BR102015020665A2

BR102015020665A2 - Sistema fluorescente para sensor óptico de oxigênio dissolvido, método para preparar dispositivo de sensor óptico e uso de sistema fluorescente.

Info

Publication number: BR102015020665A2
Application number: BR102015020665-8A
Authority: BR
Inventors: Duque Martins Tatiana; Albino De Souza Geovany; Alves Da Costa Filho Paulo; Carlos Chaves Ribeiro Antônio
Original assignee: Universidade Federal De Goiás
Priority date: 2015-08-27
Filing date: 2015-08-27
Publication date: 2018-03-13
Also published as: BR102015020665B1

Abstract

a presente invenção trata de um sistema fluorescente sensível a quantidades distintas do gás oxigênio contido em amostras de água composto por nanotubos auto-organizados de peptídeo, preferencialmente derivado da difenilalanina e dopados com um corante fluorescente derivado da cumarina, podendo estar sorvidos em um substrato transparente. o sensor fornece resposta óptica relacionada à quantidade de gás oxigênio dissolvido em amostras de água por meio do efeito de supressão de fluorescência que o oxigênio exerce no sistema conjugado. a eficiente supressão da fluorescência demonstrada pelo sistema com o aumento da concentração de gás oxigênio dissolvido no meio, permite a correlação da perda de intensidade de fluorescência a variações mínimas de concentração de oxigênio. a resposta é registrada na forma de espectro de emissão de fluorescência em qualquer espectrofluorímetro disponível.

Description

(54) Título: SISTEMA FLUORESCENTE PARA SENSOR ÓPTICO DE OXIGÊNIO DISSOLVIDO, MÉTODO PARA PREPARAR DISPOSITIVO DE SENSOR ÓPTICO E USO DE SISTEMA FLUORESCENTE.

(51) Int. CL: G01N 31/22; G01N 33/18; G01N 21/64 (52) CPC: G01N 31/225,G01N 33/1886,G01N 21/64 (73) Titular(es): UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIÁS (72) Inventor(es): ΤΑΤΙΑΝΑ DUQUE MARTINS; GEOVANY ALBINO DE SOUZA; PAULO ALVES DA COSTA FILHO; ANTÔNIO CARLOS CHAVES RIBEIRO (74) Procurador(es): MILTON PEREIRA DA COSTA FILHO (57) Resumo: A presente invenção trata de um sistema fluorescente sensível a quantidades distintas do gás oxigênio contido em amostras de água composto por nanotubos autoorganizados de peptídeo, preferencialmente derivado da difenilalanina e dopados com um corante fluorescente derivado da cumarina, podendo estar sorvidos em um substrato transparente. O sensor fornece resposta óptica relacionada à quantidade de gás oxigênio dissolvido em amostras de água por meio do efeito de supressão de fluorescência que o oxigênio exerce no sistema conjugado. A eficiente supressão da fluorescência demonstrada pelo sistema com o aumento da concentração de gás oxigênio dissolvido no meio, permite a correlação da perda de intensidade de fluorescência a variações mínimas de concentração de oxigênio. A resposta é registrada na forma de espectro de emissão de fluorescência em qualquer espectrofluorímetro disponível.

H

1/10 “SISTEMA FLUORESCENTE PARA SENSOR ÓPTICO DE OXIGÊNIO DISSOLVIDO, MÉTODO PARA PREPARAR DISPOSITIVO DE SENSOR ÓPTICO E USO DE SISTEMA FLUORESCENTE”

Campo da Invenção [001] A presente invenção trata de um sistema fluorescente constituído de peptídeo auto-organizado contendo um corante como aditivo, podendo estar sorvido em substrato transparente, visando sua aplicação na construção de sensores ópticos, destinados preferencial mente ao uso na determinação de quantidades de gás oxigênio dissolvido em amostras de água.

Antecedentes da Invenção [002] Sensores ópticos de diferentes composições são descritos no estado técnica. Patentes anteriores relatam sensores construídos a partir de modificações químicas de nanotubos de carbono (patente n° US8454509-), filmes poliméricos (US2011183439-A1), clusters inorgânicos ou nanoestruturas metálicas, contendo corantes fluorescentes (CN101191794), quantum dots (CN103033495-A) e até derivados de cumarina (KR1134224-).

[003] A patente n° CN101191794, em especial, relata um sensor fluorescente constituído de material nanoestruturado unidimensionalmente no qual o analito é adsorvido química ou fisicamente e pode ser constituído de diversos materiais e corantes fluorescentes, descrevendo entre eles as cumarinas. Entretanto, não apresenta exemplos de realização de sua invenção utilizando esta classe de corantes.

[004] Também foram encontradas patentes que empregam peptídeos em sensores de proteínas (JP2012242304) com fins de detecção tumoral.

[005] Embora tenha sido encontrada patente que descreve um sensor para detectar analitos baseado em hospedeiro de polipeptídeo fluorescente, que contém sítio de ligação de íons metálicos (WO2012054648) cujo funcionamento se baseia na modulação da fluorescência pela ligação do analito no sítio, não foram encontradas patentes descrevendo sistemas luminescentes que empregassem nanoestruturas auto-organizadas de peptídeos combinadas a fluoróforos orgânicos para qualquer uso.

2/10 [006] Corantes derivados de cumarina são utilizados em sensores principalmente para detecção de cobre, porém esta classe de corantes não apresenta grande sensibilidade ao oxigênio.

[007] Surpreendentemente, os presentes inventores verificaram que corantes derivados de cumarina, quando em composição com os nanotubos de peptídeos descritos na presente invenção, resultam na formação de um complexo de carga que cria estados eletrônicos excitados intermediários não observados em seu estado anterior, e que são mais influenciados pelo oxigênio. Este sistema demonstrou uma eficiente supressão da fluorescência com o aumento da concentração de gás oxigênio dissoívido no meio, e é possível correlacionar a perda de intensidade de fluorescência a variações mínimas de concentração de oxigênio.

[008] Logo, a presente invenção descreve um novo sistema resultante de interação física não observada anteriormente entre um composto biológico auto-organizado com um corante orgânico, ambos biocompatíveis e que resultam em um material com propriedades fotofísicas distintas, em especial, bastante sensível à presença de oxigênio e com capacidade de formação de oxigênio singlete.

Breve Sumário da Invenção [009] A presente invenção trata de um sistema fluorescente constituído de peptídeo auto-organizado contendo um corante como aditivo, podendo estar sorvido em substrato transparente, visando sua aplicação na construção de sensores ópticos, destinados principalmente ao uso na determinação de quantidades de gás oxigênio dissolvido em amostras de água.

Descrição Detalhada da Invenção [010] Em um primeiro aspecto, a presente invenção se refere a um sistema fluorescente constituído de um peptídeo auto-organizado em formas de nanotubos contendo um corante como aditivo, resultando em um complexo sensível a quantidades distintas de gás oxigênio dissolvido em amostras de água.

3/10 [011] Preferencialmente, o presente sistema de nanotubos de peptídeo autoorganizado, que tem adicionados a ele os corantes da presente invenção pode estar sorvido em um substrato transparente, resultando em um dispositivo.

[012] Em um segundo aspecto, a presente inveção trata da aplicação do presente sistema na construção de sensores ópticos, destinados principalmente para a determinação de quantidades de gás oxigênio dissolvido em amostras de água.

[013] O presente sistema fluorescente se caracteriza por ser um sensor óptico cuja resposta é registrada na forma de espectro de emissão de fluorescência e este dado pode ser tratado para se obter a área espectral ou então a intensidade de bandas de emissão características e sua variação é relacionada à concentração de oxigênio presente na amostra de água.

[014] O peptídeo auto-organizado pode ser selecionado do grupo constituído de aminoãcidos aromáticos como fenilalanína, tirosina, triptofano e composições {dipeptídeos, tripeptídeos, oligopeptídeos) com quaisquer aminoácidos essenciais como valina, prolina, leucina, isoleucina, metionina, glicina, alanina, treonina, glutanína, asparagina, cisteína, arginina, serina, lisina, histidina, ácido aspárgico e ácido glutâmico, sortidos ou sequências repetitivas, desde que contenham ao menos um aminoácido aromático. Preferencialmente, o peptídeo é caracterizado por ser a difenilalanina.

[015] O corante aplicado ao sistema da presente invenção é selecionado do grupo compreendido por derivados de benzopirona, também chamada cumarina. Os derivados de cumarina preferenciais da presente invenção estão apresentados na figura 1 e são as aminocumarinas com grupos amino na posição 7 e grupos doadores na posição 3, uma vez que apresentam baixo rendimento de população dos estados eletrônicos triplete, preferencialmente cumarina-6, cumarina-7 [016] Os corantes aqui descritos, por si só, apresentam baixa sensibilidade ao oxigênio, no entanto, quando aplicados ao presente sistema foi observado surpreendente aumento desta sensibilidade, A variação da resposta à presença

4/10 do oxigênio resultante da combinação do corante à estrutura auto-organizada de peptideo pode ser verificada na figura 2.

[017] Em um aspecto mais detalhado, quando os corantes são aplicados ao presente sistema de peptídeos auto-organizados, se observa a formação de um complexo de transferência de carga entre o corante e os nanotubos autoorganizados de peptídeos por meio de interações físicas do tipo pi-stacking e eletrostáticas.

[018] Os processos fotofísicos de transferência de energia eletrônica entre o oxigênio e o sistema da presente invenção suprimem de forma eficiente a fluorescência do sistema, gerando, portanto, oxigênio singlete também com maior eficiência, conforme ilustra a figura 3. Na figura 3, o mecanismo de supressão da fluorescência do derivado de cumarina está descrito, em que o corante absorve radiação eletromagnética com energia suficiente para ser promovido ao estado eletrônico excitado singlete Si ou S2. O composto, então passa por consecutivos processos de desativação não radiativa (IC e RV) que contribuem para popular o estado eletrônico excitado singlete de menor energia, ou S1, de onde parte sua emissão de fluorescência. No entanto, na presença de moléculas de gás oxigênio, ocorre uma migração de energia na forma de um processo não radiativo de conversão inter-sistemas (ISC) que ocorre envolvendo o estado eletrônio excitado singlete de menor energia do corante( de onde partiría a fluorescência) e um estado vibracional isoenergético do estado eletrônico excitado singlete de menor energia (S1) do O2. Com isso, há geração de oxigênio singlete que, por ser altamente reativo, é conhecidamente bastante tóxico a células cancerígenas e tumores e, ao ser gerado desta maneira, por fotoexcitação de um corante com subsequente migração desta energia para moléculas de O2 presentes no ar atmosférico, é imediatamente aplicado em terapias fotodinâmicas. Como a energia necessária para gerar o oxigênio singlete é proveniente do estado excitado singlete do corante, a fluorescência é suprimida em graus que depdendem de fatores de probabilidade de ocorrência de todos esses processos, que são competitivos entre si.

5/10 [019] Com a eficiente supressão da fluorescência demonstrada pelo sistema com o aumento da concentração de gás oxigênio dissolvido no meio, é possível correlacionar a perda de intensidade de fluorescência à variações mínimas de concentração de oxigênio.

[020] Assim, a resposta do sistema da presente invenção é relacionada à quantidade de gás oxigênio existente na amostra de água por meio do efeito de supressão de fluorescência que o oxigênio exerce no sistema conjugado.

[021] A resposta é registrada na forma de espectro de emissão de fluorescência em qualquer espectrofluorímetro disponível.

[022] O sistema da presente invenção também responde eficaz e sensivelmente a oxigênio dissolvido em amostras de água mesmo em solução, sem a necessidade de ser depositado em substrato transparente.

[023] Portanto, em um terceiro aspecto da presente invenção, considerando que o mecanismo pelo qual a fluorescência do sistema é suprimida envolve a formação de oxigênio singlete, agente importante nas terapias fotodinâmicas, outro possível uso do sistema composto pelos nanotubos de peptídeo contendo os corantes derivados de cumarina, preferencialmente a cumarina-6 como aditivo em solução, é em terapia fotodinâmica.

[024] O dispositivo da presente invenção é produzido depositando-se, sobre um susbtrato transparente, uma solução do peptídeo auto-organizado e, sobre a mesma, uma solução do corante derivado de cumarina.

[025] O substrato transparente do dispositivo da presente invenção pode ser rígido ou flexível, de qualquer formato e dimensão, constituído de, porém não limitante a, vidro, quartzo, polissiloxano, poli-tereftalato entre outros.

[026] Entretanto, conforme já mencionado anteriormente, o sistema pode ser usado também na forma líquida (solução), com resultados similares.

[027] Para um substrato de 2cm x 2 cm, a solução do peptídeo pode ser aplicada, preferencialmente, em um volume de 1 a 70 microlitros, sendo o solvente preferencialmente selecionado do grupo constituído de 1,1,1,3,3,3hexafluor-propanol ou ácido trifluoracético. A concentração final da solução do peptídeo é preferencialmente de 0,9 a 10 mg mL’¹. A razão volume total de

6/10 solução por área do substrato, preferencialmente, deve ser mantida na faixa de 10 a 40 microlitros por centímetro quadrado.

[028] Para um substrato de área 4 cm², a solução do corante derivado de cumarina pode ser aplicada, preferencialmente, em um volume entre 1 a 100 microlitros, sendo o solvente preferencialmente selecionado do grupo constituído por álcoois e éteres e suas misturas com água em qualquer proporção, preferencialmente de 0,01 a 80% . A concentração final da solução do corante é preferecialmente de 0,000001 a 0,001 mol L'¹.

[029] Assim, é possível verificar que a fabricação do dispositivo da presente invenção é bastante simples e apresenta baixo custo, uma vez que utiliza quantidades em micro-escala para a fabricação de um único sensor.

[030] Adicionalmente, o dispositivo da presente invenção se torna ainda mais vantajoso pelo fato de poder ser reutilizado. Os testes descritos no presente documento indicaram que a integridade do protótipo foi mantida mesmo após 20 reusos subsequentes e sua sensibilidade, determinada em termos da integridade física do dispositivo, avaliada visualmente, e da reprodutibilidade espectral que, nas mesmas condições experimentais, também se manteve inalterada durante os testes de reuso do dispositivo.

[031] Outro diferencial da presente invenção se encontra no fato de que o sistema se mostrou mais sensível que o método eletroanalítico convencional usado para corroborar os dados obtidos na avaliação de sua ação, uma vez que o equipamento utilizado para as medidas eíetroanalíticas tem precisão de + 0,4 mg mL·¹ e que os dados coletados estão dentro da faixa de erro, conforme a tabela 1, enquanto que a resolução espectral do equipamento utilizado para a obtenção dos espectros de fluorescência de 0,5 nm, com as fendas selecionadas para as medidas (slits 0.5).

Tabela 1. Tabela de resultados das análises de água com peixe

	Método convencional	Fluorescência
Intervalo de tempo	OD (mg L'¹) Peixes	OD (mg L‘¹) Controle	Intensidade x 10® (u.a.)	Intensidade x 10⁶ (u.a.)

7/10

(h)			Peixes	Controle
0	6,0	6,2	9,72	8,01
7	4,7	5,0	13,61	12,91
24	5,1	5,6	13,95	13,67
31	4,4	4,5	14,31	14,31

[032] Os testes apresentados a seguir visam à demonstração não limitante da melhor forma de realização da presente invenção, bem como a demonstração de suas propriedades aqui mencionadas.

Exemplo 1. Fabricação de um protótipo de acordo com a presente invenção [033] Uma das realizações da presente invenção é a fabricação de um protótipo de dispositivo.

[034] Um dispositivo foi produzido depositando-se sobre um susbtrato transparente de vidro 10 microlitros de solução do peptídeo difenilalanina em 1,1,1,3,3,3-hexafluor-propanol na concentração de 2 mg mL-¹. Sobre a solução de difernilalanina, foram adicionados 10 microlitros de solução do derivado de cumarina, a cumarína-6 em etanol na concentração de 0,000001 mol L^_1 mais 10 microlitros de água deionizada. O substrato foi mantido em estufa de 30 a 50°C por 48 a 72 horas, para remoção do solvente. A figura 4 ilustra o dispositivo construído e a figura 5 apresenta a imagem de microscopia eletrônica obtida para o sistema assim preparado.

Exemplo 2. Utilização do dispositivo em amostra de agua com oxigênio dissolvido [035] No dispositivo construído conforme Exemplo 1 foram adicionados volumes de 50 microlitros de água proveniente de aquário contendo peixes (volume total 20 litros, contendo 10 espécimes Danio rerío (Cyprinidae)) para a determinação da quantidade de oxigênio presente nas amostras.

[036] Amostras foram tomadas de tempos em tempos, na faixa de 0 a 54 horas, após cessar a oxigenação do tanque contendo os espécimes. Amostras de

8/10 mesmo volume provenientes de um tanque similar, mas sem peixes Danio rerio, foram medidas como controle.

[037] A quantidade de oxigênio dissolvido nas amostras foi determinada por meio do registro de espectros de fluorescência do sistema na presença da amostra proveniente do aquário contendo os espécimes e por medida eletroanalítica simultânea e da mesma amostra. Estes dados estão mostrados no gráfico da figura 6. Observa-se que a intensidade de fluorescência aumenta conforme os espécimes consomem o oxigênio no tanque. Observa-se ainda que as medidas eletroanalíticas ocorrem dentro da faixa de erro do equipamento, que é de +/- 0,4 mg mL’¹ e que a variação observada não é muito confiável, ao passo que o erro na leitura da fluorescência é imperceptível, conferindo confiabilidade â análise. A concentração de O2 pode, então, ser relacionada à variação da intensidade de fluorescência do sistema e, de modo a independer do equipamento de aquisição e tratamento de sinal, elas podem se relacionar obedecendo a uma curva de Stern-Volmer, que é dependente apenas das características fluorescentes dos componentes do sistema e não mais do equipamento. A curva que relaciona, portanto intensidade de fluorescência e concentração de O2 para este sistema é apresentada na figura 7 Não se observou efeito na resposta por meio da ação de interferentes que possam se complexar ou alterar de qualquer forma a composição da camada ativa do protótipo e que estivessem presentes em água, mesmo contendo peixes.

[038] Os testes indicaram que a integridade do protótipo se manteve mesmo após 20 reusos subsequentes. Sua sensibilidade, determinada em termos da reprodutibilidade espectral nas mesmas condições experimentais também se manteve inalterada durante os testes de reuso do dispositivo.

[039] A reprodutibilidade da resposta foi averiguada utilizando-se protótipos distintos para determinar quantidades também distintas de oxigênio nas amostras de água.

Exemplo 3. Teste comparativo com o método convencional

9/10 [040] Os resultados obtidos com o sistema da presente invenção foram comparados com o método eletroanalítico convencional utilizando um oxímetro modelo Lutron DO-5519, de faixa de detecção de 0 - 20 mg mL¹ e precisão de +/- 0,4 mg mL’¹.

[041] O sistema se mostrou ainda mais sensível que o método eletroanalítico convencional usado para corroborar os dados, uma vez que é capaz de distinguir quantidades diferentes de 02 dissolvido com maior confiança que as leituras do oxímetro, que foram dentro de sua faixa de erro do aparelho, como também ilustra a figura 6 e a tabela 1.

Exemplo 4. Teste do sistema em solução [042] O sistema também respondeu eficaz e sensivelmente a oxigênio dissolvido em amostras de água mesmo em solução, sem a necessidade de ser depositado em substrato transparente, como mostra a figura 8.

Descrição das Figuras [043] A figura 1 apresenta a estrutura dos derivados de benzopirona (cumarina) com grupos amino na posição 7 e grupos doadores na posição 3 utilizados na presente invenção.

[044] A Figura 2 apresenta os espectros de fluorescência obtidos para A) solução de cumarina 6 10'⁶ mol L '¹ na presença água que recebeu oxigenação a uma vazão de 1,018 cm³ min^-1 em tempos que variaram de 0 a 2260 segundos e B) do sistema completo de nanoestruturas de difenilalanina autoorganizadas e contendo a cumarina-6, utilizadas na construção do sistema sensor.

[045] A Figura 3 apresenta o mecanismo da supressão de fluorescência da cumarina 6 por meio da reação com O2 presente nas amostras de água, resultando na geração de O2 singlete próprio para terapia fotodinâmica e com a subsequente supressão da fluorescência.

[046] A figura 4 apresenta uma representação esquemática do sensor construído de acordo com uma das realizações da presente invenção.

[047] A figura 5 apresenta fotograma obtido por Microscopia Eletrônica de Varredura do sistema de nanotubos de peptídeo auto-organizado, contendo 0

10/10 corante como aditivo e depositado sobre um substrato de quartzo. A imagem foi obtida em um Microscópio Eletrônico de Varredura (SEM) Jeol, modelo JSM 6610 acoplado a EDS da Thermo scientífic NSS Spectral Imaging. Uma camada de ouro (Au) foi depositada por meio de um equipamento Denton Vacuum, Desk V.

[048] A figura 6 apresenta um gráfico que relaciona a intensidade da fluorescência emitida pela amostra com a concentração de O2 que permanece dissolvido, de acordo com o tempo decorrido do consumo de O2 pelos espécimes no aquário.

[049] A figura 7 apresenta uma curva de Stern-Volmer que descreve o comportamento da supressão de fluorescência do sistema completo dependente da concentração do O2 e, portanto, relaciona a intensidade de fluorescência com a concentração do gás, descrita por uma função exponencial.

[050] A figura 8 apresenta os espectros de fluorescência obtidos para o sistema completo de nanoestrutura de peptídeo dopada com o corante derivado de cumarina na forma de A) solução e B) sensor sólido, construído a partir da deposição deste sistema sobre um substrato transparente.

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Claims

Reivindicações “SISTEMA FLUORESCENTE PARA SENSOR ÓPTICO DE OXIGÊNIO DISSOLVIDO, MÉTODO PARA PREPARAR DISPOSITIVO DE SENSOR ÓPTICO E USO DE SISTEMA FLUORESCENTE

1. Sistema fluorescente para sensor óptico de oxigênio dissolvido caracterizado pelo fato de ser constituído de um peptídeo auto-organizado contendo um corante derivado de cumarina como aditivo.
2. Sistema fluorescente de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do peptídeo auto-organizado ser apresentado em forma de nanotubos.
3. Sistema fluorescente de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do peptídeo auto-organizado ser selecionado do grupo constituído de difenilalanina, fenilalanina, triptofano ou qualquer outra composição (dipeptídeos, tripeptídeos, oligopeptídeos) com quaisquer aminoácidos essenciaiscom quaisquer aminoácidos essenciais como valina, prolina, leucina, isoleucina, metionina, glicína, alanina, treonina, glutanina, asparagina, císteína, arginina, serina, lisina, histidina, ácido aspárgico e ácido glutâmico, sortidos ou em sequências repetitivas, desde que contenham ao menos um aminoácido aromático.
4. Sistema fluorescente de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do corante derivado de cumarina ser selecionado do grupo constituído por amino-cumarinas na posição 7 e que contenham grupos doadores de elétrons na posição 7 como a cumarina-6 e cumarina-7.
5. Sistema fluorescente de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser construído sorvido a um substrato transparente.
6. Sistema fluorescente de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser utilizado na forma de solução.
7. Sistema fluorescente de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato do substrato transparente ser selecionado do grupo constituído de constituído de vidro, quartzo, polissiloxano, poli-tereftalato.
8. Sistema fluorescente de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato da resposta gerada ser registrada na forma de espectro de emissão de fluorescência em um espectrofluorímetro.

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9. Método para preparar dispositivo de sensor óptico de oxigênio dissolvido, caracterizado pelo fato de compreender as etapas: (i) depositar, sobre um susbtrato transparente, uma solução do peptídeo auto-organizado; e (ii) adicionar uma solução do corante derivado de cumarina, com remoção dos solventes.
10. Método de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato da solução de peptídeo auto-organizado ser aplicada em um volume de 1 a 70 microlítros, em um substrato de 4 cm² de área superficial.
11. Método de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato da solução de peptídeo que se auto-organiza utilizar solventes selecionados do grupo constituído de hexafluor-propanol ou ácido trifluoracético, em que a concentração final da solução do peptídeo seja de 0,9 a 10 mg mL'¹.
12. Método de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato da solução de corante derivado de cumarina ser aplicada em um volume de 1 a 70 microlítros, em partes iguais às adições de solução de peptídeo.
13. Método de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato da solução de corante derivado de cumarina utilizar solventes selecionados do grupo constituído por álcoois e éteres e suas misturas com água, nas proporções de 0 a 50%.
14. Método de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato da concentração final da solução do corante ser de 0,000001 a 0,001 mol L'¹.
15. Uso de sistema fluorescente de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser para a construção de sensores ópticos para a determinação de quantidades de gás oxigênio dissolvido em amostras de água.
16. Uso de sistema fluorescente de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser para a geração de oxigênio smglete.
17. Uso de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de ser empregado em terapias fotodinâmicas.

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FIG 1.

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Intensidade \ 10^e(u.a.) Intensidade x 10⁶ (u.a.)

450 500 550 600 650

Comprimento de onda (nm)