BR102016029685A2 - compostos heteroaromáticos como inibidores de btk - Google Patents

Abstract

compostos heteroaromáticos como inibidores de btk . a presente invenção abrange compostos de fórmula (i) o h2n cy hn n.n r' y (ii. em que os grupos ri, cy e y são aqui definidos, que são adequados para o tratamento de doenças relacionadas com btk, e processos para preparar estes compostos, preparações farmacêuticas contendo estes compostos e os seus métodos de uso.

Description

COMPOSTOS HETEROAROMÁTICOS COMO INIBIDORES DE BTK

CAMPO TÉCNICO

[001] A presente invenção refere-se a novos compostos que inibem BTK e a sua utilização como medicamentos. FUNDAMENTOS DA INFORMAÇÃO

[002] Os membros da família de proteína quinase de enzimas humanas desempenham importantes papéis reguladores em uma multiplicidade de processos de transdução de sinal distintos devido à sua modificação pós-traducional de proteínas específicas através da adição de um grupo fosfato (Hunter, Cell 1987, 50, 823-829). A tirosina quinase de Bruton (BTK) é um membro da família Tec de tirosina quinases e desempenha um papel crítico no desenvolvimento de células B, ativação e produção de anticorpos.

[003] A contribuição da BTK para a biologia de células B é exemplificada na imunodeficiência da agamaglobulinemia ligada ao X (XLA) em seres humanos (revista em Lindvall, Immunol. Rev. 2005, 203, 200-215) que exibe a sinalização de cálcio atenuada sobre o envolvimento do receptor de células B (BCR), falta células B maduras na periferia devido ao bloqueio entre os estágios de células pró e pré-B e têm níveis mais baixos de anticorpos circulantes do que os indivíduos normais saudáveis. O resultado de ensaios clínicos recentes com moléculas anti-CD20 que esvaziam células B em doenças tais como a artrite reumatoide (RA) e a esclerose múltipla (MS) suporta a hipótese de que as células B oferecem um nó de intervenção importante para o controle de doenças autoimunes (Townsend, Immunol. Rev., 2010, 237, 264-283). Como tal, a atenuação da ativação e proliferação das células B através da mroiçao aa rsits. poae orerecer um Denencio terapêutico semelhante e é consistente com a resistência demonstrada de ratinhos deficientes em BTK à artrite induzida por colágeno (Jansson, Clín. Exp. Immunol. 465) e encefalite autoimune experimental (Svensson, Eur. J. Immunol. 2002, 32, 19391946 e Mangla, Blood 2004, 104, 1191-1197) . De um modo semelhante, a eficácia clinica observada com um anticorpo neutralizante contra o fator de estimulação das células B BlyS suporta um papel para as células B na fisiopatologia do lúpus eritematoso sistêmico (SLE) (La Cava, Expert Opin. Biol. Ther. 2010, 10, 1555- 1561). Dada a necessidade da BTK para a produção de auto-anticorpos, incluindo anticorpos anti-DNA, em modelos murinos de SLE (Steinberg, <J. Clín. Invest. 1982, 70, 587-597; Golding, J. Immunol. 1983, 130, 1043 Scribner, J. Immunol., 1987, 138, 36113617, Seldin, J. Exp. Med. 1987, 166, 1585-1590, Takeshita, Int. Immunol. 1998, 10, 435-4444; Whyburn, J Immunol., 2003, 171, 1850-1858), os inibidores da BTK podem oferecer benefícios terapêuticos aos pacientes com SLE.

[004] Dentro das células mieloides, a transdução de sinal da BTK é necessária para a liberação estimulada de citocinas inflamatórias tais como TNFa a partir de monócitos estimulados (Horwood, J. Exp. Med. 2003, 197, 1603-1611) e para a organização ótima do citoesqueleto da actina e reabsorção óssea lacunar em osteoclastos isolados (Danks, J. Bone Miner., Res. 2010, 26, 182-192) . Os mastócitos derivados da medula óssea sem BTK apresentam degranulação induzida pela ativação comprometida e liberação de citocinas. Dado o papel da BTK nos processos de transdução de sinal em vários tipos de células impncaaas na patogenese ae aoenças autoimunes e aiergicas, a inibição da atividade da BTK pode proporcionar benefícios clínicos em doenças tais como RA, MS, SLE, nefrite lúpica, doença de Sjogren, vasculite, asma e distúrbios alérgicos. SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[005] Atualmente, os compostos tais como A e C (discutidos abaixo), e aqueles descritos, por exemplo, na publicação PCT número W02014025976 são conhecidos como inibidores da BTK. No entanto, como aqui proporcionado abaixo, estes compostos reagem cruzadamente e inibem outras quinases. Assim, esses representantes não são seletivos para BTK sobre outros alvos. A falta de inibição seletiva da BTK aumenta a probabilidade de efeitos adversos em um ambiente clínico.

[006] Além da eficácia e seletividade, um composto terapêutico deve ter um perfil de segurança favorável, como a segurança cardiovascular. Um parâmetro para avaliar a segurança cardiovascular (CV) de um composto é a pressão arterial média (MAP). Uma alteração estatisticamente significativa na MAP em um estudo de segurança CV de rato é indicativo de eventos cardiovasculares adversos em humanos. Conforme aqui proporcionado abaixo, os compostos comparativos A, B e C mostram aumentos estatisticamente significativos na MAP em um estudo de CV de rato. Os dados sugerem que estes compostos podem não ter um perfil de segurança cardiovascular favorável em seres humanos.

[007] Tendo em vista as preocupações de segurança acima mencionadas com os outros inibidores da BTK conhecidos, permanece ainda a necessidade de compostos adicionais que sejam altamente seletivos para a inibição da BTK e não tenham um impacto adverso em parâmetros cardiovasculares relevantes tais como MAP.

[008] Os compostos da presente invenção mantêm a atividade inibitória potente necessária contra a BTK para tratar as doenças relacionadas com a BTK acima mencionadas, e resolvem a seletividade e problemas de segurança cardiovascular associados a outros inibidores da BTK conhecidos tais como os representados pelos compostos comparativos A, B e C (discutido abaixo). A seletividade da BTK e o perfil de segurança cardiovascular favorável que são demonstrados pelos compostos da presente invenção representam melhoramentos inesperados e surpreendentes em relação a outros inibidores da BTK conhecidos.

[009] Em particular, os compostos da presente invenção resolvem os problemas de eficácia e segurança associados a outros inibidores da BTK conhecidos, mantendo um elevado nível de potência e seletividade na inibição da atividade da BTK sem ter quaisquer efeitos estatisticamente significativos na MAP.

[010] Em conformidade, esta invenção compreende uma nova classe de compostos heteroaromáticos e métodos para a sua preparação e utilização. Estes compostos são úteis para o tratamento de doenças autoimunes e alérgicas pelo fato de apresentarem um excelente efeito inibitório sobre a BTK.

[011] Em uma primeira forma de realização genérica, é proporcionado um composto de fórmula (I) em que: Cy é escolhido de cada Ri é independentemente escolhido de hidrogênio ou metila; R2 é L-Ar, em que Ar é fenila ou piridinila e cada um é opcionalmente substituído por um ou mais de halogênio, halo alquila C1-4, alquila C1-4, alcoxi C1-4, -CN, halo alcoxi C1-4, ou cicloalquila; L é -(CH2)- ou -(CHCH3)-; Y é um espirociclo Cg-Cg contendo 1 átomo de nitrogênio no anel, e é substituído por um R3; R3 é escolhido de cada R4 é independentemente escolhido de entre hidrogênio, alquila C1-4 ou cicloalquila C3-4; cada grupo definido acima para R1-R4 θ Y pode ser, quando possível, parcial ou totalmente halogenado; ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[012] Em uma forma de realização adicional, é proporcionado um composto de fórmula (I) de acordo com a forma de realização aqui acima e em que: Y é escolhido de ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo, [013] Em uma forma de realização adicional, é proporcionado um composto de fórmula (I) de acordo com a forma de realização aqui acima e em que: Cy é Y é escolhido de em que cada R4 é independentemente escolhido de entre hidrogênio, alquila C1-4 ou cicloalquila C3-4; ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[014] Em uma outra forma de realização, é proporcionado um composto de fórmula (I) de acordo com a forma de realização aqui acima e em que: Y é escolhido de em que R4 é escolhido de hidrogênio, alquila Ci-4 ou cicloalquila C3-4; ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[015] Em uma forma de realização adicional, é proporcionado um composto de fórmula (I) de acordo com a forma de realização aqui acima e em que: Cy é Y é escolhido de em que R4 é escolhido de hidrogênio, alquila Ci_4 ou cicloalquila C3-4; ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[016] Em uma forma de realização adicional, é proporcionado um composto de fórmula (I) de acordo com a forma de realização aqui acima e em que: Cy é Y é escolhido de R3 é em que cada R4 é independentemente escolhido de entre hidrogênio, alquila Ci_4 ou cicloalquila C3-4; ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[017] Em uma forma de realização adicional, é proporcionado um composto de fórmula (I) de acordo com a forma de realização aqui acima e em que: Cy é Y é escolhido de R3 é . em que cada R4 é independentemente escolhido de entre hidrogênio, alquila C1-4 ou cicloalquila C3-4; ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do ΓΠΘ smo.

[018] Em uma forma de realização adicional, é proporcionado um composto de fórmula (I) de acordo com a forma de realização aqui acima e em que: cada R4 é independentemente escolhido de entre hidrogênio, metila, ou ciclopropila.: ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[019] Em uma forma de realização adicional, é proporcionado um composto de fórmula (I) de acordo com a forma de realização aqui acima e em que: R2 é L-Ar, em que Ar é fenila ou piridinila e cada um é opcionalmente substituído por um ou mais de halogênio, halo metila, metila, metoxi, -CN, halo metoxi, ou cicloalquila; L é -(CH2)- ou -(CHCH3)-; ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[020] Em uma outra forma de realização, a invenção proporciona fabricar compostos na Tabela 1 que podem ser fabricados em vista dos esquemas gerais, exemplos e métodos descritos aqui e aqueles conhecidos na técnica.

Tabela 1. Propriedades físicas e biológicas de representativos da presente invenção [021] Em uma segunda forma de realização genérica, é proporcionada uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a primeira forma de realização ou qualquer das suas formas de realização relacionadas ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

[022] Em uma terceira forma de realização genérica, é proporcionado um método de tratamento de uma doença escolhida de artrite reumatoide, lúpus eritromatoso sistêmico, nefrite lúpica, doença de Sjogren, vasculite, esclerodermia, asma, rinite alérgica, eczema alérgico, linfoma de células B, esclerose múltipla, artrite reumatoide juvenil, artrite idiopática juvenil, doença inflamatória do intestino, doença do enxerto contra hospedeiro, artrite psoriática, espondilite anquilosante e uveite, compreendendo administrar a um doente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a primeira forma de realização ou qualquer uma das suas formas de realização relacionadas ou um de um seu sal farmaceuticamente aceitável.

[023] Em uma quarta forma de realização genérica, é proporcionado um processo para a preparação de um composto de acordo com a primeira forma de realização ou qualquer uma das suas formas de realização relacionadas por: (i) acoplar um composto de fórmula A

com um composto de fórmula E

para formar um composto de fórmula G em que cada Rj é independentemente escolhido de hidrogênio ou metila; X é um halogênio (isto é, cloro, bromo ou iodo); LG é um grupo de saída; e Y' é espirociclo C6-C8 contendo 1 átomo de nitrogênio no anel capeado por um grupo protetor;

(ii) acoplar o composto de fórmula (I —1) com um ácido ou éster borônico heterocíclico de fórmula C na presença de uma base e catalisador de paládio seguido da hidrólise da nitrila para carboxamida para formar um composto de fórmula (II—1) em que cada grupo R do composto de fórmula C é H, alquila, ou ambos grupos R são ligados para formar um anel;

Cy no composto de fórmula (II-l) é escolhido de R2 é L-Ar, em que Ar é fenila ou piridinila e cada um é opcionalmente substituído por um ou mais de halogênio, haloalquila C1-4, alquila C1-4, alcoxi C1-4, -CN, halo alcoxi C1-4, ou cicloalquila; L é -(CH2)- ou -(CHCH3)-; e (iii) desproteção do nitrogênio capeado do composto de fórmula (II—1) sob uma condição ácida e acoplamento do composto desprotegido de fórmula (II—1) com um composto escolhido de para formar o composto de fórmula (I) em que Y é espirociclo Cg-Cg contendo 1 átomo de nitrogênio no anel ligado a R3, em que R3 é cada R4 é independentemente escolhido de hidrogênio, alquila Ci-4 ou cicloalquila C3_4; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[024] O desenho anexo, que está incluído para proporcionar uma compreensão adicional da tecnologia em questão e está incorporado e constitui uma parte deste relatório, ilustra aspectos da tecnologia em questão e, em conjunto com a descrição, serve para explicar os princípios da tecnologia em questão.

[025] A Figura 1 mostra que os compostos da presente invenção, por exemplo, os Exemplos 12 e 22, não provocam efeito na pressão arterial média (MAP) in vivo em comparação com os compostos comparativos A a C (descritos na seção de exemplo).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Definições [026] Os termos que não estão especificamente definidos aqui têm os significados que são evidentes para o especialista à luz da revelação global e do contexto como um todo.

[027] Tal como aqui utilizado, as seguintes definições aplicam-se, a menos que indicado de outro modo: [028] A utilização do prefixo Cx_y, em que x e y representam cada um, um número natural, indica que a estrutura da cadeia ou anel ou combinação de estrutura de cadeia e anel como um todo, especificada e mencionada em associação direta, pode consistir em um máximo de y e um mínimo de x átomos de carbono.

[029] Alquila significa cadeias de hidrocarbonetos monovalentes, saturadas, que podem estar presentes tanto em forma de cadeia linear (não ramificada) como ramificada. Se uma alquila é substituída, a substituição pode ter lugar independentemente uma da outra, por mono- ou polissubstituição em cada caso, em todos os átomos de carbono portadores de hidrogênio.

[030] Por exemplo, o termo "alquila C1-5" inclui, por exemplo, H3C-, H3C-CH2-, H3C-CH2-CH2-, H3C-CH (CH3)-, H3C-CH2- CH2-CH2-, H3C-CH2-CH(CH3)H3C-CH(CH3)-CH2-, H3C-C (CH3) 2-, H3C-CH2-CH2-CH2-CH2-, H3C-CH2-CH2-CH (CH3)-, H3C-CH2-CH (CH3)-ch2-, h3c-ch (ch3)-ch2-ch2-, H3C-CH2-C(CH3)2-, h3c-c(CH3)2-ch2-, H3C-CH (CH3)-CH (CH3) - e H3C-CH2-CH (CH2CH3) -.

[031] Outros exemplos de alquila são metila (Me; -CH3) , etila (Et; -CH2CH3) , 1-propila (n-propila; n-Pr; -CH2CH2CH3) , 2-propila (i-Pr; iso-propila; -CH(CH3)2), 1- butila (n-butila, n-Bu, -CH2CH2CH2CH3) , 2-metil-l-propila (iso-butila; i-Bu; -CH2-CH (CH3) 2), 2-butila (sec-butila; sec-Bu; -CH(CH3)CH2CH3, 2-metil-2-propila (terc-butila, t-Bu; -C(CH3)3), 1-pentila (ri-pentila, -CH2CH2CH2CH2CH3) , 2- pentila (-CH (CH3) CH2CH2CH3) , 3-pentila (-CH-(CH2CH3) 2) , 3- metil-l-butila (iso-pentila, CH2CH2CH(CH3)2) , 2-metil-2-butila (-C (CH3) 2CH2CH3) , 3-metil-2-butila ( -CH (CH3) CH (CH3) 2) , 2.2- dimetil-l-propila (neo-pentila; (CH2C(CH3)3, 2-metil-l- butila (-CH2CH (CH3) CH2 (CH3), 1-hexila (n-hexila; -CH2CH2CH2CH2CH2CH3) , 2-hexila (CH (CH3) 2CH2CH2CH3) , 3-hexila (CH (CH2CH3) (CH2CH2CH3) ) , 2-metil-2-pentila (- C (CH3) 2CH2CH2CH3) , 3-metil-2-pentila (-CH (CH3) CH (CH3) CH2CH3) , 4-metil-2-pentila (-CH (CH3) CH2CH (CH3) 2, 3 metil-3-pentila (- C (CH3) (CH2CH3)2) , 2-metil-3-pentila (CH (CH2CH3) CH (CH3) 2) , 2,3 dimetil-2-butila (-C (CH3) 2CHCH3) 2) , 3,3-dimetil-2-butila (CH (CH3) C (CH3) 3) , 2,3-dimetil-l-butila (-CH2CH (CH3) CH (CH3) CH3) , 2,2-dimetil-l-butila (-CH2C (CH3) 2CH2CH3) , 3,3-dimetil- l-butila (-CH2CH2C (CH3) 3) , 2-metil-l-pentila (-CH2CH(CH3) CH2CH2CH3) , 3-metil-l-pentila (-CH2CH2CH (CH3) CH2CH3) , 1- heptila (n-heptila), 2-metil-l-hexila, 3-metil-l-hexila, 2.2- dimetil-l-pentila, 2,3-dimetil-l-pentila, 2,4-dimetil-1-pentila, 3,3-dimetil-l-pentila, 2,2,3-trimetil-l-butila, 3-etil-l-pentila, 1-octila (n-octila), 1-nonila (n-nonila); 1-decila (n-decila), etc.

[032] Pelos termos propila, butila, pentila, hexila, heptila, octila, nonila, decila, etc., sem qualquer definição adicional significam grupos hidrocarboneto saturados com o número correspondente de átomos de carbono, em que todas as formas isoméricas estão incluídas.

[033] A definição acima para alquila também se aplica se alquila é uma parte de outro grupo (combinado) tal como, por exemplo, Cx_y alquilamino ou Cx_y alcoxi.

[034] Ao contrário de alquila, alquenila consiste em pelo menos dois átomos de carbono, em que pelo menos dois átomos de carbono adjacentes estão ligados entre si por uma ligação dupla C-C e um átomo de carbono pode ser apenas parte de uma ligação dupla C-C. Se em uma alquila como aqui definido anteriormente possuindo pelo menos dois átomos de carbono, dois átomos de hidrogênio nos átomos de carbono adjacentes são formalmente removidos e as valências livres são saturadas para formar uma segunda ligação, formando-se a alquenila correspondente.

[035] A alquenila pode estar opcionalmente presente na orientação cis ou trans ou E ou Z em relação à dupla ligação (s). .

[036] Ao contrário de alquila, a alquinila consiste em pelo menos dois átomos de carbono, em que pelo menos dois átomos de carbono adjacentes estão ligados entre si por uma ligação tripla C-C. Se em uma alquila como aqui anteriormente definido possuindo pelo menos dois átomos de carbono, dois átomos de hidrogênio em cada caso em átomos de carbono adjacentes são formalmente removidos e as valências livres são saturadas para formar duas ligações adicionais, a alquinila correspondente é formada.

[037] Haloalquila (haloalquenila, haloalquinila) é derivada da alquila (alquenila, alquinila) previamente definida substituindo um ou mais átomos de hidrogênio da cadeia de hidrocarboneto independentemente uns dos outros por átomos de halogêneo, que podem ser idênticos ou diferentes. Se uma haloalquila (haloalquenila, haloalquinila) for ainda substituída, as substituições podem ter lugar independentemente umas das outras, sob a forma de mono- ou polissubstituições em cada caso, em todos os átomos de carbono portadores de hidrogênio.

[038] Exemplos de haloalquila (haloalquenila, haloalquinila) são -CF3, -CHF2, -CH2F, -CF2CF3, -CHFCF3, -CH2CF3, -cf2ch3, -chfch3, -cf2cf2cf3, -CF2CH2CH3, -CF=CF2, -CC1=CH2, -CBr=CH2, -C=C-CF3, -CHFCH2CH3, -CHFCH2CF3, etc.

[039] Halogêneo refere-se a átomos de flúor, cloro, bromo e/ou iodo.

[040] Cicloalquila é constituída pelos subgrupos de anéis de hidrocarbonetos monocíclicos, anéis de hidrocarbonetos bicíclicos e anéis de espiro-hídrocarbonetos. Os sistemas são saturados. Em anéis de hidrocarbonetos bicíclicos, dois anéis são ligados entre si de modo a que tenham pelo menos dois átomos de carbono em conjunto.

[041] Se uma cicloalquila é para ser substituída, as substituições podem ter lugar independentemente uma da outra, sob a forma de mono- ou polissubstituições em cada caso, em todos os átomos de carbono portadores de hidrogênio. A própria cicloalquila pode estar ligada como um substituinte à molécula através de cada posição adequada do sistema de anel.

[042] Exemplos de cicloalquila são ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila.

[043] Os grupos correspondentes são um exemplo: Ciclo-hexil [044] Espirociclo é um anel espiro-hidrocarboneto um átomo de carbono (espiroátomo) pertence a dois anéis juntos.

[045] Arila significa carbociclos mono-, bi- ou triciclicos com pelo menos um carbociclo aromático. Preferencialmente, significa um grupo monocíclico com seis átomos de carbono (fenila) ou um grupo biciclico com nove ou dez átomos de carbono (dois anéis de seis membros ou um anel de seis membros com um anel de cinco membros), em que o segundo anel também pode Ser aromático ou, no entanto, também pode ser saturado ou parcialmente saturado.

[046] Se uma arila for substituída, as substituições podem ter lugar independentemente umas das outras, sob a forma de mono- ou polissubstituições em cada caso, em todos os átomos de carbono portadores de hidrogênio. A própria arila pode estar ligada como um substituinte à molécula através de cada posição adequada do sistema de anel.

[047] Exemplos de arila são fenila e naftila.

[048] A definição acima de arila também se aplica se arila for parte de outro grupo (combinado) como, por exemplo, em arilamino, ariloxi ou arilalquila.

[049] Heterociclila significa sistemas de anéis, que são derivados do cicloalquila ou espirociclo anteriormente definidos substituindo um ou mais dos grupos -CH2-independentemente uns dos outros nos anéis de hidrocarbonetos pelos grupos -O-, -S- ou -NH-, em que um total de não mais de cinco heteroátomos pode estar presente, pelo menos um átomo de carbono pode estar presente entre dois átomos de oxigênio e entre dois átomos de enxofre ou entre um átomo de oxigênio e um átomo de enxofre e o anel como um todo deve ter estabilidade química. Os heteroátomos podem estar opcionalmente presentes em todos os estágios de oxidação possíveis (enxofre -» sulf óxido-SO-, sulf ona-S02~, nitrogênio -» N-óxido).

[050] Se uma heterociclila é substituída, as substituições podem ter lugar independentemente umas das outras, sob a forma de mono- ou polissubstituições em cada caso, em todos os átomos de carbono e/ou nitrogênio portadores de hidrogênio. A própria heterociclila pode estar ligada como um substituinte à molécula através de cada posição adequada do sistema de anel.

[051] Exemplos de heterociclila são tetra-hidrofuranila, tetra-hidropiranila, piperidinila, piperazinila, pirrolidinila, morfolinila, ou os seguintes espirociclos heterocíclicos.

[052] Heteroarila significa anéis heteroaromáticos monocíclicos ou anéis policíclicos com pelo menos um anel heteroaromático, em comparação com a correspondente arila ou cicloalquila, em vez de um ou mais átomos de carbono, um ou mais heteroátomos idênticos ou diferentes, selecionados independentemente um do outro entre nitrogênio, enxofre e oxigênio, em que o grupo resultante deve ser quimicamente estável. 0 pré-requisito para a presença de heteroarila é um heteroátomo e um sistema heteroaromático.

[053] Se uma heteroarila é para ser substituída, as substituições podem ter lugar independentemente umas das outras, sob a forma de substituições mono- ou polissubstituições em cada caso, em todos os átomos de carbono e/ou nitrogênio portadores de hidrogênio. A própria heteroarila pode estar ligada como um substituinte à molécula através de cada posição adequada do sistema de anel, tanto carbono como nitrogênio.

[054] Exemplos de heteroarila são piridinila, piridazinila, pirimidinila, pirazinila, benzoxazolila, indolila, isoindolila, benzofuranila, benzimidazolila, benzotiazolila e semelhantes.

[055] Os heteroátomos podem estar opcionalmente presentes em todos os estágios de oxidação possíveis (enxofre -» sulfóxido-SO-, sulfona-S02-, nitrogênio -+ N-óxido).

[056] Carbociclos incluem anéis de hidrocarbonetos contendo de três a doze átomos de carbono. Estes carbociclos podem ser sistemas de anéis aromáticos quer aromáticos quer não aromáticos. Os sistemas de anéis não aromáticos podem ser mono- ou poli-insaturados. Os carbociclos preferidos incluem, mas não estão limitados a ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclopentenila, ciclo-hexila, ciclo-hexenila, ciclo-heptanila, ciclo-heptenila, fenila, indanila, indenila, benzociclobutanila, di-hidronaftila, tetra-hidronaftila, naftila, deca-hidronaftila, benzociclo-heptanila e benzociclo-heptenila.

[057] Todos os sistemas cíclicos e acíclicos definidos nesta seção acima devem ser entendidos como opcionalmente parcial ou totalmente halogenados quando possível e salvo indicação em contrário.

[058] Estereoquímica/solvatos/hidratos: A menos que especificamente indicado, ao longo do relatório descritivo e reivindicações anexas, uma dada fórmula ou nome químico deve abranger os tautômeros e todos os isômeros estéreo, ópticos e geométricos (por exemplo, enantiômeros, diastereômeros, isômeros E/Z, etc.) e racematos dos mesmos bem como misturas em diferentes proporções dos enantiômeros separados, misturas de diastereômeros ou misturas de qualquer das formas precedentes, quando tais isômeros e enantiômeros existem, bem como sais, incluindo os seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Os compostos e sais da invenção podem existir em formas não solvatadas, bem como solvatadas com solventes farmaceuticamente aceitáveis tais como água, etanol e semelhantes. Em geral, as formas solvatadas tais como hidratos são consideradas equivalentes às formas não solvatadas para os propósitos da invenção.

[059] Os compostos da invenção também incluem as suas formas isotopicamente marcadas. Uma forma isotopicamente marcada de um agente ativo de uma combinação da presente invenção é idêntica ao referido agente ativo, mas pelo fato de um ou mais átomos do referido agente ativo terem sido substituídos por um átomo ou átomos com uma massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número de massa do referido átomo que é normalmente encontrado na natureza. Exemplos de isótopos que estão prontamente disponíveis comercialmente e que podem ser incorporados em um agente ativo de uma combinação da presente invenção de acordo com procedimentos bem estabelecidos, incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, flúor e cloro, por exemplo, 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 180, 170, 31P, 32P, 35S, X8F e 36C1, respectivamente. Um agente ativo de uma combinação da presente invenção, um seu pró-fármaco, ou um sal farmaceuticamente aceitável de qualquer um que contenha um ou mais dos isótopos acima mencionados e/ou outros isótopos de outros átomos está contemplado para estar dentro do âmbito da presente invenção.

[060] Sais: Ά frase "farmaceuticamente aceitável" é aqui empregada para se referir aos compostos, materiais, composições e/ou formas de dosagem que são, dentro do âmbito do julgamento médico sadio, adequadas para utilização em contato com os tecidos de seres humanos e animais sem excesso de toxicidade, irritação, resposta alérgica ou outro problema ou complicação, e proporcional a uma razoável relação benefício/risco.

[061] Como aqui utilizado "sais farmaceuticamente aceitáveis" referem-se a derivados dos compostos divulgados em que o composto original é modificado por produção de seus sais ácidos ou básicos. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a, sais de ácidos minerais ou orgânicos de resíduos básicos tais como aminas; sais alcalinos ou orgânicos de resíduos ácidos tais como ácidos carboxílicos; e similar.

[062] Por exemplo, tais sais incluem acetatos, ascorbatos, benzenossulfonatos, benzoatos, besilatos, bicarbonatos, bitartaratos, brometos/hidrobrometos, edetatos/edetatos de Ca, camsilatos, carbonatos, cloretos/cloridratos, citratos, edisilatos, etano dissulfonatos, estolatos esilatos, fumaratos, gluceptatos, gluconatos, glutamatos, glicolatos, glicolilarsnilatos, hexilresorcinatos, hidrabaminas, hidroximealeatos, hidroxinaftoatos, iodetos, isotionatos, lactatos, lactobionatos, malatos, maleatos, mandelatos, metanossulfonatos, mesilatos, metilbrometos, metilnitratos, metilsulfatos, mucatos, napsilatos, nitratos, oxalatos, pamoatos, pantotenatos, acetatos de fenila, fosfatos/difosfatos, poligalacturonatos, propionatos, salicilatos, estearatos, subacetatos, succinatos, sulfamidas, sulfatos, tannatos, tartaratos, teoclatos, toluenossulfonatos, tritiodetos, amônio, benzatinas, cloroprocaínas, colinas, dietanolaminas, etilenodiaminas, megluminas e procainas.

[063] Outros sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com cátions a partir de metais como alumínio, cálcio, lítio, magnésio, potássio, sódio, zinco e semelhantes (ver também Sais farmacêuticos, Birge, S.M. et al., J. Pharm. Sei.), 66, 1-19).

[064] Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser sintetizados a partir do composto original que contém uma porção básica ou ácida por métodos químicos convencionais. Geralmente, tais sais podem ser preparados por reação da forma de ácido ou base livre destes compostos com uma quantidade suficiente da base ou ácido apropriado em água ou em um diluente orgânico como éter, acetato de etila, etanol, isopropanol ou acetonitrila ou um sua mistura.

[065] Os sais de outros ácidos que os mencionados acima que, por exemplo, são úteis para purificar ou isolar os compostos da presente invenção (por exemplo, trifluoroacetatos) , também compreendem uma parte da invenção.

[066] Algumas notações abreviadas e suas correspondências de estrutura estão listadas abaixo: [067] Em uma representação tal como, por exemplo, a linha contínua significa que o sistema de anel pode ser ligado à molécula através do átomo de carbono 1, 2 ou 3 e é assim equivalente à seguinte representação [068] Por uma quantidade terapeuticamente eficaz para os objetivos da presente invenção entende-se uma quantidade de substância que é capaz de obviar sintomas de doença ou aliviar estes sintomas, ou que prolongam a sobrevivência de um doente tratado.

Lista de abreviações [069] As características e vantagens da presente invenção tornar-se-ão evidentes a partir dos seguintes exemplos detalhados que ilustram os fundamentos da invenção a título de exemplo sem restringir o seu âmbito de aplicação: Preparação dos compostos de acordo com a invenção Métodos Sintéticos Gerais [070] As condições ótimas de reação e os tempos de reação podem variar dependendo dos reagentes particulares utilizados. Salvo especificação em contrário, os solventes, temperaturas, pressões e outras condições de reação podem ser facilmente selecionados por um especialista na técnica. Procedimentos específicos são fornecidos na seção Exemplos Sintéticos. Os intermediários e produtos podem ser purificados por cromatografia sobre gel de sílica, recristalização e/ou HPLC de fase reversa (RHPLC).

Enantiômeros discretos podem ser obtidos por resolução de produtos racêmicos utilizando HPLC quiral. Os métodos de purificação de RHPLC utilizados em qualquer lugar entre 0100% de acetonitrila em água contendo 0,1% de ácido fórmico, 0,1% de TFA ou 2,5 mM de bicarbonato de amônio e utilizaram uma das seguintes colunas: A) Coluna Waters Sunfire OBD C18 5 pm 30x150 mm B) Coluna Waters XBridge OBD C18 5 pm 30x150 mm C) Coluna Waters ODB C8 5 pm 19x150 mm D) Coluna Waters Atlantis ODB C18 5 pm 19x50 mm E) Coluna Waters Atlantis T3 OBD 5 pm 30x100 mm F) Coluna Phenomenex Gemini Axia C18 5 pm 30x100 mm Métodos de HPLC: Tabela 1: HPLC Analítico Método A

Tabe1a 2: HPLC Analítico Método B_________________ ________Tabela 3: HPLC Analítico Método C_______________ [071] Os compostos de acordo com a invenção são preparados pelos métodos de síntese descritos a seguir, nos quais os substituintes das fórmulas gerais têm os significados dados aqui anteriormente. Estes métodos pretendem ser uma ilustração da invenção sem restringir o seu objeto e o âmbito dos compostos reivindicados para estes exemplos. Onde a preparação de compostos de partida não é descrita, eles são comercialmente obtidos ou podem ser preparados analogamente a compostos conhecidos ou métodos aqui descritos. As substâncias descritas na literatura são preparadas de acordo com os métodos publicados de síntese.

[072] As formações de ligação de amida podem ser realizadas por condições de acoplamento padrão bem conhecidas na técnica (por exemplo, Bodanszky, M. The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, 1984, que é aqui incorporada por referência na sua totalidade), tal como a reação de um ácido carboxílico e uma amina na presença de reagentes de acoplamento tais como hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-l-il)-N,N,N',N'-tetrametí1-urônio (HATU). A utilização de grupos protetores (isto é, proteção ou desproteção de um grupo funcional) pode ser realizada por condições padrão bem conhecidas na técnica (por exemplo, Greene, T.W., Wuts, P.G.M. Protective Groups in Organic Synthesis, 3a Ed. Nova York, Wiley, 1999, que é aqui incorporado por referência na sua totalidade).

[073] Os compostos de fórmula I podem ser preparados como mostrado no Esquema I ou II abaixo.

Esquema I

[074] No Esquema I, um pirazol de fórmula A, em que X pode ser bromo, cloro ou iodo, é reagido com um ácido borônico apropriado de fórmula B (R = H) , um éster borônico adequado de fórmula B (R = metila), ou um éster borônico adequado de fórmula C sob uma condição de acoplamento cruzado catalisado por paládio tal como a presença de uma base adequada (por exemplo, Cs2CO3 aquoso, NaH), um catalisador adequado [por exemplo, tetraquis (trifenilfosfina)paládio (0)], em um solvente adequado (por exemplo, DME) e a uma temperatura adequada para proporcionar um composto de fórmula D. 0 heterociclico D é feito reagir com um composto de fórmula E, em que LG é um grupo de saída adequado (por exemplo, O-Ts), em um solvente adequado (por exemplo, DMA), na presença de uma base adequada (por exemplo, NaH) e a uma temperatura adequada para dar um composto de fórmula F. A nitrila F é hidrolisada para a carboxamida correspondente sob uma condição adequada tal como em um solvente adequado ou uma mistura de solventes (por exemplo, uma mistura de água e etanol), na presença de um reagente adequado tal como (hidrido(ácido dimetilfosfinoso-KP)[hidrogeno bis (dimetilfosfinito-KP)]platina (II) e a uma temperatura adequada. A subsequente desproteção e acoplamento de amida utilizando condições bem conhecidas na técnica tais como as descritas acima proporcionam um composto de fórmula (I) . [075] Além disso, os compostos de fórmula I podem ser preparados de acordo com o Esquema II.

Esquema II

[076] De acordo com o Esquema II, um pirazol de fórmula A, em que X pode ser bromo, cloro ou iodo com um composto de fórmula E, em que LG é um grupo de saída (por exemplo, O-Ts), em um solvente adequado (por exemplo, CS2CO3, NaH) e a uma temperatura adequada para dar um heterocíclico de fórmula G. 0 amino-pirazol G pode ser feito reagir com um ácido borônico adequado de fórmula B (R = H), um éster borônico adequado de fórmula B (R = metila) ou um éster borônico adequado de fórmula C sob uma condição de acoplamento cruzado catalisado por paládio tal como a presença de uma base adequada (por exemplo, K2CO3 aquoso) um catalisador adequado [por exemplo, tetraquis (trifenilfosfina)paládio (0)], em um solvente adequado (por exemplo, DME) e a uma temperatura adequada para gerar um composto de fórmula F. A nitrila F pode ser convertida em um composto de fórmula I) de acordo com o método descrito no Esquema I.

Exemplos sintéticos: Método A Síntese do Intermediário 1-1 [077] Cs2CO3 é adicionado a uma solução de R-l (22,0 g, 118 mmol) e R-2 (47,6 g, 129 mmol) em acetona (250 ml). A mistura é aquecida a 80°C durante 2 dias. A mistura é diluída com água (200 ml) e extraída com CH2C12 (100 ml x 2) . Os orgânicos são então coletados e concentrados para dar 1-1 (25 g) , m/z = 382,1 [M+H].

Método B Síntese do Intermediário 1-2 [078] Hidreto de sódio (14,3 g, 372,2 mmol) é adicionado a uma solução de R-l (58 g, 310,2 mmol) em DMA (460 ml). Após 30 min, R-3 (130,2 g, 341,2 mmol) é adicionado e aquecido a 80°C durante 18 h. A reação é resfriada até à temperatura ambiente e diluída com MeOH (250 ml) e água (35 ml). A reação é então agitada vigorosamente durante a noite. A mistura heterogênea é filtrada sob vácuo para produzir, após secagem, 96 g de um sólido como uma mistura 1:1 de isômeros de pirazol. O sólido é combinado com 240 ml de CH2C12 e agitado vigorosamente durante a noite. A mistura heterogênea é filtrada a vácuo e produziu 40 g de um sólido esbranquiçado. 0 sólido é combinado com 58 ml de CH2C12 e agitado vigorosamente. Após 2 h, a solução heterogênea é sonicada durante 5 minutos e depois resfriada a 5°C e agitada durante 1 h. A solução heterogênea é filtrada a vácuo e o sólido é lavado com CH2C12 frio (2x), coletado e seco para dar 1-2 (27,7 g) . Os filtrados combinados são diluídos com 180 ml de i-PrOH e agitados vigorosamente durante 3 h. A solução heterogênea é filtrada e o sólido é lavado com uma pequena quantidade de i-PrOH (2x). O filtrado é concentrado in vacuo para dar um resíduo que é combinado com 32 ml de CH2C12 e sonicado durante 5 minutos. Após mais 1 hora de agitação, a solução é resfriada a 0°C e agitada durante 1 h. A solução heterogênea é filtrada e sólido coletado e seco para se obter quantidades adicionais de 1-2 (5,6 g). A quantidade total de 1-2 isolada é 33,3 g, m/z 394,0/396,0 [M+H].

Método C Síntese do Intermediário 1-3 [079] 1-1 (1,1 g, 2,9 mmol), R-4 (1,71 g, 3,2 mmol), carbonato de potássio aquoso 2M (2,9 ml, 5,8 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) (333 mg, 0,3 mmol) e DME (6 ml) são combinados e selados em um tubo de microondas e aquecidos a 120°C termicamente durante a noite. A mistura é filtrada, depois diluída com água (100 ml) e extraída com EtOAc (4 x 200 ml) . As camadas de EtOAc combinadas são secas sobre sulfato de sódio e concentradas. O resíduo em bruto é purificado por cromatografia flash (SiO2, 0-60% de EtOAc/Heptano) para dar 1,2 g de 1-3, m/z = 500,5 [M+H].

[080] 0 seguinte intermediário é preparado de modo semelhante: Método D Síntese do Intermediário 1-5 [081] R-l (2,0 g, 10,7 mmol), R-4 (6,4 g, 60%, 11,8 mmol), Cs2CO3 aquoso 2M (10,7 ml, 21 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (1,2 g; 1,1 mmol), e DME (6 ml) são combinados em um tubo de micro-ondas e aquecidos a 135°C em um micro-ondas durante 2 horas. A mistura é filtrada, depois diluída com água e extraída com EtOAc. Os extratos combinados são secos sobre sulfato de sódio e concentrados para proporcionar um resíduo em bruto que é purificado por cromatografia flash (0-100% de EtOAc em heptano) para dar 3,2 g de 1-5, m/z = 382,1 [M+H].

[082] Os seguintes intermediários são preparados de modo semelhante: ____________________________________________ Método E Síntese do Intermediário 1-8 [083] Hidreto de sódio (250 mg, 6,5 mmol) a uma solução de 1-5 (1,64 g, 5,4 mmol) em DMA (10 ml). Após 5 min, R-3 (2,26 g, 5,9 mmol) é adicionado e aquecido a 70°C durante 18 h. A mistura é diluída com água (20 ml) e extraída com EtOAc (4 x 10 ml) . Os extratos de EtOAc combinados são secos sobre sulfato de sódio, filtrados e depois concentrados in vacuo. 0 resíduo bruto é purificado por cromatografia flash (SiO2, 0-50% EtOAc em heptano) para proporcionar 1,1 g de 1-8, m/z - 514,5 [M+H].

[084] O seguinte intermediário é preparado de modo semelhante: Método F Síntese do Intermediário 1-10 [085] 1-3 (845 mg, 1,7 mmol) é dissolvido em THF (15 ml). Uma solução 1M de R-5 em THF (5,1 ml, 5,1 mmol) é adicionado à solução. A mistura é agitada a 70°C durante a noite. A solução de reação é partilhada entre NH4C1 saturado (solução aquosa) e EtOAc. As camadas são separadas e a camada orgânica é concentrada in vacuo. Uma pequena quantidade de CH2C12 é adicionada ao resíduo e o sólido resultante é filtrado para dar 900 mg de 1-10, ia/z = 370,3 [M+H].

[086] Os seguintes intermediários são preparados de modo semelhante: Método G Síntese do Intermediário 1-13 [087] Carbonato de potássio (270 mg, 1,94 mmol) é adicionado a uma solução de 1-10 (143 mg, 0,39 mmol) em DMA (5 mL). Após 5 min, R-6 (110 mg, 0,47 mmol) é adicionado e a solução é aquecida a 70°C durante 18 h. A solução em bruto é carregada diretamente sobre uma coluna de silica e purificada (gradiente: 0-60% de EtOAc em heptano) para dar 71 mg de 1-13, m/z = 528,4 [M+H].

[088] Os seguintes intermediários são preparados de modo semelhante: __________________________________________ Método Η Síntese do Intermediário 1-21 [089] A uma solução agitada de R-7 (19,2 g, 99,1 mmol) em DMA (54 ml) é adicionado carbonato de potássio (27,4 g, 198,1 mmol). R-8 (23,0 g, 109 mmol) é então adicionado lentamente. A reação é agitada à temperatura ambiente durante 6 h. A reação é então temperada com água e extraída com EtOAc. 0 EtOAc é concentrado in vacuo e o resíduo é purificado por cromatografia flash (SiO2, EtOAc a 10% em hexanos) para produzir 18 g de 1-21, m/z = 324,4 [M+H].

[090] Os seguintes intermediários são preparados de modo semelhante :_________________________________ Método I Síntese do Intermediário 1-31 [091] Em um balão de 1 1 é colocado R-7 (25 g, 128,8 mmol) e carbonato de potássio (35,6 g, 257,7 mmol) em 100 ml de DMF. A esta mistura é adicionado R-9 (33,9 g, 141,7 mmol) e a reação deixada em agitação durante a noite. A reação é então filtrada e concentrada. 0 resíduo é dissolvido em CH2CI2 e filtrado através de Celite. 0 filtrado é concentrado para proporcionar 45,4 g de 1-31, m/z = 353,4 [M+H] . O Intermediário 1-31 é usado em etapas subsequentes sem purificação adicional.

[092] Os seguintes intermediários são preparados de modo semelhante:_____________________________________ Método J Síntese do Intermediário 1-52 [093] Em um balão de 1 1 é colocado R-7 (75 g, 386,5 mmol) e K2CO3 (106,7 g, 773 mmol) em 100 ml de DMF. A isto é adicionado R-10 (101,6 g, 425,2 mmol) e a reação é deixada em agitação durante a noite. A reação é filtrada e concentrada. O resíduo é dissolvido em CH2CI2 e filtrado através de Celite. 0 filtrado é concentrado para proporcionar 136 g de 1-52, m/z = 353,0 [M+H], Intermediário 1—52 é utilizado nas etapas subsequentes sem purificação adicional.

Método K Síntese da mistura de Intermediários 1-53 [094] Ά uma mistura de R-7 (5,0 g, 25,8 mmol), acetonitrila (29 ml) e carbonato de potássio (7,1 g, 51,5 mmol) é adicionado R-ll (3,9 ml, 25,6 mmol) . A mistura é agitada durante 18 h sob Ar. A reação é então concentrada e o resíduo é partilhado entre EtOAc e água. As camadas são separadas e a camada aquosa é extraída com EtOAc (2x) . As camadas orgânicas combinadas são lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas para dar 8,75 g de 1-53, m/z = 271,0 [M+H]. A mistura 1-53 intermediária é utilizada em etapas subsequentes sem purificação adicional.

[095] Os seguintes intermediários são preparados de modo semelhante: ____________________________________________ Método L Síntese do Intermediário 1-60 [096] 1-2 (1,1 g, 2,8 mmol), 1-53 (1,12 g, 4,16 mmol), carbonato de césio (1,81 g, 5,5 mmol) são combinados em um tubo de micro-ondas e o recipiente é purgado com Ar. DME (6,6 ml) e Pd (PPh3)4 (320 mg, 0,28 mmol) são adicionados e o recipiente é desgaseifiçado e aquecido termicamente a 125°C durante a noite. A mistura é filtrada através de Celite e a Celite é lavada com EtOAc e água. As camadas são separadas e a fase aquosa é extraída com EtOAc (2x). As camadas combinadas são lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas. O resíduo é purificado por cromatografia flash (SiO2, 10-80% de EtOAc em heptano) para dar 407 mg de 1-60, m/z = 542,2 [M+H].

Método M Síntese do Intermediário 1-61 [097] 1-2 (1,0 g, 1,31 mmol), 1-30 (790 mg, 2,8 mmol), carbonato de césio (1,6 g, 5,1 mmol), Pd (PPh3)4 (0,29 g, 0,25 mmol) e DME (6 ml) são combinados em um tubo de micro-ondas e aquecidos termicamente a 125°C durante a noite. A mistura é filtrada, depois é diluída com água (30 ml) e extraída com EtOAc (4 x 30 ml). Os extratos orgânicos combinados são secos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados para proporcionar o resíduo em bruto. O material em bruto é purificado por cromatografia flash (SiO2, 0-100% de EtOAc em heptano) para produzir 1,1 g de 1-61, m/z = 474,3 [M+H].

[098] Os seguintes intermediários são preparados de modo semelhante: Método N Síntese do Intermediário 1-87 [099] 1-2 (0,7 g, 1,8 mmol), 1-39 (1,5 g, 3,5 mmol), carbonato de césio (1,15 g, 3,5 mmol), Pd(PPh3)4 (0,2 g, 0,21 mmol) são combinados em um tubo de micro-ondas. São adicionados dioxano desgaseifiçado (8 ml) e água (2 ml) . O recipiente de reação é selado sob Ar e aquecido em um micro-ondas durante 60 min a 125°C. A reação é transferida para um funil de separação, diluída com EtOAc e lavada com água e salmoura. As fases orgânicas são secas, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo é então purificado por cromatografia flash (SiO2, 0-55% de EtOAc/ heptano) para dar 710 mg de 1-87, m/z = 622,2 [M+H].

[100] Os seguintes intermediários são preparados de modo semelhante: Método Ο Síntese do Intermediário 1-95 [101] 1-2 (310 mg, 0,78 mmol), 1-21 (380 mg, 1,17 mmol), triciclo-hexilfosfina (175 mg, 0,63 mmol) e fosfato de potássio (500 mg, 2,3 mmol) são combinados em frascos de micro-ondas de 20 ml em 8 ml de dioxano e 2 ml de água. Ar é borbulhado através da solução durante 10 minutos. Tris (dibenzilidenoacetona)dipaládio (0) é então adicionado e Ar é borbulhado através da reação durante mais 5 minutos. A reação é selada e aquecida em um micro-ondas durante 60 min a 120°C. Após resfriamento até à temperatura ambiente, a solução da reação é diluída com água e extraída com EtOAc (2x) . Os extratos orgânicos combinados são secos sobre MgSO4, filtrados e concentrados in vacuo. O resíduo em bruto é purificado por cromatografia flash (SiO2, 10-90% de EtOAc em heptano) e produz 340 mg de 1-95, m/z = 514,3 [M+H].

[102] Os seguintes intermediários são preparados de modo semelhante: Método P Síntese do Intermediário 1-101 [103] Em um balão de 1 1 é colocado 1-2 (32,0 g, 80,8 mmol), 1-31 (56,9 g, 161,5 mmol), carbonato de césio (52,6 g, 161,5 mmol) e Pd(PPh3)4 em 225 ml de Ar DMA desgaseif içado e 75 ml de água. Este é equipado com um condensador sob argônio e depois aquecido a 140°C em um bloco de reação pré-aquecido. Após 45 min, a reação é resfriada até à temperatura ambiente e depois filtrada. Os sólidos são enxaguados com EtOAc mínimo. Os filtrados combinados são transferidos para um funil de separação de 2 1, diluídos com aproximadamente 750 ml de água e extraídos com EtOAc (750 ml) . O EtOAc é então enxaguado com mais 750 mL de água e depois 750 ml de salmoura. Os orgânicos são então combinados, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados in vacuo. A cromatografia flash (SÍO2, 0-75% EtOAc/heptano) produz 25 g de 1-101. As frações impuras são isoladas e re-purifiçadas por cromatografia flash (SiO2, 075% EtOAc/heptano) para dar 7,5 g de 1-101. Total 33 g de 1-101 (75%), m/z = 560,4 [M+H].

[104] O seguinte intermediário é preparado de modo semelhante: Método Q Síntese do Intermediário 1-103 [105] Hidrido(ácido dimetilfosfinoso-KP)[hidrogênio bis(dimetilfosfinito-KP)]platina (II) (79 mg, 0,19 mmol) é adicionado a 1-95 (1,0 g, 1,9 mmol) em água (3,0 ml) e etanol (15 ml). A reação heterogênea é aquecida a 80°C. Após 18 h, a reação é resfriada até à temperatura ambiente. A reação é concentrada in vacuo. 0 resíduo é combinado com EtOAc e filtrado. 0 filtrado é concentrado in vacuo para dar 500 mg de 1-103, m/z = 532,3 [M+H]. O produto é utilizado nas etapas subsequentes sem purificação adicional.

[106] Os seguintes intermediários são preparados de modo semelhante: _____________________________________________ Método R Síntese do Intermediário 1-130 [107] 1-102 (61,5 g, 113,6 mmol) é dissolvido em etanol (200 ml) e água (40 ml). Hidrido(ácido dimetilfosfinoso-KP)[hidrogênio bis(dimetilfosfinito- KP)]platina (II) (2,91 g; 6,8 mmol) e a reação é agitada a 80°C durante 16 h. A solução da reação é diluída com água, extraída com MeOH/CH2Cl2 a 5% e a camada orgânica é coletada, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada in vacuo. O resíduo é purificado por cromatografia flash (SiO2, 0-100% de EtOAc em Hep e depois 0-20% de MeOH em CH2C12) para se obter 57,2 g de 1-130, m/z = 560,3 [M+H].

Método S Síntese do Intermediário 1-131 [108] Hidrido(ácido dimetilfosfinoso-KP)[hidrogênio bis(dimetilfosfinito-KP)]platina (II) (2,86 g, 6,2 mmol) (863 mg 2,0 mmol) é adicionado à solução de 1-101 (11,4 g, 20,2 mmol) em água (30 ml) e etanol (100 ml) em um recipiente selável. 0 recipiente é selado e aquecido a 95°C durante a noite. A reação é concentrada in vacuo, diluída com EtOAc e filtrada através de Celite. O filtrado é concentrado in vacuo para dar 12 g de 1-131, m/z = 560,4 [M+H]. 0 material (1-131) é utilizado sem purificação adicional.

Método T Síntese do Intermediário 1-132 [109] 1-109 (1,04 g, 2,5 mmol), 1-41 (1,5 g, 5,0 mmol), carbonato de césio (1,64 g, 5,0 mmol), Pd(PPh3)4 (0,29 g, 0,25 mmol) são combinados em um tubo de microondas. São adicionados dioxano desgaseifiçado (8 ml) e água (2 ml) . O recipiente de reação é selado sob Ar e aquecido em um micro-ondas durante 60 min a 125°C. A reação é transferida para um funil de separação, diluída com EtOAc e lavada com água e salmoura. Os orgânicos são secos, filtrados e concentrados in vacuo. 0 resíduo é então purificado através de cromatografia flash (SiO2, 0-20% de MeOH em DCM) para dar 1000 mg de 1-132, m/z = 517,4 [M+H].

Método U Síntese do Intermediário 1-133 [110] 1-95 ¢1,34 g, 2,6 mmol) é aquecido a 140°C em ortoformato de trimetila (R-12) (17,4 ml) . Após 18 h o excesso de ortoformato de trimetila é removido in vacuo. O resíduo amarelo é diluído com etanol absoluto (15 ml), é adicionado boro-hidreto de sódio (R-13) (118 mg, 3,1 mmol) e a mistura é agitada à temperatura ambiente. Após 3 h, o solvente é removido in vacuo. O resíduo é diluído com água, extraído com EtOAc, seco sobre MgSO4, filtrado e concentrado in vacuo. O resíduo em bruto é purificado por cromatografia flash (SiO2, EtOAc 10-80% em heptano) para dar 920 mg de 1-133, m/z = 528,3 [M+H].

[111] Os seguintes intermediários são preparados de modo semelhante: Método V Síntese do Intermediário 1-136 [112] Hidrido(ácido dimetilfosfinoso-KP)[hidrogênio bis(dimetilfosfinito-KP)]platina (II) (70 mg, 0,16 mmol) é adicionado a 1-133 (890 mg, 1,7 mmol) em água (0,8 ml) e etanol (2,4 ml). A reação heterogênea é aquecida a 80°C. Após 18 h, a reação é resfriada até à temperatura ambiente. É adicionado hidrido (ácido dimetilfosfinoso-KP) [hidrogênio bis(dimetilfosfino-KP)]platina (II) (80 mg, 0,19 mmol) e a reação é aquecida a 80°C durante 96 h. A reação é concentrada in vacuo e partilhada entre EtOAc e água. As camadas são separadas e a camada aquosa é extraída com EtOAc (2x). As camadas orgânicas combinadas são lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas para dar um resíduo que é purificado por cromatograf ia flash (SiOz, 30-100% EtOAc em heptano) obtendo-se 500 mg de 1-136 m/z = 546,4 [M+H].

[113] Os seguintes intermediários são preparados de modo semelhante :____________ ______________________ Método W Síntese do Exemplo 1 [114] 1-110 (84 mg, 0,17 mmol) é tratado com uma solução de HC1 4,0 M em dioxano (0,427 ml, 1,7 mmol) e agitada à temperatura ambiente durante 0,5 h. A reação é concentrada in vacuo para dar 120 mg de 1-158. A uma solução de cloreto de acriloila (0,03 ml 0,37 mmol) em CH2CI2 (5 ml) é adicionado 1-158 e DIEA (0,15 ml, 0,84 mmol) . Após agitação à temperatura ambiente durante a noite, cloreto de amônio aquoso saturado (4 ml) é adcionado e a mistura é extraída com EtOAc (4 x 2 0 ml) , Os extratos orgânicos combinados são secos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados in vacuo. O resíduo é purificado por RHPLC (Coluna: Luna PFP (2) Prep; Gradiente: 25% a 30% de ACN em água (TFA a 0,1%)) para dar 5 mg do Exemplo 1.

[115] 0 composto seguinte é preparado de um modo semelhante: Exemplo 26.

Método X Síntese do Exemplo 2 [116] A uma solução de 1-139 (220 mg, 0,42 mmol) em CH2CI2 (5 ml) é adicionada uma solução de HC1 4,0 M em dioxano (2,0 ml; 8,0 mmol) e a reação é agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A solução é concentrada in vacuo para dar 175 mg de 1-159.

[117] A uma solução de ácido 2-butinoico (35 mg, 0,41 mmol) em THF (5 ml) é adicionado cloroformato de isobutila (62 mg; 0,45 mmol) e N-metilmorfolina (166 mg; 1,6 mmol). A reação é agitada à temperatura ambiente durante 15 min e depois é transferida para uma solução de 1-159 (175 mg; 0,41 mmol) em THF (10 ml) e agitada durante 1 h à temperatura ambiente. A mistura é então dividida em porções entre 10% de MeOH em CH2C12 e água e filtrada através de um separador de fases e o filtrado é concentrado. O resíduo é purificado por cromatografia flash (SiO2, acetato de etila em heptano 0-100%, em seguida MeOH em CH2CI2 0-20%) para dar, após concentração em vácuo, 127 mg do Exemplo 2.

[118] Os seguintes compostos são preparados de um modo semelhante: Exemplos 3-9, 13, 14, 19, 24, 27-29, 3437, 44, 52-60.

Método Y Síntese do Exemplo 12 [119] A uma solução de 1-130 (57 g, 102 mmol) em CH2CI2 (250 ml) é adicionada uma solução de HC1 4,0 M em dioxano (101,9 ml, 407,4 mmol). Esta solução de reação é deixada a agitar à temperatura ambiente durante 16 h e depois concentrada in vacuo para dar 57,5 g de 1-160 que é utilizado sem purificação adicional.

[120] Uma solução de ácido 2-butinoico (11,6 g, 138 mmol) em IPAc (228 ml) é resfriada a 0°C e adiciona-se sequencialmente gota a gota cloroformato de isobutila (18 mL, 138 mmol) seguido de N-metilmorfolina (50,5 ml, 460 mmol). A solução é deixada agitar a 0°C durante 15 min e depois é transferida para uma solução de 1-160 (57 g, 115 mmol) em IPAc (200 ml) . A mistura de reação é agitada durante 1 h, depois diluída com 300 ml de água e aquecida a 50°C durante 3 h, depois agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura heterogênea é filtrada a vácuo e o sólido é lavado com água, coletado e seco para produzir 39 g do Exemplo 12. O filtrado é coletado e as camadas são separadas. A camada IPAc é concentrada e o resíduo suspenso em EtOAc e aquecido até se observar uma solução homogênea. A solução é resfriada até à temperatura ambiente e o precipitado resultante é filtrado, coletado e seco para produzir mais 8,2 g do Exemplo 12.

Método Z Síntese do Exemplo 22 [121] A uma solução de 1-131 (77,4 g, 138,3 mmol) em CH2CI2 (250 ml) é adicionado MeOH (50 ml) seguido de uma solução de HC1 4M em dioxano (138,3 ml, 553,3 mmol) . Esta solução de reação é deixada agitar à temperatura ambiente durante 4 h e depois concentrada sob vácuo para dar 69,6 g de 1-161 que é utilizado sem purificação adicional.

[122] Uma solução de ácido 2-butinoico (14,3 g, 168,4 mmol) em IPAc (350 ml) é resfriada a 0°C e cloroformato de isobutila (25,4 g, 182. 4 mmol) seguido de N-metilmorfolina (57,3 g, 561 mmol) são adicionados sequencialmente gota a gota. A solução é deixada agitar a 0°C durante 30 min e depois é transferida para uma solução de 1-161 (69,6 g, 140,3 mmol) em IPAc (350 ml). A solução é aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 1 hora, depois diluída com 800 ml de água e aquecida a 50 °C durante 45 minutos. A mistura é então resfriada até à temperatura ambiente e agitada durante 30 min e depois filtrada. O sólido é coletado e seco para dar 55 g do Exemplo 22.

Método AA Síntese do Exemplo 25 [123] A uma solução de 1-139 (624 mg, 1,15 mmol) em CH2C12 (10 ml) é adicionada gota a gota uma solução de HC1 em dioxano (4M, 2,8 ml, 11,5 mmol). A solução é decantada e o resíduo é seco em vácuo para dar 571 mg de 1-162. 0 material em bruto (1-162) é utilizado sem purificação adicional.

[124] Uma solução de 1-162 (571 mg, 1,51 mmol) em DMF (10 ml) e DIEA (0,60 ml, 3,4 mmol) é agitada durante 15 minutos em seguida ácido 2-butinoico (97 mg, 1,51 mmol) de e 440 mg, 1,1 mmol). Após 30 minutos, NH4C1 (aquoso saturado (50 ml) é adicionado e a mistura é extraída com EtOAc. 0 extrato orgânico é lavado com água e salmoura, seco sobre sulfato de sódio, filtrado e concentrado in vacuo para dar um resíduo em bruto que é purificado por cromatografia flash (SiO2, 0-10% de MeOH em EtOAc) obtendo-se 55 mg do Exemplo 25.

[125] Os seguintes compostos são preparados de um modo semelhante: Exemplos 15-18, 21, 23, 30-33, 38, 39, 40, 41, 51.

Método AB Síntese do Exemplo 43 [126] A uma solução de 1-103 (1,2 g, 2,3 mmol) em CH2CI2 (15 ml) é adicionada uma solução de HC1 em dioxano (4M, 5 ml, 20 mmol). A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 1 h, em seguida concentrada in vacuo e o resíduo é triturado com CH2CI2- O sólido é filtrado, coletado e seco para dar 1,09 g de 1-163 que é utilizado sem purificação adicional.

[127] A uma solução de ácido acrílico (50 mg, 0,69 mmol) e HATU (2 64 mg, 0,69 mmol) em DMA (2,5 ml) é adicionado 1-163 (250 mg, 0,53 mmol) e DIEA (0,47 ml, 2,7 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante a noite, a reação é concentrada in vacuo para dar um resíduo que é purificado por cromatografia flash (SiO2, 0-10% de MeOH em CH2C12) dando 106 mg do Exemplo 43.

[128] Os compostos seguintes são preparados de modo semelhante: Exemplos 20, 42, 48.

Método AC Síntese do Exemplo 45 [129] A uma solução de 1-137 (100 mg, 0,21 mmol) em CH2C12 (5 ml) é adicionado TFA (1,5 ml) e a mistura é agitada à temperatura ambiente durante a noite. A reação é concentrada sob vácuo para dar 1-164 que é utilizado sem purificação adicional.

[130] A uma solução do ácido 2-butinoico (20 mg, 0,24 mmol) e EDC (78 mg, 0,41 mmol) em DMF (1 ml) é adicionado DIEA (0,12 ml, 0,80 mmol). Após 15 min, 1-164 (100 mg, 0,27 mmol) é adicionado. Após agitação à temperatura ambiente durante a noite, a reação é concentrada in vacuo. Ά purificação por RHPLC (10 - 90%: ACN/H2O com 0,1% de TFA) deu 9 mg do Exemplo 45.

Método AD Síntese do Exemplo 47 [131] 1-106 (87 mg, 0,159 mmol) é dissolvido em 5 ml de CH2C12. TFA (1 ml) é adicionado e a mistura é agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A solução é concentrada sob vácuo e o resíduo é dissolvido em MeOH e filtrado através de uma coluna SPE de Agilent StratoSpheres de 500 mg (MP PL-HCO3) . O filtrado é concentrado in vacuo para dar 1-165 que é utilizado sem purificação adicional.

[132] A uma solução do ácido 2-butinoico (17 mg, 0,207 mmol) e HATU (79 mg 0,21 mmol) em DMA (1 ml), é adicionado 1—165 (71 mg, 0,159 mmol) e DIEA (0,083 ml, 0,48 Mmol) . Após agitação à temperatura ambiente durante a noite, adiciona-se NH4C1 aquoso saturado (4 ml) e a mistura é extraída com EtOAc (4 x 20 ml) . Os extratos orgânicos combinados são secos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados in vacuo para dar um resíduo que é purificado por cromatografia flash (SiO2, MeOH a 1-6% em CH2C12) para dar 21 mg do Exemplo 47.

[133] Os seguintes compostos são preparados de modo semelhante: Exemplos 46, 49, 50.

Método AE Síntese do Exemplo 48 [134] Em um frasco é colocado 1-164 (100 mg, 0,27 mmol), ácido acrílico (28 mg, 0,4 mmol), TBTU (127 mg, 0,4 mmol) e trietilamina (40 mg, 0,4 mmol) em 1 ml de DMF. Após agitação à temperatura ambiente durante a noite, o solvente é removido sob vácuo para proporcionar um resíduo que é purificado por RHPLC (10-80% de MeCN/água + 0,1% de TFA) para dar 20 mg do Exemplo 48.

Método AF Síntese do Exemplo 11 [135] Ά uma solução de 1-132 (1,0 g, 1,94 mmol) em CH2C12 (5 ml) adiciona-se TFA (3 mL) gota a gota. Após 3 h à temperatura ambiente, o solvente é removido para proporcionar um resíduo que é dissolvido em MeOH e passado através de várias colunas SPE de StratoSpheres Agilent de 500 mg (MP PL-HCO3) . Os cartuchos são lavados com MeOH. O filtrado é concentrado in vacuo para proporcionar 806 mg de 1-167 que é utilizado sem purificação adicional.

[136] A uma solução de ácido 2-butinoico (197 mg, 2,3 mmol) em EtOAc (10 ml) adiciona-se cloroformato de isobutilo (350 mg, 2,5 mmol) seguido de N-metilmorfolina (0,79 g, 7,7 mmol). A mistura é agitada durante 10 min e depois é adicionada a uma solução de 1-167 (806 mg, 1,9 mmol) em THF (10 ml) e agitada durante 30 min à temperatura ambiente. A reação é diluída com água e extraída com EtOAc, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada. O resíduo em bruto é purificado por cromatografia flash (SiO2, 0-10% de MeOH em 0Η2012) para dar 370 mg do Exemplo 11.

[137] Os seguintes compostos são preparados de modo semelhante: Exemplo 10 Uso terapêutico [138] Com base nas suas propriedades biológicas, os compostos de fórmula (I) de acordo com a invenção, ou os seus tautômeros, racematos, enantiômeros, diastereômeros, suas misturas e os sais de todas as formas acima mencionadas são adequados para o tratamento de doenças autoimun.es e alérgicas em que exibem um bom efeito inibitório sobre a BTK.

[139] Estas doenças incluem, por exemplo, artrite reumatoide, lúpus eritromatoso sistêmico, nefrite lúpica, doença de Sjorgen, vasculite, esclerodermia, asma, rinite alérgica, eczema alérgico, linfoma de células B, esclerose múltipla, artrite reumatoide juvenil, artrite idiopática juvenil, doença do enxerto contra hospedeiro, artrite psoriática, espondilite anquilosante e uveite.

[140] Os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados isoladamente ou em combinação com pelo menos uma outra substância ativa de acordo com a invenção, e/ou opcionalmente também em combinação com pelo menos uma outra substância farmacologicamente ativa. A outra substância farmacologicamente ativa pode ser um agente imunomodulador, um agente anti-inflamatório ou um agente quimioterapêutico. Exemplos de tais agentes incluem, mas não estão limitados a, ciclofosfamida, micofenolato (MMF), hidroxicloroquina, glucocorticoides, corticosteroides, imunossupressores, NSAIDs, inibidores específicos da enzima ciclooxigenase específica de COX-2 e não específica, antagonistas dos receptores do receptor de fator de necrose tumoral (TNF) e metotrexato.

[141] As preparações adequadas incluem, por exemplo, comprimidos, cápsulas, supositórios, soluções -particularmente soluções para injeção (s.c., i.v., i.m.) e infusão - elixires, emulsões ou pós dispersáveis. 0 teor do (s) composto (s) farmaceuticamente ativo (s) deve estar na faixa de 0,1 a 90% em peso, de preferência 0,5 a 50% em peso da composição como um todo, isto é, em quantidades que são suficientes para alcançar a faixa de dosagem especificada abaixo. As doses especificadas podem, se necessário, ser administradas várias vezes ao dia.

[142] Os comprimidos adequados podem ser obtidos, por exemplo, misturando a substância (s) ativa com excipientes conhecidos, por exemplo, diluentes inertes tais como carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou lactose, desintegrantes tais como amido de milho ou ácido alginico, ligantes tais como amido ou gelatina, lubrificantes tais como estearato de magnésio ou talco e/ou agentes para retardar a liberação, tais como carboximetilcelulose, acetato ftalato de celulose ou acetato de polivinila. Os comprimidos podem também compreender várias camadas.

[143] Os comprimidos revestidos podem ser preparados de acordo com os núcleos de revestimento produzidos analogamente aos comprimidos com substâncias normalmente utilizadas para revestimentos de comprimidos, por exemplo, colidona ou goma-laca, goma arábica, talco, dióxido de titânio ou açúcar. Para conseguir uma liberação retardada ou evitar incompatibilidades, o núcleo pode também consistir em um número de camadas. De modo semelhante, o revestimento do comprimido pode consistir num certo número de camadas para conseguir a liberação retardada, possivelmente utilizando os excipientes mencionados acima para os comprimidos.

[144] Os xaropes ou elixires contendo as substâncias ativas ou suas combinações de acordo com a invenção podem conter adicionalmente um edulcorante tal como sacarina, ciclamato, glicerol ou açúcar e um intensificador de sabor, por exemplo, um aromatizante tal como vanilina ou extrato de laranja. Podem também conter adjuvantes de suspensão ou espessantes tais como carboximetil celulose de sódio, agentes umectantes tais como, por exemplo, produtos de condensação de álcoois graxos com óxido de etileno, ou conservantes tais como p-hidroxibenzoatos.

[145] As soluções para injeção e infusão são preparadas da maneira habitual, por exemplo, com adição de agentes isotônicos, conservantes tais como p-hidroxibenzoatos, ou estabilizantes tais como sais de metais alcalinos de ácido etilenodiaminotetracético, opcionalmente utilizando emulsionantes e/ou dispersantes, enquanto que se a água é utilizada como diluente, por exemplo, solventes orgânicos podem ser opcionalmente utilizados como agentes de solvatação ou auxiliares de dissolução, e transferidos para frascos de injeção ou ampolas ou frascos de infusão.

[146] As cápsulas contendo uma ou mais substâncias ativas ou combinações de substâncias ativas podem, por exemplo, ser preparadas misturando as substâncias ativas com veículos inertes tais como lactose ou sorbitol e embalando em cápsulas de gelatina.

[147] Supositórios adequados podem ser feitos, por exemplo, misturando com veículos proporcionados para este fim, tais como gorduras neutras ou polietilenoglicol ou seus derivados.

[148] Excipientes que podem ser utilizados incluem, por exemplo, água, solventes orgânicos farmaceuticamente aceitáveis tais como parafinas (por exemplo, frações de petróleo), óleos vegetais (por exemplo, óleo de amendoim ou de gergelim), álcoois mono- ou polifuncionais (por exemplo, etanol ou glicerol), veículos tais como (por exemplo, ácido silicico altamente disperso e silicatos), açúcares (por exemplo, açúcar de cana, lactose e glicose), emulsionantes (por exemplo, lignina, licores de sulfito gasto, metilcelulose, amido e polivinilpirrolidona) e lubrificantes (por exemplo, estearato de magnésio, talco, ácido esteárico e lauril sulfato de sódio).

[149] As preparações são administradas pelos métodos usuais, de preferência por via oral ou transdérmica, mais preferencialmente por via oral. Para administração oral, os comprimidos podem naturalmente conter, além dos veículos acima mencionados, aditivos tais como citrato de sódio, carbonato de cálcio e fosfato dicálcico juntamente com vários aditivos tais como amido, de preferência amido de batata, gelatina e semelhantes. Além disso, lubrificantes tais como estearato de magnésio, lauril sulfato de sódio e talco podem ser utilizados ao mesmo tempo para o processo de formação de comprimidos. No caso de suspensões aquosas, as substâncias ativas podem ser combinadas com vários intensificadores de sabor ou colorantes além dos excipientes mencionados acima.

[150] Para utilização parentérica, podem ser utilizadas soluções das substâncias ativas com veículos líquidos adequados.

[151] A dosagem para utilização intravenosa é de 1 -1000 mg por hora, de preferência entre 5 e 500 mg por hora.

[152] Contudo, pode por vezes ser necessário afastar-se das quantidades especificadas, dependendo do peso corporal, da via de administração, da resposta individual ao fármaco, da natureza da sua formulação e do tempo ou intervalo durante o qual o fármaco é administrado. Assim, em alguns casos pode ser suficiente utilizar menos do que a dose mínima dada acima, enquanto em outros casos o limite superior pode ter de ser excedido. Ao administrar grandes quantidades, pode ser aconselhável dividi-las em uma série de doses menores espalhadas ao longo do dia.

Descrição de propriedades biológicas BTK v. Ensaio de Inibição de EGFR

Ensaio de ligação de Lanthscreen® Eu Kinase a BTK: [153] Um ensaio de ligação de Lanthscreen Eu Kinase (Life Technologies) é realizado para quantificar a capacidade dos compostos de teste de se ligarem a BTK. 0 ensaio baseia-se na ligação e deslocamento de Kinase Tracer # 236 marcado com Alexa Fluor647 ao sítio de ligação a ATP de BTK humano marcado com His com o comprimento total (Life Technologies cat # PV3587) com detecção de TR-FRET utilizando um anticorpo anti-His marcado com európio. O ensaio é montado em placas pretas de NBS de 384 poços de baixo volume (Corning) em que 2 nM de BTK e composto de teste em DMSO a várias concentrações são pré-incubados durante 30 min a 28 °C em tampão de ensaio constituído por 50 mM de HEPES, pH 7,4, MgCl2 10 mM, EGTA 1 mM. 100 μΜ de Na3VO4 e 0,01% de Brij 35. Em seguida, são adicionados 2 nM de anticorpo Eu-anti His e 30 nM Kinase Tracer e incubados durante 60 min a 28°C. Após a incubação, o sinal TR-FRET é lido em um leitor de placas Envision (excitação: 340 nm, emissões: 615 e 665 nm). A razão de emissão de 665:615 nm é calculada e convertida em POC em comparação com poços de controle e branco.

Inibição da produção de IL-6 em células B co-estimuladas com ODN 2006 e anti-hlgD

[154] As células CD19+B primárias (AllCells # PB010F) são descongeladas e plaqueadas em RPMI contendo 10% de HI FBS em uma placa de cultura de tecidos de 384 poços a 20.000 células/poço. As células são tratadas com o composto de teste (concentração final de DMSO a 0,5%) e incubadas durante 1 hora a 37 °C, 5% de C02. As células são então estimuladas com 5 ug/ml de IgD anti-humano de cabra F(ab') 2 (SouthernBiotech # 2032) e 2 uM de ODN 2006 (InvivoGen # tlrl-2006) e incubadas durante 18 a 24 horas a 37°C, 5% de CO2. A IL-6 no sobrenadante é medida utilizando o kit Meso Scale Discovery # K211AKB-6.

Inibição da autofosforilação de EGFR em células epiteliais humanas A431 estimuladas com fator de crescimento epitelial [155] As células A431 (ATCC # CRL-1555 FZ) são descongeladas e plaqueadas em DMEM contendo FBS a 10% em uma placa tratada com cultura de tecidos de 384 poços a 15.000 células/poço. Após incubação durante 24 horas a 37 °C, 5% de C02, as células são tratadas com o composto de teste (concentração final de 1% de DMSO) e incubadas durante 16 horas a 37°C, 5% de C02. EGF é adicionado (Millipore, 01-107) a uma concentração final de 60 ng/ml e incubado durante 10 minutos. O meio é removido, as células são lisadas, e o fosfo EGFR é medido (Meso Scale Diagnostics, N31CB-1) .

[156] Compostos representativos da presente invenção são testados e mostram inibição de BTK (Tabela I). Assim, eles têm a capacidade de demonstrar benefício clínico para o tratamento de distúrbios autoimunes. Adicionalmente, os compostos da presente invenção, tal como representados pelos exemplos na Tabela II, são seletivos para a inibição de BTK em relação a outras quinases relacionadas. Por exemplo, os dados apresentados na Tabela II demonstram que os compostos da presente invenção possuem elevado grau de seletividade de BTK em relação ao EGFR. Nesta tabela a atividade de BTK é medida pela produção de IL-6 em células B CD19+ primárias, e a atividade de EGFR é medida por fosforilação de EGFR em células A431.

Tabela II. Dados de seletividade de EGFR para compostos representativos da presente invenção [157] Por conseguinte, como pode ser apreciado por um especialista na técnica, os compostos da presente invenção têm um menor potencial de efeitos adversos devido à atividade fora do alvo, como demonstrado pela sua elevada seletividade contra EGFR em ensaios celulares.

Ensaios de inibição TEC e TXK, BTK v. BMX

[158] Os compostos preferidos da presente invenção exibem uma faixa de inibição seletiva de BTK sobre outras quinases relacionadas BMX, TEC e TXK em relação aos inibidores conhecidos de BTK. Os seguintes compostos são utilizados como compostos de teste: compostos da presente invenção e 1-[{3R)-3-[4-amino-3-(4-fenoxifenil)pirazolo [3,4-d]pirimidin-l-il]-1-piperidil]prop-2-en-l-ona (composto comparativo A, ibrutinib), 5-amino-l-(7-but-2-inoil-7-azaspiro [3.4]octan-2-il)-3-(4-isopropoxifenil) pirazole-4-carboxamida (composto comparativo B, Exemplo 168 WO2014/025976) , N-(3-(5-fluoro-2-(4 -(2-metoxietoxi) fenilamino)pirimidin-4-ilamino) fenil)acrilamida (composto comparativo C, Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 2013, 346:219-228) que são inibidores conhecidos de BTK.

Ensaios de BTK, BMX e TXK

Ensaio Z'-LYTE™ (Life Technologies): [159] O ensaio Z'-Lyte emprega um formato de enzima acoplada baseado em FRET e é baseado na sensibilidade diferencial de peptideos fosforilados e não fosforilados para a divagem proteolitica. A atividade de BTK recombinante humano (comprimento total, marcado com His), BMX (comprimento total, marcado com His) ou Txk (comprimento total, marcado com GST) é estimada medindo a fosforilação de um substrato de peptideo em FRET sintético marcado com cumarina e fluoresceina. As misturas de ensaio de 10 μΐ contêm HEPES 50 mM (pH 7,5), 0,01% Brij-35, MgCl2 10 mM, EGTA 1 mM, substrato de peptideo em FRET 2 μΜ (Peptideo Tyr 1 Ζ'-LYTE™ para BTK e BMX e Peptideo Tyr 06 para TXK) e quinase (1,3-9,3 ng de BTK, 2,8-45,0 ng de BMX, 2,3-93,6 ng de TXK). As incubações são realizadas a 22°C em placas de 384 poços de polipropileno preto (Corning). Antes do ensaio, a quinase, o substrato de péptido em FRET e os compostos de teste diluídos em série são pré-incubados em conjunto em tampão de ensaio (7,5 μΐ) durante 10 minutos e o ensaio é iniciado pela adição de 2,5 μΐ de tampão de ensaio contendo 4x ATP (25 μΜ para BTK, 100 μΜ para ambos BMX e TXK). Após a incubação de 60 minutos, as misturas de ensaio são temperadas pela adição de 5 μΐ de reagente de desenvolvimento Ζ'-LYTE™, e 1 hora mais tarde as emissões de cumarina (445 nm) e fluoresceína (520 nm) são determinadas após excitação a 400 nm utilizando um leitor de placas Envision. É determinada uma razão de emissão (445 nm/520 nm) para quantificar o grau de fosforilação do substrato.

Ensaio TEC

Ensaio de ligação Lanthscreen® Eu Kinase (Life Technologies): [160] 0 ensaio de ligação de Lanthscreen® Eu Kinase para BMX é realizado como descrito acima para BTK com a exceto que 1 nM de quinase recombinante humana de TEC (marcado com His) de comprimento total e 1 nM de Kinase Tracer # 178 marcado com Alexa Fluor647 foram utilizados em vez disso.

[161] Compostos representativos da presente invenção são avaliados quanto à inibição de BTK, BMX e TXK que medem a fosforilação de um substrato (ensaio Ζ'-LYTE™, Life Technologies) e TEC que medem o deslocamento de um "traçador" (ensaio Lanthscreen® Eu Kinase Binding, Life Tecnologias) .

Tabela III, seletividade de BMX, TEC e TXK para compostos da presente invenção ___________________________ [162] Estes resultados mostram que os compostos da presente invenção são seletivos para a inibição de BTK em comparação com outras quinases em pelo menos cerca de 10 vezes. Ver Tabela III

Ensaio In-Vivo - Comparação entre os compostos da presente invenção e os compostos comparativos A, Be C

[163] Em um estudo in vivo lado a lado, os compostos selecionados da presente invenção e os compostos comparativos A a C são avaliados em ratos conscientes instrumentados por telemetria para determinar os seus efeitos sobre a pressão arterial média (MAP) a doses igual ou superior às concentrações terapeuticamente relevantes. Os compostos seguintes são avaliados a 10 mg/kg po qd e 30 mg/kg po qd ao longo de cinco dias: Exemplos 12 e 22 da presente invenção e compostos comparativos A a C, isto é, 1-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-fenoxifenil)pirazolo[3,4-d] pirimidin-l-il]-1-piperidil]prop-2-en-l-ona (composto comparativo A , ibrutinib), 5-amino-l-(7-but-2-inoil~7-azaspiro[3.4]octan-2-il)-3-(4-isopropoxifenil) pirazole-4-carboxamida (composto comparativo B, WO2014/025976) e N-(3-(5-fluoro-2-(4-(2-metoxietoxi)fenilamino)pirimidin-4-ilamino) fenil)acrilamida (composto comparativo C, Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 2013, 346: 219-228).

Protocolo experimental [164] Todos os animais (equipados com telemetria) são alojados individualmente em gaiolas metabólicas. Os ratos são aclimatados à gaiola metabólica durante pelo menos 3 dias e depois são dosados com veículo durante até 4 dias. A pressão arterial, a frequência cardíaca e o peso corporal são coletados durante o período da linha de base e os animais são distribuídos aleatoriamente em 3 grupos com base nestes parâmetros (n = 8-9/grupo). Os grupos de tratamento são: veiculo e composto de teste (10 mg/kg po e 30 mg/kg po qd) ; os animais são tratados com composto durante 5 dias. No dia seguinte, os ratos são dosados novamente com o composto de teste e as amostras de plasma são coletadas através do sangramento da cauda para exposições do composto em múltiplos pontos de tempo pós-dose para capturar o Tmax (n = 3-9/grupo) . A pressão arterial média (MAP) e a frequência cardíaca (HR) são coletadas continuamente ao longo do estudo. As análises estatísticas são realizadas utilizando GraphPad Prism com base no valor médio de 24 horas durante cinco dias de administração do composto (ANOVA unidirecional com pós-teste de Dunnett versus veículo; p <0,05 é considerado estatisticamente significativo).

Tabela IV ____________________________________________ [165] Os resultados mostram que os compostos da presente invenção, por exemplo, os Exemplos 12 e 22, não provocam qualquer efeito sobre a MAP em ratos em comparação com os compostos comparativos A, B e C. Como pode ser apreciado por um especialista na técnica, alterações significativas na pressão arterial média em ratos poderíam ser indicativas de maior risco de eventos cardiovasculares adversos em um ambiente clínico. Por conseguinte, o fato de os compostos da presente invenção não exibirem efeitos estatisticamente significativos na MAP é surpreendente e inesperado. Ver Tabela IV e Figura 1.

[166] Todos os documentos de patentes e não patentes ou literatura citados neste pedido são aqui incorporados por referência na sua totalidade.

REIVINDICAÇÕES

Claims (22)

1. Composto caracterizado por ter a fórmula (I) em que: Cy é escolhido de cada Ri é independentemente escolhido de hidrogênio ou metila; R2 é L-Ar, em que Ar é fenila ou piridinila e cada um é opcionalmente substituído por um ou mais de halogênio, halo alquila C1-4, alquila C1-4, alcoxi C1-4, -CN, halo alcoxi C1-4, ou cicloalquila; L é -(CH2)- ou ~(CHCH3)-; Y é um espirociclo C6-C8 contendo 1 átomo de nitrogênio no anel, e é substituído por um R3; R3 é escolhido de cada R4 é independentemente escolhido de entre hidrogênio, alquila C1-4 ou cicloalquila C3-4; cada grupo definido acima para R1-R4 e Y pode ser, quando possível, parcial ou totalmente halogenado; ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Y é escolhido de ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Cy é Y é escolhido de em que R3 é cada R4 é independentemente escolhido de entre hidrogênio, alquila C1-4 ou cicloalquila C3_4; ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

4. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Cy é Y é escolhido de em que R3 é R4 é escolhido de hidrogênio, alquila C1-4 ou cicloalquila C3-4; ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do me smo.

5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Cy é Y é escolhido de em que R3 é R4 é escolhido de hidrogênio, alquila C1-4 ou cicloalquila C3_4; ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

6. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que cy é Y é escolhido de em que R3 é cada R4 é independentemente escolhido de entre hidrogênio, alquila Ci-4 ou cicloalquila C3-4; ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

7. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Cy é Y é escolhido de em que R3 é cada R4 é independentemente escolhido de entre hidrogênio, alquila Ci_4 ou cicloalquila C3_4; ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

8. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que cada R4 é independentemente escolhido de entre hidrogênio, metila ou ciclopropila; ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

9. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que R2 é L-Ar, em que Ar é fenila ou piridinila e cada um é opcionalmente substituído por um ou mais de halogêneo, halometila, metila, metoxi, -CN, halometoxi, ou ciclopropila; L é - (CH2) - ou - (CHCH3) - ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

10. Composto, caracterizado pelo fato de ser escolhido de: ou o sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

11. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser da fórmula: ou o sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

12. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser da fórmula: ou o sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

13. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser da fórmula: ou o sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

14. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser da fórmula: ou o sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

15. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser da fórmula: ou o sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

16. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser da fórmula: ou o sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

17. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser da fórmula: ou o sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

18. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser da fórmula: ou o sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

19. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser da fórmula: ou o sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

20. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser da fórmula: ou o sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

21. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 17 ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

22. Processo para a preparação de um composto conforme definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende: (i) acoplar um composto de fórmula A Com um composto de fórmula E para formar um composto de fórmula G em que cada Ri é independentemente escolhido de hidrogênio ou metila; X é um halogêneo; LG é um grupo de saída; e Y' é espirociclo Cg-Cg contendo 1 átomo de nitrogênio no anel capeado por grupo protetor; (ii) acoplamento do composto de fórmula (I—1) com um éster ou ácido borônico heterocíclico de fórmula C na presença de uma base adequada e catalisador de paládio seguido por hidrólise da nitrila a carboxamida para formar um composto de fórmula (II—1) em que cada grupo R do composto de fórmula C é H, alquila, ou ambos os grupos R estão ligados para formar um anel; Cy no composto de fórmula (II-l) é escolhido de entre R2 é L-Ar, em que Ar é fenila ou piridinila e cada um é opcionalmente substituído por um ou mais de halogênio, halo alquila Ci_4, alquila Ci_4, alcoxi Ci-4, -CN, halo alcoxi Ci_4, ou cicloalquila; L é -(CH2)- ou -(CHCH3)-; e (iii) desproteção do nitrogênio capeado do composto de fórmula (II-l) sob uma condição ácida e acoplamento do composto desprotegido de fórmula (II-l) com um composto escolhido de para formar o composto de fórmula (I) em que Y é espirociclo Cg-C8 contendo 1 átomo de nitrogênio no anel· ligado a R3, em que R3 é cada R4 é independentemente escolhido de hidrogênio, alquila Ci-4 ou cicloalquila C3_4; ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.