BR102015013231B1

BR102015013231B1 - PREPARATION OF MICROEMULSION DEVELOPED BASED ON COPAÍBA OIL FOR DENTAL USE

Info

Publication number: BR102015013231B1
Application number: BR102015013231-0A
Authority: BR
Inventors: Maria Aparecida Medeiros Maciel; Melyssa Lima De Medeiros; Rejane Andrade De Carvalho; Irami Araújo Filho; Amália Cínthia Meneses Do Rêgo; Marcia Martins Marques; Ciro Dantas Soares; Valdir Florêncio Da Veiga Junior
Original assignee: Maria Aparecida Medeiros Maciel
Priority date: 2015-05-18
Filing date: 2015-05-18
Publication date: 2021-03-23
Also published as: BR102015013231A2

Abstract

preparo de microemulsão a base de óleo de copaíba para uso odontológico. na presente invenção o óleo de copaíba (oc) foi veiculado em baixa concentração, um sistema automicroemulsionado do tipo smedds para aplicação na terapêutica odontológica. o bioproduto resultante foi denominado de biocopame e contem um tensoativo da classe dos sorbitanos e a fase oleosa foi preferencialmente preparada com oc em mistura com o óleo de girassol. a caracterização físico-quimica do bioformulado biocopame mostrou diâmetro em escala micrométrica das gotículas micelares, com favorecimento da liberação controlada e prolongada do princípio bioativo oc. a eficácia terapêutica e a biocompatibilidade do formulado biocopame foram comprovadas em experimento in vitro desenvolvido com células tronco da polpa dentária (dental pulp stem cells - dpsc2). por tratar-se de uma formulação automicroemulsificante do tipo smedds, contendo compostos considerados seguros para saúde humana em baixas concentrações, a via de administração pode ser oral ou tópica. a eficácia da liberação de oc veiculado neste formulado foi analisada sobre células-tronco da polpa dentária por simulação do contato indireto. biocopame mostrou biocompatibilidade nesse modelo experimental e está sendo reivindicado como um capeador pulpar.preparation of microemulsion based on copaiba oil for dental use. in the present invention, copaiba oil (oc) was carried in low concentration, a self-emulsified smedds-type system for application in dental therapy. the resulting bioproduct was called biocopame and contains a surfactant of the sorbitan class and the oil phase was preferably prepared with the dog in mixture with the sunflower oil. the physical-chemical characterization of the bioformulate biocopame showed a micrometric scale diameter of the micellar droplets, favoring the controlled and prolonged release of the oc bioactive principle. the therapeutic efficacy and biocompatibility of the formulated biocopame were proven in an in vitro experiment developed with dental pulp stem cells (dpsc2). since it is a self-emulsifying formulation of the smedds type, containing compounds considered safe for human health in low concentrations, the route of administration can be oral or topical. the efficacy of the release of OC conveyed in this formulation was analyzed on dental pulp stem cells by simulation of indirect contact. biocopame has shown biocompatibility in this experimental model and is being claimed as a pulp capper.

Description

PREPARATION OF MICROEMULSION DEVELOPED BASED ON COPAÍBA OIL FOR DENTAL USE

Field of the Invention

[001] A presente invenção está inserida na área da biotecnologia e consiste no invento de um bioformulado denominado de BIOCOPAME, desenvolvido à base de óleo de copaíba (0,2% a 2%) veiculado em um sistema coloidal do tipo SMEDDS (Self Microemulsifying Drug Delivery System) contendo Tween® 80 (18% a 20%) em meio aquoso neutro.[001] The present invention is inserted in the area of biotechnology and consists of the invention of a bioformulate called BIOCOPAME, developed based on copaiba oil (0.2% to 2%) transmitted in a colloidal system of the SMEDDS type (Self Microemulsifying Drug Delivery System) containing Tween® 80 (18% to 20%) in neutral aqueous medium.

[002] O fitoterápico BIOCOPAME tem aplicação na área odontológica e consiste em um bioproduto eficaz para o tratamento e prevenção de lesões que acometem os tecidos da cavidade oral, tais como: mucosite e doença periodontal, bem como procedimento de capeamento pulpar direto.[002] The BIOCOPAME phytotherapic has application in the dental field and consists of an effective bioproduct for the treatment and prevention of injuries that affect the tissues of the oral cavity, such as: mucositis and periodontal disease, as well as direct pulp capping procedure.

[003] Por estar sendo biodisponibilizado em um sistema coloidal que não causa nenhum dano agressivo em tratamento de curta duração, o fitomedicamento BIOCOPAME poderá despertar o interesse do setor industrial farmacêutico voltado para a área da odontologia.[003] Because it is being made available in a colloidal system that does not cause any aggressive damage in short-term treatment, the BIOCOPAME phytomedication may arouse the interest of the pharmaceutical industrial sector focused on the area of dentistry.

Object of the Invention and Justification of the Invention

[004] Em função do rico histórico medicinal do óleo de copaíba, em função de seus efeitos adversos, no presente invento objetivou-se a veiculação deste óleo em baixa concentração em um sistema coloidal carreador do tipo SMEDDS.[004] Due to the rich medicinal history of copaiba oil, due to its adverse effects, the aim of the present invention was to convey this oil in low concentration in a colloidal carrier system of the SMEDDS type.

[005] BIOCOPAME consiste em uma microemulsão SMEDDS que por ter sido desenvolvida à base de óleo de copaíba, que tem comprovada ação anti-inflamatória, cicatrizante e microbiológica poderá ser eficaz para o tratamento e prevenção de lesões que acometem os tecidos da cavidade oral.[005] BIOCOPAME consists of a SMEDDS microemulsion which, having been developed based on copaiba oil, which has a proven anti-inflammatory, healing and microbiological action may be effective for the treatment and prevention of injuries that affect the tissues of the oral cavity.

[006] Especificamente, BIOCOPAME contém uma mistura de óleo-resina de copaíba e óleo de girassol (0,2% a 2%) e sua elaboração está baseada em sistemas de entrega de fármacos polar do tipo óleo em água (O/A) com ação automicroemulsificante (sistema SMEDDS).[006] Specifically, BIOCOPAME contains a mixture of copaiba oil-resin and sunflower oil (0.2% to 2%) and its preparation is based on oil-in-water (O / W) polar drug delivery systems with auto-emulsifying action (SMEDDS system).

[007] No fitomedicamento BIOCOPAME o óleo de copaíba foi utilizado como principal bioconstituinte e se destaca por agregar valor biotecnológico ao uso medicinal do óleo de copaíba (OC), em função do comprovado aumento da eficácia de adsorção de filme micelar presente em microemulsões, e ainda, por OC ter sido veiculado com concentração reduzida (0,2% a 2%), ter liberação lenta e prolongada, mantendo-se a eficácia de ação biológica do óleo de copaíba.[007] In BIOCOPAME phytomedication, copaíba oil was used as the main bioconstituent and stands out for adding biotechnological value to the medicinal use of copaíba oil (OC), due to the proven increase in the effectiveness of micellar film adsorption present in microemulsions, and furthermore, because OC was served with reduced concentration (0.2% to 2%), it had a slow and prolonged release, maintaining the effectiveness of the biological action of copaiba oil.

[008] No presente invento se propõem que o óleo OC, veiculado em baixa concentração em mistura com óleo de girassol (OG), tenha sua eficácia terapêutica potencializada em função de estar veiculado em uma emulsão automicroestruturada. Portanto, funciona como reservatório de fármaco, exerce proteção contra ação enzimática e agentes oxidantes e tem ação terapêutica prolongada e controlada, com consequente redução de riscos toxicológicos.[008] In the present invention it is proposed that OC oil, delivered in low concentration in a mixture with sunflower oil (OG), has its therapeutic efficacy enhanced because it is delivered in an auto-structured emulsion. Therefore, it acts as a drug reservoir, protects against enzymatic action and oxidizing agents and has a prolonged and controlled therapeutic action, with a consequent reduction in toxicological risks.

[009] A partir de informações reportadas na literatura, não foram encontrados documentos antecipando ou sugerindo o uso de óleos de copaíba em mistura com o óleo de girassol, veiculados em baixas concentrações em um sistema microemulsionado do tipo SMEDDS, com aplicação na área da odontologia.[009] From information reported in the literature, no documents were found anticipating or suggesting the use of copaiba oils in a mixture with sunflower oil, carried in low concentrations in a microemulsified system of the SMEDDS type, with application in the area of dentistry .

Problem that the Invention Proposes to Solve

[010] A maioria das doenças que acometem o complexo maxilo-facial (especialmente a cavidade oral) são de origem inflamatória e estão associadas a uma complexa interação entre células do hospedeiro e microorganismos patogênicos. Infecções de curso clínico indolente aos processos degenerativos de maior complexidade resultam na perda tecidual, e consequentemente, na perda dentária, e suas etiopatogenias apresentam fatores comuns.[010] Most diseases that affect the maxillofacial complex (especially the oral cavity) are of inflammatory origin and are associated with a complex interaction between host cells and pathogenic microorganisms. Infections of a clinical course indolent to degenerative processes of greater complexity result in tissue loss, and consequently, tooth loss, and their etiopathogenesis have common factors.

[011] Em procedimentos de capeamento pulpar direto, realizados rotineiramente nos consultórios odontológicos, a ausência de infecção e a biocompatibilidade do material inserido, em contato direto com a polpa dentária, são decisivos no resultado positivo do tratamento odontológico.[011] In direct pulp capping procedures, performed routinely in dental offices, the absence of infection and the biocompatibility of the inserted material, in direct contact with the dental pulp, are decisive in the positive result of dental treatment.

[012] Neste contexto, a busca por novos recursos terapêuticos eficazes que possibilitem redução de toxicidade reforça o interesse de novas pesquisas. É importante destacar ainda, que a elevada incidência de complicações de enfermidades que acometem os tecidos da cavidade oral, bem como as que são decorrentes de lesões traumáticas ou de efeitos adversos de alguns fármacos, motivam a busca por atividade inventiva no setor industrial de biomateriais que tenham aplicação odontológica.[012] In this context, the search for new effective therapeutic resources that make it possible to reduce toxicity reinforces the interest of new research. It is also important to highlight that the high incidence of complications of diseases that affect the tissues of the oral cavity, as well as those resulting from traumatic injuries or adverse effects of some drugs, motivate the search for inventive step in the industrial sector of biomaterials that have dental application.

[013] Desta forma, o desenvolvimento de novos produtos utilizando recursos naturais, que possam restabelecer mais precocemente, a integridade tecidual da polpa dentária, surge como uma alternativa viável em novos procedimentos odontológicos.[013] Thus, the development of new products using natural resources, which can restore the dental pulp tissue integrity earlier, appears as a viable alternative in new dental procedures.

[014] O óleo de copaíba por apresentar propriedades bioquímicas anti-inflamatória, analgésica, antibacteriana e cicatrizante, representa uma alternativa medicinal viável para fabricação biotecnológica de fitoterápicos objetivando eficácia terapêutica com redução de riscos toxicológicos.[014] Copaiba oil, as it has biochemical anti-inflammatory, analgesic, antibacterial and healing properties, represents a viable medicinal alternative for the biotechnological manufacture of herbal medicines aiming at therapeutic efficacy with reduction of toxicological risks.

[015] Neste cenário, estudos preliminares reportaram efeitos adversos do óleo de copaíba utilizado na forma in natura, tendo sido comprovado que este óleo-resina provoca atraso no processo de reparação tecidual. No entanto, observou-se que ferimentos tratados com OC administrado em concentrações reduzidas, combate processos inflamatórios com significante aumento da atividade fibroblástica (BRITO et al., 1999; COMELLI Jr. et al., 2009; ESTEVÃO et al., 2013, 2009; GELMINI et al., 2013; MASSON-MEYERS et al., 2013a, 2013b; MILLAS et al., 2014; SILVA et al., 2012, 2009; YASOJIMA et al., 2013).[015] In this scenario, preliminary studies have reported adverse effects of copaiba oil used in its fresh form, and it has been proven that this oil-resin causes a delay in the tissue repair process. However, it was observed that wounds treated with OC administered in low concentrations, fight inflammatory processes with a significant increase in fibroblastic activity (BRITO et al., 1999; COMELLI Jr. et al., 2009; ESTEVÃO et al., 2013, 2009 ; GELMINI et al., 2013; MASSON-MEYERS et al., 2013a, 2013b; MILLAS et al., 2014; SILVA et al., 2012, 2009; YASOJIMA et al., 2013).

[016] No presente invento, OC encontra-se veiculado em baixa concentração, em um sistema coloidal de liberação controlada do tipo SMEDDS (microemulsão autoemulsificante) e, portanto, em função do comprovado aumento da eficácia de adsorção de filmes micelares e suas eficácias terapêuticas (KIM et al., 2010; MISHRA et al., 2014; PIERI et al., 2010; SHUKLA et al., 2012), o fitoterápico BIOCOPAME agrega valor biotecnológico ao óleo de copaíba.[016] In the present invention, OC is served in low concentration, in a colloidal controlled-release system of the SMEDDS type (self-emulsifying microemulsion) and, therefore, due to the proven increase in the adsorption efficiency of micellar films and their therapeutic efficacy. (KIM et al., 2010; MISHRA et al., 2014; PIERI et al., 2010; SHUKLA et al., 2012), the herbal medicine BIOCOPAME adds biotechnological value to copaiba oil.

[017] Filmes em forma de micelas observados em microemulsões [O/A, A/O, SMEDDS ou bicontínua (O/A/O ou A/O/A)] são característicos de sistemas coloidais termodinamicamente estáveis e vêm sendo amplamente utilizados na área biotecnológica como sistemas de liberação controlada de fármacos com comprovada eficácia terapêutica. Possibilitam, ainda, a melhoria da solubilidade de fármacos ampliando suas biodisponibilizações (CHENG et al., 2015; DAMASCENO et al., 2011; MAHMOUD et al., 2013; OLIVEIRA et al., 2004; REDDY et al., 2015; ROSSI et al., 2007; 2006; SONI et al., 2014).[017] Micelle-shaped films observed in microemulsions [O / A, A / O, SMEDDS or bicontinuous (O / A / O or A / O / A)] are characteristic of thermodynamically stable colloidal systems and have been widely used in biotechnological area as controlled drug delivery systems with proven therapeutic efficacy. They also make it possible to improve the solubility of drugs by increasing their bioavailability (CHENG et al., 2015; DAMASCENO et al., 2011; MAHMOUD et al., 2013; OLIVEIRA et al., 2004; REDDY et al., 2015; ROSSI et al., 2007; 2006; SONI et al., 2014).

[018] A solubilidade é um dos parâmetros mais importantes para atingir a concentração desejada de droga na circulação sistêmica e otimização da resposta terapêutica. Neste contexto, os sistemas coloidais nano e miroestruturados, são aplicados como técnicas modernas para o avanço biotecnológico de fármacos (DIAS et al., 2012; MEGHANI et al., 2013; OLIVEIRA et al., 2004; ROSSI et al., 2007; SUDHEER et al., 2012; ZHANG et al., 2015).[018] Solubility is one of the most important parameters to achieve the desired drug concentration in the systemic circulation and optimization of the therapeutic response. In this context, nano and myostructured colloidal systems are applied as modern techniques for the biotechnological advancement of drugs (DIAS et al., 2012; MEGHANI et al., 2013; OLIVEIRA et al., 2004; ROSSI et al., 2007; SUDHEER et al., 2012; ZHANG et al., 2015).

[019] A constatação de que drogas com baixa solubilidade aquosa quando co-administradas com refeições ricas em lipídios melhoravam a biodisponibilidade oral, indicaram o interesse em estratégias mais eficazes, baseadas em otimizar a biodisponibilidade e absorção de fármacos.[019] The finding that drugs with low aqueous solubility when co-administered with lipid-rich meals improved oral bioavailability, indicated the interest in more effective strategies, based on optimizing the bioavailability and absorption of drugs.

[020] Desta forma, sistemas de liberação controlada de drogas baseados em lipídios encapsulados em nano e microemulsões do tipo apolar (A/O) apresentaram sucesso mercadológico; alguns exemplos específicos são destacados a seguir.[020] In this way, controlled drug delivery systems based on nano-encapsulated lipids and non-polar microemulsions (A / O) have shown market success; some specific examples are highlighted below.

[021] SandimmuneNeoralTM(Ciclosporina), NovartisLaboratories, Fortovase™ (Saquinavir) e Roche Laboratories (SHUKLA P, PRAJAPATI SK, SHARMA UK, SHIVHARE S, AKHTAR AA. Review on self-microemulsifying drug delivery system: an approach to enhance the oral bioavailability of poorly water soluble drugs. 2012).[021] SandimmuneNeoralTM (Ciclosporin), NovartisLaboratories, Fortovase ™ (Saquinavir) and Roche Laboratories (SHUKLA P, PRAJAPATI SK, SHARMA UK, SHIVHARE S, AKHTAR AA. Review on self-microemulsifying drug delivery system: an approach to enhance the oral bioavailability of poorly water soluble drugs. 2012).

[022] A absorção da indometacina via administração oral do seu bioformulado coloidal do tipo SMEDDS, ampliou sua eficácia de ação (KIM JY, KU YS. Enhanced absorption of indomethacin after oral or rectal administration of a self-emulsifying system containing indomethacin to rats. 2000).[022] The absorption of indomethacin via oral administration of its colloidal bioformulate of the SMEDDS type, has increased its effectiveness of action (KIM JY, KU YS. Enhanced absorption of indomethacin after oral or rectal administration of a self-emulsifying system containing indomethacin to rats. 2000).

[023] Nanoemulsões bicontínuas do tipo A/O/A foram preparadas e avaliadas como bioformulados citotóxicos (SIGWARD E, MIGNET N, RAT P, DUTOT M, MUHAMED S, GUIGNER JM, SCHERMAN D, BROSSARD D, CRAUSTE-MANCIET S. Formulation and cytotoxicity evaluation of new self-emulsifying multiple W/O/W nanoemulsions. 2013).[023] A / O / A type bicontinuous nanoemulsions were prepared and evaluated as cytotoxic bioformulates (SIGWARD E, MIGNET N, RAT P, DUTOT M, MUHAMED S, GUIGNER JM, SCHERMAN D, BROSSARD D, CRAUSTE-MANCIET S. Formulation and cytotoxicity evaluation of new self-emulsifying multiple W / O / W nanoemulsions. 2013).

[024] Nanoemulsões são utilizadas como veículos de cosméticos (ROCHA FILHO PA, MARUNO M, OLIVEIRA B, BERNARDI DS, GUMIERO VC, PEREIRA TA. Nanoemulsions as a vehicle for drugs and cosmetics. 2014).[024] Nanoemulsions are used as cosmetic vehicles (ROCHA FILHO PA, MARUNO M, OLIVEIRA B, BERNARDI DS, GUMIERO VC, PEREIRA TA. Nanoemulsions as a vehicle for drugs and cosmetics. 2014).

[025] De forma abrangente, existe a necessidade de desenvolvimento biotecnológico para sistematizar a utilização de produtos bioativos em geral, objetivando-se otimizar a eficácia de ação, minimizar riscos toxicológicos ou ampliação da biodisponibilidade, sem que haja comprometimento da sua eficácia terapêutica (CHENG G, HU R, YE L, WANG B, GUI Y, GAO S, LI X, TANG J. Preparation and in vitro/in vivo evaluation of puerarin solid selfmicroemulsifying drug delivery system by spherical crystallization technique. 2015; REDDY S, RUDRA R, HAQ F. Formulationand evaluation of solid self-nanoemulsifying drug delivery system (S-SNEDDS) of ritonavir drug. 2015).[025] In a comprehensive way, there is a need for biotechnological development to systematize the use of bioactive products in general, aiming to optimize the effectiveness of action, minimize toxicological risks or increase bioavailability, without compromising its therapeutic effectiveness (CHENG G, HU R, YE L, WANG B, GUI Y, GAO S, LI X, TANG J. Preparation and in vitro / in vivo evaluation of puerarin solid selfmicroemulsifying drug delivery system by spherical crystallization technique. 2015; REDDY S, RUDRA R , HAQ F. Formulationand evaluation of solid self-nanoemulsifying drug delivery system (S-SNEDDS) of ritonavir drug. 2015).

[026] No presente invento, a eficácia de liberação controlada do óleo de copaíba foi avaliada em modelo experimental in vitro na manutenção da viabilidade celular. Para tanto, foram utilizadas células tronco da polpa dentária (Dental Pulp Stem Cells - DPSC2) e a viabilidade celular foi determinada pela atividade mitocondrial (ensaio de MTT).[026] In the present invention, the efficacy of controlled release of copaiba oil was evaluated in an experimental model in vitro in maintaining cell viability. For this purpose, dental pulp stem cells (Dental Pulp Stem Cells - DPSC2) were used and cell viability was determined by mitochondrial activity (MTT assay).

[027] Desta forma, foi possível confirmar que o bioproduto BIOCOPAME é biocompatível neste modelo experimental. Em função da ação mitocrondial de OC veiculado em baixas concentrações, na formulação denominada BIOCOPAME. Este fitomedicamento encontra-se disponibilizado para uso odontológico na terapêutica de mucosite, doença periodontal e no capeamento pulpar direto.[027] In this way, it was possible to confirm that the bioproduct BIOCOPAME is biocompatible in this experimental model. Due to the mitochondial action of OC transmitted in low concentrations, in the formulation called BIOCOPAME. This phytomedication is available for dental use in the treatment of mucositis, periodontal disease and direct pulp capping.

Fundamentals of the Invention

[028] A indústria de biomateriais têm desenvolvido novos produtos com indicação para o capeamento pulpar direto. No entanto, alguns não apresentam biocompatibilidade eficaz com as células do tecido pulpar e, portanto, não são competitivos no mercado odontológico.[028] The biomaterials industry has developed new products with an indication for direct pulp capping. However, some do not have effective biocompatibility with pulp tissue cells and, therefore, are not competitive in the dental market.

[029] As células tronco da polpa dentária (Dental Pulp Stem Cell - DPSC2), por exemplo, são derivadas do tecido pulpar de humanos adultos e uma das suas características mais relevantes consiste na capacidade de diferenciação em células neurais, osteoblastos, condroblastos, adipócitos e miócitos.[029] The dental pulp stem cells (Dental Pulp Stem Cell - DPSC2), for example, are derived from the pulp tissue of adult humans and one of its most relevant characteristics is the ability to differentiate into neural cells, osteoblasts, chondroblasts, adipocytes and myocytes.

[030] Estudos científicos foram amplamente desenvolvidos para modelos de cultivo celular e a biocompatilidade de diversos compostos foram avaliados nas DPSC (ESMERALDO et al., 2013; GRONTHOS et al., 2000; 2002; 2011; HAN et al., 2014; LEONG et al., 2012; PARANJPE et al., 2010).[030] Scientific studies have been widely developed for cell culture models and the biocompatibility of several compounds has been evaluated in the DPSC (ESMERALDO et al., 2013; GRONTHOS et al., 2000; 2002; 2011; HAN et al., 2014; LEONG et al., 2012; PARANJPE et al., 2010).

[031] Considerando-se os compostos bioativos advindos dos recursos naturais aplicados no desenvolvimento de biomateriais aplicados na área odontológica, pesquisadores da engenharia tecidual estão investindo em pesquisas de produtos naturais que possuam atividades cicatrizante, anti-inflamatória e analgésica, objetivando a produção de novos fitoterápicos de uso odontológico (ESMERALDO et al., 2013; PARANJPE et al., 2010).[031] Considering the bioactive compounds from natural resources applied in the development of biomaterials applied in the dental field, tissue engineering researchers are investing in research on natural products that have healing, anti-inflammatory and analgesic activities, aiming at the production of new herbal medicines for dental use (ESMERALDO et al., 2013; PARANJPE et al., 2010).

[032] Neste contexto, para utilização endodôntica destaca-se o uso do óleo de copaíba que foi avaliado na prevenção e no tratamento de doenças da cavidade oral, inclusive as de origem infeciosas (DIAS-DA-SILVA et al., 2013; GARCIA et al., 2011; GARRIDO et al., 2010; SOUZA et al., 2011).[032] In this context, for endodontic use, the use of copaiba oil, which was evaluated in the prevention and treatment of diseases of the oral cavity, including those of infectious origin, stands out (DIAS-DA-SILVA et al., 2013; GARCIA et al., 2011; GARRIDO et al., 2010; SOUZA et al., 2011).

[033] Especificamente, as propriedades físico-químicas de um cimento endodôntico contendo Copaifera multijuga foram avaliadas e comparadas a três outros produtos comercializados. No referido estudo, os autores concluíram que, nos ensaios realizados, as características físico químicas do cimento atenderam aos critérios exigidos pela American Dental Association (GARRIDO AD, LIA RC, FRANÇA SC, DA SILVA JF, ASTOLFI-FILHO S, SOUSA-NETO MD. Laboratory evaluation of the physicochemical properties of a new root canal sealer based on Copaifera multijuga oil-resin. 2010).[033] Specifically, the physical-chemical properties of an endodontic cement containing Copaifera multijuga were evaluated and compared to three other products sold. In that study, the authors concluded that, in the tests carried out, the physical and chemical characteristics of the cement met the criteria required by the American Dental Association (GARRIDO AD, LIA RC, FRANCE SC, DA SILVA JF, ASTOLFI-FILHO S, SOUSA-NETO MD Laboratory evaluation of the physicochemical properties of a new root canal sealer based on Copaifera multijuga oil-resin.

[034] Nessa perspectiva, a biocompatibilidade no tecido conjuntivo de outros dois cimentos endodônticos, contendo óleo de copaíba, foi analisada e comprovada em estudo in vivo, em modelo experimental em ratos (GARCIA L, CRISTIANE S, WILSON M, SORAYA M, LOPES RA, MÔNICA R, DE FREITAS O. Biocompatibility assessment of pastes containing copaiba oil resin, propolis, and calcium hydroxide in the subcutaneous tissue of rats. 2011).[034] In this perspective, the biocompatibility in the connective tissue of two other endodontic cements, containing copaiba oil, was analyzed and proven in an in vivo study, in an experimental model in rats (GARCIA L, CRISTIANE S, WILSON M, SORAYA M, LOPES RA, MÔNICA R, DE FREITAS O. Biocompatibility assessment of pastes containing copaiba oil resin, propolis, and calcium hydroxide in the subcutaneous tissue of rats. 2011).

[035] Os efeitos do óleo de copaíba administrado por via tópica e oral, no processo de reparo alveolar após exodontia, foram avaliados em estudo experimental em ratos. Os resultados das análises histopatológicas demonstraram uma melhor cicatrização óssea alveolar nos grupos tratados. No entanto, os animais submetidos à administração por via tópica apresentaram ulcerações na mucosa oral, redução da migração epitelial e as fibras colágenas estavam dispostas de forma desordenada e com menor espessura, quando comparadas ao grupo tratado por via oral (DIAS-DA-SILVA MA, PEREIRA AC, MARIN MC, SALGADO MA. The influence of topic and systemic administration of copaiba oil on the alveolar wound healing after tooth extraction in rats. 2013).[035] The effects of copaiba oil administered topically and orally, in the alveolar repair process after extraction, were evaluated in an experimental study in rats. The results of histopathological analyzes showed better alveolar bone healing in the treated groups. However, the animals submitted to topical administration presented ulcerations in the oral mucosa, reduced epithelial migration and the collagen fibers were arranged in a disorderly manner and with less thickness, when compared to the group treated orally (DIAS-DA-SILVA MA , PEREIRA AC, MARIN MC, SALGADO MA.The influence of topic and systemic administration of copaiba oil on the alveolar wound healing after tooth extraction in rats. 2013).

[036] Recentemente, a atividade anticariogênica de diterpenos e sesquiterpenos isolados do óleo-resina de copaíba, foi avaliada in vitro. As análises dos resultados deste estudo mostraram que o ácido copálico apresentou maior atividade, inibindo o crescimento bacteriano dos principais microrganismos responsáveis pela carie dentária (SOUZA AB, MARTINS CH, SOUZA MG, FURTADO NA, HELENO VC, DE SOUSA JP, ROCHA EM, BASTOS JK, CUNHA WR, VENEZIANI RC, AMBRÓSIO SR. Antimicrobial activity of terpenoids from Copaifera langsdorffii Desf. against cariogenic bacteria. 2011).[036] Recently, the anticariogenic activity of diterpenes and sesquiterpenes isolated from copaiba oil-resin, has been evaluated in vitro. The analysis of the results of this study showed that copalic acid showed greater activity, inhibiting the bacterial growth of the main microorganisms responsible for dental caries (SOUZA AB, MARTINS CH, SOUZA MG, FURTADO NA, HELENO VC, DE SOUSA JP, ROCHA EM, BASTOS JK, CUNHA WR, VENEZIANI RC, AMBRÓSIO MR Antimicrobial activity of terpenoids from Copaifera langsdorffii Desf. Against cariogenic bacteria. 2011).

[037] Considerando, ainda, o efeito antimicrobiano nas enfermidades da cavidade oral, o óleo de copaíba foi tão eficaz quanto à clorexidina como agente inibidor do crescimento do Streptococcus mutans, principal agente etiológico da cárie (PIERI FA, MUSSI MC, FIORINI JE, MOREIRA MA, SCHNEEDORF JM. Bacteriostatic effect of copaiba oil (Copaifera officinalis) against Streptococcus mutans. 2012).[037] Considering also the antimicrobial effect in diseases of the oral cavity, copaiba oil was as effective as chlorhexidine as an inhibitor of the growth of Streptococcus mutans, the main etiologic agent of caries (PIERI FA, MUSSI MC, FIORINI JE, MOREIRA MA, SCHNEEDORF JM. Bacteriostatic effect of copaiba oil (Copaifera officinalis) against Streptococcus mutans. 2012).

[038] O ácido copálico, também foi considerado o composto mais ativo na inibição do principal patógeno da doença periodontal, a bactéria Porphyromonas gingivalis, além disso, não exibiu citotoxicidade para os fibroblastos humanos (SOUZA AB, DE SOUZA MG, MOREIRA MA, MOREIRA MR, FURTADO NA, MARTINS CH, BASTOS JK, DOS SANTOS RA, HELENO VC, AMBROSIO SR, VENEZIANI RC. Antimicrobial evaluation of diterpenes from Copaifera langsdorffii oleoresin against periodontal anaerobic bacteria. 2011).[038] Copalic acid was also considered the most active compound in inhibiting the main pathogen of periodontal disease, the bacterium Porphyromonas gingivalis, in addition, it did not exhibit cytotoxicity to human fibroblasts (SOUZA AB, DE SOUZA MG, MOREIRA MA, MOREIRA MR, FURTADO NA, MARTINS CH, BASTOS JK, DOS SANTOS RA, HELENO VC, AMBROSIO SR, VENEZIANI RC Antimicrobial evaluation of diterpenes from Copaifera langsdorffii oleoresin against periodontal anaerobic bacteria. 2011).

[039] Neste contexto, outro antimicrobiano oral, a base de óleo de copaíba (OC), foi testado em cães e seus efeitos em doença periodontal, foram avaliados e comparados ao controle clorexidina. Os resultados sugeriram que OC pode ser considerado um possível substituto da clorexidina na terapia antimicrobiana da cavidade oral (PIERI FA, MUSSI MC, FIORINI JE, SCHNEEDORF JM. Efeitos clínicos e microbiológicos do óleo de copaíba (Copaifera officinalis) sobre bactérias formadoras de placa dental em cães. 2010).[039] In this context, another oral antimicrobial, based on copaiba oil (OC), was tested in dogs and its effects in periodontal disease, were evaluated and compared to the chlorhexidine control. The results suggested that OC can be considered a possible substitute for chlorhexidine in antimicrobial therapy of the oral cavity (PIERI FA, MUSSI MC, FIORINI JE, SCHNEEDORF JM. Clinical and microbiological effects of copaiba oil (Copaifera officinalis) on dental plaque-forming bacteria in dogs. 2010).

[040] O óleo de copaíba, em estudo in vitro, favoreceu a proliferação celular sobre as células do tipo MDBK (Madin Darby Bovine Kidney), de forma dose e efeito proliferativo (NOGUEIRA E, NOVAES A, SANCHEZ C, ANDRADE C. Avaliação do efeito do óleo-resina de copaíba (Copaifera sp.) na proliferação celular in vitro. 2012).[040] Copaiba oil, in an in vitro study, favored cell proliferation on MDBK-type cells (Madin Darby Bovine Kidney), in a dose and proliferative manner (NOGUEIRA E, NOVAES A, SANCHEZ C, ANDRADE C. Evaluation of the effect of copaiba oil-resin (Copaifera sp.) on cell proliferation in vitro. 2012).

[041] Com relação aos estudos que avaliam a formação de sistemas coloidais contendo óleo de copaíba, encontram-se reportados sistemas biológicos do tipo nano e microemulsão, obtidos a partir de uma mistura de tensoativos (Span® 80 e Tween® 20) em meio aquoso, tendo apresentado atividade antibacteriana para o tratamento de infecções ocasionadas por Streptococcus epidermidis, causadas por dispositivos biomédicos, tais como: cateteres, próteses articulares e válvulas cardíacas (XAVIER JUNIOR, 2011; XAVIER JUNIOR et al., 2010; 2009; SILVA et al., 2010; 2009).[041] Regarding the studies that evaluate the formation of colloidal systems containing copaiba oil, biological systems of the nano and microemulsion type have been reported, obtained from a mixture of surfactants (Span® 80 and Tween® 20) in medium aqueous, having shown antibacterial activity for the treatment of infections caused by Streptococcus epidermidis, caused by biomedical devices, such as: catheters, joint prostheses and heart valves (XAVIER JUNIOR, 2011; XAVIER JUNIOR et al., 2010; 2009; SILVA et al ., 2010; 2009).

[042] No estudo de Alencar et al. (2015) investigou-se a atividade antimicrobiana do óleo essencial obtido do óleo-resina de copaíba (Copaifera langsdotffii) e do óleo de rã-touro (Rana catesbeiana Shaw) os quais foram veiculados em sistemas emulsionados nanoestruturados, objetivando a avaliação em experimentos realizados com bactérias associadas a doenças de pele. O teste de concentração inibitória mínima demonstrou atividade antimicrobiana contra cepas de Staphylococcus, Pseudomonas e Candida.[042] In the study by Alencar et al. (2015) the antimicrobial activity of the essential oil obtained from the copaiba oil-resin (Copaifera langsdotffii) and bullfrog oil (Rana catesbeiana Shaw) was investigated, which were carried out in nanostructured emulsified systems, aiming at the evaluation in experiments carried out with bacteria associated with skin diseases. The minimum inhibitory concentration test demonstrated antimicrobial activity against strains of Staphylococcus, Pseudomonas and Candida.

[043] No referido estudo, os autores puderam concluir que as emulsões nanoestruturadas de óleo resinoso e essencial de copaíba melhoraram a atividade antimicrobiana dos óleos puros, especialmente contra Staphylococcus e Candida, resistentes a azóis.[043] In the referred study, the authors were able to conclude that nanostructured emulsions of resinous and essential oil of copaiba improved the antimicrobial activity of pure oils, especially against Staphylococcus and Candida, resistant to azoles.

[044] A emulsão de óleo rã-touro nanoestruturada apresentou efeito antimicrobiano menor quando comparado com as amostras de copaíba, porém mostrou uma atividade antibiofilme significativa (p <0,05), melhor que o observado para o óleo-resina de copaíba veiculado em nonoemulsão.[044] The nanostructured bullfrog oil emulsion showed less antimicrobial effect when compared to the copaiba samples, but showed significant antibiofilm activity (p <0.05), better than that observed for copaiba oil-resin carried in nonoemulsion.

[045] Finalmente, os autores afirmaram que as emulsões nanoestruturadas à base de óleo essencial extraído do óleo-resina de copaíba, bem como óleo de rã-touro poderão ser eficazes para tratamento de infecções e podem ser utilizadas para incorporar outros medicamentos antimicrobianos (ALENCAR EN, XAVIER-JUNIOR FH, MORAIS ARV, DANTAS TRF, DANTAS-SANTOS N, VERISSIMO LM, REHDER VLG, CHAVES GM, OLIVEIRA AG, EGITO EST. Chemical characterization and antimicrobial activity evaluation of natural oil nanostructured emulsions. 2015).[045] Finally, the authors stated that nanostructured emulsions based on essential oil extracted from copaiba resin oil, as well as bullfrog oil, may be effective for treating infections and can be used to incorporate other antimicrobial drugs (ALENCAR EN, XAVIER-JUNIOR FH, MORAIS ARV, DANTAS TRF, DANTAS-SANTOS N, VERISSIMO LM, REHDER VLG, CHAVES GM, OLIVEIRA AG, EGITO EST. Chemical characterization and antimicrobial activity evaluation of natural oil nanostructured emulsions. 2015).

[046] Com relação às publicações de patentes contendo o bioativo OC, destacam-se neste descritivo apenas as que são vinculadas ao escopo da presente invenção, como mostrado abaixo.[046] With regard to patent publications containing the bioactive OC, the highlights in this specification are only those that are linked to the scope of the present invention, as shown below.

[047] A patente PI0402262-9 refere-se à composição de obturação endodôntica, método para preparação de cimento endodôntico e uso de dita composição atóxica, biocomptível, apropriada para uso como material de obturação endodôntica, endurecível in situ.[047] The patent PI0402262-9 refers to the composition of endodontic filling, method for preparing endodontic cement and use of said non-toxic, biocomptible composition, suitable for use as endodontic filling material, hardenable in situ.

[048] A patente PI0404266-2 refere-se ao método de fabricação de um gel de óleo de copaíba (Copaifera Multijuga) com atividade antibacteriana para controle de placa ou biofilme dental.[048] The patent PI0404266-2 refers to the method of manufacturing a copaiba oil gel (Copaifera Multijuga) with antibacterial activity to control plaque or dental biofilm.

[049] A patente PI1000802-0 descreve o processo de obtenção de micropartículas matriciais de Copaifera langsdorffii e do isolamento dos compostos bioativos da referida planta, além de formulações para uso médico, cosmético, veterinário, odontológico, dentre outros.[049] The patent PI1000802-0 describes the process of obtaining matrix microparticles from Copaifera langsdorffii and the isolation of the bioactive compounds of the referred plant, in addition to formulations for medical, cosmetic, veterinary, dental, among others.

[050] A patente US839900-2 refere-se a uma formulação de silicone para uso tópico, obtida com alguns componentes de origem natural, dentre eles, óleo de girassol, indicada para prevenir (ou reduzir) o aparecimento de cicatrizes e marcas de estiramento.[050] The patent US839900-2 refers to a silicone formulation for topical use, obtained with some components of natural origin, among them, sunflower oil, indicated to prevent (or reduce) the appearance of scars and stretch marks. .

[051] A patente BR1020130055-5 consiste no uso do extrato natural óleo-resina de copaíba para reparação tecidual.[051] The patent BR1020130055-5 consists of the use of the natural oil-resin extract of copaiba for tissue repair.

[052] Nas patentes BR102014033133-6 e BR102014033132-8 encontram-se reivindicados respectivamente, formulações coloidias do tipo nanoemulsão e microemulsão contendo óleo de copaíba (OC), veiculado em baixa concentração, para aplicação medicinal tópica. Especificamente, são bioformulados coloidais polares (O/A) contendo Tween 80 indicados para tratamento de enfermidades cutâneas, com ações antimicrobiana, anti-inflamatória e cicatrizante.[052] In the patents BR102014033133-6 and BR102014033132-8 are claimed, respectively, colloidal formulations of the nanoemulsion and microemulsion type containing copaiba oil (OC), served in low concentration, for topical medicinal application. Specifically, they are polar colloidal bioformulates (O / W) containing Tween 80 indicated for the treatment of skin diseases, with antimicrobial, anti-inflammatory and healing actions.

[053] No descritivo do preparo do invento NEOCAP (nanooemulsão) o óleo de copaíba encontra-se encapsulado em uma nanoemulsão polar O/A que contém meio aquoso salinizado com água de coco em pó e o sistema coloidal foi formado na presença do tensoativo Tween 80 (BR102014033133-6. MACIEL MAM, DE MEDEIROS ML, ARAÚJO FILHO I, ROSSI CGFT, SALGUEIRO CCM, VEIGA JUNIOR VF. Nanoformulação contendo bioativos naturais para cicatrização de lesões cutâneas. INPI).[053] In the description of the preparation of the NEOCAP invention (nanooemulsion), copaiba oil is encapsulated in a polar O / W nanoemulsion containing aqueous saline medium with powdered coconut water and the colloidal system was formed in the presence of the Tween surfactant 80 (BR102014033133-6. MACIEL MAM, DE MEDEIROS ML, ARAÚJO FILHO I, ROSSI CGFT, SALGUEIRO CCM, VEIGA JUNIOR VF. Nanoformulation containing natural bioactive agents for the healing of skin lesions. INPI).

[054] O bioformulado MEOCOG (microemulsão) foi preparado em meio aquoso neutro, com fase oleosa contendo OC em mistura com óleo de girassol e Tween 80, como tensoativo (BR102014033132-8. DE MEDEIROS, ML MACIEL, MAM, ARAÚJO FILHO, I, DO RÊGO, ACM, EMERENCIANO, DP, VEIGA JUNIOR, VF. Preparo e avaliação de bioformulação contendo óleo de copaíba para tratamento de enfermidades cutâneas. INPI).[054] The bioformulate MEOCOG (microemulsion) was prepared in a neutral aqueous medium, with an oily phase containing OC mixed with sunflower oil and Tween 80, as a surfactant (BR102014033132-8. DE MEDEIROS, ML MACIEL, MAM, ARAÚJO FILHO, I , DO RÊGO, ACM, EMERENCIANO, DP, VEIGA JUNIOR, VF Preparation and evaluation of bioformulation containing copaiba oil for the treatment of skin diseases (INPI).

[055] Para a proposta da presente invenção, comprovou-se que não existem relatos literários contendo óleo de copaíba encapsulado em microemulsão do tipo SMEDDS, isenta de co-tensoativo, contendo como tensoativo Tween 80, que tenha indicação para uso odontológico terapêutico no combate a mucosite e doença periodontal, bem como no capeamento pulpar direto.[055] For the purpose of the present invention, it has been proven that there are no literary reports containing copaiba oil encapsulated in a SMEDDS-type microemulsion, free of co-surfactant, containing Tween 80 as a surfactant, which has an indication for therapeutic dental use in combating mucositis and periodontal disease, as well as direct pulp capping.

Detailed description of the invention

[056] O óleo de copaíba utilizado no preparo do bioproduto BIOCOPAME foi adquirido comercialmente e sua autenticidade foi comprovada de acordo com metodologia previamente desenvolvida que consta das seguintes análises cromatográficas: CGAR-DIC (Cromatografia em fase Gasosa de Alta Resolução utilizando detecção em ionização de chama) e CGAR-EM (Cromatografia em fase Gasosa de Alta Resolução acoplada ao Espectrômetro de Massas) (PIERI FA, SILVA VO, VARGAS FS, VEIGA JUNIOR VF, MOREIRA MAS. Antimicrobial activity of Copaifera langsdorffii oil and evaluation of its most bioactive fraction against bacteria of dog’s dental plaque. 2014. VEIGA JÚNIOR VF, ROSAS EC, CARVALHO MV, HENRIQUES MG, PINTO AC. Chemical composition and anti-inflammatory activity of Copaiba oils from Copaifera cearensis Huber ex Ducke, Copaifera reticulate Ducke and Copaifera multijuga Hayne - a comparative study. 2007).[056] The copaiba oil used in the preparation of the BIOCOPAME bioproduct was purchased commercially and its authenticity was proven according to a previously developed methodology that consists of the following chromatographic analyzes: CGAR-DIC (High Resolution Gas Chromatography using detection in ionization of flame) and CGAR-EM (High Resolution Gas Chromatography coupled to the Mass Spectrometer) (PIERI FA, SILVA VO, VARGAS FS, VEIGA JUNIOR VF, MOREIRA MAS. Antimicrobial activity of Copaifera langsdorffii oil and evaluation of its most bioactive fraction against bacteria of dog's dental plaque. 2014. VEIGA JÚNIOR VF, ROSAS EC, CARVALHO MV, HENRIQUES MG, PINTO AC Chemical composition and anti-inflammatory activity of Copaiba oils from Copaifera cearensis Huber ex Ducke, Copaifera reticulate Ducke and Copaifera multijuga Hayne - a comparative study. 2007).

[057] No presente invento a veiculação do óleo de copaíba no sistema coloidal SMEDDS denominado de BIOCOPAME ocorreu na presença do tensoativo não iônico Tween 80, conforme descrito abaixo.[057] In the present invention, the delivery of copaiba oil in the SMEDDS colloidal system called BIOCOPAME occurred in the presence of the non-ionic surfactant Tween 80, as described below.

[058] I- Considerando-se as etapas iniciais do processo de preparo da formulação realizou-se pesagem dos componentes, utilizando-se uma balança de precisão digital com limite operacional para 400 g.
II- O tensoativo Tween 80 (18% a 20%) foi adicionado aos constituintes da fase oleosa que consiste na mistura de óleo de copaíba (0,2% a 2%) e girassol (0,2% a 2%).
III- A biomistura descrita no item II foi mantida sob agitação magnética a uma velocidade de 500 rpm, em temperatura controlada, inferior a 80 °C, até completa homogeneização.
IV- Na sequência, adicionou-se água (bidestilada ou desmineralizada) até completar o volume máximo de 100% do peso total do bioformulado.
V- O bioformulado descrito nos itens II - IV foi submetido à sonificação ultrassônica (10 a 20 minutos) resultando no sistema coloidal do tipo SMEDDS que recebeu denominação BIOCOPAME (com conotação comercial de fitoterápico). FIGURA 1. Fotografia do formulado microautoemulsificante (BIOCOPAME) contendo óleo de copaíba, como biocomponente principal.
VI- Após caracterização físico-químicas comprovou-se a escala micro para o sistema BIOCOPAME (microemulsão do tipo óleo em água, automicroemulsificante) que é opticamente transparente, termodinamicamente estável, com micropartículas na faixa 8,00 a 10,00 nm de diâmetro, para 100% da amostra analisada, tendo sido determinada pela técnica de espalhamento de luz dinâmico, utilizando o equipamento Nanotrac Particle Size Analyser (Microtac Incorporation, EUA). A medida foi realizada em triplicata, na temperatura de 25 °C e com o índice de refração no valor 1,4635.
VII- BIOCOPAME possui pH na faixa 5,78 ± 0,02 a 6,51 ± 0,02, estando adequado para uso na cavidade oral, tendo sido avaliado em triplicata, no peagâmetro microprocessado de bancada (Tecnopon, Modelo MPA-210), previamente calibrado com as soluções tampões de pH 4,0 e 7,0, a uma temperatura de 25 ± 0,5 °C.
VIII- BIOCOPAME apresenta viscosidade na faixa 7,89 x 10-3 cP a 8,79 x 10-3 cP, obtida por reômetro rotacional Thermo scientific Hooke Mars. As análises foram realizadas em triplicata, em temperatura constante de 25 °C.[058] I- Considering the initial stages of the formulation preparation process, the components were weighed, using a digital precision scale with an operational limit of 400 g.
II- The surfactant Tween 80 (18% to 20%) was added to the constituents of the oily phase that consists of the mixture of copaiba oil (0.2% to 2%) and sunflower (0.2% to 2%).
III- The biomixture described in item II was kept under magnetic stirring at a speed of 500 rpm, at a controlled temperature, below 80 ° C, until complete homogenization.
IV- Then, water (bidistilled or demineralized) was added until the maximum volume of 100% of the total weight of the bioformulate was completed.
V- The bioformulate described in items II - IV was submitted to ultrasonic sonication (10 to 20 minutes) resulting in the colloidal system of the SMEDDS type that received the name BIOCOPAME (with commercial connotation of herbal medicine). FIGURE 1. Photograph of the formulated microautoemulsifier (BIOCOPAME) containing copaiba oil, as the main biocomponent.
VI- After physical-chemical characterization, the micro scale for the BIOCOPAME system (microemulsion of the oil-in-water type, auto-emulsifier) was proved, which is optically transparent, thermodynamically stable, with microparticles in the range 8.00 to 10.00 nm in diameter, for 100% of the analyzed sample, having been determined by the dynamic light scattering technique, using the Nanotrac Particle Size Analyzer equipment (Microtac Incorporation, USA). The measurement was performed in triplicate, at a temperature of 25 ° C and with a refractive index of 1.4635.
VII- BIOCOPAME has a pH in the range 5.78 ± 0.02 to 6.51 ± 0.02, being suitable for use in the oral cavity, having been evaluated in triplicate, on the bench microprocessed peameter (Tecnopon, Model MPA-210) , previously calibrated with pH 4.0 and 7.0 buffer solutions, at a temperature of 25 ± 0.5 ° C.
VIII- BIOCOPAME has viscosity in the range 7.89 x 10-3 cP to 8.79 x 10-3 cP, obtained by a rotational rheometer Thermo scientific Hooke Mars. The analyzes were performed in triplicate, at a constant temperature of 25 ° C.

[059] A avaliação da viabilidade celular do fitoterápico BIOCOPAME encontra-se descrito a seguir, tendo sido realizada de acordo com estudo estabelecido previamente (GUVEN EP, YALVAC ME, SAHIN F, YAZICI MM, RIZVANOV AA, BAYIRLI G. Effect of dental materials calcium hydroxide-containing cement, mineral trioxide aggregate, and enamel matrix derivative on proliferation and differentiation of human tooth germ stem cells. 2011); (JABERIANSARI Z; NADERI S; TABATABAEI FS, GUVEN EP; YALVAC ME, SAHIN F, YAZICI MM, RIZVANOV AA, BAYIRLI G. Cytotoxic effects of various mineral trioxide aggregate formulations, calcium-enriched mixture and a new cement on human pulp stem cells. 2014).[059] The cell viability assessment of the BIOCOPAME herbal medicine is described below, having been carried out according to a previously established study (GUVEN EP, YALVAC ME, SAHIN F, YAZICI MM, RIZVANOV AA, BAYIRLI G. Effect of dental materials calcium hydroxide-containing cement, mineral trioxide aggregate, and enamel matrix derivative on proliferation and differentiation of human tooth germ stem cells. 2011); (JABERIANSARI Z; NADERI S; TABATABAEI FS, GUVEN EP; YALVAC ME, SAHIN F, YAZICI MM, RIZVANOV AA, BAYIRLI G. Cytotoxic effects of various mineral trioxide aggregate formulations, calcium-enriched mixture and a new cement on human pulp stem cells 2014).

[060] Na determinação da viabilidade celular utilizou-se células DPSC2 (Dental Pulp Stem Cells), cultivadas meio de cultura DMEM/Ham (1:1, Invitrogen, Carlsbad, EUA), suplementado com 15% de soro fetal bovino (FBS, Hyclone, Logan, EUA), 100 U/mL de penicilina (Invitrogen), 100 mg/mL de estreptomicina (Invitrogen), 2 mM de L-glutamina (Invitrogen) e 2 mM de aminoácidos não essenciais (Invitrogen). As células foram cultivadas numa incubadora a 37 °C em atmosfera úmida contendo 5% de CO2, pelo tempo necessário para atingir o número total de células necessárias para estudo. No grupo teste, as células DPSC2 foram cultivadas em meio de cultura condicionado com o bioformulado a uma concentração de 100%, enquanto no grupo controle apenas o meio de cultura foi usado. Vinte quatro horas após o início do experimento a viabilidade celular foi determinada por meio da atividade mitocondrial. Os resultados foram analisados por meio do teste t student com nível de confiança de 95%.[060] In determining cell viability, DPSC2 cells (Dental Pulp Stem Cells) were used, cultured DMEM / Ham culture medium (1: 1, Invitrogen, Carlsbad, USA), supplemented with 15% fetal bovine serum (FBS, Hyclone, Logan, USA), 100 U / ml of penicillin (Invitrogen), 100 mg / ml of streptomycin (Invitrogen), 2 mM of L-glutamine (Invitrogen) and 2 mM of non-essential amino acids (Invitrogen). The cells were cultured in a 37 ° C incubator in a humid atmosphere containing 5% CO2, for the time necessary to reach the total number of cells needed for study. In the test group, the DPSC2 cells were grown in a culture medium conditioned with the bioformulate at a concentration of 100%, while in the control group only the culture medium was used. Twenty-four hours after the beginning of the experiment, cell viability was determined by means of mitochondrial activity. The results were analyzed using the student t test with a 95% confidence level.

[061] De acordo com os resultados obtidos comprovou-se que o óleo de copaíba encapsulado no formulado BIOCOPAME (0,2% a 2% de óleo por mL de sistema SMEDDS), com viabilidade celular avaliada em células DPSC2, em diferentes concentrações (0,01% a 100% do sistema SMEDDS), se mostrou biocompatível em modelo experimental in vitro de células-tronco da polpa dentária, com ação eficaz na manutenção da viabilidade celular (FIGURA 2. Absorbância (atividade mitocondrial) observada em experimento in vitro para o bioproduto BIOCOPAME).[061] According to the results obtained, it was proved that the copaiba oil encapsulated in the formulated BIOCOPAME (0.2% to 2% oil per ml of SMEDDS system), with cell viability evaluated in DPSC2 cells, in different concentrations ( 0.01% to 100% of the SMEDDS system), proved to be biocompatible in an in vitro experimental model of dental pulp stem cells, with an effective action in maintaining cell viability (FIGURE 2. Absorbance (mitochondrial activity) observed in an in vitro experiment for the BIOCOPAME bioproduct).

Claims

Microemulsion developed based on copaiba oil for dental use characterized by being a colloidal SMEDDS system (selfemulsifying microemulsion) free of co-surfactant, made with Tween 80 (18% to 20%), containing copaiba oil and sunflower oil in low concentration (0.2% to 2%) in neutral aqueous medium;

Method of obtaining the self-emulsifying microemulsion defined in claim 1, characterized by undergoing moderate heating (40 ° C to 80 ° C), under a centrifugation process with constant speed in a limited time (30 min. To 60 min.).