BG61384B1

BG61384B1 - Method for the preparation of live attenuated cellular-culture vaccine against fowl pseudopest

Info

Publication number: BG61384B1
Application number: BG98777A
Authority: BG
Inventors: Петко Петров; Марин Диловски; Незабравка Джамбазова; Красимира Генова; Лучия Мукова
Original assignee: Петко Петров; Марин Диловски; Незабравка Джамбазова; Красимира Генова; Лучия Мукова
Priority date: 1994-05-17
Filing date: 1994-05-17
Publication date: 1997-07-31
Also published as: BG98777A

Abstract

The method is used for the preparation of attenuated cellular-culture vaccine against fowl pseudopest having high antigen content. It is made by the cultivation of strain Avium paramyxovirus-1, registered in NBIMCC under No. 2382, in cellular cultures of the permanent celullar BHK-21 line with subsequent freeze-drying by cryoprotector of 3.5% dextrane.

Description

ОБЛАСТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТОFIELD OF THE INVENTION

Изобретението се отнася до метод за получаване на жива атенуирана ваксина против псевдочума по птиците, означена като ДД/94.The invention relates to a method for the preparation of a live attenuated avian pseudo-plague vaccine, designated DD / 94.

НИВО НА ИЗОБРЕТЕНИЕТОBACKGROUND OF THE INVENTION

Известен е метод за получаване на живи ваксини, при които вирусните щамове се атенуират чрез многобройни серийни пасажи в кокоши ембриони или в клетъчни култури /1,2, 3, 4/.A method for the preparation of live vaccines in which viral strains are attenuated by numerous serial passages in hen embryos or in cell cultures is known (1,2, 3, 4).

В литературата има данни за култивиране на псевдочумния вирус в хомоложни клетъчни култури от кокоши ембриони. При използването за ваксинопроизводство на яйца от обикновени ферми, поради липсата на SPFферми, съществува потенциална опасност за разпространение на птичи левкозни и саркомни вируси. Има данни и за размножаване на вируса в хетероложни клетъчни култури от свински и телешки произход, а също така и от хамстери. Методите обикновено са патент на фирмите производители.There is evidence in the literature for the cultivation of pseudopumps virus in homologous cell cultures from hen embryos. When used for the production of eggs from ordinary farms, due to the lack of SPF farms, there is a potential risk of the spread of avian leukemia and sarcoma viruses. There is also evidence of virus multiplication in heterologous cell cultures of porcine and veal origin, as well as of hamsters. Methods are usually the patent of manufacturers.

Трудностите за получаване на такива ваксини произтичат основно от търсенето на подходящи клетъчни култури. Сериозно препятствие за получаването на жива атенуирана ваксина е адаптирането на вирусния щам върху съответната клетъчна култура и подходяща селекция за запазване на имуногенността и безвредността му.The difficulties in obtaining such vaccines stem mainly from the search for suitable cell cultures. A serious impediment to the production of a live attenuated vaccine is the adaptation of the viral strain to the appropriate cell culture and appropriate selection to preserve its immunogenicity and safety.

СЪЩНОСТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТОSUMMARY OF THE INVENTION

По своята същност изобретението представлява метод за получаване на атенуирана клетьчнокултурална ваксина против псевдочума по птиците с високо съдържание на антиген.In essence, the invention is a method for the preparation of an attenuated pseudomodal cell vaccine for high antigen content in birds.

Методът съгласно изобретението предвижда използването на вирусен щам, адаптиран, атенуиран и селекциониран последователно на примокултури от телешки бъбрек и ста билните клетъчни линии Heart и ВНК-21. Щамът Avium paramyxovirus-1 ДД/94, регистриран под № 2382 в Националната банка за промишлени микроорганизми и клетъчни култури, предизвиква характерен цитопатичен ефект и едрооформени плаки, притежава хемаглутинираща активност за кокоши еритроцити над 1:64 и има инфекциозен титър в ВНК21 lx 10⁶ ККИД₅₀/ст³. Лиофилизира се с криопротектор 3,5 % декстран.The method of the invention envisages the use of a viral strain adapted, attenuated and sequentially selected from veal kidney primocultures and stable Heart and BHK-21 cell lines. Strain Avium paramyxovirus-1 DD / 94, registered under № 2382 in the National Bank for Industrial Microorganisms and Cell Cultures, induces a characteristic cytopathic effect and edrooformeni plates possesses hemagglutinating activity of hen erythrocytes more than 1:64, and has an infectious titer in BHK21 lx 10 ⁶ KKID ₅₀ / Article ³ . Lyophilized with cryoprotectant 3.5% dextran.

Получената ваксина има следните предимства. Получена е от селекциониран и атенуиран щам на псевдочумния вирус, ваксиналният щам се култивира успешно в клетъчни култури от постоянната линия ВНК-21, поддържани със синтетични хранителни среди при стационарен или ролерен режим.The vaccine obtained has the following advantages. Obtained from a selected and attenuated strain of the pseudogenic virus, the vaccine strain is successfully cultured in cell cultures of the BHK-21 constant line maintained with synthetic culture media under steady or roller mode.

Изобретението се пояснява със следните примери.The invention is illustrated by the following examples.

Пример 1. С ваксинният щам Avium paramyxovirus-1 ДД/94, регистриран в НБПМКК под №2382, се заразяват с ВНК-21 клетки в монослой /Ру-стъкла/ или в суспензия /ролерни стъкла/ при множественост на инфекцията 0,2 с адсорбция на вируса 1 h при 37°С, след което се добавя поддържащата хранителна среда. Култивирането продължава 7296 h. Вирусният добив се контролира по специфичния цитопатичен ефект на монослоя и чрез определяне на хемаглутинационния титър след замразяване и размразяване на пробите от събрания вирус.Example 1. The Avium paramyxovirus-1 DD / 94 vaccine strain registered in NBPMCC under No. 2382 was infected with BHK-21 cells in a monolayer (Ru-glasses) or in suspension (roller glasses) at a multiplicity of infection of 0.2 s. virus adsorption for 1 h at 37 ° C, followed by addition of the culture medium. Cultivation was continued for 7296 h. Viral yield is controlled by the specific cytopathic effect of the monolayer and by determining the hemagglutination titer after freezing and thawing the samples of the collected virus.

Ваксината се означава като ДД/94.The vaccine is referred to as DD / 94.

Пример 2. Ваксината се прилага очноназално на 2-3-седмични пилета и мускулно на 18-20 седмица в определена доза. Ваксината индуцира появата на серумни антитела, които предпазват пилетата от заразяване с див вирус. Протективният ефект се установява на 8-10 ден след ваксинацията и продължава 6-8 месеца.EXAMPLE 2 The vaccine was administered oconasally to 2-3-week-old chickens and intramuscularly for 18-20 weeks at a fixed dose. The vaccine induces the appearance of serum antibodies that protect the chickens from becoming infected with wild virus. The protective effect is established 8-10 days after vaccination and lasts 6-8 months.

Claims

1. A method for the preparation of a live attenuated cell-culture vaccine against avian pseudo-plague, characterized in that the vaccine strain Avium paramyxovirus1 strain DD / 94, registered in NBPMCC under No. 2382, is propagated in cell cultures by the constant BHK line 21 lyophilized with cryoprotectant 3.5% dextran.