BR102021004173A2 - SOPHOROLIPIDS AS A DECONTAMINANT IN THE REDUCTION OF THERMAL TOLERANT COLIFORMS AND ESCHERICHIA COLI IN THE STAGE OF PRE-COOLING POULTRY - Google Patents
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- A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
- A23B4/00—General methods for preserving meat, sausages, fish or fish products
- A23B4/14—Preserving with chemicals not covered by groups A23B4/02 or A23B4/12
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
A presente invenção objetiva o uso do soforolipídios de Starmerella como agente descontaminante na água de lavagem na etapa de pré-resfriamento de aves, quando se faz a lavagem das carcaças. Dito isso, as carcaças foram coletadas na etapa de evisceração, após chuveiro final, imediatamente anterior a entrada do pré resfriamento, simulando as condições do primeiro tanque dos pré resfriadores, que consiste no tanque com maior carga orgânica, bem como carga microbiológica. Os microrganismos contaminantes avaliados na invenção foram coliformes termotolerantes e Escherichia coli. Os soforolipídios nas concentrações de 500, 2.250 e 4.000 μg.mL-1 em etanol 45% (v/v), foram aplicados nas carcaças (em triplicata) por imersão em 500 mL das diferentes soluções e nos tempos de 30, 60 e 90 minutos, simulando as condições dos pré resfriadores em frigoríficos. Os resultados demonstraram que o soforolipídio em 2.250 e 4.000 μg.mL-1 em 30 minutos, foi eficaz no controle E. coli na água de lavagem, e a concentração de 2.250 μg.mL-1 em 90 minutos de tratamento zerou a contagem de coliformes termotolerantes. Assim, os dados evidenciam a aplicação de solução de soforolipídio como agente descontaminante, podendo ser utilizado como sanitizante no sistema de lavagem de carcaças por imersão, na etapa de pré resfriamento, no processo de abate, e no processamento de aves, para o controle de coliformes termotolerantes, especificamente E. coli.The present invention aims at using Starmerella sophorolipids as a decontaminating agent in the washing water in the poultry pre-cooling stage, when carcasses are washed. That said, the carcasses were collected in the evisceration stage, after the final shower, immediately before entering the pre-cooling, simulating the conditions of the first tank of the pre-coolers, which consists of the tank with the highest organic load, as well as the microbiological load. The contaminating microorganisms evaluated in the invention were thermotolerant coliforms and Escherichia coli. The sophorolipids at concentrations of 500, 2,250 and 4,000 μg.mL-1 in ethanol 45% (v/v) were applied to the carcasses (in triplicate) by immersion in 500 mL of the different solutions and at times of 30, 60 and 90 minutes, simulating the conditions of pre-coolers in slaughterhouses. The results showed that the sophorolipid at 2,250 and 4,000 μg.mL-1 in 30 minutes was effective in controlling E. coli in the wash water, and the concentration of 2,250 μg.mL-1 in 90 minutes of treatment zeroed the count of thermotolerant coliforms. Thus, the data show the application of sophorolipid solution as a decontaminating agent, which can be used as a sanitizer in the carcass washing system by immersion, in the pre-cooling stage, in the slaughtering process, and in the poultry processing, for the control of thermotolerant coliforms, specifically E. coli.
Description
[001] Estimativas para os próximos anos indicam um crescimento do número de habitantes, da urbanização e da renda da população mundial. Estes índices impulsionam o consumo de carne que, segundo as estatísticas da FAO (Organização das Nações Unidas para Alimentação e Agricultura), entre os anos de 2015 e 2030 representará, em média, uma taxa de crescimento mundial de 1,5%. Neste cenário, o Brasil vem se destacando, pois se tornou o maior exportador mundial de carne de frangos desde 2004 (ABPA, 2019). Medidas assertivas de manejo, ambiência, nutrição e sanidade colocaram o país no apogeu e foram fundamentais para manutenção e expansão de mercados consumidores nacionais e internacionais. Dentre todos os tipos de carne, a de frango de corte é a que deverá representar o maior aumento, com uma taxa de crescimento de 2,4% para este período.[001] Estimates for the coming years indicate growth in the number of inhabitants, urbanization and income of the world's population. These indices drive meat consumption which, according to FAO (Food and Agriculture Organization of the United Nations) statistics, between 2015 and 2030 will represent, on average, a world growth rate of 1.5%. In this scenario, Brazil has been standing out, as it has become the world's largest exporter of chicken meat since 2004 (ABPA, 2019). Assertive management, ambience, nutrition and health measures placed the country at its peak and were fundamental for maintaining and expanding national and international consumer markets. Among all types of meat, broiler chicken is expected to represent the largest increase, with a growth rate of 2.4% for this period.
[002] Entretanto, diante da presença de microrganismos patogênicos e produtos químicos usados de forma indevida dentro da cadeia de produção avícola, apresentam-se restrições severas e abrangentes, cujas regulamentações e avaliações técnicas apontam impactos à sanidade, à produtividade animal e principalmente à segurança dos alimentos (LONGO; FIGUEIREDO, 2014). Este fato foi confirmado recentemente pela “Operação Carne Fraca”, deflagrada no cenário nacional, e que coloca em risco toda a seriedade e competência das grandes empresas brasileiras exportadoras, abrindo um alerta para a estrondosa preocupação com relação ao alimento consumido. Ademais, por se tratar de um alimento altamente perecível, tal qual todos os produtos cárneos, a conservação e o transporte inadequados da carne de frango podem afetar de forma negativa seus atributos de qualidade, tornando-a indesejável do ponto de vista do consumidor, tornando-se um entrave na sua comercialização (CORRIER et al., 1999; WARRIS et al., 1999; MIN; AHN, 2005). O desafio para preservar as características do produto e prolongar sua vida de prateleira deve ser compreendido e considerado nas várias etapas do processo, que se inicia na fazenda e termina no prato do consumidor (LOGUE et al., 2003).[002] However, in view of the presence of pathogenic microorganisms and chemical products used improperly within the poultry production chain, there are severe and comprehensive restrictions, whose regulations and technical evaluations point to impacts on health, animal productivity and especially on safety of food (LONGO; FIGUEIREDO, 2014). This fact was recently confirmed by “Operação Carne Fraca”, launched on the national scene, and which puts at risk all the seriousness and competence of the large Brazilian exporting companies, opening an alert to the resounding concern regarding the food consumed. Furthermore, as it is a highly perishable food, like all meat products, improper conservation and transport of chicken meat can negatively affect its quality attributes, making it undesirable from the consumer's point of view, making it an obstacle to its commercialization (CORRIER et al., 1999; WARRIS et al., 1999; MIN; AHN, 2005). The challenge to preserve the product's characteristics and extend its shelf life must be understood and considered in the various stages of the process, which starts at the farm and ends on the consumer's plate (LOGUE et al., 2003).
[003] Nesse contexto, a avaliação microbiológica constitui um dos parâmetros crucial para se determinar a qualidade e a inocuidade das carnes, verificando se padrões e especificações microbiológicos nacionais e internacionais estão sendo atendidos adequadamente. Diante disso, pesquisas que buscam inovação no desenvolvimento de compostos eficazes na redução da contaminação microbiológica são fundamentais para despertar a atenção dos órgãos de regulamentação do Brasil sobre a necessidade, de mudanças e adesão de novos procedimentos para diminuição dos prejuízos na produção de frango, especialmente com agentes antibacterianos naturais, tais como os soforolipídios, que apresentam baixa citotoxicidade e alta biocompatibilidade.[003] In this context, microbiological evaluation is one of the crucial parameters to determine the quality and safety of meat, verifying that national and international microbiological standards and specifications are being properly met. In view of this, research that seeks innovation in the development of effective compounds in reducing microbiological contamination is essential to awaken the attention of regulatory bodies in Brazil about the need for changes and adherence to new procedures to reduce losses in chicken production, especially with natural antibacterial agents, such as sophorolipids, which have low cytotoxicity and high biocompatibility.
[004] Diversos estudos têm sido direcionados na busca de novos agentes descontaminantes e antimicrobianos, no entanto, no Brasil ainda não é permitida a utilização de qualquer adjunto ou composto descontaminante no processamento de abate das aves. Atualmente, a legislação brasileira permite cloração de 0,2 a 2,0 ppm de cloro livre na água de uso geral da indústria, conforme determinado pela ANVISA; e cloração máxima de 5,0 ppm de cloro livre na água de renovação na etapa de pré resfriamento - etapa está em que as carcaças são lavadas com o intuito de reduzir a temperatura e a contaminação até dois ciclos logarítmicos, para que se garanta sua qualidade durante o espostejamento e embalagem, a fim de não violar o segundo ponto crítico de controle, ou seja, atingir 4°C em no máximo quatro horas de processamento. (BRASIL, 1998).[004] Several studies have been directed towards the search for new decontaminating and antimicrobial agents, however, in Brazil the use of any adjunct or decontaminating compound in the processing of poultry slaughter is still not allowed. Currently, Brazilian legislation allows chlorination of 0.2 to 2.0 ppm of free chlorine in water for general industrial use, as determined by ANVISA; and maximum chlorination of 5.0 ppm of free chlorine in the renewal water in the pre-cooling stage - the stage is where the carcasses are washed in order to reduce the temperature and contamination up to two logarithmic cycles, in order to guarantee their quality during stripping and packaging, in order not to violate the second critical control point, that is, reaching 4°C in a maximum of four hours of processing. (BRASIL, 1998).
[005] Diferentes sanitizantes estão sendo estudados como agente descontaminante nas águas dos pré-resfriadores. No presente momento, é utilizado somente o agente cloro, mas pesquisas têm destacado a eficácia de produtos, por exemplo, derivados de ácidos orgânicos (lático, acético, cítrico, fumárico), sorbatos e benzoatos,fosfato trisódico (TSP), culturas starter (lactobacilli e lactococci), peróxido de hidrogênio e ozônio, a fim de legalizar tais coadjuvantes no abate e processamento de aves (ANDERSON et al., 1977; BOLDER et al.,1997; HUGAS; TSIGARIDA, 2008; DEPNER, 2015).[005] Different sanitizers are being studied as a decontaminating agent in the pre-cooler waters. At present, only the chlorine agent is used, but research has highlighted the effectiveness of products, for example, derivatives of organic acids (lactic, acetic, citric, fumaric), sorbates and benzoates, trisodium phosphate (TSP), starter cultures ( lactobacilli and lactococci), hydrogen peroxide and ozone, in order to legalize such coadjuvants in the slaughter and processing of poultry (ANDERSON et al., 1977; BOLDER et al.,1997; HUGAS; TSIGARIDA, 2008; DEPNER, 2015).
[006] Os Estados Unidos e na União Europeia, já legalizaram produtos químicos como hipoclorito de sódio, ozônio e o ácido lático para a desinfecção de carcaças de aves ou de bovinos. A legislação americana permite o uso de concentrações superiores a 20 ppm de cloro na água comum e 50 ppm na água dos pré resfriadores e aspersão de soluções de até 5% de ácido lático para uso em carcaças de frango após o pré-resfriamento; e utilização de ozônio para todos os produtos de carne de frango (U.S.A., 2016; COMISSÃO, 2013). Já a comunidade europeia regulamenta o uso de solução de ácido láctico, de 2 a 5%, por pulverização ou nebulização; e níveis de cloração de até 5 ppm de cloro livre na água de refrigeração do chiller (COMISSÃO, 2013; EFSA, 2011).[006] The United States and the European Union have already legalized chemicals such as sodium hypochlorite, ozone and lactic acid for the disinfection of poultry or cattle carcasses. American legislation allows the use of concentrations greater than 20 ppm of chlorine in common water and 50 ppm in pre-cooler water and spraying of solutions of up to 5% of lactic acid for use in chicken carcasses after pre-cooling; and use of ozone for all poultry meat products (U.S.A., 2016; COMISSÃO, 2013). The European community, on the other hand, regulates the use of lactic acid solution, from 2 to 5%, by spraying or nebulizing; and chlorination levels of up to 5 ppm of free chlorine in the chiller cooling water (COMISSÃO, 2013; EFSA, 2011).
[007] O cloro é o agente sanitizante mais utilizado nos processos de descontaminação de carcaças, tendo seu efeito comprovado em diversas pesquisas. Em contrapartida, a utilização de hipoclorito de sódio é limitada quando a carne se destina à exportação para União Europeia (UE) e Rússia, pois estes mercados exigem dos abatedouros brasileiros utilizar água potável com máximo 5,0 e 1,0 ppm respectivamente, devido à possibilidade da oxidação do cloro produzir agentes cancerígenos (RUSSEL, 2007).[007] Chlorine is the most used sanitizing agent in carcass decontamination processes, having its effect proven in several studies. On the other hand, the use of sodium hypochlorite is limited when the meat is destined for export to the European Union (EU) and Russia, as these markets require Brazilian slaughterhouses to use potable water with a maximum of 5.0 and 1.0 ppm respectively, due to to the possibility of chlorine oxidation producing carcinogens (RUSSEL, 2007).
[008] O altivo potencial como agente antimicrobiano alternativo do soforolipídio, no combate de microrganismos patogênicos, evidenciados recentemente na literatura (SILVEIRA et al., 2019; HOA et al., 2017; SOLAIMAN; ASHBY; UKNALIS, 2017; VALOTTEAU et al., 2017; DÍAZ DE RIENZO et al., 2015; ZHANG et al., 2017) e a comprovada ação para bactérias de extrema importância no controle higiênico sanitário das indústrias de abate e processamento de aves, tanto Gram-positivas e negativas, como Staphyloccocus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Listeria monocytogenes, Escherichia coli, Salmonela spp. e Salmonela typhimurium, entre outras, sugere que este composto seja uma alternativa de agente descontaminante para aplicação na água de imersão do pré resfriamento em abate e processamento de aves.[008] The high potential as an alternative antimicrobial agent of sophorolipid, in the fight against pathogenic microorganisms, recently evidenced in the literature (SILVEIRA et al., 2019; HOA et al., 2017; SOLAIMAN; ASHBY; UKNALIS, 2017; VALOTTEAU et al. , 2017; DÍAZ DE RIENZO et al., 2015; ZHANG et al., 2017) and the proven action against bacteria of extreme importance in the sanitary hygienic control of poultry slaughtering and processing industries, both Gram-positive and negative, such as Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Listeria monocytogenes, Escherichia coli, Salmonella spp. and Salmonella typhimurium, among others, suggests that this compound is an alternative decontaminant agent for application in pre-cooling immersion water in poultry slaughtering and processing.
[009] As atividades antimicrobianas dos soforolipídios envolvem mecanismos de desestabilização e alteração da permeação da membrana celular, o que leva a ruptura e extravasamento do conteúdo celular (FRACCHIA et al., 2015; OLIVEIRA et al., 2015). As propriedades antimicrobianas dos soforolipídios estão intimamente relacionadas com sua estrutura química formada, que podem ser divididas em dois grupos principais, as formas acídicas e lactônicas. Apesar de uma melhor ação das formas lactônicas, os soforolipídios são eficazes como agente bactericida independentemente de seu conteúdo acídico/lactônico, capaz de induzir a morte de células planctônicas e biofilmes, sendo comparável aos antimicrobianos convencionais (PAULINO et al., 2016).[009] The antimicrobial activities of sophorolipids involve mechanisms of destabilization and alteration of cell membrane permeation, which leads to rupture and leakage of cell contents (FRACCHIA et al., 2015; OLIVEIRA et al., 2015). The antimicrobial properties of sophorolipids are closely related to their formed chemical structure, which can be divided into two main groups, acidic and lactonic forms. Despite the better action of the lactonic forms, sophorolipids are effective as a bactericidal agent regardless of their acidic/lactonic content, capable of inducing the death of planktonic cells and biofilms, being comparable to conventional antimicrobials (PAULINO et al., 2016).
[010] Os soforolipídios são biossurfactantes compostos por um dissacarídeo de soforose unidos a uma cadeia de ácido graxo (ASHBY; SOLAIMAN, 2010). Possuem inúmeras vantagens frente aos compostos sintéticos, como biodegradabilidade e natureza ecológica, baixa toxicidade, alta seletividade devido à presença de grupos funcionais específicos e eficiência de operação em condições ambientais extremas de temperatura, pH e salinidade, o que os torna adequados para uma ampla gama de aplicações industriais (MAKKAR; CAMEOTRA; BANAT, 2011; NITSCHKE; PASTORE, 2002).[010] Sophorolipids are biosurfactants composed of a sophorose disaccharide attached to a fatty acid chain (ASHBY; SOLAIMAN, 2010). They have numerous advantages over synthetic compounds, such as biodegradability and ecological nature, low toxicity, high selectivity due to the presence of specific functional groups and operating efficiency in extreme environmental conditions of temperature, pH and salinity, which makes them suitable for a wide range of of industrial applications (MAKKAR; CAMEOTRA; BANAT, 2011; NITSCHKE; PASTORE, 2002).
[011] Considerando a importância do desenvolvimento de novas estratégias e agentes para o controle de microrganismos deteriorantes e patogênicos, os soforolipídios podem ser vistos como os biossurfactantes mais vantajosos nesta perspectiva. Apesar da ação bem elucidada, a aplicação desse composto em produtos alimentares de origem animal nunca foi testada para coliformes termotolerantes, em especial a Escherichia coli. Dessa forma, a presente invenção tem como objetivo avaliar a ação do soforolipídio “in vivo”, na população de coliformes termotolerantes e Escherichia coli presentes nas carcaças e consequentemente na água de lavagem de frango, simulando a ação antimicrobiana para redução logarítmica dos microrganismos pesquisados na água do sistema de pré resfriamento. Diante do exposto, a utilização desse biossurfactante, na redução de contaminação microbiológica em carne de frango é extremamente promissora para as indústrias avícolas do Brasil, visto a importância do controle microbiológico, não apenas para a saúde pública, mas também para os órgãos de regulamentação, promovendo a adoção de novas metodologias, afim de diminuir prejuízos no setor avícola.[011] Considering the importance of developing new strategies and agents for the control of deteriorating and pathogenic microorganisms, sophorolipids can be seen as the most advantageous biosurfactants in this perspective. Despite its well-understood action, the application of this compound in food products of animal origin has never been tested for thermotolerant coliforms, especially Escherichia coli. Thus, the present invention aims to evaluate the action of sophorolipid "in vivo", in the population of thermotolerant coliforms and Escherichia coli present in the carcasses and consequently in the chicken washing water, simulating the antimicrobial action for logarithmic reduction of the microorganisms researched in the precooling system water. In view of the above, the use of this biosurfactant to reduce microbiological contamination in chicken meat is extremely promising for the poultry industries in Brazil, given the importance of microbiological control, not only for public health, but also for regulatory bodies, promoting the adoption of new methodologies in order to reduce losses in the poultry sector.
[012] Foram depositadas, anteriormente, outras três patentes, descritas abaixo, sobre a aplicação de soforolipídio em carne de frango e sua ação contra os microrganismos aeróbios mesófilos, coliformes termotolerantes e Escherichia coli, porém, todas diferem da atual, pois nesta em questão é avaliada e comprovada a eficácia do soforolipídio em chiller, que consiste em uma lavagem por imersão com soforolipídio em uma etapa diferente do processo produtivo avícola, considerada ponto crítico de controle.[012] Three other patents were deposited previously, described below, on the application of sophorolipid in chicken meat and its action against mesophilic aerobic microorganisms, thermotolerant coliforms and Escherichia coli, however, all differ from the current one, because in this one in question the effectiveness of sophorolipid in a chiller is evaluated and proven, which consists of washing by immersion with sophorolipid in a different stage of the poultry production process, considered a critical control point.
[013] APLICAÇÃO DE SOFOROLIPÍDIO PARA REDUÇÃO DE CONTAMINAÇÃO DE AERÓBIOS MESÓFILOS EM CORTES DE FRANGO (BR 10 2018 072522 0), cuja invenção tem como objetivo a avaliação da atividade antibacteriana de soforolipídios, produzidos por espécie de Candida, em aeróbios mesófilos em cortes de frango. O soforolipídio produzido foi liofilizado e os testes conduzidos em triplicada. O experimento consistiu na imersão de 100 g de peito de frango, cortado em quadrados de 2 cm e imersos em 500 mL de solução com diferentes concentrações de soforolipídios (500, 2.250 e 4.000 μg/mL em etanol 45% (v/v), em diferentes tempos de tratamentos (30, 60 e 90 minutos). Foi utilizado como padrão a imersão em água de torneira e tratamento com apenas etanol 45%, nos mesmos tempos indicados. Os cortes de frango foram armazenados em sacos plásticos estéreis e as análises microbiológicas realizadas por contagem de unidades formadoras de colônias utilizando sistema Petrifilm (3M). Os resultados demonstraram que a utilização de soforolipídio no controle da população de mesófilos aeróbios foi eficaz. O aumento da concentração de soforolipídios reduziu o crescimento dos mesófilos em 10%, 41% e 72% com 500, 2.250 e 4.000 μg/mL, respectivamente, demonstrando ser um eficiente sanitizante não tóxico. Assim, a possibilidade de aplicação deste composto no processo de abate de aves para o controle de mesófilos é de grande relevância.[013] APPLICATION OF SOPHOROLIPID FOR REDUCING CONTAMINATION OF MESOPHIL AEROBES IN CHICKEN CUTS (BR 10 2018 072522 0), whose invention aims to evaluate the antibacterial activity of sophorolipids, produced by Candida species, in mesophilic aerobes in cuts of chicken. The sophorolipid produced was lyophilized and the tests conducted in triplicate. The experiment consisted of immersing 100 g of chicken breast, cut into 2 cm squares and immersed in 500 mL of a solution with different concentrations of sophorolipids (500, 2,250 and 4,000 μg/mL in 45% ethanol (v/v), at different treatment times (30, 60 and 90 minutes). Immersion in tap water and treatment with only 45% ethanol was used as standard, at the same times indicated. The chicken cuts were stored in sterile plastic bags and the analyzes microbiological tests carried out by counting colony-forming units using the Petrifilm system (3M). The results showed that the use of sophorolipid in the control of the aerobic mesophilic population was effective. The increase in the concentration of sophorolipid reduced the growth of mesophiles by 10%, 41 % and 72% with 500, 2,250 and 4,000 μg/mL, respectively, proving to be an efficient non-toxic sanitizer. Thus, the possibility of applying this compound in the process of slaughtering poultry for the control le of mesophiles is of great relevance.
[014] APLICAÇÃO DE SOFOROLIPÍDIOS COMO SANITIZANTE NO SISTEMA LAVAGEM DE CARCAÇAS DE FRANGO POR ASPERSÃO PARA REDUÇÃO DE CONTAMINAÇÃO DE AERÓBIOS MESÓFILOS (BR 10 2019 004754 2), cuja invenção refere-se à aplicação de soforolipídios, produzido a partir de uma levedura do gênero Candida contra aeróbios mesófilos contaminantes em carcaças de frango. Os resultados demonstraram que a maior concentração testada de soforolipídio foi eficaz em diminuir a população de aeróbios mesófilos em carcaças de frango, obtendo-se redução de 1 log da contaminação presente desse grupo. Os resultados encontrados nessa invenção demonstraram viabilidade e facilidade de aplicação deste composto, na lavagem de carcaças, durante o processo industrial controlando os mesófilos, que são os principais indicativos de qualidade na indústria avícola.[014] APPLICATION OF SOPHOROLIPIDS AS SANITIZER IN THE SPRINKLER CHICKEN CARCASS WASHING SYSTEM TO REDUCED CONTAMINATION OF AEROBES MESOPHILS (BR 10 2019 004754 2), whose invention refers to the application of sophorolipids, produced from a yeast of the genus Candida against contaminating mesophilic aerobes in chicken carcasses. The results showed that the highest concentration of sophorolipid tested was effective in reducing the population of mesophilic aerobes in chicken carcasses, resulting in a reduction of 1 log in the contamination present in this group. The results found in this invention demonstrated the feasibility and ease of application of this compound, in washing carcasses, during the industrial process, controlling mesophiles, which are the main quality indicators in the poultry industry.
[015] USO DE SOFOROLIPIOS DE Starmerella DURANTE A LAVAGEM DE CARCAÇAS PARA REDUÇÃO MICROBIANA APÓS A ETAPA DE EVISCERAÇÃO DE FRANGOS DE CORTE (BR 10 2020 013479 5), cuja invenção proposta tem como objetivo o uso de soforolipídio, produzido por uma espécie de Starmerella, como coadjuvante na água utilizada para lavar as carcaças após evisceração e avaliar sua efetividade como sanitizante, contra coliformes termotolerantes e Escherichia coli. Os resultados demonstraram que os soforolipídios foram eficazes no controle dos patógenos, demonstrando ser um eficiente sanitizante, podendo ser usado como agente descontaminante nas indústrias avícolas, na etapa de evisceração na lavagem por aspersão das carcaças, reduzindo a contaminação, por coliformes termotolerantes e Escherichia coli.[015] USE OF SOPHOROLIPS FROM Starmerella DURING THE WASHING OF CARCASSES FOR MICROBIAL REDUCTION AFTER THE EVISCERATION STAGE OF BROILER CHICKENS (BR 10 2020 013479 5), whose proposed invention aims to use sophorolipid, produced by a species of Starmerella , as an adjuvant in the water used to wash the carcasses after evisceration and evaluate its effectiveness as a sanitizer against thermotolerant coliforms and Escherichia coli. The results showed that sophorolipids were effective in controlling pathogens, proving to be an efficient sanitizing agent and can be used as a decontaminating agent in poultry industries, in the evisceration stage in the spray washing of carcasses, reducing contamination by thermotolerant coliforms and Escherichia coli .
[016] Methods for washing poultry during processing with medium chain peroxycarboxylic acid compositions (US8128976B2), cuja invenção refere-se a métodos para reduzir a contaminação microbiana em aves ou em superfícies usadas no processamento de aves, empregando composições incluindo ácido carboxílicos por spray ou imersão em água. Não há relato da utilização de biossurfactantes, como os soforolipídios, como agentes antimicrobianos neta etapa que foi descrita na presente patente, diferindo-a da invenção pleiteada.[016] Methods for washing poultry during processing with medium chain peroxycarboxylic acid compositions (US8128976B2), whose invention relates to methods for reducing microbial contamination in poultry or on surfaces used in poultry processing, employing compositions including carboxylic acids by spray or immersion in water. There is no report of the use of biosurfactants, such as sophorolipids, as antimicrobial agents in this step that was described in the present patent, differing it from the claimed invention.
[017] Pathogen reduction using chloramines (US7767095B2, cuja invenção descreve o uso de cloraminas em água utilizada na planta de abate de aves para a redução de patógenos associados. O diferencial da invenção pleiteada é a aplicação dos soforolipídios, um produto não tóxico e efetivo como agente antimicrobiano no processo.[017] Pathogen reduction using chloramines (US7767095B2, whose invention describes the use of chloramines in water used in the poultry slaughter plant to reduce associated pathogens. The differential of the claimed invention is the application of sophorolipids, a non-toxic and effective product as an antimicrobial agent in the process.
[018] Poultry processing water recovery and re-use process (US7077967B2), cuja invenção descreve a utilização de compostos clorados e ozônio para reduzir os níveis de contaminação da água de chiller e sua potencial reutilização, gerando economia no processo. Não utiliza nenhum tipo de biossurfactante, como os soforolipídios para reduzir tal contaminação como descrito na nossa patente.[018] Poultry processing water recovery and re-use process (US7077967B2), whose invention describes the use of chlorinated compounds and ozone to reduce the levels of contamination of chiller water and its potential reuse, generating savings in the process. It does not use any type of biosurfactant such as sophorolipids to reduce such contamination as described in our patent.
[019] Treatment of animal carcasses (US8030351B2), cuja invenção descreve um método de sanitização das carcaças usando água com antimicrobianos, tais como uma mistura de ácidos carboxílicos. Diferentemente, enquanto essa invenção utiliza ácidos carboxílicos como agentes antimicrobianos, a pleiteada propõe um novo sanitizante, os soforolipídios.[019] Treatment of animal carcasses (US8030351B2), whose invention describes a method of sanitizing carcasses using water with antimicrobials, such as a mixture of carboxylic acids. Differently, while this invention uses carboxylic acids as antimicrobial agents, the defendant proposes a new sanitizer, sophorolipids.
[020] Method for neutralizing fungi using sophorolipids and antifungal sophorolipids for use therein (US8796228B2): A presente invenção refere-se as propriedades antifúngicas dos soforolipídio e métodos para usá-los como agentes antifúngicos. A solução de soforolipídio foi preparada adicionando 15 mg de composto em 1 ml de solução de sacarose e os microrganismos testados foram Candida albicans, Candida antartica e Candida tropicalis. Essa patente descrê testes in vitro, utilizando placas de 96 poços, e não foi relatado teste contra bactérias contaminantes da indústria avícola ou foi realizado testes em carne de frango ou na indústria avícola na fase de pré-resfriamento.[020] Method for neutralizing fungi using sophorolipids and antifungal sophorolipids for use therein (US8796228B2): The present invention relates to the antifungal properties of sophorolipids and methods for using them as antifungal agents. The sophorolipid solution was prepared by adding 15 mg of compound in 1 ml of sucrose solution and the microorganisms tested were Candida albicans, Candida antartica and Candida tropicalis. This patent describes in vitro tests, using 96-well plates, and no test has been reported against contaminating bacteria from the poultry industry or tests have been carried out on chicken meat or in the poultry industry in the pre-cooling phase.
[021] Method for neutralizing fungi using sophorolipids and antifungal sophorolipids for use therein (US8796228B2): A presente invenção refere-se as propriedades antifúngicas dos soforolipídio e métodos para usá-los como agentes antifúngicos. A solução de soforolipídio foi preparada adicionando 15 mg de composto em 1 ml de solução de sacarose e os microrganismos testados foram Candida albicans, Candida antartica e Candida tropicalis. Essa patente descrê testes in vitro, utilizando placas de 96 poços, e não foi relatado teste contra bactérias contaminantes da indústria avícola ou foi realizado testes em carne de frango ou na indústria avícola na fase de pré-resfriamento.[021] Method for neutralizing fungi using sophorolipids and antifungal sophorolipids for use therein (US8796228B2): The present invention relates to the antifungal properties of sophorolipids and methods for using them as antifungal agents. The sophorolipid solution was prepared by adding 15 mg of compound in 1 ml of sucrose solution and the microorganisms tested were Candida albicans, Candida antartica and Candida tropicalis. This patent describes in vitro tests, using 96-well plates, and no test has been reported against contaminating bacteria from the poultry industry or tests have been carried out on chicken meat or in the poultry industry in the pre-cooling phase.
[022] Sophorolipid fruit preservative and use thereof in fruit preservation (CN101886047A), A invenção pertence ao campo técnico de preservação de alimentos e refere-se a um conservante de frutas com soforolipídio, em particular a um método para prolongar a vida de preservação de frutas. Uma solução de 3 mg/mL do soforolipídio é preparada usando água destilada e é pulverizada uniformemente nas frutas para evitar a corrosão e manter o frescor da fruta, prolongando a vida útil. Diferentemente, essa invenção tem como foco a utilização da solução como soforolipídio como conservante de frutas, então não é descrito o estudo de microrganismos patogênicos avícolas ou a utilização de soforolipídio em carne de frango.[022] Sophorolipid fruit preservative and use thereof in fruit preservation (CN101886047A), The invention belongs to the technical field of food preservation and relates to a fruit preservative with sophorolipid, in particular to a method for extending the preservation life of fruits. A 3 mg/mL solution of the sophorolipid is prepared using distilled water and is evenly sprayed on the fruit to prevent corrosion and maintain fruit freshness, extending shelf life. Differently, this invention focuses on the use of the solution as a sophorolipid as a fruit preservative, so the study of poultry pathogenic microorganisms or the use of sophorolipid in chicken meat is not described.
[023] Modified sophorolipids for the inhibition of plant pathogens (US20130085067A1), Método para controlar pragas de plantas através de métodos de modificação química de soforolipídios e sua aplicação em patógenos da planta ou a um ambiente em que os patógenos possam ocorrer. Portanto é um processo para uso em plantas e não utiliza microrganismos contaminantes da carne de frango.[023] Modified sophorolipids for the inhibition of plant pathogens (US20130085067A1), Method for controlling plant pests through methods of chemical modification of sophorolipids and their application to plant pathogens or to an environment in which pathogens may occur. Therefore, it is a process for use in plants and does not use contaminating microorganisms from chicken meat.
[024] Use of sophorolipids and derivatives thereof in combination with pesticides as adjuvant/additive for plant protection and the industrial non-crop field (US20120220464A1), A invenção refere-se ao emprego de soforolipídios como adjuvantes em combinação com pesticidas como aditivo e formulação para produção e proteção de plantas e para o âmbito industrial non-crop. Portanto é um processo para uso em plantas e não utiliza microrganismos contaminantes da carne de frango.[024] Use of sophorolipids and derivatives thereof in combination with pesticides as adjuvant/additive for plant protection and the industrial non-crop field (US20120220464A1), The invention refers to the use of sophorolipids as adjuvants in combination with pesticides as an additive and formulation for plant production and protection and for the industrial non-crop field. Therefore, it is a process for use in plants and does not use contaminating microorganisms from chicken meat.
[025] A kind of compound bacteriostatic soap of bioactivity and preparation method thereof (CN110331059A), A invenção apresenta sabões bacteriostáticos compostos por bases de sabão de plantas, soluções aquosas de soforolipídio e lisozima. O sabão bacteriostático possui ação eficiente, espectro antimicrobiano amplo, e o poder de remoção de sujeira é forte e ambientalmente protetor. A invenção descreve a utilização de soforolipídio como composto para sabão bacteriostático de amplo espectro, não relata uso em produtos avícolas ou em bactérias contaminantes deste setor.[025] A kind of compound bacteriostatic soap of bioactivity and preparation method thereof (CN110331059A), The invention features bacteriostatic soaps composed of plant soap bases, aqueous solutions of sophorolipid and lysozyme. The bacteriostatic soap has efficient action, broad antimicrobial spectrum, and the dirt removal power is strong and environmentally protective. The invention describes the use of sophorolipid as a compound for broad spectrum bacteriostatic soap, it does not report the use in poultry products or in contaminating bacteria in this sector.
[026] A kind of kitchen greasy dirt cleaning agent and preparation method thereof containing biosurfactant (CN109705990A), Descreve a invenção de um agente de limpeza para cozinha constituído por biossurfactante (soforolipídio) e outros compostos. Não apresenta teste em microrganismos contaminantes da indústria avícola ou aplicação em carne de frango.[026] A kind of kitchen greasy dirt cleaning agent and preparation method thereof containing biosurfactant (CN109705990A), Describes the invention of a kitchen cleaning agent consisting of biosurfactant (sophorolipid) and other compounds. It does not present a test on contaminating microorganisms from the poultry industry or application on chicken meat.
[027] Materials and methods for maintaining industrial, mechanical and restaurant equipment (CA3059419A1), A presente invenção fornece um produto à base de leveduras para melhorar a produção e desempenho industriais, limpando eficientemente substâncias contaminantes e/ou incrustantes de equipamentos industriais. A invenção fornece materiais e métodos para a limpeza de equipamentos industriais utilizando leveduras e/ou subprodutos de produção, como, por exemplo, biossurfactantes (soforolipídio). Essa invenção não descreve a utilização do soforolipídio como agente antibacteriano em carne de frango, mas sim como possível agente de limpeza para equipamentos industriais.[027] Materials and methods for maintaining industrial, mechanical and restaurant equipment (CA3059419A1), The present invention provides a yeast-based product to improve industrial production and performance, efficiently cleaning contaminating substances and/or fouling of industrial equipment. The invention provides materials and methods for cleaning industrial equipment using yeast and/or production by-products, such as, for example, biosurfactants (sophorolipid). This invention does not describe the use of sophorolipid as an antibacterial agent in chicken meat, but as a possible cleaning agent for industrial equipment.
[028] Biocide solution containing sophorolipids and its Application (CN105191941B), Descreve a invenção de uma solução biocida contendo soforolipídio, etanol e água. São testados os microrganismos E. coli, Salmonella e Listeria, os quais apresentaram bom efeito bactericida. No entanto, não é realizado teste em carne de frango, apenas testes in vitro.[028] Biocide solution containing sophorolipids and its Application (CN105191941B), Describes the invention of a biocide solution containing sophorolipid, ethanol and water. The microorganisms E. coli, Salmonella and Listeria are tested, which showed good bactericidal effect. However, no test is carried out on chicken meat, only in vitro tests.
[029] Animal feed containing specific glycolipids (BR112018015786A2), Descreve o uso de soforolipídio e lisolecitina na preparação de um suplemento alimentar para melhorar a eficiência alimentar animal e a taxa de conversão alimentar. Essa invenção tem como objetivo melhorar a conversão alimentar de animais, destacando as aves, porém não apresenta qualquer evidência do controle do soforolipídio nos microrganismos patogênicos testados na presente patente, além de diferenciar que sua aplicação é em frangos de corte vivos, e não na carne de frango.[029] Animal feed containing specific glycolipids (BR112018015786A2), Describes the use of sophorolipid and lysolecithin in the preparation of a feed supplement to improve animal feed efficiency and feed conversion rate. This invention aims to improve the feed conversion of animals, highlighting poultry, but it does not present any evidence of sophorolipid control in the pathogenic microorganisms tested in this patent, in addition to differentiating that its application is in live broiler chickens, and not in meat. of chicken.
[030] Processo de microencapsulação celular por alginato de sódio de leveduras do gênero Candida para a produção de soforolipídeos (BR 10 2017 020787 0 A2), A presente invenção refere-se ao processo de imobilização celular por microencapsulação com alginato de sódio de leveduras do gênero Candida
para a produção de soforolipídeos que se destaca pela ampla aplicação industrial. O processo descrito não apresenta aplicação ou foco em microrganismos contaminantes da indústria avícola, ou carne de frango.[030] Process of cell microencapsulation by sodium alginate of yeasts of the genus Candida for the production of sophorolipids (BR 10 2017 020787 0 A2), The present invention refers to the process of cell immobilization by microencapsulation with sodium alginate of yeasts of the Candida genus
for the production of sophorolipids that stands out for its wide industrial application. The described process does not present application or focus on contaminating microorganisms of the poultry industry, or chicken meat.
[031] Processo de utilização da gordura residual da indústria de frango para produção de soforolipídios (BR 10 2017 012044 9 A2), A presente invenção refere-se ao processamento da gordura residual da indústria de frango e sua utilização para a produção de soforolipídios por uma cepa de Candida. A invenção tem como foco a utilização de um subproduto industrial para a produção de soforolipídios, não apresentando aplicação em microrganismos patogênicos da carne de frango.[031] Process of using residual fat from the chicken industry for the production of sophorolipids (BR 10 2017 012044 9 A2), The present invention refers to the processing of residual fat from the chicken industry and its use for the production of sophorolipids by a strain of Candida. The invention focuses on the use of an industrial by-product for the production of sophorolipids, with no application in pathogenic microorganisms of chicken meat.
[032] Processo de produção de soforose a partir de soforolipídios (BR 11 2015 009139 3 A2), A presente invenção refere-se a um processo de soforose, a partir de soforolipídio, no qual se efetua uma etapa de hidrólise do soforolipídio em meio aquoso, em presença de um composto ácido. Não é mencionado a aplicação de soforolipídios como agentes antimicrobianos avícolas.[032] Sophorose production process from sophorolipids (BR 11 2015 009139 3 A2), The present invention relates to a sophorose process, from sophorolipid, in which a hydrolysis step of sophorolipid is carried out in medium aqueous solution in the presence of an acidic compound. The application of sophorolipids as poultry antimicrobial agents is not mentioned.
[033] Passion fruit fresh keeping agent and application thereof (CN108208147), É descrita a invenção de uma solução de manutenção de frescor para maracujá utilizando soforolipídio como um dos ingredientes. Com essa solução é possível estender a durabilidade e o frescor da fruta. Não foi relatado teste contra bactérias contaminantes da indústria avícola, nem aplicação diretamente na carne de frango.[033] Passion fruit fresh keeping agent and application thereof (CN108208147), The invention of a freshness maintenance solution for passion fruit using sophorolipid as one of the ingredients is described. With this solution it is possible to extend the durability and freshness of the fruit. Testing against contaminating bacteria from the poultry industry has not been reported, nor has it been applied directly to chicken meat.
[034] Sterilization detergent for down feather (CN108085167), É desenvolvido um detergente de esterilização para penas contendo soforolipídio como um dos compostos ativos. O detergente para esterilização possui as vantagens de remover o odor completamente, usar pouca água, o efeito da esterilização é bom e a eficiência da limpeza é alta. O soforolipídio é utilizado como um agente detergente de limpeza após retirada de penas e como removedor de odores, não é feito testes para verificar a diminuição da contagem de bactérias contaminantes na carne de frango antes e após o tratamento com o biossurfactante.[034] Sterilization detergent for down feather (CN108085167), A sterilization detergent for feathers containing sophorolipid as one of the active compounds is developed. The sterilization detergent has the advantages of completely removing odor, using little water, the sterilization effect is good, and the cleaning efficiency is high. Sophorolipid is used as a detergent cleaning agent after feather removal and as an odor remover, tests are not carried out to verify the decrease in the count of contaminating bacteria in chicken meat before and after treatment with the biosurfactant.
[035] O objetivo desta invenção é utilizar os soforolipídios de Starmerella como agente descontaminante na água de lavagem na etapa de pré-resfriamento de aves, quando se faz a lavagem das carcaças. Dito isso, as carcaças de frango foram coletadas na etapa de evisceração, após chuveiro final, imediatamente anterior a entrada do pré resfriamento, simulando as condições do primeiro tanque dos pré resfriadores, que consiste no tanque com maior carga orgânica, bem como carga microbiológica.[035] The purpose of this invention is to use Starmerella sophorolipids as a decontaminating agent in the washing water in the pre-cooling stage of poultry, when washing the carcasses. That said, the chicken carcasses were collected in the evisceration stage, after the final shower, immediately before entering the pre-cooling, simulating the conditions of the first tank of the pre-coolers, which consists of the tank with the highest organic load, as well as the microbiological load.
[036] Os microrganismos contaminantes avaliados na invenção foram coliformes termotolerantes e Escherichia coli. Os soforolipídios nas concentrações de 500, 2.250 e 4.000 μg.mL-1 em etanol 45% (v/v), foram aplicados nas carcaças (em triplicata) por imersão em 500mL das diferentes soluções e com tempos de exposição de 30, 60 e 90 minutos, simulando as condições dos pré resfriadores em frigoríficos. Os resultados demonstraram que, como nunca antes foi feito, os soforolipídios em 2.250 e 4.000 μg.mL-1 em 30 minutos, foi eficaz no controle E. coli na água de lavagem, e a concentração de 2.250 μg.mL-1 em 90 minutos de exposição, zerou a contagem de coliformes termotolerantes. Assim, os dados evidenciam a aplicação de solução de soforolipídios como agente descontaminante, podendo ser utilizado como sanitizante no sistema de lavagem de carcaças por imersão, na etapa de pré resfriamento, no processo de abate, e no processamento de aves, para o controle de coliformes termotolerantes, especificamente E. coli.[036] The contaminating microorganisms evaluated in the invention were thermotolerant coliforms and Escherichia coli. The sophorolipids at concentrations of 500, 2,250 and 4,000 μg.mL-1 in ethanol 45% (v/v) were applied to the carcasses (in triplicate) by immersion in 500mL of the different solutions and with exposure times of 30, 60 and 90 minutes, simulating the conditions of pre-coolers in slaughterhouses. The results showed that, as never before, sophorolipids at 2250 and 4000 μg.mL-1 in 30 minutes were effective in controlling E. coli in the wash water, and the concentration of 2250 μg.mL-1 in 90 minutes of exposure, zeroed the thermotolerant coliform count. Thus, the data show the application of sophorolipid solution as a decontaminating agent, which can be used as a sanitizer in the carcass washing system by immersion, in the pre-cooling stage, in the slaughter process, and in the poultry processing, to control thermotolerant coliforms, specifically E. coli.
[037] A tecnologia que este trabalho apresenta é a possibilidade de substituição do agente sanitizante cloro, comumente utilizado nas indústrias avícolas na etapa de pré resfriamento, como principal sanitizante na redução de contagens de bactérias patogênicas e de controle de bactérias deteriorantes. Dito isto, o cloro será substituído por um composto de origem natural e com propriedades antimicrobianas, comprovadas pela pesquisa pleiteada, a qual não apresenta nenhum efeito tóxico. Neste teor, este novo produto demonstra uma importante inovação tecnológica a ser aplicada nas indústrias de abate de aves, como uma nova estratégia para o controle de microrganismos deteriorantes e patogênicos em aves - ou seja, elevando a qualidade do setor.[037] The technology that this work presents is the possibility of replacing the sanitizing agent chlorine, commonly used in poultry industries in the pre-cooling stage, as the main sanitizing agent in reducing pathogenic bacteria counts and controlling deteriorating bacteria. That said, chlorine will be replaced by a compound of natural origin and with antimicrobial properties, proven by the requested research, which does not have any toxic effect. In this sense, this new product demonstrates an important technological innovation to be applied in poultry slaughter industries, as a new strategy for the control of deteriorating and pathogenic microorganisms in poultry - that is, raising the quality of the sector.
[038] Posto isto, o processo é composto por duas etapas, onde etapa 1: aplicação do soforolipídio como sanitizante; e etapa 2: avaliação da ação antimicrobiana por coliformes termotolerantes e E. coli.[038] That said, the process consists of two steps, where step 1: application of sophorolipid as a sanitizer; and step 2: evaluation of the antimicrobial action by thermotolerant coliforms and E. coli.
[039] ETAPA 1 - Aplicação do Soforolipídios como Sanitizante. Os soforolipídios produzido, segundo Silveira et al., 2019, foi aplicado como sanitizante na água de lavagem das amostras, a fim de controlar a população de coliformes termotolerantes e E. coli. Previamente a isso, foi realizado teste de solubilidade do soforolipídio, sendo o composto solúvel em solução contendo ≥45% de etanol em água (v/v).[039] STAGE 1 - Application of Sophorolipids as a Sanitizer. The sophorolipids produced, according to Silveira et al., 2019, were applied as a sanitizer in the sample washing water, in order to control the population of thermotolerant coliforms and E. coli. Prior to this, a sophorolipid solubility test was carried out, with the compound being soluble in a solution containing ≥45% ethanol in water (v/v).
[040] Os tratamentos testados foram: controle com água de torneira clorada (0,2 a 2,0ppm); Etanol 45%; Solução com Etanol 45% + 500 μg.mL-1 de soforolipídios; Solução com Etanol 45% + 2.250 μg.mL-1 de soforolipídios; Solução com Etanol 45% + 4.000 μg.mL-1de soforolipídios.[040] The treatments tested were: control with chlorinated tap water (0.2 to 2.0ppm); Ethanol 45%; Solution with 45% Ethanol + 500 μg.mL-1 of sophorolipids; Solution with 45% Ethanol + 2,250 μg.mL-1 of sophorolipids; Solution with 45% Ethanol + 4,000 μg.mL-1 of sophorolipids.
[041] As diferentes soluções foram submetidas a banho de ultrassom por 20 minutos. Foram preparadas 500mL das soluções, e as amostras de carcaças de um mesmo lote, coletadas aleatoriamente em um mesmo instante, foram imersas. Uma carcaça por tratamento e o tempo de exposição foi variado em 30, 60 e 90 minutos. Ao final de cada tempo de tratamento, as amostras foram coletadas em sacos plásticos estéreis e mantidas sob refrigeração até a análise microbiológica. Todas as análises foram realizadas em triplicata.[041] The different solutions were subjected to an ultrasound bath for 20 minutes. 500mL of solutions were prepared, and carcass samples from the same lot, randomly collected at the same time, were immersed. One carcass per treatment and the exposure time was varied in 30, 60 and 90 minutes. At the end of each treatment period, the samples were collected in sterile plastic bags and kept under refrigeration until microbiological analysis. All analyzes were performed in triplicate.
[042] ETAPA 2 - Avaliação da ação antimicrobiana por coliformes termotolerantes e E. coli. As análises microbiológicas para determinação de coliformes termotolerantes e E. coli foram realizadas em placas Petrifilm™C (3M®), com meios específicos para tal microrganismos. De cada tratamento foram removidos assepticamente 25 mL de água, e acondicionados em sacos de polietileno estéreis, contendo 225 mL de água peptonada tamponada a 1% e estéril. Estas amostras foram homogeneizadas em aparelho stomacher por 3 minutos, na diluição 10-1, e diluições subsequentes foram realizadas em solução salina 0,85%, estéril. Para o cálculo das unidades formadoras de colônia de coliformes termotolerantes, 1 mL das diluições 10-4 e 10-6 foram semeadas em placas Petrifilm™C (3M®), específicas para coliformes termotolerantes e E. coli e com incubação a 45°C por 48 horas. Todas as contagens obtidas foram convertidas em logaritmo decimal (Log10) e expressas em Log UFC/ 25mL.[042] STEP 2 - Evaluation of antimicrobial action by thermotolerant coliforms and E. coli. Microbiological analyzes to determine thermotolerant coliforms and E. coli were performed in Petrifilm™C plates (3M®), with specific media for such microorganisms. From each treatment, 25 mL of water were aseptically removed and placed in sterile polyethylene bags containing 225 mL of sterile 1% buffered peptone water. These samples were homogenized in a stomacher apparatus for 3 minutes, at a 10-1 dilution, and subsequent dilutions were performed in sterile 0.85% saline solution. To calculate the colony-forming units of thermotolerant coliforms, 1 mL of dilutions 10-4 and 10-6 were seeded in Petrifilm™C plates (3M®), specific for thermotolerant coliforms and E. coli and incubated at 45°C for 48 hours. All counts obtained were converted into decimal logarithm (Log10) and expressed in Log CFU/25mL.
[043] No presente experimento, foram avaliadas 45 amostras, sendo realizadas 09 repetições para cada tratamento exposto anteriormente.[043] In the present experiment, 45 samples were evaluated, with 09 repetitions being performed for each treatment previously exposed.
[044] Para análise dos dados, foi utilizado o delineamento inteiramente casualizado, e as variáveis resposta observadas foram a contagem de coliformes termotolerantes e contagem de E. coli em log10 (UFC/25mL).[044] For data analysis, a completely randomized design was used, and the response variables observed were the thermotolerant coliform count and E. coli count in log10 (CFU/25mL).
[045] Os resultados das análises microbiológicas obtidos através do sistema Petrifilm estão expostos abaixo na Tabela 1.[045] The results of the microbiological analyzes obtained through the Petrifilm system are shown below in Table 1.
[046] Tabela 1 - E. coli e coliformes termotolerantes log10 (UFC/mL) em amostras de água de lavagem com diferentes concentrações de soforolipídios.
[047] Na análise dos dados de E. coli e coliformes termotolerantes, os resíduos não podem ser considerados normais, de acordo com o Teste de Shapiro-Wilk. Deve-se considerar a interação entre a concentração de soforolipídios aplicada e o tempo de permanência na solução, sendo desdobrada as interações. Desdobrando a variável tempo para cada tratamento, compara-se as médias dos tempos de 30, 60 e 90 minutos pelo Teste de Tukey.[047] In the analysis of data from E. coli and thermotolerant coliforms, the residues cannot be considered normal, according to the Shapiro-Wilk Test. The interaction between the applied concentration of sophorolipids and the time spent in the solution must be considered, with the interactions unfolded. Deploying the time variable for each treatment, the average times of 30, 60 and 90 minutes are compared using the Tukey Test.
[048] Para E. coli, no tempo de 30 minutos de imersão, as soluções com concentrações de soforolipídios de 2.250 e 4.000 μg.mL-1 eliminaram toda a contaminação presente na água de lavagem. As soluções Etanol 45% e soforolipídios 500 μg.mL-1 não apresentaram diferença significativa e apresentaram resultados parecidos ao controle (água de torneira). Ao analisar as solução com 60 minutos após a imersão, as soluções com concentrações de soforolipídios de 2.250 e 4.000 μg.mL-1 continuam apresentando a maior eficiência, eliminando toda a contaminação presente na água de lavagem, seguida da solução de soforolipídios 500 μg.mL-1 (2,80 log10UFC/mL), que diferiu dos tratamentos Etanol 45% (3,25 log10UFC/mL) e controle (3,26 log10UFC/mL). Após 90 minutos de exposição ao sanitizante com concentrações de 2.250 e 4.000 μg.mL-1, obteve-se a maior eficiência, eliminando toda a contaminação presente na água de lavagem, seguida da solução de soforolipídios 500 μg.mL-1 (2,62 log10UFC/mL), a qual diferiu dos tratamentos Etanol 45% (3,14 log10UFC/mL), que também apresentou diferença significativa em relação ao controle (3,40 log10UFC/mL).[048] For E. coli, within 30 minutes of immersion, solutions with sophorolipid concentrations of 2,250 and 4,000 μg.mL-1 eliminated all contamination present in the washing water. Ethanol 45% and sophorolipids 500 μg.mL-1 solutions did not show significant difference and presented similar results to the control (tap water). When analyzing the solutions 60 minutes after immersion, the solutions with sophorolipid concentrations of 2,250 and 4,000 μg.mL-1 continue to show the highest efficiency, eliminating all contamination present in the washing water, followed by the 500 μg sophorolipid solution. mL-1 (2.80 log10CFU/mL), which differed from the Ethanol 45% (3.25 log10CFU/mL) and control (3.26 log10CFU/mL) treatments. After 90 minutes of exposure to the sanitizer with concentrations of 2,250 and 4,000 μg.mL-1, the highest efficiency was obtained, eliminating all contamination present in the washing water, followed by the sophorolipid solution 500 μg.mL-1 (2, 62 log10CFU/mL), which differed from the Ethanol 45% treatments (3.14 log10CFU/mL), which also showed a significant difference in relation to the control (3.40 log10CFU/mL).
[049] Ao analisar os dados de coliformes termotolerantes, desdobrando a variável tempo de exposição em cada tratamento com diferentes concentrações do agente sanitizante, e comparando cada tratamento em diferentes tempos de exposição, a comparação de médias também foi realizada pelo Teste de Tukey e evidenciados na Tabela 1. Com exposição de 30 minutos de imersão, a solução sanitizante com concentração de soforolipídios de 4.000 μg.mL-1 eliminou completamente a contaminação de coliformes termotolerantes presentes na água de lavagem. As soluções controle, Etanol 45%, soforolipídios 500 e 2.250 μg.mL-1, apresentaram diferença significativa, com resultados decrescentes de contagem, 3,21; 3,04; 2,96; 2,36 mL, respectivamente após 30 minutos de imersão. Ao analisar a solução com 60 minutos de exposição após a imersão, os resultados seguem a mesma tendência de redução que após 30 minutos de exposição, ou seja, uma redução linear com aumento da concentração. Com 90 minutos pós tratamento, as soluções com concentrações 2.250 e 4.000 μg.mL-1 apresentam a maior eficiência antibacteriana, eliminando toda a contaminação presente na água de lavagem, seguida da solução de soforolipídios 500 μg.mL-1 (2,75 log10UFC/mL), que apresentou diferença significativa com os tratamentos Etanol 45% (3,29 log10UFC/mL), que também se diferencia da solução controle (3,47 log10UFC/mL).[049] When analyzing the thermotolerant coliform data, deploying the exposure time variable in each treatment with different concentrations of the sanitizing agent, and comparing each treatment at different exposure times, the comparison of means was also performed using the Tukey Test and evidenced in Table 1. With exposure of 30 minutes of immersion, the sanitizing solution with a concentration of sophorolipids of 4,000 μg.mL-1 completely eliminated the contamination of thermotolerant coliforms present in the washing water. The control solutions, Ethanol 45%, sophorolipids 500 and 2,250 μg.mL-1, showed a significant difference, with decreasing count results, 3.21; 3.04; 2.96; 2.36 mL, respectively after 30 minutes of immersion. When analyzing the solution with 60 minutes of exposure after immersion, the results follow the same reduction trend as after 30 minutes of exposure, that is, a linear reduction with increasing concentration. At 90 minutes after treatment, the solutions with concentrations of 2,250 and 4,000 μg.mL-1 have the highest antibacterial efficiency, eliminating all contamination present in the washing water, followed by the sophorolipid solution 500 μg.mL-1 (2.75 log10CFU /mL), which showed a significant difference with the Ethanol 45% treatments (3.29 log10CFU/mL), which also differs from the control solution (3.47 log10CFU/mL).
[050] As soluções com concentrações de soforolipídios de 2.250 e 4.000 μg.mL-1 são totalmente efetivas na redução da contagem das células de E. coli na água de lavagem, em quaisquer tempos de exposição. Por outro lado, ao analisarmos coliformes termotolerantes, somente a solução com concentração de soforolipídios de 4.000 μg.mL é efetiva na redução total da contagem das células na água de lavagem, em qualquer tempo de exposição. Porém, estes resultados também podem ser alcançados com a concentração de 2.250 μg.mL-1 por um tempo de exposição de 90 minutos, seguido por excelentes resultados nos tempos de exposição de 60 e 30 minutos com 2,09 e 2,36 log10UFC/mL, respectivamente.[050] Solutions with sophorolipid concentrations of 2,250 and 4,000 μg.mL-1 are fully effective in reducing the count of E. coli cells in the wash water, at any exposure time. On the other hand, when analyzing thermotolerant coliforms, only the solution with a sophorolipid concentration of 4,000 μg.mL is effective in reducing the total cell count in the washing water, at any time of exposure. However, these results can also be achieved with the concentration of 2,250 μg.mL-1 for an exposure time of 90 minutes, followed by excellent results in the exposure times of 60 and 30 minutes with 2.09 and 2.36 log10CFU/ ml, respectively.
[051] Ao comparar os resultados obtidos da água de lavagem contendo apenas etanol 45% e das soluções contendo soforolipídios a concentrações de 2.250 e 4.000 μg.mL-1 tem-se que o soforolipídio e capaz de eliminar o crescimento de coliformes termotolerantes, especificamente E. coli comparado ao controle, demonstrando ser um eficiente sanitizante a ser aplicado na água de imersão no pré resfriamento para descontaminação das carcaças.[051] When comparing the results obtained from washing water containing only 45% ethanol and solutions containing sophorolipids at concentrations of 2,250 and 4,000 μg.mL-1, it appears that sophorolipid is capable of eliminating the growth of thermotolerant coliforms, specifically E. coli compared to the control, proving to be an efficient sanitizer to be applied in the immersion water in the pre-cooling for decontamination of the carcasses.
Claims (3)
- I. Carcaças de frango com presença de microrganismos contaminantes;
- II. Água de lavagem para imersão das carcaças contendo soforolipídios, como sanitizante, na concentração de 2.250 μg.mL-1 de, diluído em etanol 45% (v/v), com exposição de 90 minutos;
- III. Água de lavagem para imersão das carcaças contendo soforolipídios, como sanitizante, na concentração de 4.000 μg.mL-1 de, diluído em etanol 45% (v/v), com exposição de 30 minutos;
- I. Chicken carcasses with the presence of contaminating microorganisms;
- II. Washing water for carcass immersion containing sophorolipids, as sanitizer, at a concentration of 2,250 μg.mL-1 of, diluted in ethanol 45% (v/v), with exposure of 90 minutes;
- III. Washing water for carcass immersion containing sophorolipids, as sanitizer, at a concentration of 4,000 μg.mL-1 of, diluted in ethanol 45% (v/v), with exposure of 30 minutes;
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| B03A | Publication of a patent application or of a certificate of addition of invention [chapter 3.1 patent gazette] | ||
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