BG60367B2

BG60367B2 - Amonoacid derivatives

Info

Publication number: BG60367B2
Application number: BG96639A
Authority: BG
Inventors: Joseph Martin; Sally Redshaw
Original assignee: Hoffmann-La Roche Inc.
Priority date: 1990-11-19
Filing date: 1992-07-17
Publication date: 1995-01-30

Abstract

Аминокиселинните производни намират приложение като фармацевтични средства, които при лечение или профилактика на вирусни инфекции у хора и животни инхибират протеазата от вирусен произход. Съединенията и техните фармацевтично приемливи соли са новии имат формула, в която r означава бензилоксикарбонил или 2-хинолилкарбонил.Amino acid derivatives are used as pharmaceuticals which, in the treatment or prevention of viral infections in humans and animals, inhibit the protease of viral origin. The compounds and their pharmaceutically acceptable salts are novel and have the formula wherein r is benzyloxycarbonyl or 2-quinolylcarbonyl.

Description

АМИНОКИСЕЛИННИ ПРОИЗВОДНИAMINO ACID DERIVATIVES

Изобретението се отнася до аминокиселинни производни. Аминокиселинните производни, получени съгласно изобретението, са съединения с формула в която означава бензилоксикарбонил или 2-хинолилкарбонил, както и техни фармацевтично приемливи киселинно присъединителни соли.The invention relates to amino acid derivatives. The amino acid derivatives prepared according to the invention are compounds of the formula in which denotes benzyloxycarbonyl or 2-quinolylcarbonyl, as well as their pharmaceutically acceptable acid addition salts.

Съединенията с формула I и техните фармацевтично приемливи киселинно-присъединителни соли са нови и притежават ценни фармакологични свойства. По-специално те инхибират протеаза _ от вирусен произход и могат да се използват за профилактика и лечение на вирусни инфекции, особено на инфекции, предизвикани от HIV И други ретровируси при млекопитаещи животни и хора.The compounds of formula I and their pharmaceutically acceptable acid addition salts are novel and have valuable pharmacological properties. In particular, they inhibit protease _ of viral origin and can be used for the prevention and treatment of viral infections, especially infections caused by HIV and other retroviruses in mammals and humans.

Аминокиселинните производни, получени съгласно изобретението, са съединения с формулаThe amino acid derivatives prepared according to the invention are compounds of formula

в която R означава бензилоксикарбонил или 2-хинолилкарбонил, и техни фармацевтично приемливи киселиннии адиционни соли.wherein R is benzyloxycarbonyl or 2-quinolylcarbonyl, and their pharmaceutically acceptable acid addition salts.

Съединенията с формула I и техните фармацевтично приемливи киселинно присъединителни соли са нови и притежават ценни фармакологични свойства. По-специално те инхибират протеазата от вирусен произход и могат да се използват при профилактиката и лечението на вирусни инфекции, особено на инфекции, предизвикани от HIV и други ретровируси при млекопитаеши животни и хора.The compounds of formula I and their pharmaceutically acceptable acid addition salts are novel and have valuable pharmacological properties. In particular, they inhibit protease of viral origin and can be used in the prevention and treatment of viral infections, especially infections caused by HIV and other retroviruses in mammals and humans.

Предмет на изобретението са съединенията с формуяа I и техните горепосочени соли, използването им като терапевтично-активни вещества, методът за получаване на тези съединения и соли, междинните съединения, използвани в този метид, лекарствените средства, съдържащи тези съединения и солите им, използването на тези съединения и солите им за лечение и профилактика на заболявания, по-специално за лечение и профилактика на вирусни инфекции, и използването на тези съединения и солите им при производството на лекарствени срества за лечение и профилактика на вирусни инфекции.The subject of the invention are the compounds of Formula I and their salts mentioned above, their use as therapeutically active substances, the method of preparing these compounds and salts, the intermediates used in this method, the drugs containing these compounds and their salts, the use of these compounds and their salts for the treatment and prevention of diseases, in particular for the treatment and prophylaxis of viral infections, and the use of these compounds and their salts in the manufacture of medicaments for the treatment and pro prevention of viral infections.

Фармацевтично приемливите киселинно-адий^онни соли на съединенията с формула I са соли, образувани с неорганични киселини, 2 ···-··.The pharmaceutically acceptable acid-adiate salts of the compounds of formula I are salts formed with inorganic acids, 2 ··· - ··.

например халогеноводородни киселини като хлороводородна киселина или бромоводородна киселина, сярна киселина, азотна киселина, фосфорна киселина и т.н., или с органични киселини, например оцетна киселина, ябълчена киселина, фумарова киселина, винена киселина, метансулфонова киселина, р-толуенсулфонова киселина и т.н.for example, hydrohalic acids such as hydrochloric acid or hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, etc., or with organic acids, for example acetic acid, malic acid, fumaric acid, tartaric acid, methanesulfonic acid, p-toluenic acid etc.

По метода съгласно изобретението съединенията с формула I, посочени по-горе, и техните фармацевтично ириемливи киселинни присъединителни соли се получават по следния начин:According to the process of the invention, the compounds of formula I mentioned above and their pharmaceutically acceptable acid addition salts are prepared as follows:

А. При взаимодействие на 2-1]з(&)-амино-2(Ю-хидрокси-4-фенилбутил -1*к-трет. -бутил-декахидро-(4а ^s,8aS)-изохинолид-3(6)-карбок-A. In the reaction of 2-1] with (R) - amino-2 (10-hydroxy-4-phenylbutyl-1 * k-tert-butyl-decahydro- (4a ^s , 8aS) -isoquinolide-3 (6) -carbox-

в която R има значения»®. , описани по-горе, или нейно реактивоспособно производно,in which R has the meaning »®. described above, or a reactive derivative thereof,

Б. При редуциране на съединение с формулаB. When reducing a compound of formula

в която има значенията, посочени по-гере, и отделяне на желания 2(Ц)-хидрокси-изомер от получената смес.in which the meanings indicated above are separated and the desired 2 (R) -hydroxy isomer is separated from the resulting mixture.

В. При взаимодействие на 2^3(5)-[_(1^аспарагинил)амино]-2{R) -хидрокси-4-фенилбутил]-М-трет-бутил-декахидро-(4aS,8aS) -изохинолин-З(Ь)-карбоксамид с формулаB. In the reaction of 2R, 3 (S) - [_ (1R asparaginyl) amino] -2 (R) -hydroxy-4-phenylbutyl] -N-tert-butyl-decahydro- (4aS, 8aS) -isoquinoline- C (b) -carboxamide of the formula

със средство, което.' отдава бензилоксикарбонилна или 2-хинолилкарбонилна група.with a means that. ' affords a benzyloxycarbonyl or 2-quinolylcarbonyl group.

Г. В даден случай превръщане на съединение с формула I в негова фармацевтично приемлива киселинно адиционна сол.D. Optionally converting a compound of formula I into its pharmaceutically acceptable acid addition salt.

Взаимодействието на съединение с формула II с киселина с формула III по метода А. съгласно изобретението може да се осъществи чрез известни от пептидната химия методи. Когато се изполвва киселина с формула III, за предпочитане е реакцията да се осъществи в присъствие на кондензиращо средство като хидроксибензотриазол и дициклохексилкарбодиимид. Тази реакция най-добре протича в среда от инертен органичен разтворител, например етер, като диетилов етер, тетрахидрофуран и др., или диметилформамид при ниска температура. Предпочитана температура е от -10°С до +5°С и особено около 0°С. Подходящи реактивоспособни производни на киселините с формула III са съответните киселинни халогениди, например хлориди, киселинни анхидриди, смесени анхидриди, активирани естери и др. Когато се използва реактивоспособно производно, реакцията се провежда най-често в среда на инертен органичен разтворител като халогениран алифатен въглеводород,например дихлорометан и др., или етер, например диетилов етер, тетрахидрофуран и др., и когато е необходимо в ррисъствие на органична база, например N-етилморфолин, диизопропиламин и др. при ниска температура. Подходяща температура е около -10°С до +5°С, по-специално около 0°С.The reaction of a compound of formula II with an acid of formula III according to method A. according to the invention can be accomplished by methods known in the peptide chemistry. When an acid of formula III is used, it is preferable to carry out the reaction in the presence of a condensing agent such as hydroxybenzotriazole and dicyclohexylcarbodiimide. This reaction is best carried out in an environment of an inert organic solvent, for example an ether, such as diethyl ether, tetrahydrofuran, etc., or dimethylformamide at low temperature. A preferred temperature is from -10 ° C to + 5 ° C and especially about 0 ° C. Suitable reactive derivatives of the acids of formula III are the corresponding acid halides, for example chlorides, acid anhydrides, mixed anhydrides, activated esters and the like. When using a reactive derivative, the reaction is most often carried out in an environment of an inert organic solvent such as a halogenated aliphatic hydrocarbon, for example dichloromethane, etc., or an ether, for example diethyl ether, tetrahydrofuran, etc., and when necessary in the presence of an organic base. e.g. N-ethylmorpholine, diisopropylamine and the like. at low temperature. A suitable temperature is about -10 ° C to + 5 ° C, in particular about 0 ° C.

Редуцирането на съединение с формула IV по метод Б съгласно изобретението може да се осъществи по добре известни методи от нивото на техниката за редуциране на карбонилна гпупа до хидроксигрупа. Например, редукцията може да се проведе при използване на комплевсен метален хидрид като алкалнометалин борохидрид, поспециално натриев борохидрид в подходящ органичен разтворител, като алканол, например метанол, етанол, пропанол, изопропанол и др. Обикновено редукцията протича при стайна ®емпература около 20°С. Отделянето на желания 2(Ю-хидроксиизомер от получената смес може да се осъществи по известни начини, например чрез хроматография и други подобни.The reduction of a compound of formula IV by Method B according to the invention can be accomplished by well-known methods from the prior art for reducing a carbonyl group to a hydroxy group. For example, the reduction can be carried out using complex metal hydride such as alkali metal borohydride, especially sodium borohydride in a suitable organic solvent such as alkanol, for example methanol, ethanol, propanol, isopropanol and the like. Generally, the reduction occurs at room temperature about 20 ° C. The separation of the desired 2 (10-hydroxyisomer from the resulting mixture can be accomplished by known means, for example, by chromatography and the like.

В съответствие с подточка В на метода подходящо средство, което води до получаването на бензилоксикарбонилна група и бензил хлороформиат. Подходящи средства, които водят до получаване на 2-хинолилкарбонилна група са съответната киселина или нейно реак5 тивоспособно производно, например съответните киселинни халогениди като киселинен хлорид, киселинен анхидрид, смесени анхидриди, активирани естери и др. Взаимодействието на съединение с формула V с посоченото по-горе средство се провежда по същия начин, както е описано в подточка А на метода.In accordance with point B of the method, a suitable agent which results in a benzyloxycarbonyl group and benzyl chloroformate. Suitable agents leading to the formation of the 2-quinolylcarbonyl group are the corresponding acid or its reactive derivative, for example the corresponding acid halides such as acid chloride, acid anhydride, mixed anhydrides, activated esters and the like. The reaction of a compound of formula V with the above agent is carried out in the same manner as described in point A of the method.

Превръщането на съединение с формула I във фармацевтично приемлива киселинно адиционна сол съгласно подточка Г на метода може да се извърши чрез третиране на съединението по известен начин с неорганична киселина, например халогеноводородна киселина, като хлороводородна, бромоводородна, сярна, азотна, фосфорна киселина и др., или с органична киселина като оцетна, лимонена, ябълчена, фумарова, винена и метансулфонова киселина и др.The conversion of a compound of formula I into a pharmaceutically acceptable acid addition salt according to point D of the process can be accomplished by treating the compound in a known manner with an inorganic acid, for example, hydrochloric acid, such as hydrochloric, hydrobromic, sulfuric, nitric, phosphoric acid. , or with an organic acid such as acetic, citric, malic, fumaric, tartaric and methanesulfonic acids, etc.

Използваното като изходен продукт съединение с формула II, съгласно подточка А на метода,е ново и също е предмет на изобретението.The compound of formula II used as the starting material according to point A of the process is novel and is also an object of the invention.

Съединението с формула II може да се получи, например при вдаимодействие на съединение с формулаThe compound of formula II can be prepared, for example, by the interaction of a compound of formula

VI в която R, ϊ представлява аминозащитна група и X означава хлоран или бромен атом, с 1М-трет-бутил-декахидро-(4а5,8а5)изохинолинкарбоксамид и формула и редуциране на полученото съединение с формулаVI in which R, ϊ represents an amino protecting group and X represents a chlorine or bromine atom, with 1M-tert-butyl-decahydro- (4a5,8a5) isoquinolinecarboxamide and formula and reduction of the resulting compound of formula

в която j има значенията, посочени по-горе, отделяне на желания 2(Ц)-хидроксиизомер от получената смес и отцепване на групата от полученото съединение с формулаin which j has the meanings indicated above, the separation of the desired 2 (S) -hydroxyisomer from the resulting mixture and the cleavage of the group from the compound obtained by the formula

съединение с формула II.a compound of formula II.

Терминът аминозащитна група означава аминозащитна група, която обикновено се използва и е добре известна от нивото на техниката в пептидната химия, например трет.-бутоксикарбонилна или бензоилоксикарбонилна.The term amino protecting group means an amino protecting group commonly used and well known in the art in peptide chemistry, for example tert-butoxycarbonyl or benzyloxycarbonyl.

Взаимодействието на съединение с формула VI за предпочитане такова, в което К j θ бензилоксикарбонилна група, със съединение с формула VII може да се осъществи по известен начин, например в среда от инертен органичен разтворитер като халогенирани алифатни въглеводороди, например дихлорометан и др., и в присъствие на база, например триалкиламин като триетиламин и др., обикновено при около 20°С.The reaction of a compound of formula VI is preferably one in which a K 1 бен benzyloxycarbonyl group with a compound of formula VII can be carried out in a known manner, for example in an environment of an inert organic solvent such as halogenated aliphatic hydrocarbons, for example dichloromethane, etc., and in the presence of a base, for example trialkylamine such as triethylamine and the like, usually at about 20 ° C.

Редуцилането на съединение с формула VIII, за да се получи съединение с формула IX, и последващото отделяне на 2(Н)-хидроксиизомера може да се осъществи по начина, описан в подточка Б на метода от изобретението, при редуциране на съединение с формула IV и отделянето на 2(1^)-хидроксиизомера от получената смес.The reduction of a compound of formula VIII to give a compound of formula IX, and the subsequent separation of the 2 (H) -hydroxyisomer can be accomplished in the manner described in section B of the method of the invention, by reducing a compound of formula IV and separation of the 2 (1R) - hydroxyisomer from the resulting mixture.

Отцепването на групата от съединението с формула IX може също да се осъществи по познат начин като се използва силна неорганична киделина като халогеноводородна или силна органична киселина, например трифлуорооцетна киселина и др., обикновено при около 0°С до стайна температура около 20°С. В даден случай аминозащитната група може да се отцепи като се използва водород в присътвието на катализатор от благороден метал, например паладиев катализатор, като паладий-въглерод, в среда от органичен разтворител или смес от разтворители, които са инертни при условията на реакцията, например алканоли като етанол, изопропанол и др., алканкарбонов естер като етилацетат и др., обикновено при температура около 20°С.The cleavage of the group of the compound of formula IX can also be carried out in a known manner using a strong inorganic acid such as hydrohalic or strong organic acid, for example trifluoroacetic acid, etc., usually at about 0 ° C to room temperature about 20 ° C. In one case, the amino protecting group may be cleaved using hydrogen in the presence of a noble metal catalyst, for example palladium catalyst, such as palladium carbon, in an organic solvent medium or a mixture of solvents which are inert under reaction conditions, for example alkanols such as ethanol, isopropanol, etc., an alkanecarbon ester such as ethyl acetate, etc., typically at a temperature of about 20 ° C.

Друг метод да получаване на съединение с формула II включва първо реакция на съединение с формулаAnother method of preparing a compound of formula II involves first reacting a compound of formula

в която J има значенията, посочени по-горе, със съединение с формула VII, описано по-горе, обикновено в среда от инертен органи чен разтворител като алканол, например метанол и др, диметилформамид или друг подобен разтворител при повишена температура, обикновено при около 60°С до около 120°С, и след това се отцепва групата Ц I в реакционния продукт - описаното по-горе съединение с формула IX.in which J has the meanings indicated above with a compound of formula VII described above, usually in an environment of an inert organic solvent such as alkanol, for example methanol, etc., dimethylformamide or other similar solvent at elevated temperature, typically at about 60 ° C to about 120 ° C, and then cleave the group I in the reaction product - the compound of formula IX described above.

Съединенията с формула IV, използвани като изходни продукти в метода, описан в подточка Б, могат да се получат чрез отцепване на аминозащитната група j от съединение с формула VIII и при взаимодействие на продукта с киселина с формуда. III или нейно производно. Реакцияаа може да протече както е описано в подточка А.The compounds of formula IV used as starting materials in the method described in point B can be prepared by cleaving the amino protecting group j from a compound of formula VIII and by reacting the product with an acid of formula. III or a derivative thereof. The reaction may proceed as described in point A.

Съединението с формула V, използвано в подточка В на метода, също е предмет на изобретението.The compound of formula V used in point B of the process is also an object of the invention.

Съединението с формула V може да се получи например чрез отцепване на бензилоксикарбонилната група Р от съединението с формула I, в което Р означава бензилоксикарбонилна или трет-бутоксикарбонилна група от съединение с формула I, в което Р е трет-бутоксикарбонил. Последното съединение може да се получи например при взаимодействие на съединение с формула II с 1М-(трет-бутоксикарбонил)-^аспарагин, както е описано в подточка А. Горепосоченото отцепване протича аналогично на описаното отцепване на групата | от съединение с формула VIII.The compound of formula V can be prepared, for example, by cleaving the benzyloxycarbonyl group P from the compound of formula I, wherein P is a benzyloxycarbonyl or tert-butoxycarbonyl group of a compound of formula I, wherein P is tert-butoxycarbonyl. The latter compound can be obtained, for example, by reacting a compound of formula II with 1M- (tert-butoxycarbonyl) - N-asparagine, as described in point A. The above cleavage proceeds analogously to the described cleavage of the group | of a compound of formula VIII.

Изходните продукти с формула III и техните реактивоспособни производни, както и съединенията с формули VI, VII и X, могат да се получат,уакто са получени известните съединения или както в описано в примерите по-нататък, или по аналогичен начин. Реагентите, използвани в метода, описан в подточка В, са известни съединения.The starting materials of formula III and their reactive derivatives, as well as the compounds of formulas VI, VII and X, may be prepared as known compounds are obtained, either as described in the examples below, or in an analogous manner. The reagents used in the method described in point B are known compounds.

Съединениата с формула I и техните фармацевтично приемливи киселинно-адиционни соли, както беше споменато, инхибират протеазата от вирусен произход и могат да се използват при лечението и профилактиката на вирусни инфекции, потспециално на инфекции, предидиз викани от HIV и други ретровируси при млекопитаещи животни и хора. Инхибирането in vitro на HIV протеаза от съединенията съгласно изобретението може да се поясни със следния тест:The compounds of formula I and their pharmaceutically acceptable acid addition salts, as mentioned, inhibit protease of viral origin and can be used in the treatment and prophylaxis of viral infections, especially infections, pre-invoked by HIV and other retroviruses in mammals and animals people. In vitro inhibition of HIV protease by the compounds of the invention can be explained by the following test:

HIV протеаза се експресира в Е. coli и частично се пречиства от разтворими екстракти от бактерията чрез фракциониране ( 0- 30%) с амониев сулфат. Протеазната активност се преценява при използването на защитен хексапептиден сукцинил-Ser-Leu-Asn-Tyr-Pro-lle изобутиламид ( S¹) или защитен хептапептид-сукцинил- Val-Ser-Gln-Asn2HIV protease is expressed in E. coli and partially purified from soluble bacterial extracts by fractionation (0-30%) with ammonium sulfate. Protease activity was evaluated using protected hexapeptide succinyl-Ser-Leu-Asn-Tyr-Pro-lle isobutylamide (S ¹ ) or protected heptapeptide-succinyl-Val-Ser-Gln-Asn2

Phe-Pro-lle изобутиламид (S ) като субстрат. Отцепването на субстрата се определя количествено чрез измерване продуцирането на Н-РгоИе изобутиламид посредством спектрофотометрично определяне на N-терминалния пролин.Phe-Pro-lle isobutylamide (S) as substrate. The substrate cleavage was quantified by measuring the production of H-PrOie isobutylamide by spectrophotometric determination of the N-terminal proline.

Разтварят се 1.25 мМ субстрат в 125 мМ цитратен буфер с рНDissolve 1.25 mM substrate in 125 mM citrate buffer with pH

5.5, съдържащ 0.125 мг/мл Твин 20. 10 л разтвор с различни концен трации на изпитваното съединение, разтворено в метанол или диметилсулфоксид и разредено с 0.1% Твин 20, съдържащ вода, и се прибавят 10 ^л протеаза към 80 улл от горния буфериран субстрат.Разграждането се провежда при 37°С за определен период от време и приключва чрез прибавяне на 1 мл багрилен реактив ( ЗО^Ьаг/мл изатин и 1.5 мг/мл 2-(4-хлоробензоил)-бензоена киселина в 10% ацетон в етанол(обем/обем№ Полученият разтвор се загрява^на водна баня и после оцветеният остатък отново се разтваря в 1 мл 1%-ов пирогалол в 33% вода в ацетон (тегло/обем/обем). Оптичната плътност на разтвора се измерва спектрофотометрично при 599 нм. Образуването на н-^рго-11е изобутиламид в присъствие на изпитваното съединение се сравнява с контролите и концентрацията на изпитваното съединение, необходима за да се получи5.5 containing 0.125 mg / ml Tween 20. 10 l of solution with different concentrations of test compound dissolved in methanol or dimethyl sulfoxide and diluted with 0.1% Tween 20 containing water and 10 µl of protease added to 80 µl of the above buffered The substrate was decomposed at 37 ° C for a certain period of time and terminated by the addition of 1 ml of dye reagent (30 ^ L / d / ml isatin and 1.5 mg / ml 2- (4-chlorobenzoyl) -benzoic acid in 10% acetone in ethanol (v / v) The resulting solution was heated in a water bath and then the colored residue was redissolved in 1 ml of 1% pyrogallol in 33% water in acetone (w / v / v). The optical density of the solution was measured spectrophotometrically at 599 nm. The formation of the ^n-p-11f it isobutylamide in the presence of test compound was compared with controls and the concentration of the test compound, needed to get it

50%-но инхибиране (Ι^θ), се определя чрез графика, получена от различните концентрации на използваните опитни съединения.50% inhibition (Ι ^ θ) is determined by the graph obtained from the different concentrations of test compounds used.

Антивирусната активност in vitro на съединенията с формула I се пояснява със следващия опит.The in vitro antiviral activity of the compounds of formula I is explained by the following experiment.

Активност срещу HIVActivity against HIV

Използва се НТ V-III (щам rf ), култивиран в С8166 клетки от човешка CD4⁺ Т лимфобластоидна линия, при използване на 1640 среда с бикарбонатен буфер, антибиотици и 10%-ен фетален говежди серум.HT V-III (strain rf) cultured in C8166 cells from human CD4 ⁺ T lymphoblastoid line was used using 1640 media with bicarbonate buffer, antibiotics and 10% fetal bovine serum.

Суспензия от клетки се инфектира с десетократна ТСД^д на вируса и адсорбцията протича н продължение на 90 минути при 37°С. Клетките се промиват три пъти. Опитът се извършва в 6 мл тъканни културални тръбички, като всяка съдържа 2 х 10 инфектирани клетки в 1.5 мл среда. Изпитваните съединения се разтварят или във водна среда или в диметил сулфоксид, в зависимост от разтворимостта им, и се прибавят 15 л разтвор от прибавената субстанция. Културите се инкубират при 37°C в продължение на 72 ч във влажна атмосфера, съдържаща 5% въглероден двуокис. След това културите се центрофугират и аликвотно количество от описаната течност се солюбилизира с Нонидет Р40 и се подлага на количествено определяне на антигените, при което се използва първичен антисерум със специална реактивоспособност срещу вирусния протеин 24 и проследяваща система на база пероксидаза от хрян. Оцветяването се проследява спектрофотометрично и резултатите се нанасят графично в зависимост от концентрацията на изпитваните съединения. Определя се концентрацията, която дава 50%-на защита (Ι^θ).The cell suspension was infected with ten-fold TSD of the virus and the adsorption proceeded for 90 minutes at 37 ° C. The cells were washed three times. The assay was performed in 6 ml tissue culture tubes, each containing 2 x 10 infected cells in 1.5 ml medium. The test compounds were dissolved either in aqueous medium or in dimethyl sulfoxide, depending on their solubility, and a 15 l solution of the added substance was added. The cultures were incubated at 37 ° C for 72 h in a humidified atmosphere containing 5% carbon dioxide. The cultures were then centrifuged and an aliquot of the liquid described was solubilized with Nonidet P40 and quantified by antigens using a primary antiserum with special reactivity against viral protein 24 and a horseradish peroxidase-based tracking system. The staining was monitored spectrophotometrically and the results plotted against concentration of test compounds. The concentration giving 50% protection (Ι ^ θ) is determined.

Успоредно с теста, описан по-горе, се провежда цитотоксичен опит, основаващ се на поглъщане на багрило за проследяване на метаболизма на радиоактивни аминовиселини, за да се определи антивирусната им селективност.In parallel with the assay described above, a cytotoxic assay was conducted based on the absorption of a dye to monitor the metabolism of radioactive amino acids to determine their antiviral selectivity.

Резултатите, получени от гореописаните опити, при използването на съединения с формула I като опитни вещества, са посочени в следващата таблица.The results obtained from the experiments described above using compounds of formula I as test substances are listed in the following table.

ТаблицаTable

¹ 50 инхибиране на активност ¹ 50 inhibition of activity

Съединение ICompound I

HIV протеаза(|АгМ) срешу HIV (нМ) HIV protease (| AgM) for HIV (nm) бензилоксикарбонил benzyloxycarbonyl £ 0.024 z. 0.0027 S0 £ 0.024 z. 0.0027 S0

2-хинолилкарбонил £ 0.033 £0.00372-quinolylcarbonyl £ 0.033 £ 0.0037

Съединенията с формула I и техните фармацевтично приемливи киселинно-адиционни соли могат да се използват като лекарствени средства, например под формата на фармацевтични препарати. Фармацевтичните препарати могат да се прилагат ентерално или перорално като таблети, филм таблети, драже, твърди и меки желатинови капсули, разтвори, емулсии и суспензии, назално под формата на назален спрей, или ректално под форма на супозитории. Приложението може също да бъде и парентерално чрез мускулно или венозно инжектиране под форма на инжекционни разтвори.The compounds of formula I and their pharmaceutically acceptable acid addition salts may be used as medicaments, for example in the form of pharmaceutical preparations. The pharmaceutical preparations may be administered enterally or orally such as tablets, film tablets, dragees, hard and soft gelatin capsules, solutions, emulsions and suspensions, nasally in the form of a nasal spray or rectally in the form of suppositories. Administration may also be parenteral by intramuscular or intravenous injection in the form of injection solutions.

За получаването на етделни дозирани форми като таблети,филм таблети, дражета и твърди желатинови капсули съединенията с формула I и техните фармацевтично приемливи киселинно-присъединителни соли могат да се смесят с фармацевтично инертни, неорганични или органични пълнители. За приготвянето на таблети, дражета и твърди желатинови капсули могат да се използват като пълнители лактоза, царевично нишесте или негови производни, талк, стеаринова киселина или нейни соли.For the preparation of individual dosage forms such as tablets, film tablets, dragees and hard gelatin capsules, the compounds of formula I and their pharmaceutically acceptable acid addition salts may be admixed with pharmaceutically inert, inorganic or organic excipients. For the preparation of tablets, dragees and hard gelatin capsules, lactose, corn starch or derivatives, talc, stearic acid or its salts may be used as fillers.

Подходящи пълнители за единични дозирани форми на меки желатинови капдули са растителни масла, восък, мазнини, полутвърди и течни полиоли и др.Suitable fillers for single dosage forms of soft gelatin capsules are vegetable oils, waxes, fats, semi-solid and liquid polyols, and the like.

Подходящи пълнители за получаване на дозирани форми на разтвори и сиропи са вода, полиоли, захароза, инвертна захар^люкоза и др. 12Suitable excipients for the preparation of dosage forms of solutions and syrups are water, polyols, sucrose, invert sugar ^ lucose and the like. 12

Подходящи пълнители за инжекционни разтвори са вода, алкохоли, полиоли, глицерол, растителни масла и др.Suitable fillers for solution for injection are water, alcohols, polyols, glycerol, vegetable oils and more.

Подходящи пълнители за супозитории са природни или втвърдени масла, восък, мазнини, полутечни или течни полиоли и др.Suitable fillers for suppositories are natural or hardened oils, waxes, fats, semi-liquid or liquid polyols and more.

Освен това фармацевтичните препарати могат да съдържат и консерванти, солубилизи)ращи агенти, вещества, повишаващи вискодитета, стабилизатори, умокрящи агенти, емулгатори, подсладители, оцветители, ароматизиращи вещества, соли за променяне на осмотичното налягане, буфериращи вещества, филмообразуващи агенти и антиоксиданти. Фармацевтичните препарати могат също да включват и други терапевтично-активни вещества.In addition, pharmaceutical preparations may also contain preservatives, solubilizers, viscosity agents, stabilizers, wetting agents, emulsifiers, sweeteners, colorants, flavoring agents, salts of osmotic pressure, buffering agents, film-forming agents. The pharmaceutical preparations may also include other therapeutically active substances.

Съгласно изобретението съединенията с формула I и техните фармацевтично приемливи киселинно-адиционни соли могат да се използват за лечение и профилактика на вирусни инфекции, по-специално на ретровирусни инфекции. Дозите могат да се изменят в широки граници съобразени с индивидуалните особености на пациента, в зависимост от всеки отделен случай.При перорално приложение се счита за достатъчна дневната доза от около 3 мг до около 3 г, за предпочитане около 10 мг до около 1 г, или приблизително 300 мг на пациент, разделена за предпочитане на 1 до 3 единични дози, които могат да са еднакви по количество. Горната доза може да бъде превишена, когато се прецени, че е необходимо.According to the invention, the compounds of formula I and their pharmaceutically acceptable acid addition salts can be used for the treatment and prophylaxis of viral infections, in particular retroviral infections. Doses can be varied widely according to the individual characteristics of the patient, depending on the individual case.Oral dosage of about 3 mg to about 3 g, preferably about 10 mg to about 1 g, is considered sufficient. or approximately 300 mg per patient, preferably divided into 1 to 3 unit doses, which may be the same in amount. The upper dose may be exceeded when deemed necessary.

Следващите примери поясняват по-подробно изобретението ббз да го ограничават.Ако не е посочено друго температурата е в Целзиеви градуси, а съотношенията са обем/обем.The following examples explain in more detail the invention bbz to limit it. Unless otherwise stated, the temperature is in degrees Celsius and the ratios are volume / volume.

ПРИМЕР 1.EXAMPLE 1.

Разтвор на 561 мг 2-[3($)-амино-2(Ю-хидрокси-4-фенилбутил]N-трет-бутил-декахидро-(4aS,8 aS)-изохинолин-3(5)-карбоксамид и 372 мг М-(бензилоксикарбонил)-Ь -аспаргин в 20 мл сух тетрахидрофуран се охлажда в смес от лед и сол. Към сместа се прибавят 189 мг 13 хидроксибензотриазол, 161 мг N-етилморфолин и 317 мг дициклихексилкарбодиимид и се бърка в продължение на 16 ч. Сместа се разрежда с етилацетат и се филтрува. Фиртратът се промива с воден разтвор на натриев бикарбонат и натриев хлорид. Разтворителят се отстранява чрез изпаряване и остатъкът се хроматографира върху силикагел, като за елуиране се използва дихлорометан/метанол (9:1), при което се получава 434 мг 2-|3(£)-Цк[-(бензилоксикарбонил)-17аспарагинил}аминоП -2- (R) -хидрокси-4-фенилбутил} -N-трет-бутил-декахидро- (4aS, 8aS) изохинолин-3( S)-карбоксамид като бяло твърдо вещество из метанол/ диетилов етер; M£:vn/e 6501М+Н|⁺ , ЯМР СН^ОН, 400 MHZ);A solution of 561 mg of 2- [3 ($) - amino-2 (10-hydroxy-4-phenylbutyl) N-tert-butyl-decahydro- (4aS, 8 aS) -isoquinoline-3 (5) -carboxamide and 372 mg N- (benzyloxycarbonyl) -L-aspartin in 20 ml of dry tetrahydrofuran was cooled in a mixture of ice and salt, 189 mg of 13 hydroxybenzotriazole, 161 mg of N-ethylmorpholine and 317 mg of dicyclichexylcarbodiimide were added to the mixture and stirred for 16 h. The mixture was diluted with ethyl acetate and filtered, the filtrate washed with aqueous sodium bicarbonate and sodium chloride, the solvent was removed by evaporation and the residue was chromatographed on oricagel using dichloromethane / methanol (9: 1) as the elution to give 434 mg of 2- | 3 (R) -Cr [- (benzyloxycarbonyl) -17asparaginyl} amino] -2- (R) -hydroxy-4 -phenylbutyl} -N-tert-butyl-decahydro- (4aS, 8aS) isoquinoline-3 (S) -carboxamide as a white solid from methanol / diethyl ether; Mg: vn / e 6501M + H | ⁺ , NMR CH2 + OH, 400 MHZ);

7.33 (5Н, tn, PhCH₂O), 7.25 (2Н, т), 7.18 (2Н, т), 7.09 (1Н, т) 5.05 (2Н, s, PhCH₂O), 4.42 (1Н, dd, Asn a J«7.8, 6.1), 4.22 (1H, m, -CH₂CH(OH)- Л^е10.7,около 4, около 4), 3.85 (1H, m, -CHCH(OH)CH₂- J-8.0, 6.2, около 4), 3.02 (1H, dd, PhCH(H)CH-J—13.9 ОКОЛО 4), 3.02 (1H, dd, 1 J—12.0, малък ), 2.69 (1H, dd,PhCH(H)CHeC]7.33 (5H, tn, PhCH ₂ O), 7.25 (2H, t), 7.18 (2H, t), 7.09 (1H, t) 5.05 (2H, s, PhCH ₂ O), 4.42 (1H, dd, Asn a J 7.8, 6.1), 4.22 (1H, m, -CH ₂ CH (OH) - L ^is 10.7, about 4, about 4), 3.85 (1H, m, -CHCH (OH) CH ₂ - J-8.0, 6.2, about 4), 3.02 (1H, dd, PhCH (H) CH-J - 13.9 ABOUT 4), 3.02 (1H, dd, 1 J - 12.0, small), 2.69 (1H, dd, PhCH (H) CHeC ]

J —13.9, 10.7), 2.63 (1H, dd, -CH(OH)CH(H)N- J—12.6, 8.0),J-13.9, 10.7), 2.63 (1H, dd, -CH (OH) CH (H) N-J-12.6, 8.0),

2.62 (1H, dd, H3 J- ОКОЛО 11, малък ),2.57(1H, dd,Asn 8.3=-15.2 8X A2.62 (1H, dd, H3 J- ABOUT 11, small), 2.57 (1H, dd, Asn 8.3 = -15.2 8X A

6.1), 2.38 (1H, dd, Asn B₂ J—15.2, 7.8), 2.19 (1H, dd, -CH(OH)CH(H)N-, J—12.6, 6.2), 2.17 (1H, dd, l_flXJ= -12.0, 3.2), 2.07 (1H, m, H4 J= -12.7,около 116.1), 2.38 (1H, dd, Asn B ₂ J-15.2, 7.8), 2.19 (1H, dd, -CH (OH) CH (H) N-, J-12.6, 6.2), 2.17 (1H, dd, l _flX J = -12.0, 3.2), 2.07 (1H, m, H4 J = -12.7, about 11

XX

J, . - около 11.5,J,. - about 11.5,

4a-4ax ’4a-4ax '

ОКОЛО 11.5), 1.78 (1H, m, H4a малък, Зд_а_8_а “Малък ), 1.63(lH,m, ^{H8a J}8a-lax³·² ’^J8a-leq’ ^малък· ^J8a-4a‘^MaJlbK) > l-35(lH,m, H4_eqJ-12.7, малък, малък ),1.30 (9H,s,t- бутил), 2.0-1.2(8H,m)ABOUT 11.5), 1.78 (1H, m, H4a small, 3d _a _8 _a “Small), 1.63 (1H, m, ^{H8a J} 8a-lax ³ · ² ' ^J 8a-leq' ^small · ^J 8a-4a ' ^MaJlbK) > l-35 (1H, m, H4 _eq J-12.7, small, small), 1.30 (9H, s, t-butyl), 2.0-1.2 (8H, m)

Използваният като изходен продукт 2-|^3(*)-амино-2(1<)-хидрокси4-фенилбутил7-М-трет-бутил-декахидро-(4а1,8а5)-изохинолин-ЗС$)карбоксамид се получава по следния начин.The 2- (S) -amino-2 (S) -hydroxy-4-phenylbutyl-7-N-tert-butyl-decahydro- (4a1,8a5) -isoquinoline-3C $) carboxamide used as starting material was obtained as follows .

1. Суспензия от 12.676 г (71.6 ммола) 1,2,3,4-тетрахидро-3(Я)изохинолинкарбонова киселина ( Chem. Pharm.Bull., 1983,31,312) в 200 мл 90%-на оцетна киселина се хидрира при 80°С при налягане 140 атмосфери върху 5%-ен родий върху въглен в продължение на 24 чь1. A suspension of 12.676 g (71.6 mmol) of 1,2,3,4-tetrahydro-3 (R) isoquinolinecarboxylic acid (Chem. Pharm.Bull., 1983,31,312) in 200 ml of 90% acetic acid is hydrogenated at 80 ° C at 140 atmospheres at 5% rhodium on charcoal for 24 h

Сместа се оставя да се охлади до стайна температура и катализаторът се отфилтрува, Филтратът се изпарява и се получава продукт под форма на смола, който се разтваря в 10 мл етилацетат, и бавно се прибавя към 100 мл диизопропилов етер при енергично разбъркване. Отделя се смолиста утайка. Супернатантната течност се отстранява чрез декантиране и утайката се екстрахира с горещ етилацетат.Този горещ разтвор се излива при енергично бъркане в смес от 150 мл диетилов етер/диизопропилов етер (1:1), при което се получава светлосива твърда фаза, която се отделя чрез филтруване, промива се с диетилов етер и се суши. Така се получават 5.209 г смес от декахидроизохинолин-3(5)-карбоновикиселини, състоящи се предимно от около 65% 4аЗ,8а0 изомера, заедно с 4а£,8аЗизомера, около 25%, и около 10% от транс изомера; M5:W»/e 184 |М+Н|⁺.The mixture was allowed to cool to room temperature and the catalyst was filtered off, the filtrate was evaporated to give a resin product, which was dissolved in 10 ml of ethyl acetate, and slowly added to 100 ml of diisopropyl ether with vigorous stirring. A resinous precipitate formed. The supernatant was removed by decantation and the precipitate was extracted with hot ethyl acetate. This hot solution was poured under vigorous stirring into a mixture of 150 ml of diethyl ether / diisopropyl ether (1: 1) to give a light gray solid which was separated by filtration, washed with diethyl ether and dried. There are thus obtained 5.209 g of a mixture of decahydroisoquinoline-3 (S) -carboxylic acids, consisting predominantly of about 65% of the 4a3, 8a0 isomers, together with the 4a, 8aZisomer, about 25%, and about 10% of the trans isomer; M5: W »/ e 184 | M + H | ⁺ .

II» 9.036 г (49.4 ммола) от описаната в точка I смес от декахидроизохинолин-3($)-карбонови киселини се разтварят в 50 мл (50 ммола) 1М разтвор на натриев хидроксид и полученият разтвор се охлажда до 0°С. В продължение на 1 час при охлаждане и поддържане на температура 0-5°С се прибавят на капки 7.40 мл (51.87 ммола) бензил хлороформиат и 58.7 мл (58.7 ммола) 1М разтвор на натриев хидроксид. След това сместа се бърка оше 2 часа, като през това време се оставя сместа да се затопли до стайна температура.Прибавят се 100 мл диетилов етер и сместа се филтрува, при което неразтворимият R,R -изомер се отстранява. Водният слой на филтрата се отделя и се нагласява на pH 1.5-2 чрез прибавяне на концентрирана хлороводородна киселина, при което се отделя масло. Сместа се екстрахира двукратно с по 100 мл етилацетат. Събраните органични екстракти се промиват с вода, сушат се над безводен натриев сулфат и се изпаряват до получаване на масло. То се разтваря в 35 мл етилацетат и се прибавят 2.85 мл(25 ммола) циклохексиламин. Бялата утайка се отделя чрез филтруване и след неколкократно фракционно прекристали15 зиране от метанол/етилацетат се получават 2.38 г циклохексиламинова сол на 2- (бензилоксикарбонил)-декахидро- (4а5,8аЬ)-изохинолин-3 (£») карбонова киселина; MS : М /е 318 |М+Н|⁺.II. 9.036 g (49.4 mmol) of the mixture of decahydroisoquinoline-3 (S) - carboxylic acids described in point I was dissolved in 50 ml (50 mmol) of a 1M solution of sodium hydroxide and the resulting solution cooled to 0 ° C. 7.40 ml (51.87 mmol) of benzyl chloroformate and 58.7 ml (58.7 mmol) of 1M sodium hydroxide solution were added dropwise over 1 hour while cooling and maintaining the temperature at 0-5 ° C. The mixture was then stirred for another 2 hours, during which time the mixture was allowed to warm to room temperature. 100 ml of diethyl ether were added and the mixture filtered, whereby the insoluble R, R-isomer was removed. The aqueous layer of the filtrate was separated and adjusted to pH 1.5-2 by the addition of concentrated hydrochloric acid to remove oil. The mixture was extracted twice with 100 ml of ethyl acetate. The combined organic extracts were washed with water, dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated to give an oil. It was dissolved in 35 ml of ethyl acetate and 2.85 ml (25 mmol) of cyclohexylamine were added. The white precipitate was collected by filtration and after several fractional recrystallization from methanol / ethyl acetate 2.38 g of 2- (benzyloxycarbonyl) -decahydro- (4a5,8aB) -isoquinoline-3 (S) carboxylic acid were obtained; MS: M / e 318 (M + H) ⁺ .

III. Разделят се 2.334 г циклохексиламинова сол на 2-(бензилоксикарбонил )-декахидро-(4а5,8aS) -изохинолин-3 (S) -карбонова киселина между 50 мл етилацетат и 50 мл 10%-ен разтвор на лимонена киселина. Органичната фаза се отдрля, промива се с вода, филтрува се, изпарява се и се получават 1.87 г 2-(бензилоксикарбонил)-декахидро(4а5,8а^)-изохинолин-3(S)-карбонова киселина под форма на безцветно смолообразно вещество; М5: νΉ/θ 318 |М+Н|⁺.III. Divide 2,334 g of 2- (benzyloxycarbonyl) -decahydro- (4a5,8aS) -isoquinoline-3 (S) -carboxylic acid cyclohexylamine salt between 50 ml of ethyl acetate and 50 ml of 10% citric acid solution. The organic phase was separated, washed with water, filtered, evaporated, yielding 1.87 g of 2- (benzyloxycarbonyl) -decahydro (4a5,8a) - isoquinoline-3 (S) -carboxylic acid as a colorless gum; M5: νΉ / θ 318 | M + H | ⁺ .

IV. Към разтвор на 0.634 г (2.0 ммола) 2-(ббнзилоксикарбонил)3декахидро-(4а5,8а3}изохинолин-3(5)-карбонова киселина в 6 мл диметоксиетан се прибавят 0.23 г (2.0 ммола) N-хидроксисукцинимид и 0.412 г (2.0 ммола) дициклохексилкарбодиимид. Сместа се бърка при стайна температура в продължение на 18 часа, филтрува се и филтратът се изпарява,при което се получават 0.879 г Н-хидроксисукцинимиден естер на горната киселина под форма на бледожълто масло.Разтвор на 0.828 г (2.0 ммола) от М-хидроксисукцинимидния естер се разбърква в 5 мл дихлорометан, охлажда се до 0°С и към него се прибавят 0.219 г (3.0 ммола) трет-бутиламин. Сместа се разбърква при 0°С 2 часа и след това още 4.5 часа при стайна температура. Промива се с 2М хлороводородна киселина, с разтвор на натриев карбонат и на натриев хлорид, суши се над безвозен магнезиев сулфат и се изпарява. Остатъкът се разтваря в 20 мл диетилов етер и се филтрува. Филтратът се изпарява и се получават 0.712 г 2-(бензилоксикарбонил)-М-третбyτил-дeκaxидpo-(4aS,8aS)-изохинолин-3(5)-карбоксамид под форма на бяла твърда маса; М$: УИ/е 373 |М+Н| ⁺ .IV. To a solution of 0.634 g (2.0 mmol) of 2- (benzyloxycarbonyl) 3-decahydro- (4a5,8a3} isoquinoline-3 (5) -carboxylic acid in 6 ml of dimethoxyethane was added 0.23 g (2.0 mmol) of N-hydroxysuccinimide and 0.412 g (2.0 The mixture was stirred at room temperature for 18 hours, filtered and the filtrate evaporated to give 0.879 g of the hydrochloride ester of the above acid as a pale yellow oil. A solution of 0.828 g (2.0 mmol). of the M-hydroxysuccinimide ester was stirred in 5 ml of dichloromethane, cooled to 0 ° C and added to it. 0.219 g (3.0 mmol) of tert-butylamine was added to the mixture, the mixture was stirred at 0 ° C for 2 hours and then another 4.5 hours at room temperature, washed with 2M hydrochloric acid, sodium carbonate and sodium chloride solution, dried over of magnesium sulfate and evaporated The residue was dissolved in 20 ml of diethyl ether and filtered The filtrate was evaporated to give 0.712 g of 2- (benzyloxycarbonyl) -N-tert-butyl-decoxy-3- (4aS, 8aS) -isoquinone ) -carboxamide in the form of a white solid; M $: IM / e 373 | M + H | ⁺ .

V. Разтвор на 0.689 г (1.85 ммола) 2-(бензилоксикарбонил)-Нτpeτ-бyτил-дeκaxидpo-(4aS,8aS)-изохинолин-3(З)-карбоксамид в 20 мл етанол се хидрогенира в присъствие на 0.01 г 10% паладий-въглерод 16 при стайна температура и под атмосферно налягане за 18 часа.Катализаторът се отстранява чрез филтруване и разтворителят се изпарява, при което се получава количествен добив от N-трет-бутил-декахидро-(4а5,8а5)-изохинолин-3(’$)-карбоксамид като бистро масло; М S : vn/e 239 |М+Н|⁺, което се използва в следващия етап без допълнително пречистване.V. A solution of 0.689 g (1.85 mmol) of 2- (benzyloxycarbonyl) -Nτpeτ-butyl-decoxy-3- (4aS, 8aS) -isoquinoline-3 (3) -carboxamide in 20 ml of ethanol is hydrogenated in the presence of 0.01 g of 10% palladium -carbon 16 at room temperature and atmospheric pressure for 18 hours. The catalyst was removed by filtration and the solvent was evaporated to give a quantitative yield of N-tert-butyl-decahydro- (4a5,8a5) -isoquinoline-3 (' $) - carboxamide as a clear oil; M S: vn / e 239 | M + H | ⁺ which is used in the next step without further purification.

VI. Разтвор от 440 мг Г5-трет-бутил-декахидро-(4а5,8аЗ)изохинолин-3(SO-карбоксамид и 549 мг 3(5)-(бензилоксиформамидо)1,2( 5)-епокси-4-фенилбутан в б мл етанол се разбърква при 60°С в продължение на 7 часа. Прибавят се допълнително още 54 мг 3(£)(бензилоксиформамидо)-1,2(5)-епокси-4-фенилбутан и разтворът се разбърква при 20°С още 16 часа. Разтворителят се изпарява и остатъкът се хроматографира върху силикагел, като се елуира със смее от диетилов етер/н-хексан/метанол (47.5:47.5:5), и се получават 771 мг 2- [3 (S) - (бензилоксиформамидо)-2(R)-хидрокси-4-фенилбутилΓί-трет-бутил-декахидро-(4aS,8а S) -изохинолин-3(S) -карбоксамид като бяла твърда маса; МS :γη/е 536 |М+Н|⁺.VI. A solution of 440 mg of 5-tert-butyl-decahydro- (4a5,8a3) isoquinoline-3 (SO-carboxamide and 549 mg of 3 (5) - (benzyloxyformamido) 1,2 (5) -epoxy-4-phenylbutane in b ml ethanol was stirred at 60 ° C for 7 hours, an additional 54 mg of 3 (S) (benzyloxyformamido) -1,2 (5) -epoxy-4-phenylbutane was added and the solution was stirred at 20 ° C for another 16 hours The solvent was evaporated and the residue was chromatographed on silica gel eluting with a mixture of diethyl ether / n-hexane / methanol (47.5: 47.5: 5) to give 771 mg of 2- [3 (S) - (benzyloxyformamido) - 2 (R) -hydroxy-4-phenylbutyl-tert-butyl-decahydr o- (4aS, 8a S) -isoquinoline-3 (S) -carboxamide as a white solid; MS: γη / e 536 | M + H | ⁺ .

VII. Разтвор на 747 мг 2-[3(3)-(бензилоксиформамидо)-2(Р)хидрокси-4-фенилбутил-И-трет-бутилдекахидро-(4а ,8а )-изохинолин3(5)-карбоксамид в 40 мл етанол се хидрира върху паладий-въглерод при 20°С и при атмосферно налягане в продължение на 5 часа. Катализаторът се отстранява чрез филтруване и филтратът се изпарява, при което се получават 561 мг 2-|3(Ь)-амино-2(^)-хидрокси-4-фенилбутил|-Γί-трет-бутилдекахидро-(4а£, 8а S)-изохинолин-3(S)-карбоксамид като бежово оцветена твърда маса.VII. A solution of 747 mg of 2- [3 (3) - (benzyloxyformamido) -2 (R) hydroxy-4-phenylbutyl-1-tert-butyl decahydro- (4a, 8a) -isoquinoline (5) -carboxamide in 40 ml of ethanol is hydrogenated on palladium-carbon at 20 ° C and at atmospheric pressure for 5 hours. The catalyst was removed by filtration and the filtrate was evaporated, yielding 561 mg of 2- | 3 (b) -amino-2 (R) -hydroxy-4-phenylbutyl-t-butyl-decahydro- (4a, 8a S ) -isoquinoline-3 (S) -carboxamide as a beige colored solid.

ПРИМЕР 2.EXAMPLE 2.

Разтвор на 154 мг 2-[3(5)-£(1у-аспарагинил)аминоТ-2(1^:\)хидрокси-4-фенилбутил}-М-трет-бутилдекахидро-(4а5,8а^)-изохинолин3(5)-карбоксамид и 52 мг хиналдинова киселина в 6 мл сух тетрахидрофуран се охлаждат в смес от лед и сол. Прибавят се 41 мг хидрок17 сибензотриазол, 35 мг N-етилморфолин и 68 мг дициклохексилкарбодиимид и сместа се разбърква 64 часа. Разрежда се с етилацетат и се филтрува. Филтратът се промива с воден разтвор на натриев бикарбонат и с разтвор на натриев хлорид и се изпарява. Остатъкът се хроматографира върху силикагел, като за елуиращо средство се използва смес от дихлорометан/метанол (9:1). Получават се 50 мг Γϊ-третбутил-декахидро-2[2(^)-хидрокси-4-фенил-3(5)-[]13^-(2-хинолилкарбонил) -Ц-аспарагинилТ амино*] бутил] - (4а 5,8а5) -изохинолин-3 (S) -карбоксамид като бяла.твърда маса. Ms .: .m /е 671 |М+Н|⁺, (d⁴ сн₃он,4ООA solution of 154 mg of 2- [3 (5) - N (1y-asparaginyl) aminoT-2 (1 ^: 1) hydroxy-4-phenylbutyl} -N-tert-butyldecahydro- (4a5,8a) -isoquinoline3 (5) -carboxamide and 52 mg quinaldic acid in 6 ml of dry tetrahydrofuran are cooled in a mixture of ice and salt. 41 mg of hydroxyl 17 sibenzotriazole, 35 mg of N-ethylmorpholine and 68 mg of dicyclohexylcarbodiimide were added and the mixture was stirred for 64 hours. Dilute with ethyl acetate and filter. The filtrate was washed with aqueous sodium bicarbonate solution and sodium chloride solution and evaporated. The residue was chromatographed on silica gel using a mixture of dichloromethane / methanol (9: 1) as the eluting agent. 50 mg of N-tertbutyl-decahydro-2 [2 (S) -hydroxy-4-phenyl-3 (S) - [] 13 '- (2-quinolylcarbonyl) -N-asparaginylT amino *] butyl] - (4a) are obtained 5,8a5) -isoquinoline-3 (S) -carboxamide as a white solid. Ms .: .m / e 671 | M + H | ⁺ , (d ⁴ dream _{3 it} , 4OO

MHz); 8;52(1Н,т),8.18(1Н,т),8.14(1Н,т),8.02(lH,m),7.84(1Н,т),7.69 (1Н,т),7.18(2H,m),6.90(2H,m), 6.72(lH,m),4.93(lH,dd,Asn aCH J=6.6, 6.8),4.27(lH,m-CH₂CHCH(OH)- J-3.8, 3.8, 11.0), 3.89(lH,m,-CHCH(OH)CH₂J-7.2, 6.4, 3.8),3.06(lH,dd,Hl__J—12.0,3.0),3.02(lH,dd,PhCH(H)CHeqMHz); 8; 52 (1H, m), 8.18 (1H, m), 8.14 (1H, m), 8.02 (1H, m), 7.84 (1H, m), 7.69 (1H, m), 7.18 (2H, m) , 6.90 (2H, m), 6.72 (1H, m), 4.93 (1H, dd, Asn aCH J = 6.6, 6.8), 4.27 (1H, m-CH ₂ CHCH (OH) - J-3.8, 3.8, 11.0 ), 3.89 (1H, m, -CHCH (OH) CH ₂ J-7.2, 6.4, 3.8), 3.06 (1H, dd, Hl__J-12.0,3.0), 3.02 (1H, dd, PhCH (H) CHeq

J—14.0, 3.8),2.77(lH,dd, Asn β_χ J—15.6, 6.6), 2.68 (1H, dd,Asn, fi₂ J—15.6, 6.8), 2,68(1H, dd,PhCH(H)CH- J—14.0, 11.0) ;J-14.0, 3.8), 2.77 (1H, dd, Asn β _χ J-15.6, 6.6), 2.68 (1H, dd, Asn, fi ₂ J-15.6, 6.8), 2.68 (1H, dd, PhCH ( H) CH-J-14.0, 11.0);

ОКОЛО2.68(1H, dd,-CH(OH)CH(H)CHJ—12.0, 7.2),2.63(1H, dd,H3 J-ll.0,2.2), 2.22(1H, dd,-CH(OH)CH(H)NJ—12.0, 6.4) ,2.18(1H, dd, Hl J—12.0, 2.2) ,2.06(lH,m, H4 J—11.0, a X a XABOUT 2.68 (1H, dd, -CH (OH) CH (H) CHJ-12.0, 7.2), 2.63 (1H, dd, H3 J-l.0,2.2), 2.22 (1H, dd, -CH (OH) ) CH (H) NJ - 12.0, 6.4), 2.18 (1H, dd, Hl J - 12.0, 2.2), 2.06 (1H, m, H4 J - 11.0, and X a X

11.0),1.78(lH, m, 4a J, . -11.0, J, . - 0К0ЛО4, J, _o - ОКОЛО 4) ’ ’ 4a-4x ’ 4a-4eq ’ 4a-8a ^z 11.0), 1.78 (1H, m, 4a J, -11.0, J, - 0K0LO4, J, _o - ABOUT 4) '' 4a-4x '4a-4eq' 4a-8a ^z

l. 65 (1H, m, ^Jg_a_|_ax“2.2, Oga-leq“^3,0’ ^J8a-4a^{e около}> ^1,37 ^m, ^H4eq 2.2, ОКОЛО 4), 1.30 (9H, s, t- бутил ),l. 65 (1H, m, ^J g _a _ | _ax "2.2, Oga-leq" ^3.0 ' ^J 8a-4a ^{is about} > ^1.37 ^m, ^H4 eq 2.2, ABOUT 4), 1.30 (9H, s, t - butyl),

2.0-1.2 (8H, m)2.0-1.2 (8H, m)

Използваният като изходно съединение 2-£з($)-[^?(ь.^;аспарагинил)аминоП -2(Г\)-хидрокси-4-фенилбутил]-Ь1-трет-бутил-декахидро-(4аХ 8аЬ)-изохинолин-3(5)-карбоксамид се получява по следния начин.Used as the starting compound 2- £ 3 ($) - [ ^? The (b ^.; asparaginyl) amino-2- (R) -hydroxy-4-phenylbutyl] -1H-tert-butyl-decahydro- (4aX8a) -isoquinoline-3 (5) -carboxamide was prepared as follows.

Разтвор на 195 мг 2-^3(з)-^(М-(бензилоксикарбонил)-1_<7аспарагинил}амино}-2(ф-хидрокси-4-фенилбутил}-Н-трет-бутил-декахидро(4а?,8а S)-изохинолин-3(5)-карбоксамид в 20 мл етанол се хидрира при стайна температура и атмосферно налягане в продължение на 18 часа върху 10% паладий-въглерод. Катализаторът се отфилтрува и филтратът се изпарява под намалено налягане и се получават 154 мг 2-f3(S)L-аспарагинил) амино] -2 (R) -хидрокси-4-фенилбутил | - М-трет-бутилдекахидро- (4аЗ, 8а^) -изохинолин-3 ($>) -карбоксамид.A solution of 195 mg of 2- ^ 3 (S) - ^ (N- (benzyloxycarbonyl) -1 _<7 asparaginyl} amino} -2 (u-hydroxy-4-phenylbutyl} -N-tert-butyl-decahydro (4a ?, 8a S) -isoquinoline-3 (5) -carboxamide in 20 ml of ethanol was hydrogenated at room temperature and atmospheric pressure for 10 hours on 10% palladium carbon. The catalyst was filtered off and the filtrate was evaporated under reduced pressure to give 154 mg 2-f3 (S) L-asparaginyl) amino] -2 (R) -hydroxy-4-phenylbutyl-N-tert-butyldecahydro- (4a3, 8a) -isoquinoline-3 (S) -carboxamide.

ПРИМЕР 3EXAMPLE 3

Разтвор на 287 мг М-(2-хинолилкарбонил )-1^аспарагин и 401 мг 2-f3(S)-амино-2(R) -хидрокси-4-фенилбутил]_-Г1-трет-бутил-декахидро(4aS,8aS)-изохинолин-3(3)-карбоксамид, получен, както е описано в пример 1 ,в 3 мл тетрахидрофуран се охлажда до -10°С и се прибавят 163 мг 3-хидрокси-1,2,3-бензотриазин-4(ЗН)-он и 220 мг дициклохексилкарбодиимид. Сместа се разбърква при температура -10°С в продължение на 2 часа и още 16 часа при 20°С. Разрежда се с етилацетат и се филтрува. Филтратът се промива с наситен разтвор на натриев бикар бонат и на натриев хлорид и се изпарява. Остатъкът се хроматографира върху силикагел, като за елуиращ агент се използва 4%-ен разтвор на метанол в дихлорометан. Получават се 537 мг П-трет-бутилдекахидро-2[2(R) -хидрокси-4-фенил-З(S)-f[N-(2-хинолилкарбонил)-A solution of 287 mg of N- (2-quinolylcarbonyl) -1H-asparagine and 401 mg of 2-f3 (S) -amino-2 (R) -hydroxy-4-phenylbutyl] -N-tert-butyl-decahydro (4aS, 8aS) -isoquinoline-3 (3) -carboxamide, obtained as described in Example 1, was cooled to -10 ° C in 3 ml of tetrahydrofuran and 163 mg of 3-hydroxy-1,2,3-benzotriazine-4 was added (3H) -one and 220 mg of dicyclohexylcarbodiimide. The mixture was stirred at -10 ° C for 2 hours and another 16 hours at 20 ° C. Dilute with ethyl acetate and filter. The filtrate was washed with saturated sodium bicarbonate and sodium chloride solution and evaporated. The residue was chromatographed on silica gel using a 4% solution of methanol in dichloromethane as the eluent. 537 mg of N-tert-butyldecahydro-2 [2 (R) -hydroxy-4-phenyl-3 (S) -f [N- (2-quinolylcarbonyl) -

I-аспарагинил)амино]бутил]-(4aS,8а S) -изохинолин-3-(S)-карбоксамид, който е идентичен със съединението, получено в точка А на пример 2.I-asparaginyl) amino] butyl] - (4aS, 8a S) -isoquinoline-3- (S) -carboxamide, which is identical to the compound obtained in point A of Example 2.

Използваният като изходен продукт Ь1-(2-хитолинилкарбонил)-Used as the starting material b1- (2-chitolinylcarbonyl) -

I-аспарагин се получава по следния начин.I-asparagine is prepared as follows.

Смес от 540 мг хиналдинова киселина сукцинимиден естер иMixture of 540 mg quinaldic acid succinimide ester and

300 мг I-аспарагин монохидрат в 2 мл диметилформамид се разбъркват при 20°С 96 часа. Разтворителят се отстранява чрез изпаряване, при което се получава бял твърд остатък, който се разбърква енергично в 10 мл дихлорометан, филтрува се и се промива с дихлорометан. Получават се 431 мг N-(2-хинолилкарбонил)-1о-аспарагин като бяла твърда маса. М5 : ил/е 288 |М+Н|⁺.300 mg of I-asparagine monohydrate in 2 ml of dimethylformamide were stirred at 20 ° C for 96 hours. The solvent was removed by evaporation to give a white solid which was vigorously stirred in 10 ml of dichloromethane, filtered and washed with dichloromethane. Obtained 431 mg of N- (2-quinolylcarbonyl) -1o-asparagine as a white solid. M5: m / e 288 | M + H | ⁺ .

Следващият пример пояснява получаването на фармацевтичен препарат, съдържащ като активно вещество съединение с формула I или негова фармацевтично приемлива киселинно-адиционна сол.The following example illustrates the preparation of a pharmaceutical composition comprising as an active substance a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable acid addition salt thereof.

ПРИМЕР АEXAMPLE A

Воден разтвор на активното вещество се филтрува стерилно и се смесва при сагряване със стерилен желатинов разтвор, който съдържа фенол като консервиращо средство. Използват се такива количества, че 1.00 мл от получения разтвор да съдържа 3.0 мг активно вещество, 150.0 мг желатин, 4.7 мг фенол и дестилирана вода до 1.0 мл. Сместа се пълни във флакони с обем 1.0 мл при асептични условия.The aqueous solution of the active substance is filtered sterile and mixed under heating with a sterile gelatin solution containing phenol as a preservative. Amounts are used such that 1.00 ml of the solution obtained contains 3.0 mg of active substance, 150.0 mg of gelatin, 4.7 mg of phenol and distilled water to 1.0 ml. The mixture was filled into 1.0 ml vials under aseptic conditions.

Claims

Patent Claims

A compound of formula wherein it is benzyloxycarbonyl or 2-quinolylcarbonyl, and the pharmaceutically acceptable acid addition salts thereof.

A compound according to claim 1 which is N-tertbutyl-decahydro-2 (2 (-hydroxy-4-phenyl-3 (S) -FQM - (2-quinolylcarbonyl) - N-asparaginyl] amino | butyl) - (4a) , 8aS) -isoquinoline-3 (5) carboxamide.

3. A compound according to claim 1, which is N-tertbutyl-decahydro-212 (RJ-hydroxy-4-phenyl-3 (S) - QN-benzyloxycarbonyl) -N-asparaginylDaminoDbutyl] - (4aS, 8a) -isoquinoline-3 (S) carboxamide.

4. A compound of formula

5. A compound of formula

A pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a compound of formula wherein P is benzyloxycarbonyl or 2-quinolylcarbonyl, or a pharmaceutically acceptable acid addition salt thereof, and a therapeutically inert carrier.

7. A pharmaceutical composition according to claim 6, wherein in formula I, R is benzyloxycarbonyl.

A pharmaceutical composition according to claim 6, wherein in formula I 1 represents 2-quinolylcarbonyl.

Pharmaceutical composition according to claim 6, characterized in that it contains a compound of formula I in an amount sufficient to treat viral infections.

10. A pharmaceutical composition according to claim 6, characterized in that it contains a compound of formula I in an amount of from about 3 mg to about 3000 mg.

A pharmaceutical composition according to claim 10, wherein the compound of formula I is in an amount of from about 10 mg to about 1000 mg.

Pharmaceutical composition according to claim 6, characterized in that it is formulated as separate dosage units.

A pharmaceutical composition according to claim 12, wherein the compound of formula I is in an amount of from about 10 mg to about 1000 mg.

Pharmaceutical composition according to claim 12, characterized in that the individual dosage units are tablets, film tablets, dragees, hard-gelatin capsules, soft gelatin capsules, solutions, emulsions, suspensions, syrups, sprays or suppositories.

15. A method of treating mammals infected with viruses, wherein the compound of formula is administered is benzyloxycarbonyl or 2-quinolylcarbonyl, or in which a pharmaceutically acceptable acid addition salt thereof is present in an amount effective for treating viral infections.

A method according to claim

15, wherein a compound of formula is administered

I wherein R is benzyloxycarbonyl.

A method according to claim

15, wherein a compound of formula is administered

I, in which R is 2-quinolylcarbonyl.