BG65588B1

BG65588B1 - Method for the alteration of the autoreactivity of liquid immunoglobulin preparations

Info

Publication number: BG65588B1
Application number: BG108223A
Authority: BG
Inventors: Йордан ДИМИТРОВ; Чавдар РУМЕНИН; Чавдар ВАСИЛЕВ
Original assignee: Йордан ДИМИТРОВ; Чавдар РУМЕНИН; Чавдар ВАСИЛЕВ
Priority date: 2003-10-03
Filing date: 2003-10-03
Publication date: 2009-01-30
Also published as: BG108223A

Abstract

The method is applied in the fractionizing of human blood proteins for medical purposes. It considerably increases the autoreactivity of human plasma. By the method liquid immunoglobulin is placed on a device generating permanent homogenous magnetic field, the increase of which, until reaching its end value, continues for no less than 1 min. The time of the magnetic field effect on the preparation is no less than 5 min. The immunoglobulin preparation undergoes a stage of self-stabilization for no less than 10 min, after which it is practically applicable during the entire life of its effectiveness.

Description

Област на техникатаTechnical field

Изобретението се отнася до метод за изменение автореактивността на течни имуноглобулинови препарати, приложим при фракционирането на човешки кръвни белтъци за целите на медицината. Известен е метод за изменение автореактивността на течни имуноглобулинови препарати, при който първоначално имуноглобулиновият разтвор се нанася на гел-филтрационна колона. След това колоната се промива с буферен разтвор. След това последователно се разделят изтичащите от колоната фракции на имуноглобулиновите димери и мономери. Димерната фракция е обогатена на естествени авгоантитела¹.The invention relates to a method for modifying the autoreactivity of liquid immunoglobulin preparations useful in the fractionation of human blood proteins for medical purposes. There is a known method for modifying the autoreactivity of liquid immunoglobulin preparations, in which the immunoglobulin solution is initially applied to a gel filtration column. The column was then washed with buffer solution. The fractions of the immunoglobulin dimers and monomers are then sequentially separated. The dimer fraction is enriched in natural ago antibodies ¹ .

Недостатък на този метод за изменение автореактивността на течни имуноглобулинови препарати е сложността на процесите в условията на промишлено производство.The disadvantage of this method of modifying the autoreactivity of liquid immunoglobulin preparations is the complexity of the processes in industrial production.

Техническа същност на изобретениетоSUMMARY OF THE INVENTION

Задача на изобретението е да се създаде метод за изменение автореактивността на течни имуноглобулинови препарати, процесите на който да бъдат опростени в условията на промишлено производство без опасност от замърсяване с микроорганизми и пирогенни вещества.It is an object of the invention to provide a method for modifying the autoreactivity of liquid immunoglobulin preparations, the processes of which can be simplified in industrial production without the risk of contamination with microorganisms and pyrogenic substances.

Тази задача се решава с метод за изменение автореактивността на течни имуноглобулинови препарати, при който имуноглобулиновият препарат се поставя в устройство, генериращо постоянно хомогенно магнитно поле с индукция не по-малка от 0.15 Т и не по-голяма от 2 Т. Нарастването на магнитното поле до крайната стойност на индукцията продължава не по-малко от 1 min. Времетраенето на въздействието на магнитното поле върху препарата е не по-малко от 5 min при температури на имуноглобулиновия препарат в интервала 4-30°С при атмосферно налягане. Намаляването на магнитното поле продължава не по-малко от 3 min до пълното му изключване. След това имуноглобулиновият препарат преминава етап на самостабилизиране в продължение на не по-малко от 10 min, след кое то е практически приложим за срока на своята годност.This problem is solved by a method for modifying the autoreactivity of liquid immunoglobulin preparations, in which the immunoglobulin preparation is placed in a device generating a constant homogeneous magnetic field with an induction of not less than 0.15 T and not more than 2 T. The increase in the magnetic field last at least 1 min until induction. The duration of the effect of the magnetic field on the preparation is at least 5 minutes at temperatures of the immunoglobulin preparation in the range of 4-30 ° C at atmospheric pressure. The reduction of the magnetic field lasts at least 3 minutes until it is completely switched off. Thereafter, the immunoglobulin preparation undergoes a self-stabilization step for at least 10 min, after which it is practically applicable for its useful life.

Пред имства на метода са неговата опростеност, висока производителност, поради отсъствието на сложни технологични процеси и повишената автореактивност на получения имуноглобулинов препарат.The advantages of the method are its simplicity, high productivity, due to the absence of complex technological processes and increased autoreactivity of the obtained immunoglobulin preparation.

Описание на приложената фигураDescription of the attached figure

По-подробно ефектът от действието на метода се пояснява с фигурата, посочваща зависимостта на интензитета на взаимодействие на имуноглобулинов препарат за интравенозно приложение (преди и след прилагане на магнитно поле с индукция В = 0.5 Т, съгласно изобретението), с белтъци от нормален човешки черен дроб. Екстракт от човешки черен дроб, получен при неденатуриращи условия бе подложен на електрофореза в полиакриламиден гел в присъствието на додецилсулфат, след това пренесен върху нитроцелулозна мембрана, която бе обработена последователно с антитяло срещу Fc фрагмента на човешки IgG, конюгирано с алкална фосфатаза, промита и поставена с разтвор на субстрат. Представени са криви, получени след денситометричен анализ на проявените мембрани.The effect of the method is explained in more detail by the figure showing the dependence of the intensity of interaction of an immunoglobulin preparation for intravenous administration (before and after application of a B = 0.5 T induction magnetic field according to the invention) with proteins of normal human black fraction. Human liver extract obtained under non-denaturing conditions was subjected to polyacrylamide gel electrophoresis in the presence of dodecyl sulfate, then transferred to a nitrocellulose membrane, which was treated sequentially with an anti-Fc antibody fragment of human IgG conjugated with alkaline and conjugated with alkali with a substrate solution. Curves obtained after densitometric analysis of the membranes that have been developed are presented.

Примери за изпълнение на изобретениетоExamples of carrying out the invention

Методът за изменение автореактивността на течни имуноглобулинови препарати се заключава в поставяне на имуноглобулиновия препарат в устройство, генериращо постоянно хомогенно магнитно поле с индукция не по-малка от 0.15 Т и не по-голяма от 2 Т. Нарастването на магнитното поле до крайната стойност на индукцията продължава не по-малко от 1 min. Времетраенето на въздействието на магнитното поле върху препарата е не по-малко от 5 min при температури на имуноглобулиновия препарат в интервала 4-30°С при атмосферно налягане. Намаляването на магнитното поле продължава не по-малко от 3 min до пълното му изключване. След това имуноглобулиновият препарат преминава етап на самостабилизиране в продължение на не по-малко от 10 min, след което е практически приложим за срока на своята годност.The method for modifying the autoreactivity of liquid immunoglobulin preparations is to place the immunoglobulin preparation in a device generating a constant homogeneous magnetic field with an induction of not less than 0.15 T and not more than 2 T. The increase of the magnetic field to the final value of the induction lasts at least 1 min. The duration of the effect of the magnetic field on the preparation is at least 5 minutes at temperatures of the immunoglobulin preparation in the range of 4-30 ° C at atmospheric pressure. The reduction of the magnetic field lasts at least 3 minutes until it is completely switched off. Thereafter, the immunoglobulin preparation undergoes a self-stabilization step for at least 10 minutes, after which it is practically applicable for its useful life.

Действието на метода за изменение авто2The effect of the auto change method2

65588 Bl реактивността на течни имуноглобулинови препарати се основава върху влиянието на външното магнитно поле В върху некомпенсираните електронни спинове в атомите на феромагнитния метал желязо. Той неизбежно присъства в кръвната плазма и в имуноглобулиновите препарати, получени при фракционирането й. В отсъствие на поле В, течните имуноглобулинови препарати, в резултат на хомогенността си, могат да се сравнят с парамагнитна система. В нея резултиращият магнитен момент е близък до нула вследствие хаотичното Болцманово разпределение на атомите на желязото в препарата. Процесите в молекулите на разглежданата система на имуноглобулиновия разтвор имат обменен характер. Също така в резултат на това обменното взаимодействие, в което роля имат и собствените магнитни моменти на отделните атоми желязо, на микрониво вероятно се формират клъстъри с отличен от нула резултиращ магнитен момент. Важен фактор във взаимодействието е ефективната площ на клъстърните структури, през която се осъществяват биохимичните процеси.65588 B1 reactivity of liquid immunoglobulin preparations is based on the influence of the external magnetic field B on the non-compensated electron spins in the ferromagnetic metal atoms of iron. It is inevitably present in blood plasma and in immunoglobulin preparations resulting from its fractionation. In the absence of field B, liquid immunoglobulin preparations, as a result of their homogeneity, can be compared to a paramagnetic system. In it, the resultant magnetic moment is close to zero due to the chaotic Boltzmann distribution of the iron atoms in the preparation. The processes in the molecules of the immunoglobulin solution system under consideration are exchangeable. Also, as a result of the exchange interaction, in which the magnetic moments of the individual iron atoms also play a role, clusters with a non-zero resultant magnetic moment are likely to form at the micro level. An important factor in the interaction is the effective area of the cluster structures through which the biochemical processes take place.

Прилагането на външно хомогенно магнитно поле В има комплексно въздействие върху парамагнитните системи от разглеждания тип. Всички микрообразования с некомпенсиран магнитен момент се ориентират по посоката на вектора на полето В. В резултат отделните клъстъри по време на облъчването се окрупняват и променят свойствата си. От това най-вероятно произтича новият неочакван и положителен ефект от въздействието на магнитното поле върху течните имуноглобулинови препарати. Сравняването на експерименталните зависимости без и с магнитно поле на фигурата еднозначно доказват, че полето В съществено увеличава автореактивността на човешката плазма, съгласно описаното действие. Използването на метода в промишлени условия се определя от отсъствието на сложни технологични процеси, изискващи строго дефинирани външни фактори. В нашия случай единствено определяща е ролята на външното 5 магнитно поле, генерирането на което не поражда никакви технологични проблеми. Методът е с максимално възможна степен на възпроизводимост и практически е нечувствителен към параметрите на отделните етапи, включително и към 10 спектралните характеристики на светлината.The application of an external homogeneous magnetic field B has a complex effect on the paramagnetic systems of the type in question. All microprojections with uncompensated magnetic moment are oriented in the direction of the vector of field B. As a result, individual clusters during irradiation become larger and change their properties. This is likely to result in the new unexpected and positive effect of the magnetic field on liquid immunoglobulin preparations. Comparison of the experimental dependences without and with the magnetic field of the figure clearly proves that the field B significantly increases the autoreactivity of human plasma according to the described action. The use of the method in industrial conditions is determined by the absence of complex technological processes requiring strictly defined external factors. In our case, the only determinant is the role of the external 5 magnetic field, the generation of which does not cause any technological problems. The method has the highest possible reproducibility and is practically insensitive to the parameters of the individual steps, including the 10 spectral characteristics of light.

Claims

1. A method for modifying autoreactivity

15 of liquid immunoglobulin preparations, characterized in that the immunoglobulin preparation is placed in a device generating a constant homogeneous magnetic field with an induction of not less than 0.15 T and not more than 2 T, increasing the magnetic field to the final value the induction lasts not less than 1 min, the duration of the magnetic field effect on the preparation is not less than 5 min at temperatures of the immunoglobulin preparation in 25 intervals of 4-30 ° C at atmospheric pressure, the decrease in the magnetic field continues not on the m until it is completely switched off, then the immunoglobulin preparation undergoes a self-stabilization step for at least 10 minutes, after which it is practically applicable for its shelf life.

Attachment: 1 figure