BR102012002827A2

BR102012002827A2 - Método para determinar condições em sangue centrifugado usando pressão medida

Info

Publication number: BR102012002827A2
Application number: BRBR102012002827-1A
Authority: BR
Inventors: David D Hyde; Michael W Lacourt; Tracy Mcdonald; Christopher M Parobek
Original assignee: Ortho Clinical Diagnostics Inc
Priority date: 2011-02-07
Filing date: 2012-02-07
Publication date: 2014-01-14
Also published as: RU2611384C2; US20170160177A1; EP2485049B1; JP6000561B2; RU2016151668A; HK1172688A1; EP2485049A3; US20120202238A1; EP2908131A1; EP2485049A2; CA2766735C; CA2766735A1; RU2012103973A; JP2012163562A; US9719906B2

Abstract

MÉTODO PARA DETERMINAR CONDIÇÕES EM SANGUE CONTRIFUGADO USANDO PRESSÃO MEDIDA. A presente invenção refere-se a um método para determinação de uma condição em uma amostra sanguínea que inclui: fornecimento de uma amostra de sangue; fornecimento de uma sonda de medição que têm uma bomba para aspiração e dispensação, inserir a sonda de medição até uma distância selecionada dentro da amostra sanguínea, medição da pressão entre a amostra e a bomba durante a aspiração da amostra ou dispensação da amostra, comparação da pressão medida com um valor de referência, e sinalização da presença ou ausência da condição. Um método para confirmar ou detectar a presença de uma camada selecionada de componente sanguíneo em uma amostra de sangue centrifugado que inclui: medição da pressão de uma camada selecionnada suspeita em uma sonda de medição durnate aspiração ou dispensação, comparação da pressão medida comum um valor de referência, sendo que se a pressão medida e o valor de referência são substancialmente idênticos, então a camasda selecionada do componentee sanguíneo é confirmada. Em uma modalidade preferencial, o valor de referência é uma faixa de pressão pré-selecionada.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MÉTODO PARA DETERMINAR CONDIÇÕES EM SANGUE CENTRIFUGADO USANDO PRESSÃO MEDIDA".

REFERÊNCIA REMISSIVA A PEDIDO RELACIONADO Este pedido de patente é um pedido não provisório do pedido

provisório dos Estados Unidos número 61/439.947, depositado em 7 de fe- vereiro de 2011, a descrição do mesmo estando aqui incorporada a título de referência, em sua totalidade.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se à determinação de condições em

sangue centrifugado, usando-se pressão medida em um processo de aspi- ração ou dispensação. Especificamente, a presente invenção refere-se a detecção ou confirmação da aspiração de concentrados de eritrócitos a par- tir de sangue centrifugado.

A maioria das doações de sangue são divididas (fracionadas)

em seus componentes: eritrócitos, plaquetas, fatores de coagulação, plas- ma, anticorpos (imunoglobulinas), e leucócitos. Dependendo da situação, pessoas podem receber apenas as células do sangue, apenas os fatores de coagulação do sangue, ou algum outro componente do sangue. Uma trans- 20 fusão que apenas seleciona certos componentes do sangue permite que o tratamento seja específico, reduz os riscos de efeitos colaterais, e pode usar efetivamente os diferentes componentes de uma única unidade de sangue para o tratamento de várias pessoas.

Concentrados de eritrócitos (PRBC), o componente sanguíneo 25 mais comumente transfundido, pode restaurar a capacidade de transporte de oxigênio do sangue. Este componente pode ser dado a uma pessoa que está sangrando ou que está com anemia grave. Os eritrócitos são separa- dos do componente fluido do sangue (plasma) e de outros componentes celulares e semelhantes à células. Esta etapa concentra os eritrócitos de 30 modo que eles ocupam menos espaço, por isso o termo "concentrado". Os eritrócitos podem ser refrigerados por até 42 dias. Em casos especiais — por exemplo, para preservar um tipo raro de sangue — os eritrócitos podem ser congelados por até 10 anos. Portanto, a habilidade de se separar PRBCs de outros componentes para transfusão é importante.

O campo de imuno-hematologia é a ciência de antígenos e anti- corpos, e como eles se relacionam com o gerenciamento de transfusão a- 5 través de serviços de doação e transfusão. Aplicações de imuno- hematologia incluem a definição de tipos sanguíneos, e a identificação de anticorpos inesperados que podem levar à transfusões e transplantes in- compatíveis, ou complicações durante a gravidez. Ambos o recipiente (paci- ente) e o doador de sangue são testados para se assegurar uma transfusão 10 de sangue segura. A classificação sanguínea pode ser executada manual- mente ou em sistemas automatizados ou semiautomatizados, como o Ortho ProVue®, vendido pela Ortho-Clinical Diagnostics, Inc.

Na imuno-hematologia, bem como na química clínica, sangue in- tegral deve, as vezes, ser girado em camadas de seus vários componentes através de centrifugação, antes de poder ser analisado. As camadas são principalmente compostas por plasma, um creme leucocitário que contém leucócitos e plasma, e concentrados de eritrócitos (PRBC).

Os concentrados de eritrócitos são importantes por uma varie- dade de razões, em adição aquelas mencionadas. Os PRBCs são necessá- 20 rios para se realizar alguns dos tipos de teste de imunohematologia. Os PRBCs são usados em uma forma diluída, tipicamente em uma razão de diluição de 0,8% e 4,0% em relação ao diluente salino industrializado ade- quado. Para aspirar os PRBCs, uma sonda de medição deve passar através da camada de plasma do sangue centrifugado.

Deste modo, a partir de ambas perspectivas de transfusão e i-

muno-hematologia, é importante ser capaz de identificar e separar os PRBCs de outros componentes do sangue. Métodos conhecidos para identi- ficação e separação dos PRBCs de outros componentes do sangue têm ob- servações do operador inclusas antes do teste (por exemplo, tipo sanguí- 30 neo) ou uso de um sistema de formação de imagens após o teste. Tais tes- tes posteriores sofrem com a falta de precisão e a necessidade de se refa- zer um teste se a separação foi incompleta ou se a camada errada foi aspi- rada. Também é importante a partir de ambas perspectivas de transfusão e imuno-hematologia ser capaz de detectar outras condições no sangue cen- trifugado, como uma condição de erro de centrifugação incompleta, ou ou- tras condições de erro.

Há ainda uma necessidade de se ser capaz de distinguir várias

camadas de componentes sanguíneos, como uma camada de PBRCs de outros componentes do sangue após a centrifugação, e para determinar ou- tras condições que podem estar presentes nas amostras de sangue centri- fugado.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A presente invenção diz respeito a um método que trata dos problemas anteriormente mencionados de se ser capaz de determinar con- dições em sangue centrifugado, como identificação de uma camada de PRBC de outros componentes do sangue centrifugado.

Um aspecto da invenção diz respeito a um método para avalia-

ção de uma condição em uma amostra sanguínea. O método inclui: forne- cimento de uma amostra de sangue, fornecimento de uma sonda de medi- ção que têm uma bomba para aspiração e dispensação, inserir a sonda de medição até uma distância selecionada dentro da amostra sanguínea, medi- 20 ção da pressão entre a amostra e a bomba durante a aspiração da amostra ou dispensação da amostra, comparação da pressão medida com um valor de referência, e sinalização da presença ou ausência da condição. Em uma modalidade preferencial, o valor de referência inclui um perfil de pressão, uma faixa de pressão pré-selecionada, ou o coeficiente angular de uma por- 25 ção pré-selecionada de um perfil de pressão.

Um outro aspecto da invenção fornece um método para confir- mação ou detecção da presença de uma camada selecionada de compo- nente sanguíneo em uma amostra de sangue centrifugado. O método inclui: medição da pressão de uma camada selecionada suspeita em uma sonda 30 de medição durante aspiração ou dispensação, comparação da pressão medida com um valor de referência, sendo que se a pressão medida e o valor de referência são substancialmente idênticos, então a camada sele- cionada do componente sanguíneo é confirmada. Em uma modalidade pre- ferencial, o valor de referência é uma faixa de pressão pré-selecionada.

Em uma outra modalidade preferencial, a camada selecionada é uma de concentrados de eritrócitos e uma camada adicional é de plasma, e 5 o método para confirmação ou detecção da presença de uma camada de componente sanguíneo selecionada em uma amostra de sangue centrifuga- do inclui adicionalmente: mover a ponta de sonda da sonda de medição e a amostra de sangue centrifugado em relação uma a outra posicionando a sonda de medição acima da amostra de sangue centrifugado, mover a son- 10 da de medição e a amostra em relação uma a outra para trazer a sonda de medição na direção da superfície da amostra sanguínea, detecção da super- fície da amostra, aspiração do plasma da camada de plasma, medição da pressão durante a aspiração da camada de plasma, comparação de um va- lor de referência e da pressão medida para confirmar que a camada é de 15 plasma, mover a sonda de aspiração até a camada de concentrados de eri- trócitos suspeita, aspiração da camada suspeita e medição da pressão, e comparação de um valor de referência com a pressão medida para confir- mar que a camada aspirada suspeita é a camada de concentrados de eritró- citos selecionada.

Ainda outro aspecto da invenção fornece um método para de-

tecção da interface entre as camadas de plasma e de concentrados de eri- trócitos em uma amostra de sangue centrifugado. O método inclui: posicio- namento da sonda de medição acima da amostra de sangue centrifugado, mover a sonda e a amostra em relação uma a outra de tal modo que a son- 25 da se move em direção a e entra na amostra, medição da primeira pressão a uma primeira profundidade na amostra, medição de uma segunda pressão a uma segunda profundidade na amostra, e comparação da primeira e da segunda pressão para determinar se a interface está entre a primeira e a segunda profundidade.

Outros objetivos, recursos e vantagens da presente invenção fi-

carão evidentes aos versados na técnica, a partir da consideração detalhada das modalidades preferenciais que são apresentadas a seguir. BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

A figura 1 mostra uma vista esquemática de uma sonda de me- dição e uma sonda convencionais em um recipiente para amostras, que po- dem ser usadas de acordo com uma modalidade preferencial da invenção.

A figura 2 mostra um perfil de pressão de pressão versus tempo para plasma e PRBC para um processo de aspiração, de acordo com uma modalidade preferencial.

A figura 3 mostra um perfil de pressão de pressão versus tempo para plasma e PRBC para um processo de dispensação, de acordo com uma modalidade preferencial.

A figura 4 mostra um perfil de pressão de pressão versus tempo para plasma e PRBC para uma aspiração seqüencial de PRBC e plasma na mesma ponta, de acordo com uma modalidade preferencial.

A figura 5 mostra um perfil de pressão de pressão versus tempo para plasma e PRBC para uma aspiração seqüencial de PRBC e plasma na mesma ponta, de acordo com uma modalidade preferencial.

A figura 6 mostra vários perfis de pressão de pressão versus tempo para plasma e PRBC para um processo de aspiração, de acordo com uma modalidade preferencial.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES PREFERENCIAIS

Ao mesmo tempo em que as várias aplicações para determinar uma condição em uma amostra de sangue centrifugado mediante a medição de pressão, como confirmação e detecção de um componente sanguíneo selecionado, não são limitadas de acordo com a invenção, uma aplicação 25 particularmente útil se encontra no campo de imunohematologia ou transfu- são de sangue. A faixa de instrumentos e metodologias que podem ser usa- dos com a presente invenção é ampla, e é discutida em maiores detalhes abaixo.

A presente invenção usa a diferença na viscosidade conforme apresentado pelas diferenças de pressão entre condições diferentes no sangue centrifugado para determinar se certas condições estão presentes ou não na amostra sendo testada. Por exemplo, em uma modalidade prefe-

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20 rencial, a presente invenção usa uma diferença na viscosidade entre um componente sanguíneo selecionado e outros componentes do sangue para ser possível detectar a presença ou ausência do componente sanguíneo selecionado e para determinar que o componente sanguíneo selecionado está sendo aspirado ou dispensado durante um processo de medição.

Em uma modalidade preferencial, a presente invenção usa a di- ferença na viscosidade entre o PRBC (chamado de RBC nas figuras) e ou- tros componentes do sangue, principalmente plasma, para ser possível de- tectar a presença de PRBC e para confirmar que o PRBC está sendo aspi- 10 rado ou dispensado durante um processo de medição. Muito do restante da descrição da presente invenção apresenta o componente sanguíneo como a condição selecionada, e, em particular, plasma ou PRBC como o compo- nente sanguíneo selecionado. Entretanto, a invenção não é limitada por isto e qualquer outro componente do sangue pode ser a camada selecionada, 15 contanto que ele possa ser centrifugado em uma camada e tenha uma vis- cosidade diferente da das outras camadas de componentes do sangue. Por exemplo, um componente sanguíneo selecionado poderia ser uma camada de creme leucocitário, que contém leucócitos e plaquetas. Além disso, qual- quer outra condição, que pode ser determinada por uma diferença na pres- 20 são entre a pressão medida e o valor de pressão de referência também está dentro do escopo da presente invenção.

A viscosidade do PRBC, genericamente na faixa 8- 12 centipoises (cps) ou mais dependendo da concentração de PRBC, é sig- nificativamente maior que a viscosidade do plasma, que situa-se generica- 25 mente na faixa de menos que 2 a 3 cps. A razão pela qual acredita-se que o PRBC têm uma viscosidade maior é devido a sua alta concentração de sóli- dos (isto é, eritrócitos) e, portanto, mais resistência à fluxo. Em geral, a con- centração em uma camada de PRBC é de aproximadamente 80% de eritró- citos e 20% de plasma.

A diferença nas viscosidades entre o PRBC e o plasma irá levar

a perfis de pressão diferentes durante um processo de medição (isto é, aspi- ração ou dispensação) devido a uma maior resistência a fluxo pelo PRBC (presumindo-se outras condições, como a taxa de aspiração/dispensação permanecendo a mesma). Em outras palavras, uma pressão maior terá de ser aplicado ao PRBC para se alcançar fluxo, em comparação com o plas- ma. A figura 2 mostra a diferença nos perfis de pressão para o plasma e o 5 PRBC. Esta pressão pode ser monitorada por um sensor de pressão (por exemplo, um transdutor de pressão) em um sistema de medição que inclui uma sonda de medição que pode ser usada para aspirar e/ou dispensar. Sistemas de medição convencionais adequados que incluem sensores de pressão e pontas de prova de medição são descritos, por exemplo, nas pa- 10 tentes U.S. 6.484.556, 6.060.320, 5.750.881, 5.540.081 e 7.361.509, todas aqui incorporadas a título de referência, em sua totalidade. O único requisito é a habilidade de se medir a pressão no espaço entre o líquido sendo aspi- rado ou dispensado e o mecanismo de bombeamento para o equipamento de medição. Isto é genericamente alcançado usando-se um transdutor de 15 pressão situado entre a sonda de aspiração/dispensação e a bomba, con- forme mostrado na figura 1. A figura 1 é um desenho esquemático de uma sonda de aspiração/dispensação combinada que inclui um probóscide 10, e um transdutor de pressão 20 para medição da pressão entre a bomba medi- dora 30 e o líquido (nesse caso, uma amostra de sangue centrifugado). A 20 sonda inclui, também, uma ponta de medição descartável 40 na extremida- de do probóscide. Nesta ilustração, a ponta de medição é inserida em um tubo de ensaio 50 no PRBC próximo ao fundo do tubo. O tubo contém san- gue centrifugado que têm um altura A e é separado em uma porção de plasma 60 e uma porção de PRBC 70, tendo uma altura B.

Para executar o método de acordo com a presente invenção,

sangue integral é obtido e é centrifugado usando-se uma centrífuga e técni- cas bem conhecidas pelos versados na técnica. O sangue integral é tipica- mente centrifugado em um recipiente de coleta de amostra, como um tubo de ensaio.

Uma vez que o sangue foi separado em suas camadas constitu-

intes, a camada selecionada pode ser separada do resto dos componentes, geralmente por aspiração. Por exemplo, a camada de PRBC, sendo o com- ponente mais denso, estará no fundo do recipiente de coleta de amostra. Neste ponto, dependendo do aspecto do método sendo executado, a sonda de medição pode ser movida até vários pontos no sangue centrifugado.

Em uma modalidade preferencial onde a camada de PRBC é a 5 camada selecionada, a sonda de medição é movida até a adjacência do fundo do recipiente de coleta de amostra, de preferência alguns milímetros longe do fundo do recipiente. Se a centrifugação foi realizada corretamente, o PRBC estará no fundo do recipiente. A bomba da sonda de medição será ativada e irá começar a aspirar o PRBC para dentro da ponta. A ponta pode 10 ser descartável ou fixa (isto é, permanente). Uma ponta descartável tem a vantagem de não precisar de um sistema de lavagem de sonda complexo e minimiza as chances de transferência entre amostras de sangue diferentes. Pontas descartáveis típicas incluem a Microtip e a Versatip®, ambas vendi- das pela Ortho-Clinical Diagnostics1 Inc., e que são descritas, por exemplo, 15 na patente U.S. 6.797.518 e no Pedido de Patente Publicado U.S. 2003- 0022380 A1, ambos estando aqui incorporados a título de referência, em sua totalidade. Se a sonda é fixa, pontas de prova e sistemas de lavagem de pontas de prova como aqueles descritos no Pedido de Patente Publicado U.S. 2005-0196867 A1 podem ser usados.

Mediante aspiração do PRBC na ponta, um primeiro perfil de

pressão será gerado. O perfil de pressão é medido pelo transdutor de pres- são associado à sonda de medição e pode ser registrado por um computa- dor associado à sonda de medição. Todo o perfil de pressão pode ser usado na comparação descrito a seguir, ou, com mais preferência, uma porção ou 25 ponto(s) selecionado(s) no perfil de pressão podem ser usados. Em uma modalidade preferencial, uma ou mais medições de pressão em tempos co- nhecidos durante um processo de medição podem ser registrados. Em outra modalidade, o coeficiente angular de uma porção selecionada do perfil de pressão pode ser determinado e registrado.

Neste ponto, o primeiro perfil de pressão (ou medições de pres-

são ou coeficiente angular) gerado pelo PRBC deve ser comparado com um valor ou pressão de referência. A forma do valor de referência dependerá do que foi medido e registrado. Por exemplo, se o valor medido foi todo o perfil de pressão, então a comparação adequada seria com um perfil de pressão e, deste modo, o valor de referência será um segundo perfil de pressão. Se o valor medido foi uma medição de pressão selecionada no perfil, a compa- 5 ração seria com medições de pressão e, portanto, o valor de referência po- deria ser um único valor de pressão ou uma faixa de pressão que forma um limite de pressão superior e inferior. De modo semelhante, se o valor de medição foi o coeficiente angular de uma porção do perfil de pressão, a comparação seria com um coeficiente angular da mesma porção do perfil de 10 pressão. Ele também pode ser uma combinação de dois ou mais destes.

Conforme observado acima, se o valor medido durante o pro- cesso de medição era um primeiro perfil de pressão, ele será comparado com um segundo perfil de pressão para se assegurar que o PRBC foi aspi- rado. Este segundo perfil de pressão pode ser de múltiplas fontes. O segun- 15 do perfil de pressão pode ser um perfil anteriormente medido de outra amos- tra sanguínea de plasma e/ou PRBC, que pode ser armazenado em um dis- positivo de memória associado a um computador que controla a sonda de medição. Alternativamente, o segundo perfil de pressão pode ser o perfil de pressão medido de uma camada de plasma na mesma amostra de sangue 20 centrifugado (este será geralmente o caso, uma vez que plasma é aspirado primeiro na maioria dos perfis de teste). O computador compara o primeiro perfil de pressão medido com o segundo perfil de pressão. Esta também poderia ser uma combinação de várias das técnicas acima para a produção de uma conclusão mais concreta.

Se o segundo perfil de pressão é o PRBC e ele é substancial-

mente idêntico ao primeiro perfil de pressão que acredita-se ser o PRBC, então esta será uma indicação ou confirmação de que o PRBC, de fato, é o que foi aspirado e o PRBC aspirado pode, então, ser subsequentemente usado como desejado, como para os usos descritos acima. Para uso na 30 presente invenção, o termo "substancialmente idêntico" significa que a pres- são medida é < 20%, com mais preferência < 10% e, com a máxima prefe- rência, < 5% diferente do valor de referência. Se o segundo perfil de pressão é do plasma e ele é significativamente diferente do primeiro perfil de pressão que acredita-se ser do PRBC, então esta será uma indicação ou confirma- ção de que o PRCB, de fato, é o que foi aspirado e o PRBC aspirado pode, então, ser subsequentemente usado como desejado, como para os usos 5 descritos acima. Para uso na presente invenção, o termo "significativamente diferente" significa que a pressão medida é > 25%, com mais preferência > 30%, com mais preferência > 35% e, com a máxima preferência, > 40% dife- rente do valor de referência. A tabela 1 que mostra este conceito mais grafi- camente é mostrada abaixo.

Tabela 1 - Tabela do Estado de Perfil de Pressão

Condição 1 Condição 2 JCondiçao 3 1 Condição 4 Primeiro Baixa Viscosida¬ Alta Viscosi¬ Baixa Visco¬ Alta Viscosi¬ Perfil de (Plasma) dade (PRBC) sidade (Plas¬ dade (PRBC) - ma) έβ&·; Baixa Viscosida¬ Alta Viscosi¬ Alta Viscosi¬ Baixa Visco¬ , 1 I de (Plasma) dade (PRBC) dade (PRBC) sidade (Plas¬ 9Ι·η·^^^ΝΐΙΙ·Ι^^Β ma) Resultado Nenhuma Mu¬ Nenhuma Nível de Nível de (Posição da dança no Nível Mudança no PRBC Dife¬ Plasma Dife¬ áoni^?!^;^' de Plasma Nível de rente rente PRBC Se os perfis de pressão não correspondem aos descritos acima, então este é um indicativo de que o PRBC não está sendo aspirado e a se- paração do sangue em seus componentes não foi bem sucedida, ou que a sonda está a uma altura de medição incorreta, ou que os níveis de compo- 15 nente fluido não foram aqueles antecipados. Por exemplo, uma centrifuga- ção incompleta ou inexistente pode ter ocorrido. Neste caso, o primeiro perfil de pressão (ou outra medição) seria similar ao sangue integral e tal perfil de pressão se encontraria entre o do plasma e o do PRBC. A sonda de medi- ção pode indicar um erro, como por um alarme ou suspensão da operação 20 da sonda de medição ou instrumento associado à sonda de medição, até um ponto em que o operador ou o instrumento pode tomar ações adequa- das como conduzir uma investigação adicional ou começar o processo no- vamente. Outras condições que podem gerar uma condição de erro são descritos em maiores detalhes abaixo.

Ao mesmo tempo em que as descrições acima e abaixo envol-

vem o uso de um perfil de pressão como o valor medido e registrado, outras medições (por exemplo, coeficiente angular, medições de pressão descontí- nuas) também observadas acima podem ser usadas. Alternativamente, con- forme observado acima, em oposição à medição de todo o perfil de pressão, 10 medições de pressão distintas podem ser medidas em intervalo(s) de tempo específico(s) após a aspiração ou dispensação ter começado, e comparadas para se observar se a pressão medida se encontra dentro da ou fora de uma faixa predeterminada. A faixa pode ser determinada por testes empíricos.

De acordo com um outro aspecto da invenção, ambas a camada 15 de plasma e a camada de PRBC são aspiradas e, subsequentemente, usa- das como para classificação sanguínea. Neste caso, o método de detecção pode ser usado para confirmar que ambas camadas foram corretamente aspiradas. Conforme apresentado acima, amostras de sangue integral são centrifugadas para separar os eritrócitos do plasma. As amostras são apre- 20 sentadas no recipiente de coleta de amostra para teste/separação, possi- velmente com volumes / alturas de fluido desconhecidos.

Uma sonda de medição como aquela descrita acima se move horizontalmente para se posicionar sobre a amostra e se move para baixo verticalmente até a superfície do plasma. Apesar do fato de que a sonda de 25 medição é descrita como móvel em relação à amostra nesta modalidade e outras modalidades aqui descritas, deve-se compreender que o único requi- sito é que a sonda de medição e a amostra entrem em contato uma com a outra. Isto pode ser igualmente alcançado pelo recipiente para amostras se movendo na direção de uma sonda de medição estacionária. Em uma mo- 30 dalidade preferencial, a sonda toca a superfície de topo do plasma. A ponta de medição pode tocar o topo do líquido usando-se inúmeras técnicas co- nhecidas, como aquelas descritas nas patentes U.S. 5.273.717, 5.143.849, 5.133.392, 5.111.703 e 4.272.482.

Uma vez que a superfície do fluido é encontrada, a sonda de medição irá aspirar o volume desejado de plasma para uso subsequente. Durante esta etapa de aspiração, a pressão dentro da ponta é medida, co- mo através do uso de um transdutor de pressão descrito acima, e uma me- dição de pressão como um primeiro perfil de pressão como aquele mostrado na figura 2 é gerada. Um valor de referência como um segundo perfil de pressão é gerado conforme descrito acima. A medição de pressão e o valor de referência, como um primeiro e segundo perfis de pressão, são compa- rados. Dependendo do segundo perfil de pressão ser ou de plasma ou de PRBC, os perfis de pressão serão substancialmente idênticos ou significati- vamente diferentes. Se a comparação entre o primeiro e o segundo perfis de pressão revela que o plasma não foi aspirado, um sinal de erro pode ser gerado, conforme descrito acima. De outro modo, a sonda de medição então extrai a ponta do fluido e procede para dispensar o plasma conforme neces- sário.

Após pelo menos parte da camada de plasma ser aspirada, a camada de PRBC será aspirada. Se não foi feito ainda, a sonda de medição remove a ponta de medição usada para a aspiração de plasma e obtém 20 uma nova ponta descartável. No caso de uma ponta de medição não des- cartável, a ponta pode ser lavada entre a aspiração de plasma e a aspiração de PRBC. A sonda de medição se move verticalmente para baixo para den- tro do recipiente para amostras e através de qualquer plasma remanescen- te, até a alguns milímetros do fundo do recipiente para amostras descrito 25 acima. A sonda de medição aspira o PRBC e mede a pressão interna da bomba/ponta para gerar uma medição de pressão como um primeiro perfil de pressão, conforme descrito acima. Um valor de referência como um se- gundo perfil de pressão é gerado conforme descrito acima. A medição de pressão e o valor de referência, como o primeiro e o segundo perfis de 30 pressão, são comparados. Dependendo do segundo perfil de pressão ser ou de plasma ou de PRBC, os perfis de pressão serão substancialmente idênti- cos ou significativamente diferentes. Se a comparação entre o primeiro e o segundo perfis de pressão revela que o PRBC não foi aspirado, um sinal de erro pode ser gerado, conforme descrito acima. De outro modo, a sonda de medição então extrai a ponta do fluido e procede para dispensar o PRBC conforme necessário.

Ao mesmo tempo em que esta modalidade foi descrita com a

camada de plasma sendo aspirada primeiro, é igualmente exeqüível proces- sar primeiro da camada de PRBC, seguido da camada de plasma.

De acordo com ainda outro aspecto da invenção, a invenção pode ser usada para situar a interface das camadas de plasma/PRBC de 10 uma amostra centrifugada. Na prática, uma sonda de medição estaria se movendo verticalmente para baixo através da amostra centrifugada. Durante a movimentação através da amostra, a amostra é aspirada continuamente ou em pontos selecionados previamente ao longo da profundidade da amos- tra. Quanto mais freqüente a amostragem, mais precisa será a detecção da 15 interface, portanto, uma medição de pressão contínua é preferencial. Quan- do a ponta da sonda de medição alcança a interface, a medição de pressão irá mudar rapidamente, como por uma ampla alteração no coeficiente angu- lar, indicando que a interface foi alcançada.

Uma aplicação útil deste aspecto da invenção é fornecer um va- Ior de porcentagem de hematócrito de uma amostra de um paciente. O he- matócrito (Ht ou HCT) ou volume celular concentrado (PCV) ou fração de volume de eritrócitos (EVF) é a proporção do volume de sangue que é ocu- pada por eritrócitos. Ele normalmente situa-se a cerca de 48% para homens e 38% para mulheres. Ele é considerado uma parte integral dos resultados de contagem de sangue completos de uma pessoa, junto com concentração de hemoglobina, contagem de leucócitos, e contagem de plaquetas. O vo- lume de concentração de eritrócitos dividido pelo volume total da amostra sanguínea revela o PCV. Devido ao fato de que um tubo é usado, isto pode ser calculado mediante a medição dos comprimentos das camadas. Usan- do-se a figura 1 como um exemplo, o valor de HCT ou de PCV pode ser de- terminado mediante a divisão da camada de PRBC B pelo volume total da amostra sanguínea A. Agora, referência será feita às modalidades não limitadoras mostradas nas figuras. A figura 2 mostra um perfil de pressão da pressão, conforme apresentado por tensão versus tempo (msec) para plasma e PRBC, para um processo de aspiração. O perfil de pressão para plasma é 5 mostrado em quadrados (■) e identificado como a curva B, e o perfil de pressão para PRBC é mostrado em losangos (♦) e identificado como a curva A. Neste exemplo, 25 μΙ_ de plasma e 25 pl_ de PRBC foram aspirados de uma amostra de sangue centrifugado. O PRBC tendo uma viscosidade mais alta terá uma maior alteração na pressão, conforme a figura 2 mostra clara- 10 mente.

A figura 3 mostra um perfil de pressão de pressão(tensão) ver- sus tempo (msec) para plasma e PRBC, para um processo de dispensação. O perfil de pressão para plasma é mostrado em quadrados (■) e identificado como a curva B, e o perfil de pressão para PRBC é mostrado em losangos 15 (♦) e identificado como a curva A. Neste exemplo, 25 pl_ de plasma e 25 pl_ de PRBC foram dispensados de uma amostra de sangue centrifugado. O PRBC, sendo mais viscoso, terá uma maior alteração na pressão, conforme a figura 3 mostra claramente.

A figura 4 mostra um exemplo onde ambos o plasma e o PRBC são aspirados seqüencialmente durante o mesmo processo de aspiração usando-se a mesma ponta descartável. O início da aspiração, conforme mostrado do lado esquerdo do gráfico é o PRBC, enquanto que a segunda parte da aspiração mostrada no lado direito do gráfico é o plasma. O eixo Y indica a diferença de pressão relativa entre os dois tipos diferentes de fluido em uma amostra normal que foi centrifugada, de modo que todos os eritróci- tos estão no fundo do recipiente para amostras. O eixo X é o tempo (msec). Conforme a figura 4 mostra, há uma descontinuidade aguda na pressão quando a interface é alcançada. Esta aspiração seqüencial do PRBC e do plasma é particularmente útil para situar a interface entre as camadas de plasma e PRBC.

A figura 5 é muito parecida com a figura 4, exceto pelo fato de que a ordem de aspiração é invertida. Isto indica que, independente da or- dem de aspiração do tipo de fluido, o diferencial de pressão pode ser usado para identificar que tipo de fluido está aonde. De fato, este método pode ser usado para se buscar a interface entre plasma e PRBC que, dentre outras coisas, pode ser usada para determinar valores de hematócrito para um pa- ciente em particular.

A figura 6 mostra vários perfis de pressão de pressão versus tempo para o plasma e o PRBC, para um processo de aspiração, onde 200 μΙ_ de um fluido diluente já estão na ponta antes da aspiração de 10 μΙ_ de plasma ou PRBC. Os primeiros três perfis do topo são para o plasma, e os 10 dois perfis inferiores são para o PRBC. Conforme o gráfico mostra, a dife- rença entre os perfis de pressão de plasma versus PRBC é bem evidente, mesmo com o diluente ainda na ponta. Esta é uma descoberta particular- mente útil pois os PRBCs são tipicamente diluídos antes da adição dos mesmos a elementos de teste. Com base no que foi descoberto acima, um 15 aspecto da invenção fornece uma abordagem eficiente para combinação de PRBCs com diluentes. Mais especificamente, de acordo com uma modali- dade preferencial, uma ponta é inserida em uma sonda e movida até uma fonte de diluente. Uma quantidade selecionada de diluente é aspirada para dentro da ponta. Depois que o diluente é aspirado para dentro da ponta, a 20 ponta é movida até uma amostra de sangue centrifugado. A sonda é movida até o fundo do sangue centrifugado onde a camada de PRBC deve estar. Usando-se a presente invenção, o sistema de medição confirma que a ca- mada sendo aspirada é, de fato, PRBC. Após a aspiração da PRBC para dentro da ponta que inclui os diluentes, o diluente e o PRBC são dispensa- 25 dos em uma cavidade e misturados. A mesma ponta irá então dispensar os PRBCs diluídos nos elementos de teste.

De acordo com ainda outro aspecto da invenção, a presente in- venção pode ser usada para determinar outras condições que podem estar presentes em uma amostra de sangue centrifugado. Por exemplo, medição 30 de uma diferença de pressão, ou ausência da mesma, pode ser usado para determinar se a amostra foi adequadamente centrifugada. Se não houve nenhuma centrifugação ou uma centrifugação imprópria, a medição de pres- são seria igual ou similar à amostra de sangue integral, e haveria pouca ou nenhuma diferença entre a medição de pressão do topo da amostra até o fundo da amostra. Alternativamente, a medição de pressão pode ser compa- rada a um valor de referência como uma faixa de pressão pré-selecionada.

Se a faixa de pressão pré-selecionada é para PRBC ou plaquetas, e a me- dição de pressão está fora da faixa pré-selecionada, então este é um indica- tivo de centrifugação inadequada. Alternativamente, se a faixa pré- selecionada é a pressão que seria encontrada para uma centrifugação in- completa (por exemplo, uma faixa de pressão para sangue integral) então a 10 medição de pressão deve estar dentro da faixa pré-selecionada.

Outras condições que podem ser determinadas mediante a me- dição de pressão e comparação com um valor de referência, como outro perfil de pressão ou faixa de pressão pré-selecionada, podem incluir deter- minar se houve ou não uma separação prévia dos componentes sanguí- 15 neos. Por exemplo, se a camada de plasma já foi separada da camada de PRBC e removida do recipiente para amostras, então as medições de pres- são irão corresponder aquelas esperadas para uma camada de PRBC, in- dependentemente da posição da sonda na amostra. Se a camada de plas- ma estava sendo buscada, então a falta de uma medição de pressão cor- 20 respondente a mesma iria reativar uma condição de erro. O mesmo será verdadeiro para apenas uma camada de plasma estando presente e a ca- mada de PRBC sendo buscada.

Mais uma outra condição que seria determinada mediante a medição da pressão é se o fibrinogênio está ou não sendo capturado pela 25 ponta da sonda de medição. Quando fibrinogênio é aspirado para dentro da sonda junto com o fluido, o fibrinogênio irá criar uma resistência ao fluxo (is- to é, fará com que o fluido se comporte de maneira mais viscosa) o que irá demandar uma maior pressão da bomba medidora para aspirar o fluido. Es- ta maior resistência a fluxo e a habilidade de se medir a pressão resultante 30 permitem que o fibrinogênio (ou qualquer outro particulado) seja detectado na camada de fluido sendo aspirada. Para se alcançar tal detecção, uma sonda de medição é encaminhada até uma camada de uma amostra de sangue centrifugado. Mediante aspiração da camada de plasma, a pressão ou perfil medido é comparado a um valor de referência de fluido sem fibrino- gênio. Se a pressão medida indicar uma viscosidade maior, então é provável que fibrinogênio ou outro particulado foi aspirado para dentro da sonda de 5 medição junto com o plasma. Neste caso, uma condição de erro pode ser indicada.

Se uma condição de erro é indicada, conforme descrito acima, a sonda de medição pode indicar um erro, como por um alarme ou suspensão da operação da sonda de medição ou instrumento associado à sonda de 10 medição, até um ponto em que o operador ou o instrumento pode tomar a- ções adequadas como conduzir uma investigação adicional ou começar o processo novamente.

Ficará evidente aos versados na técnica que várias modifica- ções e variações podem ser feitas nos compostos, composições e proces- sos da presente invenção. Portanto, pretende-se que a presente invenção cubra tais modificações e variações, desde que estejam no escopo das rei- vindicações em anexo e seus equivalentes.

As descrições de todas as publicações acima citadas estão ex- pressamente incorporadas à presente invenção a título de referência, em sua totalidade, da mesma forma que estariam se cada uma fosse incorpora- da individualmente a título de referência.

Claims

1. Método para determinar uma condição em uma amostra san- guínea, compreendendo: fornecimento de uma amostra de sangue, fornecimento de uma sonda de medição que tem uma bomba para aspiração e dispensação, inserção da sonda de medição até uma distância selecionada dentro da amostra sanguínea, medição da pressão entre a amostra e a bomba durante a aspi- ração da amostra ou dispensação da amostra, comparação da pressão medida com um valor de referência, e sinalização da presença ou ausência da condição.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que o valor de referência é selecionado do grupo que consiste em um perfil de pressão, uma faixa de pressão pré-selecionada, ou o coeficiente angular de uma por- ção pré-selecionada de um perfil de pressão.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que a condição é uma condição de erro, e se a pressão medida está fora do valor de refe- rência, então uma condição de erro é sinalizada.

4. Método, de acordo com a reivindicação 3, em que a condição de erro é causada por uma centrifugação incompleta.

5. Método, de acordo com a reivindicação 3, em que a condição de erro é causada pela amostra ter sido anteriormente centrifugada e sepa- rada.

6. Método, de acordo com a reivindicação 5, em que a amostra de sangue centrifugado contém apenas plasma e o valor de referência é para concentrados de eritrócitos.

7. Método, de acordo com a reivindicação 5, em que a amostra de sangue centrifugado contém apenas concentrados de eritrócitos e o valor de referência é para plasma.

8. Método, de acordo com a reivindicação 3, em que a condição de erro é causada por fibrinogênio no plasma que produz uma pressão simi- Iar aquela de concentrados de eritrócitos.

9. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que a condição é a presença ou ausência de uma camada de componente sanguíneo.

10. Método, de acordo com a reivindicação 9, em que a camada de componente sanguíneo é de concentrados de eritrócitos.

11. Método, de acordo com a reivindicação 9, em que a camada de componente sanguíneo é de plasma.

12. Método para confirmação ou detecção da presença de uma camada selecionada de componente sanguíneo em uma amostra de sangue centrifugado, compreendendo: medição da pressão de uma camada selecionada suspeita em uma sonda de medição durante a aspiração ou dispensação, comparação da pressão medida com um valor de referência, sendo que se a pressão medida e o valor de referência são substancialmen- te idênticos, então a camada selecionada de componente sanguíneo é con- firmada.

13. Método, de acordo com a reivindicação 12, em que o valor de referência é uma faixa de pressão pré-selecionada.

14. Método, de acordo com a reivindicação 13, em que se a pressão se encontra fora da faixa de pressão pré-selecionada, então um alarme é soado.

15. Método, de acordo com a reivindicação 12, em que a medi- ção de pressão é um primeiro perfil de pressão e compreende adicionalmen- te o fornecimento de um segundo perfil de pressão como o valor de referên- cia, sendo que o segundo perfil de pressão é um perfil de pressão medido a partir de uma camada igual ou diferente de componente sanguíneo em uma amostra diferente, ou o segundo perfil de pressão é de uma camada diferen- te do sangue medido na mesma amostra, e sendo que o segundo perfil de pressão pode ser medido antes ou depois do primeiro perfil de pressão, e comparação do primeiro perfil de pressão com o segundo perfil de pressão, emque se o primeiro e o segundo perfis de pressão são subs- tancialmente idênticos e o segundo perfil é do mesmo componente, então a camada selecionada do componente sanguíneo é confirmada, ou emque se o primeiro e o segundo perfis de pressão são significativamente diferentes e o segundo perfil é de um componente diferente, então a camada seleciona- da do componente sanguíneo é confirmada.

16. Método, de acordo com a reivindicação 15, em que a cama- da selecionada é de concentrados de eritrócitos e a camada diferente é de plasma.

17. Método, de acordo com a reivindicação 15, em que o primei- ro perfil de pressão é medido enquanto a camada selecionada suspeita está sendo aspirada.

18. Método, de acordo com a reivindicação 15, em que o primei- ro perfil de pressão é medido enquanto a camada selecionada suspeita está sendo dispensada.

19. Método, de acordo com a reivindicação 12, em que a cama- da selecionada é de concentrados de eritrócitos, e uma camada adicional é de plasma, e compreende adicionalmente: movimentação da ponta de sonda da sonda de medição e da amostra de sangue centrifugado em relação uma a outra para posicionar a sonda de medição acima da amostra de sangue centrifugado, movimentação da sonda de medição e da amostra em relação uma a outra para colocar a sonda de medição na direção da superfície da amostra sanguínea, detecção da superfície da amostra, aspiração de plasma a partir da camada de plasma, medição da pressão durante a aspiração da camada de plasma, comparação de um valor de referência e da pressão medida pa- ra confirmar se a camada adicional é de plasma, movimentação da sonda de aspiração até a camada de concen- trados de eritrócitos suspeita, aspiração da camada suspeita e medição da pressão, e comparação de um valor de referência e da pressão medida pa- ra confirmar se a camada aspirada suspeita é a camada de concentrados de eritrócitos selecionada.

20. Método, de acordo com a reivindicação 19, compreendendo adicionalmente a dispensação do plasma aspirado antes da aspiração da camada de concentrados de eritrócitos suspeita.

21. Método para detecção da interface entre as camadas de plasma e de concentrados de eritrócitos em uma amostra de sangue centri- fugado, compreendendo: posicionamento de uma sonda de medição acima da amostra de sangue centrifugado, movimentação da sonda e da amostra em relação uma a outra de tal modo que a sonda se move na direção da amostra e entra na amos- tra, medição de uma primeira pressão a uma primeira profundidade na amostra, medição de uma segunda pressão a uma segunda profundidade na amostra, e comparação da primeira e da segunda pressão para determinar se a interface situa-se entre a primeira e a segunda profundidades.

22. Método, de acordo com a reivindicação 21, em que a pres- são é continuamente medida enquanto a sonda está sendo movida através da amostra e a interface é detectada mediante uma alteração súbita na pressão medida.