BR102022013331A2

BR102022013331A2 - Intensificação da eficácia de vacina por biomassa e/ou material relacionado em alimento animal

Info

Publication number: BR102022013331A2
Application number: BR102022013331-0A
Authority: BR
Inventors: Andrew A. Dahl; William P. Pfund; Amy E. Steffek
Original assignee: Zivo Bioscience, Inc.
Priority date: 2020-07-02
Filing date: 2022-07-04
Publication date: 2023-01-10
Also published as: CN115554312A; US20220062403A1

Abstract

Um método de tratamento eficaz para uma ampla variedade de doenças tanto em animais quanto em humanos é revelado. O método inclui a combinação de uma ou mais vacinas com um composto de tratamento para intensificar a eficácia da vacina. O composto de tratamento revelado não atua diretamente no patógeno e, portanto, os organismos não podem prontamente desenvolver resistência ao tratamento. Quando um composto tal como, mas não limitado ao composto revelado é utilizado em conjunto com uma ou mais vacinas, um efeito sinérgico é realizado. O composto sugerido é derivado de um lipopolissacarídeo (LPS) de bactérias gram-negativas. O composto de tratamento é combinado com uma ou mais vacinas apropriadas e é administrado no início da vida de um animal para obter um efeito sinérgico, em comparação com o uso do composto de tratamento ou da vacina isoladamente.

Description

INTENSIFICAÇÃO DA EFICÁCIA DE VACINA POR BIOMASSA E/OU MATERIAL RELACIONADO EM ALIMENTO ANIMAL

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDO RELACIONADO

[001] Este pedido é um pedido de patente não provisório norte-americano do pedido de patente provisório norte-americano n° US 63/047,517, intitulado "Intensificação da Eficácia De Vacina Por Biomassa e/ou Material Relacionado Em Alimento Animal", depositado em 2 de julho de 2020, que é incorporado na presente invenção por referência em sua totalidade para todos os propósitos.

CAMPO TÉCNICO

[002] A presente invenção se refere ao uso de um composto à base de bactérias em conjunto com uma vacina apropriada na prevenção e tratamento de doenças. Mais particularmente, a presente invenção se refere ao uso de um composto, tal como o derivado de um lipopolissacarídeo (LPS) de bactérias gram-negativas em conjunto com uma vacina apropriada na prevenção e tratamento de uma doença do trato intestinal, tal como a coccidiose, por meio de um regime de alimentação animal administrado a partir do dia da eclosão.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[003] Perdas econômicas substanciais na indústria avícola são, frequentemente, o resultado de doenças. As doenças em bandos frequentemente resultam em volume de produção reduzido ou qualidade comprometida da carne. A prevenção e o tratamento de doenças avícolas aumentam significativamente os custos da produção avícola. Algumas estimativas colocam as perdas totais como resultado de doenças avícolas em mais do que 10% de todos os custos de produção.

[004] Das doenças conhecidas que atingem os bandos de aves, as mais comuns são as doenças entéricas, que incluem a coccidiose, uma doença causada por um parasita, o protozoário coccídio. Estima-se que as perdas econômicas anuais devido apenas à coccidiose ultrapassem 3 bilhões de dólares por ano e esses custos devem aumentar devido a uma variedade de razões.

[005] Primeiro, a prevenção da coccidiose hoje é realizada principalmente através do uso de vacinas. Uma administração única da vacina é fornecida muito cedo na vida de frangos de corte e, especificamente, no dia da eclosão. Embora esta abordagem tenha mostrado algum benefício, é conhecido que vacinas sofrem de eficácia variável no controle da doença ao longo do tempo. A experimentação mostrou que uma vacina utilizada em conjunto com um suplemento tal como um probiótico pode aprimorar o resultado, mas esta abordagem aumenta o custo de produção.

[006] Segundo, o tratamento da coccidiose hoje é realizado convencionalmente através do uso de antibióticos e ionóforos, ambos custos adicionais em uma indústria com margens restritas. O uso de antibióticos e ionóforos está sob pressão globalmente por várias razões, incluindo ambientais. Há relativamente pouco tempo, a União Europeia baniu doses subterapêuticas de certos antibióticos para uso como aditivos de alimento. Compostos sintéticos de tratamento e outros agentes químicos são conhecidos, mas não são tão eficazes quanto os antibióticos convencionais.

[007] Terceiro, apesar da pressão supracitada contra o uso de antibióticos e ionóforos, não obstante, um ou ambos os antibióticos e ionóforos são frequentemente utilizados em uma série com abordagem escalonada (biotransporte), na qual a vacina contra a coccidiose viva é administrada na incubação, seguida de tratamento com um anticoccidiano entre duas e três semanas de idade.

[008] Quarto, a resistência a fármacos antibióticos, ionóforos e compostos sintéticos de tratamento está aumentando em grande parte devido ao uso excessivo, comprometendo severamente a eficácia desses tratamentos. Não houve aprovação de novos fármacos em nenhuma destas categorias por muitos anos.

[009] Quinto, mesmo que os tratamentos conhecidos ainda fossem econômicos e eficazes, as abordagens conhecidas ainda seriam consideradas insatisfatórias, porque a medicação deve ser incluída na alimentação do animal durante toda a sua vida útil para ser totalmente eficaz. Esse requisito adiciona um custo significativo à alimentação durante todo o período de crescimento.

[010] Por conseguinte, é desejável desenvolver um método de tratamento que reforce a eficácia das vacinas para uso no tratamento de infecções patogênicas, tal como, mas não se limitando a, coccidiose em animais sem neutralizar a atividade da própria vacina.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[011] O conceito inventivo revelado fornece um método de tratamento aprimorado para uma ampla variedade de doenças tanto em animais quanto em humanos. O método inclui combinar uma ou mais vacinas com um composto de tratamento estabelecido como parte do conceito inventivo revelado que intensifica a eficácia da vacina. Ao contrário da combinação inviável de um agente anticoccidiano com uma vacina, o composto de tratamento pode ser combinado com uma vacina porque o composto de tratamento não atua diretamente nos patógenos. Uma vantagem adicional do método de tratamento inventivo revelado sobre os métodos de tratamento conhecidos é o uso concomitante com uma vacina sem o risco de resistência ao tratamento.

[012] As vacinas usadas para controlar a coccidiose em aves têm sido, historicamente, da variedade de vacina coccidiana viva. As vacinas conhecidas contêm oocistos esporulados de várias espécies. Sabe-se que os parasitas E. maxima, E. tenella e E. acervulina geralmente existem em vacinas. O número total de oocistos presentes em cada uma das vacinas atuais difere significativamente. Ο número total pode ser tão baixo quanto cerca de 200 oocistos por dose até cerca de 3.000 oocistos por dose.

[013] Vários métodos são conhecidos para a entrega de vacinas de oocistos vivos. Esses métodos incluem entrega através de água potável, administração através de alimento mediante pulverização do alimento ou aplicação de gotículas de gel no alimento, ou administração na incubação através de entrega de esferas de gel, vacinação ocular ou cabines de pulverização, sendo este último o método mais comum de administração nos Estados Unidos hoje. Ao usar a cabine de pulverização para vacinação coccidiana, os pintos têm um dia de idade no momento do tratamento.

[014] Quando um composto, tal como, mas não limitado a, o composto revelado é usado em conjunto com uma ou mais vacinas, um efeito sinérgico é realizado. O composto sugerido é derivado de um lipopolissacarídeo (LPS) de bactérias gram-negativas. O composto de tratamento é combinado com uma ou mais vacinas apropriadas e é administrado no início da vida de um animal, fornecendo um efeito sinérgico em comparação com o uso do composto de tratamento ou da vacina isoladamente.

DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[015] Para uma compreensão mais completa desta invenção, deve-se agora fazer referência às figuras anexas. Conforme estabelecido em muitas das figuras, a designação "Sem Tx, Sem Desafio" se refere a um teste no qual nenhum tratamento foi administrado a um indivíduo animal não infectado deliberadamente com coccidiose. A designação "Sem Tx, Cocci" se refere a um teste no qual nenhum tratamento foi administrado a um indivíduo animal deliberadamente infectado com coccidiose. A designação "Anti-cocci, Cocci" se refere a um teste no qual o indivíduo animal foi infectado com coccidiose e foi administrado um anticoccidiano ao animal.

[016] A designação "ZIVO todas as rações, Cocci" se refere a um teste no qual 0 indivíduo animal foi infectado com coccidiose e foi administrado ao animal uma composição de tratamento de acordo com o conceito inventivo revelado. A designação "ZIVO fase inicial e fase de crescimento, Cocci" se refere a um teste no qual o indivíduo animal foi infectado com coccidiose e uma dieta inicial foi administrada ao animal entre os 0 a 21 dias de idade. A designação "ZIVO fase inicial, Cocci" se refere a um teste no qual o indivíduo animal foi infectado com coccidiose e uma dieta de crescimento foi administrada ao animal entre os 22 a 35 dias de idade. A designação "ZIVO, fase de crescimento e fase final, Cocci" se refere a um teste no qual o indivíduo animal foi infectado com coccidiose e foram administradas ao animal dietas de fase de crescimento e de fase final entre os 36 a 42 dias de idade.

[017] As figuras anexas são descritas a seguir:
A FIG 1 é um gráfico que ilustra os dados de conversão alimentar corrigida do indivíduo de teste para os Dias 0 a 42;
A FIG 2 é um gráfico que ilustra os dados de conversão alimentar corrigida do indivíduo de teste para os Dias 0 a 41;
A FIG 3 é um gráfico que ilustra a porcentagem de mortalidade do indivíduo de teste entre os dias 0 a 42;
A FIG 4 é um gráfico que ilustra a porcentagem de mortalidade do indivíduo de teste entre os dias 0 a 41;
A FIG 5 é um gráfico que ilustra a pontuação média de lesão do indivíduo de teste no dia 26;
A FIG 6 é um gráfico que ilustra a pontuação média de lesão do indivíduo de teste no dia 27;
A FIG 7 é um gráfico que ilustra a razão de conversão alimentar não ajustada por tratamento ao longo do primeiro estudo;
A FIG 8 é um gráfico que ilustra a média de pontuações de lesões por Eimeria sp. por espécie;
A FIG 9 é um gráfico que ilustra a média de oocistos por grama (OPG) por espécies de coccídios;
A FIG 10 é um gráfico que ilustra a média de pontuações de lesões por Eimeria sp. por espécie; e
A FIG 11 é um gráfico que ilustra oocistos médios por grama (OPG) por espécies de coccídios.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA MODALIDADE PREFERENCIAL

[018] Na descrição a seguir, vários parâmetros operacionais e componentes são descritos para diferentes modalidades construídas. Esses parâmetros e componentes específicos estão incluídos como exemplos e não pretendem ser limitantes. Salvo se observado de outro modo, todos os termos técnicos e científicos usados na presente invenção recebem o significado comumente conhecido por um técnico no assunto.

O COMPOSTO USADO NO TRATAMENTO

[019] O método de tratamento revelado preferencialmente, mas não absolutamente, utiliza um composto geralmente derivado de um lipopolissacarídeo (LPS) de bactérias gram-negativas. Ao administrar o composto no início da vida do frango de corte, a prevenção da doença e o tratamento por modulação imunológica são alcançados.

[020] Conforme usado na presente invenção, o termo "inibidor" se refere a uma molécula que reduz ou atenua a atividade induzida por outra molécula, receptor, estrutura celular ou órgão. A título de exemplo, um composto que pode bloquear a ativação de TLR4 dependente de LPS presente na superfície de uma célula imune hospedeira seria considerado um inibidor desta via específica.

[021] Conforme usado na presente invenção, o termo "cultura de algas" é definido como um organismo de algas e bactérias (um ou mais tipos) que crescem juntos em um meio líquido. Salvo indicação expressa em contrário, o termo "biomassa de algas" se refere às células de algas e células bacterianas (com 0 meio de cultura líquido removido). A "biomassa de algas" pode ser material úmido ou material seco.

[022] Salvo indicação expressa em contrário, o termo "sobrenadante de algas" é definido como o meio de cultura no qual a biomassa de algas é cultivada que contém compostos excretados da biomassa de algas. O sobrenadante de algas é obtido pelo cultivo da biomassa de algas em meio de cultura por um período de tempo apropriado e então pela remoção das células de algas e bactérias por filtração e/ou centrifugação.

[023] Sabe-se que as bactérias do gênero Variovorax e do gênero Rhodobacter são metabolicamente versáteis. A Variovorax é uma bactéria aeróbica gram-negativa que pode crescer sob uma ampla variedade de condições. É parte da subclasse Proteobacteria e é capaz de utilizar metabolicamente vários compostos naturais gerados por plantas ou algas. A Rhodobacter pode crescer sob uma ampla variedade de condições, incluindo tanto fotossíntese quanto quimiossíntese. O crescimento também pode ser alcançado tanto sob condições anaeróbicas quanto aeróbicas. A Rhodobacter sphaeroides representa uma bactéria gram-negativa facultativa e é um membro da subdivisão α-3 da Proteobacteria.

[024] As modalidades do composto usado no tratamento da doença, conforme estabelecido na presente invenção, incluem um ou mais compostos LPS/Lipídeo A produzidos por cepas bacterianas gram-negativas para uso como inibidores seletivos da via de sinalização de TLR4. O conceito inventivo revelado envolve qualquer combinação de três etapas fundamentais: (1) as bactérias gram-negativas produzem compostos LPS/Lipídeo A; (2) os compostos LPS/Lipídeos modulam a atividade de TLR4 através da inibição; e (3) um efeito a jusante resulta na redução da inflamação do intestino por bloqueio da sinalização de TLR4, auxiliando assim no tratamento da coccidiose.

[025] Em uma modalidade, os compostos LPS/Lipídeo A usados como inibidores seletivos da via de sinalização de TLR4 são produzidos a partir de uma cepa de Variovorax paradoxus. A cepa de Variovorax paradoxus pode ser uma cepa de ocorrência natural encontrada em uma biomassa de algas e/ou produtos sobrenadantes de algas. Por exemplo, a biomassa de algas pode compreender as espécies de algas Klebsormidium flaccidum. Mais especificamente, a cultura de biomassa de algas pode compreender a cepa de algas Klebsormidium flaccidum, var. ZIVO.

[026] Em outra modalidade, os compostos LPS/Lipídeo A usados como inibidores seletivos da via de sinalização de TLR4 são produzidos a partir de uma cepa Rhodobacter sphaeroides. Amplos estudos têm sido conduzidos em relação à estrutura e função de Rhodobacter sphaeroides. Estudos mais focados examinaram as características fotossintéticas de Rhodobacter sphaeroides. Embora se saiba que os lipopolissacarídeos a partir de Rhodobacter sphaeroides são antagonistas eficazes de TLR4 em células humanas que previnem a inflamação mediada por TLR4 através do bloqueio da sinalização LPS/TLR4, os inventores empregaram uma metodologia de teste para abordar vários mecanismos de resposta imune em aves, para chegar à conclusão de que um composto LPS derivado de Rhodobacter sphaeroides provou ser eficaz como um coccidiostático em aves. Os dados iniciais sugeriram a inibição por uma molécula do tipo LPS, até o momento em que testes específicos direcionados à Rhodobacter sphaeroides revelaram a eficácia desta bactéria no tratamento de doenças, tal como no tratamento da coccidiose em aves. A pesquisa mostrou ainda que a combinação de um inibidor de TLR4 com um ativador de TLR2 (tal como LPS de bactérias gram-negativas) fornece um efeito anticoccidiose.

[027] Por conseguinte, as modalidades do composto usado no tratamento da doença de acordo com a presente invenção são direcionadas a um ou mais compostos LPS/Lipídeo A produzidos por uma cepa bacteriana gram-negativa do grupo Variovorax ou o grupo Rhodobacter para uso como inibidores seletivos da via de sinalização TLR4. Uma modalidade específica do conceito inventivo revelado é direcionada ao uso de um composto LPS/Lipídeo A usado como um inibidor seletivo da via de sinalização TLR4 produzida a partir da cepa Variovorax paradoxus e da cepa Rhodobacter sphaeroides.

[028] O composto LPS/Lipídeo A empregado na presente invenção pode ser obtido a partir da cepa Variovorax paradoxus e/ou da cepa Rhodobacter sphaeroides por qualquer método adequado, mas em modalidades específicas eles são extraídos usando protocolos padrão de extração de LPS em várias etapas, tais como: (1) extrair bactérias liofilizadas com uma solução de fenol/tiocianato de guanidina e coleta da camada de água para liofilização; (2) ressolubilizar a fração liofilizada em água; (3) ultrafiltrar a fração solubilizada para remover substâncias e sais de baixo peso molecular; (4) purificar por afinidade a fração de alto peso molecular usando uma coluna de resina de polimixina B, tal como material de matriz de polimixina Affi-prep (Bio-Rad), a partir do qual uma fração ativa é eluída com desoxicolato a 1% e, opcionalmente; (5) realizar purificação adicional usando cromatografia de exclusão por tamanho.

[029] Em alguns exemplos, diversos tipos de protocolos de extração de LPS são empregados para obter um composto LPS a partir das bactérias e os procedimentos de extração podem ser realizados mais de uma vez. Uma vez que o composto LPS é extraído e purificado a partir das bactérias, a fração de Lipídeo A pode ser preparada por hidrólise ácida ou outra técnica adequada.

[030] O um ou mais compostos LPS/Lipídeo A derivados a partir de cepas bacterianas gram-negativas, tal como Variovorax paradoxus ou Rhodobacter sphaeroides, pode inibir seletivamente a via de sinalização de TLR4 para reduzir e/ou inibir as respostas inflamatórias e aprimorar a saúde imunológica em uma variedade de usos e aplicações. Em uma modalidade, o composto LPS/Lipídeo A derivado a partir de Variovorax paradoxus ou Rhodobacter sphaeroides pode ser incorporado dentro de um ingrediente alimentar à base de algas para aprimorar a saúde intestinal das aves.

[031] O composto revelado LPS/Lipídeo A derivado a partir de Variovorax paradoxus ou Rhodobacter sphaeroides pode ser usado para aprimorar a saúde das aves através de uma variedade de mecanismos. Por exemplo, o composto LPS/Lipídeo A pode proteger contra inflamação interna em aves, ao regular negativamente mediadores inflamatórios através da infrarregulação da expressão de TLR4 e da inibição a jusante da ativação de NF-kappa B em uma cascata inflamatória típica. Em outro exemplo, o composto LPS/Lipídeo A pode inibir a ativação de TLR4 em aves, ao interferir na dimerização do receptor mediada por resíduos de cisteína. Ainda em outro exemplo, o composto LPS/Lipídeo A pode inibir a capacidade de estímulos não infecciosos e infecciosos de interagir com TLR4 e desencadear uma resposta pró-inflamatória, aprimorando assim a integridade do intestino das aves.

COMPOSTOS DE TRATAMENTO ESPECÍFICOS

[032] Os compostos de tratamento revelados são à base de uma ou mais biomassas de algas de água doce incluindo cepas bacterianas, conforme discutido acima. Mais particularmente, a biomassa de algas pode incluir gram-negativas, tal como a cepa Variovorax paradoxus ou a cepa gram-negativa Rhodobacter sphaeroides.

[033] Os compostos compartilham a característica comum da biomassa de algas referenciada acima e são usados no tratamento de animais. Os produtos à base de biomassa de algas são fornecidos aos animais em uma dieta formulada, tal como milho ou dieta de milho-soja (SBM) ou são entregues em água potável. Conforme observado, as composições de tratamento específico incluem "ZIVO -todas as rações", "ZIVO fase inicial e fase de crescimento", "ZIVO - fase inicial" e "ZIVO - fase de crescimento e fase final".

[034] Em todas as suas variações, o composto de tratamento ZIVO é biomassa de algas de água doce contendo bactérias gram-negativas fornecidas como alimento animal em combinação com um aditivo alimentar, tal como óleo de soja, preferencialmente, embora não exclusivamente, na razão de duas partes de óleo do solo para uma parte de biomassa de algas. Uma vez que a biomassa e o aditivo alimentar são combinados no nível de pré-mistura preferido, a batelada combinada é despejada ou administrada uniformemente em um misturador de fita contendo alimento acabado. A batelada combinada é preferencialmente fornecida em uma quantidade entre cerca de 0,1 Ibs (0,0453 kg) de composição por tonelada de alimento acabado a cerca de 10,0 Ibs (4,536 kg) de composição por tonelada de alimento acabado, é mais preferencialmente fornecida em uma quantidade entre cerca de 0,2 Ibs (0,091 kg) de composição por tonelada de alimento acabado a cerca de 5,0 Ibs (2,268 kg) de composição por tonelada de alimento acabado, e é mais preferencialmente fornecida em uma quantidade entre cerca de 0,5 Ibs (0, 2268 kg) de composição por tonelada de alimento acabado a cerca de 2,0 Ibs (0,9072 kg) de composição por tonelada de alimento acabado. A razão ideal sugerida e não limitante é de cerca de 0,5, 1,0 e 2,0 de composição por tonelada de alimento acabado.

MÉTODO DE TRATAMENTO

[035] Um exemplo não limitante de um método para intensificação de uma vacina em aves é estabelecido. Deve-se entender que o método a seguir não pretende ser o único método de tratamento, mas é apenas exemplificativo. Os estudos estabelecidos na presente invenção comparam o composto inventivo revelado com o fármaco anticoccidiano ionóforo, Salinomicina, e com a vacinação contra coccídios do dia anterior. O tratamento foi fornecido a grupos separados. No entanto, nenhum grupo foi tratado tanto com fármaco anticoccidiano quanto com uma vacina. Todos os pássaros, exceto um grupo de controle negativo, foram desafiados com Eimeria acervuHna, E. maxima, e E. tenella no dia 21.

[036] O teste em todos os três estudos estabelecidos abaixo foi conduzido sob o uso de uma vacina de alta dose de oocisto, Coccivac-B52 (marca registrada, Intervet Inc.), um produto vendido pela Merck Animal Health. De acordo com o fabricante, Coccivac-B52 contém E. acervuHna, E. maxima, E. mivati, e E. tenella. Contagem dos oocistos. A vacina foi misturada com água na dosagem de 240 mL de água por 1.000 doses. A combinação vacina-água foi colocada em um recipiente de vacina selado e misturada por agitação e inversão do recipiente. A combinação misturada de vacina-água foi pulverizada em cada pinto com um dia de idade em uma cabine de pulverização convencional. Estimou-se que cada pinto ingeriu um número igual de gotículas de modo a resultar na ingestão de cerca de 240 μL de dose por pinto.

[037] A vacinação contra coccídios vivos (Coccivac-B52 [Merck] ) foi administrada a todos os pintos com um dia de idade envolvidos nos estudos de acordo com a recomendação do fabricante.

PRIMEIRO ESTUDO

[038] O objetivo do primeiro estudo foi determinar o regime de dose mais eficaz para o produto anticoccidiano natural inventivo revelado versus o produto anticoccidiano ionóforo, Salinomicina, com ou sem uma vacina contra coccídios vivos.

[039] As rações consistiam em dietas de fase inicial, fase de crescimento e fase final para frangos de corte do tipo comercial não medicados, compostas de acordo com as diretrizes do NRC e continham alimentos comumente usados nos Estados Unidos. As rações foram servidas ad libitum a partir da data de chegada do pinto da seguinte maneira: Fase inicial - PONTO 0 até PONTO 14, fase de crescimento PONTO 14 a PONTO 28 e fase final a partir do PONTO 28 a PONTO 42 (término do estudo). As dietas foram fornecidas em formatos de farelos na fase inicial e pellets nas fases de crescimento e final. As rações de tratamento experimental foram preparadas a partir de uma formulação de alimento basal. As quantidades de todos os alimentos basais e artigos de teste incluídos nas bateladas do grupo de tratamento foram documentados e incluídos nos arquivos de dados de origem. O alimento de tratamento foi misturado antes da peletização para assegurar uma distribuição uniforme dos respectivos artigos de teste.

[040] Mil e quinhentos pássaros (1.500) foram atribuídos a seis (6) grupos de tratamento com dez (10) galinheiros replicados por tratamento e 25 pássaros por galinheiro. O estudo começou quando os pássaros foram alojados (dia da eclosão; PONTO 0), momento em que os pássaros foram alocados nos galinheiros experimentais. Apenas pássaros saudáveis foram selecionados. No PONTO 0, os pesos corporais do grupo foram registrados por galinheiro. Nenhum pássaro foi substituído durante o estudo.

METODOLOGIA DE ANÁLISE - PRIMEIRO ESTUDO

[041] Os pássaros receberam alimento adequado ao tratamento do dia 0 ao dia 42. No dia 14, o alimento inicial restante foi removido, pesado e substituído por alimento de crescimento até o dia 28. No dia 28, o alimento de crescimento restante foi removido, pesado de volta e substituído por alimento acabado até o dia 42.

[042] Os pássaros receberam alimento adequado ao tratamento do PONTO 0 ao PONTO 42. No PONTO 14, o alimento inicial restante foi removido, pesado e substituído por alimento de crescimento até o PONTO 28. No PONTO 28, o alimento de crescimento restante foi removido, pesado de volta e substituído por alimento acabado até o PONTO 42 (término do estudo).

[043] Todos os pássaros foram pesados por galinheiro nos dias 0, 14, 28 e 42. O alimento adicionado ao comedouro de cada galinheiro foi pesado no início de cada período de formulação no dia 0 (fase inicial), dia 14 (fase de crescimento) e dia 28 (fase final). 0 alimento foi distribuído conforme necessário aos comedouros a partir de sacos pré-pesados atribuídos a cada galinheiro ao longo de cada período. O alimento restante nos comedouros foi pesado e descartado nos dias 14, 28 e 42. O ensaio foi encerrado no dia 42.

[044] Todos os pássaros foram pesados por galinheiro no PONTO 0, 14, 28 e 42. O alimento adicionado ao comedouro de cada galinheiro, foi pesado no início de cada período de formulação no PONTO 0 (fase inicial), 14 (fase de crescimento) e 28 (fase final). Quaisquer sacos adicionais de alimento foram pesados (e documentados) para cada galinheiro (conforme necessário) durante cada período de formulação. O alimento foi distribuído conforme necessário aos comedouros a partir de sacos pré-pesados (atribuídos a cada galinheiro) ao longo de cada período. O alimento restante nos comedouros (e sacos de alimento, se aplicável) foi pesado e descartado no PONTO 14, 28 e 42. Os pesos dos comedouros vazios foram registrados antes do início do estudo. O ensaio foi encerrado no PONTO 42.

[045] No Dia 20 (100.000 oocistos por pássaro de E. acervulina; 50.000 oocistos por pássaro de E. maxima; e 75.000 oocistos por pássaro de E. tenella) todos os pássaros do estudo receberam um inoculo coccidiano de E. acervulina, E. maxima, e E. tenella misturado. O inoculo foi misturado ao alimento encontrado na base do tubo de alimentação de cada galinheiro.

[046] No Dia 26, três pássaros de cada galinheiro foram selecionados, sacrificados, pesados e examinados quanto ao grau de presença de lesões de coccídios. O método de Johnson e Reid (1970) de pontuação da lesão de coccidiose foi utilizado para pontuar a(s) região(ões) infectada(s) do intestino. A pontuação foi baseada em uma pontuação de 0 a 4, sendo 0 normal e 4 a mais grave.

[047] No Dia 26, amostras fecais frescas foram coletadas de cada galinheiro. Estas amostras representativas foram testadas para determinar o grau de propagação/ciclagem de oocistos. Foram determinados oocistos por grama para cada amostra.

*Razão de conversão alimentar ajustada para mortalidade

*Razão de conversão alimentar ajustada para mortalidade

*Razão de conversão alimentar ajustada para mortalidade

[048] Os Dias de alimentação corrigida de 0 a 42 para este estudo são ilustrados na FIG. 1. Os Dias de alimentação corrigida de 0 a 41 são ilustrados na FIG. 2.

*Johnson e Reed no ΡΟΝΤΟ 26

[049] A Pontuação média de lesão por dia, dias de correção de alimentação 0 a 42 para este estudo são ilustrados na FIG. 1. Os Dias de alimentação corrigida de 0 a 41 são ilustrados na FIG. 2.

*OPG de fezes no PONTO 26

RESULTADOS - PRIMEIRO ESTUDO

[050] O pico de reação à vacina contra coccídios para os tratamentos 3 e 6 foi de cerca de 14 dias. A vacina com a composição inventiva na fase inicial apontou peso corporal significativamente maior e FCR numericamente menor do que o tratamento apenas com vacina aos 14 dias (Tabela 1). O desafio com coccídios ocorreu no dia 20 com pico de dano máximo entre os dias 25 a 27. A vacina e a composição inventiva continuaram a apontar o peso corporal estatisticamente mais pesado e FCR menor (Tabela 2). Uma libra (0,4536 kg)/ton da composição inventiva teve desempenho continuamente semelhante ao do fármaco, Salinomicina. Os resultados de 42 dias demonstraram que a combinação da vacina com a composição inventiva teve pesos corporais numericamente maiores do que dos pássaros de controle desafiados e 11 pontos mais pesados do que a vacina isoladamente (Tabela 3). A vacina com a composição inventiva teve uma FCR não ajustada significativamente menor na ausência de tratamento (FIG. 7).

[051] Como ilustrado na FIG. 3 ("Percentual de mortalidade dos dias 0 a 42" e FIG. 4 ("percentual de mortalidade dos dias 0 a 41") houve maior mortalidade após o desafio atribuído aos coccídios. Curiosamente, a vacina isoladamente e todos os tratamentos de composição inventiva foram significativamente menores do que o controle de desafio e até mesmo a Salinomicina (Tabela 3). As pontuações médias de lesão de Johnson e Reed para todos os coccis foram significativamente menores na vacina com Zivo (Tabela 4, FIG. 5 ["pontuação média de lesão do dia 26"] , e FIG. 6 ["pontuação média de lesão do dia 27"] ). Isso foi especialmente verdadeiro para E. acervulina e E. maxima (FIG 8). Isso provavelmente explica o melhor desempenho neste tratamento. Os resultados de OPG seguem uma tendência semelhante (Tabela 5). No entanto, os OPGs não se correlacionam com o desempenho do tratamento, assim como as pontuações das lesões (Figura 9).

SEGUNDO ESTUDO

[052] As rações consistiam em dietas de fase inicial, de crescimento e final de frangos de corte do tipo comercial não medicados, compostas de acordo com as diretrizes do NRC e contendo alimentos comumente utilizados nos Estados Unidos. Pintos de corte machos do dia da eclosão foram utilizados no estudo. As rações foram servidas ad libitum a partir da data de chegada dos pintos da seguinte maneira: Fase inicial - dia 0 ao dia 14, fase de crescimento do dia 14 ao dia 28 e fase final a partir do dia 28 ao dia 42 (data final do estudo). Vacinação contra coccídios apenas para os tratamentos 4 e 5.

[053] Dois mil e cem pássaros (2.100) foram atribuídos a sete (7) grupos de tratamento com doze (12) galinheiros replicados por tratamento e 25 pássaros por galinheiro. O estudo começou quando os pássaros foram alojados (dia da eclosão; PONTO 0), momento em que os pássaros foram alocados nos galinheiros experimentais. Apenas pássaros saudáveis foram selecionados. No PONTO 0, os pesos corporais do grupo foram registrados por galinheiro. Nenhum pássaro foi substituído durante o estudo.

METODOLOGIA DE ANÁLISE - SEGUNDO ESTUDO

[054] Os pássaros receberam alimento adequado ao tratamento do PONTO 0 ao PONTO 42. No PONTO 13, o alimento inicial restante foi removido, pesado e substituído por alimento de crescimento até o PONTO 28. No PONTO 28, o alimento de crescimento restante foi removido, pesado de volta e substituído por alimento acabado até o PONTO 42 (término do estudo). Todo o alimento não consumido foi pesado e descartado de acordo com as normas apropriadas.

[055] Todos os pássaros foram pesados por galinheiro no PONTO 0, 13, 28 e 42. O alimento adicionado ao comedouro de cada galinheiro, foi pesado no início de cada período de formulação no PONTO 0 (fase inicial), 13 (fase de crescimento) e 28 (fase final). Quaisquer sacos adicionais de alimento foram pesados (e documentados) para cada galinheiro (conforme necessário) durante cada período de formulação. O alimento foi distribuído conforme necessário aos comedouros a partir de sacos pré-pesados (atribuídos a cada galinheiro) ao longo de cada período. O alimento restante nos comedouros (e sacos de alimento, se aplicável) foi pesado e descartado no PONTO 13, 28 e 42. Os pesos dos comedouros vazios foram registrados antes do início do estudo. O ensaio foi encerrado no PONTO 42.

[056] No Dia 21 do estudo, todos os pássaros, exceto o grupo de controle negativo, receberam um inoculo coccidiano contendo: 100.000 oocistos por pássaro de E. acervulina; 50.000 oocistos por pássaro de E. maxima·, e 75.000 oocistos por pássaro de E. tenella. Todos os pássaros receberam uma mistura de inoculo coccidiano com E. acervulina, E. maxima, e E. tenella. O inoculo foi misturado ao alimento encontrado na base do tubo de alimentação de cada galinheiro.

[057] No Dia 26, três pássaros de cada galinheiro foram selecionados, sacrificados, pesados e examinados quanto ao grau de presença de lesões de coccídios. O método de Johnson e Reid (1970) de pontuação da lesão de coccidiose foi utilizado para pontuar a(s) região(ões) infectada(s) do intestino. A pontuação foi baseada em uma pontuação de 0 a 4, sendo 0 normal e 4 a mais grave.

[058] Também no Dia 26, amostras fecais frescas foram coletadas de cada galinheiro. Estas amostras representativas foram testadas para determinar o grau de propagação/ciclagem de oocistos. Foram determinados oocistos por grama para cada amostra.

*FCR ajustado para mortalidade

*FCR ajustado para mortalidade

*FCR ajustado para mortalidade

RESULTADOS - SEGUNDO ESTUDO

[059] Este estudo comparou o produto inventivo com e sem uma vacina contra coccídios vivos em frangos de corte desafiados aos 21 dias de idade com Eimeria acervulina, E. maxima, e E. tenella. Deve-se observar que não houve um projeto de desafio de Clostridium perfringens. No entanto, devido à limpeza anterior a este estudo com uma lavadora de alta pressão, os esporos resistentes de C. perfringens ainda estavam presentes, resultando em um leve N.E. no estudo.

[060] Aos 13 dias, podem ser observados efeitos da ciclagem da vacina contra coccídios (Tabela 6). No dia 28, o desafio de coccídios atingiu o pico e começou a afetar significativamente o desempenho. Os tratamentos com a composição inventiva na fase de crescimento possuíram quase a mesma FCR que o controle sem desafio (Tabela 7). Os tratamentos com a composição inventiva na fase de crescimento também obtiveram o maior peso corporal dentre os tratamentos desafiados, exceto o de 2,0 libras (0,9072 kg)/ton na fase de crescimento. Aos 42 dias, o crescimento compensatório resultou em diferenças de conversão alimentar menos significativas (Tabela 8). Os tratamentos com a composição inventiva na fase inicial e na fase de crescimento, mais 1,5 libra (0,6804 kg) apenas na fase de crescimento, obtiveram os maiores pesos corporais. Estes eram quase os mesmos que o controle não desafiado. A enterite necrótica ocorreu no pico da ciclagem da vacina contra coccídios e foi encontrada em todos os tratamentos, inclusive naqueles sem vacina. Os tratamentos utilizando a composição inventiva parecem reduzir a N.E., exceto o tratamento contendo duas libras na fase de crescimento.

[061] Cinco dias após o desafio de coccídios, três pássaros por galinheiro pontuaram por lesão para E. acervulina, E. maxima, e E. tenella. Todos os tratamentos reduziram as pontuações gerais de lesão por coccídios (Tabela 9). Isto é facilmente observado na FIG. 10. No pico da ciclagem de coccídios, dia 27 (ver Emenda de Protocolo 1), as fezes coletadas de cada galinheiro tinham contagens de oocistos por grama para cada uma das três espécies de desafio de Eimeria. Todos os tratamentos foram muito eficazes na redução dos oocistos/grama para todas as espécies, conforme mostrado na FIG. 11. Isso é especialmente observado com E. maxima.

TERCEIRO ESTUDO

[062] As rações consistiam em dietas de fase inicial, de crescimento e final de frangos de corte do tipo comercial não medicados, compostas de acordo com as diretrizes do NRC e contendo alimentos comumente utilizados nos Estados Unidos. Pintos de corte machos do dia da eclosão foram utilizados no estudo. As rações foram servidas ad libitum a partir da data de chegada dos pintos da seguinte maneira: Fase inicial - dia 0 ao dia 14, fase de crescimento do dia 14 ao dia 28 e fase final do dia 28 ao dia 42 (data final do estudo). Vacinação contra coccídios apenas para os tratamentos 4 e 5.

[063] Mil e quinhentos pássaros (1.500) foram atribuídos aleatoriamente a 5 grupos de tratamento com 12 galinheiros replicados por tratamento e 25 pássaros por galinheiro. O estudo começou quando os pássaros foram alojados (dia da eclosão; DIA 0), momento em que os pássaros foram alocados nos galinheiros experimentais. No dia 0, os pesos corporais do grupo foram registrados por galinheiro. Nenhum pássaro foi substituído durante o estudo.

METODOLOGIA DE ANÁLISE - TERCEIRO ESTUDO

[064] Os pássaros receberam alimento adequado ao tratamento a partir do dia 0 ao dia 42. No dia 14, o alimento inicial restante foi removido, pesado e substituído por alimento de crescimento até o dia 28. No dia 28, o alimento de crescimento restante foi removido, pesado de volta e substituído por alimento acabado até o dia 42.

[065] Todos os pássaros foram pesados por galinheiro nos dias 0, 14, 28 e 42. O alimento adicionado ao comedouro de cada galinheiro foi pesado no início de cada período de formulação no dia 0 (fase inicial), dia 14 (fase de crescimento) e dia 28 (fase final). O alimento foi distribuído conforme necessário aos comedouros a partir de sacos pré-pesados atribuídos a cada galinheiro ao longo de cada período. O alimento restante nos comedouros foi pesado e descartado nos dias 14, 28 e 42. O ensaio foi encerrado no dia 42.

[066] No dia 21 do estudo, todos os pássaros, exceto o grupo de controle negativo, receberam um inoculo coccidiano contendo: 100.000 oocistos de E. acervulino por pássaro, 50.000 oocistos de E. maxima por pássaro, e 75.000 oocistos de E. tenella por pássaro.

[067] No Dia 26, três pássaros de cada galinheiro foram selecionados, sacrificados, pesados e examinados quanto ao grau de presença de lesões de coccídios. A pontuação foi baseada em uma pontuação de 0 a 4, sendo 0 normal e 4 a mais grave.

[068] No Dia 26, amostras fecais frescas foram coletadas de cada galinheiro. Estas amostras representativas foram testadas para determinar o grau de propagação/ciclagem de oocistos. Foram determinados oocistos por grama para cada amostra.

*FCR ajustado para mortalidade
**A cor cinza denota tratamentos vacinados

*FCR ajustado para mortalidade
**A cor cinza denota tratamentos vacinados

*FCR ajustado para mortalidade
**A cor cinza denota tratamentos vacinados

**A cor cinza denota tratamentos vacinados

**A cor cinza denota tratamentos vacinados

RESULTADOS-TERCEIRO ESTUDO

[069] Antes do desafio no dia 14, houve pequenas diferenças nos parâmetros de desempenho (Tabela 10). No pico do desafio no dia 28, os pássaros tratados com a vacina mais o composto inventivo revelado tiveram um ganho de peso corporal semelhante à salinomicina (Tabela 11). No dia 28, verificou-se que os pássaros tratados com a vacina mais o composto inventivo revelado demonstraram menor FCR não-ajustado e FCR ajustado do que o tratamento apenas com vacina, e demonstrou FCR semelhante aos pássaros tratados com salinomicina (Tabela 12).

[070] As pontuações gerais médias de lesões por coccídios seis dias após o desafio demonstraram que a vacina mais o composto da invenção revelado, tiveram lesões por coccídios numérica ou estatisticamente significativamente mais baixas do que os grupos que receberam apenas a vacina ou o controle sem aditivo alimentar desafiado (Tabela 13). Os oocistos por grama (OPG) de fezes apresentaram uma tendência semelhante às pontuações por lesão (Tabela 14). O pico do desafio que deveria ser no dia da coleta de fezes (dia 27) constatou que 0 controle do desafio, a salinomicina, apresentou a maior contagem de oocistos neste momento. (Este resultado também confirma a perda de eficácia do ionóforo observada acima).

[071] Durante todo o período de estudo de 41 dias, o grupo que recebeu a vacina mais o composto inventivo anticoccidiano revelado, melhorou a FCR em relação ao grupo de vacina isoladamente e resultados semelhantes à salinomicina (Tabela 3). O maior ganho de peso dentre qualquer grupo desafiado foi observado no grupo que recebeu a vacina mais o composto inventivo revelado (2,52 kgB). Apenas os pássaros não desafiados eram mais pesados aos 2,65 kgA. A maior mortalidade (5,67%A) foi no tratamento apenas com vacina e a menor no tratamento apenas com salinomicina (1,33%B). Verificou-se que a combinação da vacina e o composto inventivo revelado tinham mortalidade geral semelhante à salinomicina (Tabela 12).

Claims

Uso de um composto de tratamento, caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de uma composição para prevenir ou tratar um animal contra uma doença patogênica, em que o referido composto de tratamento tem um efeito neutro sobre o patógeno, em que a referida composição é formulada para ser administrada em combinação com uma ou mais vacinas para intensificar a eficácia da uma ou mais vacinas, e em que a referida composição é formulada para ser administrada ao animal tanto em água potável quanto no alimento, ou em ambos, durante diferentes estágios de desenvolvimento.
Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido composto de tratamento é um composto de tratamento à base de lipopolissacarídeo derivado de bactérias.
Uso de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o referido composto de tratamento é derivado de Variovorax paradoxus.
Uso de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o referido composto de tratamento é uma composição de algas que inclui a presença de Variovorax paradoxus.
Uso de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o referido composto de tratamento é administrado nos estágios de desenvolvimento inicial, de crescimento e final.
Uso de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o referido composto de tratamento é administrado na quantidade entre 0,0 libra (0,0 kg) por tonelada de alimento e 1,0 libra (0,4536 kg) por tonelada de alimento acabado no estágio inicial.
Uso de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o referido composto de tratamento é administrado na quantidade entre 1,0 libra (0,4536 kg) por tonelada de alimento e 2,0 libras (0,9072 kg) por tonelada de alimento acabado no estágio de crescimento.
Uso de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o referido composto de tratamento é administrado na quantidade entre 0,0 libra (0,0 kg) por tonelada de alimento e 0,5 libra (0,2268 kg) por tonelada de alimento acabado no estágio final.
Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido composto de tratamento é inicialmente administrado ao animal com cerca de um dia de idade.
Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido composto de tratamento é administrado ao animal entre o dia um e o dia 14.
Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido composto de tratamento é eficaz na prevenção ou no tratamento de coccidiose.
Uso de um composto de tratamento de lipopolissacarídeo, caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de uma composição para prevenir ou tratar coccidiose em um animal, em que o referido composto de tratamento tem um efeito neutro sobre patógenos, em que a referida composição é formulada para ser administrada em combinação com uma vacina para intensificar a eficácia da vacina, e em que a referida composição é formulada para ser administrada ao animal tanto em água potável quanto no alimento, ou em ambos, in vivo.
Uso de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o referido composto de tratamento de lipopolissacarídeo é um lipopolissacarídeo derivado de bactérias.
Uso de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o referido composto de tratamento de lipopolissacarídeo derivado de bactérias é uma composição de algas que inclui a presença de Variovorax paradoxus.
Uso de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o referido composto de tratamento é derivado de Variovorax paradoxus.
Uso de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o referido composto de tratamento é administrado ao animal em diferentes estágios de desenvolvimento.
Uso de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que os diferentes estágios de desenvolvimento incluem o estágio inicial, o estágio de crescimento e o estágio final.
Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o referido composto de tratamento é administrado na quantidade entre 0,0 libra (0,0 kg) por tonelada de alimento e 1,0 libra (0,4536 kg) por tonelada de alimento acabado no estágio inicial.
Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o referido composto de tratamento é administrado na quantidade entre 1,0 libra (0,4536 kg) por tonelada de alimento e 2,0 libras (0,9072 kg) por tonelada de alimento acabado no estágio de crescimento.
Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o referido composto de tratamento é administrado na quantidade entre 0,0 libra (0,0 kg) por tonelada de alimento e 0,5 libra (0,2268 kg) por tonelada de alimento acabado no estágio final.
Composição para prevenir ou tratar coccidiose em um animal vacinado, caracterizada pelo fato de que compreende quantidades eficazes de um aditivo alimentar selecionado a partir de uma biomassa que consiste em uma biomassa de algas e uma biomassa bacteriana, em que o efeito anticoccidiano da vacina é intensificado através do aditivo alimentar.
Composição de acordo com a reivindicação 21, caracterizada pelo fato de que a biomassa é uma biomassa bacteriana que inclui um lipopolissacarídeo derivado de bactérias Gram-negativas.
Composição de acordo com a reivindicação 22, caracterizada pelo fato de que a biomassa é uma biomassa bacteriana que inclui um dentre um sobrenadante, uma bactéria simbionte ou fermentado bacteriano.
Invenção de produto, processo, sistema, kit ou uso, caracterizada pelo fato de que compreende um ou mais elementos descritos no presente pedido de patente.