BR102012029876A2

BR102012029876A2 - METHOD FOR PREPARING A HIGH PURITY GENTIO-OLIGOSACCARID, GENTIO-OLIGOSACARIDE, OF HIGH PURITY, METHOD FOR IMPROVING THE FLAVOR OR TASTING OF THE FOOD AND METHOD FOR USING HIGH-PURITY GENTIO-OLIGOSACARD

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Publication number: BR102012029876A2
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Publication date: 2017-10-03

Description

MÉTODO PARA PREPARAR UM GENTIO-OLIGOSSACARÍDEO DE ALTA PUREZA, GENTIO-OLIGOSSACARÍDEO DE ALTA PUREZA, MÉTODO PARA MELHORAR O SABOR OU GOSTO DO ALIMENTO E MÉTODO PARA USAR O GENTIO-OLIGOSSACARÍDEO DE ALTA PUREZA A presente invenção refere-se a métodos para preparar gentio-oligossacarídeos de alta pureza, gentio-oligossacarídeos de alta pureza obtidos destes e seus usos, e mais particularmente a métodos para preparar gentio-oligossacarídeos de alta pureza que podem ser beneficamente usados como alternativas para os alimentos, tais como cacau, chocolate, café, cerveja, pão, chá ou produtos de confeitaria, bebidas, etc, e ingredientes principais destes sem produzir subprodutos desnecessários pela fermentação de gentio-oligossacarídeos de baixa pureza contendo grandes quantidades de glicose com microrganismos para remover glicose dos mesmos.METHOD FOR PREPARING A HIGH PURITY GENTIO-OLIGOSACARIDE, HIGH PURITY GENTIO-OLIGOSACARIDE, METHOD FOR IMPROVING FLAVOR OR TASTE OF FOOD AND METHOD FOR USING THE HIGH-PURITY GENTIO-OLIGOSACARIDE high purity oligosaccharides, high purity gentio oligosaccharides obtained from these and their uses, and more particularly to methods for preparing high purity gentio oligosaccharides which may be beneficially used as food alternatives such as cocoa, chocolate, coffee, beer , bread, tea or confectionery, beverages, etc., and their main ingredients without producing unnecessary byproducts by fermenting low purity gentio-oligosaccharides containing large amounts of glucose with microorganisms to remove glucose from them.

FUNDAMENTO DA INVENÇÃOBACKGROUND OF THE INVENTION

Gentio-oligossacarídeos são adoçantes compostos de principalmente gentiobiose e celobiose que são dissacarídeos sintetizados por enzimas da glicose, e tem o nome genérico de oligossacarídeos tendo ligações β-1,6-glicosidicas. Gentio-oligossacarídeos são compostos de gentiobiose, celobiose, gentiotriose, gentiotetraose, etc, e o seu ingrediente principal é a gentiobiose que é um dissacarídeo que tem um forte gosto amargo.Gentio oligosaccharides are sweeteners composed mainly of gentiobiose and cellobiose which are disaccharides synthesized by glucose enzymes, and have the generic name oligosaccharides having β-1,6-glycosidic bonds. Gentio oligosaccharides are composed of gentiobiose, cellobiose, gentiotriosis, gentiotetraose, etc., and its main ingredient is gentiobiose which is a disaccharide that has a strong bitter taste.

Gentio-oligossacarídeos são encontrados nas raízes ou caules de plantas e no mel natural e são preparados através de uma reação enzimática usando amido como matéria-prima. Gentio-oligossacarídeos são conhecidos como açúcares de baixa digestão que ajudam na absorção de minerais, são seletivamente utilizados por Bifidobácterium e Lactobacillus para ajudar na melhora da flora microbiana intestinal e têm um efeito na regulação intestinal similar ao do galacto-oligossacarideo que tem um efeito excelente na regulação intestinal.Gentio oligosaccharides are found in plant roots or stems and in natural honey and are prepared by an enzymatic reaction using starch as a raw material. Gentio oligosaccharides are known as low digestion sugars that aid in the absorption of minerals, are selectively used by Bifidobacterium and Lactobacillus to help improve intestinal microbial flora and have an effect on gut regulation similar to galactooligosaccharide that has an excellent effect. in intestinal regulation.

Gentio-oligossacarideos são caracterizados por terem um amargor mais suave e mais fresco em comparação com substâncias que possuam um gosto amargo, tal como Naringina. 0 gosto amargo dos gentio-oligosacarideos, em harmonia com o gosto amargo de vários alimentos, tais como chocolate, cacau, café, cerveja, chá, etc., diminui a adstringência de frutas e vegetais e suaviza o amargor de alimentos tendo um gosto amargo e aumenta preferências pelos alimentos pela adição de pequenas quantidades. Gentio-oligossacarideos podem ser aplicados a vários alimentos, por exemplo, sucos de fruta, tais como suco de laranja e suco de abacaxi, café, bebidas vegetais, mingau de abóbora, etc.Gentio oligosaccharides are characterized by having a softer and fresher bitterness compared to substances that have a bitter taste, such as Naringin. The bitter taste of gentile oligosaccharides, in harmony with the bitter taste of various foods such as chocolate, cocoa, coffee, beer, tea, etc., reduces the astringency of fruits and vegetables and softens the bitterness of foods having a bitter taste. and increases food preferences by adding small amounts. Gentio oligosaccharides can be applied to various foods, for example fruit juices such as orange juice and pineapple juice, coffee, vegetable drinks, pumpkin porridge, etc.

Tais gentio-oligossacarideos podem ser preparados industrialmente a partir de uma alta concentração de glicose por reações de condensação e transglicosilação, usando β-glicosidase fúngica (ver [Umino Takehiro: Study of Industrial Production of Gentiooligosaccharide, Journal of Applied Glycoscience (Japan), 42, 83 (1995)]). Atualmente, gentio-oligossacarideos tendo uma pureza tão elevada quanto 45% são produzidos por sintese enzimática, e aqueles tendo um grau de pureza tão elevada quanto 90% ou mais são produzidos usando resinas de troca catiônica. Aqui, os componentes restantes com excepção dos gentio-oligossacarideos são principalmente glicose, e, por exemplo, gentio-oligossacarídeos tendo uma pureza de 45% contêm cerca de 50 a 55% em peso de glicose com base no peso total dos componentes de sacarídeos, enquanto que gentio-oligossacarídeos tendo uma pureza de 90% contêm cerca de 0,5 a 5% em peso de glicose com base no peso total dos componentes de sacarídeos.Such gentio-oligosaccharides may be prepared industrially from a high glucose concentration by condensation and transglycosylation reactions using fungal β-glycosidase (see [Umino Takehiro: Study of Industrial Production of Gentiooligosaccharide, Journal of Applied Glycoscience (Japan), 42]). , 83 (1995)]). Gentile oligosaccharides having a purity as high as 45% are currently produced by enzymatic synthesis, and those having a purity as high as 90% or more are produced using cation exchange resins. Here, the remaining components with the exception of gentile oligosaccharides are mainly glucose, and for example gentile oligosaccharides having a purity of 45% contain about 50 to 55% by weight glucose based on the total weight of the saccharide components, whereas gentio-oligosaccharides having a purity of 90% contain about 0.5 to 5% by weight of glucose based on the total weight of saccharide components.

Glicose tem cerca de 60% da doçura da sacarose. Por vezes, a glicose contida nos gentio-oligossacarídeos desempenha um papel em fornecer a doçura, mas há casos em que ela inibe a manifestação do amargor, dependendo dos objetos a qual ela é aplicada. Além disso, é difícil aplicar gentio-oligossacarídeos a objetos devido à glicose neles contida. Por exemplo, no caso dos chocolates, a adição de gentio-oligossacarídeos com um elevado teor de glicose pode causar dificuldades na moldagem. Consequentemente, pode haver a necessidade de utilizar gentio-oligossacarídeos tendo altas purezas dependendo dos objetos aos quais são aplicados. Além disso, quanto maior a pureza de oligossacárideos, pode-se obter o efeito com menos quantidade, o que torna possível conseguir os mesmos efeitos com pequenas quantidades. Assim, a preparação de gentio-oligossacarídeos de alta pureza é essencial.Glucose has about 60% of the sweetness of sucrose. The glucose contained in gentile oligosaccharides sometimes plays a role in providing sweetness, but there are cases where it inhibits the manifestation of bitterness depending on the objects to which it is applied. In addition, it is difficult to apply gentio-oligosaccharides to objects due to the glucose contained therein. For example, in the case of chocolates, the addition of high glucose gentio oligosaccharides may cause difficulties in molding. Accordingly, there may be a need for gentile oligosaccharides having high purity depending on the objects to which they are applied. In addition, the higher the purity of oligosaccharides, the less effect can be obtained, which makes it possible to achieve the same effects with small amounts. Thus, the preparation of high purity gentio oligosaccharides is essential.

No entanto, na prática, existem algumas limitações na preparação de gentio-oligossacarídeos de alta pureza. Anteriormente, um caso tem sido relatado em que a pureza de gentio-oligossacarídeos foi aumentada para cerca de 90% ou mais por colunas utilizando resinas de troca iônica (veja [Umino Takehiro: Study of Industrial Production of Gentiooligosaccharide, Journal of Applied Glycoscience (Japão), 42, 85-91 (1995)]). No entanto, de acordo com a cromatografia em coluna, a pureza é determinada em função do grau de separação durante a preparação do gentio-oligossacarídeos de alta pureza, mas existem desvantagens na medida em que ao separar gentio-oligossacarideos com alta pureza, a quantidade das frações de subprodutos aumenta e gentio-oligossacarideos são eluídos com as frações de glicose, o que resulta em um baixo rendimento. Além disso, nos casos em que as frações de subprodutos são procurados para serem utilizados para outros fins, as frações de subprodutos devem ser submetidas a um novo tratamento, tal como a decomposição de gentio-oligossacarideos em glicose em baixas concentrações de enzima, uma vez que grandes quantidades de glicose e pequenas quantidades de gentio-oligossacarideos estão contidos nos mesmos.However, in practice there are some limitations in the preparation of high purity gentio oligosaccharides. Previously, a case has been reported where the purity of gentio-oligosaccharides has been increased to about 90% or more by columns using ion exchange resins (see [Umino Takehiro: Study of Industrial Production of Gentiooligosaccharide, Journal of Applied Glycoscience (Japan). ), 42, 85-91 (1995)]). However, according to column chromatography, purity is determined as a function of the degree of separation during the preparation of high purity gentio-oligosaccharides, but there are disadvantages in that when separating high purity gentio-oligosaccharides, the amount of the by-product fractions increases and gentio-oligosaccharides are eluted with the glucose fractions, which results in a low yield. In addition, where by-product fractions are sought for use for other purposes, by-product fractions should be retreated, such as the decomposition of glucose gentio-oligosaccharides at low enzyme concentrations, once that large amounts of glucose and small amounts of gentol oligosaccharides are contained therein.

REVELAÇÃO DA INVENÇÃO PROBLEMAS A SER RESOLVIDOS PELA INVENÇÃO É um objeto da presente invenção fornecer métodos para a preparação de gentio-oligossacarideos de alta pureza tendo uma pureza de pelo menos 90% sem a produção de subprodutos desnecessários. É outro objeto da presente invenção proporcionar gentio-oligossacarideos de alta pureza tendo uma pureza de pelo menos 90% preparados pelos métodos acima. É ainda um outro objeto da presente invenção proporcionar métodos para melhorar o gosto de alimentos através da adição dos gentio-oligossacarideos de alta pureza acima tendo uma pureza de pelo menos 90% aos alimentos. É ainda um outro objeto da presente invenção proporcionar métodos para a utilização dos gentio-oligossacarídeos de alta pureza acima tendo uma pureza de pelo menos 90% como alternativas aos alimentos ou aditivos alimentares.DISCLOSURE OF THE INVENTION PROBLEMS TO BE SOLVED BY THE INVENTION It is an object of the present invention to provide methods for the preparation of high purity gentio oligosaccharides having a purity of at least 90% without producing unnecessary byproducts. It is another object of the present invention to provide high purity gentol oligosaccharides having a purity of at least 90% prepared by the above methods. It is yet another object of the present invention to provide methods for improving food taste by adding the above high purity gentio-oligosaccharides having a purity of at least 90% to foods. It is yet another object of the present invention to provide methods for using the above high purity gentio-oligosaccharides having a purity of at least 90% as alternatives to foods or food additives.

MEIOS PARA RESOLVER OS PROBLEMAS A fim de atingir os objetivos acima referidos, são proporcionados métodos para a preparação de gentio-oligossacarIdeos de pureza alta que compreendem: a adição de um gentio-oligossacarideo de baixa pureza a um meio liquido; submeter o meio líquido à inoculaçâo com um microrganismo, seguida da incubação e fermentação para consumir a glicose que está contida no gentio-oligossacarideo de baixa pureza; remover o microorganismo a partir do caldo de fermentação obtido, por exemplo, por meio de filtraçâo e centrifugação, e submeter o caldo obtido à purificação.MEANS FOR SOLVING PROBLEMS In order to achieve the above objectives, methods are provided for the preparation of high purity gentio-oligosaccharides which comprise: adding a low purity gentio-oligosaccharide to a liquid medium; subjecting the liquid medium to inoculation with a microorganism, followed by incubation and fermentation to consume the glucose contained in the low purity gentol oligosaccharide; remove the microorganism from the fermentation broth obtained, for example, by filtration and centrifugation, and subject the obtained broth to purification.

Além disso, a presente invenção proporciona gentio-oligossacarideos de alta pureza tendo uma pureza de pelo menos 90% preparados através dos métodos acima.In addition, the present invention provides high purity gentol oligosaccharides having a purity of at least 90% prepared by the above methods.

Além disso, a presente invenção fornece métodos para melhorar o sabor dos alimentos através da adição dos gentio-oligossacarídeos de alta pureza acima tendo uma pureza de pelo menos 90%, para os alimentos.In addition, the present invention provides methods for improving the taste of food by adding the above high purity gentoyl oligosaccharides having a purity of at least 90% to the food.

Além disso, a presente invenção proporciona métodos de utilização dos gentio-oligossacarídeos de alta pureza acima tendo uma pureza de pelo menos 90% como alternativas aos alimentos ou aditivos alimentares.In addition, the present invention provides methods of using the above high purity gentol oligosaccharides having a purity of at least 90% as alternatives to foods or food additives.

EFEITO DA INVENÇÃOEFFECT OF INVENTION

De acordo com os métodos da presente invenção onde gentio-oligossacarídeos de baixa pureza contendo grandes quantidades de glicose são submetidos à inoculação com microorganismos que consomem glicose como fonte de carbono, mas não consomem gentio-oligossacarideos e fermentação, e em seguida o caldo de fermentação obtido é submetido à filtração e purificação, gentio-oligossacarideos de alta pureza tendo uma pureza de pelo menos 90% podem ser preparados sem a produção de subprodutos desnecessários. Além disso, os gentio-oligossacarídeos de alta pureza tendo uma pureza de pelo menos 90% obtidos de acordo com a presente invenção podem melhorar o gosto ou sabor dos alimentos, tais como cacau, chocolate, café, cerveja, chá, pão ou produtos de confeitaria, bebidas, etc., pela adição de pequenas quantidades e podem ser vantajosamente utilizados como alternativas aos alimentos ou dos seus ingredientes principais.In accordance with the methods of the present invention where low purity gentile oligosaccharides containing large amounts of glucose are subjected to inoculation with microorganisms that consume glucose as a carbon source but do not consume gentile oligosaccharides and fermentation, and then the fermentation broth. obtained is subjected to filtration and purification, high purity gentio-oligosaccharides having a purity of at least 90% can be prepared without producing unnecessary by-products. In addition, high purity gentile oligosaccharides having a purity of at least 90% obtained in accordance with the present invention may enhance the taste or taste of foods such as cocoa, chocolate, coffee, beer, tea, bread or bread products. confectionery, beverages, etc., by the addition of small amounts and may be advantageously used as alternatives to foods or their main ingredients.

DESCRIÇÃO DETALHADA PARA A PRÁTICA DA INVENÇÃODETAILED DESCRIPTION FOR INVENTION PRACTICE

Os métodos para a preparação de gentio-oligossacarídeos de alta pureza de acordo com a presente invenção compreendem adicionar um gentio-oligossacarídeo de baixa pureza a um meio líquido; submeter o meio líquido a inoculação com um microrganismo, seguindo-se à incubação e à fermentação para consumir glicose que está contida no gentio-oligossacarídeo de baixa pureza; remover o microorganismo a partir do caldo de fermentação obtido, e submeter o caldo à purificação.Methods for the preparation of high purity gentio oligosaccharides according to the present invention comprise adding a low purity gentio oligosaccharide to a liquid medium; subjecting the liquid medium to inoculation with a microorganism following incubation and fermentation to consume glucose which is contained in the low purity gentio-oligosaccharide; remove the microorganism from the obtained fermentation broth, and subject the broth to purification.

Os gentio-oligossacarídeos de baixa pureza que são utilizados no presente invenção como matéria-prima não são particularmente limitados e quaisquer gentio- oligossacarideos que são obtidos com os métodos convencionais de preparação de gentio-oligosacarideos, por exemplo, por reações de condensação e transglicosilação usando uma beta-glucosidase fúngica a partir de uma concentração alta de glicose (ver [Umino Takehiro: Study of Industrial Production of Gentiooligosaccharide, Journal of Applied Glycoscience (Japão), 42, 83 (1995)]), ou gentio- oligossacarídeos obtidos por processos de preparação convencionais de gentio-oligossacarideos e então inicialmente purificados utilizando colunas com resina de troca iônica para aumentar a pureza podem ser utilizados. Os gentio-oligossacarideos de baixa pureza que são usados na presente invenção contêm cerca de 15 a 65% em peso de glicose e podem ser adicionados em concentrações de sólidos de 5 a 70% (p/v), com base no volume do meio de cultura.The low purity gentoyligosaccharides which are used in the present invention as a feedstock are not particularly limited and any gentoyligosaccharides that are obtained with conventional gentoyligosaccharide preparation methods, for example by condensation and transglycosylation reactions using a fungal beta-glucosidase from a high glucose concentration (see [Umino Takehiro: Study of Industrial Production of Gentiooligosaccharide, Journal of Applied Glycoscience (Japan), 42, 83 (1995)]), or process-obtained gentiooligosaccharides Conventional gentio-oligosaccharide preparations and then initially purified using ion exchange resin columns to increase purity may be used. The low purity gentio-oligosaccharides that are used in the present invention contain about 15 to 65% by weight of glucose and may be added at solids concentrations of 5 to 70% (w / v) based on the volume of the medium. culture.

Além disso, o meio de cultura para a fermentação da presente invenção pode conter 0,1 a 1,5% (p/v) de extrato de levedura, 0,1 a 0,5% (p/v) de extrato de malte, e de 0,1 a 0,8% (p/v) de peptona como componentes do meio de cultura.In addition, the fermentation culture medium of the present invention may contain 0.1 to 1.5% (w / v) yeast extract, 0.1 to 0.5% (w / v) malt extract , and from 0.1 to 0.8% (w / v) peptone as components of the culture medium.

Entre os componentes do meio de cultura acima, aqueles tais como extrato de levedura, extrato de malte e peptona são adicionados para o crescimento de microrganismos para remover a glicose contida nos gentio-oligosacarideos, e é desejável que tais componentes sejam adicionados em quantidades dentro do faixas acima para a cultura eficiente de microrganismos.Among the above culture medium components, those such as yeast extract, malt extract and peptone are added for the growth of microorganisms to remove the glucose contained in the gentol oligosaccharides, and it is desirable that such components be added in amounts within the range. above ranges for efficient culture of microorganisms.

Os extratos de levedura incluídos no meio líquido para a fermentação da presente invenção são exsudados solúveis em água que são extraídos a partir de leveduras e são bem conhecidos na técnica. Eles são estímulos superiores para o crescimento de microrganismos e desempenham um papel no fornecimento do meio de incubação com vitaminas, nitrogênio, aminoácidos, carbono, etc. É desejável que os extratos de levedura sejam utilizados na concentração de 0,1 a 1,5% (p/v) com base no meio de cultura.Yeast extracts included in the fermentation liquid medium of the present invention are water soluble exudates which are extracted from yeast and are well known in the art. They are superior stimuli for the growth of microorganisms and play a role in providing the incubation medium with vitamins, nitrogen, amino acids, carbon, etc. It is desirable that yeast extracts be used at a concentration of 0.1 to 1.5% (w / v) based on the culture medium.

Os extratos de malte são obtidos por cultura de grãos de cevada com leveduras e bolores. Além disso, uma vez que eles contêm altas concentrações de caboidratrados, maltose, em particular, extratos de malte são adequados para a cultura de microorganismos, tais como leveduras e fungos e desempenham um papel no fornecimento do meio com nutrientes tais como o carbono e proteínas. É desejável que os extratos de malte são utilizados na concentração de 0,1 a 0,5% (p/v) com base no meio de cultura.Malt extracts are obtained by growing barley grains with yeast and mold. In addition, since they contain high concentrations of cabohydrates, maltose, in particular, malt extracts are suitable for the cultivation of microorganisms such as yeast and fungi and play a role in providing the medium with nutrients such as carbon and proteins. . It is desirable that malt extracts are used at a concentration of 0.1 to 0.5% (w / v) based on the culture medium.

Peptonas são pós amarelos de pequenas moléculas que contêm vestígios de proteose, que são obtidos por digestão de proteínas tais como a carne animal e caseína utilizando enzimas tais como a pepsina, tripsina, pancreatina, e são usadas como fontes de nitrogênio no meio de cultura. É desejável que peptonas sejam utilizadas na concentração çie 0,1 a 0,8% (p/v) com base no meio de cultura.Peptones are small molecule yellow powders containing traces of proteas, which are obtained by digesting proteins such as animal meat and casein using enzymes such as pepsin, trypsin, pancreatin, and are used as nitrogen sources in the culture medium. It is desirable for peptones to be used at a concentration of from 0.1 to 0.8% (w / v) based on the culture medium.

Além disso, o meio líquido para a fermentação da presente invenção pode conter pequenas quantidades de componentes adicionais, tais como um agente antiespuma, para a cultura eficiente quando a espuma é gerada durante a fermentação de microorganismos para o consumo de glicose contida nos gentio-oligossacarídeos.In addition, the liquid fermentation medium of the present invention may contain small amounts of additional components, such as an antifoam agent, for efficient culture when the foam is generated during the fermentation of glucose-containing microorganisms in the gentio-oligosaccharides. .

Assim como os microrganismos utilizados para a fermentação para a obtenção de gentio-oligossacarideos de pureza alta de acordo com a presente invenção, aqueles- que consomem glicose como fonte de carbono enquanto não consomem gentio-oligosacarideos, por exemplo, fungos da fermentação, tais como leveduras, bactérias e bolores podem ser usados. Exemplos representativos de microrganismos incluem espécies de leveduras, por exemplo, aquelas que pertencem a Saccharomyces sp. tais como Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces carlsbergensis, Saccharomyces uvarum, Saccharomyces ellipsoideus, Saccharomyces bayanus. Além destes, os Lactobacillus sp pertencentes ao Bacillus sp., e Candida sp. podem ser usados. Em particular, as leveduras são desejáveis na medida em que podem ser facilmente separadas e removidas do meio liquido, após a fermentação ser finalizada, e a levedura removida pode ser vendida como subproduto, tais como alimentos para animais.As well as the microorganisms used for fermentation to obtain high purity gentol oligosaccharides according to the present invention, those which consume glucose as a carbon source while not consuming gentol oligosaccharides, for example fermentation fungi such as Yeast, bacteria and mold can be used. Representative examples of microorganisms include yeast species, for example those belonging to Saccharomyces sp. such as Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces carlsbergensis, Saccharomyces uvarum, Saccharomyces ellipsoideus, Saccharomyces bayanus. In addition, the Lactobacillus sp belonging to Bacillus sp., And Candida sp. can be used. In particular, yeast are desirable in that they can be easily separated and removed from the liquid medium after fermentation is completed, and the removed yeast can be sold as a by-product such as feed.

Na presente invenção, é desejável que os microorganismos que são usados para a fermentação para a remoção de glicose contida nos gentio-oligossacarídeos de baixa pureza sejam adicionados a uma concentração de cerca de 10% (v/v) em relação à quantidade de meio de cultura. A adição de microorganismos em quantidades que excedem a quantidade acima é problemática na medida em que a eficiência é reduzida devido ao excesso de fermentação, enquanto que o uso de microrganismos em quantidades menores do que a quantidade acima tem problemas na medida em que o tempo de incubação é prolongado.In the present invention, it is desirable that the microorganisms that are used for the fermentation for glucose removal contained in the low purity gentio-oligosaccharides are added at a concentration of about 10% (v / v) relative to the amount of medium. culture. The addition of microorganisms in amounts exceeding the above amount is problematic as efficiency is reduced due to excess fermentation, while the use of microorganisms in amounts lower than the above amount has problems as the time of Incubation is prolonged.

Na presente invenção, a fermentação pode ser realizada sob condições de temperatura variando de 25°C a 35°C, uma aeração variando de 0,5 a 2 v/v/m (volume de ar/volume de trabalho/minuto) e uma taxa de agitação de 200 rpm a 500 rpm por 24 horas a 72 horas.In the present invention, fermentation may be performed under temperature conditions ranging from 25 ° C to 35 ° C, aeration ranging from 0.5 to 2 v / v / m (air volume / working volume / minute) and a Agitation rate from 200 rpm to 500 rpm for 24 hours to 72 hours.

Tal como descrito acima, se um meio de cultura contendo gentio-oligossacarideos de baixa pureza é submetido à inoculação com microorganismos de incubação, e a fermentação, a glicose que está contida nos gentio-oligossacarideos de baixa pureza é consumida pelos microorganismos e removida, o que torna possível a obtenção de gentio-oligossacarideos de alta pureza .As described above, if a culture medium containing low purity gentio-oligosaccharides is inoculated with incubation microorganisms, and fermentation, the glucose that is contained in the low purity gentio-oligosaccharides is consumed by the microorganisms and removed. which makes it possible to obtain high purity gentio oligosaccharides.

Após a fermentação ser finalizada, os microorganismos que são usados para a fermentação podem ser removidos a partir do caldo de fermentação, por exemplo, usando centrifugação ou filtração, e, em seguida, o caldo obtido pode ser submetido a um processo de purificação, incluindo a descoloração usando carvão ativado e desmineralização com resinas de troca iônica e evaporado sob pressão reduzida, tornando assim possível a obtenção de gentio-oligossacarideos de alta pureza que possuem uma pureza de pelo menos 90%.After the fermentation is completed, the microorganisms that are used for fermentation can be removed from the fermentation broth, for example using centrifugation or filtration, and then the obtained broth can be subjected to a purification process including discoloration using activated carbon and demineralization with ion exchange resins and evaporated under reduced pressure, thus making it possible to obtain high purity gentio-oligosaccharides having a purity of at least 90%.

Os gentio-oligossacarideos de alta pureza tendo uma pureza de pelo menos 90% obtida de acordo com os métodos da presente invenção têm uma composição de sacarídeos como mostrado na Tabela 1 abaixo (com base no peso total dos sacarídeos residuais). __________________________Tabela 1__________________________ Como tais, de acordo com os métodos para a preparação de gentio-oligossacarídeos de alta pureza através da fermentação da presente invenção, o teor de glicose nos gentio-oligossacarideos pode ser reduzido para 0,5%, em peso, e gentio-oligossacarideos tendo uma pureza de pelo menos 90% podem ser facilmente obtidos sem a produção de subprodutos desnecessários.High purity gentio-oligosaccharides having a purity of at least 90% obtained according to the methods of the present invention have a saccharide composition as shown in Table 1 below (based on the total weight of the residual saccharides). As such, according to the methods for the preparation of high purity gentio oligosaccharides by fermentation of the present invention, the glucose content of the gentio oligosaccharides may be reduced to 0.5% by weight and gentile. Oligosaccharides having a purity of at least 90% can easily be obtained without producing unnecessary byproducts.

Além disso, durante a preparação dos gentio-oligossacarideos de alta pureza através da fermentação de acordo com a presente invenção, a glicose é metabolizada por microrganismos, tais como levedura e farelo de levedura, para a produção de etanol. Entre os subprodutos de tal processo de fermentação, farelo de levedura pode ser utilizado como alimentação animal, enquanto o etanol deverá ser o centro das atenções como bio-etanol, um novo combustível do futuro.In addition, during the preparation of the high purity gentio-oligosaccharides by fermentation according to the present invention, glucose is metabolized by microorganisms such as yeast and yeast bran to produce ethanol. Among the byproducts of such a fermentation process, yeast bran can be used as animal feed, while ethanol should be the center of attention as bioethanol, a new fuel of the future.

Além disso, gentio-oligossacarídeos de alta pureza tendo uma pureza de pelo menos 90% obtidos de acordo com a presente invenção podem resolver problemas associados com Gentio-oligossacarídeos convencionais, onde a sua utilização foi limitada devido às dificuldades de moldagem ou conformação dos produtos que são causados pelas propriedades físicas da glicose e os efeitos prejudiciais do seu alto teor em glucose ou doçura. Além disso, eles podem melhorar o gosto e o sabor de vários alimentos, tais como cacau, chocolate, cervejas, chá, café e ginseng vermelho pela adição de pequenas quantidades. Além disso, eles podem ser vantajosamente utilizados como alternativas aos alimentos, tais como cacau, café, chocolate, chá, pão ou produtos de confeitaria, e os seus ingredientes principais.In addition, high purity gentio-oligosaccharides having a purity of at least 90% obtained in accordance with the present invention may solve problems associated with conventional gentio-oligosaccharides, where their use has been limited due to difficulties in molding or shaping of the products they produce. are caused by the physical properties of glucose and the detrimental effects of its high glucose or sweetness. In addition, they can enhance the taste and flavor of various foods such as cocoa, chocolate, beer, tea, coffee and red ginseng by adding small amounts. In addition, they can be advantageously used as alternatives to foods such as cocoa, coffee, chocolate, tea, bread or confectionery, and their main ingredients.

Por exemplo, na preparação de produtos de confeitaria de cacau, chocolate, chá verde ou semelhantes, substituindo gentio-oligossacarideos de alta pureza tendo uma pureza de pelo menos 90% obtidos de acordo com a presente invenção, por 0,1 a 40% em peso dos ingredientes principais dos produtos de confeitaria, por exemplo, cacau (por exemplo, pó de cacau sem açúcar 100% (Valrhona), cacau Hershey (HERSHEY), etc.), chocolate preto (por exemplo, Real Dark Choco Chip (Belcolade) , Le Noir 68% Baking Bar (Valrhona) , etc.), ou pó de chá verde, etc, podem apresentar um amargor e um gosto similar ao dos produtos convencionais para os quais gentio-oligossacarideos não são adicionados.For example, in the preparation of cocoa confectionery, chocolate, green tea or the like, substituting high purity gentio-oligosaccharides having a purity of at least 90% obtained according to the present invention by 0.1 to 40% by weight. weight of the main ingredients of confectionery, eg cocoa (eg 100% unsweetened cocoa powder (Valrhona), Hershey cocoa (HERSHEY), etc.), dark chocolate (eg Real Dark Choco Chip (Belcolade ), Le Noir 68% Baking Bar (Valrhona), etc.), or green tea powder, etc. may have a bitterness and taste similar to conventional products to which gentio-oligosaccharides are not added.

Além disso, no caso da utilização bolos de cacau e de chocolate preto, substituindo gentio-oligossacarideos de alta pureza tendo uma pureza de pelo menos 90% obtidos de acordo com a presente invenção, por 0,1 a 40% em peso de chocolate preto e de 0,1 a 40% em peso de cacau que são os ingredientes principais dos bolos podem também exibir um amargor e um gosto similar aos dos produtos convencionais os gentio-oligossacarideos não são adicionados.In addition, in the case of use of cocoa and dark chocolate cakes, substituting high purity gentio-oligosaccharides having a purity of at least 90% obtained according to the present invention, by 0.1 to 40% by weight of dark chocolate. and from 0.1 to 40% by weight of cocoa which are the main ingredients of the cakes may also exhibit a bitterness and taste similar to that of conventional products gentile oligosaccharides are not added.

Para as bebidas de ginseng vermelho, a proporção de gentio-oligossacarideos de alta pureza a ser usado varia de acordo com a concentração do ginseng vermelho concentrado a ser adicionado nas mesmas. No caso das bebidas de ginseng vermelho que contêm 1,5 a 2% em peso de concentrado de ginseng vermelho, substituindo gentio-oligossacarídeos de alta pureza tendo uma pureza de pelo menos 90% por 0,1 a 40% em peso de concentrado de ginseng vermelho podem exibir um armagor similar ao da bebida convencional, ao passo que, no caso de bebidas que contêm ginseng vermelho 0,4-0,5% em peso de concentrado de ginseng vermelho, substituindo gentio-oligossacarideos de alta pureza tendo uma pureza de, pelo menos de 90% para 0,1 e 30% em peso de concentrado de ginseng vermelho podem exibir um amargor e um gosto similar aos das bebidas convencionais para os quais Gentio-oligossacarideos não são adicionados. Além disso, quando Gentio-oligossacarideos de alta pureza tendo uma pureza de pelo menos 90% são utilizados em vez de concentrados de ginseng vermelho como descrito acima, gentio-oligossacarideos de alta pureza podem ser adicionados por um a dez vezes a quantidade de concentrado de ginseng vermelho a ser substituído.For red ginseng beverages, the proportion of high purity gentio oligosaccharides to be used varies according to the concentration of red ginseng concentrate to be added to them. In the case of red ginseng beverages containing 1.5 to 2% by weight of red ginseng concentrate, substituting high purity gentio-oligosaccharides having a purity of at least 90% by 0.1 to 40% by weight of Red ginseng may exhibit a similar armagor to that of the conventional beverage, whereas for beverages containing red ginseng 0.4-0.5% by weight of red ginseng concentrate, substituting for high purity gentio oligosaccharides having a purity from at least 90% to 0.1 and 30% by weight of red ginseng concentrate may exhibit similar bitterness and taste to conventional beverages to which Gentio-oligosaccharides are not added. In addition, when high purity gentio oligosaccharides having a purity of at least 90% are used instead of red ginseng concentrates as described above, high purity gentio oligosaccharides may be added by one to ten times the amount of Red ginseng to be replaced.

Para as bebidas de café, embora as quantidades substituídas variam dependendo das características dos grãos de café, tais como o local de origem para a planta de café, gentio-oligossacarídeos de alta pureza da presente invenção podem ser substituídos por 0,1 até 10% em peso dos grãos de café. A presente invenção é ainda descrita e ilustrada de acordo com os exemplos fornecidos abaixo. No entanto, deve notar-se que os seguintes exemplos são apresentados apenas para fins ilustrativos e não se destinam a limitar o escopo da presente invenção. EXEMPLO 1: (1) Preparação da cultura de sementes 30 ml de caldo YM (Disco) foi inoculado com 0,5 ml da espécie de Saccharomyces cerevisiae Y1135, seguida de incubação a 30°C durante 24 horas com agitação a 180 rpm. (2) A incubação O gentio-oligosaccarideo bruto (pureza 45%) foi adicionado a 50 ml de meio contendo 0,3% (p/v) de extrato de levedura (Difco), 0,3% (p/v) de extrato de malte (Difco), 0,5% (p/v) de peptona (Difco), e água nas concentrações de sólidos de 5% (p/v) e 10% (p/v), respectivamente, com base no volume do meio, e foi inoculado com 1 ml de cultura da semente de Saccharomyces cerevisiae Y1135 obtido na etapa (1) e, a seguida pela incubação por 48 horas sob condições de temperatura de cultura de 30°C, areação de 1,0 v/v/m, e taxa de agitação de 300 rpm em um incubador. 0 meio de cultura foi analisado usando cromatografia liquida de alta eficiência (HPLC) (Waters, HPX-42A da coluna) e BIO-LC (DIONEX, ICS-5000 Bio-LC Cromatography System, PA detector, PA-1 column). Como resultado, no caso de se realizar a incubação com a adição de gentio-oligosaccarideo bruto (pureza 45%) a uma concentração sólida de 5% (p/v) com base no volume do meio liquido, gentio-oligossacarideos tendo um teor de gentio-oligosaccarideo de 92,8% em peso, com base nos sacarideos residuais foram obtidos após a fermentação, enquanto que no caso de se realizar a incubação com a adição de gentio-oligosaccarideo bruto (pureza 45%) a uma concentração de sólidos de 10% (p/v), gentio-oligossacarideos tendo um teor ‘ de gentio-oligosaccarideo de 92,0 % em peso, com base nos sacarideos residuais foram obtidos após a fermentação. EXEMPLO 2: O gentio-oligosaccarideo bruto (pureza 45%) foi adicionado a 3 1 de meio contendo 0,3% (p/v) de extrato de levedura (Difco), 0,3% (p/v) de extrato de malte (Difco), 0,5% (p/v) de peptona (Difco), 1 ml de agente anti-espuma (Dow Corning, LS-300), e água nas concentrações de sólidos de 30% (p/v), 40% (p/v) e 50 % (p/v), respectivamente, com base no volume do meio, e foi inoculado com 300 ml da cultura de sementes de Saccharomyces cerevisíae Y1135 obtida na etapa (1), seguida de incubação por 48 horas sob condições de temperatura da cultura 30°C, areamento de 1,0 v/v/m, e taxa de agitação de 300 rpm em um incubador de 51. O gentio-oligosaccarldeo contendo caldo de cultura obtido após incubação compreende, além dos gentio-oligossacarideos e glicose, glicerol e ingredientes de monossacarídeo (por exemplo, glicose, frutose, etc.) resultantes da liquefacçâo e glicosilação de amido. O caldo de cultura foi submetido à filtração para remover os microrganismos, seguida pela descoloração com carvão ativado e desmineralização com resinas de troca iônica, e em seguida concentrou-se para se obter o pó de gentio-oligosaccarideo usando um secador por pulverização. Os teores dos ingredientes no pó (com base no peso total de sacarideos residuais) foram analisados por um modo semelhante ao do Exemplo 1. Os resultados são mostrados na Tabela 2 abaixo.For coffee drinks, although the amounts substituted vary depending on the characteristics of the coffee beans, such as the place of origin for the coffee plant, the high purity gentio oligosaccharides of the present invention may be substituted by 0.1 to 10%. by weight of coffee beans. The present invention is further described and illustrated according to the examples provided below. However, it should be noted that the following examples are given for illustrative purposes only and are not intended to limit the scope of the present invention. EXAMPLE 1: (1) Preparation of seed culture 30 ml of YM broth (Disco) was inoculated with 0.5 ml of Saccharomyces cerevisiae Y1135 species, followed by incubation at 30 ° C for 24 hours with shaking at 180 rpm. (2) Incubation Crude gentile oligosaccharide (purity 45%) was added to 50 ml medium containing 0.3% (w / v) yeast extract (Difco), 0.3% (w / v) malt extract (Difco), 0.5% (w / v) peptone (Difco), and water at solids concentrations of 5% (w / v) and 10% (w / v), respectively, based on medium volume, and was inoculated with 1 ml of Saccharomyces cerevisiae Y1135 seed culture obtained in step (1), followed by incubation for 48 hours under 30 ° C culture / v / m, and stir rate of 300 rpm in an incubator. Culture medium was analyzed using high performance liquid chromatography (HPLC) (Waters, HPX-42A column) and BIO-LC (DIONEX, ICS-5000 Bio-LC Chromatography System, PA detector, PA-1 column). As a result, in the case of incubation with the addition of crude gentio oligosaccharide (purity 45%) to a solid concentration of 5% (w / v) based on the volume of the liquid medium, gentio oligosaccharides having a content of 92.8% by weight of the gentio oligosaccharide based on the residual saccharides were obtained after fermentation, whereas in case of incubation with the addition of crude gentio oligosaccharide (purity 45%) to a solids concentration of 10% (w / v) gentile oligosaccharides having a gentio oligosaccharide content of 92.0% by weight based on the residual saccharides were obtained after fermentation. EXAMPLE 2: Crude gentile oligosaccharide (purity 45%) was added to 3 l of medium containing 0.3% (w / v) yeast extract (Difco), 0.3% (w / v) malt (Difco), 0.5% (w / v) peptone (Difco), 1 ml antifoam (Dow Corning, LS-300), and water at 30% (w / v) solids , 40% (w / v) and 50% (w / v), respectively, based on the volume of the medium, and was inoculated with 300 ml of Saccharomyces cerevisíae Y1135 seed culture obtained in step (1), followed by incubation for 48 hours under conditions of 30 ° C culture temperature, 1.0 v / v / m setting, and 300 rpm agitation rate in a 51 incubator. The broth-containing gentile oligosaccharide obtained after incubation comprises, in addition to the gentol oligosaccharides and glucose, glycerol and monosaccharide ingredients (e.g. glucose, fructose, etc.) resulting from starch liquefaction and glycosylation. The culture broth was subjected to filtration to remove microorganisms, followed by decolorization with activated charcoal and demineralization with ion exchange resins, and then concentrated to obtain gentio-oligosaccharide powder using a spray dryer. Powder ingredient contents (based on total weight of residual saccharides) were analyzed in a similar manner to Example 1. Results are shown in Table 2 below.

Tabela 2 Como mostrado na Tabela 2, gentio-oligossacarideos de alta pureza tendo uma pureza de 90% ou mais podem ser obtidos por fermentação, independentemente de qual concentração de gentio-oligossacarideos bruto é adicionada. EXEMPLO 3: Na preparação de bolos tendo chocolate preto (Dark Chocochip Real de Belcolade (Bélgica), ingredientes: cacau 45,8% em peso, manteiga de cacau 9,9%, açúcar, lecitina, aroma de baunilha natural, etc.), e pó de cacau (100% de pó de cacau sem açúcar de Valrhona (França)), como os ingredientes principais, Grupo Experimental 1 onde 12 g de gentio-oligossacarldeo de alta pureza (pureza 95,2%), obtido no Exemplo 2 foi substituido por 7,7% em peso do chocolate preto e 33,3% em peso do pó de cacau e Grupo Experimental 2, onde 10 g de gentio-oligossacarideo de alta pureza (pureza 95,2%) foi substituido por 6,1% em peso do chocolate preto e 33,3% em peso do pó de cacau, ou grupo de controle que é constituído de acordo com as taxas de combinação convencionais foram empregadas para preparar bolos. As proporções respectivas de combinação de cada amostra dos grupos experimentais 1 e 2 e do grupo de controle foram apresentadas na Tabela 3 abaixo.As shown in Table 2, high purity gentio-oligosaccharides having a purity of 90% or more can be obtained by fermentation, regardless of which concentration of crude gentio-oligosaccharides is added. EXAMPLE 3: In the preparation of cakes having dark chocolate (Dark Chocochip Real de Belcolade (Belgium), ingredients: cocoa 45.8% by weight, cocoa butter 9.9%, sugar, lecithin, natural vanilla flavoring, etc.). , and cocoa powder (100% unsweetened cocoa powder from Valrhona (France)) as the main ingredients, Experimental Group 1 where 12 g of high purity gentio-oligosaccharide (95.2% purity) obtained in Example 2 was replaced by 7.7% by weight of dark chocolate and 33.3% by weight of cocoa powder and Experimental Group 2, where 10 g of high purity gentio-oligosaccharide (purity 95.2%) was replaced by 6 1% by weight of dark chocolate and 33.3% by weight of cocoa powder, or control group which is constituted according to conventional combination rates were employed to prepare cakes. The respective combination ratios of each sample from experimental groups 1 and 2 and the control group were presented in Table 3 below.

Tabela 3 (*l)Teor de proteína: 8% 0 amargor, maciez e preferência pelo grupo de controle preparado e grupos experimentais 1 e 2 foram apreciados e avaliados através de um teste sensorial.Table 3 (* l) Protein content: 8% 0 bitterness, softness and preference for the prepared control group and experimental groups 1 and 2 were assessed and evaluated by a sensory test.

No teste sensorial, um teste de 9 escalas, onde os atributos (amargor e maciez) e preferência foram avaliados usando graus de classificação de 1 a 9, foi usado. No caso de amargor, quanto mais próximo à pontuação é do 9 ele é mais amargo, ao passo que no caso da maciez, quanto mais próximo o resultado é do 9, ele é mais macio. No que diz respeito da preferência do sabor, quanto mais próximo à pontuação é do 9, melhor é a preferência. Os avaliadores selecionados eram 6 mulheres e 6 homens com idades variando de 25 a 40 e foram educados e treinados quanto ao teste sensorial por dois meses. Os valores médios de amargor, maciez e preferência para bolos feitos a partir do grupo de controle e grupos experimentais- 1 e 2 são mostrados na Tabela 4 abaixo. 0 programa SigmaPlot 11,0 de Software Systat como utilizado para os dados estatísticos sobre os resultados dos testes sensoriais, onde as diferenças estatisticamente significativas entre os três grupos acima foram examinadas com relação aos valores médios pelo modelo one-way ANOVA em um nível de significância de 0,05 e as diferenças entre os grupos foram analisadas estatisticamente utilizando o teste de Tukey. __________Tabela 4___________________________ Como resultado do teste sensorial sobre o amargor, maciez e preferência, os bolos do Grupo Experimental 1 onde o gentio-oligossacarídeo de alta pureza foi substituído por 7,7% em peso do chocolate preto e 33,3% em peso do pó de cacau apresentaram uma pontuação mais alta estatisticamente significativa para o amargor, mas não apresentaram diferenças estatísticas para a maciez e preferência, em comparação com o bolos do Grupo de Controle que não contêm gentio-oligossacarídeo de alta pureza. Além disso, o bolos do Grupo Experimental 2, em que o gentio-oligossacarídeo de pureza alta foi incluído em menor quantidade, ou seja, substituído por 6,1% em peso de chocolate preto e 33,3% em peso de cacau em pó, não apresentaram diferenças estatísticas significativas para o amargor e maciez, enquanto exibiram uma preferência estatisticamente significativa mais alta quando comparados com o bolos do grupo de controle.In the sensory test, a 9-scale test, where attributes (bitterness and softness) and preference were evaluated using grades of 1 to 9, was used. In the case of bitterness, the closer the score is to 9, the more bitter it is, while in the case of softness, the closer the score is to 9, the softer it is. With respect to taste preference, the closer the score is to 9, the better the preference. The evaluators selected were 6 women and 6 men with ages ranging from 25 to 40 and were educated and trained in sensory testing for two months. The average values of bitterness, softness and preference for cakes made from the control group and experimental groups 1 and 2 are shown in Table 4 below. Systat Software's SigmaPlot 11.0 program as used for statistical data on sensory test results, where statistically significant differences between the three groups above were examined with respect to mean values by the one-way ANOVA model at a significance level. 0.05 and the differences between the groups were statistically analyzed using the Tukey test. __________Table 4___________________________ As a result of the sensory test on bitterness, softness and preference, the Experiment Group 1 cakes where the high purity gentio-oligosaccharide was replaced by 7.7 wt% of dark chocolate and 33.3 wt% of the powder. Cocoa beans showed a statistically significant higher score for bitterness, but did not show statistical differences for smoothness and preference compared to Control Group cakes that did not contain high purity gentio-oligosaccharide. In addition, cakes from Experimental Group 2, in which the high purity gentio-oligosaccharide was included in a smaller amount, ie replaced by 6.1% by weight of dark chocolate and 33.3% by weight of cocoa powder showed no statistically significant differences for bitterness and softness, while exhibiting a statistically significant higher preference when compared to the cakes in the control group.

Isto é, pode ser confirmado a partir dos resultados dos Grupos Experimentais 1 e 2, que substituindo Gentio-oligossacarídeos de alta pureza tendo a pureza de 90% ou mais da presente invenção por não mais que 40% em peso dos ingredientes principais do bolos, isto é, o pó de cacau e chocolate preto, não mostrou diferenças sensoriais, enquanto exibiu um sabor e preferência total melhorada, em comparação com os bolos convencionais que não contêm gentio-oligosacarídeo. EXEMPLO 4: Na preparação de bebidas de ginseng vermelho contendo 2% em peso (6 g) de concentrado de ginseng vermelho, o gentio-oligossacarídeo de alta pureza (pureza 92,5%) obtido no Exemplo 2 foi substituído por 25% em peso (1,5 g) do ginseng vermelho concentrado, enquanto que o gentio- oligossacarideo de alta pureza foi adicionado em uma quantidade três vezes maior (4,5 g) à quantidade de ginseng vermelho concentrado para ser substituído (1,5 g) . Os principais ingredientes e proporções de combinação das bebidas de ginseng vermelho são mostrados na Tabela 5 abaixo. ______Tabela 5__________________________ As bebidas de ginseng vermelho do Grupo de Controle e Grupo Experimental foram avaliadas quanto ao amargor, maciez e preferência por um teste sensorial, e os resultados são mostrados na Tabela 6 abaixo. 0 teste sensorial e a análise estatística foram realizados da mesma maneira como descrito no Exemplo 3.That is, it can be confirmed from the results of Experimental Groups 1 and 2, which substitute high purity Gentio-oligosaccharides having the purity of 90% or more of the present invention for no more than 40% by weight of the main ingredients of the cakes, that is, cocoa powder and dark chocolate showed no sensory differences, while exhibiting an improved overall taste and preference compared to conventional non-gentio oligosaccharide cakes. EXAMPLE 4: In the preparation of red ginseng beverages containing 2 wt% (6 g) of red ginseng concentrate, the high purity gentio oligosaccharide (purity 92.5%) obtained in Example 2 was replaced by 25 wt%. (1.5 g) of the concentrated red ginseng, while high purity gentio-oligosaccharide was added three times as much (4.5 g) to the amount of concentrated red ginseng to be replaced (1.5 g). The main ingredients and combination ratios of red ginseng drinks are shown in Table 5 below. ______Table 5__________________________ Control and Experimental Group red ginseng drinks were evaluated for bitterness, tenderness, and preference for a sensory test, and the results are shown in Table 6 below. Sensory testing and statistical analysis were performed in the same manner as described in Example 3.

Tabela 6 ___ Como resultado, as bebidas de ginseng vermelho do Grupo de Controle e Grupo Experimental não apresentaram diferenças estatisticamente significativas no nivel de significância de 0,05, e não mostraram grandes diferenças nos valores totais médios para amargor, maciez e preferência. Deste modo, substituindo gentio-oligossacarideo de alta pureza da presente invenção por uma porção de concentrado de ginseng vermelho que é o principal ingrediente de bebidas de ginseng vermelho não resultou em diferenças sensoriais no amargor, maciez e preferência em comparação com as bebidas que não contêm originais gentio-oligosacarídeo.Table 6 ___ As a result, the red ginseng drinks from the Control Group and Experimental Group did not show statistically significant differences at the 0.05 significance level, and did not show large differences in the mean total values for bitterness, softness and preference. Therefore, replacing the high purity gentio-oligosaccharide of the present invention with a portion of red ginseng concentrate which is the main ingredient of red ginseng beverages did not result in sensory differences in bitterness, softness and preference compared to beverages containing no ginseng. original gentio-oligosaccharides.

REIVINDICAÇÕES

Claims

A method for preparing a high purity gentile oligosaccharide, comprising: adding a low purity gentile oligosaccharide to a liquid medium; subjecting the liquid medium to inoculation with a microorganism, followed by incubation and fermentation to consume glucose which is contained in the low purity gentio-oligosaccharide; remove the microorganism from the fermentation broth obtained; and subjecting the obtained broth to purification.

Method according to claim 1, characterized in that the low purity gentile oligosaccharide contains 15 to 65% by weight glucose and 35 to 85% by weight gentile oligosaccharide.

Method according to claim 1, characterized in that the low purity gentio-oligosaccharide is added to the liquid medium at a concentration of 5 to 70% (w / v).

Method according to claim 1, characterized in that the microorganism consumes glucose as a carbon source while not consuming gentio-oligosaccharide.

Method according to claim 4, characterized in that the microorganism is yeast, bacteria or fungus.

A method for preparing a high purity gentile oligosaccharide, comprising: adding a low purity gentile oligosaccharide to a liquid medium; subjecting the liquid medium to inoculation with a microorganism, followed by incubation and fermentation to consume glucose which is contained in the low purity gentio-oligosaccharide; remove the microorganism from the fermentation broth obtained; and subjecting the obtained broth to purification; and wherein the microorganism is a species selected from the group consisting of Saccharomyces sp., Bacillus sp., Lactohacillus sp. and Candida sp.

Method for preparing a high purity gentile oligosaccharide, comprising: adding a low purity gentile oligosaccharide to a liquid medium; subjecting the liquid medium to inoculation with a microorganism, followed by incubation and fermentation to consume glucose which is contained in the low purity gentio-oligosaccharide; remove the microorganism from the fermentation broth obtained; and subjecting the obtained broth to purification; and wherein the microorganism is a species selected from the group consisting of Saccharomyces sp., Bacillus sp., Lactohacillus sp. and Candida sp; and wherein purification is accomplished by activated carbon discoloration, ion exchange resin demineralization and evaporation.

Method according to claim 7, characterized in that the high purity gentile oligosaccharide has a purity of at least 90%.

Gentle oligosaccharide of high purity, characterized in that it has a purity of at least 90% which is obtained by the method according to claim 7.

A method for improving the taste or taste of the food, characterized in that the high purity gentile oligosaccharide having a purity of at least 90 according to claim 9 is added to the food.

A method of using high purity gentile oligosaccharide, characterized in that it has a purity of at least 90% according to claim 9 as alternatives to the food or main ingredient thereof.

A method according to claim 11, characterized in that the high purity gentile oligosaccharide having a purity of at least 90% is added in an amount ranging from 0.1 to 40% by weight of the food or Main ingredients of this.

Method according to claim 11, characterized in that the food is one or more selected from the group consisting of cocoa, chocolate, coffee, bread or confectionery and beverages.