BR102017026328A2

BR102017026328A2 - METHOD OF RETICULATION OF CORNEAL COLLAGEN WITH GENIPINE FOR APPLICATION IN THE TREATMENT OF CERATOCONE

Info

Publication number: BR102017026328A2
Application number: BR102017026328-2A
Authority: BR
Inventors: Camila Melo Gadelha Pereira Diniz; Josué Da Silva Buriti; Marcus Vinicius Lia Fook; Rossemberg Cardoso Barbosa; Wladymyr Jefferson Bacalhau De Sousa; Márcio José Batista Cardoso
Original assignee: Universidade Federal De Campina Grande - Pb
Priority date: 2017-12-06
Filing date: 2017-12-06
Publication date: 2019-06-25

Abstract

a presente invenção trata de uma metodologia de reticulação da córnea com genipina para tratamento de ceratocone sem a necessidade de desepitelização da córnea. o ceratocone trata-se de um afinamento corneano central ou paracentral, progressivo, que faz com que a córnea apresente um abaulamento anterior, em forma de cone podendo levar a uma perda da acuidade visual, astigmatismo irregular e opacidade. estudos têm demonstrado que a indução da reticulação da córnea através do uso de radiação ultravioleta a (uva) associada à riboflavina promove um aumento da rigidez da córnea estabilizando a doença (cannon e foster, 1978; wollensak et al., 2003a). a reticulação da córnea é utilizada para inibir progressão da doença em pacientes portadores do ceratocone. tal tratamento apresenta um protocolo padrão, no entanto, necessita-se de remover o epitélio, o que estimula desenvolver novas metodologias que otimizem a reticulação sem remover o epitélio, diminuindo o tempo de cirurgia e recuperação do paciente. a geninipa por ser uma substância natural com baixa citotoxicidade, tem sido investigada como reticulante a ser usado em aplicações biológicas. neste contexto, o desenvolvimento desta patente compreende uma série de estudos que tratam de uma metodologia de reticulação da córnea com genipina para tratamento do ceratocone.The present invention is directed to a genipine corneal crosslinking methodology for treating keratoconus without the need for corneal epithelialization. Keratoconus is a progressive central or paracentral corneal thinning that causes the cornea to have an anterior, cone-shaped bulging that can lead to loss of visual acuity, irregular astigmatism, and opacity. Studies have shown that induction of corneal crosslinking through the use of riboflavin-associated ultraviolet (grape) radiation promotes increased corneal stiffness by stabilizing the disease (cannon and foster, 1978; wollensak et al., 2003a). Corneal reticulation is used to inhibit disease progression in keratoconus patients. Such treatment presents a standard protocol, however, it is necessary to remove the epithelium, which stimulates the development of new methodologies that optimize the reticulation without removing the epithelium, reducing the surgery and recovery time of the patient. geninipa, being a natural substance with low cytotoxicity, has been investigated as a crosslinker to be used in biological applications. In this context, the development of this patent comprises a series of studies dealing with a genipine corneal crosslinking methodology for treating keratoconus.

Description

“MÉTODO DE RETICULAÇÃO DO COLÁGENO CORNEANO COM GENIPINA PARA APLICAÇÃO NO TRATAMENTO DE CERATOCONE” Escopo da invenção [001] A presente invenção trata de uma metodologia de reticulação do colágeno corneano com genipina para tratamento de ceratocone sem a necessidade de desepitelização da córnea. A ceratocone trata-se de um afinamento corneano central ou paracentral, progressivo, que faz com que a córnea apresente um abaulamento anterior, em forma de cone podendo levar a uma perda da acuidade visual devido a ectasia, astigmatismo irregular e opacidade. A reticulação do colágeno corneano é utilizado para inibir progressão da doença em pacientes portadores de ceratocone. Tal tratamento apresenta um protocolo padrão, atualmente bem estabelecido, que consiste na aplicação de riboflavina e ultravioleta A (UVA) na superfície da córnea desepitelizada.BACKGROUND OF THE INVENTION The present invention relates to a crosslinking methodology of corneal collagen with genipine for the treatment of keratoconus without the need for corneal de-epithelialization. Keratoconus is a progressive central or paracentral corneal thinning that causes the cornea to have a anterior cone-shaped bulge, which may lead to loss of visual acuity due to ectasia, irregular astigmatism and opacity. Corneal collagen crosslinking is used to inhibit disease progression in patients with keratoconus. Such treatment presents a standard protocol, currently well established, that consists of the application of riboflavin and ultraviolet A (UVA) on the surface of the desepitelizada cornea.

Antecedentes [002] A ceratocone trata-se de um afinamento corneano central ou paracentral (geralmente inferior), progressivo, que faz com que a córnea apresente um abaulamento anterior, em forma de cone (Krachmer e Palay, 2008).BACKGROUND Keratoconus is a progressive (usually inferior) central or paracentral (corneal) thinning that causes the cornea to exhibit a cone-shaped anterior bulge (Krachmer and Palay, 2008).

[003] O ceratocone geralmente se inicia e progride na puberdade podendo levar a uma perda da acuidade visual devido a ectasia, astigmatismo irregular e opacidade. Geralmente é bilateral, assimétrico e constitui uma das principais indicações de transplante de córnea. No histórico familiar, está presente em 6 a 8% dos casos, sugerindo herança familiar, talvez autossômica dominante, com penetrância incompleta (Santhiago, 2017).[003] Keratoconus usually begins and progresses at puberty and may lead to loss of visual acuity due to ectasia, irregular astigmatism and opacity. It is usually bilateral, asymmetrical and is one of the main indications of corneal transplantation. In family history, it is present in 6 to 8% of cases, suggesting family inheritance, perhaps autosomal dominant, with incomplete penetrance (Santhiago, 2017).

[004] O tratamento da doença pode inicialmente ser com óculos, para correção do erro refrativo. Em termos de paradigmas de tratamento, a evidência sugere que manejo conservador deve incluir orientações para evitar coçar os olhos e prescrição de medicamentos tópicos como antihistamínicos, estabilizadores de mastócitos e agentes combinados, bem como lubrificantes oculares sem preservativos, evitando-se, dessa forma, a progressão do ceratocone que pode ocorrer devido a microtraumas epiteliais (Mcghee et al., 2015) [005] Em fases mais adiantadas da doença ou para astigmatismos maiores, lentes de contato rígidas gás-permeáveis (Downie e Lindsay, 2015) podem ser adaptadas com êxito. Implante de anel intraestromal (Ertan e Colin, 2007) e lentes intra-oculares fácicas (Kurian et al., 2012) podem ser indicados em determinadas situações.[004] Treatment of the disease may initially be with glasses, for correction of refractive error. In terms of treatment paradigms, the evidence suggests that conservative management should include guidelines for avoiding eye scratching and prescription of topical medications such as antihistamines, mast cell stabilizers and combined agents, as well as ocular lubricants without preservatives, the progression of keratoconus that may occur due to epithelial microtraumas (Mcghee et al., 2015). In later stages of the disease or for larger astigmatisms, rigid gas-permeable contact lenses (Downie and Lindsay, 2015) can be adapted with success. Intraestromal ring implantation (Ertan and Colin, 2007) and phakic intraocular lenses (Kurian et al., 2012) may be indicated in certain situations.

[006] Transplante lamelar anterior geralmente é indicado para casos mais avançados, e aqueles que apresentam cicatrizes extensas devem ser tratados com transplante penetrante de córnea (Henein e Nanavaty, 2017).[006] Anterior lamellar transplantation is generally indicated for more advanced cases, and those with extensive scarring should be treated with penetrating corneal transplantation (Henein and Nanavaty, 2017).

[007] Paradigmas do tratamento do Ceratocone incluem diagnóstico precoce, monitorização regular e uso de intervenções para retardar ou prevenir progressão da doença (Mcghee et al., 2015).[007] Paradigms of the treatment of keratoconus include early diagnosis, regular monitoring and use of interventions to delay or prevent disease progression (Mcghee et al., 2015).

[008] O uso primário da reticulação tem sido na interrupção da progressão do ceratocone. Observações quanto a menor progressão do ceratocone em pacientes com diabetes e maior idade levou à ideia de que a reticulação natural das fibras de colágeno da córnea poderia resultar em fortalecimento e enrijecimento dos tecidos. Isso levou ao desenvolvimento da reticulação da córnea, um processo no qual uma combinação de um fotoindutor, luz ultravioleta (UV) e uma reação fotoquímica leva a indução de radicais livres, que conduz a uma ligação química entre as fibras de colágeno (Daxer et al., 1998; Santhiago, 2017).The primary use of crosslinking has been in stopping the progression of keratoconus. Observations regarding the lower progression of keratoconus in patients with diabetes and older patients led to the idea that natural cross-linking of corneal collagen fibers could result in tissue strengthening and stiffening. This has led to the development of corneal crosslinking, a process in which a combination of a photoinducer, ultraviolet (UV) light and a photochemical reaction leads to the induction of free radicals, leading to a chemical bond between the collagen fibers (Daxer et al. ., 1998, Santhiago, 2017).

[009] Um estudo inicial em animais revelou um aumento de até 70% da rigidez da córnea, enquanto o primeiro estudo clínico por Wollensak et al. (2003b), mostrou interromper a progressão e levar a aplanamento da topografia corneana em pacientes com ceratocone.[009] An initial study in animals revealed an increase of up to 70% in corneal stiffness, while the first clinical study by Wollensak et al. (2003b), was shown to interrupt the progression and lead to flattening of the corneal topography in patients with keratoconus.

[010] A riboflavina (7,8-dimetil-10-ribitil-isoaloxazina), designada também por vitamina B2, é o fotoindutor padrão da reticulação. É um composto orgânico baseado no anel tricíclico isoaloxazina e uma molécula predominantemente hidrofóbica (Souza et al., 2005).Riboflavin (7,8-dimethyl-10-ribethyl-iso-oxazine), also referred to as vitamin B2, is the standard cross-linking photoinducer. It is an organic compound based on the tricyclic ring isoaloxazine and a predominantly hydrophobic molecule (Souza et al., 2005).

[011] O protocolo padrão do tratamento, conhecido como protocolo de Dresden, primeiramente descrito por Wollensak et al. (2003b), consiste nos seguintes passos (Kubrak-Kisza et al., 2016): (a) Anestesia ocular tópica em forma de gotas (colírio anestésico); (b) Remoção dos 7-9 mm centrais do epitélio corneano com espátula sem corte; (c) Antes de iniciar com a radiação UV, o estroma é embebido com o fotoindutor: riboflavina A (Vitamina B12). Ela é aplicada na forma de colírio de Riboflavina 5-fosfato 0.1% e Dextran 20% na córnea desepitelizada a cada 5 minutos durante 30 minutos; (d) A aplicação de riboflavina por mais 30 minutos, administrada a cada 5 minutos, é combinada com a aplicação da radiação UVA (370nm, 3mW/cm2, 5.4J/cm2) a 5 cm do olho; (e) Aplicação de lente de contato terapêutica e colírios de antibiótico e corticosteróide. A lente de contato e o antibiótico são mantidos até total re-epitelização corneana. O corticosteróide é mantido por alguns meses.[011] The standard protocol of treatment, known as the Dresden protocol, first described by Wollensak et al. (2003b), consists of the following steps (Kubrak-Kisza et al., 2016): (a) Topical ocular anesthesia in the form of drops (anesthetic eye drops); (b) Removal of the central 7-9 mm of corneal epithelium with blunt spatula; (c) Before starting with UV radiation, the stroma is soaked with the photoinducer: riboflavin A (Vitamin B12). It is applied in the form of drops of Riboflavin 5-phosphate 0.1% and Dextran 20% in the desepitelizada cornea every 5 minutes during 30 minutes; (d) The application of riboflavin for another 30 minutes, given every 5 minutes, is combined with the application of UVA (370nm, 3mW / cm2, 5.4J / cm2) at 5 cm from the eye; (e) Application of therapeutic contact lens and antibiotic and corticosteroid eye drops. The contact lens and the antibiotic are maintained until total corneal re-epithelization. The corticosteroid is maintained for a few months.

[012] A reduzida reticulação do colágeno corneano em pacientes com ceratocone foi demonstrada por Cannon em 1978. Estudos têm demonstrado que a indução da reticulação do colágeno corneano através do uso de radiação ultravioleta A (UVA) associada à riboflavina promove um aumento da rigidez biomecânica da córnea possibilitando a estabilização da doença (Cannon e Foster, 1978; Wollensak et al., 2003a).The reduced cross-linking of corneal collagen in patients with keratoconus was demonstrated by Cannon in 1978. Studies have shown that the induction of corneal collagen cross-linking through the use of riboflavin-associated ultraviolet A (UVA) radiation promotes an increase in biomechanical rigidity (Cannon and Foster, 1978; Wollensak et al., 2003a).

[013] Genipina é um produto hidrolítico do geniposídio que é achado na fruta da Gardênia, um gênero de cerca de 250 espécies de plantas da família do café, Rubiaceae, nativa das regiões tropicais e subtropicais da África, sul da Ásia, Austrália e Oceania (Butler et al., 2003; Kuo e Lin, 2006).[013] Genipina is a hydrolytic product of geniposide found in the fruit of Gardenia, a genus of about 250 plant species of the coffee family, Rubiaceae, native to the tropical and subtropical regions of Africa, South Asia, Australia and Oceania (Butler et al., 2003; Kuo and Lin, 2006).

[014] Ações farmacológicas efetivas da genipina, como atuações antioxidativas, anti-inflamatória e atividades fibrolíticas têm sido identificadas. É utilizada também como um corante azul, devido à sua afinidade a proteínas, na indústria de alimentos (Renhe, 2008; Yoo et al., 2011).[014] Effective pharmacological actions of genipine, such as antioxidative, anti-inflammatory and fibrolytic activities have been identified. It is also used as a blue dye, due to its protein affinity, in the food industry (Renhe, 2008; Yoo et al., 2011).

[015] Por ser uma substância natural e uma molécula biodegradável com baixa citotoxicidade, a genipina tem sido investigada, como um agente reticulante a ser usado em aplicações biológicas. Recentes estudos usando gelatina reticulada por genipina obtiveram bons resultados (Bispo, 2009).As a natural substance and a biodegradable molecule with low cytotoxicity, genipine has been investigated as a cross-linking agent to be used in biological applications. Recent studies using genipine cross-linked gelatine obtained good results (Bispo, 2009).

[016] Segundo pesquisas realizadas por Mi et al. (2005) e Muzzarelli (2009), o mecanismo de reticulação das cadeias poliméricas de quitosana pela genipina é influenciado pelo pH do meio. Assim, dois principais processos químicos de reticulação podem acontecer, sendo um em meio ácido ou neutro e outro em meio alcalino.[016] According to research carried out by Mi et al. (2005) and Muzzarelli (2009), the mechanism of crosslinking the chitosan polymer chains by genipine is influenced by the pH of the medium. Thus, two main chemical crosslinking processes can occur, one being in acid or neutral medium and the other in alkaline medium.

[017] A reticulação do colágeno corneano com genipina mostrou aumento da rigidez biomecânica de córneas suínas, dose-dependente, quando se utilizou genipina 0.10%, 0.25% e 1.00%; bem como, aumentou, em cinco vezes, a resistência da córnea à colagenase bacteriana. (Ávila M, 2010).[017] The cross-linking of corneal collagen with genipine showed increased dose-dependent biomechanical stiffness of porcine corneas when genipine 0.10%, 0.25% and 1.00%; as well as increased corneal resistance to bacterial collagenase fivefold. (Avila M, 2010).

[018] A genipina 0.25% foi similar a radiação ultravioleta A com riboflavina 0.1% na reticulação de córneas suínas em relação a rigidez ocular e toxicidade às células endoteliais corneanas. (Ávila M, 2012).Genipine 0.25% was similar to ultraviolet A radiation with 0.1% riboflavin in the cross-linking of porcine corneas with respect to ocular stiffness and corneal endothelial cell toxicity. (Avila M, 2012).

[019] As aplicações da fotoquímica de polímeros podem ser divididas em três grandes grupos: reações de síntese, fotodegradação/fotoestabilização e processos de fotopolimerização/fotoreticulação. O setor de fotopolimerização/fotoreticulação tem recebido atenção especial devido a inúmeras e importantes aplicações na área de Materiais (Rodrigues e Neumann, 2003).[019] Polymer photochemistry applications can be divided into three main groups: synthesis reactions, photodegradation / photo-stabilization and photopolymerization / photoreticulation processes. The photopolymerization / photoreticulation sector has received special attention due to numerous and important applications in the area of Materials (Rodrigues and Neumann, 2003).

[020] Nos processos de fotopolimerização/fotoreticulação a utilização de luz UVA no comprimento de onda de 320 - 480 nm é fator chave nos tratamentos baseados na reticulação do colágeno corneano. A luz ultravioleta A (UVA) associada à riboflavina cria novas ligações entre as moléculas de colágenos adjacentes, produzindo aumento da espessura da córnea bem como diminuindo sua maleabilidade (Spoerl et al., 2007).[020] In the photopolymerization / photoreticulation processes, the use of UVA light at the wavelength of 320 - 480 nm is a key factor in treatments based on corneal collagen crosslinking. The ultraviolet A (UVA) light associated with riboflavin creates new bonds between the adjacent collagen molecules, producing increased corneal thickness as well as decreasing its malleability (Spoerl et al., 2007).

[021] Neste contexto, o desenvolvimento desta patente compreende uma série de ações e estudos que tratam de uma metodologia de reticulação do colágeno corneano com genipina para tratamento de ceratocone sem a necessidade de desepitelização da córnea., Breve descrição dos desenhos [022] Na Figura 1, o diagrama em blocos apresenta o procedimento da metodologia de reticulação do colágeno suíno.[021] In this context, the development of this patent comprises a series of actions and studies that deal with a crosslinking methodology of corneal collagen with genipine for treatment of keratoconus without the need for corneal desepitelization. Brief description of the drawings [022] Na Figure 1, the block diagram shows the porcine collagen crosslinking procedure procedure.

[023] Na Figura 2, apresenta as imagens de microscopia eletrônica de varredura das córneas suína normal (G1), com o tratamento padrão (G2), com a metodologia de reticulação por genipina sem epitélio (G3) e com a metodologia de reticulação por genipina com epitélio (G4).[023] In Figure 2, the scanning electron microscopy images of the normal swine corneas (G1), with the standard treatment (G2), with the methodology of crosslinking by genipine without epithelium (G3) and with the methodology of crosslinking by genipine with epithelium (G4).

[024] A Figura 3 apresenta as imagens de microscopia ótica das córneas suína normal (G1), com o tratamento padrão (G2), com a metodologia de reticulação por genipina sem epitélio (G3) e com a metodologia de reticulação por genipina com epitélio (G4).Figure 3 shows the normal (G1) swine corneal optical microscopy images with the standard treatment (G2), the methodology for crosslinking by epithelium without epithelium (G3) and the methodology of crosslinking by genipine with epithelium (G4).

[025] A Figura 4 apresenta uma tabela com os resultados de resistência mecânica a tração das córneas suína normal (G1), com o tratamento padrão (G2), com a metodologia de reticulação por genipina sem epitélio (G3) e com a metodologia de reticulação por genipina com epitélio (G4).Figure 4 shows a table with the results of mechanical resistance to normal swine corneal traction (G1), standard treatment (G2), crosslinking methodology with epithelium-free genipine (G3) and the methodology of crosslinking by genipine with epithelium (G4).

Descrição detalhada [026] A metodologia empregada para reticulação do colágeno corneano com genipina é realizada conforme o seguinte procedimento: anestesia ocular tópica em forma de gotas (colírio anestésico) e posteriormente é realizado a aplicação da genipina 0,1% por mais 30 minutos, administrada a cada 5 minutos nas córneas integras, sem remoção do epitélio.Detailed description [026] The methodology used for the cross-linking of corneal collagen with genipine is performed according to the following procedure: topical ocular anesthesia in the form of drops (anesthetic eye drops) and then the application of 0.1% genipine for another 30 minutes, administered every 5 minutes in the intact corneas, without removal of the epithelium.

[027] De forma a confirmar a eficácia da metodologia de reticulação do colágeno foram realizados estudos in situ da córnea suína, separadas em 3 grupos: G1- grupo controle sem reticulante, G2 - córneas imersas em solução de riboflavina de acordo com o tratamento de reticulação em humanos, segundo protocolo de Dresden e G3 - córneas, sem epitélio,, imersas em solução 0,1% de genipina por 30 minutos, sendo aplicada três gotas da solução a cada 5 min e G4 - córneas, com epitélio íntegro, imersas em solução 0,1% de genipina por 30 minutos, sendo aplicada três gotas da solução a cada 5 min detalhadas com base no diagrama em blocos apresentado na Figura 1.[027] In order to confirm the effectiveness of the collagen crosslinking methodology, in situ studies of the porcine cornea were performed in three groups: G1- control group without crosslinker, G2 - corneas immersed in riboflavin solution according to the treatment of crosslinking in humans, according to Dresden protocol and G3 - corneas, without epithelium, immersed in 0.1% solution of genipine for 30 minutes, three drops of solution being applied every 5 min and G4 - corneas, with intact epithelium, immersed in 0.1% solution of genipine for 30 minutes, three drops of the solution being applied every 5 min detailed based on the block diagram shown in Figure 1.

[028] A metodologia empregada para reticulação do colágeno in situ da córnea suína é realizado conforme o seguinte procedimento: olhos de suínos com córneas claras (20) coletadas in situ em matadouros no Município de João Pessoa-PB e/ou Campina Grande-PB dentro de 8 a 10 horas post-mortem e mantidos sob refrigeração para separação das córneas (50), que foram separadas em 4 grupos de córneas (100). As córneas (100) foram trepanadas (200) e colocadas em preservação (300). As córneas (100) foram desepitelizadas (110) e colocado a riboflavina (120) a 0,1% por 30 minutos, posteriormente aplicado a radiação ultravioleta A - UVA (130) por 30 minutos, trepanadas (200) e colocadas em preservação (300). As córneas (100) foram desepitelizadas (110) colocadas em solução de genipina (140) a 0,1% por 30 minutos sendo aplicada três gotas da solução a cada 5 min, posteriormente levadas para trepanação (200) e colocadas em preservação (300). As córneas (100) foram colocadas em solução de genipina (140) a 0,1% por 30 minutos sendo aplicada três gotas da solução a cada 5 min nas córneas, posteriormente levadas para trepanação (200) e colocadas em preservação (300).[028] The methodology used to cross-link the collagen in situ of the porcine cornea is performed according to the following procedure: eyes of pigs with clear corneas (20) collected in situ in slaughterhouses in the municipality of João Pessoa-PB and / or Campina Grande-PB within 8 to 10 hours post-mortem and kept under refrigeration to separate the corneas (50), which were separated into 4 groups of corneas (100). The corneas (100) were trepanated (200) and placed in preservation (300). The corneas (100) were de-epithelialized (110) and riboflavin (120) was added at 0.1% for 30 minutes, then applied to ultraviolet A-UVA (130) for 30 minutes, trepanades (200) and placed in preservation ( 300). The corneas (100) were de-epithelialized (110) placed in 0.1% genipine solution (140) for 30 minutes and three drops of the solution were applied every 5 min, then carried for trepanation (200) and placed in preservation (300 ). The corneas (100) were placed in 0.1% genipine solution (140) for 30 minutes and three drops of the solution were applied every 5 min in the corneas, then taken for trepanation (200) and placed in preservation (300).

Resultado [029] As imagens de microscopia eletrônica de varredura com aumento de 400X (Figura 2) obtidos das córneas suínas normal de controle sem reticulação, com reticulação com o tratamento convencional aplicado a humanos e com reticulação de genipina sem e com remoção do epitélio mostram que a metodologia empregada com genipina sem e com remoção do epitélio provoca a reticulação da mesma forma que o tratamento convencional mesmo sem aplicação de radiação UVA. Destacando-se o processo de reticulação com genipina sem remoção do epitélio que propicia a um processo menos dolorosos, diminuído o tempo para o tratamento e favorecendo a recuperação do tecido ocular, já que não ocorre remoção do epitélio e com mesma eficácia que o tratamento convencional.Results Scanning electron microscopy images with magnification of 400X (Figure 2) obtained from control normal swine corneas without crosslinking, crosslinked with conventional treatment applied to humans and with crosslinking of genipine with and without epithelium removal show that the methodology used with genipine without and with removal of the epithelium causes crosslinking in the same way as the conventional treatment even without UVA radiation. Highlighting the process of crosslinking with genipine without removal of the epithelium, which leads to a less painful process, shortening the time to treatment and favoring the recovery of the ocular tissue, since epithelium removal does not occur and with the same efficacy as conventional treatment .

[030] Nas imagens por microscopia ótica com aumento de 100X, Figura 3, verifica-se nas córneas de controle uma superfície com pouca rugosidade e translucida, com a aplicação do método tradicional observa-se a superfície rugosa adquiri uma coloração amarelada, devido presença do medicamento, com os métodos de reticulação com genipina a superfície rugosa apresenta uma coloração mais embranquecida, no entanto, o processo de remoção do epitélio provoca uma maior rugosidade da superfície.[030] In the images by optical microscopy with a magnification of 100X, Figure 3 shows a surface with little roughness and translucency in the control corneas, with the application of the traditional method, the rough surface acquired a yellowish color due to presence of the drug, with the crosslinking methods with genipine the rough surface has a more whitened staining, however, the removal process of the epithelium causes a greater roughness of the surface.

[031] Os resultados de ensaios mecânicos mostram que a metodologia de reticulação por genipina provoca alterações da estrutura do colágeno, devido a reticulação das fibras, aumentando sua resistência a tração. Observa-se que os valores de resistência das córneas com tratamento convencional com o riboflavina e radiação UVA e da reticulação da córnea com o epitélio por genipina são similares com variações insignificantes, já com a remoção do epitélio a um aumento considerável da resistência da tração e comparação ao tratamento convencional, corroborando com os resultados observados na microscopia eletrônica de varredura e microscopia ótica.[031] The results of mechanical tests show that the methodology of crosslinking by genipine causes changes in the structure of collagen, due to the crosslinking of the fibers, increasing their tensile strength. It is observed that the resistance values of the corneas with conventional treatment with riboflavin and UVA radiation and the cross-linking of the cornea with the epithelium by genipine are similar with insignificant variations, already with the removal of the epithelium to a considerable increase of the resistance of the traction and comparison with the conventional treatment, corroborating with the results observed in scanning electron microscopy and optical microscopy.

REIVINDICAÇÕES

Claims

1. A method of cross-linking the corneal collagen with genipine for the treatment of keratoconus without the need for corneal de-epithelialization, it being understood that the invention relates to a method of crosslinking corneal collagen with genipine for the treatment of keratoconus. that this problem in vision is a progressive central or paracentral corneal thinning that causes the cornea to present a anterior cone-shaped bulge that can lead to a loss of visual acuity due to ectasia, irregular astigmatism and opacity, problems that may occur be treated by inhibiting disease progression with standard protocol treatment, currently well established, consisting of the application of riboflavin and ultraviolet A (UVA) on the surface of the desepitelizada cornea.

2. A method of cross-linking the corneal collagen with genipine which is performed according to the following procedure: topical ocular anesthesia in (anesthetic eye drops), and 0.1% genipine is applied for another 30 minutes, administered every 5 minutes in the intact corneas, without epithelial removal.