamatórios para câncer do pâncreas com Metástases aos pulmões, fígado e Linfonodos Abdominais

[354] Paciente I (PtI): PtI foi diagnosticado com câncer pancreático em agosto, ano 1, em cujo tempo teve cirurgia para remover seu pâncreas (ou seja, procedimento Whipple). No entanto, em julho ano 2, desenvolveu metástases aos pulmões bilateralmente e em fevereiro do ano 4 desenvolveu recorrência de câncer na área pancreática com metástases abdominal e hepática. Este é um diagnóstico terminal com um prognóstico muito fraco. PtI começou um regime de vitaminas antioxidantes, vitamina D, grandes doses de turmerico (curcumina), óleo de peixe (9 gm por dia), resveratrol e chá verde (equivalente de 36 copos por dia) em 27 de setembro, ano 2, todos os quais são modalidades anti-inflamatórias, todas as quais continuou tomando. Em março ano 3, começou tratamento com Celebrex 100 mg duas vezes ao dia, que tomou por mais do que 20 meses. PtI começou tratamento com PVF três vezes per semana em maio ano 4, que continuou o uso regularmente pro mais do que 3 anos. PtI sobreviveu por 5 anos após um diagnóstico de câncer pancreático metastático terminal, uma sobrevivência notadamente prolongada no contexto de um diagnóstico tem um prognóstico extremamente fraco. Este caso fornece evidência de que altas doses de várias modalidades anti-inflamatórias (ou seja, Celebrex, antioxidantes, vitamina D, turmerico, óleo de peixe, resveratrol, chá verde) tomadas em conjunto com as composições PVF, resultou em um efeito sinérgico que contribuiu à sobrevivência de PtI notadamente por 5 anos após o desenvolvimento de câncer pancreático metastático, um diagnóstico que é geralmente fatal dentro de 6 meses.

[355] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de câncer de pâncreas, linfonodos abdominais fígado e pulmão com administração de composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por causaram infecção no pâncreas, linfonodos abdominais, fígado e pulmão.

[356] Paciente J (PtJ) teve um diagnóstico essencialmente idêntico a PtI (ou seja, câncer pancreático com metástases aos linfonodos abdominais, pulmões e fígado). PtJ, que não tomou outros anti-inflamatórios junto com vacina PVF exceto antioxidantes e vitamina D, morreu em 4 meses do diagnóstico, enquanto que PtI, que tomou grandes doses de várias outras modalidades anti-inflamatórias (ou seja, Celebrex, turmerico, óleo de peixe, resveratrol e chá verde) em conjunto com vacina PVF, sobreviveu por 5 anos após diagnóstico. Estes casos fornecem evidência de um efeito sinérgico de altas doses de várias modalidades anti- inflamatórias e terapia de vacina direcionada.MRV para câncer de mama com Metástases ao osso

[357] Paciente K (PtK): Em março, ano 0, PtK desenvolveu dor e pescoço e cabeça, que persistiu. Em 28 de julho, ano 0, ela foi diagnosticada com câncer de mama estágio 4 com metástases à coluna cervical, um diagnóstico incurável. Ela passou por cirurgia para remover dois nódulos mamários (linfonodos axilares positivos) e radiação paliativa para a metástase em sua coluna. Em 18 de Janeiro, ano 1, PtK começou tratamento com doses de antioxidantes e vitamina D, bem como os NSAID indometacina 50 mg quatro vezes ao dia. Três dias depois, em 21 de Janeiro, ano 1, começou tratamento com composição MRV, que contém Staphylococcus aureus o patógeno mais comum de ambos mama e osso. Embora não houve documentação da duração exata de tempo que o tratamento com esta combinação de MRV/indometacina/antioxidante/vitamina D foi continuado, a paciente recebeu vacina suficiente (20 ml) por aproximadamente 2 anos de tratamento na dose e frequência usuais (ou seja, três vezes per semana) e PtK declarou que completou o curso de tratamento recomendado em casa. Notadamente, PtK estava ainda viva no último contato, 13 anos após diagnóstico com câncer de mama estágio 4 metastático com metástases ao osso.

[358] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de câncer de mama e osso com administração de composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por serem patogênicos em infecção de mama e osso.

[359] Em contraste ao Paciente K, Paciente L (PtL) foi diagnosticada com câncer de mama com metástases ao osso em 11 de Outubro, ano 0. Ela não foi prescrita com NSAID ou outros anti-inflamatórios. PtL começou tratamento com MRV em 27 de Fevereiro, ano 1. Ela morreu 9 meses depois em 4 de Novembro, ano 1, justo um a ano após diagnóstico com câncer de mama estágio 4 com metástases ao osso. O contraste entre os casos de alguma forma semelhantes de PtK e PtL ilustra o potencial para tratamento sinérgico com anti-inflamatórios e composições antigênicas da invenção. MRV com e sem Anti-inflamatórios para câncer de mama com Metástases ao osso

[360] Paciente M (PtM): PtM foi diagnosticada com câncer de mama estágio 4 com metástases ao osso em 15 de Junho, ano 0. Ela começou com NSAID Naprosyn 250 mg duas vezes ao dia em uma base contínua para alívio de dor e, em Outubro, ano 3, ela começou doses de antioxidantes e vitamina D. Três meses depois, em 15 de Janeiro, ano 4, ela começou tratamento com vacina MRV (que contém Staphylococcus aureus, o patógeno mais comum de mama e osso) em combinação com estas terapias anti-inflamatórias (ou seja, Naprosyn, antioxidantes e vitamina D). PtM viveu por mais do que 9 anos após sendo primeiramente diagnosticada com câncer de mama estágio 4 metastático com metástases ao osso, uma sobrevivência incomumente longa considerando o prognóstico geral fraco associado com este diagnóstico.

[361] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de câncer de mama e osso com administração de composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por serem causas comuns de infecção de mama e osso.

[362] Em contraste a PtM, Paciente N (PtN): PtN foi diagnosticada com câncer estágio 4 com metástases ao osso em 8 de abril, ano 0. Ela começou doses de antioxidantes e vitamina D em 24 de Abril, ano 0. No entanto, antes de começar MRV, foi prescrita com o afinador de sangue varfarina, suplementação limitante com vitamina E e vitamina C, dois importantes antioxidantes que podem levar a complicações potenciais se suados em conjunto com varfarina. Além disso, NSAIDs não poderiam ser prescritos neste caso uma vez que são contraindicados com uso de varfarina. Em 2 de Junho, ano 1 PtN começou tratamento com MRV. Ela morreu 14 meses depois em agosto, ano 2. Neste contexto, é possível que o uso de terapia com vacina direcionada sem o efeito sinérgico em anti-inflamatórios adjuvantes (ou seja, NSAID, vitamina E e doses terapêuticas de vitamina C) limitou seu benefício potencial.

[363] Em suma, no caso de câncer de mama estágio 4 com metástases ao osso tratado com terapia MRV direcionada detalhada acima, o uso de agentes adjuvantes anti- inflamatórios em conjunto com MRV foi associado com sobrevivência substancialmente melhorada, muito maior do que dos dois casos em que estas modalidades adjuvantes anti-inflamatórias não foram usadas em conjunto com a vacina, fornecendo evidência sugestiva de um efeito sinérgico.MRV para Metástases aos pulmões

[364] Paciente O (PtO) foi diagnosticado em junho, ano 0 com câncer renal com metástases aos pulmões bilateralmente ao osso (fêmur esquerdo). Isto é geralmente considerado como sendo um diagnóstico terminalmente incurável com um prognóstico fraco. Começou tratamento com MRV em 10 de Agosto, ano 0 e continuou tratamento regular (três vezes per semana) por 16 meses (após o qual MRV não estava mais disponível). Em Setembro, ano 0, ele começou 7 meses de tratamento com uma droga experimental, interferon alfa-2a peguilado. Seu fêmur esquerdo foi ‘pinado’ devido ao risco de fratura como um resultado de metástase, mas devido a complicações cirúrgicas, amputação da perna esquerda abaixo do meio da coxa foi requerida. Em Setembro, ano 2, este rim direito cancerígeno foi removido. Em Outubro, ano 2, uma varredura PET não encontrou evidência de câncer cancer nos pulmões e sem evidência de metástase óssea. PtO está vivo sem evidência de câncer em seus pulmões, mais de 9 anos após um diagnóstico de metástase pulmonar bilateral, um resultado notável.

[365] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de metástases ao pulmão com administração de composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por ser patogênicos ao pulmão.MRV para Metástases ao osso e pulmões

[366] Paciente P (PtP) foi diagnosticado com câncer renal em julho, ano 0, e passou por returada de seu rim direito. Em dezembro, ano 4, desenvolveu metástases ao osso (fêmures bilateralmente) e pulmões (bilateralmente). PtP declinou tratamento convencional e começou tratamento com MRV em April, ano 5, o qual continuou regularmente, três vezes per semana, por 18 meses. A saúde de PtP melhorou e ele retornou às atividades normais diariamente. Raios X e imagens do peito e fêmures não mostraram progressão, com doença estável nos pulmões e fêmures durante os 18 meses em que PtP estava em tratamento MRV.

[367] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de câncer de metástases ao pulmão e osso com administração de composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por serem causas comuns de infecção de pulmão e osso. MRV para Metástases aos pulmões

[368] Paciente Q (PtQ) foi diagnosticado com câncer de cólon com provável metástases aos pulmões em junho, ano 0. Naquele tempo, o tumor primário cólon foi totalmente retirado, deixando somente várias metástases pulmonares. PtQ começou tratamento com MRV em 11 de dezembro, ano 0 que continuou três vezes por semana por 4 meses. Em 19 de abril, ano 1, após 6 meses de tratamento com quimioterapia, teve cirurgia para retirar somente lesão pulmonar visível restante, que foi confirmada sendo uma lesão metastática. Um diagnóstico de câncer de cólon com metástases pulmonares teve um prognóstico fraco, mesmo no contexto de quimioterapia seguido por cirurgia para retirar metástases visíveis. Apesar de seu prognóstico original fraco, PtQ permanece em excelente saúde, sem evidência de câncer mais do que 10 anos após seu diagnóstico inicial com metástases ao pulmão e tratamento com MRV. Antígenos S. aureus para câncer de mama com metástase ao osso

[369] Paciente R (PtR): Em maio, ano 0, PtR foidiagnosticado com câncer de mama com metástases ao esterno, fêmur e coluna cervical, um câncer incurável com um prognóstico fraco. Ela foi tratada com radiação e Tamoxifeno. Em maio, ano 4, ela desenvolveu uma área adicional de metástase em sua coluna lombar e ela começou em tratamento com Megace. Em Novembro, ano 4, ela começou tratamento com uma vacina (vacina de lisado Staphage) contendo somente Staphylococcus aureus, a causa mais comum de infecção em ambos mama e osso e, assim, uma formulação selecionada para o tratamento de câncer de mama e osso. Ela continuou terapia regular com esta vacina por 5 anos. Apesar do um diagnóstico de câncer metastático de mama com várias metástases ósseas, PtR sobreviveu por mais do que 17 anos, uma sobrevivência notável no contexto de câncer metastático incurável de mama e um testamento de promessa de terapia com vacina direcionada para o tratamento de câncer de mama.

[370] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de câncer de mama e osso com administração de composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por serem causas comuns de infecção de mama e osso.

[371] Esta modalidade ilustra que uma formulação inclui determinantes antigênicos de alguns dos organismos mais frequentemente patogênicos ou organismos para um tecido pode fornecer vantagens particulares, como é ainda ilustrado nos dados de modelo de camundongo definido abaixo. Ao manter isto, demonstramos efetividade melhorada de Respivax como oposto ao MRV ao tratar cânceres situados no pulmão, refletindo o fato de que a formulação Respivax é de alguma forma mais ideal porque inclui maiores concentrações relativas de espécies patogênicas que mais comumente causam infecção pulmonar (ou seja, 67% de contagem de célula bacteriana de Respivax é compreendida de espécies que mais comumente causam infecção pulmonar, enquanto que somente 30% das vacinas MRV são compreendidas de espécies que mais comumente causam infecção pulmonar).

[372] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve formular as composições antigênicas de modo que determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos como causas comuns de infecção são administrados em prioridade preferencial nas proporções da formulação, com uma causa mais comum de infecção recebendo a maior prioridade preferencial. Por exemplo, a proporção de determinantes antigênicos que são derivados de patógenos que são conhecidos como a causa mais comum de infecção pode ser 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ou 100%.

[373] Assim, em algumas modalidades, a invenção fornece composições antigênicas em que uma proporção liminar de determinantes antigênicos selecionados de acordo com a invenção são usados, em relação a outros determinantes antigênicos na composição. Por exemplo, composições antigênicas podem ter mais do que X% de determinantes antigênicos nestas derivadas de espécies patogênicas (ou comumente patogênicas, ou mais comumente patogênicas), onde X pode, por exemplo, ser 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95 ou 100 (ou qualquer valor inteiro entre 10 e 100). Por exemplo, pelo menos X% de determinantes antigênicos na composição antigênica pode ser específico para patógenos microbianos que são patogênicos (ou comumente patogênicos, ou mais comumente patogênicos) no órgão ou tecido específico do paciente dentro do qual o câncer está situado. Usando uma medida alternativa, do número total de patógenos microbianos na composição antigênica, pelo menos X% pode ser selecionado como sendo patógenos microbianos que são patogênicos (ou comumente patogênicos, ou mais comumente patogênicos) no órgão ou tecido específico do paciente dentro do qual o câncer está situado. Em algumas modalidades, a composição antigênica pode assim consistir essencialmente de determinantes antigênicos de um ou mais patógenos microbianos que são cada um patogênico no órgão ou tecido específico dentro do qual o câncer está situado. Em modalidades selecionadas, a composição antigênica pode consistir essencialmente ou totalmente de determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são comumente patogênicos no órgão ou tecido específico dos pacientes com os quais o câncer está situado. Em outras modalidades selecionadas, a composição antigênica pode consistir essencialmente ou totalmente de determinantes antigênicos de um patógeno microbiano (ou patógenos) que são mais comumente patogênicos no órgão ou tecido específico dos pacientes com os quais o câncer está situado.

[374] No contexto de vários aspectos da invenção, organismos são caracterizados pela frequência com as quais são patogênicos. Neste contexto, a invenção ainda se refere à frequência com a qual a flora endógena é patogênica. Para esclarecimento, com relação a isto, as caracterizações aqui de uma frequência de patogenicidade, como a designação "comumente patogênica" se refere, em geral, à proporção de infecções em um órgão ou tecido particular que são comumente atribuídos a um organismo particular, e não à frequência com a qual colonização microbiana de um tecido é convertido a uma infecção patogênica. Na América do Norte, a maior parte de infecções humanas é entendida como causada por organismos endógenos, mesmo embora estes organismos comumente estão presentes como parte da flora endógena sem causar infecção. Por exemplo, enquanto S. pneumonia é uma causa comum de infecção pulmonar (ou seja, pneumonia) em humanos (e, assim, é designado “comumente patogênico” no pulmão), este é, não obstante, ainda verdadeiro que S. pneumoniae é comumente presente como parte da flora endógena de trato respiratório sem causar infecção, e, assim, na natureza de uma colonização endógena, não é normalmente patogênica.MRV para mieloma múltiplo

[375] Paciente S (PtS) foi diagnosticado com mieloma múltiplo (estágio 3A) no outono de ano 0, com várias lesões na varredura óssea, incluindo crânio, úmeros e pélvis. Ele foi tratado com quimioterapia padrão (melfalan e prednisona) por 6 meses. No entanto, em Dezembro, ano 3, ele desenvolveu uma fratura patológica de seu fêmur direito como um resultado de sua doença, que requereu fixação e radiação local. Em 28 de Abril, ano 4, PtS começou tratamento com MRV, que contém Staphylococcus aureus uma causa comum de septicemia, que ele continuou por mais do que 13 anos até está vacina não estar mais disponível em Dezembro, ano 17. Notadamente, PtS ainda está vivo quase 25 anos após ser diagnosticado com mieloma múltiplo, um resultado verdadeiramente extraordinário considerando sem diagnóstico ‘terminal’.

[376] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de cânceres hematológicos administração de composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por causarem septicemia.

[377] De acordo com os resultados anteriores, e como ilustrado em outros relatos de caso de paciente detalhado aqui, outro aspecto da invenção envolve a administração das composições imunogênicas repetidamente com relativa frequência durante um período de tempo relativamente longo, como descrito em outra parte aqui.PVF para câncer de cólon com Metástases do fígado e Linfonodos abdominais

[378] Paciente T (PtT) foi diagnosticado com câncer de cólon e foi tratado com retirada do tumor primário (e subsequente quimioterapia) em Setembro ano 0. Dez meses depois, ela desenvolveu uma metástase ao fígado, que foi cirurgicamente retirado em julho ano 1. PtT permaneceu bem até Junho do ano 7, quando foi diagnosticada com doença recorrente- uma massa inoperável de linfonodos abdominais em íntima proximidade da aorta e coluna, obstruindo o ureter esquerdo, requerendo inserção de tubo de nefrostomina. PtT foi considerada terminal e tratada com radiação paliativa em Outubro do ano 7. Ela começou tratamento com PVF em 17 de Novembro, ano 7, que continuou cada segundo dia. PtT sobreviveu por quase 4 anos após ser diagnosticada com câncer de cólon metastático recorrente terminal.

[379] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de câncer em linfonodos abdominais com administração de composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por causaram infecção em linfonodos abdominais.MRV para Metástase à Pele e Períneo

[380] Paciente U (PtU) foi diagnosticado com câncer de cólon e foi tratado com retirada de tumor primário em Novembro ano 0. Ele foi diagnosticado com câncer estágio 4 em Julho ano 2 com metástases ao períneo (ou seja, área de tecido mole peri-anal/genital) e pele. Teve outra cirurgia para remover a maior parte do câncer possível no períneo (câncer se estende após margens cirúrgicas) com acompanhamento de radiação e quimioterapia. Somente locais com câncer conhecidos restantes estavam na pele e períneo. PtU começou tratamento com MRV, que contém Staphylococcus aureus uma causa comum de infecção de pele e perineal, em 25 de maio, ano 3, que continuou três vezes per semana por 5 meses. Apesar de seu prognóstico fraco original, PtU está em excelente saúde mais do que 10 anos após seu diagnostico com câncer estágio 4 com metástases ao períneo e pele.

[381] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de câncer de pele e períneo osso com administração de composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por serem causas comuns de infecção na pele e períneo. PVF para Metástases ao peritônio

[382] Paciente V (PtV) foi diagnosticado com câncer de mama em maio, ano 0, em cujo tempo ela teve uma mastectomia com quimioterapia adjuvante. Em Janeiro, ano 12, ela desenvolveu dor abdominal e ascites e foi diagnosticada com metástases peritoneais, um diagnóstico com um prognóstico fraco. Em 5 de Agosto, ano 12, PtV começou tratamento com PVF, que contém E. coli uma causa comum de infecção peritoneal, que ela continuou regularmente por 1 ano. Seus marcadores de tumor e ascites reduziram e, em Agosto ano 13, após um ano de tratamento PVF, ela teve cirurgia abdominal para uma condição médica não relacionada, em cujo tempo o cirurgião não pode encontrar evidência de câncer peritoneal anterior. PtV descontinuou o uso de vacina. PtV estava ainda viva no último contato, 3 anos e 9 meses após ser diagnosticado com metástases peritoneal terminal.

[383] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de metástases peritoneais com administração de composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por causarem infecção peritoneal. PVF para câncer ovariano e pélvico

[384] Paciente W (PtW) foi diagnosticado com estágio 3B de câncer ovariano fracamente diferenciado no outono de ano 0. Ela teve cirurgia em Novembro ano 0, com remoção do ovário esquerdo, mas o câncer não pode ser totalmente retirado e, assim, ela estava em risco extremo por recorrência. Ela teve um curso completo de quimioterapia pós operatória. No entanto, no ano 2 seus marcadores tumorais começaram a aumentar em Janeiro ano 3 ela foi diagnosticada com uma recorrência em sua área de ovário direito. Ela teve cirurgia para remover sua massa ovariana direita em Fevereiro ano 3, mas novamente o câncer não pode ser completamente retirado e ela seguiu a quimioterapia. No entanto, uma vez novamente em Dezembro ano 3 ela desenvolveu outra recorrência na área pélvica e linfadenopatia retroperitoneal. Ela começou tratamento com vacina PVF, que contém E. coli uma causa de infecção ovariana e pélvica, em Janeiro 5, ano 4, que ela continuou por 6 meses. Seus marcadores tumorais, que elevaram a 2600, caíram para a faixa de 300. PtW estava viva e se sentindo bem no último contato, 2 anos e 9 meses depois de ser diagnosticada com câncer ovariano recorrente. Deve-se notar a queda nos marcadores tumorais após tratamento PVF.

[385] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de câncer ovariano e pélvico com administração de composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por causarem infecção em áreas de ovário e pélvica.MRV para Linfoma não Hodgkin folicular

[386] Paciente Y (PtY): foi diagnosticado com Linfoma não Hodgkin folicular estágio 4A, com linfadenopatia extensiva marcada (ou seja, glândulas linfáticas aumentadas). Ele declinou todo o tratamento convencional. PtY começou tratamento com composição MRV, que contém muitos dos patógenos que comumente causam infecção de linfonodos de áreas de cabeça e pescoço, axila, mediastino e inguinal. Além disso, começou tratamento com um regime de multi-vitamínico/suplemento, dieta saudável e outros tratamentos de melhora imunes. Ele continuou o uso regular desta vacina por mais do que 3 anos, em cujo tempo suas glândulas linfáticas começaram a reduzir grandemente e ele estava se sentindo bem. Esta resolução de linfadenopatia continuou, e as imagens mostraram resolução completa de linfadenopatia extensiva anterior. PtY estava se sentindo bem e não havia linfadenopatia palpável: uma recuperação claramente notável. Cinco anos após seu diagnóstico inicial com Linfoma não Hodgkin folicular Estágio 4A, PtY não tinha evidência de recorrência e estava levando uma vida ativa e saudável. Tratamento com vacina MRV resultou em remissão completa de seu linfoma não Hodgkins folicular estágio 4A.

[387] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de linfoma com administração de composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por serem causas comuns de infecção de linfonodos na região em que o linfoma está localizado. PVF para câncer de cólon com Metástases ao fígado e rins

[388] Paciente Z (PtZ) foi diagnosticado com disseminação metastática de câncer de cólon anteriormente tratado, com uma metástase ao fígado e prováveis outras metástases a ambos os rins. A metástase de fígado foi retirada. O prognóstico para este estágio (ou seja, estágio 4) de câncer de cólon é fraco e o benefício de outro tratamento convencional (ou seja, quimioterapia) é limitado. PtZ declinou quimioterapia inicialmente. Três meses após diagnóstico com câncer de cólon metastático, PtZ começou tratamento com Polivaccinum Forte (PVF), que contém E. coli, uma causa comum de infecção do cólon, fígado e rins. Além disso PtZ começou tratamento com um regime multi-vitamínico/suplemento e dieta saudável. Ele continuou uso regular desta vacina e o regime de vitamina e suplemento, e começou quimioterapia. Embora o curso geral desta doença foi lentamente progressivo, com desenvolvimento de metástases ao pulmão e recorrência de metástases ao fígado, 28 meses após o diagnóstico inicial de doença metastática, seu peso foi estável e níveis de energia foram bons. Três anos (36 meses) após diagnóstico de câncer de cólon estágio 4, PtZ estava se sentindo bem exceto com náusea e perda de peso leve relacionado à quimioterapia.

[389] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de câncer de cólon, fígado e rins com administração de composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por ser patogênicos no cólon, fígado e rins.PVF para câncer de cólon com Metástases ao fígado, Linfonodos de Porta Hepática e pulmão

[390] Paciente AA (PtAA) foi diagnosticado com câncer de cólon metastático com metástases ao fígado, linfonodos portahepáticos e pulmões. O prognóstico para este estágio (ou seja, estágio 4) de câncer de cólon é fraco (ou seja, câncer ‘terminal’) e o benefício de outro tratamento convencional (ou seja, quimioterapia) é limitado. PtAA começou quimioterapia, mas descontinuou o tratamento aproximadamente 5 meses após o diagnóstico devido a efeitos colaterais, em cujo tempo começou tratamento com Polivaccinum Forte (contendo espécie bacteriana que causa infecção n o cólon, fígado, linfonodos abdominais e pulmões) cada segundo dia bem como um regime multi-vitamínico/suplemento e uma dieta saudável. Varreduras de CT subsequentes de PtAA demonstraram linfonodos porta hepática necróticos inalterados em tamanho a partir do momento de seu diagnóstico e sem alteração no tamanho da metástase do pulmão, embora as duas metástases hepáticas cresceram moderadamente em tamanho (3,4 cm para 4,5 cm e 1,2 cm para 3,0 cm). Apesar de um prognóstico muito fraco, PtAA continuou a cair bem quase um ano após um diagnóstico de câncer terminal.

[391] De acordo com os resultados anteriores, um aspecto da invenção envolve o tratamento de câncer de cólon, fígado, linfonodos abdominais e pulmões com administração de composições antigênicas que compreendem determinantes antigênicos de patógenos microbianos que são conhecidos por ser patogênicos no cólon, fígado, linfonodos abdominais e pulmões.EXEMPLO 3: Patógenos microbianos

[392] Em aspectos alternativos, a invenção utiliza antígenos microbianos, como antígenos bacterianos ou virais, para formular composições antigênicas, onde a espécie microbiana é selecionada com base no tecido ou órgão dentro do qual o micróbio é conhecido por causar infecções. A flora bacteriana residente são os patógenos bacterianos mais comuns, contam para a ampla variedade de infecções bacterianas na maioria dos animais, incluindo humanos. A flora residente pode, por exemplo, infectar através de ligação primária, ou ligação e invasão após dano de mucosa, resultando, por exemplo, em dano vascular, trauma, insulto químico, ou dano resultando de infecção primária.

[393] Para patógenos microbianos, a virulência e potencial infecção é uma combinação da capacidade de o micróbio em aderir, para produzir enzimas, para sobreviver a imunoprodutos (complemento, anticorpo) e para sobreviver á atividade microbicida de macrófago e neutrófilos. Algumas bactérias, incluindo bactéria endógena, podem ser suficientemente virulentas como para causar infecções monomicrobianas, enquanto outras são mais efetivas com a sinergia de infecção polimicrobiana. Em geral, é frequente não possível de precisar sobre o papel específico de micróbios individuais dentro dos arredores de infecção misturada. Como a infecção aguda pode, em alguns casos, fornecer mais estímulo imune ideal, assim, em algumas modalidades, a invenção utiliza espécies microbianas que estão envolvidos na infecção aguda.

[394] Em algumas modalidades, as bactérias que são membros da flora endógena de uma região particular podem ser usadas para formular composições antigênicas da invenção. As linhas da tabela 6 listam um número de espécie bacteriana, junto com as regiões biológicas em que cada espécie pode formar uma parte da flora endógena. Por exemplo, Abiotrophia spp. são tipicamente membros da flora endógena do trato respiratório e da boca.Tabela 6: Flora Bacteriana Normal Humana (Patógenos humanos bacterianos endógenos)

[395] Flora microbiana endógena, como bactéria, tem acesso a tecidos para patogênese através de dispersão contígua ou dispersão bacterêmica. Em condições favoráveis, todos os organismos endógenos podem se tornar patogênicos e invadir localmente e se espalhar por dispersão contígua para tecidos e órgãos adjacentes. Flora bacteriana endógena da pele, boca e cólon são as espécies que são entendidas por ainda ser responsáveis por dispersão bacterêmica. Bactérias que são membros de uma flora endógena particular podem, portanto, causar infecção em tecidos ou órgãos aos quais estas bactérias podem se espalhar. Assim, um aspecto da invenção envolve o uso de patógenos microbianos endógenos para tratar um câncer de um tecido ou órgão ao qual a bactéria endógena pode se espalhar para causar infecção. As colunas da tabela 2 listam 9 domínios para flora endógena: pele, sistema respiratório, genitais, sistema GU, boca, estômago, duodeno/jejuno, íleo e cólon. As linhas da tabela 7 listam órgãos ou tecidos dentro dos quais cânceres podem ser situados. Assim, um aspecto da invenção envolve o uso de patógenos microbianos endógenos para formular composições antigênicas, ou a seleção de formulações existentes contendo os patógenos, para tratar cânceres situados em tecidos ou órgãos aos quais o patógeno pode se espalhar para causar uma infecção. Assim, em modalidades alternativas, tumores situados nos tecidos ou órgãos listados na primeira coluna da tabela 7 podem ser tratados com composições antigênicas compreendendo determinantes antigênicos que são específicos para patógenos microbianos que são membros da flora endógena de um ou mais domínios da flora endógena listada na primeira linha da tabela 7 e indicado com um X ou uma marca de verificação na linha apropriada. Por exemplo, tumores situados na próstata podem ser tratados com uma composição antigênica contendo determinantes antigênicos específicos para um patógeno microbiano ou patógenos endógenos ao sistema GU e/ou sistema genitário. Um número de espécie bacteriana que são endógenas aos domínios de flora endógena listados na tabela 7 é listado, com os domínios de flora endógena correspondente, na tabela 6. Assim, um aspecto da invenção envolve o tratamento de um câncer situado em um tecido listado na tabela 7 com uma composição antigênica compreendendo determinantes antigênicos da espécie bacteriana que são listados na tabela 6, onde as regiões da flora endógena ligadas ao local do tumor na tabela 7 combinam com as regiões de flora endógena ligada à espécie bacteriana na tabela 6.Tabela 7: Patogenicidade em Tecido/Órgão de Flora Endógena

[396] Bactérias têm acesso aos tecidos/órgãos através de: Disseminação contígua (X) ou disseminação bacterêmica: (□).

[397] De acordo com as informações combinadas nas tabelas 6 e 7, cânceres localizados nos tecidos ou órgãos estabelecidos na coluna 1 da tabela 7 podem ser tratados com composições antigênicas compreendendo determinantes antigênicos das correspondentes espécie bacteriana da tabela 6, de modo que os títulos da colina na tabela 7 estão em efeito substituído com a espécie bacteriana da tabela 6.

[398] Em algumas modalidades, patógenos microbianos para uso na invenção podem ser patógenos bacterianos exógenos. Por exemplo, os organismos listados na tabela 8 podem ser usados como patógenos microbianos para formular composições antigênicas, ou composições antigênicas contendo aqueles patógenos podem ser selecionadas, para uso para tratar cânceres situados nos tecidos ou órgãos listados com o organismo relevante na tabela 8. Em algumas modalidades, determinantes antigênicos de ambas espécies bacterianas endógenas e exógenas direcionadas a um tecido ou órgão específico podem ser usadas em combinação. Por exemplo, uma composição antigênica derivada de, ou específica para, Clostridium difficile, pode ser usada para tratar um câncer situado no cólon.Tabela 8 Patógenos humanos bacterianos exógenos, e seus locais de infecção

[399] Em algumas modalidades, patógenos microbianos para uso na invenção podem ser patógenos virais. Tabela 9 fornece uma lista exemplar de patógenos virais junto com o local do tecido e órgão para o qual cada espécie viral é reportadamente um patógeno. Assim, um aspecto da invenção envolve utilizar composiçõesimunogênicas que são específicas para os vírus nomeados para tratar um câncer situado nos órgãos ou tecidos que são identificados adjacentes ao nome do vírus na tabela 9. Por exemplo, uma composição antigênica derivada de, ou específica para, um vírus vaccinium, pode ser usada para tratar um câncer situado na pele, tecidos hematológicos, linfonodos, cérebro, medula espinhal, olho ou coração. Tabela 9 Patógenos humanos virais, e seus locais de infecção

[400] As informações cumulativas nas tabelas 6 a 9 fornece uma identificação extensiva de patógenos microbianos que podem ser usados na formulação de composições antigênicas da invenção, junto com uma identificação de tecidos ou órgãos em que estes organismos que um câncer está situado que pode ser tratado com a formulação antigênica.

[401] Em algumas modalidades, o patógeno microbiano selecionado para uso nas composições antigênicas da invenção pode ser um que é uma causa comum de infecção aguda no tecido ou órgão em que o câncer a ser tratado está situado. A tabela 10 identifica patógenos bacterianos e virais deste tipo, junto com os tecidos e órgãos em que comumente causam infecção. Assim, em modalidades selecionadas, um câncer que reside em um tecido identificado na primeira coluna da tabela 10 pode ser tratado com uma composição antigênica que compreende determinantes antigênicos para um ou mais dos organismos patogênicos listados na segunda coluna da tabela 10. Por exemplo, um câncer situado na pele pode ser tratado com uma composição antigênica compreendendo determinantes antigênicos de um ou mais dos seguintes organismos: Staphylococcus aureus, streptococci beta hemolíticos grupo A, B, C e G, Corynebacterium diptheriae, Corynebacterium ulcerans, Pseudomonas aeruginosa, rubéola, rubéola, varicela-zoster, Ecovírus, coxsackievírus, adenovírus, vaccinia, herpes simplex, ou parvo B19.Tabela 10: Causas comuns de infecção aguda (Bacteriana eVírus) para cada local de tecido/Órgão

[402] Em modalidades selecionadas, patógenos microbianos particulares podem estar situados para tratamento de cânceres particulares, exemplos de modalidades selecionadas são definidos na tabela 10. Estas são modalidades exemplares, e não uma lista exaustiva de formulações alternativas para uso de acordo com a invenção.

[403] Os micróbios específicos que comumente causam infecção em uma região específica de tecido ou órgão podem variar por localização geográfica. Por exemplo, Mycobacterium tuberculosis é uma causa mais comum de infecção pulmonar em algumas localizações geográficas e populações do que em outras e, portanto, enquanto M. tuberculosis pode não ser um patógeno pulmonar comum em alguns grupos geográficos e população este pode ser um patógeno pulmonar comum em outros. Tabela 10 é então não uma lista exaustiva de patógenos comuns para todas as localizações geográficas e grupos de população. É entendido que um microbiologista clínico especialista na técnica poderia determinar as espécies patogênicas comuns em uma área geográfica particular ou um grupo de população para um local de tecido ou órgão específico de acordo com a invenção. Para uso veterinário, há, claro, patógenos específicos que são comuns em tecidos selecionados de espécies selecionadas, e isto pode ainda variar geograficamente.

[404] Em modalidades selecionadas, a invenção envolve etapas diagnósticas para avaliar a exposição anterior do paciente a patógeno microbiano. Por exemplo, as etapas diagnósticas podem incluir tomar um histórico médico de exposição a patógenos selecionados, e/ou avaliar a resposta imune de um paciente a um patógeno selecionado. Por exemplo, um teste de sorologia pode ser conduzido para anticorpos para patógenos selecionados no soro de um paciente. Em conexão com este aspecto da invenção, determinantes antigênicos de um patógeno microbiano selecionado podem ser escolhidos para uso em uma composição imunogênica em um paciente selecionado em uma indicação diagnóstica que o paciente teve ou não exposição anterior ao patógeno, por exemplo, em virtude da presença de anticorpos a determinantes antigênicos daquele patógeno no soro do paciente.

[405] Em outras modalidades selecionadas, a invenção envolve etapas diagnósticas para avaliar a resposta imunológica de um paciente ao tratamento com uma composição imunogênica selecionada. Por exemplo, as etapas diagnósticas podem incluir avaliar a resposta imune do paciente aos determinantes antigênicos daquela composição imunogênica, por exemplo, usando um teste sorológico para detectar anticorpos aos determinantes antigênicos. Em conexão com este aspecto da invenção um tratamento com uma composição imunogênica selecionada pode ser continuada se a avaliação indica que há uma resposta imunológica ativa aos determinantes antigênicos daquela composição, e o tratamento de vacina pode ser descontinuado, e um tratamento alternativo com uma composição imunogênica diferente pode ser iniciado, se a avaliação indica que não há uma resposta imunológica suficientemente ativa aos determinantes antigênicos da composição imunogênica.

[406] Como discutido no contexto de Paciente R, em modalidades selecionadas, o patógeno microbiano selecionado para uso nas composições antigênicas da invenção pode ser um que é causa mais comum de infecção aguda no tecido ou órgão em que o câncer a ser tratado está situado, que pode fornecer benefício particular como ilustrado pelo caso de Paciente R. Por exemplo, para o tratamento de câncer ósseo, Staphylococcus aureus poderia ser a espécie bacteriana selecionada; para o tratamento de câncer no tecido pulmonar, Streptococcus pneumoniae poderia ser selecionado; para o tratamento de câncer de mama, Staphylococcus aureus poderia ser selecionado; para o tratamento de câncer renal ou de bexiga, Escherichia coli poderia ser selecionado; e para o tratamento de câncer de cólon, Escherichia coli poderia ser a espécie bacteriana selecionada. É entendido que um microbiologista clínico especialista na técnica poderia determinar as espécies frequentemente mais patogênicas, bacteriana ou viral, para cada tecido ou órgão específico de acordo com a invenção. Em modalidades selecionadas, somente determinantes antigênicos do patógeno mais comum para o tecido ou órgão particular poderiam ser usados para tratar cânceres daquele tecido ou órgão. Em modalidades alternativas, determinantes antigênicos do patógeno mais comum para o tecido ou órgão particular poderiam ser usados em combinação com determinantes antigênicos de outros patógenos que são conhecidos ao patogênico naquele tecido ou órgão particular, preferencialmente selecionado a parte de um patógeno mais comum.

[407] Em algumas modalidades, a invenção fornece composições antigênicas em que uma proporção limiar de determinantes antigênicos selecionados de acordo com a invenção são usadas, em relação a outros determinantes antigênicos na composição. Por exemplo, composições antigênicas podem ter mais do que X% de determinantes antigênicos nestas derivadas de espécies patogênicas (ou comumente patogênicas, ou mais comumente patogênicas), onde X pode, por exemplo, ser 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95 ou 100 (ou qualquer valor inteiro entre 10 e 100). Por exemplo, pelo menos X% de determinantes antigênicos na composição antigênica pode ser específico para patógenos microbianos que são patogênicos (ou comumente patogênicos, ou mais comumente patogênicos) no órgão ou tecido específico do paciente dentro do qual o câncer está situado. Usando uma medida alternativa, do número total de patógenos microbianos na composição antigênica, pelo menos X% pode ser selecionado como sendo patógenos microbianos que são patogênicos (ou comumente patogênicos, ou mais comumente patogênicos) no órgão ou tecido específico do paciente dentro do qual o câncer está situado. Em algumas modalidades, a composição antigênica pode assim consistir essencialmente de determinantes antigênicos de um ou mais patógenos microbianos que são cada um patogênico (ou comumente patogênico, ou mais comumente patogênico) no órgão ou tecido específico dentro do qual o câncer está situado. Os seguintes dados ilustram a surpreendente efetividade destas formulações selecionadas:

[408] O uso de MRV (que contém muitos patógenos do trato respiratório comum e Staphylococcus aureus, o patógeno mais comum de mama e osso) demonstrou ser útil para o tratamento de câncer de mama com metástases ao osso (ver Figura 6). No entanto, o benefício de sobrevivência (sobrevivência de pacientes que foram tratados com MRV em comparação aqueles que não foram) foi modesto (ou seja, sobrevivência média de 31 meses par pacientes tratados com a vacina em comparação aos 26 meses para pacientes não tratados com a vacina). Por outro lado, o um paciente (Paciente R) que foi tratado com uma vacina especificamente direcionada para câncer de mama e câncer ósseo (ou seja, contendo somente Staphylococcus aureus, de longe a causa mais comum de infecção de mama e osso) teve um benefício de sobrevivência mais notável, sobrevivendo por mais do que 17 anos. A inclusão, em MRV, de outra espécie bacteriana que não (ou menos comumente) causa infecção óssea e comumente causa infecção em outro local (ou seja, trato respiratório) parece substancialmente reduzir o benefício desta vacina para o tratamento de câncer de mama e osso.

[409] Uma sobrevivência de pacientes com câncer pulmonar estágio 3B tratados com RespivaxTM (ou seja, sobrevivência média de 38 meses e 40% sobrevivência de 5 anos) foi substancialmente maior do que a sobrevivência de pacientes com câncer pulmonar estágio 3B tratados com MRV (ou seja, sobrevivência média de 18 meses e 14% sobrevivência de 5 anos). RespivaxTM contém substancialmente concentrações relativas maiores da espécie bacteriana que comumente cause infecção pulmonar do que a dose MRV. 67% de contagem de célula bacteriana de RespivaxTM é compreendido de espécie bacteriana que são as causas comuns de infecção pulmonar, enquanto que somente 30% da contagem de célula bacteriana de MRV é compreendido de espécie bacteriana que são as causas comuns de infecção pulmonar. Assim, a composição contendo a maior proporção de bactérias que mais comumente causam infecção pulmonar, RespivaxTM, demonstrou ser mais efetivo para o tratamento de câncer pulmonar do que a formulação MRV.

[410] A sobrevivência de pacientes com câncer de cólon estágio 4 tratados com MRV (que não contém somente patógenos do cólon) foi menor do que pacientes não tratados com uma vacina. Isto indica que os tratamentos que usam determinantes antigênicos não são derivados de micróbios que são patogênicos no órgão ou tecido em que o câncer está situado pode não ser somente inefetivo, mas ainda ser prejudicial.

[411] Os Estudos Murinos definidos abaixo, e em particular os dados de modelo de célula cancerígena envolvendo tratamento com determinantes antigênicos Klebsiella pneumoniae sozinho, em comparação ao tratamento com antígenos Klebsiella pneumoniae em conjunto com antígenos adicionais.

[412] Os dados aqui então fornecem evidência de uma gradação aumentada de benefício de patógenos, a comumente patogênicos, a mais comumente patogênicos para o tratamento câncer dentro de um órgão ou tecido específico usando composições antigênicas direcionadas que são derivados de patógenos microbianos que são patogênicos ao órgão ou tecido específico.

[413] Em algumas modalidades, a invenção compreende o uso de vacinas bacterianas ou virais que são aprovados para outros fins (por exemplo, vacina de poliomielite, vacina de H. influenza, vacina meningococcal, vacina pneumococcal, vacina influenza, vacina hepatite B, vacina hepatite A, vacina diftérica, vacina de tétano, vacina pertussis, vacina sarampo, vacina caxumba, vacina rubéola, vacina varicella, vacina BCG, vacina colérica, vacina de encefalite Japonesa, vacina de raiva, vacina tifoide, vacina de febre amarela, vacina varíola, etc.) para uso como tratamentos de câncer selecionando uma vacina contendo um patógeno (ou constituinte antigênico de um patógeno) que é patogênico no órgão ou tecido específico do paciente dentro do qual o câncer está situado consultando tabelas 6-10. Por exemplo, uma vacina S. pneumoniae, seja vacina de célula inteira ou uma vacina compreendida de um ou mais componentes antigênicos de S. pneumoniae (por exemplo, pneumococcal polissacarídeo-23-valente) poderia ser usada para tratar câncer em qualquer um dos seguintes locais em que S. pneumoniae é listado como um patógeno comum na tabela 10: linfonodos pulmonares hilar, cânceres hematológicos, osso, meninges, medula espinhal, olho/órbita, seios, tireoide, brônquios, pulmões, pleura ou peritônio. Como outro exemplo, uma vacina de hepatite B poderia ser usada para tratar câncer em qualquer um dos seguintes locais em que o vírus hepatite B é listado como um patógeno na tabela 9, como a seguir: cânceres de fígado, pâncreas, ou hematológico.

[414] Em algumas modalidades, composições selecionadas e métodos são especificamente excluídos do escopo da invenção. Por exemplo, o uso dos seguintes patógenos microbianos no tratamento de cânceres seguintes é excluído de algumas modalidades, de modo que a invenção reivindicada pode se estender a modalidades particulares com a exceção de um ou mais dos seguintes:a) BCG (Mycobacterium bovis) para o tratamento de câncer de estômago e câncer de cólon, por exemplo, por injeção;b) Mycobacterium w para o tratamento de câncer pulmonar, por exemplo, por injeção;c) Mycobacterium vaccae para o tratamento de câncer pulmonar de célula não pequena, por exemplo, por injeção;d) Corynebacterium parvum para o tratamento de melanoma, por exemplo, por injeção; e) Streptococcus pyogenes para o tratamento de câncer de estômago, por exemplo, por injeção;f) Nocardia rubra para o tratamento de câncer pulmonar ou leucemia mieloide aguda, por exemplo, por injeção;g) Lactobacillus casei para o tratamento de câncer cervical, por exemplo, por injeção;h) Pseudomonas aeruginosa para o tratamento de linfoma e câncer pulmonar, por exemplo, por injeção;i) Vaccinia para o tratamento de melanoma, por exemplo, por injeção;j) Vírus da raiva para o tratamento de melanoma, por exemplo, por injeção;k) Uma composição que consiste de antígenos combinados das seguintes espécies bacterianas para tratamento veterinário (ou, alternativamente, humano), por exemplo, por administração oral, para cânceres primários (ou, alternativamente, metastáticos) situados no pulmão: Streptococcus pneumoniae; Neisseria catarrhalis;Streptococcus pyogenes; Haemophilus influenzae;Staphylococcus aureus; Klebsiella pneumoniae.l) Uma composição que consiste de antígenos combinados das seguintes espécies bacterianas para tratamento veterinário (ou, alternativamente, humano), por exemplo, por administração oral, para cânceres primários (ou, alternativamente, metastáticos) situados no pulmão: Streptococcus pneumoniae; Neisseria catarrhalis;Streptococcus pyogenes; Haemophilus influenzae;Staphylococcus aureus; Klebsiella pneumoniae; Klebsiella ozaenae; Streptococcus viridans.EXEMPLO 4: Estudos Murinos

[415] Nos seguintes estudos murinos, os seguintes materiais comuns foram utilizados: PBS (Gibco), e camundongos foram fêmeas de 7 semana de idade C57BL/6. Exemplo 4A: Câncer do pulmão

[416] Esta seção se refere a um modelo de camundongo de carcinoma pulmonar de Lewis. As vacinas bacterianas usadas neste experimento foram como a seguir: Vacina Streptococcus pneumoniae [células e caldo] (lote #J049-1 [2 x 109]; vacina Klebsiella pneumoniae [células e caldo] (lote #J046-1 [2 x 109]; vacina Staphylococcus aureus [células e caldo] (lote #J041-2 [10 x 109]; vacina Escherichia coli (isolado de cólon) [células e caldo] (lote #J047-1 [6 x 109]; vacina Salmonella enterica [células e caldo] (lote #J31 [15 x 109]; vacina Klebsiella pneumoniae [somente células] (lote #J048-1 [2 x 109]; e somente meio (meio Klebsiella pneumoniae) (lote #J046-1). Os camundongos foram tratados de acordo com os agrupamentos experimentais definidos na tabela 11.Tabela 11: Agrupamentos experimentais para modelo decamundongo de câncer pulmonar

[417] Especificamente, grupos de camundongos foram pré-tratados via subcutânea com vacinas bacterianas nos dias -10, -8, -6, -4, e -2. No dia 0, camundongos foram desafiados via intravenosa com uma dosagem de 10e5 células de carcinoma pulmonar de Lewis (Cedarlane lot# 508714). Depois disso, os camundongos foram tratados via subcutânea com injeções de vacina cada segundo dia pela duração do experimento como definido na tabela 11. Um grupo controle foi tratado com somente meio. Pesos dos animais foram medidos e registrados a cada 4 dias. Quando os camundongos começaram a apresentar morbidade o experimento foi encerrado. Depois disso, todos os camundongos foram humanamente sacrificados e os pulmões foram cirurgicamente removidos e pesados. Os pulmões foram colocados nos frascos com fluido de Buoin e os números dos nódulos do pulmão em cada grupo foram contados. Estes resultados são ilustrados na tabela 12. Exemplos representativos destes pulmões são descritos na Figura 14.Tabela 12: número de tumores pulmonares visíveis em camundongos em cada grupo

[418] Os pesos dos pulmões de camundongosinjetados com células de tumor foram então comparados aos pesos dos pulmões de camundongos injetados com somente PBS, para determinar a carga de tumor e, assim, o efeito terapêutico de tratamento de vacina. Estes resultados são ilustrados na tabela 13.Tabela 13: Peso médio de pulmão (mg) e inibição de peso de tumor (em comparação ao controle) em camundongos imunizados com vacinas bacterianas mortas em modelo de carcinoma pulmonar de Lewis implantados via intravenosa

Exemplo 4B: Câncer de pele

[419] Esta seção se refere a um modelo de camundongo de câncer de pele. As vacinas bacterianas usadas neste experimento foram como a seguir: Vacina Streptococcus pneumoniae [células e caldo] (lote #J049-1 [2 x 109];vacina Klebsiella pneumoniae [células e caldo] (lote #J046- 1 [2 x 109]; vacina Staphylococcus aureus [células e caldo] (lote #J041-2 [10 x 109]; vacina Escherichia coli (isolado de cólon) [células e caldo] (lote #J047-1 [6 x 109]; vacina Salmonella enterica [células e caldo] (lote #J31 [15 x 109]; vacina Staphylococcus aureus [somente células] (lote #J041-2 [10 x 109]; e somente meio (meio S.aureus) (lote #J041-1). Os camundongos foram tratados de acordo com os agrupamentos experimentais definidos na tabela 14.Tabela 14: Agrupamentos experimentais para modelo de camundongo de câncer de pele

[420] Especificamente, grupos de camundongos foram pré-tratados via subcutânea com vacinas bacterianas nos dias -10, -8, -6, -4, e -2. No dia 0, camundongos foram desafiados via intravenosa com uma dosagem de 2 x 10e6 de células melanoma B16 (lote #3995448; ATCC CRL-6323). Depois disso, os camundongos foram tratados via subcutânea com injeções de vacina cada segundo dia pela duração do experimento como definido na tabela 14. Um grupo controle foi tratado com somente meio. Pesos dos animais foram medidos e registrados a cada 4 dias. Uma vez os tumores foram palpáveis, os diâmetros de tumor foram medidos cada segundo dia usando paquímetros. Quando os camundongos começaram a apresentar morbidade, ou diâmetros de tumor atingiram 20 mm em cada grupo, o experimento foi encerrado. Depois disso, todos os camundongos foram humanamente sacrificados. Os volumes médios dos tumores presentes nos grupos de camundongos descritos aqui são ilustrados na Figura 15. Exemplo 4C: Câncer do cólon

[421] Esta seção se refere a um modelo decamundongo de câncer de cólon. As vacinas bacterianas usadas neste experimento foram como a seguir: Vacina Streptococcus pneumoniae [células e caldo] (lote #J049-1 [2 x 109]; vacina Klebsiella pneumoniae [células e caldo] (lote #J046-1 [2 x 109]; vacina Staphylococcus aureus[células e caldo] (lote #J041-2 [10 x 109]; vacina Escherichia coli (isolado de cólon) [células e caldo] (lote #J047-1 [6 x 109]; vacina Escherichia coli (isolado de próstata) [células e caldo] (lote #J040-2 [6 x 109]; vacina Salmonella enterica [células e caldo] (lote #J31 [15 x 109]; e somente meio (E. coli media) (lote #J040-1). Os camundongos foram tratados de acordo com os agrupamentos experimentais definidos na tabela 15.Tabela 15: Agrupamentos experimentais para modelo de camundongo de câncer de cólon

[422] Especificamente, grupos de camundongos forampré-tratados via subcutânea com vacinas bacterianas nos dias -10, -8, -6, -4, e -2. No dia 0, camundongos foram desafiados via intraperitoneal com uma dosagem de 2 x 10e5 células MC-38 collo adenocarcinoma (presente de Dr. Jeff Schlom Lab, NCI). Depois disso, os camundongos foram tratados via subcutânea com injeções de vacina cada segundo dia pela duração do experimento como definido na tabela 15. Um grupo controle foi tratado com somente meio. Os camundongos foram observados para os seguintes fatores clínicos: peso, frio ao toque, diarreia, respiração rápida, olhos fechados, movimento reduzido, piloereção, e convulsões. Quando um camundongo começou a apresentar sinais de morbidade clínica, o camundongo foi humanamente sacrificado e aquele dia foi definido como o dia da morte. Dados de sobrevivência para este exemplo são descritos na Figura 16.

[423] Ainda, a saúde versus morbidade/mortalidade dos camundongos envolvidos neste Exemplo foi calculado no dia 29 do experimento como definido na tabela 16.Tabela 16: Saúde v. Escore de Grupo Morbidade/Mortalidade **

** saudável = 10 pontos; tumor somente = 5 pontos;tumor + ascites = 2 pontos; e mortos = 0 pontos.Tabela 17. Sumário de sobrevivência para cada grupo de camundongo de experimentos de câncer de cólon

*MST – Sobrevivência média de tempo**ILS – Aumento em vida sobre o grupo controle*** comparação ao grupo controle tratado com placeboComparação geral de sobrevivência:Classe Log (Mantel Cox) p = 0,001Breslow (Generalized Wilcoxon) p = 0,003Tarone-Ware p = 0,002Exemplo 4 SumárioModelo de Pele:

[424] Há uma vantagem terapêutica marcada para o grupo tratado com Staph aureus (células-somente). Este estudo demonstra a efetividade de uma vacina de S. aureus mortos para o tratamento de câncer de pele em um modelo de camundongo, consistente com o fato de que S. aureus é a causa mais comum de infecção de pele em camundongos. Os dados são consistentes com o uso de composições imunogênicas da invenção para reduzir ou inibir crescimento do câncer. A vacina contendo somente células de S. aureus (em que o meio e exotoxinas foram removidos por centrifugação das células e caldo para coletar somente as células e então reconstituir com salina normal) foi mais eficaz do que vacina de células e caldo de S. aureus (que contém meio e exotoxinas). Isto porque S. aureus exotoxinas inibem a função imune, como leuocidinas que podem matar células brancas sanguíneas. A invenção assim inclui modalidades em que determinantes antigênicos que devem ser usados nas composições imunogênicas são separados de compostos imunomoduladores produzidos por um patógeno microbiano de interesse.

Modelo de pulmão

[425] relativamente raramente um patógeno pulmonar em camundongos (embora S. pneumoniae pneumonia possa ser induzida em camundongos). E. coli e S. aureus pode não comumente causar infecção pulmonar em camundongos, que é consistente com seus benefícios leves ilustrados aqui. Este Exemplo demonstra que a vacina de K. pneumoniae morta é notadamente eficaz para o tratamento de câncer de pulmões em camundongos, particularmente modalidades em que a composição imunogênica inclui antígenos de somente os organismos mais comumente patogênicos (ver Grupo 2 vs. Grupo 6).

Modelo de cólon:

[426] S. enterica é uma das causas mais comuns deinfecção gastrointestinal e intraperitoneal em camundongos,que é consistente com o efeito benéfico ilustrado aqui notratamento de câncer gastrointestinal e intraperitonal emcamundongos.

[427] Das composições imunogênicas usadas nesteExemplo (ou seja, S. enterica, E. coli, S. aureus, K.pneumoniae, S. pneumoniae), S. enterica é o patógeno maiscomum g.i./abdominal em camundongos. E. coli é o patógenoseguinte mais comum g.i./abdominal em camundongos. S.aureus e K. pneumoniae pode ser encontrado como parte daflora colônica e pode causar infecção g.i./abdominal,embora menos comumente. S. pneumoniae não causa infecçãog.i./abdominal. De acordo com isto, a S. entericuma vacinademonstrou ser substancialmente benéfica neste modelo detumor de cólon em camundongo, vacina E. coli demonstrou sermoderadamente benéfico, vacinas S. aureus e K. pneumoniaedemonstraram ser levemente benéfica e vacina S. pneumoniaedemonstrou ser de nenhum benefício. Em humanos, espécies Salmonella causam infecção g.i. e portanto, poderia se esperar S. enterica e outras Salmonella vaccines são úteis para o tratamento de câncer de cólon em humanos.EXEMPLO 5: Modelos AnimaisExemplo 5A: Ilustrando a influência de uma composição antigênica Klebsiella pneumoniae inativada por calor em populações de células monócito/macrófago e dendríticas em camundongos.

[428] Os seguintes métodos e materiais foram utilizados neste Exemplo: Camundongos. Camundongos C57BL/6 fêmeas de 7-8 semanas de idade foram solicitados do Harlan Labs (Livermore, CA) para estes estudos.

[429] Anticorpos e reagentes. Os seguintes anticorpos foram usados neste Exemplo: anti-I-A/I-E FITC (MHC Classe II; M5/114,15,2); anti-Gr-1 PE (RB6-8C5); anti- CD11b PerCP-Cy5 (M1/70); anti-CD11c APC (N418); anti-CD4 FITC (GK1,5); anti-NK1,1 PE (PK136); anti-CD8a eFluor780 (53-6,7); anti-CD44 APC (IM7). Todos os anticorpos foram adquiridos de eBioscience (San Diego, CA). Liberase TM e DNAse I foram adquiridas de Roche. Todos os meios foram de HyClone (Fisher).

[430] Tratamento com composições antigênicas. K. pneumoniae morta com calor com fenol (KO12 [5,0 unidades OD600]) foi diluída 1/10 em PBS contendo 0,4% fenol e 100μl foi injetado via subcutânea no dia 0, 2, 4, e 6 em 4 camundongos. Camundongos controle (n=5) foram injetados no dia 0, 2, 4, e 6 com PBS.

[431] Lavagem Brocoalveolar. No dia 7 camundongosforam sacrificados e uma lavagem a broncoalveolar (BAL) foi realizada expondo a traqueia seguido por inserção de um cateter 22G ligado a uma seringa de 1ml. 1ml de PBS foi injetado pulmões e removido e colocado em um tubo de 1,5ml microcentrífuga. Os pulmões foram subsequentemente lavados 3 vezes mais com 1ml de PBS e o fluido foi agrupado. A primeira lavagem de cada camundongo foi centrifugada a 400xg e o sobrenadante foi congelado para análise de citocina. Os 3ml finais do fluido de lavagem foram centrifugados e as células foram agrupadas com o pellet celular da primeira lavagem. As células foram contadas e coradas com anticorpos específicos para MHC classe II, Ly6G/C, CD11b, e CD11c. Após coloração as células foram lavadas e analisadas em um citômetro de fluxo FACS Calibur.

[432] Digestão pulmonar. Depois de BAL ser realizado os pulmões foram colocados em 5ml de RPMI contendo 417,5μg/ml Liberase TL (Roche) e β00μg/ml DNAse I (Roche). Os pulmões foram então digeridos a 37°C por 30min. Após digestão os pulmões foram forçados por um coador de célula 70um para criar uma suspensão celular única. As células foram então centrifugadas, lavadas, ressuspensas em tampão FACS (PBS com 2%FCS e 5mM EDTA) e contadas. Após contagem as células foram coradas e analisadas por FACS usando os mesmos anticorpos como para as células BAL.

[433] Lavagem Peritoneal. 1ml de PBS foi injetado no peritônio de camundongos usando uma seringa de 1ml ligada a uma agulha 25G após BAL. O abdômen foi massageado por 1 minuto e 0,5ml de PBS foi recuperado do peritônio usando uma pipeta de 1ml. O fluido de lavagem foi colocado em um tubo de centrífuga de 1,5ml, centrifugado a 400xg por 5mins, e ressuspenso em um tampão FACS antes da coloração e análise FACS.

[434] Análise de baço e linfonodo. O baço e linfonodo de drenagem foram removidos após BAL e lavagem peritoneal e colocados em PBS. O baço foi rompido por trituração usando um coador de célula de 70μm (Fisher) e o linfonodo foi rompido usando a extremidade de borracha do êmbolo de uma seringa de 1ml. Após rompimento, a suspensão celular única do baço e linfonodos foi centrifugada, lavada uma vez com tampão FACS, e ressuspensa em tampão FACS antes da contagem, coloração e análise FACS.

[435] Análise FACS. As células foram coradas em gelo por 20mins em placas de 96 poços usando 50ul de anticorpos diluídos em um tampão FACS. Após β0mins, 100μl de tampão FACs foi adicionado aos poços e as placas foram centrifugada a 400xg por 5mins. Subsequentemente o meio foi removido e as células foram lavadas 1 vez mais com tampão FACS. Após a lavagem final as células foram ressuspensas em β00μl de tampão FACS e os dados foram adquiridos usando um citômetro de fluxo FACS Calibur (BD). Um mínimo de 20.000 eventos vivos foi coletado para todas as amostras exceto o BAL onde um mínimo de 5,000 eventos foi coletado.

[436] Os seguintes resultados foram obtidos neste Exemplo.

[437] Camundongos normais sem tumores foram tratados com a composição antigênica de K. pneumoniae no dia 0, 2, 4, e 6. No dia 7 os camundongos foram sacrificados e a o fluido de lavagem broncoalveolar, tecido de pulmão, fluido de lavagem peritoneal, linfonodos, e baço foi analisado para mudanças em monócito e macrófagos. Um aumento no número de monócitos/macrófagos sanguíneos inflamatórios agudos, definido por alta expressão de CD11b e Gr-1 (mesmo marcador que Ly6c), e F4/80 no linfonodo de drenagem do local da injeção da composição antigênica de K. pneumoniae foi observada (ver: Figura 17A). Estes monócitos /macrófagos inflamatórios agudos ainda expressão níveis muito altos de moléculas de MHC classe II sugerindo exposição aos antígenos bacterianos. De modo importante, tratamento de camundongos com a composição antigênica de K. pneumoniae por uma semana levou a um aumento marcado na frequência de monócitos inflamatórios agudos no fluido de lavagem broncoalveolar e no pulmões (ou seja, o órgão alvo) mas não no baço ou peritônio de camundongos tratados, sugerindo que o tratamento pode induzir alojamento de monócitos especificamente aos pulmões sem afetar outros órgãos (ver: Figura 17B). Monócitos podem se diferenciar em células dendríticas (DCs) nos pulmões e consistente com nossas observações de um aumento marcado em recrutamento de monócito foi ainda observado que houve um aumento marcado na frequência de células apresentando marcadores para DCs maduros (ver: Figura 17C).

[438] Como ilustrado na Figura 17, tratamento com a composição antigênica de K. pneumoniae por 7 dias resultou em um aumento marcado (em comparação ao tratamento com placebo = PBS) em ambos monócitos inflamatórios agudos e células dendríticas no pulmões de camundongos. Como ilustrado na Figura 17, os camundongos foram tratados com uma composição antigênica de K. pneumoniae para ou PBS no dia 0, 2, 4, e 6. No dia 7, os camundongos foram sacrificados e o número total de A) e B) monócitos inflamatórios (células CD11b+ Gr-1+) e C) células dendríticas (células CD11c+ MHC classe II+) foi determinado por citometria de fluxo no pulmão e baço. As barras de erro descritos em A) representam a média de 4-5 camundongos por grupo.Exemplo 5B. Ilustrando uma composição antigênica Klebsiella pneumoniae inativada por calor e uma composição antigênica E. coli inativada por calor em populações de monócito/macrófago, célula dendrítica, e célula efetora em camundongos

[439] Os seguintes métodos e materiais foram utilizados neste Exemplo: Camundongos. Camundongos C57BL/6 fêmeas de 7-8 semanas de idade foram solicitados do Harlan Labs (Fígadomore, CA) para estes estudos.

[440] Anticorpos e reagentes. Os seguintes anticorpos foram usados: anti-I-A/I-E FITC (MHC Classe II; M5/114,15,2); anti-Gr-1 PE (RB6-8C5); anti-CD11b PerCP-Cy5 (M1/70); anti-CD11c APC (N418); anti-CD4 FITC (GK1,5); anti-NK1,1 PE (PK136); anti-CD8a eFluor780 (53-6,7); anti- CD44 APC (IM7). Todos os anticorpos foram adquiridos de eBioscience (San Diego, CA). Liberase TM e DNAse I foram adquiridas de Roche. Todos os meios foram de HyClone (Fisher).

[441] Tratamento com composições antigênicas. K. pneumoniae mortas por calor com fenol (K. pneumoniae; lot KO12; 5,0 unidades OD600) foi diluída 1/10 em PBS contendo 0,4% fenol e 100ul foi injetada via subcutânea no dia 0, 2, 4, e 6 em 5 camundongos. E. coli morta por calor (lote ; 5,0 unidades OD600) foi diluída 1/10 em contendo 0,4% fenol e 100μl foi injetada via subcutânea no dia 0, β, 4, e 6 em 5 camundongos. Camundongos controle (n=5) foram injetados no dia 0, 2, 4, e 6 com PBS.

[442] Lavagem Brocoalveolar. No dia 7 camundongos foram sacrificados e uma lavagem a broncoalveolar (BAL) foi realizada expondo a traqueia seguido por inserção de um cateter 22G ligado a uma seringa de 1ml. 1ml de PBS foi injetado nos pulmões e removido e colocado em um tubo de 1,5ml microcentrífuga. Os pulmões foram subsequentemente lavados 3 vezes mais com 1ml de PBS e o fluido foiagrupado. A primeira lavagem de cada camundongo foicentrifugada a 400xg e o sobrenadante foi congelado para análise de citocina. Os 3ml finais do fluido de lavagem foram centrifugados e as células foram agrupadas com o pellet celular da primeira lavagem. As células foram contadas e coradas com anticorpos específicos para MHC classe II, Ly6G/C, CD11b, e CD11c. Após coloração as células foram lavadas e analisadas em um citômetro de fluxo FACS Calibur.

[443] Digestão pulmonar. After BAL ser realizado os pulmões foram colocados em 5ml de RPMI contendo 417,5μg/ml Liberase TL (Roche) e β00μg/ml DNAse I (Roche). Os pulmões foram então digeridos a 37°C por 30mins. Após digestão os pulmões foram forçados por um coador de célula 70μm para criar uma suspensão celular única. As células foram então centrifugadas, lavadas, ressuspensas em tampão FACS (PBS com 2%FCS e 5mM EDTA) e contadas. Após contagem as células foram coradas e analisadas por FACS usando os mesmos anticorpos como para as células BAL.

[444] Lavagem Peritoneal. 1ml de PBS foi injetadono peritônio de camundongos usando uma seringa de 1ml ligada a uma agulha 25G após BAL. O abdômen foi massageado por 1 minuto e 0,5ml de PBS foi recuperado do peritônio usando uma pipeta de 1ml. O fluido de lavagem foi colocado em um tubo de centrífuga de 1,5ml, centrifugado a 400xg por 5mins, e ressuspenso em um tampão FACS antes da coloração e análise FACS.

[445] Análise de Baço e linfonodo. O baço e linfonodo de drenagem foram removidos após BAL e lavagem peritoneal e colocados em PBS. O baço foi rompido por trituração usando um coador de célula de 70μm (Fisher) e o linfonodo foi rompido usando a extremidade de borracha do êmbolo de uma seringa de 1ml. Após rompimento, a suspensão celular única do baço e linfonodos foi centrifugada, lavada uma vez com tampão FACS, e ressuspensa em tampão FACS antes da contagem, coloração, e análise FACS.

[446] Análise FACS. As células foram coradas em gelo por β0mins em placas de 96 poços usando 50μl de anticorpos diluídos em um tampão FACS. Após β0mins, 100μl de tampão FACs foi adicionado aos poços e as placas foram centrifugada a 400xg por 5mins. Subsequentemente o meio foi removido e as células foram lavadas 1 vez mais com tampão FACS. Após a lavagem final as células foram ressuspensas em β00μl de tampão FACS e os dados foram adquiridos usando um citômetro de fluxo FACS Calibur (BD). Um mínimo de 20.000 eventos vivos foi coletado para todas as amostras exceto o BAL onde um mínimo de 5,000 eventos foi coletado.

[447] Os seguintes resultados foram obtidos nesteExemplo.

[448] Como ilustrado na Figura 18, os camundongosforam tratados no dia 0, 2, 4, e 6 com uma composição antigênica de K. pneumoniae, uma composição antigênica E. coli ou PBS. No dia 7 os camundongos foram sacrificados e o número total de monócitos inflamatórios (células CD11b+ Gr- 1+) e células dendríticas (células CD11c+ MHC classe II+) foram determinados por citometria de fluxo no fluido de lavagem peritoneal, pulmões, linfonodo e baço. Barras de erro na Figura 18 representam o desvio padrão de 5 camundongos. *valor-p < ,05 usando um teste t de Student.

[449] Figura 18 ilustra que tratamento com a composição antigênica de K. pneumoniae, mas não um tratamento com a composição antigênica E. coli, marcadamente aumentou o número de monócitos e DCs no pulmões de camundongos. Em contraste aos pulmões, K. pneumoniae não levou a um aumento em monócitos no peritônio dos camundongos enquanto que E. coli sim. De modo importante, houve somente um ligeiro aumento no número de monócitos inflamatórios e nenhum aumento em DCs nos baços de camundongos tratados com K. pneumoniae ou E. coli sugerindo que os efeitos da terapia não são gerais e são, de fato, específicos para o local do órgão particular. Além de olhar os efeitos de tratamento em monócitos inflamatórios e DCs nos pulmões de camundongos, ainda olhamos as alterações em outros leucócitos como células T CD8 citotóxicas, células T CD4 T helper, e células natural killer (NK) todas as quais podem potencialmente desempenhar um papel em imunidade anti-tumor.

[450] Figura 19 ilustra que a composição antigênica de K. pneumoniae, mas não PBS ou uma composição antigênica E. coli, resultou em um aumento marcado na frequência e os números totais de células NK, células T CD4 e CD8 nos pulmões de camundongos tratados. Este Exemplo é a primeira demonstração ao nosso conhecimento que a injeção subcutânea e uma espécie bacteriana morta que normalmente causa infecção pulmonar pode promover o acúmulo de leucócitos em pulmões sem a presença de qualquer inflamação naquele local. Além disso, demonstramos que este efeito é específico ao local direcionada e que é ainda específico aos constituintes bacterianos do tratamento usado.

[451] Como ilustrado na Figura 19, os camundongos foram tratados no dia 0, 2, 4, e 6 com uma composição antigênica de K. pneumoniae, uma composição antigênica E. coli ou PBS. No dia 7, os camundongos foram sacrificados e o número total de células T CD4 T, células T CD8 T, e células natural killer (NK) foram determinados por citometria de fluxo. Barras de erro representam o sd de valores obtidos de 5 camundongos por grupo. *valor-p < 0,05 usando um teste t de Student.Exemplo 5C. Ilustrando os efeitos de composições antigênicas Klebsiella pneumoniae (K. pneumoniae) inativadas por calor e fenol em resposta anti-tumor em camundongos, e o status de monócitos inflamatórios e células dendríticas após tratamento em camundongos com tumor.

[452] Os seguintes métodos e materiais foram utilizados neste Exemplo:

[453] Inoculações de célula de tumor. A linhagem de célula de carcinoma pulmonar de Lewis derivada de C57BL/6 background foram adquiridos de ATCC (Manassas, VA). As células foram mantidas em meio Eagles modificado por Dulbecco (ATCC, Manassas, VA) contendo 10% FCS. As células foram cultivadas em uma incubadora umidificada 37oC com 5% CO2. Antes da inoculação do tumor, foram destacadas das placas de cultura usando 0,25% tripsina e 0,53mM EDTA. As células foram lavadas em PBS e ressuspensas em 8x106 células/ml e 200ul (4x105 células) foram injetadas via intravenosa nos camundongos.

[454] Tratamento com composição antigênica. As seguintes composições antigênicas foram usadas neste estudo: uma composição antigênica de K. pneumoniae inativada com calor e com fenol (lote KO12) e uma composição antigênica K .pneumoniae inativada por fenol (lote KO25). Ambos K. pneumoniae inativadas por calor e K .pneumoniae inativadas com fenol são concentradas a 5,0 unidades OD600. 0,1ml de K .pneumoniae diluída 1/10 em PBS com 0,4% fenol foi injetada via subcutânea a cada 2 dias começando no dia 2 após injeção de tumor.

[455] Análise de monócitos inflamatórios, DCs, células T, e células NK. Todas as análises foram realizadas de acordo com os métodos usados no Exemplo 5B acima.Tabela 18. Agrupamentos experimentais e cronograma de dosepor exemplo, 5C

1 Salina tamponada de fosfato Dulbecco com fenol 2 Morta em calor com fenol 3 Morto em Fenol com fenol

[456] Os seguintes resultados foram obtidos nesteExemplo.

[457] Este exemplo foi desenhado para determinarse a presença de tumor impactou o recrutamento de células aos pulmões e se o efeito de tratamento aumento com o tempo resultando em demais aumentos em recrutamento de célula com tratamento em andamento e assim, potencialmente, mais efeito terapêutico ideal com tratamento prolongado. Além disso, queremos determinar se a composição antigênica de K. pneumoniae inativada por fenol foi mais efetivo do que a composição antigênica de K. pneumoniae inativada por calor.

[458] A Figura 20 claramente demonstra que pelo dia 9 (ou seja, 4 tratamentos com a composição antigênica de K. pneumoniae) já há um aumento marcado no número de acute monócitos inflamatórios, DCs, células T, e células NK nos pulmões de camundongos tratados com a composição antigênica de K. pneumoniae inativada por calor ou fenol, muitas vezes maior do que dos pulmões de camundongos tratados com placebo (salina normal = PBS), novamente, claramente demonstrando que a resposta imune celular notadamente direcionada no pulmões disparado por terapia com composição antigênica de K. pneumoniae. No dia 9, houve uma sugestão que inativação com fenol foi mais eficaz do que inativação por calor, mas esta tendência reverteu pelo dia 16. De modo importante, no entanto, com referência aos números de célula nos pulmões no dia 9 e dia 16, é evidente que há um efeito cumulativo de tratamento bacteriano no recrutamento de células aos pulmões. Por exemplo, no grupo tratado com uma composição antigênica de K. pneumoniae inativada por fenol há cerca de 100.000 monócitos inflamatórios agudos nos pulmões dos camundongos no dia 9 e este número aumenta substancialmente a 400.000 pelo dia 16, demonstrando uma resposta substancialmente crescente com tratamento em andamento. A mesma resposta aumentada de tratamento com tratamento em andamento ocorreu em camundongos tratados com bactéria inativada por calor. De modo importante, este efeito de tratamento cumulativo é observado para todos os outros tipos de células analisadas como tal. Neste estudo, não houve diferença estatisticamente demonstrável significativa em recrutamento de célula imune com composições antigênicas inativadas por calor ou fenol de K. pneumoniae.

[459] Como ilustrado na Figura 20, os camundongos foram injetados com 4 x 105 células de carcinoma pulmonar de Lewis via intravenosa no dia 0. Os camundongos foram subsequentemente tratados a cada outro dia começando no dia 2 com uma composição antigênica de K. pneumoniae gerada por inativação com calor, ou inativação com fenol, ou com PBS. No dia 9 e dia 16 os camundongos foram sacrificados e os números totais de (A) monócitos inflamatórios (CD11b+ Gr- 1+) e DCs (CD11c+ Iab+) ou (B) células T CD4, células CD8 T, e células natural killer (NK) foram determinados por citometria de fluxo. Barras representam respectivamente: o grupo tratado com PBS, os camundongos tratados com uma composição antigênica inativada por calor de K. pneumoniae e camundongos tratados com uma composição antigênica inativada por fenol de K. pneumoniae. Barras de erro representa os sd de valores obtidos de 5 camundongos por grupo. *valor-p < 0,05 usando um teste t de Student.

[460] Os resultados deste estudo demonstram uma resposta imune aumentando dentro do tecido direcionado com tratamento em andamento. inativação com fenol em composição antigênica de K. pneumoniae, incluindo recrutamento de leucócito nos pulmões de camundongos, e os efeitos de fenol como um preservativo tem qualquer efeito.

[461] Os seguintes métodos e materiais foram utilizados neste Exemplo:Camundongos. Camundongos C57BL/6 fêmeas de 7-8 semanas de idade foram solicitados do Harlan Labs (Fígadomore, CA) para estes estudos.

[462] Composições antigênicas. Composição antigênica morta por calor de K. pneumoniae com fenol (KO12), composição antigênica morta por calor de K. pneumoniae sem fenol (KO25), composição antigênica irradiada de K. pneumoniae sem fenol (KO24), e uma composição antigênica morta por fenol de K. pneumoniae sem fenol (KO25) foram usados neste estudo. Todas as formulações bacterianas foram em uma concentração de 5,0 unidades OD em salina. Para diluição 1/10, 1ml de formulação bacteriana foi adicionada a 9ml de DPBS e misturado imediatamente e então novamente antes da injeção. Para diluição 1/100, 0,1ml de formulação bacteriana serão adicionados a 9,9ml de DPBS e misturados imediatamente e novamente antes da injeção. Para diluições de composição antigênica morta por calor de Klebsiella pneumoniae com fenol, as diluições foram realizadas como acima usando uma solução DPBS contendo 0,4% fenol (p/v). Para preparar o 0,4% fenol em DPBS, primeiro uma solução 5% fenol foi preparada adicionando 0,5g de fenol sólido (Sigma Aldrich, St. Louis, MO) a 10ml de DPBS (Hyclone, Logan, UT) Esta solução foi filtrada por um filtro 0,22um (Millipore, Billerica, MA) e armazenada a 4oC. Imediatamente antes do uso a solução 5% fenol foi diluída 1ml em 12,5ml DPBS e usada para preparar as formulações bacterianas.

[463] Tratamento com composições antigênicas. 5 camundongos por grupo foram tratados via subcutânea no dia 0, 2, 4, e 6 com 0,1ml de uma composição antigênica morta por calor de K. pneumoniae diluída 1/10 em PBS ou PBS com 0,4% fenol, 0,1ml de uma composição antigênica irradiada de K. pneumoniae diluída 1/10 em PBS, ou uma composição antigênica inativada com fenol de K. pneumoniae diluída 1/10 com PBS ou PBS com 0,4% fenol. No dia 7 os camundongos foram sacrificados e recrutamento de leucócito aos pulmões foi analisado como n o Exemplo 5B.

[464] Os seguintes resultados foram obtidos neste Exemplo.

[465] Neste exemplo, usando recrutamento de leucócito aos pulmões como um substituto de eficácia para comparar a eficácia de composições antigênicas K. pneumoniae inativadas por vários métodos. A Figura 21 ilustra que, para ambas composição antigênica mortas por calor e mortas por fenol de K. pneumoniaes, a adição de fenol (0,4%) como um preservativo, eficácia aumentada, como medido por recrutamento celular. Em algumas modalidades, uma pequena quantidade de fenol (ou seja, 0,4% como um preservativo) pode estabilizar um componente da parede celular bacteriana, por exemplo, um componente que é importante em reconhecimento de padrão de antígeno e ativando uma resposta direcionada ideal. Na comparação das 3 formulações contendo fenol como um preservativo (ou seja, morta por calor, morta por fenol e morta por radiação), composição antigênica irradiada de K. pneumoniae levou a um maior recrutamento de monócitos inflamatórios agudos, DCs, células NK, e células T aos pulmões, seguido por composição antigênica morta por fenol de K. pneumoniae, com composição antigênica morta por calor de K. pneumoniae resultando em menos recrutamento celular.

[466] Como ilustrado na Figura 21, os camundongos foram tratados no dia 0, 2, 4, e 6 com composição antigênica de K. pneumoniae inativada por calor (HKWP) ou sem (HKnp) preservativo fenol, inativado com fenol com (PKWP) ou sem (PKnp) preservativo fenol, ou composição antigênica de K. pneumoniae inativada por radiação com fenol preservativo (IRWP). No dia 7 os camundongos foram sacrificados e os números totais de (A) monócitos inflamatórios (CD11b+ Gr-1+) e DCs (CD11c+ Iab+) ou (B) células T CD4, células CD8 T, e células natural killer (NK) foram determinadas por citometria de fluxo. Barras de erro representam os sd de valores obtidos de 5 camundongos por grupo. *valor-p <,05 em comparação aos camundongos tratados com IRWP usando um teste t de Student.EXEMPLO 6: Estudos clínicos envolvendo cânceres epiteliais avançadosVisão geral do tratamento

[467] Os seguintes pacientes com diferentes cânceres avançados passaram por tratamento com composições antigênicas bacterianas direcionadas inativadas por calor. Formulário de consentimento informado escrito foi recebido de cada paciente em cada caso. O tratamento consistiu de injeções repetidas (3x/semana) subcutânea de quantidades exatas da vacina na região abdominal. A dosagem foi gradualmente aumentada em cada paciente para obter uma resposta de pele suficiente (3-5cm vermelhidão durando por ca. 24h). Para cada paciente um formulário de relato de caso (CRF) documentou a reação de pele e possíveis efeitos clínicos e/ou efeitos colaterais relatados ao tratamento. Tratamentos característicos e concomitantes bem como a resposta a terapia dos pacientes são brevemente descritos. Paciente #1:

[468] Paciente homem de 53 anos de idade com melanoma avançado, ICD10: C43, primeiro diagnosticado com lesão em 11/2005 sob a unha do dedão do pé direito, histologia um ano depois 12/2006: melanoma maligno avançado; paciente recusou a amputação do dedão do pé; 5/2008 metástase linfática para a perna direita, no momento da primeira apresentação para tratamento de composição antigênica bacteriana direcionada (9/2008) Inchaço da perna com 100% aumento em circunferência: Karnofsky 80%, sem pré- tratamento.Tratamentos por 6 meses 09/2008-04/2009:12 x intraperitoneal insuflação de ozônio (O3);42 x radiofrequência locoregional hipertermia (13,56 Mhz);18 x hipertermina de corpo total moderada 38,5°C;6 meses de tratamento com composição antigênica Staph. aureus s.c.;Medicina Ortomolecular: infusões com alta dose de vitamina C (0,5g/kg/BW), Vitamina D3; 2.000iu/dia, Artesunate200mg/dia, Celebrex 100mg/dia, baixa dose naltrexone, cogumelo medicinal (cordyceps, reishi, shitake), selênio 200uc/dia, curcumina 3,000mg/dia, enzimas proteolíticas (Wobemugos) Detalhes Epicrisis:PET 7/2008: SUV no dedão do pé direito 4,81, joelho: 5,01 PET 12/2008: SUV no dedão do pé direito 3,80, joelho: 4,02 Começos tratamento em fim de 9/2008.

[469] Naquele tempo (9/2008) já havia linfonodos clinicamente palpáveis na virilha que não foram observados no PET de 7/2008.05/2010: boa condição clínica, PET confirma completa remissão, Karnofsky 100%.Paciente #2:

[470] Paciente mulher de 48 anos de idade com câncer de mama bilateral avançado, ICD10: C50,9 primeiro diagnosticada 4/2008; histologia adenocarcinoma infiltrando em dutos da mama, ER/PR pos., Her2 não conhecido, T1/T2, N1 (nodo axilar sentinela), M0 G3; vários tratamentos com injeções de bicarbonato de sódio e cirurgia repetida em ambas as mamas; paciente recusou a mastectomia bilateral proposta e nunca foi resectada “in sano” (por exemplo, margens de lumpectomies nunca estiveram livres de células de tumor). Paciente ainda recusou Quimioterapia e/ou terapia hormonal. Karnofsky 90%, sem pré-tratamento. Tratamentos por 8 meses 03/2009-11/2009:3 x terapia com Célula dendrítica autóloga em combinação com:3 x hipertermina de corpo total moderada de longa duração 40° por 8h57 x radiofrequência locoregional hipertermia em ambas as mamas (13,56 Mhz);6 meses de tratamento com composição antigênica Staph.aureus s.c.; Medicina Ortomolecular: infusões de alta dose de vitamina C (0,5g/kg/BW), baixa dose naltrexone, cogumelo medicinal (cordyceps, reishi, shitake), curcuma 3,000mg/dia, zinco Detalhes Epicrisis: Começo tratamento em fim de 3/2009.05/2010: MRI de mamas bilateral não mostrou anormalidade detectada, boa condição clínica, Karnofsky 100% Paciente #3:

[471] Paciente mulher 73anos de idade com câncer NSCLC avançado FIGO IIc, ICD10: C34, primeiro diagnosticado 6/2009; histologia clara de adenocarcinoma celular dos pulmões, T4, N1, M0 G3; passou por CHT neoadjuvante; nova classificação após 3 ciclos de CHT neoadjuvante demonstrou tumor T2; passou por ressecção R0 pneumectomia esquerda; Karnofsky 90%.Tratamentos por 7 meses 08/2009-03/2010:08/2009 começou quimioterapia com Taxan/Cisplatina até 10/2009 em combinação com:4 x hipertermina de corpo total moderada de longa duração 40° por 8h (1-2/2009)20 x hipertermia radiofrequência locoregional ao tórax (13,56 Mhz) (8-10/2009)10/2009 resecção R0 pneumoctomia (Oncologia decidida contra outro CHT adjuvante)6 meses tratamento com composição antigênica Klebsiella pneumoniae s.c. (08/2009-02/2010)Medicina Ortomolecular: Peptídeos de timo i.m.,indometacin, cimetidina, infusões de alta dose de vitamina C (0,5g/kg/BW), ALA/N protocol (baixa dose naltrexone e ácido alfa lipoico), cogumelo medicinal (reishi), curcuma 3,000mg/dia, zinco, melatonina, inalação de oxigênio ionizadoDetalhes Epicrisis:Começo de tratamento em fim de 08/2009.05/2010: CT de tórax e marcador de tumor CEA, NSE e CYFRA mostrou completa remissão, boa condição clínica, Karnofsky 100%.Paciente #4:

[472] Paciente mulher 50 anos de idade com câncer de mama avançado, ICD10: C50, com metástase disseminada hepática e pulmonar, primeiro diagnosticado em 8/1990; histologia indiferenciada para cirrose tipo adenocarcinoma de mama, pT1c, N1, M0 G3; passou por vários cursos de quimioterapia por 20 anos; 11/2004 primeiro sinal de recorrência, 12/2004 ablação de mama esquerda, 6x CHT Epitax e radiação de parede torácica; 9/2005 primeiro diagnóstico de metástases disseminadas de fígado e pulmonar: novamente 8x CHT com Epitax até 3/2006. Nova classificação mostrou doença progressiva em cujo tempo ela começou tratamento direcionado com composição antigênica bacteriana. Karnofsky 90%. Tratamentos por 4 anos 03/2006-03/2010: 03/2006 Começou tratamento com vacina Polivaccinum forte em combinação com:3 x terapia com Célula dendrítica autóloga em combinação with (6-8/2006):3 x hipertermina de corpo total moderada de longa duração (LD-WBH) 40° por 8h (1-2/2009)25 x hipertermia radiofrequência locoregional ao tórax e fígado (13,56 Mhz) (3-6/2006) 8 meses tratamento com composição antigênica Klebsiella pneumoniae ((11/2008-7/2009)10/2009 TM CEA e CA15/3 começou aumentando novamente 02-03/2009 2x terapia de célula dendrítica autóloga sem LD- WBH04/2010 ablação térmica de mets de fígado (sem alteração de metástase pulmonar)Medicina Ortomolecular: peptídeos de timo i.m.,indometacina, cimetidina, infusões de alta dose de vitamina C (0,5g/kg/BW), curcuma 3,000mg/dia, zinco, enzimas proteolíticas Detalhes Epicrisis:Começou tratamento em fim de 03/2006.05/2010: CT tórax mostra doença estável por 4 anos, doença progressiva de fígado mets, boa condição clínica, Karnofsky 100%.Paciente #5:

[473] Paciente homem de 66 anos de idade com câncer de próstata avançado, ICD10: C61, com metástase disseminada ao osso e linfático, primeiro diagnosticado 01/1997; histologia indiferenciada adenocarcinoma de próstata, pT3, N1, M1 G3; passou por vários tratamentos de hormônio e CHT por 13 anos; pacientes está boa condição clínica sobrevivendo a câncer de próstata metastático por 13 anos desde o diagnóstico; Karnofsky 90%. Tratamentos por 11 anos 11/1999-05/2010:13 anos anti-androgênio com Suprefact, Zoladex, Casodex, Trenantone, Estracyt, β-Sitosterol06/2006-12/2007 Começou tratamento misto vacina bacteriana com vacina Polivaccinum forte Desde 03/2008 quimioterapia regular com Taxotere 140mg cada 3-4 semanas50 x hipertermina de corpo total moderada de longa duração 39° por 3h (1999-2009)18 meses de tratamento com composição antigênica Staph. aureus (11/2008-05/2010, em andamento)05-06/2009 2x terapia de célula dendrítica autóloga sem WBH 39° moderada, 3hMedicina Ortomolecular: trigo, cimetidina, Zometa, infusões de alta dose de vitamina C (0,5g/kg/BW), curcuma 3,000mg/dia, boswellia serrata (Indian) 400mg 4x4/dia, zinco, enzimas proteolíticas Detalhes Epicrisis:Começou tratamento em fim de 1999.05/2010: varredura óssea mostra doença estável; PSA atualmente 89 ng/ml, boa condição clínica, Karnofsky 90%. Paciente #6:

[474] Paciente mulher de 52 anos de idade com câncer primário avançado do peritônio, ICD10: C48,2, com carcinose disseminada peritoneal, primeiro diagnosticado 06/2003; histologia indiferenciada adenocarcinoma de peritônio, pT3, N1, M1 G3; submetida a Debulking OP com ovarectomia bilateral e histerectomia e quimioterapia adjuvante com Taxol/Paraplatina: doença progressiva e mudança a Taxol/Paraplatina com SD até 8/2008; doença progressiva com metástase LK disseminada peritoneal e CHT de terceira linha com Carboplatina e começando tratamento com composição antigênica bacteriana direcionada; paciente estava em boa condição clínica; Karnofsky 100%. Tratamentos por 4 meses 05-09/2009: 5x Carboplatina quimioterapia (terceira linha) seguido por: 5 x hipertermina de corpo total moderada de longa duração (LD-WBH) 40° por 8h (05-09/2009)20 x hipertermia radiofrequência locoregional ao abdômen (13,56 Mhz) (05-09/2009)2 meses de tratamento com E.coli (cólon) composição antigênica (05-07/2009)Medicina Ortomolecular: infusões de alta dose de vitamina C (0,5g/kg/BW), alta dose extratos de alcachofra e silimarina (fígado) Detalhes Epicrisis: Começou tratamento em fim de 5/2009.04/2010: CT abdômen e marcador de tumor demonstra remissão completa; boa condição clínica, Karnofsky 100% Paciente #7:

[475] Paciente feminina 50 anos de idade com câncer pancreático inoperável, ICD10: C25,9, com o câncer infiltrando os vasos grandes; Sonographic e evidência CT sugeriu invasão em veia mesentérica superior. Primeiro diagnosticada 02/2009; histologia indiferenciada adenocarcinoma do pâncreas, pT3, N1, M1 G3 com carcinose peritoneal; passou por radiação local e baixa dose Xeloda como sensibilizador de radiação; quando ela começou tratamento em nossa clínica o câncer foi ainda irresecável; Karnofsky 100%.Tratamentos por 2 meses de 06-07/2009: (E. coli SSI por 11 meses)1 x terapia com célula dendrítica autóloga estimulada por NDV em combinação com: 1 x hipertermina de corpo total moderada de longa duração 40° por 8h (7-10/2009)4 x hipertermina de corpo total moderada 38,5°15 x hipertermia radiofrequência locoregional ao abdômem (13,56 Mhz) (06-07/2009)11 meses de tratamento com E.coli (cólon) composição antigênica (06/2009) até hoje, em andamento)Medicina Ortomolecular: peptídeos de timo i.m; cogumelo medicinal (reishi, cordyceps, shitake); infusões de alta dose de vitamina C (0,5g/kg/BW), alta dose terapia de enzima proteolítica (wobenzima flogenzima), cimetidina. Detalhes Epicrisis:Começou tratamento em fim de 6/2009.05/2010: remissão completa, NED; PET 02/2010 demonstrou nenhuma absorção de glicose; marcador de tumor normal CA19/9: 4; boa condição clínica, Karnofsky 100%EXEMPLO 7: Estudos de dosagem (estudo QB28)

[476] Em um esforço para examinar o papel de dosagem, os camundongos foram tratados com doses diferentes de composição antigênica de K. pneumoniae ou um controle PBS. Todos os camundongos (C57BL/6) começaram tratamento com composição antigênica de K. pneumoniae ou PBS no dia - 10, -8, -6, -4 e -2 usando os seguintes locais de injeção (1a injeção: ventral inguinal direita; 2a injeção: ventral axilar direita, 3a injeção: ventral axilar esquerda; 4a injeção: ventral inguinal esquerda etc.). Todos oscamundongos receberam uma dose de inoculação dose de 3x105 células de carcinoma pulmonar de Lewis via injeção intravenosa na veia caudal lateral dos camundongos. As doses das composições antigênicas ou PBS foram como a seguir: i) PBS 0,1ml; ii) K. pneumoniae 0,1mL de OD600= 1,67; iii) K. pneumoniae 0,1mL de OD600=0,5. Camundongos receberam composições antigênicas K.pneumoniae ou PBS, tratamento nos dias 2, 4, 6, e 8. O experimento foiterminado no dia 10; todos os camundongos foramsacrificados, seus pulmões foram cirurgicamente removidos, rinsados em água, pesados, e então colocados em fluidos Bouins para fixação e contagem 24 horas depois. Comomostrado na Figura 22, cada ponto de dados representa o número de nódulos de tumor de um camundongo. Fotografias de pulmões representativos destes experimentos são mostradas na Figura 23. Figura 23 mostra que os pulmões de camundongos tratados com o controle PBS mostram números significativos de nódulos. Por meio de comparação, Figura 23 demonstra que os pulmões de camundongos tratados com composição antigênica K.pneumoniae mostram menores números de nódulos em uma taxa equivalente àquelas mostradas na Figura 22.

[477] Estudo QB30. Em outros estudos no efeito de dosagem de composições antigênicas K.pneumoniae, foi demonstrado que se uma dosagem de uma composição antigênica K.pneumoniae é muito baixa, esta não é eficaz para o tratamento de câncer pulmonar. Nestes estudos, os resultados dos quais são mostrados na Figura 24, todos os camundongos (C57BL/6) começaram tratamento com composição antigênica de K. pneumoniae ou PBS no dia -10, -8, -6, -4 e -2 usando os seguintes locais de injeção (1a injeção: ventral inguinal direita; 2a injeção: ventral axilar direita, 3a injeção: ventral axilar esquerda; 4a injeção: ventral inguinal esquerda etc.). Todos os camundongos então receberam uma dose de inoculação do tumor de 3x105 células de carcinoma pulmonar de Lewis via injeção intravenosa na veia caudal lateral dos camundongos. As doses das composições antigênicas ou PBS foram como a seguir: i) PBS 0,1ml; ii) K. pneumoniae 0,1mL de OD600= 0,5; iii) K. pneumoniae 0,1mL de OD600=0,05. Os camundongos continuaram a receber composição antigênica de K. pneumoniaes, ou PBS, tratamento no dia 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, e 16. O experimento foi terminado no dia 18; todos os camundongos foram sacrificados, seus pulmões foram cirurgicamente removidos, rinsados em água, pesados, e então colocados em fluidos Bouins para fixação e contagem 24 horas depois. Como mostrado na Figura 24, cada ponto de dados representa o número de nódulos de tumor de um camundongo.

[478] Os resultados de estudos QB28 e QB30 sugerem que doses extremamente altas das composições antigênicas K. pneumoniae são inefetivas, talvez devido a super estimulação do sistema imune hospedeiro. Os resultados destes estudos ainda sugerem que altas doses são inefetivas, talvez devido à estimulação insuficiente do sistema imune hospedeiro.EXEMPLO 8: Estudos de eficácia de Cisplatina

[479] Em um esforço para avaliar o papel entre Cisplatina e quimioterapia e doses de composição antigênica de K. pneumoniaes, o estudo QB38 foi completado. Resumidamente, todos os camundongos receberam uma dose de inoculação do tumor de 3x105 células de carcinoma pulmonar de Lewis via injeção intravenosa na veia caudal lateral no dia 0 do estudo. Após esta inoculação, todos os camundongos foram agrupados em uma única gaiola e subsequentemente distribuídos em suas respectivas gaiolas aleatoriamente para contralar contra dados tendenciosos. Na manhã do dia +2 deste estudo, os camundongos dentro do grupo de Cisplatina foram injetados com 10mg/kg desta droga via intraperitoneal. Camundongos controle foram injetados com controle (PBS). Depois disso, na tarde do dia +2 deste estudo, os camundongos receberam composição antigênica de K. pneumoniaes, ou PBS; estas injeções continuaram nos dias 4, 6, 8, 10, e 12. O estudo foi encerrado no dia 14; depois disso, todos os camundongos foram sacrificados, seus pulmões foram cirurgicamente removidos, rinsados em água, pesados, e então colocados em fluidos Bouins para fixação e contagem 24 horas depois. Como mostrado na Figura 25, cada ponto de dados representa o número de nódulos de tumor de um camundongo baseado em se os camundongos foram tratados com PBS, composição antigênica de K. pneumoniaes, composições antigênicas K. pneumoniae combinadas com Cisplatina, ou Cisplatina sozinha. Os resultados sumarizados na Figura 25 indicam que houve menos nódulos em camundongos tratados com composições antigênicas K. pneumoniae e Cisplatina em comparação com aqueles tratados com Cisplatina sozinha, composições antigênicas K. pneumoniae sozinhas, ou o controle PBS.

[480] Outro estudo foi desenhado para determinar se a terapia de composição antigênica de K. pneumoniae poderia trabalhar em sinergia com quimioterapia a base de platina para estender a sobrevivência de camundongos com tumores pulmonares de Lewis. Quatro grupos de cinco camundongos fêmeas C57BL/6 todos receberam 105 células de carcinoma pulmonar de Lewis i.v. no dia 0. No dia 2, grupos 3 e 4 receberam uma dose única i.p. de 10mg/kg Cisplatina. Começando no dia 4 os camundongos receberam K. pneumoniae ou placebo (PBS) a cada 2 dias até a morte. Figura 26 ilustra a sobrevivência de todos os camundongos e a tabela mostra os valores-p das várias curvas de sobrevivência calculadas usando o teste de Log-rank. Tratamento de camundongos com Cisplatina sozinha aumentou a sobrevivência de camundongos com tumores pulmonares com sobrevivência média aumentando de 16 dias no grupo PBS para 23 dias no grupo PBS + Cisplatina. Tratamento com K. pneumoniae sozinha ainda aumentou a sobrevivência de camundongos em comparação a PBS (sobrevivência média de 19 dias para K. pneumoniae vs. 16 dias para PBS). De modo mais importante quimioterapia Cisplatina junto com terapia K. pneumoniae teve o maior benefício terapêutico (sobrevivência média de 32 dias) demonstrando a sinergia entre quimioterapia a base de platina e terapia de composição antigênica em um modelo de camundongo de câncer pulmonar. Os valores-p para os dados gerados neste estudo QB45 são mostrados na tabela 19 abaixo.Tabela 19. Dados de sobrevivência (QB45)

[481] Como mostrado neste exemplo, composições antigênicas podem ser usadas no mesmo dia como Cisplatina ou em um período após administração de Cisplatina. Conforme usado aqui, o termo “composição antigênica” se refere a uma composição que inclui antígenos de uma ou mais espécies microbianas. Conforme usado aqui, o termo “espécie microbiana” pode se referir a um patógeno viral ou um patógeno bacteriano ou um patógeno fúngico, como detalhado aqui.

[482] Outro estudo foi desenhado para explorar se há uma sinergia entre quimioterapia a base de platina e terapia com composição antigênica de K. pneumoniae para o tratamento de câncer pulmonar em camundongos. Todos os camundongos receberam 105 células de carcinoma pulmonar de Lewis iv no dia 0. Os camundongos receberam composições antigênicas ou PBS via subcutânea a cada 2 dias começando no dia 0. No dia 12, alguns dos camundongos foram tratados com cisplatina (10mg/kg) via intraperitoneal. No dia seguinte (dia 13), 3 camundongos de cada grupo foram sangrados e as células sanguíneas foram coradas com anticorpo anti-CD11b e analisadas por FACS. Os gráficos na Figura 27 descrevem uma frequência de células mieloide CD11+b no sangue no dia 13. Cada ponto representa um único camundongo. Os resultados deste estudo demonstram que a terapia de composição antigênica pode aumentar a frequência de células mieloides (monócitos, macrófagos, granulócitos, células dendríticas) no sangue quando administrados com cisplatina. Isto pode aumentar a imunidade nos animais fornecendo um maior número destas células mieloides inatas que são capazes de responder aos tumores ou patógenos. Além disso, uma vez que a supressão de medula óssea é um efeito colateral clinicamente importante de tratamento com quimioterapia, com resultante redução em células mieloides no sangue, que pode resultar em adiamento/descontinuação de quimioterapia ou susceptibilidade a infecção, a melhora de células mieloides com terapia de composição antigênica durante quimioterapia, pode ser útil para reduzir o risco deste importante e clinicamente relevante efeito colateral de quimioterapia.EXEMPLO 9: Estudos de Macrófago (estudo MOA13)

[483] Para avaliar o papel de macrófagos com relação às modalidades da invenção, o estudo MOA13 foi completado. Resumidamente, camundongos foram inoculados com 3x105 células de carcinoma pulmonar de Lewis ou foram injetados com HBSS como um veículo controle. Para camundongos inoculados com células de carcinoma pulmonar de Lewis, eles foram agrupados em uma única gaiola onde foram subsequentemente transferidos aleatoriamente para suas respectivas gaiolas. Depois disso, os camundongos foram tratados com composição antigênica de K. pneumoniaes, ou PBS, nos dias 2, 4, 6 e 8. Depois disso, todos os camundongos foram sacrificados no dia 9. Para obter informações com relação às frequências de células mieloides e NK, 20 camundongos (5 de cada grupo) tiveram seus pulmões cirurgicamente removidos, e os pulmões foram digeridos usando Liberase TL e DNAse. Depois da digestão e preparação de célula, uma suspensão celular única foi gerada. Depois disso, uma parte das células foi transferida em placas redondas de 96 poços para coloração usando anticorpos específicos de mieloides (CD11b+, NK1,1+) e anticorpos específicos NK (NK1,1+, CD11b+). Para o último tipo de célula, gaiolas foram usadas para selecionar somente populações de células CD11b+ e NK1.1-. Depois disso, aquisição de dados de células foi realizado usando BD FACSCalibur e análise foi realizada usando FlowJo. Análise estatística e representação gráfica foi realizada usando Excel e GraphPad Prism. Os resultados são mostrados na Figura 28. Resumidamente, tratamento com composições antigênicas K. pneumoniae leva a um aumento em ambas células mieloides (possivelmente monócitos e macrófagos) bem como células CD11b+ NK nos pulmões de camundongos assim tratados.

[484] Com um foco de obter informações com relação a citocinas sendo produzidas dentro do tecido pulmonar, os seguintes experimentos foram conduzidos. Os camundongos foram inoculados com 3x105 células de carcinoma pulmonar de Lewis ou foram injetados com HBSS como um veículo controle. Para camundongos inoculados com células de carcinoma pulmonar de Lewis, eles foram agrupados em uma única gaiola onde foram subsequentemente transferidos aleatoriamente para suas respectivas gaiolas. Depois disso, os camundongos foram tratados com composição antigênica de K. pneumoniaes, ou PBS, nos dias 2, 4, 6 e 8. Depois disso, todos os camundongos foram sacrificados no dia 9. Para obter informações com relação a citocina dentro do tecido pulmonar, uma lavagem broncoalveolar foi realizado nos pulmões. Depois disso, os pulmões foram cirurgicamente removidos imediatamente após a lavagem e colocados em frascos pré-pesados contendo PBS e inibidores de protease. Depois disso, o tecido pulmonar foi homogeneizado, centrifugado, e o sobrenadante foi aplicado a kits ELISA (eBioscience); o ensaio ELISA foi conduzido de acordo com as diretrizes do fabricante. Análise estatística e representação gráfica foi realizada usando Excel e GraphPad Prism. Dados são representados como pg de citocina por mg de tecido pulmonar original. Cada ponto de dados na Figura 29 é o valor de um único camundongo. Como mostrado na Figura 29, tratamento com composições antigênicas K. pneumoniae leva a um aumento em produção de citocina antitumor (IL-12, MCP-1, GMCSF, IL-6) no tecido de pulmão.

[485] Com um foco de obter informações com relação a produção de citocina no fluido de lavagem broncoalveolar (BAL), os seguintes experimentos foram conduzidos. Os camundongos foram inoculados com 3x105 células de carcinoma pulmonar de Lewis ou foram injetados com HBSS como um veículo controle. Para camundongos inoculados com células de carcinoma pulmonar de Lewis, eles foram agrupados em uma única gaiola onde foram subsequentemente transferidos aleatoriamente para suas respectivas gaiolas. Depois disso, os camundongos foram tratados com composição antigênica de K. pneumoniaes, ou PBS, nos dias 2, 4, 6 e 8 do experimento. Depois disso, todos os camundongos foram sacrificados no dia 9. Para obter informações com relação à produção de citocina nos pulmões, lavagem broncoalveolar foi realizada nos pulmões dos camundongos. O fluido da lavagem foi colocado em frascos, e armazenados a -80°C até o tempo quando o ensaio ELISA foi realizado. Depois disso, o ensaio ELISA foi conduzido de acordo com as diretrizes do fabricante. Análise estatística e representação gráfica foi realizada usando Excel e GraphPad Prism. Dados são representados como pg/ml de fluido de lavagem como mostrado na Figura 30. Cada ponto de dados representa o valor obtido de um camundongo. Como mostrado na Figura 30, tratamento com composições antigênicas K. pneumoniae não teve efeito na produção de citocina no fluido BAL.

[486] Com um foco em avaliar os fenótipos de macrófago M1/M2 no modelo descrito aqui, níveis NOS2 e Arg1 foram monitorados no pulmão. Os experimentos conduzidos foram como a seguir: resumidamente, camundongos foram inoculados com 3x105 células de carcinoma pulmonar de Lewis ou foram injetados com HBSS como um veículo controle. Para camundongos inoculados com células de carcinoma pulmonar de Lewis, foram agrupados em uma única gaiola onde foram subsequentemente transferidos aleatoriamente em suas respectivas gaiolas. Depois disso, os camundongos foram tratados com composição antigênica de K. pneumoniaes, ou PBS, nos dias 2, 4, 6 e 8 do experimento. Depois disso, todos os camundongos foram sacrificados no dia 9. Para obter informações com relação à expressão de gene NOS2 e Arg1, 20 camundongos (5 de cada grupo) teve seus pulmões cirurgicamente removidos. Depois disso, uma pequena parte destes pulmões foi cortada usando técnicas estéreis e colocada em RNAlater depois para estabilizar o material de RNA para futura análise genética. RNA total foi extraída do tecido pulmonar usando um kit da Qiagen e usada de acordo com o protocolo do fabricante. Um kit cDNA foi usado para converter uma quantidade de RNA em mcDNA (Qiagen), novamente seguindo as instruções fornecidas pelo fabricante. qPCR foi conduzido usando iniciadores desenhados para especificamente amplificar Nos2 e Arg1(Nos2: direto -CGCTTTGCCACGGACGAGA; reverso - AGGAAGGCAGCGGGCACAT; Arg1:direto - GGTCCACCCTGACCTATGTG; reverso -GCAAGCCAATGTACACGATG). Análise estatística foi conduzida usando Excel e GraphPad Prism. Como mostrado na Figura 31, tratamento com composições antigênicas K. pneumoniae leva a um aumento na razão Nos2/Arg1 nos pulmões, que se correlacionado uma resposta melhorada antitumor.

[487] Com um foco em investigar a resposta M1/M2 no modelo in vivo descrito aqui, a expressão de CD206 (receptor de manose) foi monitorada. Resumidamente, camundongos foram inoculados com 3x105 células de carcinoma pulmonar de Lewis ou foram injetados com HBSS como um veículo controle. Para camundongos inoculados com células de carcinoma pulmonar de Lewis, foram agrupados em uma única gaiola onde foram subsequentemente transferidos aleatoriamente em suas respectivas gaiolas. Depois disso, os camundongos foram tratados com composição antigênica de K. pneumoniaes, ou PBS, nos dias 2, 4, 6 e 8 do experimento. Depois disso, todos os camundongos foram sacrificados no dia 9. Para obter informações com relação à expressão de CD206, 20 camundongos (5 de cada grupo) tiveram seus pulmões cirurgicamente removidos, e digeridos using Liberase TL e DNAse. Depois da digestão e preparação de célula, uma suspensão celular única foi gerada. Uma parte das células foi transformada em placas redondas de 96 poços para coloração usando anticorpos específicos CD206 (clone MR5D3), adquiridos de Cedarlane Labs (Burlington, ON). Como CD206 está localizado tanto intra quanto extracelularmente, as células foram primeiro fixadas e coradas com o anticorpo na solução de permeabilização. A análise foi realizada usando FlowJo. Análise estatística e representação gráfica foi realizada usando Excel e GraphPad Prism. Os resultados são mostrados na Figura 32. Como mostrado na Figura 32, tratamento com composições antigênicas K. pneumoniae leva a uma redução em expressão CD206 em macrófagos pulmonares ambos na presença (PBS + LL2 e K. pneumoniae 1/10X + LL2) ou ausência de tumores pulmonares (PBS e K. pneumoniae 1/10X). Na presença de câncer pulmonar, composições antigênicas K. pneumoniae reduzem a frequência de expressão de CD206 de cerca de 20% (grupo PBS + LL2) a cerca de 10% (grupo K. pneumoniae 1/10X + LL2). Uma redução semelhante em expressão de CD206 foi observada em animais tratados com K. pneumoniae sem qualquer câncer pulmonar (PBS e K. pneumoniae 1/10X).

[488] Com um foco em investigar a resposta de fenótipos M1/M2 no modelo in vivo descrito aqui, a expressão de macrófagos F4/80+ foi monitorada. Resumidamente, camundongos foram inoculados com 3x105 células de carcinoma pulmonar de Lewis ou foram injetados com HBSS como um veículo controle. Para camundongos inoculados com células de carcinoma pulmonar de Lewis, foram agrupados em uma única gaiola onde foram subsequentemente transferidos aleatoriamente em suas respectivas gaiolas. Depois disso, os camundongos foram tratados com composição antigênica de K. pneumoniaes, ou PBS, nos dias 2, 4, 6 e 8 do experimento. Depois disso, todos os camundongos foram sacrificados no dia 9. Para obter informações com relação a expressão F4/80+ em macrófagos, 20 camundongos (5 de cada grupo) tiveram seus pulmões cirurgicamente removidos, e digeridos usando Liberase TL e DNAse. Depois da digestão e preparação de célula, uma suspensão celular única foi gerada. Uma parte das células foi transferida em placas redondas de 96 poços para coloração usando anticorpos monoclonais F4/80. A aquisição de dados de células foi realizada usando BD FACSCalibur. A análise foi realizada usando FlowJo. Análise estatística e representação gráfica foi realizada usando Excel e GraphPad Prism. Como mostrado na Figura 33, tratamento com composições antigênicas K. pneumoniae leva à redução em macrófagos F4/80+ nos pulmões. Acredita-se que esta redução se correlacione com uma redução em macrófagos tipo M2.EXEMPLO 10: Estudos de especificidade de local (estudo MOA14)

[489] Com um foco na investigação de fenótipos M1/M2 no modelo in vivo descrito aqui que é usado em conjunto com a composição antigênica como descrito aqui, os seguintes experimentos foram realizados. Resumidamente, 5 camundongos por grupo foram tratados no dia 0, 2, 4, e 6 com PBS, composições antigênicas E. coli cólon, ou composição antigênica de K. pneumoniaes. No dia 7 do experimento, os camundongos foram sacrificados e a lavagem broncoalveolar foi realizada. Subsequentemente os pulmões e cólon proximal foram removidos e enzimaticamente digeridos. Após digestão, as células recuperadas foram lavadas e coradas com anticorpos específicos para I-A/I-E FITC (MHC classe II; M5/114,15,2); anti-Gr-1 PE (RB6-8C5_; anti-CD11b PerCP-Cy5 (M1/70); anti-CD11c APC (N418). Todos os anticorpos foram adquiridos da eBioscience (San Diego, CA). As células de pulmão foram contadas para determinar o número total de células (o cólon não foi contado porque não removeu quantidades iguais de cólon entre amostras). Após coloração por 20min. as células foram lavadas e analisadas por FACS. Cada ponto de dados mostrado na correspondente Figura 34 representa a frequência de células CD11b+Gr-1+ na gaiola para um camundongo. Como mostrado na Figura 34, tratamento com composições antigênicas E. coli leva a uma frequência aumentada de monócitos inflamatórios no cólon de camundongos tratados.

[490] Além disso, e como mostrado na Figura 35, quando monócitos nos pulmões foram avaliados com base nos métodos experimentais detalhados aqui, foi demonstrado que enquanto composições antigênicas E. coli e K. pneumoniae aumentam a frequência de monócitos nos pulmões de camundongos, composições antigênicas K. pneumoniae foram mais efetivos quando contando para números totais. Referindo à Figura 35, o painel mais a esquerda mostra a frequência de células CD11b+Gr-1+ (monócito inflamatório) nos pulmões; o painel mais a direita mostra o número total de células CD11b+Gr-1+ no pulmão.

[491] Em um esforço para avaliar o fenótipo de macrófagos presentes em tumores usando o modelo in vivo descrito aqui que é usado em conjunto com a composição antigênica descrita aqui, macrófagos tipo M1 e tipo M2 foram avaliados. Como mostrado na Figura 36, esta Figura representa a frequência de tipo M1 (ver painel esquerdo da Figura 36) TAMs (macrófagos associados a tecido) ou tipo M2 (ver painel direito da Figura 36) em tumores subQ 4T1 no dia 8 após implante do tumor. Como detalhado aqui, macrófagos tipo M1 foram definidos como sendo CD11b+/Gr-1- /MHC Classe II alto; macrófagos tipo M2 foram definidos como sendo CD11b+/Gr-1-/MHC Classe II baixo.EXEMPLO 11: Eficácia de indometacina e estudos anti- inflamatórios

[492] Em um esforço para avaliar a eficácia de combinação de composição antigênica e tratamento com indometacina. Resumidamente, experimentos foram desenhados em que houve 10 ou 11 camundongos em cada de 4 grupos com todos tratamentos começando no dia 4 após inoculação do tumor. Todos os camundongos receberam 50.000 células de carcinoma mamário 4T1 subQ no dia 0. Depois disso, os 4 grupos foram tratados como a seguir: 1) Indometacina diariamente (em água de beber) + PBS subQ cada 2 dias; 2) Indometacina diariamente (em água de beber) + composição antigênica S. aureus subQ cada 2 dias; 3) veículo controle diariamente (em água de beber) + PBS subQ cada 2 dias; e 4) Veículo controle diariamente (em água de beber) + composição antigênica S. aureus subQ cada 2 dias. Com relação à Figura 37, o painel mais a esquerda da Figura demonstra o volume de tumor para os vários grupos no dia 15 do experimento. O painel mais a direita demonstra a frequência e composição das células CD11b+ nos tumores no dia 11 do experimento. A frequência de células CD11b+ é significativamente aumentada em ambos grupos tratados com Indometacina em relação ao controle. Estes resultados demonstram a eficácia de combinar composições antigênicas Staph. aureus com anti-inflamatórios, como indometacina. Ainda, e como mostrado na Figura 38 aqui, no ponto de tempo dia 22, tratamento indometacina resultou em um aumento em células CD11b+.

[493] Para ainda avaliar a eficácia de combinar tratamento composição antigênica com indometacina, um estudo foi desenhado. Resumidamente, quatro (4) grupos de 10-11 camundongos Balb/c por grupo receberam 10,000 células de carcinoma 4T1 SQ no dia 0. Depois disso, tratamentos foram como a seguir: o primeiro grupo recebeu indometacina (14 μg/ml em água) começando no dia 4 + PBS nos dias 4, 6, 8 etc.; o segundo grupo recebeu indometacina (14 μg/ml em água) e composições antigênicas S. aureus [0,1 ml de 0,5 OD 600nm estoque] começando no dia 4 + PBS nos dias 4, 6, 8 etc.; o terceiro grupo recebeu PBS começando nos dias 4, 6, 8 etc.; e o quarto grupo recebeu composições antigênicas S. aureus [0,1 ml de 0,5 OD 600nm estoque] nos dias 4, 6, 8 etc. As medidas de volume do tumor foram feitas nos dias 15, 19, e 22 e estes dados aparecem na Figura 39 para os quatro (4) grupos de camundongos. Os dados descritos na Figura 39 mostram que há uma sinergia entre tratamento composição antigênica e um anti-inflamatório (por exemplo, Indometacina) em um modelo de câncer subcutâneo.

[494] No dia 11 do experimento detalhado abaixo, tumores foram retirados e digeridos. Depois disso. Os tumores digeridos foram corados com anti-CD11b e analisados por FACS (n=3 por grupo de camundongos). Os resultados são descritos na Figura 40 aqui e demonstram que há uma frequência aumentada de células CD11b+ nos tumores de camundongos tratados com indometacina no dia 11 após a inoculação.

[495] No dia 22 do experimento detalhado abaixo, tumores foram retirados e digeridos. Depois disso. Os tumores digeridos foram corados com anti-CD11b e analisados por FACS (n=7-8 por grupo de camundongos). Os resultados são descritos na Figura 41 aqui e demonstram que há uma frequência aumentada de células CD11b+ nos tumores de camundongos tratados com indometacina no dia 22 após a inoculação. Ainda, Figura 42 demonstra que tratamento indometacina causa um aumento em células mieloides CD11b+ CD94+ nos tumores como demonstrado no dia 22 após inoculação.

[496] Para ainda avaliar se tratamento composição antigênica foi associado com uma resposta anti- inflamatória, no dia 22 do experimento descrito acima, amostras de tumor total foram submetidas a PCR quantitativo por métodos conhecidos. Os produtos de gene Fizz1 e Ym1 foram direcionados. Ambos Fizz1 e Ym1 são reportadamente associados com M2 macrófagos (ver, por exemplo, Wong et al. (2010) Eur. J. Immunol. 40(8): 2296-307). Os resultados são descritos na Figura 43 aqui. Como mostrado na Figura 43, a expressão relativa de ambos Fizz1 e Ym1 foi aumentada em tumores onde houve tratamento de ambos indometacina e composições antigênicas (comparado, por exemplo, a indometacina sozinha).

[497] Os níveis de expressão relativa de Arg1 e Fizz1 foram avaliados em ambos os tumores e baços de camundongos no dia 22 do experimento. Como mostrado na Figura 44, ambas expressão de Arg1 e Fizz1 aumentaram os baços de camundongos tratados com indometacina e composições antigênicas. Os níveis de expressão relativo de Nos2 e Ym1 foram avaliados em ambos tumores e baços de camundongos no dia 22 do experimento. Os níveis de expressão relativos são descritos na Figura 45 aqui para os quatro (4) grupos de camundongos.

[498] Para ainda avaliar a resposta anti- inflamatória associada com um tratamento de composição antigênica, um experimento foi desenhado como a seguir. Resumidamente, camundongos foram administrados com tumores pulmonares de Lewis no dia 0 [PBS e composição antigênica de K. pneumoniae] ou no tumores [PBS (sem tumor)] ou composição antigênica de K. pneumoniae (sem tumor)]. Os camundongos receberam composição antigênica de K. pneumoniae [0,1ml de 0,5 OD500nm estoque] ou PBS no dia 2, 4, 6, 8. Os camundongos foram sacrificados no dia 9 e seus pulmões foram removidos e homogeneizados. IFNy foi medido no homogenado de pulmão usando ELISA. Os resultados results são mostrados na Figura 46 aqui. Tratamento com composição antigênica de K. pneumoniae reduziu produção de IFNy nos pulmões de camundongos com e sem tumores pulmonares.

[499] Para ainda avaliar a resposta anti- inflamatória associada com um tratamento de composição antigênica, o experimento foi desenhado como a seguir. Resumidamente, macrófagos de medula óssea foram cultivados durante a noite em meio, ou em meio suplantado com LPS, ou em meio suplantado com composição antigênica de K. pneumoniaes. O meio foi restado para IL-12 e IL-10. Os resultados são mostrados na Figura 47 aqui e demonstram que IL-12 não foi identificado. Como mostrado na Figura 47, macrófagos de medula óssea cultivados durante a noite com composições antigênicas K. pneumoniae produziram IL-10. IL- 10 é conhecido por estar associado com uma resposta anti- inflamatória (ver, por exemplo, Bazzoni et al. (2010) Eur. J. Immunol. 40(9): 2360-8).

[500] Para ainda avaliar a resposta anti- inflamatória associada com um tratamento de composição antigênica, o experimento foi desenhado como a seguir. Resumidamente, o modelo de tumor 4T1 foi utilizado para determinar os efeitos de terapia com composição antigênica Staph aureus (SA) para trabalhar sinergisticamente com a droga anti-inflamatória indometacina. Neste estudo, há quatro (4) grupos de 10 camundongos fêmeas Balb/c que receberam 50,000 células de carcinoma mamário 4T1 via subcutânea no dia 0. Grupo 1 recebeu PBS via subcutânea cada 2 dias começando no dia 4. Grupo 2 recebeu SA [0,1ml de 0,5 OD 600nm] via subcutânea cada 2 dias começando no dia 4. Grupos 3 e 4 receberam 14ug/ml de indometacina (indo) em suas águas de beber e via subcutânea receberam PBS e SA respectivamente cada 2 dias começando no dia 4. No dia 22 os camundongos foram sacrificados e tumores de 7-8 camundongos por grupo foram colhidos e colotados em um agente de preservação de RNA. Subsequentemente analisados a expressão de IL-10 nos tumores por PCR tempo real. Os resultados na Figura 48 mostram que camundongos tratados com indometacina e PBS têm um aumento significativo em expressão de IL-10 nos tumores. Tratamento com indometacina e SA leva a um aumento ainda maior de IL-10 sugerindo que SA aumenta os efeitos anti-inflamatórios de indometacina neste modelo de tumor. Uma vez que IL-10 é amplamente conhecido por ser uma citocina anti-inflamatória estes resultados demonstra que SA trabalha sinergisticamente com indometacina em um modo anti-inflamatório. É importante notar que os tumores no grupo PBS foram os maiores seguido por grupo SA e o grupo Indo-PBS. Os tumores no grupo Indo-SA foram os menores no dia 22. As propriedades anti- inflamatórias detalhadas aqui podem ser empregadas para uso contra uma variedade de doenças inflamatórias (ver tabela 20 aqui).Tabela 20. Lista de doenças inflamatórias crônicas

EXEMPLO 12: Estudos de doença intestinal inflamatória

[501] Este exemplo fornece uma ilustração do uso clinicamente efeito de uma formulação antigênica compreendendo E. coli morta no tratamento de um paciente com doença de Crohn, por um curso de tratamento de três meses. Durante o curso do tratamento, o paciente se torna se sintoma e cessa o uso de medicações anti-inflamatórias.

[502] O paciente inicialmente apresentou-se relatando dor na área do intestino grosso, enquanto em tratamento com prednisona e Imuran™.

[503] Tratamento foi iniciado com um inóculo subcutâneo de uma formulação morta de E. coli completa, derivada de uma cepa E. coli coletada de um paciente com uma infecção colonica de E. coli. O cronograma de dosagem envolveu uma dose subcutânea cada segundo dia, começando com uma dose 0,05 ml, gradualmente aumentando um volume até 2 polegadas de diâmetro de resposta de pele rosa clara/vermelha ser conseguida dentro de 24 horas após injeção no local de injeção. A dose eventualmente requerida para obter esta resposta de pele foi 0,09-0,11 ml neste paciente, e esta dose foi continuada como uma dose de manutenção cada segundo dia.

[504] Uma semana após início de tratamento com a preparação antigênica de E. coli inteiras mortas, o paciente reportou que a dor passou. Dentro de dois meses, o paciente descontinuou tratamento com prednisona enquanto continuando em uma dose diariamente de 150mg de Imuran™. Subsequentemente, o paciente ainda descontinuou uso de Imuran™.

[505] Em dois meses após o início de tratamento com a composição E. coli, o paciente foi auto-administrado com 0,09-0,11ml de preparação de E.coli cada outro dia. O paciente auto-ajustou esta dosagem de modo a provocar uma reação inflamatória local evidenciada por uma mancha rosa de aproximadamente 2 polegadas de diâmetro que persistiu no local de administração por cerca de dois dias. EXEMPLO 13: Estudos fúngicos

[506] Experimentos utilizando o sistema de modelo pulmonar de camundongo descrito em detalhes aqui foram conduzidos que determinaram que os camundongos que receberam água contaminada com uma espécie de fungo particular (Penicillium marneffei), que é conhecido por causar infecções respiratórias em tanto em camundongos quanto em humanos, demonstraram reduzida carga de tumor como demonstrado e discutido com relação aos patógenos pulmonares bacterianos.

[507] Várias espécies de fungos são conhecidas por estarem associadas com vários órgãos ou tecidos como detalhado na tabela 21 abaixo que água contaminada com espécies fúngicas também resultou. Assim, e com base em princípios experimentais detalhados aqui, a especificidade demonstrada aqui com relação à patógenos bacterianos e virais deve ser prorrogáveis aos patógenos fúngicos bem como.Tabela 21. Espécies fúngicas e associações comórgãos/tecidos

OUTRAS MODALIDADES

[508] Embora várias modalidades da invenção sejam reveladas aqui, muitas adaptações e modificações podem ser preparadas dentro do escopo da invenção de acordo com o conhecimento geral comum dos especialistas na técnica. Tais modificações incluem a substituição de equivalentes conhecidos para qualquer aspecto da invenção para atingir o mesmo resultado substancialmente da mesma forma. Faixas numéricas são inclusivas dos números que definem a faixa. No relatório descritivo, a palavra “compreendendo” é usada como um termo aberto, substancialmente equivalente à frase “incluindo, entre outros” e a palavra “compreende” tem um significado correspondente. A citação de referências aqui não deve ser interpretada como uma admissão que tais referências são técnica anterior à presente invenção. Todas as publicações são incorporadas aqui por referência como se cada publicação individual fosse especificamente e individualmente incorporada por referência aqui e como se totalmente estabelecida aqui. A invenção inclui todas as modalidades e variações substancialmente como aqui anteriormente descritas e com referência aos exemplos e desenhos.

Claims

1. USO DE UMA COMPOSIÇÃO ANTI-INFLAMATÓRIA, caracterizado pelo fato de que a composição anti- inflamatória compreende célula E.coli morta integral formulada para uso via intradérmica ou subcutânea e cujo uso é para formular um medicamento para o tratamento de doença de Crohn.