BR102013033185A2 - método de tratamento de neurodegeneração e de dano isquêmico em um paciente - Google Patents

Abstract

método de tratamento de neurodegeneração e de dano isquêmico em um paciente. métodos de tratamento de neurodegeneração e/ou mielinização em pacientes são revelados os quais compreendem tratar o paciente com um composto de progestina que exerce ligaçâo em receptores de progesterona e produz respostas biológicas induzidas por receptor de progesterona sem interagir com o receptor de androgênio e sem induzir respostas biológicas androgênicas ou de glicocorticóide em uma dosagem suficiente para prevenir ou reduzir a neurodegeneração. o composto de progestina preferencialmente compreende 16-metileno-17a-acetoxi-19-norpregn-4-eno-3,20-diona, e os métodos incluem combinar o composto de progestina com um composto de estrogênio para proporcionar tanto contracepção quanto tratamento para reparo de mielina e neurodegeneraç~o, e incluem efeitos sobre derrame cerebral e tbi.

Description

“MÉTODO DE TRATAMENTO DE NEURODEGENERAÇÃO E DE DANO ISQUÊMICO EM UM PACIENTE” REFERÊNCIA REMISSIVA AOS PEDIDOS RELACIONADOS O presente pedido é uma continuação em parte do pedido de número 13/500.008 depositado em 31 de maio de 2012, que é uma entrada da fase nacional sob 35 U.S.C. § 371 do pedido internacional de número PCT/US2010/53201 depositado em 19 de outubro de 2010, publicado em inglês, que reivindica o benefício da data de depósito do pedido provisório de patente dos Estados Unidos de número 61/279.320 depositado em 19 de outubro de 2009, cujas revelações são por meio deste aqui incorporadas como referências.

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se ao campo da prevenção de degeneração de mielina e de neurodegeneração. Mais especifícamente, a presente invenção refere-se à prevenção ou ao tratamento de aspectos degenerativos de doenças tais como Esclerose Múltipla (MS, Multiple Sclerosis), Mal de Alzheimer (AD, Alzheimer's Disease) e Doença de Parkinson (PD, Parkinsorís Disease), e também derrame cerebral. Ainda mais especifícamente, a presente invenção refere-se à prevenção ou ao tratamento de dano isquêmico tal como derrames cerebrais e lesão cerebral isquêmica. ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A Esclerose Múltipla (MS) é uma doença progressiva e debilitante do sistema nervoso central (CNS, central nervous system) que afeta duas vezes mais mulheres do que homens (1-4). Evidência sugere que o dano neuronal começa cedo em MS (5), com lesão axonal aguda já presente durante a desmielinização ativa. Entretanto, é sabido que a remielinização ocorre em MS (6,7) onde ela protege contra a perda de axônios (8). De fato, nenhum dano axonal significativo pode ser observado em placas remielinizadas (5). Os axônios tomam-se menos receptivos à remielinização à medida que a MS progride. Ademais, um derrame cerebral é um incidente cerebrovascular que também ocasiona dano neuronal. Em um modelo experimental de oclusão transiente de artéria cerebral média (MCAO, transient middle cerebral artery occlusion) o volume de infarto induzido pela oclusão foi muito maior em camundongos privados de receptor de progesterona (camundongos deficientes em PR, progesterone receptor) do que em camundongos intactos de controle. O processo neurodegenerativo de várias doenças do CNS, que incluem Esclerose Múltipla (MS), Mal de Alzheimer (AD) e Doença de Parkinson (PD) envolve neuroinflamação e também neurodegeneração, e sua frequência aumenta em mulheres após a menopausa. Processos neurodegenerativos similares também estão presentes em pacientes que sofrem de dano isquêmico, como pacientes com derrame cerebral, ou aqueles que têm sofrido dos efeitos de um incidente cerebrovascular, tal como uma lesão cerebral traumática (TBI, traumaiic brain injury). O dano neuronal também pode ocorrer em outros contextos, tais como com um derrame cerebral. Um derrame cerebral é um incidente vascular cerebral que resulta de uma interrupção no fornecimento de sangue para as células do cérebro. Os neurônios dessa forma podem ser destruídos por causa da sensibilidade deles à privação de oxigênio e de glicose, e também da disseminação progressiva de dano de tecido nervoso a partir de um sítio de infarto. Dessa forma tem havido sérios esforços para tratar pacientes com derrame cerebral tanto para proteger os neurônicos contra a destruição deles e a evitação da disseminação de lesões quanto também para manter a regeneração de tecido danificado. Progesterona tem sido previamente identificada como um agente neuroprotetor eficiente. De fato, a própria progesterona é produzida em velocidade aumentada em células do cérebro após a ocorrência de lesão. Também tem sido descoberto que o tratamento com progesterona é efetivo na redução do tamanho da lesão após isquemia cerebral em modelos animais de derrame cerebral (18) e tem sido descoberto que inibe a lesão cerebral isquêmica após a oclusão de artéria do cérebro (19). O derrame cerebral apresenta um problema de saúde pública importante totalizando cerca de mais que 100.000 casos anualmente. O único tratamento aprovado para derrame cerebral agudo é trombólise com ativador de plasminogênio de tecido (TPA, tissue plasminogen activator) que tem uma janela terapêutica limitada e cria um risco de hemorragia.

Tem sido descoberto que progestinas como Nestorone® exercem efeitos proliferativos e neuroprotetores no cérebro (20,21).

Aproximadamente dois terços dos pacientes com MS reincidente-remitente MS são mulheres na idade reprodutiva.(9) É sabido que um nível alto de esteróides do sexo feminino, como aquele que ocorre durante a gravidez, pode ser responsável pela remissão de sintomas em mulheres com MS. Isto é especialmente verdadeiro durante o terceiro trimestre quando os níveis de estrogênio e de progesterona (PROG) alcançam o pico, enquanto que a taxa de reincidência aumenta no período de o pós-parto.(9) As mulheres com MS experimentam mudanças em seus sintomas de MS relacionados com a gravidez, o período de pós-parto, ou a menopausa. Em um estudo conduzido na Suécia (10),: 40% das 148 mulheres com MS que foram entrevistadas relataram piora dos sintomas de MS relacionados com a menopausa, e mais do que um quarto das mulheres mais jovens relataram sintomas diminuídos durante a gravidez. Cada terço das mulheres relatou sintomas aumentados após o parto, sugerindo que os esteróides sexuais desempenham uma função na proteção (quando presentes em níveis altos durante a gravidez) ou piora da doença (quando decrescem após o parto ou na menopausa).

Uma estratégia de tratamento efetiva para as condições como MS também precisa incluir agentes terapêuticos que revertem a desmielinização de axônios com o propósito de prevenir a perda irreversível de axônios. O estrogênio e a progesterona, hormônios do sexo feminino, podem ter efeitos benéficos sobre MS e neuroproteção.

Em culturas primárias de neurônios extraídos do hipocampo tratadas com 17β-Ε2 e progestinas, sozinhas e em combinação, 48 horas antes do insulto com glutamato, estradiol, progesterona, e 19-norprogesterona, sozinhos ou em combinação, protegeram contra a toxicidade do glutamato. Em contraste, acetato de medroxiprogesterona (MPA medroxyprogesterone acetaté) falhou em proteger contra a toxicidade do glutamato. O MPA não apenas foi um neuroprotetor ineficaz, mas ele atenuou a neuroproteção induzida por estrogênio quando coadministrado (11). Estes resultados podem ter implicações importantes para a manutenção de função neuronal durante a menopausa e o envelhecimento e para proteção contra doenças neurodegenerativas como Mal de Alzheimer pela seleção das moléculas apropriadas para terapia hormonal. A expressão de receptor de (PR) e a regulação da proliferação de células progenitoras neurais foram investigadas com o uso de NPC derivado de cérebro de rato adulto. A proliferação de célula progenitora neural (NPC, neural progenitor cell) mediada por progesterona e a concomitante regulação de genes de ciclo celular mitótico é um-novo alvo terapêutico potencial para promover neurogênese no cérebro de mamífero (12).

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

De acordo com a presente invenção, estes e outros objetivos têm sido agora realizados pela descoberta de um método de tratamento de neurodegeneração em um paciente que compreende tratar o paciente com uma dosagem farmaceuticamente efetiva de um composto de progestina que' exerce ligação em receptores de progesterona e produz respostas biológicas induzidas por receptor de progesterona sem interagir com o receptor de androgênio e sem induzir respostas biológicas androgênicas ou de glicocorticóide. No caso de formas de dosagem orais, como tabletes, cápsulas, e similares, a dosagem farmaceuticamente aceita será 5 mg/dia ou menor, por meio da qual a neurodegeneração é prevenida ou reduzida. Em uma modalidade preferida, a dosagem farmaceuticamente efetiva de Nestorone®, independente da forma de dosagem específica, resulta na absorção de 100 a 450 μg/dia pelo paciente. Preferencialmente, a dosagem farmaceuticamente efetiva compreende uma dosagem contínua fornecida ao paciente. Em outra modalidade, entretanto, a dosagem farmaceuticamente efetiva compreende uma dosagem interrompida fornecida ao paciente. Preferencialmente, a dosagem interrompida compreende três semanas com dosagem seguida por uma semana sem dosagem.

De acordo com uma modalidade do método da presente invenção, o método inclui o tratamento simultâneo de um paciente feminino com um composto de estrogênio. Preferencialmente, os compostos de estrogênio compreendem estradiol, e em uma modalidade preferida a quantidade de estradiol é suficiente para fornecer cerca de 10 a 150 pg/dia absorvidos pelo paciente.

De acordo com outra modalidade do método da presente invenção, a dosagem farmaceuticamente efetiva do composto de progestina compreende uma forma de dosagem transdermal.

De acordo com outra modalidade do método da presente invenção, o composto de progestina é selecionado do grupo consistindo em Nestorone®, 18-methyl-Nestorone®, acetato de nomegestrol, trimegestona, norgestimato, dienogest, drospirenona, acetato de clormadinona, promegestona, retroprogesterona, e 17-hidroxiprogesterona. Em uma modalidade preferida, o composto de progestina, compreende acetato de nomegestrol, e a dosagem farmaceuticamente efetiva compreende de 2,5 a 5 mg/dia. Em outra modalidade, o composto de progestina compreende trimegestona, e a dosagem farmaceuticamente efetiva compreende de cerca de 0,5 a 1 mg/dia. De acordo com outra modalidade, o composto de progestina compreende dienogest, e a dosagem farmaceuticamente efetiva compreende de cerca de 2 a 3 mg/dia. De acordo com outra modalidade, o composto de progestina compreende drospirenona, e a dosagem farmaceuticamente efetiva compreende cerca de 3 mg/dia. Em outra modalidade, o composto de progestina compreende acetato de clormadinona, e a dosagem farmaceuticamente aceitável compreende cerca de 5 mg/dia.

De acordo com outra modalidade do método da presente invenção, o tratamento compreende fornecer a dosagem predeterminada em uma forma transdermal selecionada do grupo consistindo em geles transdermais, soluções transdermais, aspersões transdermais, e emplastros transdermais. Em outra modalidade, o método compreende fornecer a dosagem predeterminada em uma forma transdermal selecionada do grupo consistindo em tabletes intravaginais, geles intravaginais, e anéis intravaginais. Em outra modalidade do método da presente invenção, o tratamento pode compreender qualquer forma de administração previamente conhecida em ser eficiente para compostos esteroidais incluindo fornecer a dosagem predeterminada na forma de uma aspersão nasal·.

De acordo com outra modalidade do método da presente invenção, o método inclui tratamento que compreende um implante subcutâneo.

De acordo com a presente invenção, é fornecido um método de tratamento de neurodegeneração em mulheres pós-menopausais que compreende tratar as mulheres pós-menopausais com uma dosagem farmaceuticamente efetiva de um composto de progestina que exerce ligação em receptores de progesterona e produz respostas biológicas induzidas por receptor|de progesterona sem interagir com o receptor de androgênio e sem induzir respostas biológicas androgênicas ou de glicocorticóide em uma dosagem suficiente para prevenir ou reduzir a neurodegeneração nas mulheres pós-menopausais, e simultaneamente fornecer uma dosagem predeterminada de estradiol natural. Na modalidade preferida deste método da presente invenção, o composto de progestina compreende Nestorone®, e preferencialmente é fornecido em uma quantidade suficiente para fornecer entre cerca de 100 e 450 pg/dia absorvidos pelo paciente. Em uma modalidade preferida, o estradiol é fornecido em quantidades suficientes para fornecer de cerca de 10 a 150 pg/dia absorvidos pelo paciente.

Em uma modalidade deste método da presente invenção, a dosagem farmaceuticamente efetiva do composto de progestina compreende uma forma de dosagem transdermal selecionada do grupo consistindo em geles transdermais, soluções transdermais, aspersões transdermais, emplastros transdermais, tabletes intravaginais, geles intravaginais, e anéis intravaginais, ou em outra modalidade, na forma de uma aspersão nasal.

De acordo com a presente invenção, é fornecido um método de tratamento de neurodegeneração apresentada em uma condição selecionada do grupo consistindo em esclerose múltipla, mal de Alzheimer, doença de Parkinson, e derrame cerebral em um paciente que compreende tratar o paciente com uma dosagem farmaceuticamente efetiva de um composto de progestina que exerce ligação em receptores de progesterona e produz respostas biológicas induzidas por receptor de progesterona sem interagir com o receptor de androgênio e sem induzir respostas biológicas androgênicas ou de glicocorticóide em que a dosagem farmaceuticamente efetiva compreende 5 mg/dia ou menor, por meio do qual a neurodegeneração é prevenida ou reduzida. Preferencialmente, o composto de progestina compreende Nestorone®. Em outra modalidade, o composto de progestina é selecionado do grupo consistindo em 18-methyl-Nestorone®, acetato de nomegestrol, trimegestona, norgestimato, dienogest, drospirenona, acetato de clormadinona, promegestona, retroprogesterona, e 17-hidroxiprogesterona.

De acordo com a presente invenção, é fornecido um método de tratamento de dano isquêmico em um paciente que compreende tratar o paciente com uma dosagem farmaceuticamente efetiva de um composto de progestina que exerce ligação em receptores de progesterona e produz respostas biológicas induzidas por receptor de progesterona sem interagir com o receptor de androgênio e sem induzir respostas biológicas androgênicas ou de glicocorticóide, a dosagem farmaceuticamente efetiva compreendendo uma quantidade suficiente do composto de progestina para reduzir o volume de infarto total. Qualquer tal redução no exterior do infarto (mudança isquêmica) beneficiará dessa forma um paciente com derrame cerebral, por exemplo. Em modalidades preferidas, a redução em volume de infarto total será pelo menos cerca de 32% (P <0,01), preferencialmente estará entre cerca de 30% e 60%, e com preferência máxima próxima de pelo menos cerca de 50%; e/ou será uma quantidade suficiente do composto de progestina para reduzir as lesões isquêmicas no córtex cerebral, neste caso preferencialmente próxima de pelo menos cerca de 22% (P <0,01), preferencialmente entre cerca de 20% e 60%, com preferência máxima pelo menos cerca de 40%; e/ou uma quantidade suficiente do composto de progestina para reduzir as lesões isquêmicas nas estruturas subcorticais, neste caso preferencialmente próxima de pelo menos cerca de 52% (P <0,01), preferencialmente entre cerca de 30% e 70%, e com preferência máxima próxima de pelo menos cerca de 50%. Ademais, o tratamento com estes compostos de progestinas, com preferência máxima Nestorone®, pode reduzir uma zona de infarto após um derrame cerebral dentro de um período de cerca de 6 horas daquele evento, próximo de pelo menos cerca de 30%, e preferencialmente entre pelo menos cerca de 30% e 60%, e com preferência máxima pelo menos cerca de 50%. Ademais, tem sido descoberto que o tratamento com estes compostos de progestina, e com preferência máxima Nestorone®, para lesão traumática cerebral moderada, com a administração de níveis terapêuticos, reduz a área de dano cerebral próximo de cerca de a mesma quantidade que no caso de derrame cerebral; a saber, dentro de cerca de 6 horas do evento próximo de pelo menos cerca de 30%, preferencialmente entre cerca de 20% e 60%, e com preferência máxima cerca de 50%, e para adicionalmente induzir a neurorregeneração com o propósito de reparar a área lesionada do cérebro.

De acordo com uma modalidade deste método da presente invenção, a dosagem farmaceuticamente efetiva, particularmente com respeito ao tratamento com Nestorone®, compreende de cerca de 0,03 a 1,0 mg/dia, e preferencialmente de cerca de 100 a 800 pg/dia de medicamento realmente absorvido pelo paciente, independente das dosagens ingeridas oralmente ou de outra maneira.

As quantidades precisas da dosagem farmaceuticamente efetiva que são desejavelmente realmente absorvidas pelo paciente variarão, tanto devido ao sexo do paciente quanto devido ao método específico de administração. Dessa forma, as faixas amplas apresentadas acima compreenderão a quantidade absorvida em várias formas de fornecimento e para ambos os pacientes masculino e feminino. Dentro daquela faixa, para pacientes femininos, o uso de um anel vaginal, por exemplo, a dosagem ótima seria cerca de 200 pg/dia (e.g., de cerca de 150-350 pg/dia), e com o uso de um gel transdermal, a dosagem ótima seria cerca de 300 pg/dia (e.g., de cerca de 250-450 pg/dia). Nestes casos a quantidade de Nestorone®, por exemplo, no gel seria de 2,5 a 4,5 mg, que, em uma taxa de absorção de 10%, fornece estes compostos ao paciente. Para pacientes masculinos, por outro lado, é considerado que a dosagem ótima para a administração transdermal seria cerca de 800 pg/dia (e.g., de cerca-de 700-850 pg/dia). Assim, mais uma vez, a quantidade de Nestorone®, por exemplo, aplicada transdermalmente seria de 7 a 8,5 mg, que em uma taxa de absorção de 10%, fornece estas quantidades ao paciente, e para um fornecimento via implante deste medicamento a um paciente masculino, a dosagem ótima absorvida pelo sujeito masculino estaria na faixa de 30 a 100 pg/dia.

De acordo com outra modalidade deste método da presente invenção, a dosagem farmaceuticamente efetiva compreende uma dosagem contínua fornecida ao paciente. Em outra modalidade, a dosagem farmaceuticamente efetiva compreende uma dosagem interrompida fornecida ao paciente.

De acordo com outra modalidade do método da presente invenção, a dosagem farmaceuticamente efetiva do composto de progestina compreende uma dosagem transdermal.

De acordo com outra modalidade do método da presente invenção, o composto de progestina é 16-metileno-17a-acetoxi-19-norpregn-4-eno-3,20-diona (Nestorone®), 18-methyl-Nestorone®, acetato de nomegestrol, trimegestona, norgestimato, dienogest, drospirenona, acetato de clormadinona, promegestona, retroprogesterona, ou 17-hidroxiprogesterona.

De acordo com outra modalidade do método da presente invenção, o tratamento compreende fornecer a dosagem predeterminada em uma forma transdermal. Preferencialmente, a forma transdermal inclui um gel transdermal, uma solução transdermal, uma aspersão transdermal, ou um emplastro transdermal. De acordo com outra modalidade do método da presente invenção, o tratamento compreende fornecer a dosagem predeterminada na forma de uma aspersão nasal. Esta modalidade tem uma aplicação particularmente preferida em relação ao tratamento de mudanças isquêmicas tais como a partir de derrames cerebrais ou TBI.

De acordo com outra modalidade do método da presente invenção, o método de tratamento compreende um implante subcutâneo.

De acordo com a presente invenção, estudos preliminares em cultura de tecido e modelos animais têm mostrado que uma classe específica l de compostos de progestina, que inclui Nestorone® (NES), uma progestina sintética derivada de 19-norprogesterona, sem ações androgênicas, estrogênicas, ou de glicocorticóide, tem efeitos benéficos maiores sobre a remielinização em modelos in vitro e in vivo em comparação com, por exemplo, a progesterona, e também com certos outros compostos de progestina. Há bioensaios que comparam os efeitos de progestinas diferentes. Nestorone® de modo algum não tem ação androgênica ou estrogênica e também não produz um efeito de glicocorticóide exceto em doses 2.000 vezes a dose terapêutica. As outras progestinas como levonorgestrel e MPA induzem respostas androgênicas, MPA induz ambas as respostas androgênica e de glicocorticóide, e noretinodrel e noretisterona exercem respostas androgênicas e estrogênicas. Ademais, em estudos recentes, também tem sido mostrado que NES estimula a proliferação de células progenitoras neurais, de novo mesmo mais elevadamente que a própria progesterona. Estes resultados têm levado à descoberta de um método de tratamento de neurodegeneração em um paciente que compreende tratar o paciente com uma dosagem predeterminada de um composto de progestina que exerce ligação em receptores de progesterona e produz respostas biológicas induzidas por receptor de progesterona sem interagir com o receptor de androgênio e sem induzir quaisquer respostas biológicas androgênicas ou de glicocorticóide em uma dosagem suficiente para prevenir ou reduzir a neurodegeneração. Em relação com esta modalidade, o paciente pode ser um paciente masculino ou feminino. Em adição, de acordo com a presente invenção, um método de tratamento de neurodegeneração em um paciente compreende tratar o paciente com uma dosagem farmaceuticamente efetiva de um composto de progestina que exerce ligação em receptores de progesterona e produz respostas biológicas induzidas por receptor de progesterona sem interagir com o receptor de androgênio e sem induzir quaisquer respostas biológicas androgênicas ou de glicocorticóide em uma dosagem suficiente para prevenir ou reduzir a neurodegeneração, em combinação com um composto de estrogênio. Nesta modalidade, o paciente é preferencialmente um paciente feminino. Os compostos de progestina especificados desta invenção podem ser aplicados em várias maneiras, ambas oral e não oralmente, incluindo geles, emplastros, anéis vaginais para mulheres, ou similares, em uma faixa ampla de dosàgens, variando amplamente de tão baixa quanto cerca de 30 pg/dia absorvidos a cerca de 5 mg/dia, como pelo uso de tabletes ou outros tais meios de até 3 a 5 mg. Similarmente, no caso de estrogênios, a quantidade fornecida pode variar de tão baixa quanto 1 até cerca de 2.000 pg por dia. Também acredita-se que um tratamento de terapia menopausal que inclui doses diárias de NES entre cerca de 100 e 450 pg/dia, juntamente com um estrogênio, especificamente estradiol em quantidades de 10 a 150 pg/dia (doses absorvidas) em formulações de gel, resultarão em prevenção ou redução surpreendentemente melhorada de neurodegeneração e/ou de degeneração de mielina. Este tratamento também pode ser realizado vaginalmente, tal como pelo uso de um anel vaginal que contém estas composições. O fornecimento pode ser quer contínuo quer sequencial, tal como fornecimento sequencial contínuo de três semanas seguido por uma interrupção de fornecimento de uma semana.

Tem sido adicionalmente descoberto que estes tratamentos podem não apenas serem aplicados em mulheres menopausais, mas podem ser úteis para o tratamento de prevenção ou redução de neurodegeneração em condições tais como MS, AD, PD, e em relação com derrame cerebral ou outras causas de dano isquêmico, tal como TBI. O foco principal da presente invenção refere-se aos métodos de tratamento de neurodegeneração ou degeneração de mielina em pacientes, tanto masculinos quanto femininos. Este principalmente compreende tratar estes pacientes com dosàgens farmaceuticamente efetivas de progestinas específicas como Nestorone®, em níveis de dosagem de 100 a 450 pg/dia e até 800 pg/dia ou menor com o propósito de prevenir ou reduzir a neurodegeneração.

Em uma modalidade da presente invenção, entretanto, a invenção é direcionada especificamente aos pacientes femininos. Em um aspecto deste tratamento, a progestina é combinada com um composto de estrogênio, tal como estradiol, de modo que em geral tanto a prevenção quanto a redução de neurodegeneração e/ou o reparo de mielina é realizado juntamente com quer contracepção ou terapia hormonal. Dessa forma, em relação às mulheres jovens pré-menopausais na idade fértil, com ou sem condições neurodegenerativas tais como MS, AD, PD, derrame cerebral, ou similares, a contracepção é garantida, enquanto que em mulheres pós-menopausais, de novo com ou sem estes distúrbios neurodegenerativos, o tratamento de terapia hormonal também pode ser realizado. Dessa forma, em adição aos tratamentos de contracepção e/ou de terapia hormonal, estas combinações de composições podem ser usadas para prevenir ou reduzir as reincidências em MS em mulheres quer na idade reprodutiva quer pós-menopausais ou durante o período de pós-parto.

Em uma modalidade preferida, isto é realizado pela administração de uma progestina, como aquelas discutidas acima, preferencialmente Nestorone®, e com preferência máxima na forma de um anel vaginal para administrar esta composição na forma das dosagens diárias específicas discutidas.

No caso de mulheres pós-menopausais, em uma modalidade da presente invenção, os compostos desta invenção são administrados na forma de um gel transdermal, mais uma vez de novo preferencialmente incluindo a combinação de tanto a progestina, tal como Nestorone®, quanto estradiol. Dessa forma é previsto que este método pode prevenir ou tratar neurodegeneração em situações clínicas destas condições médicas tais como MS, AD, PD, e derrame cerebral. Preferencialmente, as doses diárias da progestina, tal como Nestorone®, variarão de 100 a 450 pg/dia, de novo com ou sem a terapia de estrogênio assoòiada em tais mulheres pós-menopausais. As dosagens de progestina podem ser administradas quer continuamente quer interrompidas por sequências com o propósito de permitir a eficácia total de neuroproliferação e de induzir o sangramento endometrial.

Por outro lado, em relação ao tratamento de mulheres jovens pré-menopausais na idade fértil,, em uma modalidade a presente invenção fornece administração contínua de longa duração da prògestina, tal como Nestorone®, em taxas de dosagem diárias de cerca de 200 pg/dia, preferencialmente na forma de um anel vaginal. De novo, isto tanto garante a contracepção com ou sem o tratamento de condições neurodegenerativas como MS e similares. Ademais, devido à ação antiovulatória potente de compostos tal como o próprio Nestorone®, a administração de longa duração destas dosagens é adaptada para prevenir gravidezes e também para prevenir reincidências de MS. Dessa forma, de acordo com esta invenção, é revelado um novo agente contraceptivo que tem benefícios saudáveis adicionais em oposição a todos os contraceptivos de estrogênio-progestina atuais que não contêm estas progestinas com propriedades neuroprotetoras para ser usado na maioria das mulheres.

De acordo com uma modalidade preferida de um aspecto da presente invenção, é fornecida uma composição que inclui uma dose diária de Nestorone® para aplicação transdermal, preferencialmente na forma de um gel, que contém entre cerca de 1 mg e 4,5 mg de Nestorone® transdermalmente aplicado (absorção de 10% resultando em cerca de 100 a 450 pg/dia de Nestorone®) que pode ser dado sozinho, ou que pode ser combinado, preferencialmente antes do uso, para terapia menopausal, com estradiol, transdermalmente aplicado a de 0,5 a 1,5 mg, ou 50 a 150 pg/dia. Em uma modalidade preferida na qual um anel vaginal é utilizado, a dose diária de Nestorone® está entre cerca de 100 e 300 pg/dia quer sozinho, quer em combinação com estradiol, preferencialmente em doses de entre 10 e 50 pg/dia. Nesta modalidade estas dosagens podem ser aplicadas quer continuamente, quer sequencialmente, tal como em um regime de três semanas sim e uma semana não.

De acordo com outra modalidade da presente invenção, mulheres pós-menopausais, com ou sem distúrbios neurodegenerativos, podem ser tratadas para induzir proliferação de célula progenitora neural pelo fornecimento diário de unidades de dosagem diárias que compreendem as progestinas discutidas acima, incluindo Nestorone®, em quantidades de dosagem suficientes para induzir proliferação de célula progenitora neural. A presente invenção também tem claramente uma aplicação geral para ambos pacientes masculinos e femininos especificamente para tratar neurodegeneração ou degeneração de mielina em um paciente. Este método dessa forma inclui o tratamento do paciente com uma dosagem farmaceuticamente efetiva, preferencialmente 5 mg/dia ou menor, da progestinas da presente invenção de modo a prevenir ou reduzir a neurodegeneração. Entretanto, no caso da progestina mais preferida, a saber, Nestorone®, devido à sua potência consideravelmente mais alta, a quantidade de Nestorone® utilizada constituirá uma dose diária de entre 100 a 300 pg/dia, preferencialmente cerca de 200 pg/dia. O método de administração destas doses de progestinas, tal como Nestorone®, por exemplo, pode compreender administração não oral. A administração não oral pode incluir administração transdermal por meio de geles, borrifos transdermais ou nasais, emplastros transdermais, ou na forma de anéis vaginais ou implante. A administração oral das progestinas da presente invenção que são oralmente ativas, pode ocorrer na forma de tabletes, cápsulas, capsulas achatadas, drágeas, pílulas, glóbulos, grânulos, pó, soluções, emulsões, suspensões, e similares.

Com o para os compostos de progestina específicos que podem ser usados de acordo com esta invenção, estes podem incluir as progestinas tais como Nestorone®, e também 18-methyl-Nestorone®, acetato de nomegestrol, trimegestona, e também progestinas não androgênicas, tais como norgestimato, dienogest, drospirenona, acetato de clormadinona, promegestona, retroprogesterona, e 17-hidroxiprogesterona. Em geral, o método da presente invenção podem dessa forma ser utilizado para a prevenção e/ou a redução da neurodegeneração e/ou para a degeneração de mielina, e/ou para o tratamento de condições tais como MS, AD, PD, ou para o tratamento de dano isquêmico, tal como aquele causado por derrame cerebral ou TBI.

Como para a modalidade da presente invenção na qual um composto de progestina que exerce ligação em receptores de progesterona e produz respostas biológicas induzidas por receptor de progesterona sem interferir com o receptor de androgênio e sem induzir respostas biológicas androgênicas ou de glicocorticóide, tem sido descoberto que o tratamento com tais compostos (progesterona e Nestorone®) após um incidente tal como um derrame cerebral, significativamente aumenta a densidade neuronal no infarto e também na penumbra, e decresce as respostas neuroinfl amatóri as, refletidas pela densidade microglial reduzida na penumbra. Portanto tem sido mostrado que progesterona é eficiente em uma dose de 8 mg/Kg enquanto que uma dose 100 vezes menor de Nestorone® (0.08 mg/Kg) mostrou eficácia neuroprotetora similar.

Como discutido acima, a dose diária das progestinas de acordo com a presente invenção é selecionada com o propósito de exercer ligação em receptores de progesterona e produzir respostas biológicas induzidas por progesterona sem induzir respostas biológicas quer androgênicas quer de glicocorticóide.

De acordo com uma modalidade preferida da presente invenção, é fornecido um novo agente contraceptivo com benefícios saudáveis adicionais, em oposição a todos os atuais contraceptivos de estrogênio-progestina, que não contêm tal progestina côm propriedades neuroprotetoras, a ser usado na maioria das mulheres.

DESCRIÇÃO BREVE DOS DESENHOS

Fig. 1 é uma representação gráfica que compara Nestorone® com progesterona e promove mielinização dependente de dose;

Fig. 2 é uma representação gráfica que compara mielinização com Nestorone®, lisolecitina e RU486;

Fig. 3 é uma representação gráfica do efeito de progestinas sobre a proliferação de células progenitoras;

Fig. 4 é uma representação gráfica de várias progestinas sobre a proliferação de células progenitoras;

Fig. 5 é uma representação gráfica de várias progestinas em relação à eficácia neuroprotetora;

Fig. 6A é uma representação gráfica que compara a regeneração de NPC induzida por norgestimato em comparação com progesterona;

Fig. 6B é uma representação gráfica que compara a regeneração de NPC com Nestorone® em comparação com progesterona;

Fig. 6C é uma representação gráfica que compara regeneração de NPC com noretinodrel em comparação com progesterona;

Fig. 6D é uma representação gráfica que compara a regeneração de NPC com noretindrona em comparação com progesterona;

Fig. 7A é uma representação gráfica que compara a eficácia neuroprotetora de Nestorone® com progesterona;

Fig. 7B é uma representação gráfica que compara a eficácia neuroprotetora de noretinodrel com progesterona;

Fig. 7C é uma representação gráfica que compara a eficácia neuroprotetora de levonorgestrel com progesterona;

Fig. 7D é uma representação gráfica que compara a eficácia neuroprotetora de norgestimato com progesterona;

Fig. 7E é uma representação gráfica que compara a eficácia neuroprotetora de acetato de medroxiprogesterona com progesterona;

Fig. 7F é uma representação gráfica que compara a eficácia neuroprotetora de noretindrona com progesterona;

Fig. 8A é uma representação gráfica que compara a proliferação de NPC em viabilidade celular com várias progestinas;

Fig. 8B é uma representação gráfica que compara a proliferação de NPC em viabilidade celular com várias progestinas;

Fig. 8C é uma representação gráfica que compara a proliferação de NPC em viabilidade celular com várias progestinas;

Fig. 9A é uma representação gráfica de expressão de PCNA de várias progestinas;

Fig. 9B é uma representação gráfica da percentagem de células TUNEL-positivas;

Fig. 10 é uma representação gráfica que demonstra a densidade neuronal no infarto, na penumbra, e no hemisfério contralateral 48 horas após a oclusão de artéria cerebral média (MCAO);

Fig. 11 é uma representação gráfica que mostra a densidade neuronal aumentada do infarto subsequente à administração de progesterona e Nestorone®;

Fig. 12 é uma representação gráfica de densidade neuronal aumentada na penumbra subsequente à administração de progesterona e Nestorone®;

Fig. 13 é uma representação gráfica de densidade microglial decrescida na penumbra subsequente à administração de progesterona e Nestorone®;

Fig. 14A é uma representação gráfica que mostra o volume de infarto 48 horas após MCAO com o uso de Nestorone®;

Fig. 14B é uma representação gráfica de equilíbrio e coordenação motora 48 horas após MCAO com base na aplicação de Nestorone®;

Fig. 15 é uma representação gráfica de viabilidade de neurônio na penumbra 48 horas após MCAO com base na administração de progestina ou Nestorone®;

Fig. 16 é uma representação gráfica de viabilidade de neurônio dentro das 48 horas de infarto após MCAO com base na administração de progesterona ou Nestorone®;

Fig. 17 é uma representação gráfica de densidade neuronal no hemisfério contralateral com base na administração dê progesterona ou Nestorone®; e Fig. 18 é uma representação gráfica de micróglia na penumbra 48 horas após MCAO com base na administração de progesterona ou Nestorone®.

DESCRIÇÃO DETALHADA A presente invenção é mais especificamente baseada na descoberta das propriedades específicas de certas progestinas. Mais especificamente, estes compostos de progestina exercem ligação em receptores de progesterona e produzem respostas biológicas induzidas por receptor de progesterona sem interagir com o receptor de androgênio e sem induzir suas respostas biológicas androgênicas e a glicocorticóides em uma dosagem suficiente para prevenir ou reduzir a neurodegeneração, e cuja dosagem, contudo é 5 mg/dia ou menor no caso de administração oral, tal como na forma de tabletes, cápsulas, e similares. Estas progestinas dessa forma incluem Nestorone®, 18-methyl-Nestorone®, acetato de nomegestrol, trimegestona, norgestimato, dienogest, drospirenona, acetato de clormadinona, promegestona, retroprogesterona, e 17-hidroxiprogesterona. Assim, esta classe de progestinas exclui progesterona e levonorgestrel, que interage com o receptor de androgênio, e que (para progesterona) necessita de uma dosagem maior que 5 mg/dia, e em geral para progesterona de até 10 mg/dia ou maior, para eficácia. O composto de progestinas da presente invenção também pode incluir compostos de progestina que exercem ligação em receptores de progesterona e produzem respostas biológicas induzidas por receptor de progesterona sem induzir suas respostas biológicas androgênicas ou a glicocorticóides.

Temos aqui apresentado algumas dosagens atualmente preferidas para as progestinas, tal como Nestorone®, que é elevadamente preferido para uso em relação com a presente invenção. Entretanto, está dentro da capacidade daquelas pessoas experientes na técnica farmacêutica determinar com experimentação de rotina qual dosagem destas progestinas será necessária, dependendo da rota de administração específica, para fornecer tal dose efetiva. Entretanto, embora haja tais variações como apresentadas abaixo, tem sido descoberto que todos estes compostos de progestina da presente invenção podem ser efetivamente utilizados em dosagens de 5 mg/dia ou menores, que é consideravelmente menor que as dosagens efetivas de compostos como progesterona. É entendido que a dosagem de cada um destes compostos de progestinas, tal como Nestorone®, administrado in vivo pode ser dependente da idade, do sexo, da saúde e do peso do paciente recipiente, do tipo de tratamento concorrente, se houver, da frequência de tratamento, e da natureza do efeito farmacêutico desejado. As faixas de dose efetiva aqui fornecidas não são intencionadas para serem limitadoras e representam faixas de dose preferidas com a faixa de dose inferior total de 5 mg/dia ou menor desta. Entretanto, as dosagens mais preferidas dentro daquela faixa total podem ser ajustadas para o sujeito individual, como é entendido e determinável por uma pessoa versada na técnica relevante. Veja, e.g., Berkow et al., eds., The Merck Manual, 16 Ed., Merck & Co., Rahway, NJ (1992); Goodman et al., eds., Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutícs, 8th Ed., Pergamen Press Inc., Elmsford, NY (1990); Katzung, Basic and Clinicai Pharmacology, Appleton & Lang, Norwalk, CN (1992); Avery's Drug Treatment Principies and Practice of Clinicai Pharmacology andTherapeutics, 3rd Ed., ADIS Press Ltd., Williams & Wilkins, Baltimore, MD (1987); Ebadi, Pharmacology, Little, Brown & Co., Boston, MA (1985); Remington's Pharmaceutical th Services, 17 ed., Alphonzo R. Genaro, Mack Publishing Company, Easton, PA (1985); cujas descrições são aqui inteiramente incorporadas como referências.

As dosagens podem ser determinadas por um médico clínico com o uso de estudos de escalonamento de dose. Pode ser presumido que estão dentro das faixas preferidas acima. Ademais, embora esta discussão tenha se referido especificamente ao componente progestina elevadamente significativo da presente invenção, obviamente ela também se aplica com igual força ao componente estrogênio da mesma.

Em adição, o termo “farmaceuticamente efetiva” significa aquela quantidade que é suficiente para realizar as mudanças desejadas no sujeito. A quantidade variará dependendo de fatores tais como a potência do medicamento específico, o efeito terapêutico desejado, e o período de tempo para o qual o método de aplicação é intencionado para fornecer o tratamento. Aquelas pessoas versadas na técnica farmacêutica serão capazes de determinar tanto os níveis tóxicos quanto as doses efetivas mínimas do medicamento de acordo com procedimentos padrão. Por exemplo, uma forma de dosagem apropriada pode ser preparada pela medição da eluição ou taxa in vivo de um dado medicamento por técnicas analíticas padrão, e.g., e análise espectroscópica ou radioimunoensaio. A difusão in vitro do medicamento a partir de um dispositivo fornecedor da presente invenção pode ser determinada, por exemplo, pelos métodos revelados em Chien et ah, J. Pharm. Sei., 63,, 365 (1974) ou pelos métodos descritos em Patente U.S. n° 3.710.795, cuja revelação é aqui incorporada como referência.

Os requerentes têm descoberto que estes compostos de progestina específicos podem ter propriedades surpreendentes em termos de sua mielinização e também para tratar neurodegeneração, e em particular tratamento de condições tais como MS, AD, PD, e para o tratamento de dano isquêmico tal como aquele causado por derrame cerebral e TBI, e ademais que estas propriedades surpreendentes podem ser obtidas em combinação com uma ação contraceptiva com estes compostos que são conhecidamente úteis para aquele propósito.

Um uso preferido específico do composto de progestinas da presente invenção é por conseguinte em combinação com um composto de estrogênio em sujeitos femininos. Em relação ao composto de estrogênio uma pessoa versada nesta técnica reconhecerá que o estrogênio pode ser selecionado do grupo consistindo em estradiol, etinil-estradiol, sulfamatos de estradiol, valerato de estradiol, acetato de estradiol, benzoato de estradiol, estrona, estriol, succinato de estriol, e estrogênios conjugados que incluem estrogênios equinos conjugados como sulfato de estrona, sulfato de 17β-estradiol, sulfato de 17a-estradiol, sulfato de equilina, sulfato de 17β-di-hidro-equilina, sulfato de 17a-di-hidro-equilina, sulfato de equilenina, sulfato de 17β-di-hidro-equilenina, sulfato de 17a-di-hidro-equilenina, estetrol, ou suas misturas. O mais preferido é estradiol. A combinação de progestinas com estrogênios para propósitos contraceptivos é amplamente conhecida. De fato, devido ao fato de que as progestinas sozinhas não podem normalmente ser usadas sem o desenvolvimento de padrões de sangramento insatisfatórios em mulheres, nem para uso pós-menopausal, tem se tomado necessário combinar estas progestinas com estrogênios para estes propósitos. Ademais, embora o tema principal da presente invenção seja baseado na descoberta de que certas progestinas como aqui descritas possuem propriedades surpreendentemente superiores em relação à neuroproteção e à mielinização, a adição de um estrogênio não é necessariamente para ajudar neste objetivo, também é possível que o uso de certos estrogênios em combinação com estas progestinas proporcione resultados ainda mais surpreendentes em termos de neuroproteção, ou neurorregeneração e reparo de mielina.

Em experimentos conduzidos em cultura de fatia cerebelar de camundongo ou rato neonatal organotípico, progesterona acelerou a mielinizaçao de axônio (13,14). Em um estudo conduzido de acordo com esta invenção, foi descoberto que tanto progesterona (PROG) quanto Nestorone® (NES) promovem a mielinização dependente de dose, conforme medida por imunorreatividade de proteína básica de mielina (MBP, myelin basic protein). Foi descoberto que NES é significativamente mais potente que PROG, porque NES a 20 μΜ foi tão ativo quanto PROG a 50 μΜ (Fig. 1). Também foi mostrado que o receptor de progesterona (PR) intracelular pode mediar as ações de pró-mielinização de PROG porque o tratamento não aumentou a mielinização em fatias cerebelares de camundongos deficientes em PR.

No mesmo modelo animal, fatias cerebelares foram cultivadas até que a mielinização estivesse completa, então foram incubadas durante a noite com lisolecitina (LYSO, lysolecithin) para produzir desmielinização com a utilização de uma técnica conhecida, (15) seguida por 3 dias de incubação com NES 20 μΜ em meio de cultura novo (10% de penetração em fatias). As fatias foram imunocoradas para MBP. Como mostrado em Fig. 1, NES produziu remielinização. A intensidade de coloração de MBP foi medida em fatias cerebelares após a completitude da mielinização normal, após a desmielinização com lisolecitina, e após 3 dias de incubação com NES a 20 μΜ, RU486 a 10 μΜ, ou NES + RU486. A remielinização estimulada por NES de fatias cerebelares desmielinizadas por lisolecitina pode envolver o receptor de progesterona (PR) clássico, porque RU486 pareceu inibir a atividade de NES neste modelo (Fig. 2).

De acordo com os estudos in vitro descritos acima, parece que a ação de mielinização/remielinização de NES pode ser mediada pelos receptores de progesterona (PR). Dessa forma, NES, que é um agonista potente de PR e uma das progestinas mais potentes sem atividade androgênica que induz respostas biológicas relacionadas com PR, parece melhorar a regeneração de mielina bem melhor que a progesterona, e isto pode se tomar um tratamento das doenças ou condições associadas com a desmielinização.

Em mulheres pós-menopausais, o aumento em doenças neurodegenerativas tem estado relacionado com a falta de estrogênio e pouca atenção tem sido dada à função de progesterona. O estudo da proliferação de células-tronco neuronais em um modelo de roedor mostrou que na zona subventricular do cérebro destes a célula rapidamente se divide e produz neuroblastos que se tomarão intemeurônios. A progesterona aumenta a proliferação destas células. Dentre as várias progestinas testadas para a proliferação celular, Nestorone® e tão efetiva quanto ou até mesmo mais efetiva do que a progesterona. Noretinodrel e norgestimato também foram mais proliferativos do que a progesterona (Fig. 3). Entretanto outras progestinas foram quer menos efetivas que progesterona (NET, LNG) quer antagonísticas (MPA, NETA) em relação à proliferação (Fig. 4). O efeito de NES e de outras progestinas sobre a plasticidade do CNS e a eficácia neuroprotetora contra a toxicidade de glutamato também têm sido avaliadas. LDH foi medida, como um ensaio bem aceito, para determinar tal efeito após a exposição das células ao glutamato, e a viabilidade neuronal foi avaliada sob a ação de várias progestinas. Fig. 5 mostra que três progestinas têm efeito comparável com o da progesterona e a 10'7M NES, e PROG exerceu a eficácia mais alta enquanto que LNG, uma progestina androgênica, foi mais ativa do que PROG em doses menores.

Foram conduzidos experimentos com o uso de camundongos deficientes em receptor de progestona (PR) (PR’/_) comparados com camundongos PR+/" e PR+/+ e tanto progesterona quanto Nestorone® foram administrados após isquemia e reperfusão. Foi descoberto que Nestorone® tem pelo menos resultados comparáveis em termos de proteção contra dano isquêmico, mas em níveis de dosagem bem menores em comparação com aqueles necessários para progesterona.

Exemplo 1 Estudos in vitro ~ foram realizados para determinar a regeneração de célula progenitora neural (NPC) em ratos. Ensaio imunoabsorvente ligado à enzima (ELISA) com quimioluminescência e 5-bromo-2-desoxiuridina (BrdU) (e os resultados são aqui mostrados em FIGS. 6A-D). A proliferação celular foi determinada pela incorporação em fase S de BrdU. Após 4 a 6 horas de inanição (meio sem suplemento), rNPCs foram carregadas com BrdU 10 μΜ na presença ou ausência de bFGF e variando as concentrações de P4 ou progestinas de teste em meio de manutenção não suplementado durante 1 dia. As rNPCs foram então processadas como descrito previamente (1, 14). Após subtrair o valor do branco (sem carregamento de BrdU), os dados foram analisados com o uso de ANOVA univariada, seguida por um teste post hoc de Neuman-Keuls. Estes resultados demonstram que em 24 horas norgestimato foi mais potente em proliferação celular que progesterona em todas as concentrações. Nestorone® e progesterona foram comparavelmente eficazes em suas concentrações ECioo· Noretinodrel produziu efeitos comparáveis aos da progesterona na faixa nanomolar baixa mas foi significativamente mais eficaz que progesterona em faixas nanomolares altas. Noretindrona foi menos efetiva que progesterona e levonorgestrel e acetato de noretindrona exerceu efeito mínimo ou nulo sobre a proliferação enquanto que acetato de medroxiprogesterona (MPA) significativamente inibiu a proliferação em concentrações múltiplas.

Exemplo 2 Foram realizadas comparações de neuroproteção contra insultos neurodegenerativos. A eficácia foi determinada em relação à proteção de neurônios hipocampais primários contra degeneração induzida por glutamato excitóxico. Culturas de neurônios hipocampais crescidas sobre placas de cultura de 90 cavidades durante 7 dias in vitro foram pré-tratadas com apenas veículo ou compostos de teste, seguido por exposição a glutamato 200 μΜ como previamente descrito (13). Após a exposição a glutamato, as culturas foram lavadas com solução salina tamponada com HEPES e substituídas com NBM novo contendo os compostos de teste ou combinações. As culturas foram retomadas para a incubadora e incubadas durante 24 horas antes da análise de viabilidade neuronal com o uso de liberação de LDH colorimétrica nos meios. Análise de dose-resposta foi conduzida para cada uma das progestinas testadas, e os resultados são mostrados em FIGS. 7A-F. A eficiência neurodegenerativa foi calculada como segue: NE ( Vamostra~ VglUtamato)/( Vsubc0ntrole~ V"glutamato)· CoiIlO pode Ser VlStO, Nestorone® induziu eficácia neuroprotetora comparável àquela da progesterona. Noretindrel foi mais potente que progesterona em concentrações efetivas mínimas enquanto que levonorgestrel mostrou eficácia comparável àquela de progesterona. Foi descoberto que norgestimato é menos potente que progesterona, do mesmo modo tanto MPA quanto noretindrona.

Exemplo 3 Foi investigada a capacidade generalizada das descobertas in vitro acima para a condição in vivo. Análises de proliferação de NPC em ratos e viabilidade celular foram conduzidas em ratas ovariectomizadas Sprague-Dawley de' três meses de idade com várias da progestinas. A expressão de proteína em ciclo celular foi determinada por análise Western blot, e os resultados como mostrados em FIG. 8A indicaram que Nestorone® pareceu ser um pouco superior à progesterona em termos de expressão de PCNA aumentada em nível de proteína. Levonorgestrel e MPA, por outro lado, não tiveram efeito significativo sobre a expressão de PCNA, enquanto que a expressão de proteína CDC2 foi significativamente aumentada tanto por progesterona quanto por Nestorone®, mas não com levonorgestrel e MPA. Com o propósito de avaliar o número total de células BrdU+, o hemisfério hipocampal contralateral usado para a análise de proteína foi fixado e. processado por análise FACS. O número total de células BrdU+ por cada hipocampo foi determinado e normalizado para aquele do controle com veículo. Os resultados são mostrados em FIG. 8B demonstrando que Nestorone® foi um pouco superior à progesterona em aumento significativo do número de células Brd+ enquanto que foi comparável com progesterona enquanto que MPA não teve efeito significativo sobre a proliferação celular in vivo. Com o propósito de medir a viabilidade celular em termos de promoção de função mitocondrial e de redução em dano oxidativo a expressão da subunidade alfa do Complexo V-ATP-sintase (CVa) da rota de fosforilação oxidativa mitocondrial foi avaliada por análise Western blot. Os resultados como mostrados em Figura 8C demonstram que Nestorone® aumentou a expressão de CVA bem mais do que progesterona e levonorgestrel enquanto que de novo MPA não exerceu efeito significativo sobre os níveis de expressão de CVa.

Exemplo 4 Os efeitos das várias progestinas sobre apoptose foram estudados com o uso de análise Western blot para determinar o nível de expressão de Bax, um mediador de apoptose por translação para as mitocôndrias para liberar fatores apoptóticos como citocromo c e Bcl-2. A proporção entre Bax e Bcl-2 foi usada como um indicador da atividade apoptótica in vivo. Os resultados demonstraram que tanto progesterona quanto Nestorone® não tiveram efeito sobre a proporção de expressão de Bax/Bcl-2, enquanto que levonorgestrel e MPA significativamente aumentaram a proporção demonstrando um efeito pró-apoptótico na mesma.

Exemplo 5 A influência da combinação de 17P-estradiol (E2) e várias progestinas sobre neurogênese e viabilidade celular in vitro também foi realizada. Ratas adultas jovens ovariectomizadas Sprague Dawley foram dessa forma divididas em seis grupos e receberam injeção quer de E2 sozinho quer de E2 combinado com uma das progestinas. Os hipocampos foram isolados 24 horas mais tarde para análise Western blot e citometria de fluxõ para determinar a influência do tratamento sobre a viabilidade celular e a neurogênese respectivamente. O nível de expressão de PCNA foi avaliado para determinar a influência dos compostos de tratamento sobre a entrada no ciclo celular necessário para neurogênese. Os resultados demonstraram que Nestorone® mais E2 induziu a magnitude mais alta de expressão de PCNA e proliferação de célula progenitora neural (veja FIG. 9A).

Com importância, Nestorone®, em combinação com estradiol, não aumentou a morte de célula progenitora neural conforme evidenciado pelo não aumento em células TUNEL-positivas, um marcador para apoptose. Em contraste, tanto MPA quanto levonogestrel, em combinação com estradiol, aumentaram significativamente a apoptose, conforme evidenciado por um aumento em células TUNEL-positivas (veja FIG. 9B). Como observado acima, tanto MPA quanto levonorgestrel aumentaram a proliferação celular.

Exemplo 6 Com o propósito de testar o efeito de tratamentos esteroidais após reperfusão, camundongos machos adultos PRlacz foram anestesiados e a artéria cerebral média (MCA) foi ocluída durante uma hora com um filamento intraluminal. Após a ligadura da artéria carótida comum esquerda, um monofilamento de náilon revestido com cola termofusível foi introduzido através de uma arteriotomia realizada na artéria carótida externa e avançada para dentro da artéria carótida interna. A oclusão da MCA foi controlada por monitoração do fluxo sanguíneo cerebral dentro do território de MCA por fluxometria por laser Doppler. O filamento foi removido uma hora após a oclusão para permitir reperfusão, e a ligadura da artéria carótida comum também foi removida. Os camundongos foram aleatoriamente e cegamente designados para quer progesterona, alopregnanolona quer Nestorone®, quer tratados com veículo (óleo de gergelim; Sigma). Todos os esteróides foram inicialmente dissolvidos em um volume pequeno de etanol e depois diluídos em óleo de gergelim para se obterem as concentrações de esteroide finais. Injeções foram dadas interperitonealmente (IP) a 1, 6, e 24 horas após a oclusão de MCA (MCAO) de acordo com os protocolos neuroprotetores estabelecidos. Os camundongos tratados foram mortos a 48 horas após MCAO.

As áreas e os volumes de infarto cerebral foram determinados após coloração com cloreto de trifeniltetrazólio (TTC) de seções cerebrais. Os detalhes deste procedimento são apresentados em "Progestone Receptors: A Key For Neuroprotection In Experimental Stroke", Endocrinology, August 2012, 153(8), pp.1-11, que é aqui incorporado em sua totalidade como referência. Como mostrado em Fig. 10, 48 horas após MCAO pode ser vista a densidade neuronal no infarto, na penumbra, e no hemisfério contralateral. Em Figs. 11, 12 e 13, após a administração de progesterona e Nestorone®, a densidade neuronal em infarto (Fig. 11) e na penumbra (Fig. 12) pode ser claramente mostrada. Em Fig. 13 o decréscimo em densidade microbiana na penumbra após a administração de progesterona e Nestorone® também é claramente mostrado.

Finalmente, como mostrado em Figs. 14a e 14b, 48 horas após MCAO o efeito protetor do tratamento com Nestorone® sobre o volume de infarto é claramente mostrado em Fig. 14A, e o efeito do tratamento com Nestorone® sobre o equilíbrio e a coordenação motora sobre a rotarod (barra rotatória) é mostrado em Fig. 14B. Dessa forma, o volume de infarto total e as lesões isquêmicas em ambos o córtex cerebral e as estruturas subcorticais foram claramente reduzidos pelo tratamento com em camundongos PR+/+ mas não em camundongos PR+/\ A coordenação motora, quando avaliada sobre a rotarod, também demonstrou correlações negativas significativas com o volume de infarto. Os tratamentos com Nestorone® reduziram o volume de infarto total em aproximadamente 32%, as lesões isquêmicas em córtex cerebral e em estruturas subcorticais, respectivamente, em aproximadamente 22% e 52%, e aumentaram o tempo que os camundongos PR+/+ permaneceram sobre a rotarod em aproximadamente 33%. Os resultados clarámente mostraram os efeitos neuroprotetores de duração mais longa desde o tratamento adicional com progestinas exógenas como Nestorone® e a significância da presença de PR. Foi adicionalmente mostrado que Nestorone® melhorou os resultados neurológicos em uma dose 100 vezes mais baixa que aquela de progesterona. A presente invenção fornece um método de estimulação de neurorregeneração e possivelmente de inibição e reversão de distúrbios neurodegenerativos tais como MS ou AD, e também derrame cerebral ou TBI. A demonstração de que os receptores de progesterona desempenham uma função importante na neuroproteção foi bastante surpreendente, e abre o caminho para o uso de progestinas sintéticas, planejadas para selecionar estes receptores, em estratégias neuroprotetoras para vários tipos de lesões, incluindo TBI, ou com relação aos processos degenerativos oride tem sido previamente mostrado que progesterona é eficiente. Dessa forma, estudos prévios (22) de modelos de lesão cerebral tal como TBI sugeriram que progesterona pode exercer seu efeito neuroprotetor via seu metabólito alopregnanolona. De fato, que a progesterona pode exercer seus efeitos neuroprotetores via alopregnanolona também foi proposto para derrame cerebral (23). Devido ao fato de que alopregnanolona, entretanto, não se liga em receptores de progesterona, mas atua pela modulação de receptores de GABAa ou pela atividade mitocondrial, isto adicionalmente sugere que os receptores de progesterona não desempenham uma função importante em neuroproteção. O método proposto compreende reverter a degeneração de mielina com uma dose de NES na faixa de cerca de 100 a 450 pg por dia administrada quer por um anel vaginal quer em um gel vaginal sozinho quer em associação com estradiol.

Em outra modalidade da invenção, NES, ou uma progestina sem propriedades androgênicas ou de glicocorticóide, é administrada a mulheres pós-menopausais que recebem doses baixas de estrogênio como terapia hormonal e uma prevenção possível de neurodegeneração. A presente invenção refere-se à descoberta de que NES é mais ativo que progesterona para estimular células progenitoras neuronais e também a regeneração de mielina. Um outro aspecto central da invenção é que agentes capazes de se ligarem nos receptores de progesterona e de induzirem respostas biológicas induzidas por PR-, seriam efetivos na prevenção ou na reversão de neurodegeneração, para mulheres em idade reprodutiva e também para mulheres pós-menopausais. O termo "Nestorone®" (NES) refere-se a um derivado de 19-norprogesterona que exerce uma ação progestacional e antiovulatória potente e não exerce ações androgênicas ou estrogênicas ou de glicocorticóide em níveis terapêuticos (16). Em particular, ele se refere à 16-metileno-17a-acetoxi-19-norpregn-4-eno-3,20-diona, que era antigamente chamada de ST1435. O termo "DDU" aqui refere-se às unidades de dosagem diárias em que a DDU está em formulação oral para outros derivados de 19-norprogesterona que são oralmente ativos (não NES), ou em uma formulação vaginal (gel ou anel) ou transdermal (gel, aspersão), ou como uma aspersão nasal. O termo "agente contraceptivo" aqui usado refere-se às medicações administradas com o propósito de prevenir ou reduzir a possibilidade de gravidez. A presente invenção é baseada no fato de que a progesterona estimula o reparo de mielina. Estes efeitos são mediados pelos receptores de progesterona (PR). A presente invenção revela que NES é mais ativo que PROG e pode regenerar a mielina em doses que também exercem eficácia contraceptiva. A presente invenção também revela que as células progenitoras de tecido neuronal se proliferam quando cultivadas com progesterona e além disso com NES em doses menores indicando uma atividade mais alta.

Também, progesterona e algumas progestinas, especialmente NES e também norgestimato (um gonano não androgênico) e noretinodrel (uma progestina estrano com atividade estrogênica) estimulam a proliferação de célula progenitora.

Com base no efeito superior de NES sobre a estimulação de mielina e também sobre a neurorregeneração, um propósito da presente invenção é melhorar as condições médicas de esclerose múltiplas e de distúrbios neurodegenerativos e ao mesmo tempo proporcionar contracepção em mulheres na idade fértil ou uma terapia hormonal em mulheres que estão na menopausa.

Embora a invenção tenha sido aqui descrita com referência às modalidades específicas, é para ser entendido que estas modalidades são meramente ilustrativas dos princípios e das aplicações da presente invenção. Portanto é para ser entendido que numerosas modificações podem ser feitas nas modalidades ilustrativas e que outros arranjos podem ser planejados sem se desviarem do espírito e do escopo da presente invenção como definidos nas reivindicações anexadas.

APLICABILIDADE INDUSTRIAL

Os métodos de tratamento de neurodegeneração ou de mielinizaçãoque são discutidos neste pedido são particularmente úteis sob a forma de uma forma de dosagem oral de uma progestina, tal como Nestorone®, quer sozinho quer em combinação com um estrogênio, tal como estradiol. Esta composição é usada na forma de um produto transdermal, tal como um gel, uma solução, uma aspersão nasal ou transdermal, ou um emplastro, ou na forma de um anel vaginal, que pode ser, portanto usada por um paciente para reduzir neurodegeneração e quando combinado com o estrogênio, também pode ser usada para contracepção e/ou terapia de reposição hormonal.

REFERÊNCIAS 1. Confavreux C, Aimard G, Devic M. Course and prognosis of multiple sclerosis assessed by the computerized data processing of 349 patients. Brain 1980;103(2):281-300 2. Confavreux C, Vukusic S. Natural history of multiple sclerosis: a unifying concept. Brain 2006;129(Pt 3):606-16 3. Pugliatti M, Rosati G, Carton H, Riise T, Drulovic J, Vecsei L, Milanov I. The epidemiology of multiple sclerosis in Europe. Eur.J.Neurol. 2006; 13(7):700-22 4. Dutta R, Trapp BD. Pathogenesis of axonal and neuronal damage in multiple sclerosis. Neurology 2007;68(22 Suppl 3):S22-S31 5. Komek B, Storch MK, Weissert R, Wallstroem E, Stefferl A, Olsson T, Linington C, Schmidbauer M, Lassmann H. Multiple sclerosis and chronic autoimmune encephalomyelitis: a comparative quantitative study of axonal injury in active, inactive, e remyelinated lesions. Am.J.Pathol. 2000; 157(1 ):267-76 6. Patani R, Balaratnam M, Yora A, Reynolds R. Remyelination can be extensive in multiple sclerosis despite a long disease course. Neuropathol.Appl.Neurobiol. 2007;33(3):277-87 7. Patrikios P, Stadelmann C, Kutzelnigg A, Rauschka H, Schmidbauer M, Laursen H, Sorensen PS, Bruck W, Lucchinetti C, Lassmann H. Remyelination is extensive in a subset of multiple sclerosis patients. Brain 2006;129(Pt 12):3165-72 8. Irvine KA, Blakemore WF. Remyelination protects axons from demyelination-associated axon degeneration. Brain 2008; 131 (Pt 6):1464-77 9. Confavreux C, Hutchinson M, Hours MM, Cortinovis-Toumiaire P, Moreau T. Rate of pregnancy-related relapse in multiple sclerosis. Pregnancy in Multiple Sclerosis Group. N.Engl.J.Med. 1998;339(5):285-91 10. Holmqvist P, Wallberg M, Hammar M, Landtblom AM, Brynhildsen J. Symptoms of multiple sclerosis in women in relation to sex steroid exposure. Maturitas. 2006 May 20;54(2): 149-53 11. Nilsen J, Brinton RD. Impact of progestins on estrogen-induced neuroprotection: synergy by progesterone and 19-norprogesterone and antagonism by medroxyprogesterone acetate. Endocrinology 2002;143(1):205-12 12. Liu L, Wang J, Zhao L, Nilsen J, McClure K, Wong K, Brinton RD. Progesterone increases rat neural progenitor cell cycle gene expression and proliferation via extracellularly regulated kinase and progesterone receptor membrane components 1 and 2. Endocrinology. 2009 Jul; 150(7):3186-96. 13. Ghoumari AM, Ibanez C, El Etr M, Leclerc P, Eychenne B, 0'Malley BW, Baulieu EE, Schumacher M. Progesterone and its metabolites increase myelin basic protein expression in organotypic slice cultures of rat cerebellum. J.Neurochem. 2003;86(4):848-59 14. Ghoumari AM, Baulieu EE, Schumacher M. Progesterone increases oligodendroglial cell proliferation in rat cerebellar slice cultures. Neuroscience 2005; 135(1):47-58 15. Birgbauer E, Rao TS, Webb M. Lysolecithin induces demyelination in vitro in a cerebellar slice culture system. J.Neurosci.Res. 2004;78(2):157-66 16. Kumar N, Koide SS, Tsong Y, Sundaram K. Nestorone: a progestin with a unique pharmacological profíle. Steroids 2000;65(10-11):629-36 17. Sitruk-Ware R. New progestagens for contraceptive use. Hum.Reprod.TJpdate. 2006; 12(2): 169-78 18. Gibson L, Gray LJ, Bath PM, Murphy SP (2008) Progesterone for the treatment of experimental brain injury; a systematic review. Brain 131:318-328 19. Sayeed I, Wali B, Stein DG (2007) Progesterone inhibits ischemic brain injury in a rat model of permanent middle cerebral artery occlusion. Restor. Neurosci. 24:151-159 20. Brinton RD, Thompson RF, Foy MR, Baudry M, Wang J, Finch CE, Morgan DE, Pike CJ, Mack WJ, Stanczyk FC, Nilsen J (2008) Progesterone receptors: form and function in the brain. Front Neuroendocrinal 29:313-339 21. Wang JM, Liu L, Irwin RW, Chen S, Brinton RD (2008) Regenerative potential of allopregnanolone. Brain Res. Rev. 57:398-409 22. Sayeed J., Parvey S., Wali B., Siemen D., Stein, D.G. (2009) Direct inhibition of the mitochondrial permeability transection pore: a possible mechanism for better neuroprotective effects of allopregnanolone over progesterone. Brain Res. 1263: 165-173. 23. Sayeed T., Guo Q., Hoffman S.W., Stein D.G. (2006) Allopregnanolone, a progesterone metabolite is more effective than progesterone in reducing cortical infarct volume after transient middle cerebral artery occlusion. Ann. Emerg. Med. 47:381-389.

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Claims (28)

1. Método de tratamento de neurodegeneração em um paciente, caracterizado pelo fato de que compreende tratar dito paciente com uma dosagem farmaceuticamente efetiva de um composto de progestina que exerce ligação em receptores de progesterona e produz respostas biológicas induzidas por receptor de progesterona sem interagir com o receptor de androgênio e sem induzir respostas biológicas androgênicas ou de glicocorticóide, dita dosagem farmaceuticamente efetiva séndo uma forma de dosagem oral que compreende 5 mg/dia ou menos, por meio da qual neurodegeneração é prevenida ou reduzida.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o dito paciente compreende um paciente feminino, e dito método simultaneamente trata dito paciente feminino com um composto de estrogênio.

3. Método de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o dito composto de estrogênio compreende estradiol.

4. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a dita dosagem farmaceuticamente efetiva compreende uma quantidade de dita dosagem farmaceuticamente efetiva que fornece de 100 a 450 pg/dia absorvidos por dito paciente.

5. Método de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a dosagem de dito estradiol compreende uma quantidade de dito estradiol que fornece de cerca de 10 a 150 pg/dia absorvidos por dito paciente.

6. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que dita dosagem farmaceuticamente efetiva compreende uma dosagem contínua fornecida ao dito paciente.

7. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que dita dosagem farmaceuticamente efetiva compreende uma dosagem interrompida fornecida ao dito paciente.

8. Método de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a dita dosagem interrompida compreende três semanas com dita dosagem seguidas por uma semana sem dita dosagem.

9. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a dita dosagem farmaceuticamente efetiva de dito composto de progestina compreende uma dosagem transdermal.

10. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o dito composto de progestina é selecionado do grupo consistindo em 16-metileno-17 α-acetoxi-19-norpregn-4-eno-3,20-diona, 18-methyl-Nestorone®, acetato de nomegestrol, trimegestona, norgestimato, dienogest, drospirenona, acetato de clormadinona, promegestona, retroprogesterona, e 17-hidroxiprogesterona.

11. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o dito tratamento compreende fornecer a dita dosagem predeterminada em uma forma transdermal.

12. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que a dita forma transdermal é selecionada do grupo consistindo em geles transdermais, soluções transdermais, aspersões transdermais, e , emplastros transdermais.

13. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o dito tratamento compreende fornecer a dita dosagem predeterminada na forma de uma aspersão nasal.

14. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o dito método de tratamento compreende um produto transdermal selecionado do grupo consistindo em tabletes intravaginais, geles intravaginais, e anéis intravaginais.

15. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o dito método de tratamento compreende um implante subcutâneo.

16. Método de tratamento de neurodegeneração em mulheres pós-menopausais, caracterizado pelo fato de que compreende tratar ditas mulheres pós-menopausais com uma dosagem farmaceuticamente efetiva de um composto de progestina que exerce ligação em receptores de progesterona e produz respostas biológicas induzidas pòr receptor de progesterona sem interagir com o receptor de androgênio e sem induzir respostas biológicas androgênicas ou de glicocorticóide em uma dosagem suficiente para prevenir ou reduzir a neurodegeneração em ditas mulheres pós-menopausais, e simultaneamente fornecer uma dosagem predeterminada de estradiol natural.

17. Método de tratamento de neurodegeneração apresentada em uma condição selecionada do grupo consistindo em Esclerose Múltipla, Mal de Alzheimer, e Doença de Parkinson em um paciente, caracterizado pelo fato de que compreende tratar dito paciente com uma dosagem farmaceuticamente efetiva de üm composto de progestina que exerce ligação em receptores de progesterona e produz respostas biológicas induzidas por receptor de progesterona sem interagir com o receptor de androgênio e sem induzir respostas biológicas androgênicas ou de glicocorticóide em uma dosagem suficiente para prevenir ou reduzir reincidências de ditas condições.

18. Método de tratamento de dano isquêmico em um paciente, caracterizado pelo fato de que compreende tratar dito paciente com uma dosagem farmaceuticamente efetiva de um composto de progestina que exerce ligação em receptores de progesterona e produz respostas biológicas induzidas por receptor de progesterona sem interagir com o receptor de androgênio e sem induzir respostas biológicas androgênicas ou de glicocorticóide, dita dosagem farmaceuticamente efetiva compreendendo uma quantidade suficiente de dito composto de progestina para reduzir o volume de infarto total em aproximadamente pelo menos 32%.

19. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a dita dosagem farmaceuticamente efetiva compreende uma quantidade de dito composto de progestina que fornece de cerca de 0,1 a 1,0 mg/dia absorvido por dito paciente.

20. Método de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que dita dosagem farmaceuticamente efetiva compreende uma quantidade de dita progestina que fornece de cerca de 100 a 800 pg/dia absorvidos por dito paciente.

21. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a dita dosagem farmaceuticamente efetiva compreende uma dosagem contínua fornecida ao dito paciente.

22. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a dita dosagem farmaceuticamente efetiva compreende uma dosagem interrompida fornecida ao dito paciente.

23. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a dita dosagem farmaceuticamente efetiva de dito composto de progestina compreende uma dosagem transdermal.

24. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o dito composto de progestina é selecionado do grupo consistindo em 16-metileno-17a-acetoxi-19-norpregn-4-eno-3,20-diona, 18-methyl-Nestorone®, acetato de nomegestrol, trimegestona, norgestimato, dienogest, drospirenona, acetato de clormadinona, promegestona, retroprogesterona, e 17-hidroxiprogesterona.

25. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o dito tratamento compreende fornecer a dita dosagem predeterminada em forma transdermal.

26. Método de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que a dita forma transdermal é selecionada do grupo consistindo em geles transdermais, soluções transdermais, aspersões nasais ou transdermais, e emplastros transdermais.

27. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o dito método de tratamento compreende um implante subcutâneo.

28. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o dito método de tratamento compreende fornecer a dita dosagem predeterminada na forma de uma aspersão nasal.