BR102017022944B1

BR102017022944B1 - USE OF A COMPOUND OR EXTRACT OBTAINED FROM THE FUNGUS PYCNOPORUS SANGUINEUS IN THE PREPARATION OF A NUTRACEUTICAL COMPOSITION, MEDICINE, SUPPLEMENT, FUNCTIONAL FOOD AND/OR PHYTOTHERAPY COMPOSITION FOR FAT OR LIPID INDEX REDUCTION

Info

Publication number: BR102017022944B1
Application number: BR102017022944-0A
Authority: BR
Inventors: Maiza Cristina Von Dentz; Gabriela Gambato; Letícia Osório Da Rosa; Andreza Ferrari; Roselei Claudete Fontana; Eliseu Rodrigues; Mirian Salvador; Matheus Parmegiani Jahn; Marli Camassola
Original assignee: Fundação Universidade De Caxias Do Sul; Universidade Federal Do Rio Grande Do Sul - Ufrgs
Priority date: 2017-10-24
Filing date: 2017-10-24
Publication date: 2022-08-30
Also published as: BR102017022944A2

Abstract

A presente invenção descreve o uso de compostos (cinabarinas) ou extratos obtidos a partir do fungo Pycnoporus sanguineus na preparação de composição nutracêutica, medicamento, suplemento, alimento funcional e/ou composição fitoterápica para redução de índices de triglicerídeos e colesterol plasmáticos em mamíferos. Em uma concretização, os compostos obtidos a partir de um extrato de Pycnoporus sanguineus e/ou seus extratos são utilizados. A presente invenção se situa nos campos da Biotecnologia, da Bioquímica, Saúde e Medicina.The present invention describes the use of compounds (cinnabarins) or extracts obtained from the fungus Pycnoporus sanguineus in the preparation of a nutraceutical composition, medicine, supplement, functional food and/or herbal composition for reducing plasma triglyceride and cholesterol levels in mammals. In one embodiment, compounds obtained from an extract of Pycnoporus sanguineus and/or extracts thereof are used. The present invention is located in the fields of Biotechnology, Biochemistry, Health and Medicine.

Description

Field of Invention

[0001] A presente invenção descreve o uso de compostos (cinabarinas) ou extratos obtidos a partir do fungo Pycnoporus sanguineus na preparação de composição nutracêutica, medicamento, suplemento, alimento funcional e/ou composição fitoterápica para redução de índices de triglicerídeos e colesterol plasmáticos em mamíferos. Em uma concretização, os compostos obtidos a partir de um extrato de Pycnoporus sanguineus e/ou seus extratos são utilizados. A presente invenção se situa nos campos da Biotecnologia, da Bioquímica, Saúde e Medicina.[0001] The present invention describes the use of compounds (cinnabarins) or extracts obtained from the fungus Pycnoporus sanguineus in the preparation of a nutraceutical composition, medicine, supplement, functional food and/or phytotherapeutic composition to reduce plasma triglycerides and cholesterol indices in mammals. In one embodiment, compounds obtained from an extract of Pycnoporus sanguineus and/or extracts thereof are used. The present invention is located in the fields of Biotechnology, Biochemistry, Health and Medicine.

Background of the Invention

[0002] Aterosclerose é uma condição em que ocorre o acúmulo de placas de gordura, colesterol e outras substâncias nas paredes das artérias, o que restringe o fluxo sanguíneo e pode levar a graves complicações de saúde, principalmente a doenças coronarianas. Este acúmulo de gordura ocorre em decorrência de elevadas concentrações de triglicerídeos e colesterol sanguíneos.[0002] Atherosclerosis is a condition in which fatty plaque, cholesterol and other substances accumulate on the walls of the arteries, which restricts blood flow and can lead to serious health complications, especially coronary heart disease. This accumulation of fat occurs as a result of high concentrations of blood triglycerides and cholesterol.

[0003] Os triglicerídeos presentes no corpo podem ser adquiridos por meio da alimentação ou produzidos pelo próprio organismo no fígado. Os triglicerídeos são necessários, pois servem como reserva energética para os momentos de jejum prolongado ou alimentação insuficiente. Porém, o excesso de triglicerídeos no sangue está associado à deposição de gorduras nos vasos e aterosclerose, aumentando o risco de doenças cardiovasculares.[0003] The triglycerides present in the body can be acquired through food or produced by the body itself in the liver. Triglycerides are necessary as they serve as an energy reserve for times of prolonged fasting or insufficient food. However, the excess of triglycerides in the blood is associated with the deposition of fats in the vessels and atherosclerosis, increasing the risk of cardiovascular diseases.

[0004] Os níveis de triglicerídeos podem se elevar por vários motivos. Algumas pessoas apresentam alterações genéticas que predispõem à hipertrigliceridemia, outras desenvolvem triglicerídeos altos secundariamente a uma dieta hipercalórica ou à presença de determinadas doenças. Níveis elevados de triglicerídeos também estão associados a um maior depósito de gorduras no fígado, provocando uma alteração conhecida como esteatose hepática.[0004] Triglyceride levels can rise for several reasons. Some people have genetic changes that predispose to hypertriglyceridemia, others develop high triglycerides secondary to a high-calorie diet or the presence of certain diseases. Elevated levels of triglycerides are also associated with increased fat deposits in the liver, causing a condition known as hepatic steatosis.

[0005] O principal objetivo do tratamento da hipertrigliceridemia é reduzir o risco de doenças cardiovasculares. Suplementos ricos em óleo de peixe (ômega 3) também são efetivos para redução da hipertrigliceridemia. Porém para haver efeito, as doses devem ser elevadas, acima de doses 3 gramas por dia de ácido eicosapentaenoico/ácido docosaexaenoico (EPA/DHA), o que significa pelo menos 4 cápsulas por dia. Alguns pacientes não toleram doses muito altas de óleo de peixe, apresentando diarreia e cólicas abdominais. Atualmente, os fibratos são drogas mais específicas para reduzir níveis de triglicerídeos, podendo alcançar reduções de até 70% em alguns casos. Estas drogas, porém, não agem sobre os valores de colesterol.[0005] The main goal of treating hypertriglyceridemia is to reduce the risk of cardiovascular disease. Supplements rich in fish oil (omega 3) are also effective in reducing hypertriglyceridemia. However, to have an effect, doses must be high, above doses of 3 grams per day of eicosapentaenoic acid/docosahexaenoic acid (EPA/DHA), which means at least 4 capsules per day. Some patients cannot tolerate very high doses of fish oil, experiencing diarrhea and abdominal cramping. Currently, fibrates are more specific drugs to reduce triglyceride levels, reaching reductions of up to 70% in some cases. These drugs, however, do not act on cholesterol values.

[0006] O aumento dos triglicerídeos pode ou não vir acompanhado de alterações no colesterol. As duas situações mais comuns são triglicerídeos e LDL (colesterol ruim) elevados ou triglicerídeos elevados e HDL (colesterol bom) baixo. A elevação isolada dos triglicerídeos, sem alterações do colesterol não é muito comum. Em diabéticos, é normal ocorrer incrementos nas concentrações de triglicerídeos.[0006] The increase in triglycerides may or may not be accompanied by changes in cholesterol. The two most common situations are high triglycerides and LDL (bad cholesterol) or high triglycerides and low HDL (good cholesterol). The isolated elevation of triglycerides, without changes in cholesterol is not very common. In diabetics, increases in triglyceride concentrations are normal.

[0007] O colesterol é encontrado nas membranas celulares e transportado no plasma sanguíneo de todos os animais. É um componente essencial das membranas celulares dos mamíferos.[0007] Cholesterol is found in cell membranes and transported in the blood plasma of all animals. It is an essential component of mammalian cell membranes.

[0008] O termo hipercolesterolemia refere-se a níveis aumentados de colesterol na corrente sanguínea. Condições com elevadas concentrações de partículas LDL (lipoproteína de alta densidade) oxidadas, especialmente partículas LDL pequenas, estão associadas com a formação de ateromas nas paredes das artérias, que é a principal causa de doença coronariana cardíaca e outras formas de doença cardíaca.[0008] The term hypercholesterolemia refers to increased levels of cholesterol in the bloodstream. Conditions with high concentrations of oxidized LDL (high-density lipoprotein) particles, especially small LDL particles, are associated with the formation of atheromas in the walls of the arteries, which is a major cause of coronary heart disease and other forms of heart disease.

[0009] O tratamento para níveis elevados de colesterol é atualmente realizado com o uso das estatinas. As estatinas são drogas muito eficazes para reduzir os níveis de colesteróis do sangue e para diminuir a incidência de manifestações de doenças decorrentes da diminuição de perfusão de tecidos irrigados por artérias estreitadas pela arteriosclerose. No entanto, há uma série riscos do uso das estatinas, entre os quais estão a elevação dos níveis de enzimas hepáticas, podendo haver ainda colestase, uma obstrução de vias biliares intra-hepáticas, que também obriga à suspensão da droga. A colestase se manifesta principalmente por icterícia e coceira. Para algumas pessoas, as estatinas, além da hepatite tóxica, podem causar falta de apetite, diarreia e vômitos. Também há efeitos colaterais como insônia, dores de cabeça, perda de memória, formigamentos e neurites. As estatinas podem diminuir a potência masculina e há relatos de incrementos em 200% nos casos de câncer de mama em mulheres que fazem uso desta droga em relação a mulheres que não utilizam. Mães, caso estejam tomando estatinas, não devem amamentar os filhos.[0009] The treatment for high cholesterol levels is currently performed with the use of statins. Statins are very effective drugs to reduce blood cholesterol levels and to reduce the incidence of disease manifestations resulting from decreased perfusion of tissues irrigated by arteries narrowed by arteriosclerosis. However, there are a number of risks associated with the use of statins, among which are the elevation of liver enzyme levels, and there may also be cholestasis, an obstruction of the intrahepatic bile ducts, which also forces the drug to be discontinued. Cholestasis is mainly manifested by jaundice and itching. For some people, statins, in addition to toxic hepatitis, can cause poor appetite, diarrhea, and vomiting. There are also side effects such as insomnia, headaches, memory loss, tingling and neuritis. Statins can decrease male potency and there are reports of 200% increases in breast cancer cases in women who use this drug compared to women who do not. Mothers, if taking statins, should not breastfeed their children.

[0010] Devido aos diversos efeitos colaterais das drogas utilizadas para reduzir níveis de triglicerídeos e colesterol existe a necessidade de busca de novas sustâncias e/ou extratos que apresentem atividade anti- hipertrigliceridêmica e anti-hipercolesterolêmica, mas que ao mesmo tempo não apresentem elevados custos de produção para tornar o acesso aos tratamentos mais acessíveis, e, contribuir assim, para a melhoria da qualidade de vida das pessoas e animais acometidos por hipertrigliceridemia e hipercolesterolemia.[0010] Due to the various side effects of the drugs used to reduce levels of triglycerides and cholesterol, there is a need to search for new substances and/or extracts that have anti-hypertriglyceridemic and anti-hypercholesterolemic activity, but at the same time do not present high costs of production to make access to treatments more accessible, and thus contribute to improving the quality of life of people and animals affected by hypertriglyceridemia and hypercholesterolemia.

[0011] Os macrofungos vêm sendo utilizados em terapias tradicionais orientais, e metabólitos fúngicos são cada vez mais utilizados para tratar uma ampla gama de doenças, pois alguns deles são ricos em compostos bioativos. Entre estes compostos incluem-se polissacarídeos, proteínas (proteínas imunomoduladoras fúngicas, lectinas, glicoproteínas e proteínas não glicosiladas e peptídeos), complexos de polissacarídeo-proteína, componentes lipídicos (ergosterol), e os terpenoides, alcaloides, pequenos peptídeos e aminoácidos, nucleotídeos e nucleosídeos. Esta longa lista representa uma grande variedade de propriedades biológicas.[0011] Macrofungi have been used in traditional oriental therapies, and fungal metabolites are increasingly used to treat a wide range of diseases, as some of them are rich in bioactive compounds. These compounds include polysaccharides, proteins (fungal immunomodulatory proteins, lectins, glycoproteins and non-glycosylated proteins and peptides), polysaccharide-protein complexes, lipid components (ergosterol), and terpenoids, alkaloids, small peptides and amino acids, nucleotides and nucleosides. This long list represents a wide variety of biological properties.

[0012] Entre as estatinas, há a lovastatina, substância que foi isolada inicialmente do fungo Aspergillus terreus, e junto da mevastatina, foi uma das primeiras estatinas obtidas no final dos anos 1970. Outros fungos também são capazes de produzir a lovastatina, como por exemplo o Pleurotus ostreatus, também conhecido como cogumelo ostra e utilizado na culinária.[0012] Among the statins, there is lovastatin, a substance that was initially isolated from the fungus Aspergillus terreus, and along with mevastatin, it was one of the first statins obtained in the late 1970s. Other fungi are also capable of producing lovastatin, such as example Pleurotus ostreatus, also known as oyster mushroom and used in cooking.

[0013] Com reportado, na composição dos fungos existe uma série de compostos capazes de regular vias metabólicas e/ou fatores de transcrição capazes de interferir no metabolismo celular.[0013] As reported, in the composition of fungi there is a series of compounds capable of regulating metabolic pathways and/or transcription factors capable of interfering with cellular metabolism.

[0014] Um dos gargalos na extração de substâncias de plantas e fungos é a dificuldade de obter substâncias em elevadas concentrações e relativamente purificadas, sem a necessidade de processos onerosos.[0014] One of the bottlenecks in the extraction of substances from plants and fungi is the difficulty of obtaining substances in high concentrations and relatively purified, without the need for costly processes.

[0015] Na busca pelo estado da técnica em literaturas científica e patentária, foram encontrados os seguintes documentos que tratam sobre o tema.[0015] In the search for the state of the art in scientific and patent literature, the following documents were found that deal with the subject.

[0016] Os fungos do gênero Pycnoporus pertencentes à família Polyporaceae, são responsáveis por realizar a podridão branca de madeiras. São chamados vulgarmente como "orelha-de-pau" e são facilmente encontrados em regiões tropicais e subtropicais, podendo desenvolver-se tanto em plantas vivas como mortas. Este fungo é facilmente reconhecível por sua intensa cor laranja avermelhada. Produz cerca de sete pigmentos, sendo o antibiótico cinabarina um deles.[0016] The fungi of the genus Pycnoporus belonging to the family Polyporaceae, are responsible for carrying out the white rot of woods. They are commonly called "wood ear" and are easily found in tropical and subtropical regions, and can develop on both living and dead plants. This fungus is easily recognizable by its intense reddish orange color. It produces about seven pigments, the antibiotic cinnabarin being one of them.

[0017] Existem estudos que indicaram que a cinabarina produzida pelo P. sanguineus apresenta atividade contra as bactérias Bacillus cereus, Enterococcus fecalis, Enterococcus faecium, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Leuconostoc mesenteroides, Lactobacillus plantarum, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella sp., Salmonella typhi, Staphylococcus aureus e vários Streptoccocus spp., tendo atividade principalmente sobre bactérias gram-positivas (Smânia et al. Rev. Microbiol. 26, 302-306, 1995; Smânia et al. J Chem Techn Biotechnol. 70, 57-59, 1997).[0017] There are studies that indicated that cinnabarin produced by P. sanguineus has activity against the bacteria Bacillus cereus, Enterococcus fecalis, Enterococcus faecium, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Leuconostoc mesenteroides, Lactobacillus plantarum, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella sp., Salmonella typhi , Staphylococcus aureus and various Streptoccocus spp., having activity mainly on gram-positive bacteria ( Smânia et al. Rev. Microbiol. 26, 302-306, 1995; Smânia et al. J Chem Techn Biotechnol. 70, 57-59, 1997 ; ).

[0018] A toxicidade da cinabarina foi avaliada em um modelo animal pela administração intraperitoneal em camundongos, sendo que a maior concentração usada no trabalho (1000 mg/kg) não foi suficiente para matar os animais e nenhuma alteração celular foi observada nos órgãos analisados (fígado e rins) (Smânia et al. Phytot Res. 17, 1069-1072, 2003).[0018] The toxicity of cinnabarin was evaluated in an animal model by intraperitoneal administration in mice, and the highest concentration used in the work (1000 mg/kg) was not enough to kill the animals and no cellular changes were observed in Organs analyzed organs ( liver and kidneys) (Smânia et al. Phytot Res. 17, 1069-1072, 2003).

[0019] O artigo científico "Lipid-lowering effects of Coriolus versicolor extract in poloxamer 407-induced hypercholesterolaemic rats and high cholesterol-fed rats"(Hor S, Farsi YE, Yam MF, Nuyah NM, Asmawi MZ. Lipid- lowering effects of Coriolus versicolor extract in poloxamer 407-induced hypercholesterolaemic rats and high cholesterol-fed rats. J Med Plants Res. 2011;5:2261-2266) apresenta o uso do extrato aquoso de Trametes versicolor no tratamento de hipercolesterolemia induzida em camundongos, tendo como resultado a diminuição dos níveis de colesterol total, triglicerídeos e colesterol de baixa densidade, porém, não antecipa nem indica o uso de extrato de Pycnoporus sanguineus, nem compreende cinabarina.[0019] The scientific article "Lipid-lowering effects of Coriolus versicolor extract in poloxamer 407-induced hypercholesterolaemic rats and high cholesterol-fed rats"(Hor S, Farsi YE, Yam MF, Nuyah NM, Asmawi MZ. Lipid-lowering effects of Coriolus versicolor extract in poloxamer 407-induced hypercholesterolaemic rats and high cholesterol-fed rats. J Med Plants Res. 2011;5:2261-2266) presents the use of the aqueous extract of Trametes versicolor in the treatment of induced hypercholesterolemia in mice, resulting in the decrease in total cholesterol, triglycerides and low-density cholesterol levels, however, does not anticipate or indicate the use of Pycnoporus sanguineus extract, nor does it comprise cinnabarin.

[0020] Patentes que empregam o Pycnoporus e seus metabólitos estão descritas. Uma delas é a CN104099304A, intitulada "Method for preparing laccase-containing fermentation broth by Pycnoporus sanguineus", mas esta invenção pertence ao campo da fermentação microbiana, e em particular refere-se a um método para a preparação de caldo de fermentação contendo lacase por P. sanguineus. O método compreende os passos como se segue: sob condições aeróbicas e no escuro, o fungo é cultivado num meio de fermentação estéril contendo uma fonte de carbono, uma fonte de nitrogênio e componentes inorgânicos, o meio de fermentação compreende farinha de milho, farelo de pó, tartarato de amônio, fosfato de monopotássio, sulfato de magnésio heptahidratado, succinato de sódio, sulfato de cobre penta-hidratado, hexa-hidrato de cloreto de potássio, um surfactante, um agente antiespumante e água. Apresenta como vantagens reprodutibilidade, elevadas atividades de lacase produzida, boa estabilidade de temperatura enzima, alta adaptabilidade pH e similares; e a lacase pode ser amplamente aplicado para os campos da degradação do corante, biobranqueamento, colagem de madeira, recuperação ecológica e semelhantes.[0020] Patents employing Pycnoporus and its metabolites are described. One of them is CN104099304A, entitled "Method for preparing laccase-containing fermentation broth by Pycnoporus sanguineus", but this invention belongs to the field of microbial fermentation, and in particular it relates to a method for the preparation of laccase-containing fermentation broth by P. sanguineus. The method comprises the steps as follows: under aerobic conditions and in the dark, the fungus is grown in a sterile fermentation medium containing a carbon source, a nitrogen source and inorganic components, the fermentation medium comprises corn flour, powder, ammonium tartrate, monopotassium phosphate, magnesium sulfate heptahydrate, sodium succinate, copper sulfate pentahydrate, potassium chloride hexahydrate, a surfactant, an anti-foaming agent and water. It has the advantages of reproducibility, high activities of the laccase produced, good enzyme temperature stability, high pH adaptability and the like; and laccase can be widely applied to the fields of dye degradation, biobleaching, wood gluing, ecological recovery and the like.

[0021] O documento patentário US5262315A refere-se a um processo para a produção de vanilina. A cultura de um fungo basidiomiceto do gênero Pycnoporus ou os seus mutantes variantes são utilizados para converter um precursor benzenoide de vanilina, e a vanilina produzida por bioconversão é recuperada.[0021] Patent document US5262315A refers to a process for the production of vanillin. The culture of a basidiomycete fungus of the genus Pycnoporus or its variant mutants is used to convert a benzenoid precursor to vanillin, and the vanillin produced by bioconversion is recovered.

[0022] O documento EP 0947142B1 refere-se a um novo método para a cross-linking uma proteína usando uma enzima. Mais particularmente, ele refere-se a um processo para a reticulação de proteínas utilizando uma oxidase multi-cobre, tal como a lacase ou bilirrubina oxidase produzida por P. sanguineus.[0022] EP 0947142B1 relates to a new method for cross-linking a protein using an enzyme. More particularly, it relates to a process for cross-linking proteins using a multi-copper oxidase, such as the laccase or bilirubin oxidase produced by P. sanguineus.

[0023] A patente de invenção "Composição antimicrobiana que compreende uma oxidoredutase e um agente melhorador da-hydroxyanilide do tipo" WO2000027204A1, refere-se a uma composição enzimática capaz de matar ou inibir células microbianas ou microrganismos, por exemplo, na lavagem de roupa, em superfícies duras, em sistemas de água, na pele, nos dentes ou nas membranas mucosas, compreendendo um sistema de enzima de oxidação fenólica e um agente melhorador de fórmula. A presente invenção também se relaciona com a utilização da dita composição enzimática para a conservação de produtos alimentares, cosméticos, tintas, revestimentos etc.[0023] The invention patent "Antimicrobial composition comprising an oxidoreductase and a da-hydroxyanilide-like enhancing agent" WO2000027204A1, refers to an enzymatic composition capable of killing or inhibiting microbial cells or microorganisms, for example, in laundry , on hard surfaces, in water systems, on the skin, on teeth or on mucous membranes, comprising a phenolic oxidation enzyme system and a formula-enhancing agent. The present invention also relates to the use of said enzymatic composition for preserving food products, cosmetics, paints, coatings, etc.

[0024] Além das propriedades antimicrobianas, P. sanguineus vêm sendo estudado devido a sua capacidade de degradar materiais lignocelulósicos e para produção de enzimas.[0024] In addition to the antimicrobial properties, P. sanguineus has been studied due to its ability to degrade lignocellulosic materials and to produce enzymes.

[0025] Em relação à redução de triglicerídeos e colesterol existem diversas patentes para este fim. Entre as quais se destaca o documento patentário US20030166614A1, intitulado "Método para a redução do colesterol e triglicerídeos" que descreve um método de tratamento de níveis excessivos de lipídios no sangue em humanos. O tratamento inclui uma dose diária de suplementos alimentares disponíveis. Os suplementos são concentrados de óleo de peixe, niacina e lecitina. Na forma de realização preferida, dois comprimidos de 500 mg de niacina, dois de 1200 mg de lecitina, e dois 1250 mg de concentrado de óleo de peixe são administrados oralmente, uma vez a duas vezes por dia.[0025] Regarding the reduction of triglycerides and cholesterol, there are several patents for this purpose. Among which stands out the patent document US20030166614A1, entitled "Method for the reduction of cholesterol and triglycerides" which describes a method of treating excessive levels of blood lipids in humans. Treatment includes a daily dose of available food supplements. The supplements are fish oil concentrates, niacin and lecithin. In the preferred embodiment, two 500 mg niacin tablets, two 1200 mg lecithin tablets, and two 1250 mg fish oil concentrate are administered orally once to twice daily.

[0026] A patente US4351835A - Método para impedir a deposição de gordura corporal em mamíferos, se trata de um método para reduzir a taxa de triglicerídeos no fígado e a síntese de deposição de gordura corporal em mamíferos mediante a administração oral durante um período prolongado de uma mistura terapêutica de quantidades eficazes de piruvato e a dihidroxiacetona, que pode ser adicionado à riboflavina. O método também tem o efeito de aumentar as capacidades de armazenamento de glicogénio de fígado.[0026] Patent US4351835A - Method for preventing the deposition of body fat in mammals, is a method for reducing the rate of triglycerides in the liver and the synthesis of body fat deposition in mammals by oral administration over a prolonged period of a therapeutic mixture of effective amounts of pyruvate and dihydroxyacetone, which can be added to riboflavin. The method also has the effect of increasing liver glycogen storage capacities.

[0027] O documento US7022713B2, intitulado "Agente terapêutico hiperlipêmico" relata a invenção de um agente terapêutico que compreende pitavastatinas e hiperlipemia ácido eicosapentaenóico ou derivado de um éster dos mesmos, como ingredientes eficazes. De acordo com o invento, um agente terapêutico tipo IIb e tipo IV tem um excelente efeito na redução do colesterol e triglicerídeos no sangue.[0027] US7022713B2 entitled "Hyperlipemic Therapeutic Agent" reports the invention of a therapeutic agent comprising pitavastatins and hyperlipemia eicosapentaenoic acid or an ester derivative thereof as effective ingredients. According to the invention, a type IIb and type IV therapeutic agent has an excellent effect in lowering blood cholesterol and triglycerides.

[0028] O método para reduzir o colesterol no sangue e/ou triglicerídeos no sangue reportado pela patente US6020383A consiste na administração de uma quantidade eficaz de terc-butil-hidroquinona ou um seu sal. Além disso, uma preparação de terc-butil-hidroquinona sob a forma de unidade de dosagem é fornecida para reduzir o colesterol no sangue e/ou triglicerídeos no sangue. A preparação é vantajosamente concebida para administração oral.[0028] The method for lowering blood cholesterol and/or blood triglycerides reported by US6020383A patent consists of administering an effective amount of tert-butylhydroquinone or a salt thereof. In addition, a tert-butylhydroquinone preparation in unit dosage form is provided for reducing blood cholesterol and/or blood triglycerides. The preparation is advantageously designed for oral administration.

[0029] O documento patentário US5958417A, Combinações de ervas, descreve o uso de preparações de ervas que têm atividade substancial reconhecida na melhoria da função circulatória e que têm efeitos reconhecidos na promoção da motilidade do intestino. Particularmente combinações preferidas foram selecionadas a partir dos seguintes ervas: Crataegus, Ho Shou Wu, crisântemo, folha de lótus, Alisma e Hu-Zhang, Cassia sementes, e ruibarbo.[0029] Patent document US5958417A, Herbal Combinations, describes the use of herbal preparations which have substantial activity recognized in improving circulatory function and which have recognized effects in promoting bowel motility. Particularly preferred combinations were selected from the following herbs: Crataegus, Ho Shou Wu, Chrysanthemum, Lotus Leaf, Alisma and Hu-Zhang, Cassia Seed, and Rhubarb.

[0030] Assim, do que se depreende da literatura pesquisada, não foram encontrados documentos antecipando ou sugerindo os ensinamentos da presente invenção, de forma que a solução aqui proposta possui novidade e atividade inventiva frente ao estado da técnica.[0030] Thus, from what can be seen from the researched literature, no documents were found anticipating or suggesting the teachings of the present invention, so that the solution proposed here has novelty and inventive step compared to the state of the art.

[0031] Devido aos efeitos colaterais do uso de estatinas no tratamento de hipertrigliceridemia, hipercolesterolemia e esteatose hepática, aqui descritos, como hepatite tóxica, falta de apetite, diarreia, vômitos, insônia, dores de cabeça, perda de memória, formigamentos e neurites, é necessário o desenvolvimento de novas formas de tratamento que sejam menos nocivas.[0031] Due to the side effects of using statins in the treatment of hypertriglyceridemia, hypercholesterolemia and hepatic steatosis, described here, such as toxic hepatitis, lack of appetite, diarrhea, vomiting, insomnia, headaches, memory loss, tingling and neuritis, it is necessary to develop new forms of treatment that are less harmful.

Summary of the Invention

[0032] Dessa forma, a presente invenção vem resolver os problemas constates no estado da técnica, a partir do uso de compostos (cinabarinas) ou extratos obtidos a partir do fungo Pycnoporus sanguineus na preparação de composição nutracêutica, medicamento, suplemento, alimento funcional e/ou composição fitoterápica para redução de índices de triglicerídeos e colesterol plasmáticos em mamíferos.[0032] In this way, the present invention solves the problems found in the state of the art, from the use of compounds (cinnabarins) or extracts obtained from the fungus Pycnoporus sanguineus in the preparation of nutraceutical composition, medicine, supplement, functional food and /or herbal composition for reducing plasma triglyceride and cholesterol levels in mammals.

[0033] Em um primeiro objeto, a presente invenção apresenta o uso de compostos (cinabarinas) ou extratos obtidos a partir do fungo Pycnoporus sanguineus na preparação de uma composição nutracêutica, medicamento, suplemento, alimento funcional e/ou composição fitoterápica para: - redução de gorduras no fígado de mamíferos; ou - redução de índices de colesterol plasmático em mamíferos; ou - redução de índices de triglicerídeos em mamíferos; ou - combinações dos mesmos; em que o composto possui a fórmula:

em que R é selecionado entre CHOH ou COOH.[0033] In a first object, the present invention presents the use of compounds (cinnabarins) or extracts obtained from the fungus Pycnoporus sanguineus in the preparation of a nutraceutical composition, medicine, supplement, functional food and/or phytotherapic composition for: - reduction of fats in the liver of mammals; or - reduction of plasma cholesterol levels in mammals; or - reduction of triglyceride indices in mammals; or - combinations thereof; where the compound has the formula:

wherein R is selected from CHOH or COOH.

[0034] Estes e outros objetos da invenção serão imediatamente valorizados pelos versados na arte e pelas empresas com interesses no segmento, e serão descritos em detalhes suficientes para sua reprodução na descrição a seguir.[0034] These and other objects of the invention will be immediately valued by those versed in the art and by companies with interests in the segment, and will be described in sufficient detail for their reproduction in the following description.

Brief Description of Figures

[0035] Com o intuito de melhor definir e esclarecer o conteúdo do presente pedido de patente, são apresentadas as presentes e figuras:[0035] In order to better define and clarify the content of this patent application, the present and figures are presented:

[0036] A figura 1 mostra o desenvolvimento de basidiomas em cultivo em estado sólido em meio com serragem de Pinus sp. suplementado com 4% (m/m) de farelo de trigo e 1% (m/m) de carbonato de cálcio.Figura 2.[0036] Figure 1 shows the development of basidiomes in solid state culture in a medium with Pinus sp sawdust. supplemented with 4% (w/w) of wheat bran and 1% (w/w) of calcium carbonate.Figure 2.

[0037] A Figura 2 mostra as estruturas moléculares das cianabarinas presentes no extrato de Pycnoporus sanguineus.[0037] Figure 2 shows the molecular structures of cyanabarins present in the extract of Pycnoporus sanguineus.

[0038] A Figura 3 mostra os cromatogramas do extrato de Pycnoporus sanguineus, evidenciando o elevado grau de pureza das duas formas de cinabarina, a cinabarina e o ácido cinabarínico.[0038] Figure 3 shows the chromatograms of the extract of Pycnoporus sanguineus, showing the high degree of purity of the two forms of cinnabarin, cinnabarin and cinnabarinic acid.

[0039] A Figura 4 mostra o espectrograma de massa do composto ácido cinabarínico (Pico 1), espectro MS (3,54 min), espectro MS2 do m/z 301 (modo positivo).[0039] Figure 4 shows the mass spectrogram of the compound cinnabarinic acid (Peak 1), MS spectrum (3.54 min), MS2 spectrum of m/z 301 (positive mode).

[0040] A Figura 5 mostra o espectrograma de massa do composto cinabarina (Pico 2), espectro MS (3,73 min), espectro MS2 do m/z 287 (modo positivo).[0040] Figure 5 shows the mass spectrogram of the compound cinnabarin (Peak 2), MS spectrum (3.73 min), MS2 spectrum of m/z 287 (positive mode).

[0041] A Figura 6 mostra o espectrograma de massa do composto não identificado (Pico 3), espectro MS (17,29 min) (modo positivo).[0041] Figure 6 shows the mass spectrogram of the unidentified compound (Peak 3), MS spectrum (17.29 min) (positive mode).

[0042] A Figura 7 mostra os espectros de UV dos picos 1 (ácido cinabarínico), 2 (cinabarina) e 3 (composto não identificado) do extrato de Pycnoporus sanguineus.[0042] Figure 7 shows the UV spectra of peaks 1 (cinnabarinic acid), 2 (cinnabarin) and 3 (unidentified compound) of Pycnoporus sanguineus extract.

[0043] A figura 8 mostra um gráfico da concentração de glicose em plasmas sanguíneos de ratos normais e diabéticos tratados por 30 dias com Pycnoporus sanguineus (Os números entre colchetes referem-se ao número de animais em cada tratamento). Símbolos diferentes (* e/ou #) indica diferença estatística significativa dos grupos DBT em relação aos outros grupos (p < 0.05, Tukey).[0043] Figure 8 shows a graph of glucose concentration in blood plasmas of normal and diabetic rats treated for 30 days with Pycnoporus sanguineus (The numbers in square brackets refer to the number of animals in each treatment). Different symbols (* and/or #) indicate a statistically significant difference between the DBT groups in relation to the other groups (p < 0.05, Tukey).

[0044] A figura 9 mostra um gráfico da concentração de triglicerídeos em plasmas sanguíneos de ratos normais e diabéticos tratados por 30 dias com Pycnoporus sanguineus (Os números entre colchetes referem-se ao número de animais em cada tratamento). Símbolos diferentes (* e/ou #) indica diferença estatística significativa dos grupos DBT em relação aos outros grupos (p < 0.05, Tukey).[0044] Figure 9 shows a graph of the concentration of triglycerides in blood plasmas of normal and diabetic rats treated for 30 days with Pycnoporus sanguineus (The numbers in square brackets refer to the number of animals in each treatment). Different symbols (* and/or #) indicate a statistically significant difference between the DBT groups in relation to the other groups (p < 0.05, Tukey).

[0045] A figura 10 mostra um gráfico da concentração de colesterol total em plasmas sanguíneos de ratos normais e diabéticos tratados por 30 dias com Pycnoporus sanguineus (Os números entre colchetes referem-se ao número de animais em cada tratamento). Símbolos diferentes (* e/ou #) indica diferença estatística significativa dos grupos DBT em relação aos outros grupos (p < 0.05, Tukey).[0045] Figure 10 shows a graph of total cholesterol concentration in blood plasmas of normal and diabetic rats treated for 30 days with Pycnoporus sanguineus (The numbers in square brackets refer to the number of animals in each treatment). Different symbols (* and/or #) indicate a statistically significant difference between the DBT groups in relation to the other groups (p < 0.05, Tukey).

[0046] A figura 11 mostra um gráfico da concentração de colesterol não HDL em plasmas sanguíneos de ratos normais e diabéticos tratados por 30 dias com Pycnoporus sanguineus (Os números entre colchetes referem-se ao número de animais em cada tratamento). Símbolos diferentes (* e/ou #) indica diferença estatística significativa dos grupos DBT em relação aos outros grupos (p < 0.05, Tukey).[0046] Figure 11 shows a graph of the concentration of non-HDL cholesterol in blood plasmas of normal and diabetic rats treated for 30 days with Pycnoporus sanguineus (The numbers in square brackets refer to the number of animals in each treatment). Different symbols (* and/or #) indicate a statistically significant difference between the DBT groups in relation to the other groups (p < 0.05, Tukey).

[0047] A figura 12 mostra um gráfico da concentração de colesterol HDL em plasmas sanguíneos de ratos normais e diabéticos tratados por 30 dias com Pycnoporus sanguineus (Os números entre colchetes referem-se ao número de animais em cada tratamento).[0047] Figure 12 shows a graph of the concentration of HDL cholesterol in blood plasmas of normal and diabetic rats treated for 30 days with Pycnoporus sanguineus (The numbers in square brackets refer to the number of animals in each treatment).

Detailed Description of the Invention

[0048] A presente invenção revela a produção de micélios ricos em princípios bioativos (cinabarinas), em que os princípios bioativos são capazes de contribuir significativamente para a redução dos índices lipídicos (colesterol e triglicerídeos). O uso dos princípios ativos com propriedades anti- hipertrigliceridêmicas e anti-hipercolesterolêmicas (redução de triglicerídeos e colesterol), com potencial para evitar e tratar esteatose hepática também são revelados.[0048] The present invention reveals the production of mycelia rich in bioactive principles (cinnabarins), in which the bioactive principles are able to significantly contribute to the reduction of lipid levels (cholesterol and triglycerides). The use of active ingredients with anti-hypertriglyceridemic and anti-hypercholesterolemic properties (reducing triglycerides and cholesterol), with the potential to prevent and treat hepatic steatosis, is also revealed.

[0049] A produção de micélios pode ser realizada tanto por cultivos submersos em biorreator, como por cultivos em estado sólido empregando biomassas lignocelulósicas como matéria-prima. A produção de corpos de frutificação também é realizada a partir dos cultivos em estado sólido.[0049] The production of mycelia can be carried out either by submerged cultures in a bioreactor, or by solid-state cultures using lignocellulosic biomass as raw material. The production of fruiting bodies is also carried out from solid-state crops.

[0050] A utilização de corpos de frutificação e micélio de P. sanguineus e seus extratos para formulações compreendendo princípios ativos (cinabarinas) capazes de reduzir triglicerídeos e colesterol em curtos espaços de tratamento (em torno de um mês) é um objeto da presente invenção. Destaca-se que as reduções em triglicerídeos e colesterol total são significantes, sendo reduzidas a concentrações iguais a indivíduos normais. Destaca-se que a maior redução do colesterol foi de colesterol não HDL.[0050] The use of fruiting bodies and mycelium of P. sanguineus and its extracts for formulations comprising active principles (cinnabarins) capable of reducing triglycerides and cholesterol in short treatment periods (around one month) is an object of the present invention . It is noteworthy that the reductions in triglycerides and total cholesterol are significant, being reduced to concentrations equal to normal individuals. It is noteworthy that the greatest reduction in cholesterol was in non-HDL cholesterol.

[0051] Este efeito também foi observado em ratos diabéticos apresentando, portanto, pode ser utilizada em formulações farmacêuticas para tratamento de hipertrigliceridemia e hipercolesterolemia.[0051] This effect was also observed in diabetic rats presenting, therefore, it can be used in pharmaceutical formulations for the treatment of hypertriglyceridemia and hypercholesterolemia.

[0052] Em um primeiro objeto, a presente invenção apresenta o uso de compostos (cinabarinas) ou extratos obtidos a partir do fungo Pycnoporus sanguineus na preparação de uma composição nutracêutica, medicamento, suplemento, alimento funcional e/ou composição fitoterápica para: - redução de gorduras no fígado de mamíferos; ou - redução de índices de colesterol plasmático em mamíferos; ou - redução de índices de triglicerídeos em mamíferos; ou - combinações dos mesmos; em que o composto possui a fórmula: em que R é selecionado entre CHOH ou COOH.[0052] In a first object, the present invention presents the use of compounds (cinnabarins) or extracts obtained from the fungus Pycnoporus sanguineus in the preparation of a nutraceutical composition, medicine, supplement, functional food and/or phytotherapic composition for: - reduction of fats in the liver of mammals; or - reduction of plasma cholesterol levels in mammals; or - reduction of triglyceride indices in mammals; or - combinations thereof; wherein the compound has the formula: wherein R is selected from CHOH or COOH.

[0053] Em uma concretização, o uso é para preparação de uma composição nutracêutica, medicamento, suplemento, alimento funcional e/ou composição fitoterápica para tratar hipertrigliceridemia.[0053] In one embodiment, the use is for preparing a nutraceutical composition, drug, supplement, functional food, and/or herbal composition for treating hypertriglyceridemia.

[0054] Em uma concretização, o uso é para preparação de uma composição nutracêutica, medicamento, suplemento, alimento funcional e/ou composição fitoterápica para tratar hipercolesterolemia.[0054] In one embodiment, the use is for preparing a nutraceutical composition, drug, supplement, functional food, and/or herbal composition for treating hypercholesterolemia.

[0055] Em uma concretização, o uso é para preparação de uma composição nutracêutica, medicamento, suplemento, alimento funcional e/ou composição fitoterápica para tratar esteatose hepática.[0055] In one embodiment, the use is for preparing a nutraceutical composition, drug, supplement, functional food and/or herbal composition for treating fatty liver.

[0056] Em uma concretização, a composição nutracêutica, medicamento, suplemento, alimento funcional e/ou composição fitoterápica é administrada por via oral, tópica ou parenteral. Em uma concretização, a composição nutracêutica, medicamento, suplemento, alimento funcional e/ou composição fitoterápica é administrada por via oral.[0056] In one embodiment, the nutraceutical composition, drug, supplement, functional food, and/or herbal composition is administered orally, topically, or parenterally. In one embodiment, the nutraceutical composition, drug, supplement, functional food and/or herbal composition is administered orally.

[0057] Em uma concretização, o composto é obtido de corpos de frutificação e/ou micélio de Pycnoporus sanguineus e/ou seus extratos.[0057] In one embodiment, the compound is obtained from the fruiting bodies and/or mycelium of Pycnoporus sanguineus and/or extracts thereof.

[0058] Em uma concretização, um processo de obtenção de micélio e corpos de frutificação em meios submersos e em estado sólido, empregando resíduos regionais é uma alternativa para aos processos conhecidos, pois torna a produção mais econômica e possibilita a utilização de substratos que estão disponíveis em diferentes regiões geográficas.[0058] In one embodiment, a process of obtaining mycelium and fruiting bodies in submerged and solid state media, using regional waste is an alternative to known processes, as it makes production more economical and enables the use of substrates that are available in different geographic regions.

[0059] Em uma concretização, a presente invenção descreve a produção, extração e concentração e purificação de um extrato rico em cinabarinas e de extratos de macrofungos e micélios com propriedades anti- hipertrigliceridêmicas e anti-hipercolesterolêmicas.[0059] In one embodiment, the present invention describes the production, extraction and concentration and purification of an extract rich in cinnabarins and extracts of macrofungi and mycelia with anti-hypertriglyceridemic and anti-hypercholesterolemic properties.

[0060] Os princípios ativos produzidos pelo Pycnoporus sanguineus não apresentam os mesmos efeitos colaterais que as estatinas. Estes princípios ativos apresentam custos de produção mais baixos, e produção a partir de fungo cultivado em resíduos lignocelulósicos o que contribui para reduzir o impacto ambiental destes resíduos.[0060] The active ingredients produced by Pycnoporus sanguineus do not have the same side effects as statins. These active ingredients have lower production costs, and production from fungus grown on lignocellulosic residues, which contributes to reducing the environmental impact of these residues.

[0061] A presente invenção pode se apresentar em diferentes formas farmacêuticas, podendo ser utilizadas em diferentes vias de administração compreendendo as vias oral, tópica e injetável (parenteral).[0061] The present invention can be presented in different pharmaceutical forms, and can be used in different routes of administration including oral, topical and injectable (parenteral) routes.

[0062] Os ativos podem ser incorporados em formulações sólidas como granulados, cápsulas, drágeas e comprimidos preparadas com excipientes inertes em diversas proporções. Dentre os excipientes pode ser utilizado o amido, a celulose, a lactose, o estearato de magnésio e o talco.[0062] The actives can be incorporated into solid formulations such as granules, capsules, dragees and tablets prepared with inert excipients in different proportions. Among the excipients, starch, cellulose, lactose, magnesium stearate and talc can be used.

[0063] Também podem ser preparadas formulações líquidas ou semissólidas tais como xaropes, soluções, suspensões e elixires a base de sacarose, sorbitol, celulose, sacarina, óleos e água.[0063] Liquid or semi-solid formulations such as syrups, solutions, suspensions and elixirs based on sucrose, sorbitol, cellulose, saccharin, oils and water can also be prepared.

[0064] Diversas formulações farmacêuticas podem ser preparadas a partir da presente invenção, suas preparações sendo óbvias para um técnico no assunto.[0064] Various pharmaceutical formulations can be prepared from the present invention, their preparations being obvious to one skilled in the art.

[0065] No presente documento entende-se o termo “cinabarinas” como o composto cinabarina e o ácido cinabarínico.[0065] In the present document the term "cinnabarins" is understood as the compound cinnabarin and cinnabarinic acid.

Examples - Achievements

[0066] Os exemplos aqui mostrados têm o intuito somente de exemplificar uma das inúmeras maneiras de se realizar a invenção, contudo sem limitar, o escopo da mesma.[0066] The examples shown here are intended only to exemplify one of the numerous ways to carry out the invention, however without limiting its scope.

Cultivation Process

[0067] Para a produção de basidiomas de P. sanguineus os micélios foram repicados em uma placa contendo o Meio Ágar Serragem de Pinus spp. (MM) e incubados a 24 °C por 7 a 10 dias.[0067] For the production of P. sanguineus basidiomes, the mycelia were subcultured onto a plate containing Sawdust Agar of Pinus spp. (MM) and incubated at 24 °C for 7 to 10 days.

[0068] Após o desenvolvimento do micélio sobre toda a placa, as culturas foram utilizadas para inocular os sacos para a produção dos macrofungos, devidamente esterilizadas, contendo o meio de cultivo de acordo com a tabela 1. Os sacos foram mantidos a temperatura de 28 ± 5 °C, por aproximadamente 45 dias, até a colonização de todo o substrato. Após, os sacos foram mantidos em local com temperatura em torno de 28 ± 5 °C e umidade necessária para o desenvolvimento do basidioma dos macrofungos como pode ser observado na figura 1. Tabela 1. Composição (% m/v) dos meios de cultivo em estado sólido.

Tabela 2. Composição do meio Pinus spp.

[0068] After the development of the mycelium over the entire plate, the cultures were used to inoculate the bags for the production of macrofungi, properly sterilized, containing the culture medium according to table 1. The bags were kept at a temperature of 28 ± 5 °C, for approximately 45 days, until the entire substrate is colonized. Afterwards, the bags were kept in a place with a temperature around 28 ± 5 °C and humidity necessary for the development of the basidiome of the macrofungi as can be seen in Figure 1. Table 1. Composition (% m/v) of the culture media in solid state.

Table 2. Composition of the Pinus spp.

Extraction Process

[0069] Os basidiomas de P. sanguineus (Agaricomycetes) foram inicialmente desidratados a 60 °C até apresentarem massa constante. Após, os basidiomas foram triturados em moinho de facas até a obtenção de uma quantidade suficiente para preparar os extratos (55 g de pó seco). A extração a 10% foi realizada sobre refluxo, utilizando-se 2,75 L de etanol 70% a 90 °C por 30 minutos. A separação da amostra foi realizada por filtração simples.[0069] The basidiomes of P. sanguineus (Agaricomycetes) were initially dehydrated at 60 °C until they had a constant mass. Afterwards, the basidiomes were ground in a knife mill until obtaining a sufficient amount to prepare the extracts (55 g of dry powder). The 10% extraction was carried out under reflux, using 2.75 L of 70% ethanol at 90 °C for 30 minutes. Sample separation was performed by simple filtration.

[0070] Após, foi feita uma nova extração com água destilada (2,75 L), utilizando o resíduo da primeira filtração, a 100 °C, durante 1 hora. A amostra foi então separada por filtração simples. Os filtrados foram secos em rotavapor, as frações foram misturadas, armazenadas em -80 °C, liofilizadas e então armazenadas ao abrigo da luz, dando um rendimento de 25% (14 g de extrato seco).[0070] Afterwards, a new extraction was performed with distilled water (2.75 L), using the residue from the first filtration, at 100 °C, for 1 hour. The sample was then separated by simple filtration. The filtrates were rotovapped, the fractions were mixed, stored at -80 °C, lyophilized and then stored in the dark, giving a 25% yield (14 g of dry extract).

Analysis of extracts

[0071] Os extratos foram dissolvidos em metanol:MTBE (50:50, v/v) e filtrados em membrana PTFE de 0,22 μm. Os compostos foram separados em uma coluna C30 YMC (5 μm, 250 mm x 4,6 mm) utilizando como fase móvel um gradiente linear de MeOH:MTBE. O fluxo da fase móvel foi de 0,9 mL/min e a temperatura da coluna foi ajustada para 29 °C. Os espectros foram obtidos entre 200 e 600 nm e os cromatogramas processados entre 280 e 429 nm. Após a saída do detector DAD um divisor de fluxo permitiu a entrada de 0,45 mL/min no MS. Os espectros de massas foram adquiridos com um scan range de m/z 100 a 800. Os parâmetros do MS foram os seguintes: fonte ESI no modo de ionização positivo; voltagem do capilar: 3000 V, temperatura do gás de secagem (N2): 310 °C, fluxo: 5 L/min, nebulizador: 30 psi; fragmentação no modo automático e energia de fragmentação MS2: 35 eV.[0071] The extracts were dissolved in methanol:MTBE (50:50, v/v) and filtered through a 0.22 μm PTFE membrane. Compounds were separated on a C30 YMC column (5 µm, 250 mm x 4.6 mm) using a linear gradient of MeOH:MTBE as mobile phase. The mobile phase flow was 0.9 mL/min and the column temperature was adjusted to 29 °C. Spectra were obtained between 200 and 600 nm and chromatograms processed between 280 and 429 nm. After exiting the DAD detector, a flow divider allowed 0.45 mL/min to enter the MS. Mass spectra were acquired with a scan range from m/z 100 to 800. The MS parameters were as follows: ESI source in positive ionization mode; capillary voltage: 3000 V, drying gas temperature (N2): 310°C, flow: 5 L/min, nebulizer: 30 psi; auto-mode fragmentation and MS2 fragmentation energy: 35 eV.

[0072] Os extratos obtidos a partir de micélios e de basidiomas de P. sanguineus são ricos em cinabarinas (Figura 2) e com elevado grau de pureza (acima de 95%) (Tabela 3 e Figuras 3 a 7).[0072] The extracts obtained from mycelia and basidiomes of P. sanguineus are rich in cinnabarins (Figure 2) and with a high degree of purity (above 95%) (Table 3 and Figures 3 to 7).

[0073] A obtenção de extrato com estes teores de cinabarina é relevante e inédita na área. O referido composto pode, portanto, ser facilmente obtido a partir de micélios e de corpos de frutificação do macrofungo, empregando materiais lignocelulósicos como matéria-prima o que reduz os custos dos processos de produção do fungo e de seus metabólitos.[0073] Obtaining an extract with these levels of cinnabarin is relevant and unprecedented in the area. Said compound can, therefore, be easily obtained from mycelia and fruiting bodies of the macrofungus, using lignocellulosic materials as raw material, which reduces the costs of the production processes of the fungus and its metabolites.

[0074] Destaca-se que todos os extratos obtidos de P. sanguineus apresentaram importante teor de polifenóis e atividade antioxidante, destacando-se os extratos obtidos a partir dos basidiomas (Tabela 4). Tabela 3. Características cromatográficas e espectroscópicas dos compostos encontrados no extrato de Pycnoporus sanguineus. obtidas por HPLC-DAD-ESI- MSn.

a Numerado de acordo com o cromatograma mostrado na Figura 3. b Tempo de retenção de uma coluna C30. c Solvente: gradiente de MeOH/MTBE. Tabela 4. Rendimento, conteúdo de polifenóis totais, inibição do radical livre difenilpicril hidrazil (DPPH) para os extratos secos dos micélios e basidiomas de Pycnoporus sanguineus.

*Polifenóis totais expressos em equivalentes de ácido gálico $ Concentração necessária para inibir 50% do radical livre DPPH Redução de índices de triglicerídeos e de colesterol plasmáticos e redução de gorduras no fígado[0074] It is noteworthy that all extracts obtained from P. sanguineus showed important content of polyphenols and antioxidant activity, highlighting the extracts obtained from the basidiomes (Table 4). Table 3. Chromatographic and spectroscopic characteristics of compounds found in Pycnoporus sanguineus extract. obtained by HPLC-DAD-ESI-MSn.

a Numbered according to the chromatogram shown in Figure 3. b Retention time of a C30 column. c Solvent: MeOH/MTBE gradient. Table 4. Yield, total polyphenols content, diphenylpicryl hydrazyl (DPPH) free radical inhibition for the dry extracts of mycelia and basidiomes of Pycnoporus sanguineus.

*Total polyphenols expressed in gallic acid equivalents $ Concentration required to inhibit 50% of the DPPH free radical Reduction of plasma triglycerides and cholesterol levels and reduction of fats in the liver

[0075] Para a avaliação da atividade do extrato de P. sanguineus foram utilizados grupos de ratos controle e grupos de ratos com diabetes.[0075] For the evaluation of the activity of the extract of P. sanguineus, groups of control rats and groups of rats with diabetes were used.

[0076] A diabetes foi induzida nos ratos por uma única injeção intraperitoneal de estreptozotocina (STZ - Sigma) na dose de 65 mg/kg. Foram considerados diabéticos aqueles animais que apresentaram concentração de glicose plasmática superior a 250mg/dL quatro dias após a injeção de STZ.[0076] Diabetes was induced in rats by a single intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ - Sigma) at a dose of 65 mg/kg. Those animals that presented plasma glucose concentration above 250mg/dL four days after STZ injection were considered diabetic.

[0077] O tratamento com o extrato de P. sanguineus foi realizado utilizando-se ratos Wistar machos (provenientes do Biotério da Universidade Federal de Santa Maria) alojados em caixas padronizadas, a 22 ± 2 °C com ciclo claro/escuro de 12 horas.[0077] The treatment with the extract of P. sanguineus was carried out using male Wistar rats (from the Animal House of the Federal University of Santa Maria) housed in standardized boxes at 22 ± 2 °C with a 12-hour light/dark cycle .

[0078] Estudos mostram que a concentração utilizada in vivo em tratamentos com o P. sanguineus, que devido ao efeito citotóxico a concentração de 10 mg/kg/dia é uma dose aceitável para o extrato de P. sanguineus. Este extrato foi disponibilizado para consumo dos ratos na água de consumo. Devido ao consumo de água 3 vezes maior por parte dos animais diabéticos, inicialmente, os ratos diabéticos receberam o produto numa diluição de 3 vezes a partir do preparado para os animais do grupo Controle. Para que a quantidade adotada fosse mantida durante todo o tratamento, o peso dos ratos e o consumo de líquido foram monitorados semanalmente e os cálculos de preparação da solução eram refeitos com base nesses dados.[0078] Studies show that the concentration used in vivo in treatments with P. sanguineus, due to the cytotoxic effect, the concentration of 10 mg/kg/day is an acceptable dose for the P. sanguineus extract. This extract was made available for consumption by rats in drinking water. Due to the 3 times greater consumption of water by the diabetic animals, initially, the diabetic rats received the product in a 3 times dilution from the preparation for the animals of the Control group. So that the adopted amount was maintained throughout the treatment, the rats' weight and liquid consumption were monitored weekly and the solution preparation calculations were redone based on these data.

[0079] Os grupos foram configurados da seguinte forma. - Grupo CTR H2O (n=5 ratos): Controles tratados com água; - Grupo CTR Pyc (n=5 ratos): Controles tratados com P. sanguineus; - Grupo DBT H2O (n=7 ratos): Diabéticos tratados com água; - Grupo DBT Pyc (n=7 ratos): Diabéticos tratados com P. sanguineus.[0079] The groups have been configured as follows. - CTR H2O group (n=5 rats): Controls treated with water; - Pyc CTR group (n=5 rats): Controls treated with P. sanguineus; - DBT H2O group (n=7 rats): Diabetics treated with water; - DBT Pyc group (n=7 rats): Diabetics treated with P. sanguineus.

[0080] Após o período de 4 semanas de tratamento com o extrato, os animais foram pesados e posteriormente mortos por decapitação em função das avaliações bioquímicas no sangue. O sangue troncular dos ratos foi coletado e depositado em tubos de ensaio específicos: 1 mL para o perfil hematológico e 4 mL para as análises bioquímicas. No sangue coletado para as análises bioquímicas, o plasma foi separado e congelado. Também foram coletados e pesados fígado e rins para cálculo dos índices hepático e renal dos grupos.[0080] After a period of 4 weeks of treatment with the extract, the animals were weighed and subsequently killed by decapitation depending on the biochemical evaluations in the blood. The truncal blood of the rats was collected and deposited in specific test tubes: 1 mL for the hematological profile and 4 mL for the biochemical analyses. In the blood collected for biochemical analyses, the plasma was separated and frozen. Liver and kidneys were also collected and weighed to calculate the hepatic and renal indices of the groups.

[0081] O presente estudo foi aprovado pela Comissão de Ética no uso de Animais da Universidade de Caxias do Sul.[0081] The present study was approved by the Ethics Committee on the use of Animals at the University of Caxias do Sul.

[0082] A comprovação das propriedades antihipertrigliceridemia e antihipercolesterolemia do extrato de P. sanguineus, bem como os efeitos sobre fígado e rins é apresentada nas Tabelas 5 a 7 e nas Figuras 8 a 12.[0082] The evidence of the antihypertriglyceridemia and antihypercholesterolemia properties of the P. sanguineus extract, as well as the effects on liver and kidneys, is presented in Tables 5 to 7 and Figures 8 to 12.

[0083] As enzimas aminotransferase de aspartate (AST) e a aminotransferase de alanine (ALT) normalmente são contidas dentro das células do fígado. Se o fígado estiver com algum problema (patologia ou intoxicação), as células são rompidas e extravasam AST e ALT na corrente sanguínea, elevando os níveis destas enzimas no sangue e sinalizando o problema que possa existir. Verificou-se que quanto à ação destas enzimas, houve redução da sua ação nos ratos normais, mas não houve diferença nos ratos diabéticos para AST (Tabela 5). Já para ALT (Tabela 6), verificou-se redução nos ratos normais, mas incrementos nos ratos diabéticos. Já para leucócitos e plaquetas, nos indivíduos normais houve incremento em suas quantidades, mas este fato não foi verificado para os ratos diabéticos. Quanto aos parâmetros nefro-hepáticos não foram verificadas variações significativas (Tabela 7). Tabela 5. Atividades enzimáticas de aminotransferase de aspartate (AST) e a aminotransferase de alanine (ALT) e albumina em plasmas sanguíneos de ratos normais e diabéticos após 30 dias de tratamento com Pycnoporus sanguineus.

CTR- controle DBT - diabéticos Pyc - tratamento com Pycnoporus sanguineus. Os números entre colchetes referem-se ao número de animais em cada tratamento. Tabela 6. Hemograma de ratos normais e diabéticos após 30 dias de tratamento com Pycnoporus sanguineus.

CTR- controle DBT - diabéticos Pyc - tratamento com Pycnoporus sanguineus. Os números entre colchetes referem-se ao número de animais em cada tratamento. Tabela 7. Variação de peso, consumo de líquido e índices hepáticos e renais de ratos normais e diabéticos após 30 dias de tratamento com Pycnoporus sanguineus.

CTR- controle DBT - diabéticos Pyc - tratamento com Pycnoporus sanguineus. Os números entre colchetes referem-se ao número de animais em cada tratamento.[0083] Aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) enzymes are normally contained within liver cells. If the liver has a problem (pathology or intoxication), the cells are broken and AST and ALT leak into the bloodstream, raising the levels of these enzymes in the blood and signaling the problem that may exist. It was found that in terms of the action of these enzymes, there was a reduction in their action in normal rats, but there was no difference in diabetic rats for AST (Table 5). As for ALT (Table 6), there was a reduction in normal rats, but increases in diabetic rats. As for leukocytes and platelets, in normal individuals there was an increase in their amounts, but this fact was not verified for diabetic rats. As for the nephro-hepatic parameters, no significant variations were observed (Table 7). Table 5. Enzymatic activities of aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) and albumin in blood plasmas of normal and diabetic rats after 30 days of treatment with Pycnoporus sanguineus.

CTR- DBT control - Pyc diabetics - treatment with Pycnoporus sanguineus. The numbers in square brackets refer to the number of animals in each treatment. Table 6. Blood count of normal and diabetic rats after 30 days of treatment with Pycnoporus sanguineus.

CTR- DBT control - Pyc diabetics - treatment with Pycnoporus sanguineus. The numbers in square brackets refer to the number of animals in each treatment. Table 7. Variation in weight, fluid consumption and hepatic and renal indices of normal and diabetic rats after 30 days of treatment with Pycnoporus sanguineus.

CTR- DBT control - Pyc diabetics - treatment with Pycnoporus sanguineus. The numbers in square brackets refer to the number of animals in each treatment.

[0084] Quanto às atividades antihiperglicêmicas, não foram verificadas atividades relacionadas ao P. sanguineus (Figura 8), no entanto quando são analisadas as concentrações de triglicerídeos e colesterol (Figuras 9 a 12), verifica-se claramente que houve redução nas concentrações nos ratos que apresentavam alterações, sendo que estas reduções foram tão significantes que apresentaram valores semelhantes aos dos animais controle.[0084] As for antihyperglycemic activities, activities related to P. sanguineus were not verified (Figure 8), however when the concentrations of triglycerides and cholesterol are analyzed (Figures 9 to 12), it is clearly verified that there was a reduction in the concentrations in the rats that presented alterations, and these reductions were so significant that they presented values similar to those of control animals.

[0085] Os versados na arte valorizarão os conhecimentos aqui apresentados e poderão reproduzir a invenção nas modalidades apresentadas e em outras variantes, abrangidas no escopo das reivindicações anexas.[0085] Those skilled in the art will appreciate the knowledge presented here and will be able to reproduce the invention in the modalities presented and in other variants, covered by the scope of the appended claims.

Claims

1. Use of a compound or an extract obtained from the fungus Pycnoporus sanguineus, characterized for being in the preparation of a nutraceutical composition, medicine, supplement, functional food and/or phytotherapic composition for: - reduction of fats in the liver of mammals; or - reduction of plasma cholesterol levels in mammals; or - reduction of triglyceride indices in mammals; or - combinations thereof; where the compound has the formula:

wherein R is selected from CHOH or COOH.

Use according to claim 1 in the preparation of a nutraceutical composition, medicament, supplement, functional food and/or herbal composition to treat hypertriglyceridemia.

Use according to claim 1 in the preparation of a nutraceutical composition, medicament, supplement, functional food and/or herbal composition to treat hypercholesterolemia.

Use according to claim 1, characterized in that it is in the preparation of a nutraceutical composition, medicine, supplement, functional food and/or herbal composition to treat hepatic steatosis.

Use according to claim 1, characterized in that said nutraceutical composition, drug, supplement, functional food and/or herbal composition is administered orally.

Use according to any one of claims 1 to 5, characterized in that the compound has been obtained from fruiting bodies and/or mycelium of Pycnoporus sanguineus and/or its extracts.