BR102017000525A2 - Processo de síntese de um polímero híbrido com acesso restrito combinado com impressão molecular e sua aplicação como sorvente de ácido fólico em matriz alimentícia - Google Patents

Processo de síntese de um polímero híbrido com acesso restrito combinado com impressão molecular e sua aplicação como sorvente de ácido fólico em matriz alimentícia Download PDF

Info

Publication number
BR102017000525A2
BR102017000525A2 BR102017000525-9A BR102017000525A BR102017000525A2 BR 102017000525 A2 BR102017000525 A2 BR 102017000525A2 BR 102017000525 A BR102017000525 A BR 102017000525A BR 102017000525 A2 BR102017000525 A2 BR 102017000525A2
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
ram
mip
folic acid
polymer
synthesis
Prior art date
Application number
BR102017000525-9A
Other languages
English (en)
Inventor
César Ricardo Teixeira Tarley
Fernanda Midori De Oliveira
Mariana Gava Segatelli
Original Assignee
Universidade Estadual De Londrina
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Universidade Estadual De Londrina filed Critical Universidade Estadual De Londrina
Priority to BR102017000525-9A priority Critical patent/BR102017000525A2/pt
Publication of BR102017000525A2 publication Critical patent/BR102017000525A2/pt

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/282—Porous sorbents
    • B01J20/285—Porous sorbents based on polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/282—Porous sorbents
    • B01J20/283—Porous sorbents based on silica
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F220/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and only one being terminated by only one carboxyl radical or a salt, anhydride ester, amide, imide or nitrile thereof
    • C08F220/02—Monocarboxylic acids having less than ten carbon atoms; Derivatives thereof
    • C08F220/04—Acids; Metal salts or ammonium salts thereof
    • C08F220/06—Acrylic acid; Methacrylic acid; Metal salts or ammonium salts thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J9/00—Working-up of macromolecular substances to porous or cellular articles or materials; After-treatment thereof
    • C08J9/26—Working-up of macromolecular substances to porous or cellular articles or materials; After-treatment thereof by elimination of a solid phase from a macromolecular composition or article, e.g. leaching out
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/40—Concentrating samples
    • G01N1/405—Concentrating samples by adsorption or absorption
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08K—Use of inorganic or non-macromolecular organic substances as compounding ingredients
    • C08K3/00—Use of inorganic substances as compounding ingredients
    • C08K3/02—Elements
    • C08K2003/023—Silicon
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N2030/009—Extraction
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material

Abstract

processo de síntese de um polímero híbrido com acesso restrito combinado com impressão molecular e sua aplicação como sorvente de ácido fólico em matriz alimentícia. a presente invenção refere-se à aplicação de um polímero molecularmente impresso para ácido fólico e com acesso restrito como material adsorvente visando a limpeza cromatográfica de amostras de leite. a síntese do polímero híbrido orgânico-inorgânico descrito nesta invenção destaca-se pelo uso do ácido fólico na presença do ácido metacrílico com posterior modificação de superfície com o 3-glicidoxipropil trimetoxisilano. ao comparar os resultados obtidos nota-se que o mip-ram apresenta menor área superficial e menor volume de poros em relação ao nip-ram. o polímero sintetizado mip-ram se mostrou um material eficiente na exclusão de macromoléculas, no clean-up de amostra e para a quantificação de ácido fólico em amostras de leite em pó enriquecidas.

Description

(54) Título: PROCESSO DE SÍNTESE DE UM POLÍMERO HÍBRIDO COM ACESSO RESTRITO COMBINADO COM IMPRESSÃO MOLECULAR E SUA APLICAÇÃO COMO SORVENTE DE ÁCIDO FÓLICO EM MATRIZ ALIMENTÍCIA (51) Int. Cl.: B01J 20/285; B01J 20/283; G01N 1/40; G01N 30/00; G01N 30/06; (...) (73) Titular(es): UNIVERSIDADE ESTADUAL DE LONDRINA (72) Inventor(es): CÉSAR RICARDO TEIXEIRA TARLEY; FERNANDA MIDORI DE OLIVEIRA; MARIANA GAVA SEGATELLI (85) Data do Início da Fase Nacional:
10/01/2017 (57) Resumo: PROCESSO DE SÍNTESE DE UM POLÍMERO HÍBRIDO COM ACESSO RESTRITO COMBINADO COM IMPRESSÃO MOLECULAR E SUA APLICAÇÃO COMO SORVENTE DE ÁCIDO FÓLICO EM MATRIZ ALIMENTÍCIA. A presente invenção refere-se à aplicação de um polímero molecularmente impresso para ácido fólico e com acesso restrito como material adsorvente visando a limpeza cromatográfica de amostras de leite. A síntese do polímero híbrido orgânico-inorgânico descrito nesta invenção destaca-se pelo uso do ácido fólico na presença do ácido metacrílico com posterior modificação de superfície com o 3glicidoxipropil trimetoxisilano. Ao comparar os resultados obtidos nota-se que o MIP-RAM apresenta menor área superficial e menor volume de poros em relação ao NIP-RAM. O polímero sintetizado MIP-RAM se mostrou um material eficiente na exclusão de macromoléculas, no clean-up de amostra e para a quantificação de ácido fólico em amostras de leite em pó enriquecidas.
Figure BR102017000525A2_D0001
1/16
PROCESSO DE SÍNTESE DE UM POLÍMERO HÍBRIDO COM ACESSO RESTRITO COMBINADO COM IMPRESSÃO MOLECULAR E SUA APLICAÇÃO COMO SORVENTE DE ÁCIDO FÓLICO EM MATRIZ ALIMENTÍCIA
Campo da Invenção [001] A presente invenção refere-se à aplicação de um polímero molecularmente impresso para ácido fólico e com acesso restrito como material adsorvente visando a limpeza cromatográfica de amostras de leite.
Antecedentes da Invenção [002] A determinação e quantificação de substâncias orgânicas presentes em amostras complexas (alimentos, urina, medicamentos, solo, entre outras) exigem, usualmente, etapas de pré-tratamento para a eliminação de interferentes e/ou pré-concentração do analito de interesse. No caso da cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) o pré-tratamento da amostra elimina a maior parte dos interferentes, aumentando a vida útil do sistema de separação cromatográfico e diminuindo a possibilidade de co-eluição do analito e interferentes. Entretanto, o tratamento prévio deve ser o mais rápido possível, pois muitas etapas podem ocasionar contaminação, perda de analito e aumentar o tempo de análise (Cardas, S. S.; Gonçalves, F. F.; Primel, E. G.; Prestes, O. D.; Martins, M. L.; Zanella, R.; Química Nova, 2011, 34, 1604), (Jardim, I. C. S. F.; Scientia Chromatographica, 2010, 2, 13), (Queiroz, S. C. N.; Collins, C. H.; Jardim, I. C. S. F.; Química Nova, 2001, 24, 68). Existem muitos pré-tratamentos para extração de analitos contidos em matrizes complexas como: extração em fase sólida (Oliveira, F. M.; Somera, B. F.; Corazza, M. Z.; Yabe, M. J. S.; Segatelli, M. G.; Ribeiro, E. S.; Lima, E. C.; Dias, S. L. P.; Tarley, C. R. T.; Talanta, 2011, 85, 2417), extração líquido-líquido (Anthemidis, A. N.; Zachariadis, G. A.; Farastelis, C. G.; Stratis, J. A.; Talanta, 2004, 62, 437), precipitação (Iwata, Y.; Imura, H.; Suzuki, N.; Analytica Chimica Acta, 1990, 239,115), co-precipitação (Xiaodan, T.; Xu, Z.; Wang, J.; Spectrochimica Acta Part B, 2005, 60, 1580) e filtração em membrana (Soylak, M.; Unsal, Y. E.; Kizil, N.; Aydin, A.; Food and Chemical Toxicology, 2010, 48, 517). Dentre
Petição 870170001833, de 10/01/2017, pág. 29/45
2/16 estas técnicas citadas, as mais utilizadas são a extração líquido-líquido e a extração em fase-sólida.
[003] A extração líquido-líquido (ELL) consiste na partição da amostra entre duas fases imiscíveis, na qual a eficiência da extração depende da afinidade do soluto pelo solvente. Esta técnica apesar de muito utilizada apresenta muitas desvantagens, pois necessita de grandes quantidades de amostra e os solventes utilizados na maioria das vezes são tóxicos. Além disso, a ELL é de difícil automação, impurezas do solvente podem contaminar a amostra e pode ocorrer a formação de emulsões (Queiroz, S. C. N.; Collins, C. H.; Jardim, I. C. S. F.; Química Nova, 2001,24, 68).
[004] A extração em fase sólida (SPE) é uma técnica de preparo de amostra amplamente difundida. Ela consiste na utilização de uma fase sólida (um sorvente) para extrair o analito de interesse de um meio, retirando possíveis interferentes e em seguida um eluente é utilizado para dessorção do analito. Quando o volume de eluente utilizado é menor do que o da amostra de partida, o analito é concentrado no eluato, o que confere à extração em fase sólida propriedades não apenas de limpeza da amostra, mas também de préconcentração (Barrionuevo, W. R.; Lanças, F. M.; Química Nova, 2001, 24, 172).
[005] A SPE apresenta vantagens em relação à ELL, pois permite altos fatores de pré-concentração, fácil regeneração da fase sólida e fácil automação. Além disso, existem vários sorventes comerciais com propriedades voltadas a solução de problemas analíticos (C18, C8, alumina, Florisil®, entre outros) (Barrionuevo, W. R.; Lanças, F.M.; Química Nova, 2001, 24,172), (Vidal, L.; Riekkola, M. L.; Canals, A.; Analytica Chimica Acta, 2012, 715, 19). A natureza do sorvente é o fator preponderante nos resultados obtidos na extração, pois o processo depende da afinidade que o analito possui pelo sítio sortivo, assim como a capacidade sortiva e seletividade. Vale ressaltar que o material deve possuir características que venham a favorecer o processo sortivo incluindo cinética rápida de sorção, alta área superficial, alta capacidade sortiva, estabilidade química, seletividade, baixa resistência à passagem de fluído e não apresentar inchaço em meio aquoso (Oliveira, F. M.; Somera, B. F.;
Petição 870170001833, de 10/01/2017, pág. 30/45
3/16
Corazza, M. Z.; Yabe, M. J. S.; Segatelli, M. G.;Ribeiro, E. S.; Lima, E. C.; Dias,
S. L. P.; Tarley, C. R. T.; Talanta, 2011, 85, 2417). Com o intuito de contornar a baixa seletividade dos materiais comerciais, alguns materiais com propriedades seletivas têm sido desenvolvidos, em especial os polímeros molecularmente impressos (MIP).
[006] Os MIP são polímeros contendo sítios de reconhecimento seletivo para o analito de interesse, obtidos por meio da polimerização do monômero funcional que estabelece interações (ligação de hidrogênio, forças fracas de Van der Waals ou ligação covalente) com a molécula molde. A impressão molecular ocorre por meio de uma ou mais interações supracitadas e, após a remoção da molécula molde, o polímero dispõe de cavidades complementares na forma e tamanho da molécula molde (Tarley, C. R. T.; Sotomayor, M. D. P.; Kubota, L.
T. ; Química Nova, 2005, 28, 1087). Apesar de seletivos os MIP não são eficientes na exclusão de macromoléculas (proteínas, carboidratos, ácidos nucleicos etc.), diminuindo sobremaneira o desempenho seletivo do material quando o mesmo é aplicado em amostras complexas, como fluídos biológicos (sangue, urina e leite etc).
[007] A aplicação de fases sorventes para a exclusão de macromoléculas de fluídos biológicos é realizada empregando materiais de acesso restrito (RAM). Estes materiais são constituídos de sorventes poliméricos contendo em sua superfície grupos funcionais e/ou proteínas capazes de excluir as macromoléculas através de barreiras físicas ou químicas. Os poros destes materiais possuem tamanhos inferiores às macromoléculas, facilitando a sorção de analitos com massas moleculares menores. Cabe salientar que a sorção de analitos nos poros não é seletiva e, portanto, estes sorventes têm sido usualmente empregados em etapas de clean-up de fluídos biológicos (Lima, V. V.; Cass, Q. B.; Química Nova, 2006, 29, 72), (Qi, Y.; Wei, J.; Wang, H.; Zhang, Y.; Xu, J.; Qian, X.; Guan, Y.; Talanta, 2009, 80, 703).
[008] Mediante o exposto algumas estratégias são reportadas na literatura para associar as vantagens dos MIP e RAM. Apesar dos MIP-RAM serem materiais com propriedades seletivas e de exclusão de macromoléculas com potencialidades analíticas já comprovadas o emprego desses materiais e/ou a
Petição 870170001833, de 10/01/2017, pág. 31/45
4/16 síntese de novos materiais tem sido pouco difundida (Du, B.; Qu, T.; Chen, Z.; Cao, X.; Han, S.; Shen, G.; Wang, L.; Talanta, 2014, 129, 465), (Parisi, O. I.; Cirillo, G.; Curcio, M.; Puoci, F.; Iemma, F.; Spizzirri, U. G.; Picci, N.; Journal of Polymer Research, 2010, 17, 355).
[009] Os MIP-RAM orgânicos são obtidos por muitas técnicas de polimerização com utilização de diferentes monômeros funcionais, formando materiais com alta estabilidade química em uma ampla faixa de pH. Entretanto, dependendo do meio em que estes materiais entram em contato, há a possibilidade das cavidades seletivas criadas pela impressão molecular sofrerem deformações por retração ou expansão. Quando comparados aos polímeros orgânicos, os polímeros inorgânicos, obtidos pelo processo sol-gel, possuem a vantagem de apresentar alta área superficial, mas apresentam baixa estabilidade química em ampla faixa de pH. Alguns trabalhos, visando aliar as vantagens dos polímeros orgânicos e inorgânicos, relatam a síntese de polímeros híbridos com alta estabilidade química, estabilidade térmica, características morfológicas e texturais que favorecem o processo sortivo (Clausen, D. N.; Pires, I. M. R.; Tarley, C. R. T.; Materials Science and Engineering C, 2014, 44, 99). Apesar dos materiais híbridos apresentarem as vantagens dos polímeros orgânicos e inorgânicos unidos em um único material, não há relatos na literatura sobre a síntese e aplicação de MIP-RAM híbridos em métodos de extração.
[010] Existem disponíveis comercialmente muitos adsorventes como resinas de troca iônica, sílicas quimicamente ligadas (C18 e C8), carvão ativo, entre outros. Apesar de serem comerciais, estes materiais apresentam a desvantagem de não serem seletivos para o analito de interesse e por sorverem em suas superfícies macromoléculas, o que acaba por reduzir a vida útil destes materiais.
Sumário da Invenção [011] A invenção supera as limitações dos materiais disponíveis comercialmente, pois o MIP-RAM se mostrou seletivo, eficiente na exclusão de macromoléculas e apresentou grande capacidade de reuso. Uma vez que o
Petição 870170001833, de 10/01/2017, pág. 32/45
5/16
MIP-RAM utilizado para rechear o cartucho foi utilizado durante todo o trabalho sem necessidade de substituição do material.
Descrição Detalhada da Invenção [012] A síntese do polímero híbrido orgânico-inorgânico descrito nesta invenção destaca-se pelo uso do ácido fólico na presença do ácido metacrílico com posterior modificação de superfície com o 3-glicidoxipropil trimetoxisilano. Para a síntese do polímero 2 mmol de ácido fólico (0,8828g) foram solubilizados em 100 mL de HCI 3 mol L-1 e agitados por 30 minutos. Em seguida, foram adicionados a mistura 310 mL de acetonitrila e 12 mmol de MAA (1,03 g) e submetida à agitação por mais de 30 minutos. Posteriormente, adicionou-se 24 mmol de TRIM (7,112 g), 2,94 mmol de VTMS (0,436 g) e 600 mg de AIBN. Após, gás nitrogênio foi borbulhado na solução por 5 minutos e em seguida o frasco foi fechado. A mistura foi polimerizada a 60 °C por 24 horas em banho de óleo. O polímero obtido foi filtrado sob vácuo e seco em estufa por 24 horas a 60 °C. Na etapa seguinte, 10,054 g do polímero orgânico obtido foram ressuspensos em 300 mL de etanol com agitação mecânica e, na sequencia, foram adicionados 52 mmol de TEOS (10,83 g), 48 mmol de GTMS (11,34 g) e 26 mL de NaOH 1 mol L . A mistura foi polimerizada por 24 horas a temperatura ambiente sob agitação. Após este tempo o material obtido foi filtrado sob vácuo e seco em estufa por 48 horas a 60 °C (Jin, Y.; Jiang, M.; Shi, Y.; Lin, Y.; Peng, Y.; Daí, K.; Lu, B.; Analytica Chimica Acta, 2008, 612, 105), (Yeh, J.-M.; Weng, C.-J.; Liao, W.-J.; Mau, Y.-W.; Surface and Coatings Technolofy, 2006, 201, 1788). Para a abertura do anel epóxi 10,000 g do material obtido foram misturados com 500 mL de HCI 0,18 mol L-1 , a qual permaneceu sob agitação à 60°C em banho de óleo por 36 horas, sendo posteriormente filtrado sob vácuo e seco em estufa a 60°C (Du, B.; Qu, T.; Chen, Z.; Cao, X.; han, S.; Shen, G.; Wang, L.; Talanta, 2014, 129, 465). A extração da molécula molde foi realizada com metanol: ácido acético (9:1, v/v) utilizando o sistema Soxhlet, este material foi denominado MIP-RAM. A mesma metodologia de síntese empregada para o MIP-RAM foi utilizada para o MIP, exceto pelo uso do GTMS. O material NIP-RAM também foi preparado e, neste caso, não foi utilizado na síntese o ácido fólico.
Petição 870170001833, de 10/01/2017, pág. 33/45
6/16 [013] Estudos morfológicos foram realizados com a finalidade de se verificar possíveis alterações morfológicas causadas pelos constituintes de síntese utilizados. Estes estudos foram realizados por microscopia eletrônica de varredura, microscopia eletrônica de transmissão e análise de área de superfície, tamanho e volume de poros.
[014] Nas micrografias (Figura 1) foi observada que a morfologia dos polímeros é bastante similar. As partículas regulares e agregadas obtidas são consequência do método de polimerização por precipitação. O método consiste na polimerização do monômero funcional e agente de ligação cruzada na presença de um volume excessivo de solvente porogênico, sendo o último responsável por impedir a coalescência das partículas (Pérez-Moral, N.; Mayes, A. G.; Analytica Chimica Acta, 2004, 504, 15).
[015] De acordo com as micrografias eletrônica de transmissão (Figura 2) pode-se confirmar que as partículas dos polímeros apresentam elevada aderência entre si adquirindo propriedades morfológicas de monólitos e não de partículas isoladas, condições bastante favoráveis para o emprego destes materiais em processo de extração em fase sólida em colunas. Cabe ainda salientar que, de acordo com as imagens de transmissão dos materiais, estes não apresentam estrutura do tipo core-shell. Esta constatação revela que a matriz orgânica e inorgânica possui estrutura interpenetrante. Na figura 2-C observou-se que o MIP possui partículas com tamanhos irregulares, que pode ser atribuída à ausência do GTMS na síntese, uma vez que este pode atuar como auxiliar na reticulação da rede polimérica, favorecendo a homogeneidade do material (Zu, L.; Li, R.; Jin, L.; Lian, H.; Liu, Y.; Cui, X.; Progress in Natural Science Materials International, 2014, 24, 42), (Ponyrko, S.; Kobera, L.; Brus, J.; Matejka, L.; Polymer, 2013, 54, 6271).
[016] Os resultados das análises de área de superfície, tamanho e volume de poros estão demonstrados na Tabela 1. Ao comparar os resultados obtidos nota-se que o MIP-RAM apresenta menor área superficial e menor volume de poros em relação ao NIP-RAM. A explicação para esta diferença morfológica pode estar relacionada à presença da molécula molde na polimerização, a qual pode aumentar a solubilidade do complexo template-monômero no solvente.
Petição 870170001833, de 10/01/2017, pág. 34/45
7/16
Como consequência, dificulta a remoção do solvente porogênico dos interstícios do polímero fazendo com que o volume dos poros seja menor e, consequentemente, a área superficial. Em relação ao MIP, o MIP-RAM possui menor área superficial e menor volume de poros possivelmente em função da modificação com a molécula GTMS que pode ocupar os poros do polímero e, assim, diminuir o volume de poros e área superficial. Entretanto, apesar de apresentar menor área superficial e menor volume de poros, o MIP-RAM apresenta maior capacidade sorção de ácido fólico em relação ao NIP-RAM e o MIP, como será visto no estudo de cinética de sorção. O tamanho dos poros obtidos para estes materiais podem ser classificados de acordo com a IUPAC (International Union of Pure and Applied Chemistry) como materiais mesoporos por possuírem tamanho de poro entre 2 e 50 mm (Cormack, P. A. G.; Elorza, A. Z.; Journal of Chromatography B, 2004, 804, 173).
Tabela 1- Área de superfície, volume de poros e tamanhos de poros
Polímero Área superficial (m2 g-1) Volume de poro (cm3 g-1) Tamanho de poro (nm)
MIP-RAM 17,5 0,039 3,04
NIP-RAM 61,0 0,114 3,32
MIP 55,3 0,103 3,35
[017] A influência do pH na sorção do ácido fólico no MIP-RAM foi realizada utilizando o método em batelada. Foram agitados por 60 minutos 50 mg do MIP-RAM com 40 mL de solução de ácido fólico 10 mg L-1 , em diferentes valores de pH (1,5; 4,4; 5,4; 6,4; 7,4; 8,4; 9,4 e 10,4). Os tampões utilizados na concentração de 0,01 mol L-1 foram: solução de KCI/HCI (pseudo tampão para o pH 1,5), tampão acetato (pH 4,4 e 5,4), tampão fosfato (pH 6,4 e 7,4) e tampão amoniacal (pH 8,4; 9,4 e 10,4). Após a agitação a mistura foi centrifugada com posterior filtração do sobrenadante em membrana de Nylon®
Petição 870170001833, de 10/01/2017, pág. 35/45
8/16
0,45 pm e analisada por espectrofotometria UV-VIS no comprimento de onda de 281 nm.
[018] No perfil de sorção do ácido fólico em ampla faixa de pH (Figura 3), a maior sorção ocorreu em pH 1,5, pois neste pH o monômero funcional se encontra protonado (ácido metacrílico pKa 4,46), o que favorece a sorção através de ligações de hidrogênio e/ou interações dipolo-dipolo momentâneo e permanente entre os grupos funcionais presentes no AF e no MAA. Assim sendo, o pH 1,5 foi adotado como o valor ótimo para sorção.
[019] Os estudos relativos à influência do tempo de contato do ácido fólico com os sorventes MIP-RAM, NIP-RAM e MIP sobre o perfil sortivo foram realizados em batelada. Cerca de 50 mg do polímero foram agitados mecanicamente com 40 mL de solução de ácido fólico 10 mg L-1 em meio de KCI/HCI 0,01 mol L-1 pH 1,5. Neste estudo os tempos de agitação estudados foram: 1, 2, 3, 5, 10, 15, 20, 40, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330, 360, 420, 450, 480, 600 e 720 minutos. Posteriormente, realizou-se a centrifugação, filtração do sobrenadante em filtro de Nylon® 0,45 pm e análise pó UV-Vis no comprimento de onda de 281 nm. A fim de investigar os mecanismos relativos à sorção do ácido fólico no MIP-RAM foram aplicados aos dados obtidos os seguintes modelos de cinética de sorção: pseudo-primeira ordem, pseudo-segunda ordem, Elovich e difusão intrapartícula.
[020] No estudo de cinética de sorção verificou-se que os tempos necessários para atingir o equilíbrio do ácido fólico entre a fase sólida e a fase líquida foram de 390 minutos, 180 minutos e 120 minutos, respectivamente para MIP-RAM, NIP-RAM e MIP (Figura 4). Estes resultados podem ser atribuídos às diferenças morfológicas existentes entre estes materiais. O MIP-RAM apresenta características morfológicas que dificultam uma rápida transferência de massa da solução para o sítio sortivo como menor área superficial e menor volume de poros (Yu, Q.; Deng, S.; Yu, G.; Water Research, 2008, 42, 3089). Apesar da sorção do ácido fólico no MIP-RAM necessitar de um tempo de equilíbrio maior, a quantidade sorvida do sorvato pelo sorvente foi maior (5,6 mg g-1 ), quando comparado com o polímero sem impressão química (NIPRAM) com sorção de 4,5 mg g-1 . Neste caso, a maior sorção de AF pelo MIPPetição 870170001833, de 10/01/2017, pág. 36/45
9/16
RAM está relacionada com a maior afinidade do analito pela cavidade seletiva. O MIP, por sua vez, apresenta cavidades com afinidade pelo AF (cavidades seletivas), bem como apresenta características texturais similares ao NIP-RAM. Estes dois fatores aliados favorecem a obtenção de um tempo de equilíbrio menor, comparado aos outros polímeros, além de uma sorção intermediária de 4,8 mg g-1 . Ainda, outro aspecto que pode ser considerado para justificar o menor tempo de equilíbrio para o MIP, resulta da ausência de GTMS (com anel aberto e grupos dióis) em sua matriz polimérica, o qual pode atuar como uma barreira química no transporte de massa do AF.
[021] Aos dados cinéticos foram aplicados os seguintes modelos: pseudoprimeira ordem, pseudo-segunda ordem, Elovich e difusão intrapartícula, cujos resultados obtidos na aplicação destes modelos estão mostrados na Tabela 2. De acordo com as regressões obtidas e as constantes calculadas pelos ajustes dos modelos verificou-se que os modelos que se ajustaram melhor aos dados experimentais foram o de pseudo-segunda ordem, Elovich e difusão intrapartícula.
Tabela 2- Constantes calculadas para os modelos aplicados no estudo de cinética de sorção. MIP RAM Qe experimental= 5,6 mg g'1; NIP-RAM Qe experimental= 4,5 mg g'1; MIP Q experimental= 4,8 mg g'1
Pseudo primeira- ordem Pseudo segunda- ordem Elovich Difusão intrapartícula
t 1 1 Qt = ^ΐιι(αβ)+ jjliit kid t0-5 + C
Sorvente ki Qe R k2 Qe R β α r Kid C r
MIP- RAM 0,01 3,85 0,99 0,01 5,05 0,99 1,53 1,77 0,97 0,41 0,19 0,82 1,58 0,97 0,99
NIP- RAM 0,01 2,68 0,95 0,03 4,13 0,99 1,88 5,64 0,98 0,70 0,20 0,61 1,74 0,99 0,98
MIP 0,02 1,79 0,95 0,09 4,60 0,99 2,10 84,86 0,97 1,49 0,15 0,69 3,10 0,98 0,98
Ki=é a constante de pseudo-primeira ordem do processo de sorção (min-i); K2= é a constante de pseudo-segunda ordem do processo de sorção (g mg·1 min'1); β está relacionado com a extensão
Petição 870170001833, de 10/01/2017, pág. 37/45
10/16 de cobertura da superfície e com a energia de ativação para quimissorção (g mg·1); α é a taxa de velocidade inicial de sorção (min-1 mg g-1); K é o coeficiente de difusão interno (mg g-1 min·1'2); C é uma constante relacionada com a espessura da camada limite (mg g-1).
[022] O modelo de pseudo-segunda ordem apresentou satisfatório coeficiente de correlação linear e a sorção predita pelo modelo foi próxima aquela observada nos dados experimentais, o que não foi observado para o modelo de pseudo-primeira ordem (Olibeira, F. M.; Somera, B. F.; Ribeiro, E. S.; Segatelli, M. G.; Yabe, M. J. S.; Galunin, E.; Tarley, C. R. T.; Industrial Engineering Chemistry Research, 2013, 52, 8550), (Lopez, M. M. C.; Perez, M. C. C.; Garcia, M. S. D.; Vilarino, L. J. M.; Rodriguez, M. V. G.; Losada, L. F. B.; Analytica Chimica Acta, 2012, 721, 68). O ajuste dos modelos aos dados experimentais indica que o MIP-RAM, NIP-RAM e o MIP apresentam sítios com energias de ligação diferentes na superfície do material, corroborando com o modelo de Elovich (Zhou, C.; Wu, Q.; Lei, T.; Negulescu, I. I.; Chemical engineering Journal, 2014, 251, 17).
[023] O modelo de difusão intrapartícula apresentou três inclinações. A primeira inclinação refere-se à difusão do analito da solução para a superfície externa do material. A segunda inclinação é definida como a etapa determinante da reação, a qual é relacionada com a sorção gradual no interior do material, conhecida como difusão intrapartícula. Os pontos restantes representam que o equilíbrio de sorção foi atingido. Conforme observado na Tabela 2 os valores da constante C para os três materiais, relativos à primeira inclinação são diferentes de zero indicando que o processo de difusão intrapartícula não é o único responsável pelo processo de sorção. Como a constante C representa a espessura da camada limite pode-se inferir que a sorção do ácido fólico nos materiais também ocorre na superfície externa do material (Cheung, W. H.; Szeto, Y. S.; Mckay, G.; Bioresource Technology, 2007, 98, 2897), (Carvalho, T. E. M.; Fungaro, D. A.; Izidoro, J. C.; Química Nova, 2010, 33, 358), (Xue, Y.; Hou, H.; Zhu, S.; Chemical Engineering Journal, 2009, 147, 272).
[024] Para o estudo de seletividade foram pesados 50 mg do MIP-RAM os quais foram agitados por 390 minutos com 40 mL de uma solução binária de ácido fólico e concomitante, ambos na concentração de 10 mg L-1 . Os
Petição 870170001833, de 10/01/2017, pág. 38/45
11/16 concomitantes estudados foram: cafeína (CAF), ácido úrico (AU), paracetamol (PAR) e a 4-aminobenzamida (AB), as quais possuem estruturas semelhantes aos fragmentos da molécula de ácido fólico. Após a agitação as soluções foram centrifugadas, filtradas em membrana de Nylon® 0,45 pm e analisadas em um espectrofotômetro UV-Vis. Os comprimentos de onda utilizados foram: 272 (CAF), 283 (AU), 243 (PAR), 221 (AB) e 281 (AF) nm, com posterior deconvolução dos espectros obtidos. Os coeficientes de distribuição (Kd), de seletividade (k) e de seletividade relativo (k’) foram calculados de acordo com as equações 1, 2, 3 e 4 (Oliveira, F. M.; Somera, B. F.; Ribeiro, E. S.; Segatelli, M. G.; Yabe, M. J. S.; Galunin, E.; Tarley, C. R. T.; Industrial Englneering Chemistry Research, 2013, 52, 8550).
[025] Equação 1 „ (Cj - Cf) V (mL) = -7-x
M assa (g) [026] Equação 2
K, d analito 'impresso
K.
d competitivo [027] Equação 3
K, d anaLito ^¥13.0 impresso
K, d competitivo [028] Equação 4 k! 'impresso impresso
Ύ13.Ο impresso [029] Em que Ci é a concentração inicial do AF e dos concomitantes (mg L·1) da solução e Cf (mg L·1) a concentração do AF e dos concomitantes no sobrenadante.
[030] Para comprovar se o MIP-RAM apresenta sítios sortivos com maior afinidade à molécula molde (ácido fólico), foi realizada a sorção competitiva de uma solução binária de AF:concomitante (cafeína, ácido úrico, paracetamol e 4-aminobenzamida) na presença do MIP-RAM ou NIP-RAM. As estruturas químicas dos concomitantes são apresentadas na Figura 5. As moléculas
Petição 870170001833, de 10/01/2017, pág. 39/45
12/16 concomitantes foram escolhidas por possuírem estruturas semelhantes aos fragmentos da molécula de ácido fólico. A Tabela 3 apresenta os coeficientes de distribuição (Kd), coeficiente de seletividade (k) e coeficiente de seletividade relativo (k'). De acordo com os valores dos coeficientes de seletividade relativo superiores a 1 pode-se inferir que a sorção do ácido fólico no MIP-RAM mesmo na presença de concomitantes acontece em sítios seletivos em detrimento ao NIP-RAM (Oliveira, F. M.; Somera, B. F.; Ribeiro, E. S.; Segatelli, M. G.; Yabe, M. J. S.; Galunin, E.; Tarley, C. R. T.; Industrial Engineering Chemistry Research, 2013, 52, 8550).
Tabela 3 - Coeficientes calculados para MIP-RAM e NIP-RAM
Polímero Molécula Kd K K
Ácido fólico 979,8
MIP-RAM Cafeína 55,5 17,64
1,82
Ácido fólico 890,6
NIP-RAM Cafeína 91,7 9,71
Ácido fólico 4033,4 0,39
MIP-RAM Ácido úrico 10265,3
Ácido fólico 3136,2 0,30 1,33
NIP-RAM Ácido úrico 10611,5
Ácido fólico 1247,2 4,50
MIP-RAM Paracetamol 277,2 1,53
Ácido fólico 920,4
NIP-RAM Paracetamol 313,9 2,93
MIP-RAM Ácido fólico 1173,3 33,35 4,37
Petição 870170001833, de 10/01/2017, pág. 40/45
13/16
4-aminobenzamida 35,2
NIP-RAM Ácido fólico 4-aminobenzamida 867,1 113,5 7,64
[031] Analisando a constante de distribuição para AF:cafeína nota-se que o MIP-RAM sorve mais AF e menos cafeína quando comparado com o NIP-RAM. O mesmo perfil sortivo é observado para o paracetamol e para 4aminobenzamida. Para o ácido úrico o MIP-RAM sorveu mais o concomitante do que o analito, entretanto pode-se observar que o NIP-RAM adsorve ainda mais ácido úrico e menos AF quando comparado com o MIP-RAM. A partir desses dados de sorção verifica-se que o MIP-RAM apresenta maior afinidade para o AF em relação aos concomitantes. Estes resultados aliados ao coeficiente de seletividade relativo comprovam a formação de sítios seletivos para o analito, pois mesmo os concomitantes apresentando estruturas semelhantes e menores que a estrutura do AF houve a sorção preferencialmente da molécula molde.
[032] O estudo de sorção de proteínas no material foi realizado pela percolação de 2 mL de uma solução de albumina sérica bovina (BSA) 1,2 g L1 em pH 1,5 com vazão de 0,5 mL min-1, por um cartucho contendo 100 mg do MIP-RAM e outro cartucho com 100 mg do MIP (Moraes, G. O. I.; Dissertação de Mestrado. Universidade Federal de Alfenas, Brasil, 2012). Posteriormente, realizou-se a análise do efluente do cartucho por UV-Vis no comprimento de onda de 277 nm (Puoci, F.; Iemma, F.; Cirillo, G.; Curcio, M.; Parisi, O. I.; Spizzirri, U. G.; Picci, N.; European Polymer Journal, 2009, 45, 1634). A porcentagem de exclusão foi calculada pela razão entre a absorbância do efluente do cartucho e a absorbância da solução inicial, o resultado obtido foi multiplicado por 100%. Após a percolação de BSA pelos cartuchos, foi empregada uma solução de NaCl 1,0 mol L-1 para remoção da BSA remanescente no cartucho.
[033] O estudo de sorção de proteínas realizado com o MIP-RAM e MIP demonstraram que a porcentagem de exclusão de proteínas é de 55±2 e 35±2, respectivamente. Este resultado corrobora com o princípio dos RAM, na qual a
Petição 870170001833, de 10/01/2017, pág. 41/45
14/16 síntese de polímeros com características mais hidrofílicas tornam o material menos susceptível a sorver proteínas (Puoci, F.; lemma, F.; Cirillo, G.; Curcio, M.; Parisi, O. I.; Spizzirri, U. G.; Picci, N.; European Polymer Journal, 2009, 45, 1634).
[034] A fim de verificar se o polímero impresso com acesso restrito poderia ser utilizado como sorvente em extração em fase sólida molecularmente impressa (MISPE) em matriz alimentícia, 100 mg do MIP-RAM foram utilizados para rechear um cartucho de SPE cobertos com discos de polietileno poroso na parte superior e inferior. Para a extração do ácido fólico presente nas amostras de leite em pó as amostras foram submetidas à saponificação e precipitação de proteínas. O preparo das amostras consistiu na solubilização de 2,50 g de leite em pó em 5 mL de água ultra-pura, posteriormente os ácidos graxos presentes na amostra foram saponificados com 7,50 mL de uma solução de KOH 0,1 mol L-1 e sonicados por 10 minutos com posterior adição de ácido tricloroacético 10% (m/v) até pH 1,5. A mistura obtida foi transferida para um balão volumétrico de 25 mL e aferida com água ultra-pura, a qual foi centrifugada por 10 minutos a 1600 rpm. Os extratos de leite obtidos (sobrenadantes) foram armazenados para posterior percolação pelo cartucho de SPE. O método MISPE consistiu no condicionamento do cartucho com 10 mL de água ultrapura, posteriormente 10 mL de extrato de leite foram percolados. Em seguida, o ácido fólico foi eludido do cartucho com 1 mL de uma solução de acetonitrila:tampão acetato 0,266 mol L-1 pH 5,7 (15:85, v/v). O eluato obtido foi filtrado em filtro de Nylon® 0,45 pm e injetado no sistema cromatográfico.
[035] A fim de avaliar se o MIP-RAM promove uma limpeza da amostra os cromatogramas do elutato obtido pela passagem do extrato de leite pelo cartucho foram comparados com o extrato sem submissão ao método MISPE (Fig. 6) pode-se observar uma limpeza satisfatória ao comparar o cromatograma do extrato injetado diretamente no sistema cromatográfico com o cromatograma da eluição do cartucho MISPE.
[036] O método MISPE foi utilizado para quantificar ácido fólico em amostras de leite em pó enriquecidas com ácido fólico, que foram adquiridas em um supermercado local. Além de comparar o valor rotulado com o valor encontrato,
Petição 870170001833, de 10/01/2017, pág. 42/45
15/16 realizou-se também o enriquecimento das amostras com AF, de modo que a concentração de AF fosse o dobro do valor rotulado (Tabela 4).
[037] De acordo com a Tabela 4 verifica-se que a concentração encontrada é próxima ao valor rotulado, além da obtenção de satisfatórias porcentagens de recuperação.
Tabela 4 - Aplicação do método MISPE em amostras de leite
Amostra Valor rotulado (Mg) Concentração adicionada (Mg) Concentração encontrada (Mg) Recuperação (%)
A 120* 0 119,1 ± 1,1* -
120 244,1 ± 1,1* 104,2
B 37** 0 35,5 ± 2,1** -
37 70,7 ± 1,3** 95,0
C 110*** 0 110,1 ± 1,2*** -
110 229,3 ± 1,3*** 108,4
D 130*** 0 123,3 ± 3,0*** -
130 259,6 ± 6,6*** 104,8
• pg de AF em 25 g de amostra; ** pg de AF em 28,5 g de amostra; *** pg de AF em 100 g de amostra.
[038] Conforme apresentado, o polímero sintetizado MIP-RAM se mostrou um material eficiente na exclusão de macromoléculas, no clean-up de amostra e para a quantificação de ácido fólico em amostras de leite em pó enriquecidas. O MIP-RAM é também um material seletivo para o ácido fólico mesmo na presença de substancias semelhantes aos fragmentos da molécula de ácido fólico. Além disso, o material possui alta reusabilidade, uma vez que o mesmo cartucho foi utilizado durante todos os estudos realizados sem sofrer redução
Petição 870170001833, de 10/01/2017, pág. 43/45
16/16 na capacidade sortiva e na limpeza da amostra. Deste modo, pode-se afirmar que os polímeros híbridos molecularmente impressos e com acesso restrito apresentam elevado potencial como fases extratoras visando limpeza de amostra e quantificação de compostos orgânicos em matrizes alimentícias.
Legenda das Figuras
Figura 1: Micrografias eletrônicas de varredura do MIP-RAM (A) e (B); e NIPRAM (C) e (D).
Figura 2: As micrografias eletrônicas de transmissão para MIP-RAM (A), NIPRAM (B) e MIP (C).
Figura 3: O perfil de sorção do ácio fólico no MIP-RAM em ampla faixa de pH.
Figura 4: Os estudos relativos à influência do tempo de contato do ácido fólico com os sorventes MIP-RAM, NIP-RAM e MIP sobre o perfil sortivo.
Figura 5: Estrutura química (A) cafeína (B) ácido úrico (C) paracetamol e (D) 4aminobenzamida.
Figura 6: Cromatogramas do extrato de leite injetado diretamente no sistema cromatográfico e do elutato obtido pela passagem do extrato pelo método MISPE proposto.
Petição 870170001833, de 10/01/2017, pág. 44/45
1/2

Claims (2)

REIVINDICAÇÕES
1/4
DESENHO
Petição 870170001833, de 10/01/2017, pág. 23/45
1. PROCESSO DE SÍNTESE DE UM POLÍMERO HÍBRIDO COM ACESSO RESTRITO COMBINADO COM IMPRESSÃO MOLECULAR E SUA APLICAÇÃO COMO SORVENTE DE ÁCIDO FÓLICO EM MATRIZ ALIMENTÍCIA, caracterizado por a síntese do polímero híbrido orgânicoinorgânico destaca-se pelo uso do ácido fólico na presença do ácido metacrílico com posterior modificação de superfície com o 3-glicidoxipropil trimetoxisilano; Para a síntese do polímero 2 mmol de ácido fólico (0,8828g) foram solubilizados em 100 mL de HCI 3 mol L-1 e agitados por 30 minutos; Em seguida, foram adicionados a mistura 310 mL de acetonitrila e 12 mmol de MAA (1,03 g) e submetida à agitação por mais de 30 minutos; Posteriormente, adicionou-se 24 mmol de TRIM (7,112 g), 2,94 mmol de VTMS (0,436 g) e 600 mg de AIBN; Após, gás nitrogênio foi borbulhado na solução por 5 minutos e em seguida o frasco foi fechado; A mistura foi polimerizada a 60 °C por 24 horas em banho de óleo; O polímero obtido foi filtrado sob vácuo e seco em estufa por 24 horas a 60 °C; Na etapa seguinte, 10,054 g do polímero orgânico obtido foram ressuspensos em 300 mL de etanol com agitação mecânica e, na sequencia, foram adicionados 52 mmol de TEOS (10,83 g), 48 mmol de GTMS (11,34 g) e 26 mL de NaOH 1 mol L-1 ; A mistura foi polimerizada por 24 horas a temperatura ambiente sob agitação; Após este tempo o material obtido foi filtrado sob vácuo e seco em estufa por 48 horas a 60 °C (Jin, Y.; Jiang, M.; Shi, Y.; Lin, Y.; Peng, Y.; Daí, K.; Lu, B.; Analytica Chimica Acta, 2008, 612, 105), (Yeh, J.-M.; Weng, C.-J.; Liao, W.-J.; Mau, Y.-W.; Surface and Coatings Technolofy, 2006, 201, 1788); Para a abertura do anel epóxi 10,000 g do material obtido foram misturados com 500 mL de HCI 0,18 mol L-1 , a qual permaneceu sob agitação à 60°C em banho de óleo por 36 horas, sendo posteriormente filtrado sob vácuo e seco em estufa a 60°C (Du, B.; Qu, T.; Chen, Z.; Cao, X.; han, S.; Shen, G.; Wang, L.; Talanta, 2014, 129, 465); A extração da molécula molde foi realizada com metanol: ácido acético (9:1, v/v) utilizando o sistema Soxhlet, este material foi denominado MIP-RAM; A mesma metodologia de síntese empregada para o MIP-RAM foi utilizada para o MIP,
Petição 870170008701, de 09/02/2017, pág. 2/3
2/2 exceto pelo uso do GTMS; O material NIP-RAM também foi preparado e, neste caso, não foi utilizado na síntese o ácido fólico
2. PROCESSO DE SÍNTESE DE UM POLÍMERO HÍBRIDO COM ACESSO RESTRITO COMBINADO COM IMPRESSÃO MOLECULAR E SUA APLICAÇÃO COMO SORVENTE DE ÁCIDO FÓLICO EM MATRIZ ALIMENTÍCIA, caracterizado por, a fim de verificar se o polímero impresso com acesso restrito poderia ser utilizado como sorvente em extração em fase sólida molecularmente impressa (MISPE) em matriz alimentícia, 100 mg do MIP-RAM foram utilizados para rechear um cartucho de SPE cobertos com discos de polietileno poroso na parte superior e inferior; Para a extração do ácido fólico presente nas amostras de leite em pó as amostras foram submetidas à saponificação e precipitação de proteínas; O preparo das amostras consistiu na solubilização de 2,50 g de leite em pó em 5 mL de água ultra-pura, posteriormente os ácidos graxos presentes na amostra foram saponificados com 7,50 mL de uma solução de KOH 0,1 mol L-1 e sonicados por 10 minutos com posterior adição de ácido tricloroacético 10% (m/v) até pH 1,5; A mistura obtida foi transferida para um balão volumétrico de 25 mL e aferida com água ultra-pura, a qual foi centrifugada por 10 minutos a 1600 rpm; Os extratos de leite obtidos (sobrenadantes) foram armazenados para posterior percolação pelo cartucho de SPE; O método MISPE consistiu no condicionamento do cartucho com 10 mL de água ultra-pura, posteriormente 10 mL de extrato de leite foram percolados; Em seguida, o ácido fólico foi eludido do cartucho com 1 mL de uma solução de acetonitrila:tampão acetato 0,266 mol L-1 pH 5,7 (15:85, v/v); O eluato obtido foi filtrado em filtro de Nylon® 0,45 pm e injetado no sistema cromatográfico
Petição 870170008701, de 09/02/2017, pág. 3/3
2/4
BR102017000525-9A 2017-01-10 2017-01-10 Processo de síntese de um polímero híbrido com acesso restrito combinado com impressão molecular e sua aplicação como sorvente de ácido fólico em matriz alimentícia BR102017000525A2 (pt)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
BR102017000525-9A BR102017000525A2 (pt) 2017-01-10 2017-01-10 Processo de síntese de um polímero híbrido com acesso restrito combinado com impressão molecular e sua aplicação como sorvente de ácido fólico em matriz alimentícia

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
BR102017000525-9A BR102017000525A2 (pt) 2017-01-10 2017-01-10 Processo de síntese de um polímero híbrido com acesso restrito combinado com impressão molecular e sua aplicação como sorvente de ácido fólico em matriz alimentícia

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BR102017000525A2 true BR102017000525A2 (pt) 2018-07-31

Family

ID=63164968

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR102017000525-9A BR102017000525A2 (pt) 2017-01-10 2017-01-10 Processo de síntese de um polímero híbrido com acesso restrito combinado com impressão molecular e sua aplicação como sorvente de ácido fólico em matriz alimentícia

Country Status (1)

Country Link
BR (1) BR102017000525A2 (pt)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Gama et al. Monoliths: Synthetic routes, functionalization and innovative analytical applications
Liang et al. Molecularly imprinted phloroglucinol–formaldehyde–melamine resin prepared in a deep eutectic solvent for selective recognition of clorprenaline and bambuterol in urine
Ansell Molecularly imprinted polymers for the enantioseparation of chiral drugs
Huang et al. Molecularly imprinted monolithic stationary phases for liquid chromatographic separation of enantiomers and diastereomers
Liu et al. Monolithic molecularly imprinted polymer for sulfamethoxazole and molecular recognition properties in aqueous mobile phase
Baydemir et al. Supermacroporous poly (hydroxyethyl methacrylate) based cryogel with embedded bilirubin imprinted particles
Sun et al. Characteristic of theophylline imprinted monolithic column and its application for determination of xanthine derivatives caffeine and theophylline in green tea
Wei et al. Imprinted monoliths: Recent significant progress in analysis field
JP2002529714A (ja) クロマトグラフィー分離法および選択吸着体
Li et al. Application of deep eutectic solvents in hybrid molecularly imprinted polymers and mesoporous siliceous material for solid-phase extraction of levofloxacin from green bean extract
Li et al. Preparation of two-dimensional magnetic molecularly imprinted polymers based on boron nitride and a deep eutectic solvent for the selective recognition of flavonoids
EP1807197A1 (en) Composite filtration article
Li et al. Preparation and evaluation of hydrophilic C18 monolithic sorbents for enhanced polar compound retention in liquid chromatography and solid phase extraction
Zhu et al. Using ionic liquid monomer to improve the selective recognition performance of surface imprinted polymer for sulfamonomethoxine in strong polar medium
Dmitrienko et al. Use of molecular imprinted polymers for the separation and preconcentration of organic compounds
JP2007522474A (ja) イオン交換粒子が結合したフロースルー多孔質モノリス
Chrzanowska et al. Characterization of particle morphology of biochanin A molecularly imprinted polymers and their properties as a potential sorbent for solid-phase extraction
Sun et al. A restricted access molecularly imprinted polymer coating on metal–organic frameworks for solid-phase extraction of ofloxacin and enrofloxacin from bovine serum
Azodi‐Deilami et al. Magnetic molecularly imprinted polymer nanoparticles coupled with high performance liquid chromatography for solid‐phase extraction of carvedilol in serum samples
Zhu et al. Molecularly imprinted polymer membranes for substance‐selective solid‐phase extraction from aqueous solutions
Çorman et al. Rapid, efficient and selective preconcentration of benzo [a] pyrene (BaP) by molecularly imprinted composite cartridge and HPLC
de Oliveira et al. Synthesis and application of restricted access material-ion imprinted poly (allylthiourea) for selective separation of Cd2+ and humic acid exclusion
CN109632985B (zh) 一种基于金属有机框架纳米材料的萃取技术检测双酚类化合物及其衍生物的方法
Huang et al. Preparation of a reversed-phase/anion-exchange mixed-mode spherical sorbent by Pickering emulsion polymerization for highly selective solid-phase extraction of acidic pharmaceuticals from wastewater
Du et al. Fabrication and characterization of aligned macroporous monolith for high-performance protein chromatography

Legal Events

Date Code Title Description
B03A Publication of a patent application or of a certificate of addition of invention [chapter 3.1 patent gazette]
B07A Application suspended after technical examination (opinion) [chapter 7.1 patent gazette]
B09B Patent application refused [chapter 9.2 patent gazette]