BG60339B2

BG60339B2 - Производни на l-пролина като антихипертензивни средства и фармацевтични състави

Info

Publication number: BG60339B2
Application number: BG096110A
Authority: BG
Inventors: Elbert Harris; Arthur Patchett; Edward Tristram; Matthew Wyvratt
Original assignee: Merck & Co. Inc.
Priority date: 1981-02-17
Filing date: 1992-03-19
Publication date: 1994-07-25
Also published as: MX173907B; MX9203483A

Abstract

Новите съединения намират приложение в медицината като антихипертензивни средства. Получени са група нови карбоксиалкилни дипептиди и техните производни, създадени са фармацевтични състави и методи за лечение на високо кръвно налягане. 82 претенции

Description

Известни са заместени ацилни производни на аминокиселини, които са полезни като инхибитори на ангиотензиипревръщания ензим /1/ и /2/ по-специално тези съединения са меркаптозаместени ацил аминокиселини и техните производни включват ефективното в клинични условия антихилертензивно съединение каптоприл или 0-3-меркапто-2-метилпропаноил-1-пролин.

Известните от нивото на техниката съединения не са дипептидни производни, каквито са съединенията съгласно изобретението. Известните от нивото на техниката съединения съдържат както съществен заместител сулфхидрил или негово производно, докато тези съгласно настоящето изобретение не съдържат такъв. В допълнение дипептидните съединения съгласно изобретението са дипептиди, чиито N-краища носят карбоксиметилна група, която за предпочитане по-нотатък е заместена с метилна група. Карбоксилната група/и/ може също да бъде превърната в естерна, в амидна или в сол. В действителност съединенията съгласно изобретението са хибриди, образувани посредством съединяване на ./-аминокиселини с дипептиди с помощта на азот, който е общ за тези две частични структури. Такова структорно подреждане е рядкост в областта на синтетичните и природните пептиди и не е описано в меркаптоацилния тип функции в посочените два патента от известното ниво на техниката.

Известни са bj-карбоксиалканоил аминокиселини, които са полезни като инхибитори на антипиотензинпревръщащия ензим /3/. Тъй като съединенията съгласно изобретението са дипептидни производни, във формален смисъл, те могат да бъдат считани за сродни на някои от съединенията, описани в патент лит. източник /3/. Когато една от метиленовите групи е заместена с аминофункция, съгласно изобретението се наблюдава висока активнос на съединенията. Например предпочитаните съединения, съгласно изо бретението могат да се въвеждат в твърдо ниски дози - 2.5 мг дневно на пациент срещу най-ниските дози от порядъка на 1 мг на килограм тегло на ден от най-предпочитаните съединения,описани в лит. източник /з/_t което съответства на около 60 мг дневно на пациент, базирано на средното тегло на пациент - около 150 паунда.

Същност на изобретението

Изобретението в неговия вирок акспект се отнася до карбоксилни дипептиди и техните производни, които се прилагат като инхибитори на превръщания ензим и като антихипертензивни средства.. Съединенията съгласно изобретението могат да се включат в следната формула

0 II	?1	*з 1 ^J			^R5	0 И
R - С	- с - 1	NHCH ·	- С II	- N	-С - 1	С - Rg
	*2		0		*7

в която

R и Rg са еднакви или различни и означават хидрокси, нисш алкокси, нисш алкенилокси, динисшалкиламино нисш алкокси /диметиламиноетокси/, ациламино нисшалкокси /ацетиламиноетокси/, ацилокси нисш алкокси /пивалоилаксиметокси/, арилокси, такъв като фенокси, арилнисшалкокси, такъв като бензилокси, заместен арилокси или заместен арилнисшалкокси, при което заместителят е метил, халоген или метокси, амино, нисшалкиламино, динисшалкиламино, хидроксиамино, арилнисшалкиламино, такъв като бензиламин;

R.J означава водород, алкил, съдържащ от 1 до 20 въглеродни атома, който може да има разклонена или циклична верига и вклюючва ненаситени /такива като алил/ алкилни групи, заместен нисш алкил, при което заместителят може да бъде халоген, хидрокси, нисш алкокси, арилокси, например фенокси, амино, динисшалкиламино, ациламино, например ацетамидо и бензамидо, ариламино, гуанидино, имидазолил, индолил, меркапто, нисш алкилтио, арилтио, например фенилтио, карбокси, или карбоксамидо, карбоксинисшалкокси, арил, като фенил или нафтил, заместен арил като фенил, при което заместителят може да бъде нисш алкил, нисш алкокси или халоген, арилнисшалкил, арилнисшалкенил, хетероарилнисш алкил или хетероарил нисш алкенил, като бензил, стирил или индолилетил, заместен арилнисш алкил, заместен арил нисш алкенил, заместен хетероарил нисш алкил или заместен хетероарил нисш алкенил, при което заместителят/ите/ може /могат/ да бъде халоген, дихалоген, нисш алкил, хидрокси, нисш алкокси, амино, аминометил, ациламино/, ацетиламино или бензоиламино/, динисшалкил амино, нисш алкил амино, карбоксид, халонисш алкил, циано или сулфонамино група, арил нисш алкил, хетероарилнисш алкил, заместени е алкилната част с амино или ациламино /ацетиламино или бензоиламино/;

R? и R? са еднакви или различни и означават водород или нисш алкил;

К₃ означава водород, нисш алкил, фенил нисш алкил, аминометилфенил нисш алкил, хидрокси нисш алкил, ациламинонисш алкил/, като бензоиламин нисш алкил, ацетиламино нисш алкил, ацетиламино нисш алкил/, амино нисш алкил, диметиламин нисш алкил, халонисш алкил, гуанидино нисш алкил, имидазолил нисш алкил, индолил нисш алкил, меркапто нисш алкил, нисш алкилтио нисш алкил;

означава водород или нисш алкил;

R^ означава водород, нисш алкил, фенил, фенил нисш алкил, хидрокси фенил нисш алкил, хидроксинисш алкил, амино нисш алкил, гуанидинонисш алкил, имидазолил нисш алкил, индолил нисш алкил, меркапто нисш алкил, нисшалкилтио нисш алкил;

^R4 и R₅ ^могаткиленов мост, да бъдат свързани заедно и да образуват алсъдържащ от 2 до 4 въглеродни атома, алкиленов мост съдържащ от 2 до 3 въглеродни атома и един атом сяра, алкиленов мост, съдържащ 3 или 4 въглеродни атома съдържащ двойна връзка или алкиленов мост, заместен, както ло-горе с хидрокси, нисшалкокси, нисшалкил или динисшалкил; и техните фармацевтично приемливи соли.

Нисшата алкилна или нисшата алкенилна група с изключение на случаите, когато е посочено друго, представлява някои от множеството включващо въглеводородни радикали с права или разклонена верига, съдържаща 1 до 6 въглеродни атома, например метил, етил, пропил, изопропил, терц.-бутил, пентил, изопентил, хексил или винил, алил, бутенил и др. Аралкилните групи се поясняват с всяка от посочените по-горе, която съдържа от 1 до четири въглеродни атома и в алкилната си част и включват например бензил, р-метокси бензил и др. Халоген означава хлор, бром, йод или флуор. Терминът арил, където се появява освен ако не е отбелязано нещо друго, означава фенил или нафтвл. Хетероарилни групи включват например пиридил, тиенил, индолил, бензтиенил, фурил, имидазоил и тиазолил.

R], R₃ и R₅ заместените нисв-алкилни части се поясняват със следните групи с формулите

H0-CH₂-,H5-CH₂-^H,H₂N-/CH₂/₄-, *СН₃-5-/СН₂/₂-,Н₂М-/СН₂/₃ -,

NH

H₂N-C -NH- /СН₂/₃ - и други.

Когато R₄ и R^ са свързани чрез въглероден атом и азотен атом, към които са прикрепени, те образуват четири до шестчленен пръстен, който може да съдържа серен атом или двойна връзка. Предпочитаните пръстени имат следните формули в които У означава метиленова група, серен атом или СН0СН₃. Предпочитани са онези съединения от общата формула /I/, в които R и Rg могат независимо един от друг да означават хидрокси, нисш алкокси, нисш алкенилокси, арилнисвалкокси, амино, динисш алкиламино нисш алкокси, ациламино нисш алкокси, оцилокси нисш алконси, като заместителят е метил, хало или м метокси;

R₂ и означават водород;

1?₃ означава нисш алкил, амино нисш алкил, имидазоилнисш алкил, хало нисш алкил;

& са свързани и образуват пръстени за предпочитане, като посочените по-горе, в които У означава СН₂, сяра или

СН-ОСН₃; 1Ц има посочените по-горе значения.

Още по-предпочитани са съединенията с общата формула /I/, при които R<| означава алкил, съдържащ от един до осем въглеродни атома, заместен нисш алкил, при което алкилната група съдържа един до пет въглеродни атома и заместителят е амино, алкилтио, арилтио, арилокси или ариламино, арилалкил или хетероарилалкил, като алкилната част има един до три въглеродни атома, като фенилетил или индолилетил или заместен арилнисшалкял /фенил нисш алкил или контил нисш алкил/ и заместен хетероарилнисш алкил, като алкилната група има един до три въглеродни атома и заместителят/ите/ са халоген, два халогенни атома, амино, аминоалкил, хидрокси, нисш алкокси или нисш алкил. Най-предпочитаните съединения с общата формула /I/ са онези, в които

R и Rg означават хидрокси, нисшалкокси, аралкилокси;

R₂ и R₇ означават водород;

R₃ означава метил или амино нисш алкил;

R| и Κς са свързани през въглероден и азотен атом до образуването на пролин, 4-тиапролин или 4-метоксипролин;

R^ означава алкил, съдържащ от 1 до 8 въглеродни атома, заместен нисш алкил, като алкилната група съдържа един до пет въглеродни атома и заместителят е амино, арилтио или арилокси, арилалкил или хетероарилалкил, като алкалната част съдържа един до три въглеродни атома, такива като фенетил или индолилетил или заместен арил_алкил /фенил/ нисш алкил или нафтил нисш алкил/ и заместен хетероарилалкил, като заместителят-алнил има един до три въглеродни атома и е заместен с един или два заместителя като халоген, дихалоген, амино, аминоалкил, хидрокси, нисш алкокси или нисш алкил.

В предпочитаните, особено предпочитаните и най-предпочитаните' съединения съще се включват и техните фармацивтично приемливи соли и са пояснени със следващите съединения: N-/1/5 /-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L -пролин; N-/1/6/-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L -пролин и техните соли;

N-/I/5 /-етоксикарбонил-4-метилпентил/-Ь -аланил-L -пролин; Ь1-/1-карбокси-5-аминопентил/-Ь -аланил-L -пролин;

-/I/5/-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -лизил-L -пролин;

N-Z, /1/5 /-етоксикарбокинл-3-фенилпропил/-Ь -пролин; N-/ /1/5 /-карбокси-3-/3-индолил/пропил/-Ь-лизил-Ь -пролин; N-Z /1/5 /-карбокси-3-/4-хлорфенил/-пропил/Ь -лизил-L пролин;

N-Z /1/6 /-карбокси-2-фенилтиоетил/-Ь -лизил-L -пролин; N-/ -/I/S/-карбокси-3-/4-хлорфенил/-лропил/-Ь -лизил-1 4/ -метоксипропил;

Ν-Ζ /1/5 /-карбокси-5-аминопентил/-Ь -лизил-Ь -пролин: Етил N-/I/5 /-етоксикарбонил/-3-фенилпропил/-Ь -аланил- Lпролинат хидрохлорид и други.

Съединенията с формула /I/ и предпочитаните подгрупи могат да бъдат получени по един или повече метода, избрани от описаните по-далу.

0 й	^R1 ^R3	0 II	%	^R5	0 п
R - С -	С -NHC - 1	С -	• N	- С - 1	С - R₆
	r₂			^7

Както е показано в примерите, реактивни групи, които не са включени в конйнзациите като амино, карбокси, меркапто и др., могат да бъдат защитени предварително по някои от стандартните методи, използвани в пептидната химия, преди реакциите на присъедкгняване и след това да бъдат освободени до получаването на желаните продукти.

Метод I. Начин I /R₂ означава Н/

OR, R_ 0 R_£ Re 0

I ¹ I ³ 11 I * I ⁵ ll

R - C - C=0 ♦ H₂NC -C-N-C-C-Rg NaBHgCHH /I/ ^R7 /II/ /III/

Кето киселина /или естер, амид или хидроксамова коселина/ /II/ се кондензира с дипептид /III/ във воден разтвор, оптимално при условия близки до неутралните, или в подходящ органичен разтворител /например СН₃СК/ в присъствието на натриев цианоборхидрид до получаването на /I/R₂ означава Н/. В даден случай междинната шифова база, енамин или аминол може да бъде каталитично редуцирана до съединение с формула /I/ например с помощта на водород в присъствието на 10%-ен паладий на въглен или с Реней-никел. Отношението на получените диастереомерни съединения може да се променя посредством избора на катализатор.

Ако R и R₆ са защитени карбокси групи, като алкокси или бензилокси или други подобни, те могат да бъдат превърнати с помощта на известни методи като хидролиза или хидриране до продукт с формула /I/, в която I? и /или Rg означават хидрокси. това важи и при всичките следващи методи, в които съществува подобна ситуация.

В даден случай съединение с формула /II/ може да кондензира с аминокиселина с формула /1У/ % 0 R«R ³ - μ 1¹1

H₂NCH-C00H * II ПаВН₃СЦ R - С -СНННСНСООН /И//У/ при същите условия до получаване на аминокиселина Ϊ. Последващо присъединяване по известни методи към аминокиселинно производно с формула ΪΙ води до получаване на съединение с формула /I/.

Известните методи осигуряват реактивните групи със защита по време на реакции на присъединяване, например с N-формил, N-терц-бутоксикарбонил и N-карбобензилокси групи, последвано от тяхното отстраняване за получаването на продукта I. Нещо повече, заместителят R може да включва естерни групи, които могат да се отстраняват, като бензил, етил или терц-бутил. Кондензационните средства при този синтетичен път са обикновено използваните в пептидната химия, като дициклохиксилкарбодиимид /ДСС/ или дифинилфосфорил озид /ДППА/ или съединение с формула У може да бъде активирано чрез междинни активни естери подобни на произхождащите от 1-хидроксибензотриазол.

/ДДС/ /I/ *7 /¥1/ /ДДС/ = /ДППА/=

Дизиклохексилкарбодиимид Дифенилфосфорил азид

Начин /¥П/ /¥Ш/

Аминокиселина /или естер, амид или хидроксамова киселина/ ¥11 взаимодейства с кетон ¥111 при условията, описвани по-горе.

Начин I за получаване на съединение с формула I.

В даден случай синтезата може да се осъществи на етапи посредством кондензация на съединение с формула ¥11 с кето киселина с формула IX

R, 0 R.R

I II I

YII * 0=С - COOH . R-C - C - NH - CH - COOH

--------------->I ^R2 /IX//X/ до получаването на аминокиселината c формула X. По известни методи, както е посочено по-горе в Опит /начин/ 1, съединение с формула X може да се присъедини към производното на аминокиселина с формула ¥1 до получаването на съединение с формула I.

HN /П/ >

п -Ο/I/ случая, когато носи Jj -аминозаместител, карбонилната и аминогрупите могат да бъдат защитени под формата на β-Лактамна функция·

Модел

2. Начин I ^R1 *1 ^R3 ^{0 R}4 ^RS

I ’ ) il < I

-C-COR —* ROCCNHCH-C-N-C-CORg ^R?

ι

R₂

I

R₂ /I/ /XI/ йод или илкил сулфонилокси ияя арил сулфо/III/

X означава хлор, бром, нилокси. Дипептидът с формула III се алкилира с подходяща X халокиселина /под формата на естер или амид/ или с <Z -гулфонилокйкоселина /естер или амид/ с формула XI при алкални условия във вода или в органичен разтворител.

В даден случай синтезът моме да се осъществи на етапи. ^R3 /

Н₂К1СН-С00Н /И/ /П/

I ¹ \| ³	I⁵	Ri R, 0 Ri Rc I¹ i³ // I⁴ P
RC0-C-NH-CH-C0H+HN- 1	-C-COR_g	——>RCO-C-NH-CH-C -N-C-C0R_g
е₂	*7	^R2

/X/ /VI/ /I/

X означава хл0, йод, алкилсулфонилокси или арилсулфонилокси.

Аминокиселината с формула IV се алкилира с-халокиселина /естер или амид/ или с (/__Су_Лф_{0НИЛ0КСИ} киселина /естер или амид с формула XI при алкални условия до получаването на съединение с формула X. Последното се кондензира по известните методи, както е посочено по-горе в Начин I, с аминокиселината /естер или амид/ с формула ΪΙ до получаването на съединение с формула I.

Редуктивното отцепване на бензиловата група от съответния естер с формула I, в която R_g означава бензилокси и R означава алкокси, води до получаване на съединения с формула I, в която Р означава алкокси и R_g означава хидрокси и в която R_g означава алкокси и R е бензилокси, довежда до получаването на съединения с формула I, в която R означава хидрокси и R_g означава алкокси.

Начин 2 ?1 Ϊ Г5 J1 fs Ϊ

R-C-C-NH,*XCH-C-N-C-COR_e----4RCC-NH-CH-C I ² I ⁶ 11' о r₂ r₇ о r₂

ΪΙΙ

XII

X означава хлор, бром, йод, сулфонилокси или арил сулфонилокси.

Аминокиселината или нейното производно с формула ΪΙΙ се

- 13 алкилира с подходящо заместена^ -халоацетил или 7 -сулфонилокси ацетил амино киселина с формула XII /за предпочитане с Rg, което е различно от хидрокси/ при алкални условия във вода или в друг разтворител до получаването на съединения с формула I.

В даден случай синтезът може да се осъществи в етапи чрез кондензиране на аминокиселинния естер с формула ΪΙΙ със заместена

			*3 1 ^J			I¹	^R3 1 ³
RCO -	с -	nh₂ +	X-CH-COOH	—A	RCO	-c - i	NH -CH - COOH
	r₂					r₂
III			XIII				X
	*4	^R5		*1		R₃0	r₅0
		1		I			1 ί ii
X +	HN-	•CH-COR₆	_—}	RC-C- II I	NH-	-c-c	- N-C-C-fb-
				o r₂			*7
	ΪΙ					I

£ - халсоцетна киселина или £ -сулфонилокси оцетна киселина с формула XIII до получаването на междинния продукт с формула X. По известни методи, описвани е Начин I, съединение с формула X може да взаимодейства с аминокиселина с формула ΪΙ или нейно производно до получаването на съединение с формула I. При описаните по-горе методи аралкилокси част може да бъде използвана за единия или за двата заместителя R и Rg до получаването на естер или диестер.

Както е описано по-горе, защитните групи могат да бъдат отстранени по известни методи.

i

Изходните продукти, необходими за осъществяването на описаните по-горе процеси, са известни от литературата съединения или могат да бъдат получени по известни методи от известни изходни вещества.

В съединенията с обща формула I въглеродните атоми, към които са прикрепени Rp R^ и R^, могат да бъдат асиметрични. Следователно съединенията съществуват в диастереоизомерни форми или като смеси от тях. Описаните по-горе синтези могат да използват рацемати, енантиомери или диастереоизомери като изходни материали. Когато в резултат на осъществените синтези се получават диастереоизомерии съединения, последните могат да бъдат разделени чрез обичаните хромотографски методи или чрез известните методи на фракционна кристализация.

Макар че аминокиселинните структури, например

R-i а ’¹

R - С - С - NH-

I» с формула 1 обикновено се предпочитат в L - и б -конфигурации, диастереоизомерите, съдържащи D -аминокиселини имат активност, която зависи от техните структури и имат предимство по отношение на метаболитната устойчивост ϊπ Ϊ1Υ0 и затова могат да се използват в смес или като чисти диастереоизомерни съединения.

Съединенията съгласно изобретението образуват соли с различни неорганични и органични основи, които са включени също в обхвата на изобретението. Такива соли включват амониевите соли, солите с алкални метали, като натриеви и калиеви соли, соли с алкалоземни метали, като калциеви или магнезиеви соли с органични бази, например дициклохексиламинови соли, N-метил-]) -глюкамин, соли с аминониселини, като аргинин, лизин и др. подобни. Също могат да бъдат получени и соли с неорганични или с органични киселини, например със солна, бромоводородна, сярна, фосфорна, метан-сулфонова, толуолсулфонова, малеинова, фумарова, камфорсулфонова. Нетоксичните фармацевтично приемливи соли се предпочитат, макар че други соли също могат да бъдат полезни, например при изолиране или пречистване на продуктите.

Солите могат да се получават по известните методи чрез взаимодействие но свободната база на продукта с един или два от подходяща база или киселина в разтворител или среда, в която получената сол е неразтворима, или в разтворител, като вода, който след това се отстранява чрез дестилация във вакуум или чрез замразяване или чрез обмен на катиони на съществуваща сол с катион на подходяща катион-обменна смола.

Съединенията съгласно изобретението инхибират ангиотензин повръщащия ензим и така блокират превръщането на декапентида ангиотензин с формула I в ангиотензин с формула II, който е силно стимулиращо вещество /повишаващо кръвното налягане/» така понижаването на кръвното налягане може да е резултат от инхибирането на неговата биосинтеза, по-специално при животни и хора, чието повишено кръвно налягане е свързано с образуването на ангиотензин с формула II. Нещо повече, превръщащият ензим разгражда вазодепресиращото вещество брЦикинин. Затова инхибитори на ангиотензин превръщания ензим, могат да понижават кръвното налягане също и чрез потенциране на брадикинина. въпреки, че относителното значение на тези и други възможни механизми предстои да бъде установено, инхибиторите на ангиотензин превръщащия ензим са ефективни антихипертензивни средства при множество модели животни и са полезни и в клинични условия, например при много пациенти с бъбречно-съдово, злокачествено и основно /есенциално/ повишено кръвно налягане /4/.

Оценката на инхибиторите на превръщащия ензим се осъществява чрез in vitro анализ на инхибирпнето на ензима. Например метода на Y. Piquilloud, A. Reinharz и М. Roth /5/, при който се измерва хидролизата на карбобензилоксифенилаланилхистидиллевцин. Може да се направи in vivo оценяване, например с плъхове с нормално налягане, имунизирани с ангиотензин I по методиката на J. R. Weeks и J. A. Jones /6/ или при плъхове с повишено кръвно налягане с бъбречен произход, такива като тези на о. Koletsky /7/.

Така съединенията съгласно изобретението са полезни при лечение на повишено кръвно налягане. Прилагат се и при лечение на акутна или хронична конгестивна сърдечна недостатъчност, при лечение на вторичен хипералдостеронизъм, първично и вторично повишено белодробно кръвно налягане, при бъбречна недостатъчност, при повишено кръвно налягане в бъбречните съдове и при лечение на сърдечносъдови неразположения, като мигрена и болестта на Рейнолд. Приложението на съединенията, съгласно изобретението за посочените и други подобни заболявания е очевидно за специалистите.

За лечение на повишено кръвно налягане и клиничните състояния, посочени по-горе, съединенията съгласно изобретението могат да се прилагат под формата на таблетки, капсули или еликсири за орална употреба, супозитории за ректално

- 17 приложение, стерилни разтвори или суспензии за парентерално или иУрамускулно приложение и др. Съединенията съгласно изобретението могат да бъдат въведени на пациентите /животни или хора/ при нужда от такова лечение в дози, които да осигурят максимална фармацевтична ефикасност. Макар че дозите варират в зависимост от естеството и сериозността на заболяването, от теглото на пациента, от специалната диета, от съпътстващите заболявания и др. Фактори, с които специалистът в тясната област трябва да съобрази, дозата обикновено е от 1 до 1000 мг за пациент дневно и може да се дава еднократно или на няколко приема. За предпочитане дозата е от около 2,5 до около 250 мг на пациент /дневно, а още по-предпочитана е дозата от около 2.5 до около 75 мг за пациент на ден. Съединенията съгласно изобретението могат също да се въвеждат в комбинация с други антихипертензивни средства и/или диуретици. Например съединенията съгласно изобретението могат да бъдат давани в комбинация със съединения, като амилорид, атенолол, бендрофлуметиазид, хлороталидон, хлоротиазид, хлонидин, криптенамин ацетати и криптенамин танати, дезерпидин, диазоксид, гуанетиден суулфат, хидралазин хидрохлорид, хидрохлоротиазид, хидрофлуметиазид, металазон, метопрололтартар, метилклотиазид, метилдопа, метилдонат хидрохлорид, миноксидил, пергилин хидрохлорид, празосин, пропранолол, rauvolfia serpentina, ресцинамин, резерпин, натриев нитропрусид, спиронолактон, тимолол, трихлорметиазид, триметофан, камзилат, бензтиазид, кинет азон, триамтерен, ацетазоламид, аминофилин, циклотиазид, етакринова киселина, фурозомид, меретоксилин прокаин, натриев етакри нат и др. както и смеси или комбинации от тях.

Обикновено отделните дневни дози за тези комбинации могат да са около една пета от минимално препоръчваната клинична доза до максимално препоръчваната доза за случаи, когато се

- 18 дават поотделно.

За пояснение на тези комбинации едно от антихипертензивните средства съгласно изобретението, клинически ефективно в дози от 2.5 - 250 мг/дневно, може ефикасно да бъде комбинирано в количество от 0.5-250 мг/ден със следните съединения в посочените дневни дози - хидрохлорвтиазид /15-200 мг/, хлоротиазид /125-2000 мг/, етокринова киселина /15-200 мг/, амилорид /5-20 мг/, фуроземид /5-80 мг/, пропранол /20-480 мг/, тимолол /5-60 мг/ и метилдопа /65-2000 мг/. Тройни лек_арствени комбинации на хидрохлоротиазид /15-200 мг/ и амилорид /5-20 мг/ и инхибитор на превръщания ензим съгласно изобретението /3-200 мг/ или хидрохлоротиазид/ 15-200 мг/ и тимолол /5-60 мг/ и инхибитор на превръщащия ензим съгласно изобретението /0.5250 мг/ са ефективнв комбинации за контрол на кръвното налягане на пациенти с повишено кръвно налягане. Тези граници в дозите могат да бъдат съобразени с индивидуалната основа за получаване на разделени на отделни приеми дневни дози и, както е отбелязано по-горе, дозата зависи от естеството и сериозността на заболяването, теглото на пациента, от специалните диети и от други фактори.

Обикновено тези комбинации могат да бъдат формулирани във фармацевтични форми, както се описва по-нататък.

Около 1 до 100 мг от съединение или смес от съединение с формула I или техни фармацевтично приемливи соли се смесват с физиологично приемлив носител, ексципиент, свързващо вещество, консервиращо средство, стабилизатор, вещество за придаване на вку_с и т.н. в единична доза форма, както се нарича по възприетата фармацевтична практика. Количеството на активното вещество в тези състави или препарати е такова, че да осигури подходящо дозиране в посочените по-горе дозови граници.

Примери за спомагателни средства, които могат да бъдат включени в таблетките, капсулите и др. са следващите вещества: свързващо средство, като трагакант, царевично нишесте, желатин; като ексципиент, като микрокристална целулоза; като диспергиращо средство, като царевично нишесте, предварително желатинирано нишесте, алгинова киселина и др.; като омасляващо средство-магнезиев стеарат, като подслаждащо средство като захароза, лактоза или захарин, като вещества за придаване на вкус - пеперминт, масло от уинтъргриин или череши. Когато дозата е формулирана в капсула, може да съдържа в добавка към изброените материали течен носител, като животинска мознина. Много други материали също могат да присъстват като покрития или включени по друг начин модифицираната крайна форма дозажната единица. Например таблетките могат да бъдат покрити с шеллак и/или захар. Сироп или еликсир може да съдържа а активното съединение, захароза като подслаждащо средство, метил и пропил парабени, като консервиращи средства, багрило и за придаване на вкус черешова или портокалова есенция.

Стерилни състави за инжекции могат да бъдат получени по известните във фармацевтичната практика методи чрез разтваряне или суспендиране на активното вещество в носител, като вода за инжекции, е^ествени растителни масла, подобни на сусамово масло, кокосово масло, фастъчено масло, памучно масло и др. или синтетични мастни носители, като етил олеат или други подобни. При необходимост могат да бъдат включени буфери, консервиращи средства, антиоксиданти и други подобни вещества.

- 20 Следващите примери поясняват изобретението, като представляват по-специално предпочитаните изпълнения. Предпочитаните диастереизомери са изолирани чрез колонна хроматография или чрез фракционна крастализация.

Пример 1. И-/1-карбокси-2-феиилетил/-Ь -аланил-L пролин.

Смес от фенилпрогроздова ниселина /753 мг/ и L -аланил-L пролин /171 мг/ в смес от вода и метанол с pH, нагласено на 6.8, се обработва с натриев цианоборхидрид /173 мг/ при стайна температура до завършване на реакцията. Продуктът се абсорбира върху силна катионобменна смола и се елюира с 2%-ен пиридин във вода до получаването на 294 мг суров диастереомерен продукт; Н-/1-карбокси-2-фенилетил/-Ь -аланил-L -пролин. порция от този продукт се пречиства с помощта на гел филтриране /L Н-20/ за спектографски анализ. ЯМР спектърът показва широк синглет при 7.2, комплексна абсорбция от 3.0 до 4,6 мултиплет при 2.1 и двойна дублети при 1.5 ррм.

Пример 2. Ь1-/1-карбоксиетил/-Ь -аланил-L -пролин.

Разтвор на L -аланил-L -пролин /372 мг/ и пирогроздова киселина /881 мг/ във вода с pH, нагласено на 7, се обработва с 377 мг натриев борхидрид при стайна температура до завършване на реакцията. Продуктът се абсорбира върху силна йонообменна смола в кисела форма и след това се елюира с 2Х-ен разтвор на пиридин във вода. При сушене посредством замразяване се получават 472 мг К-/1-карбоксиетил/-Ь -аланил-L -пролин. ЯМРспектврът и масспектрограмата съответствуват на структурата. ЯМР спектърът сочи мултиплети, центрирани при 4,5; 3.7 и 22ррм и двойка дублети при 1.6 ррм.

- 21 Пример 3. Н-/>карбокси-2-циклохексилетил/-Ь -аланилL -пролин.

Обработват се З-циклохексил-2-оксопропионова киселина /циклохексилпирогроздена киселина//0.98 мг и L -аланил-L пролин /0.22 г/ с натриев цианоборхидрид /0.22 г/, както е описано по-горе. Получава се лека безцветна утайка от твърдо вещество М-/1-карбокси-2-циклохексилетил/-Ь -аланил-L пролин, 0.31 г. След пречистване с помощта на хроматография, масспектърът показва пикове при 340 /молекулни йона/, 322, 277, 249 и 226. ЯМР спектърът показва комплексна обсорбация в интервала от 4.8 до 3.6 и пикове при 2.2, 1.7 и 1.2 ррм.

Пример 4. Ь1-/1-карбокси-5-метилхексил/-Ь -аланил-L пролин.

Обработват се 6-метил-2-оксохентаноена киселина /0.90 г/ и L -аланил-L -пролин /0.21 г/ с натриев цианоборхидрид /0.21 г/ както е описано по-горе. Получава се бяло пухкаво вещество Ь1-/1-карбокси-5-метилхексил/-Ь -аланил-L -пролин, 0.24 г. След пречистване с помощта на хроматография масспектърът показва пик при 472 /дисилилилно производно/. ЯМР спектърът показва абсорбция центрирана при 4,5; 3.65; 2.0, 1.6, 1.3 и 0.85 ррм.

Пример 5. М-/1<-карбомси-3-метилбутил/-Ь -аланил-L·пролин.

Обработват се 4-метил-2-оксопентаноена киселина /1.29 г/ и L -аланил-L -пролин /0.32 г/ с натриев цианоборхидрид /0.32г/ по описания по-горе начин. Получава се пухкаво бяло твърди вещество Ь1-/Ι,-κарбокси-3-метилбутил/-L· -аланил-L-пролин /0.40 г/. Порция от него се пречиства чрез хромотография. Масспектърът показва пик при 429 /молекулен йон на дисилилно

- 22 производно минус метил, 444-15/. ЯМР спектърът показва резонанси центрирани при 4.4, З.б, 2.1, 1.6 и при 0.95 ррм.

Пример б. 1Ч-/1-карбонсипропил/-Ь -аланил-L· -пролин.

Обработват се 2-оксомаслена киселина /1.02 г/ и L -аланилL -пролин /0.37 г/ с натриев цианобирхидрид /0.38 г/, както е описано по-горе. Суровият Ь1-Ь-карбоксипропил-1/ -аланил-L пролин се получава с добив /0.42 г/. Част от него се пречиства посредством хроматография за спектрален анализ. Масспектърът показва изразени пикове при 254/М-18/ и 210 /М-62/. ЯМР спектърът показва комплексна абсорбция от 4.5 до 3.4 мултиплет, центриран при 2.0 и метил резонанен, центрирани при 1.55 и при 0.95 ррм.

Пример 7. М-/1-карбокси-2-метилпропил/-Ь -аланил-L пролин.

Смес от З-метил-2-оксомаслена ниселина, като натриева сол /1.46 г/, и L -аланил-L -пролин /0.40 г/ се обработват с натриев цианоборхидрид /0.41 г/ по описания по-горе начин. Суровият М-/Ь-карбокси-2-метилпропил/-Ь -аланил-L -пролин се получава при елюиране от йонообменна смола /0.45 г/. Продуктът се топи при 131-142°С. ЯМР спектърът сочи комплексна абсорбция в областта от 4.6 до 3.3 широк мултиплет, центриран при 2.2 и дублети при 1.65 и при 1.1 ррм.

Пример 8. N-/1.3-дикарбоксипропил/^ -аланил-L -пролин.

2-оксоглутарова киселина /1.46 г/ и L -аланил-L -пролин /0.37 г/ се обработват с натриев цианоборхидрид /0.38 г/, както е описано по-горе. Получава се суров N-/1.З-динарбоксипрон пил/-Ь -аланил-L -пролин /0.47 г/ с т.т. 140-160°С. Масспектърът на силилирания материал показва Йон при 517 м/ е, еквивалентен на молекулния йон за трисилилното производно минус метил

- 23 /532-15/. ЯМР спектърът потвърждава структурата. Метил резонансите са центрирани при 1.4 ррм.

Пример 9. N-/I.4-дикарбоксибутил/-Ь -аланил-L -пролин.

Обработват се 2-оксоадипинова киселина /1.74 г/ и L аланил-L -пролин /0.41 г/ с натриев цианоборхидрид /0.42 г/, както е описано по-горе. Получава се суров П-/1,4-дикарбоксибутил/-Ь -аланил-L -пролин /0.35 г/ с т.т. 106-132°С. Найвисокият пик на масспектърът е 312, съответстващ на молекулния йон минус вода. Метил резонансите в ЯМР спектър показват двойка дублети, центрирани при 1.55 ррм.

Пример 10. Ь1-/Ь-карбокси-3-метилбутил/-Ъ -аланил-L изолевцин.

Разтвор на L -аланил-L -изолевцин /150 мг/ и 4-метил-2оксопентанова киселина, като натариева сол /564 мг/ във вода с РН, нагласено на 7, се обработва със 140 мг натриев цианоборхидрид при стайна температура в продължение на няколко дни. Реакцията се прекъсва със силно кисела йонообменна смола, прибавена към колона със същата смола и елюирана с 2Х-ен воден разтвор на пиридин. При сушене чрез замразяване се получават 200 мг /84.9Х/ от бяло пухкаво вещество, N-/Iкарбокси-3-метилбутил/-Ь -аланил-L -изолевцин. Масспектърът показва пикове при 460 за дисилилираното производство и при 445 за дисилилния молекулен йон минус метил /460-15/. ЯМР спектърът показва широк дублет, центриран при 0.95 ррм, комплексна абсорбация в границите от 1.2 до 1.8 ррм и широк слаб синглет при 3.7 ррм.

Пример 11. И-/1-нарбокси-3-метилбутил/-Ь -аланил-L фенилаланин.

i

- 24 Разтвор на L -алонил-L· -фенилаланин /150 мг/ и 4-метил-

2-оксвпентаноена киселина, натриева сол /483 мг/ във вода с pH, нагласено на 7, се обработва с 120 мг натриев цианоборхидрид при стайна температура за няколко дни. Реакцията се прекъсва с Dowex 50 (Н+), прибавена към колана със същата смола и елюирана с 2?-ен воден разтвор на пиридин. Чрез сушене посредством замразяване се получават 197 мг/88.7%/ бяло пухкаво вещество, К-/1>-карбокси-3-метилбутил/-Ь -аланил-L фенилаланил. Масспектърът показва пикове при 551 за трисилилното производно минус метил /566-15/, 479 за дисилилното производно минус метил /494-15/ и 449 за трисилилното производно минус -COOTMS /566-117/. ЯМР спектърът показва широки дублути при 0.95 и 1.5 ррм, комплексна обсорбция при интервала от 2.8-3.4 ррм /слаба/ и синглет при 7.1 ррм. Интеграцията се съвместява със структурата, давайки правилното отношение на ароматни към алифатни протони.

Пример 12. N-карбоксиметил-Ь -алинил-L· -пролин.

В малка колба, снабдена с pH електрод, се комбинират

1.5 г L -аланил-L· -пролин и 1.2 мл 4М - на натриева основа. Прибавя се 0.53 г хлороцетна киселина в 1.2 мл 2М - на натриева основа. pH се нагласява на 8-9, нагрява се до температура 85°С и pH на разтвора се поддържа в интервала 8-9 в продължение на 15 минути чрез прибавяне на натриева основа, ако е необходимо. Прибавят се още 0.53 г хлороцетна киселина и натриева основа, ако е необходимо, в продължение но 15 минути. Прибавя се трета порция от 0.53 г хлороцетна киселина и pH се поддържа в интервала 8-9 в продължение на 15 минути, държи се още 15 минути при 85°С и се охлажда.

Реакционната смес се прекарва през колона от Dowex 50 /И*/, промива се с вода и се елюира с 2Х-ен воден разтвор на пиридин. Комбинираните функции, които показват положителна нинхидринова реакция, се концентрират до малък обем във вакуум и се сушат чрез замразяване.

Полученият материал се разтваря в няколко милилитра вода и се зарежда в колона с Dowex 50 (На+). Елюира се с 0.5М-на лимонена киселина, като pH се нагласява на 3.3 с натриева основа. Неланият продукт се появява първи /нинхидринов тест/, добре отделен от нереагиралия аланилпролин. Фракцията от продукта се концентрира във вакуум до получаване на около 300 г.

Този разтвор се зарежда в колона с Dowex 50 (Н+Г . Промива се с вода, след това се елюира с 2%-ен разтвор на пиридин във вода. Фракцията с продукта се концентрира във вакуум до малък обем и се суши чрез замразяване. Получават се 417 мг Ь1-карбоксиметил-Ъ -аланил-L -пролин.

ЯМР спектърът /деутерирана вода, метанол вътрешен стандарт/ 1.58 ррм/ 0,1=6/ с малък пик при 1,53 /d,I=6/ /общо ЗН/, 1.77-2.68 /широк м, 4Н/, 3.63 /3/ върху 3.28-3.92 /м//общо 4Н/, 4.05-4.72/широк м, 2Н/ препокрит с пика на водата 4.68.

Пример 13. М-/1-карбоксиетил/-Ь -аланил-L -пролин Разтварят се 45 г бензил пируват 4.5 г L -аланин- в смес от вода /115 мл/ и 250 мл р-диоксан. Рн се нагласява на 5.5 с натриево основа. Прибавя се 9.4 г натриев цианоборхидрид и се разбърква при стайна температура в продължение на 6 дни. pH се нагласява на I с концентрирана солна киселина.

Разтворът се зарежда в колона с Dowex 50 (Н+), приготвена в 50Х-диоксан-вода. Промива се с 50%-ен диоксан във вода след това само с вода. Елюира се с 2Х-ен разтвор на пиридин във

- 26 вода, фракциите с продукта се събират и се концентрират във вонуум до сухо. Твърдият остатък се претрива с вода, филтрира се и се промива с вода. Суши се до получаването на 6.8 г Ь1-/Ir-карбобензоксиетил/-Ь -аланин като смес от диастериозомери. От матерния ликьор може да се събере втора реколта от 1.0 г твърдо вещество.

Разтварят се 208 мг от получения по-горе продукт и 217 мг бензилов естер на L -пролин хидрохлорид в сух диметилформамид. Охлажда се до температура 0°С. Прибавя се 0.193 мл дифенилфосфорилазид, разтворен в диметилформамид /ДМФ/. След това на капки в продължение на 10 мин. се прибавя разтвор на 0.24 мл триетиламин в ДМФ, като температурата се поддържа при 0°С. Разбърква се в продължение на 3 часа при 0°С и една нощ при стайна температура.

Сместа се разрежда с етил ацетат, промива се с вода и с 5Х-ен разтвор на натриев бикарбонат. Концентрира се във вакуум и се хроматографира върху плака със силикагел за препаративна тънкослойна хроматография, развива се с етил ацетат. Развива се широка ивица при Ь = 0.5-0.6, елюира се с етил ацетат и разтворителят се дестилира до получаването на 212 мг от сместа от диастереоизомери на М-/1-карбобензоксиетил/-Ь -аланилL -пролин бензилов естер.

135 мг от получената по-горе смес се разтварят в метанол и вода. Прибавят се 50 мг 10%-ен лаладий/въглен и се хидрира при 40 пси налягане на водород при стайна температура. Филтрира се, концентрира се във вакуум и се суши чрез замразяване до получаването на 95 мг от сместа на диастереоизомерите на Ь1-/1-карбокси-етил/-Ь -аланил-L -пролин. ЯМР спектърът е сравним с този, получен в пример 2 и мосспектърът на силили- 27 рането производно показва същите фрагменти.

Пример 14. М-/1-карбоксиетил/-Ь -аланил-L -пролин.

Разтваря се 0.75 г Ь1-/1-карбобензоксиетил/-Ь -аланин в пиридин и се прибавя 7.5 мл I М-ен разтвор на триетиламин в пиридин. Охлажда се и се прибавя 1.09 г L -пролин като бензилов естер хидрохлорид и 0.678 г дищиклохексилкарбодиимид. Съхранява се при температура 0°С в продължение на 20 часа. Филтрира се, след това се концентрира във вакуум. Остатъкът се разтваря в етил ацетат и този разтвор се промива с наситен разтвор на калиев карбонат, след това с физиологичен разтвор. Органичната фаза се суши, концентрира се във вакуум, след това се хроматографира получения остатък върху силикагел и се използва етил ацетат-хексан за изолиране на диастереоизомерната смес на И-/1-карбобензоксиетил/-Ь -алания-L -пролин.

Хидри,_ра се по обичайния начин с ЮХ-ен паладий/въглен във воден етанол и след обработка за изолиране и сушене чрез замразяване се получава М-/1-карбоксиетил/-Ь -аланил-L пролин, като бяло твърдо вещество.

ЯМР спектър в деутерирана вода - 1.65 ррм/д,6Н/, 1.9-

2.6 /М,4Н/, 3.5 - 4.2 /М,ЗН/, 4.3-4-8/М,2Н/.

Пример 15. Ь1-/1-карбометоксиетил/-Ь -аланил-L -пролин. Разтвор на 1.4 г метил L -аланинат хидрохлорид и 3.1 г ^-бромпропионова киселина в смес от диоксан и вода се неутрализира до pH 9 с натриев хидроокис. Сместта се затопля до температура 70°С, и която се поддържа в продължение на 30 мин., а pH на средата се поддържа в границите от 8 до 9, ако е необходимо чрез прибавяне на натриев хлорид. Охлажда се зарежда се в колона Dowex 50 (Н+) I с йонообменна смола, промива се с вода, и се елюира с 2Х-ен воден разтвор на пиридин.

- 28 Комбинират се фракциите с продукта и се сушат чрез замразяване. Този суров продукт се пречиства чрез хроматографиране върху йонообменна смола, заредена в нолона Djwex 50 (Na+> в 0.5 М буферен разтвор на натриев цитрат с РН 3.3. Фракциите с продукта се събират и се концентрират във вакуум до малък обем, след което повторно се хроматографират върху Dowex 50 (Н+). Фракцията с продукта се сушат чрез замразяване до получаването на чист К-/Ь-карбометоксиетил/-аланин.

Междинният продукт взаимодейства с бутилов естер на L -пролина при използване на дифенилфосфорил азид, както е описано в пример 13. Отстранява се терц. бутил естерната група чрез разтваряне в трифлуороцетна киселина при стайна температура в продължение на 3 часа, тетрафлуороцетна киселина се дестилира и сместа се пречиства върху колона с Dowex 50 (Н+) и след елюиране с 2%-ен воден разтвор на пиридин, както е описано, се получава Н-/1-нарбометоксиетил/-Ь -аланил-Ь пролин, под формата на смес от диастереоизомери.

Пример 16. Н-/1-метоксикарбонил-3-метилтиопропил/-Lаланил-L -пролин.

Разтвор на нирувоил-L -пролин /185 мг/, L -метионин, метилов естер /600 мг/ и натриев цианоборхидрид /200 мг/ в 20 мл метанол, се неутрализира с разреден метанолов разтвор на натриев хидроксид. След престояване на стайна температура в продължение на 3 дни продуктът с абсорбира върху силно кисела йонообменна смола и се елюира с 2% л. воден разтвор на пиридин до получаване на 80 мг продукт. ЯМР спектърът показва метокси група при 3.95Г, тиометилна група при 2.2 S и СН-СН- при 1.55 и 1.7 S' · Масспектропрограмата на силилирания

W

- 29 материал показва очаквания молекулен йон при 404 м/е.

Пример 17. 1\1-/1/5/-карбокси-3-метилтиопропил/-аланилI/ -пролин.

Разтвор на N-/1/6/ -метоксикарбонил-/-3-метилтиопропил/DL -аланил-L· -пролин/Ί27.5 мг; 0.384 мМ/ в 2 мл вода се обработва 8 азотна атмосфера с 7.82 мл 0.100 И натриев хлорид /0.782 мМ/ и се разбърква в продължение на два и половина часа при стайна температура. Продуктът се абсорбира от реакционната смес върху 30 мл Dowex 50 (Н+) и се елюира с 4%-ен воден разтвор на пиридин до получаването на 73.5 мг продукт, който по-нататък се пречиства върху Ij Н-20 колона до получаването на 55.7 мг продукт. ЯМР спектърът в деутерирана вода показва тиометил при 2.1; СН-СН₃ при 1.5 и 1.6 Р и липса на метилов естер. Масспектрограмата на силилирания материал показва очаквания молекулен йон при 462 м/е.

Пример 18. И-/Т-метоксикарбонил-2-/3-индолил/-етил/аланил-L -пролин.

Работи се,както е описано в пример 16, като метилов естер на триптофона кондензира с пивалоил-L -пролин в присъствието на натриев цианоборхидрид до получаването на М-/1*-метоксикарбонил-2-/3-индолил/-етил/-аланил-1?-пролин.

ЯМР спектърът в деутериран хлороформ показва ароматни протони при 6.9 до 7.7; протони, съседни на ароматните ядра и съседни на азота, при 2.8 до 3.9; алифатни метиленови протон при 1.4 до 2.7 и аланин метила при 1.0 до 1.4. Масспектрограмота на силилирания материал показва йон при 516 м/е в съответствие с дисилиран материал, загубил метилна група.

Пример 19. Н-/1/5/-карбокси-2-/3-индолил/-етил/-0Ь оланил-Ь -пролин.

- 30 Работи се както е описано в пример 17, като посочения продукт се хидролизира до получаване на очакваната дикиселина. ЯМР спектърът в D zO-c^PYR·показва пет ароматни протона при 6,8 до 7.7; 7 протона съседни на ароматното ядро и съседни на азота, при 2.8 до 7.4 и 7 алифатни протона при 1.0 до 2.2 £ в съответствие с очакваната структура. Масспектрограмата на силирания материал показва пик при 431 м/е, интерпретиран като протениран минисилилиран йон, който е загубил метилна група.

Пример 20. М-/1-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L тиазолидин нарбоксилова киселина.

Смесват се терц.Вос-аланин /1.8 г/ и L -тиадолидин-4карбоксилова киселина под формата на бензилов естер, хидрохлорид /2.6 г/ в метилен хлорид. При температура 0-5°С се обработва с триетиламин /1.4 мл/, след това е дициклохексилкарбодиимид /ДСС/ /2.3 г/ в метилен хлорид, след което се оставя да престои една нощ. След филтриране и промиване на филтъра с вода и разтвор на натриев бикарбонат, разтворителят се дестилира и продуктът се хроматографира със силикагел 6-60 /Е.Мерк/ в етил ацетатхексан. Разтворителят на събраните фракции, съдържащи продукта, се дестилира във вакуум. Бензиловият естер се хидролизира в ацетонитрил - вода при pH 13.5 /натриев хидроксид/ в продължение на един час при стайна температура. Средата се неутрализира до pH 8 чрез солна киселина, промива се с етер, концентрира се водният слой във вакуум и след това се суши чрез замразяване. Отстранява се от терц.бутоксикарбонил защитна група в 4 М разтвор на хлороводород в етил ацетат. Продуктът се утаява с етел, филтрира се и се суши до получаването на L -аланил-L -тиазолидин-4-карбоксилова киселина. 0.385 г от този продукт се кондензира с 1.88 г 2-оксо-4-фенилмаслена

- 31 киселина във вода при използване на 0.354 грама натриев цианоборхидрид по метода, описан в пример 24, до получаването на 0.53 г смес от диастереоизомерита на И-Л-карбокси-З-фенилпропил/-Ъ -аланил-L -4-тиазолидин карбоксилова коселина. ЯМР спектърът в деутерирана вода и деутериран натриев хидроксид съдържа дублет при 1.2 ррм /ЗН/, синглет при 7.1 /5 Н/, широна абсорбция в интервала от 1.6 до 2.0/2Н/, широка абсорбция в интервала от 2.2 до 4,1 и широк воден пик при 4.6 ррм. Масспектърът на силилирания продукт показва молекулния йон на дисилилираното производно при м/е=55б.

Пример 21. И-/Ькарбокси-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L пипеколинова киселина.

Чрез заместване на тиазолидин карбоксиловия естер от пример 20 с L -пипеколинова киселина, метилов естер, хидрохлорид /1.8 г/ може да се получи посоченото в заглавието съединение, като се прилага методът, описан в пример 20.

ЯМР спектърът в деутериран метанол показва широк мултиплет при 1.3 до 1.9 ррм /9Н8, синглет при 7.22 /5Н/, и серия от мултиплети в областта от 2.0-4.8 ррм. Месспектърът на силилирания материал показва пик при м/е=580 за дисилилирания молекулен йон.

Пример 22. М-/1^чарбокси-3-финилпропил/-Ь -аланил-L N-метил-аланин.

Чрез заместване на тиазолидин карбоксиловия естер от пример 20 с b-N-метилаланин, метилов естер, хидрохлорид /1.5 г/ по метода описан в същия пример, се получава посоченото в заглавието съединение.

Пример 23. М-/1-нарбокси-1гметилетил/-Ь -аланил-L пролин.

- 32 Посоченото в заглавието съединение може да се получи чрез смесване на 7.7 г 2-бромизомаслена киселина, бензилов естер, 2.4 г L -аланил-L -пролин, терц. бутилов естер, 7.0 г сребърен оксид в 40 мл бензол. След кипене на обратен хладник в продължение на 24 часа се прибавят допълнително още 7.7 г от броместера и 7.0 г от сребърния оксид и кипенето на обратен хладник продължава за още 24 часа. Охлаждане, филтриране, дестилиране на разтворителя и диестера на продукта се изолира по обичайните хроматографски методи. След отцепването на терц. бутилестерна група в трифлуороцетна киселина и на бензилната група чрез каталитично хидриране по познатите методи води до получаване на търсената свободна киселина.

Пример 24. М-/1-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L пролин.

Смес от 4-фенил-2-оксомаслена киселина /1.49 г/ и L аланил-L -пролин /0.31 г/ във вода с pH, нагласено на 7.5 с натриева основа, се обработва с натриев цианоборхидрид /0.32 г/ в продължение на едно нощ. Продуктът се абсорбира върху силно кисела йонообменна смола и се елюира с 2^-ен разтвор на пиридин във вода до получаването на 0.36 г суров диастереомерен продукт, 1Ч-/1^карбокси-3-фенилпропил/^-аланил-Lпролин. Част от него се пречиства чрез гелфилтруване /L Н-20/ за целите на спектрографския анализ. ЯМР спектърът в диметилсулфоксид показва ароматен водород при 7.20, широк синглет при 4.30 широк мултиплет в интервала 3.0 до 3.9, 2.67 и 1.94 и дублет при 1.23 и при 1.15. Масспектърът показва молекулен йон при 492 м/е за дитриметилсилилираните материали.

Пример 25. М-/1гкарбокси-3-фениляропил/-Ь -аланил-L пролин.

- 33 Смила се и се пресява XAD-2 полиестерна смола (Rohm and

Haas Co.), Отделя се фракцията с 200-400 меша и 440 мл се зареждат в хроматографска колона. Еквилибрира се с 0.1 М амониев хидроксид и смес от вода-метанол 95 към 5/обем/обем/. В колоната се зареждат 350 мг от М-/1гкарбокси-3-фенилпропил/L -аланил-L -пролин, получен, както е описано в пример 24, разтворен в 10 мл от същия разтворител. Първият изомер напуска колоната в граници на обема от 375-400 мл на елюата. Вторият изомер в границите от 440-480 мл с междинна фракция, съдържаща смес от изомери. След сушене чрез замразяване на фракцията, съдържаща първия изомер, се получава 130 мг бяло твърдо вещество. След прекристализация из 1 мл вода с pH, нагласено на 3, се получават 94 мг бели игловидни кристали с т.т. 148-151°С. Това е най-активният изомер и има $,$, 3 конфигурация, както е определено чрез анализ хс Х-лъчи ΛΖ/_α =-67.0° /0.1 М НС1/ след сушене във вакуум над дифосфорен пемтаоксид. ЯМР спектърът в диметилсул фоксид показва единичен дублет за метилните протони при 1.22 ррм. Сушенето чрез замразяване на фракцията, съдържаща втория изомер води до получаването на 122 мг бяло твърдо вещество. Прекристализирането на 103 мг от него из 2.5 мл вода с pH, нагласено но 3 води що получаване на 64 мг леки бели кристали с т.т. 140-145°С d.,/c//d = -101.6° /0.1 М НС1/ след сушене. ЯМР спектърът в диметилсулфоксид показва метилния дублет при 1.17 ррм.

Пример 26. Г1-/1/5/-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь аланил-L -пролин.

Разтварят се етил-2-окси-4-фенилбутират /1.03 г/ и Lаланил-L -пролин /0.19 г/ в смес от 1 към 1 етанол/вода. Към получения разтвор в продължение на 2 часа при стайна температура

- 34 на капки се прибавя разтвор на натриев цианборходрид /0.19 г/ в етанолвода. Когато реакцията завърши, продуктът се абсорбира върху силно кисела йонообменна смола и се елюира с 2%-ен воден разтвор на пиридин. Богатите на продукт франций се сушат чрез замразяване до получаване на 0.25 г суров N-ZJ-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L -пролин. Масспектърът показва молекулен йон при 448 м/е за моносилилирания материал. Хроматографията осигурява желания изомер.

Пример 27. Г1-/1паминокарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланилL· -пролин.

Работи се,канто е описано в Пример 26, като може да се кондензира 2-оксо-4-фенилбутирамид и Ь-аланил-L -пролин в присъствието на натриев цианоборхидрид до получаване на М-/1-аминокарбонил-3-фенил-пропил/-Ь -аланил-L -пролин.

Пример 28. М-/1«-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -алинил-L триптофан.

Работи се, както е описано в пример 24, като може да се кондензира 2-оксо-4-фенилмаслена киселина с L -аланил-L триптофан в присъствието на натриев цианоборхидрид до получаване на И-/1-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L -триптофан.

Пример 29. М-/1-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L -4хидрокси-пролин.

По метода, описан в пример 24, 2-оксо-4-фенилмаслена киселина и L -аланил-4-хидроксипролин се кондензират в присъствието на цианоборходрид до получаването на Г1-/1-карбокси/-

3-фенил-пролил/-Ь -аланил-L -4-хидроксилролин.

ЯМР спектърът в деутериран метанол показва дублет, центриран при 1.53 ррм /ЗН/, синглет при 7.13 /5Н/, серия от мултиплети в областта от 2.0 до 4.7 ррм. Масспектърът на сили- 35 лирания продукт показва молекулен йон на трисилилирон продукт при м/е=580.

Пример 30. ΓΊ-/Ι-κορ6οκ с и-3-фенилпропил/L· -серинил-L пролин.

По метода, описан в пример 24, 2-оксо-4-фенилмаслена киселина и L -серинил-L -пролин се кондензират в присъствието на натриев цианоборходрод до получаването на Ь1-/1-карбокси-3фенилпропил/-Ь -серинил-L -пролин.

Масспектърът показва молекулен йон при 580 м/е за трисилилираните видове. ЯМР спектърът в деутерирана вода потвърждава структурата.

Пример 31. К-/1^карбокси-3-фенилпропил/-Ь -фенилаланилL -пролин.

По метода, описан в пример 24, 2-оксо-4-фенилмаслена киселина и L -фенилаланил-L -пролин се кондензират в присъствието на натриев цианоборходрид до получаването на Г1-/1-карбокси-3фенилпропил-L -пролин.

Масспектърът показва един йон при 406 м/е за молекулния йон минус вода /424-18/. ЯМР спектърът в деутерирана вода съответства на структурата.

Пример 32. Ь1-/1-карбокси-3-фенилпропил/-Ъ -цистеинил-L пролин.

По метода, описан в пример 24, 2-оксо-4-фенилмаслена киселина може да се кондензира с L -5-бензилцистеинил-Ь пролин в присъствието на натриев цианоборхидрид. След това продуктът може да се обработи с натрий в течен амоняк до получаването на Ь1-/1-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -цистеинилL -пролин.

Пример 33. М-/1-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -хистидинил- 36 L -левцин.

По метода, описан в пример 24, може да се кондензират

2-оксо-4-фенилмаслена киселина с L -хистидинил-L· -левцин в присъствието на натриев цианоборхидрид до получаването на

М-/1-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -хистидинил-L· -левцин.

Пример 34. N-/I-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -фенилаланил-L аргинин.

2-оксо-4-фенилмаслената киселина с Ь -фенилаланил-L -аргинин в присъствието на натриев цианоборхидрид до получаването на N-/I-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -фенилаланил-L -аргинин.

Пример 35. М-/1<-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -фенилаланилL -триптофан.

2-оксо-4-фенилмаслена киселина с L· -фенилаланил-L -триптофан в присъст_вието на на.триев цианоборходрид до получаването на М-/1гкарбокси-3-фенилпропил/-Ь -фенилаланил-L -триптофан.

Пример 36. И-/1-карбокси-3-/3-индолил/пропил/- L аланил-L -пролин.

По метода, описан в пример 24, 4-/3-индолил/-2-оксо-маслената киселина и L -аланил-L -пролин се кондензират в присъствието на натриев цианобоорходрид до получаването на N-/Iкарбокси-3-/3-индолил/пропил/^ -аланил-L -пролин. Масспектърът на трисилилирания материал показва молекулен йон при 603 м/е и М ♦ -15 пик при 588 м/е.

Пример 37. Ь1-/1-карбокси-3-фенилпропил/^ -оланил-3,4дихидропролин. Смес от 3,4-дихидропролин /2.3 г/, терц. Вос-Ь аланин. М-хидроксисукщинимидов естер /7.2 г/ и натриев карбонат /2.5 г/ се разбърква в смес от диоксан-вода при

- 37 температура 0°С в продължение на една нощ. pH на средата се неутрализира до 8 със солна киселина. Концентрира се до малък обем във вакуум и се суши чрез замразяване. Отцепва се терц. Вос-защитна група с трифлуороцетна киселина по обичайния начин и продуктът се хроматографира при елюиране с 2Я-ен воден разтвор на пиридин, като се използва Dowex 50 (Н+) по метода, описан в пример 2. Дипептидът се изолира чрез сушене посредством замразяване. Полученият продукт взаимодейства с 2-кето-4фенилмаслената киселина по описания в пример 24 метод до получаване на продукта под формата на смес от диастереоизомери. Мосспектърът показва молекулен йон при 490 м/е за дисилилираните видове.

Диастереомерният продукт /140 мг/, получен по-горе, се разделя на компоненти чрез хроматографиране върху XAD -2 смола по описания пример 25 начин. Основният компонент /70 мг/, който пръв напуска колоната, е с Ζα /с=1.3 метанол/. Масспектърът на всеки компонент показва молекулен йон при 490 м/е за дитриметилсилилираните видове.

Пример 38. М-/1-карбокси-3-фенилпропил/-1галанил-2метил-тиозолидин-4-карбоксилова киселина.

Това съединение може да се получи по метода, описан в пример 37, при заместване на /2.3 г/ 3,4-дихидропролин с 2.9 г

2-метил-тиазолидин-4-карбоксилова киселина.

Пример 39. Ь1-/1-карбокси-3-фенилпропил/-1»-аланил-Lметилаланин.

Това съединение може да се получи по метода, описан в пример 37, при заместване на 2,3 г от 3,4-дихидропролин с 1.8 грама 2-метилаланин.

Пример 40. Сухо напълнени капсули, съдържащи по 50 мг

- 38 активен ингредиент.

Всяка капсула /размер 1/ от 200 мг съдържа следващите компоненти, в мг: 1М-/1-карбокси-2-фени лети л/-L -аланил-L· пролин 50; лактоза 149; Магнезиев стеарат 1.

Смила се М-/1^карбокси-2-фениллетил/-Ь -аланил-L пролин до размер .№ 60 на частичките и след това лактозата и магнезиевият стеарат се прекарват през сито № 60 върху прахообразния активен ингредиент. Ингредиентите с есмесват в продължение на 10 мин., след което се пълнят в суха желатинова капсула № 1.

Пример 41. Т\[-/1’-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь-аланилL -пролн.

Разтвор на L -аланил-L -пролин /7.7 г/ и етил-2-оксо-4фенилбутират /42.6 г/ в 140 мл етанол се разбърнва с 64 г прахообразно молекулно сито при стайна температура в продължение на половин час. След това бавно, в продължение на 6 часа,се прибавя разтвор на натриев цианоборходрид /2.6 г/ в 40 мл етанол. След филтриране на ситото реакционната смес се концентрира във вакуум до малък обем. Полученият остатък се разпределя между хлороформ и вода. pH се нагласява на 8.5 и хлороформеният слой се отделя и изхвърля, водният слой се подсилява до pH 2,7 и продуктът се екстрахира с хлороформ. Хлороформеният екстрат се суши над натриев сулфат и се концентрира във вакуум до получаване на 10.4 г смесени диастереомери. Високоефективната течна хромотография /ВЕТХ/ показва, че основният продукт е желания-/1-/3/-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L -пролин

ЯМР спектърът показва ароматна обсорбция при 7.1 £ и диастереомерни метили като мултиплет, центриран при 1.3сР.

Масслектърът показва молекулен йон при 376 м/е и силен

- 39 пик при 358 м/е /М ♦ -HgO/.

Пример 42. М-/1-/5/-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь аланил-L· -пролин, малеатна сол.

Разтвор на П-/1-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-1> -аланилL- пролин, смес от изомери, /13.8 г/ в 69 мл ацетонитрил се обработва с 4.25 г малеинова киселина в 69 мл ацетонитрил. След разбъркване в продължение на 1 час при стайна температура, твърдото вещество се филтрира, промива се с ацетонитрил и се суши до получаването на 8.4 г малеатна сол с т.т. 141-145°С. С високоефективна течна хроматография /ВЕТХ/ се установява чистота на продукта 96%. Суровата малеатна сол се прекристализира из ацетонитрил до получаването на 7.1 г И-/1/5/-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L -пролин, малеат, т.т. 148150°С, 99% чистота /ВЕТХ/.

Пример 43.

A. Г1-/1>-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L пролин.

Смес от 0.814 г L -аланил-L -пролин, 0.206 г етил 2-оксо-

4-фенилбутират и 1.6 г молекулно сито в 10 мл етанол се хидрира при стайна температура при 40 лаунда налягане с о.1 грам ЮХ-ен паладий /въглен като катализатор. След спиране притока на водород суровият продукт се получава чрез филтриране и концентриране, след което се абсорбира върху йонообменна смола (Dowex 50, Н+) и се елюира с 2%-ен разтвор на пиридин във вода до получаването на 0.224 г N-/I'втоксикарбонил-Зфенилпропил/-Ь -аланил-L -пролин. ВЕТХ показва, че отношението на изомерите е 55 към 45.

B. М-/1-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Е -аланил-L пролин, сол с малеинова киселина.

- 40 Смес от 3 г L -аланил-L -пролин, 5 г етил-2-оксо-4фенил-бутаноат, 13 г ЗА молекулно сито и 3.6 г Raney никел в 85 мл етанол се хидрира при температура 25°С и налягане 40 пси на водорода, докато спре поемането на водород. Твърдите вещества се филтрират, промиват се с 80 мл етанол и филтратите се събират. Анализът с ВЕТХ показва, че отношението на диастереоизомерите в сместта е 87 към 13 в полза на желания продукт. Етанолът се отстранява във вакуум до получаването на масло, което се разтваря в 60 мл вода и 20 мл етилацетат. pH на получената двуфазна смес при разбъркване се нагласява до

8.6 с помощта на 50%-ен натриев хидроксид. Слоевете се разделят и водната фаза се екстрахира с два пъти по 20 мл етил ацетат. pH на водната фаза се нагласява на 4.25 със солна киселина, прибавят се 12 г натриев хлорид, разтворен във веда и продуктът се екстрахира с пет пъти по 12 мл етил ацетат. Екстрактите се събират и се сушат над натриев сулфат. Полоният продукт Г*1-/1/.57-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-1> -аланил-L -пролин се прекрастилизира под формата на неговата сол с малеинова киселина чрез прибавяне на 1.86 г от киселината. След разбъркване в продължение но 4 часа солта се филтрира, промива се с етилацетат и след сушене се получава 5.2 г чист продукт, т.т. 150-151°С.

Пример 44. Ь1-/1.-бензилоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь аланил-L· -пролин.

Разтвор на Ь -аланил-L -пролин /167 г/ и бензил 2-ексо-4фенилбутират /1.20 г/ в 5 мл етанол се разбърква при стайна температура с 3 г прахообразно молекулно сито, тип 4А. След това на порции в продължение на 3 часа се прибавя натриев цианоборхидрид /75 мг/. Продуктът се пречиства чрез абсорбция

- 41 върху силна катион обменна смола и се елюира с 2Х-ен разтвор на пиридин във вода. След като се прекара през колона за гел филтриране /Ъ Н-20/, се получават 220 мг от И-Н-бензилоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L -пролин под формата на смес от изомери. Тънкослойната хроматография върху силикагел при елюиране с I етилацетат, 1 н-бутонол, 1 вода, 1 оцетна киселина показва едно основно петно при R_F0,71. Изомерите се разделят при използване на ВЕТХ с обратна фаза като се получава Г1-/1/$/-бензил-оксикарбонил-3-фенилпропил-Ь -аланил-L -пролин.

По аналогичен начин Ь1-ацетиламиноетил-2-оксо-4-фенилбутират и L -аланил-L -пролин се редуцират с натриев цианоборхидрид до получаването на М-/1-/2-ацетиламино/етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L -пролин.

Аналогично диметиламиноетил 2-оксо-4-фенилбутират и L -аланил-L -пролин дават И-/1-/2-диметиламино/-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L -пролин.

По подобен начин, бензил2-оксо-5-метилхексаноат и L -аланилL -пролин се получава И-/1-бензилоксокарбонил-4-метилпентил/ - L -аланил-L -пролин.

Масспектърът на силилирания материал показва пикове при 510 /М⁺, много слаб/, 495 /М⁺ -15/, 464, 420, 419, 385 и 296 м/е /основен пик/.

ЯМР спектърът е в съответствие със структурата.

Пример 45. Ь1-/>бутоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланилL -пролин.

Разтвор на ГТ-бензилоксикарбонил-Ь -аланил-L -пролин бутилов естер /452 мг/ в 5 мл бензол се хидрира върху 150 мг ΊθΧ-ен паладий /въглен до отстраняване на азотзащитната група. След филтриране и отстраняване на разтворителя L -аланил-L пролин 3° бутиловият естер се разтваря в 8 мл тетрахидрофуран

- 42 и се обработва с 1.41 г бутил 2-оксо-4-фенилбутират и 3 г прахообразно молекулно сито. На порции в продължение на няколко часа се прибавя натриев цианоборходрид /150 мг/, след което сместа се разбърква при стайна температура в продължение на една нощ. Сл^ филтриране и концентриране във вануум полученият остатък се обработва с 25 мл трифлуороцетна киселина при стайна температура в продължение на 2 часа. След отстраняване на киселината продуктът се пречиства чрез абсорбиране върху йонообменна смола и чрез гел филтриране /Ь Н-20/. След концентрирането и сушенето на фракциите, съдържащи продукта, се получават 182 мг от Ь1-/1-бутоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L -пролин под формата на смес от изомери. Тънкослойната хроматография /силикагел, 1 етилацетат, 1 бутанол, 1 вода, 1 оцетна киселина/ показва две петна, R_F0,67 и 0.72. Масспектърът показва пикове при 548 /дисилилиран молекулен йон/ и при 476 /моносилилиран молекулен йон/. Изомерите се разделят при използване на високоефективна течна хроматография с обратна фаза до получаването на ГТ-/1/6/-бутоксикорбонил-3-/фенилпропил/^ -аланилL -пролин.

Пример 46. ?1-/1-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланилL -пролин, етилов естер.

Разтвор но 0.63 г К1-/1/-карбокси-3-фенилпропил/^ -аланилL -пролин в 9.7 мл етанол се насища с газообразен хлороводород при температура 0°С. След престояване при стайна температура в продължение на една нощ солната киселина и етанолът се отстраняват във вакуум до получаване на бледожълто масло, което се пречиства чрез гел филтриране /L Н-20 колона/. Добивът от М-/1-етоксикарбонил-3-финилпропил-Е -аланил-L -пролин, етилов естер е 0.39 г; при тънкослойна хроматография се появява едно петно. ЯМР спектърът показва две етилни групи към ароматния пръстен. Масспектърът показва молекулен йон при 404 м/е.

Пример 47. Ь1-/1-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -аланилтранс-4-метокси-Ь -пролин.

Приготвя се метил транс-4-метокси-Ь -пролинат хидрохлорид от L -хидроксипролин по метода на Е.Ас|ам$ еЬ αΐ. 1.Вiol.СЬем. 208,573 /1954/, като се естерифицира с метанолова солна киселина по известния начин. Следва взаимодействие с Boc-L -аланин в метилен хлорид с дициклохексилкарбодиимид по описания по-горе начин, пречистване на междинния Boc-L -аланил-L -метокси Pzo-OMe чрез хроматография върху силикагел при елюиране със смес от етилацетат и хексан I/Ι. Хидролиза на естера с натриев хидроксид в ацетонитрил-вода, нагласяване на рН на 7.5, сушене чрез замразяване, отстраняване на защитната група на амина в 4М солна киселина в етилацетат по известния начин. Кондензация на 0.54 г от този L -аланил-L -TpaHC-4-MeTOKCH-L -пролин с 2.0 г 2-оксо-4-фенилмаслена киселина в 6 мм вода при използвЙе на 0.43 г натриев цианоборхидрид по метода, описан в пример 24. Изолиране на продукта, описано в същия пример, до получаване на 0.92 г смес от диастереоизомери на N-/Lкарбокси-3-фенилпропил/-Ь -аланил-транс-4-L -пролин.

ЯМР спектърът в деутерирана вода показва дублет, центриран при 1.58 ррм/ЗН/, синглети при 3.37 /ЗН/ и 7.35 ррм /5Н/, номплексна абсорбция в областта 1.9-3.5 и широк мултиплет при 4.0-4.6 ррм. Масспектърът показва изявени пикове при м/е=360 /М-18/ и при 256 /М-122/.

Пример 48. ?1-/1-бвнзилоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь аланил-1ранс-4-метокси-Ь -пролин.

Чрез присъединяване на L -аланил-L -4^-меток-сипролин,

- 44 получен в пример 47, с бензил-2-оксо-4-фенилбутират в етанол при използване на натриев цианоборхидрид по метода, описан в пример 44, може да се получи слее от диастереоизомерите на Ь1-/1'-бензилонсикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-транс-4метокси-L -пролин. Изомерите могат да бъдат разделени при използване на ВЕТХ с обратна фаза до получаването на N-/I/S/бензил-оксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-транс-4-метоксиL -пролин.

Пример 49. Г1-/1гбензиламинокарбонил-3-фенилпропил/-Ь аланил-L -проиин.

Получава се бензиламидът на 2-оксо-4-фенил-маслената киселина чрез разтваряне на 3.0 г от киселината, 2.4 мл бензиламин и 4.7 мл дифенилфосфорилазид в 60 мл студен диметилформамид и прибавяне на капки на 2.6 мл триетиламин в диметилформамид, като температурата се поддържа при около - 10°С в продължение на два часа и половина. Престоява при стайна температура една нощ, диметил формамидът се дестилира ввв вакуум и остатъкът се разпределя между вода и етилацетат. Съдържанието на органичния слой се хроматографира върху силикагел, елюира се с етил ацетат/хексан при съотношение 1 към 4. От фракциите съдържащи продукта, разтворителят се изпарява до получаването на 2.2 г кристален н-бензил-2-оксо-4-фенилбутиромид. 1.26 г от този продукт взаимодейства с 0.19 г L -аланил-L -пролин при използване на 0.125 г натриев цианоборхидрид в етанол по метода, описан в пример 44. Суровият продукт се пречиства чрез гел филтриране /L Н-20/ до получаването на смес от диастереоизомерите на М-/1-бензил-аминокарбонил/-3-фенилпропил/-Ь аланил-L -пролин. ЯМР спектърът в деутериран хлороформ показва дублет при 1.1 ррм/ЗН/, близка двойка синглети при 7.3 /ЮН/

- 45 и комплексна абсорбция в областта от 1.6-2.3 /6Н/, 2.3-2.9/2Н/, 2.9-3.8 /4Н/ и 4.0-4.6 /ЗН/.

Масспектърът на силилирания материал показва изявени пикове при м/е ~ 509/моносилилирано производно/ и при 581 /дисилирано производно/.

Пример 50. N-/J^-карбок си-3-фени лпропи л/-L -аланил-L N-метилфенилаланин.

Чрез замяна на тиазолидин карбоксиловия естер от пример

20, с М-метил-L -фенилаланин, метилов естер, се получава

L -аланин-И-метил-Ь -фенилаланин. При кондензация на 0.85 г от този продукт с 0.32 г 2-оксо-4-фенилмаслена киселина с използване на 0.64 г натриев цианоборхидрид във вода, както е описано по-горе, подкисляване на сместа до pH 1.5 и екстрахиране с естер, след т8а дестилиране на етера, разтваряне на остатъка в 70%-ен метанол във вода и хроматографиране върху Dowex 50 (Н+) ⁸ същия разтворител и елюиране с ЗХ-ен разтвор на пиридин в същата смес от разтворители, събиране на фракциите, съдържащи продукт, концентриране, сушене чрез замразяване. След пречистване върху L Н-20 в метанол се получават 0.54 г от сместа от изомери на М-/1-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L -Nметилфенилаланин. ЯМР спектърът /деутерирана вода, деутериран натриев хидроксид/ показва дублет, центриран при 1,18 ррв/ЗН/, два препокриващи се синглета при 7.3 /10Н/, синглет при 2.95/ЗН/ и широка мултиплетна абсорбция в интервалите 1.4-2.1 и 2.3-4.4. Масспектърът на силилирания материал показва молевулен йон на дисилилирания материал при м/е = 556.

Пример 51. Ь1-/1-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L пролин амид.

Получава се L -аланил-L -пролин амид чрез присъединяване

- 46 но терц.-Вос-L -аланин с L -пролин амид по известните методи, използващи дициклохексилкарбодиимид в смес от 4 към 1 метилен и хлороформ към диметилформамид. Пречистване на междинния терц. Boc-L -аланил-L -пролин амид чрез хромотографиране в L Н-20 в метанол, отстраняване след това на защитната терц. Вос група в 4 М разтвор на солна киселина в етилацетат. Свързване на 0.5 г от тоди L -аланил-L -пролин амид хидрохлорид в 10 мл абсолютен етанол, неутрализиран с един еквивалент триетиламин, с 2.4 г етил-2-оксо-4-фенилбутират при използване на молекулно сито и 0.30 г натриев цианоборхидрид по описания в пример 41 начин. При този пример, продуктът се установява в хлороформения екстракт при pH 8.5, нонцентрира се във вакуум, разтваря се остатъкът в 50Х-на смес от етанол и вода, хроматографира се върху Dowex 50 (Н+), напълнена с 50Х-на смес от етанолвода и се елюира с 2%-ен разтвор на пиридин в същия разтворител. Фракциите, съдържащи продукта се събират и пречистват допълнително чрез хромотографиране върху L Н-20 в метанол. Разтворителят се дистилира във вакуум до получаване на 0.40 г N-/I етокси карбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L -пролин амид, като смес от диастереозомери. ЯМР спектърът в деутериран хлороформ показва триплет, препокриващ дублет при 1.1-1.5 ррм /6Н/, серия от пет мултиплета в областта от 1.5-4.7 ррм /15 Н/ и синглет при 7.17 ррм /5 Н/. Масспектърът на силилирония продукт показва изявени пикове при м/е=477 /моносилилирано производство/ и при 519 /дисисилно производство/.

Пример 52. К-/1’-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L пролин амид.

L -аланил-L -пролин амид, получен в пример 51, взаимодейства с 2-оксо-4-фенилмаслена киселина при използване на натриев цианоборхидрид в 50%-на смес от етанол и вода по метода описан в пример 2. След елюиране от йонообменна смола, концентриране във вакуум до малък обем, заливане с вода и сушене чрез замразяване се получава 1Ч-/1--карбокси-3-фенилпропил/L -аланил-L -пролин амид под формата на смес от диастереоизомери.

ЯМР спектърът показва ароматна абсорбция при 7.35 ί и двойка дублети за диастереомерните метили при 1.55 (Р.

Пример 53. Ν-/Ι-/6/ хидроксиаминокарбонил-/3-фенилпропил/-Ь -аланил-L -пролин.

Към студен разтвор на 0.19 г Ь1-/1-етоксикарбонил-3фенилпропил/-Ь -аланил-L -пролин, малеатна сол, получена в пример 42, в 1 мл етанол, се прибавя 0.85 г калиев хидроксид в 0.57 мл етанол. След това на капки се прибавя суспензия на 0.07 г хидроксиламин хидрохлорид в 0.9 мл етанол, съдържащ 0.060 г калиев хидроксид. Сместа се поддържа два часа в ледена баня, след това при стайна температура в продължение на една нощ. Супернатантът се декантира, разрежда се с 10 мл вода, pH се нагласява на 2.5 със солна киселина и се промива с хлороформ. След неутрализиране, сушене чрез замразяване на водния слой и прочистване чрез хроматография върху XAD -2 смола с гредиент 0.1 М амониев хидроксидеметанол се получава Ь1-/1-Х$/-хидроксиаминокарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланияL -пролин. Масспектърът на силилирания продукт показва йон при м/е=579 за трисилилирането производство и ЯМР спектърът е в съответствие със структурата.

Пример 54. М-/1-карбокси-3-метилбутил/-1/ -аланил-L· триптофан.

Разтвор на натриева сол на 4-метил-З-оксо-пентаноена

- 48 киселина /414 мг/ и L -аланил-L -триптофан /150 мг/ във вода с pH нагласено на 7 с натриев хидроксид, се обработва с натриев цианоборхидрид /103 мг/ при стайна температура в продължение на няколко дни. Продуктът се абсорбира върху силно кисела йонообменна смола и се елюира с 2^-ен разтвор на пиридин във вода. Богатите на продукт фракции се събират и сушат чрез замразяване до получаването на 189 мг леко бяло твърдо вещество. Масспектърът показва молекулен йон при 389 м/е и пикове при 187 м/е и при 158 м/е за следващите фрагменти:

сн_? сн

I 1

H00C-CH-IIH-CH

ЯМР спектърът в деутерирана вода потвърждава структурата.

Пример 55. 1М-/1-карбокси-3-метилбутил/-Ь -хистидилL -левцин.

По метода, описан в пример 54, 4-метил-2-оксопйтаноена киселина и L -хистидил-L -левцин се кондензират в присъствието на натриев цианоборхидрид до получаването на Ν-/Ι-καρ6οκοΗ-

3-метилбутил/-Ь -хистидил-L· -левцин. В този случай продуктът се елюира от йонообменната смола с 10Х-ен разтвор на амоняк. Масспектърът показва молекулен йон при 408 м/е да дисилилираните видове минус 18. Чрез ЯМР спентъра се потвърждава структурата.

Пример 56. К1-/1-карбокси-3-метилбутил-Ь -фенилаланилL -аргинин.

По метода, описан в пример 54, 4-метил-2-оксопентаниената киселина и L -фенилаланил-L -аргининът се кондензират

- 49 в присъствието на натриев цианоборхидрид до получаването на М-/1<-карбонси-3-метилбутид/-Ь -фенилаланил-L -аргинин. Продуктът се елюира от йонообменната смола с 10%-ен разтвор на амоняк. ЯМР спектърът деутерирана вода показва синглет при 7.2 /5Н/, широк триллет, концентриран при 3.0 /6Н/, широк мултиплет при 1.3 /6Н/ и широк дублет при 0.9 /6Н/.

Пример 57. Ь1-/1-карбокси-3-фениллропил/-Ь -лизил-L пролин.

По метода, описан в пример 54, 2-оксо-4-фенилмаслена киселина и терц. Boc-L -лизил- L -пролин се кондензират в присъствието на натриев цианоборхидрид. По същество всички терц. Вос-защитни групи се отцепват, ногато продуктът се абсорбира върху силно киселата йонообменна смола. Суровият Ь1-/1-карбокси-3-фениллропил/-Ь -лизил-L -пролин се елюира от смолата с ЮХ-ен разтвор на амоняк, суши се чрез замразяване и се пречиства чрез гел филтриране /L Н-20/. Незначителният пик за терц.Вос протони в ЯМР спектъра изчезва, когато продуктът се обработи с етилацетат с 4 N хлороводород-газ. ЯМР спектърът на получената в резултат сол-хидрохлорид на продукта е в съответствие със структурата. Масспектърът показва молекулен йон при 693 м/е за трисилилираните видове. Хроматографирането върху смола ХАР -2 при използване на 3.5Я ацетонитрил в 0.1 М -ен амониев хидроксид води до получаване на Г1-Х-/1/5/-карбокси -3-фенилпропил/-Ь -лизил-L -пролин.

Б. Ь1-«/-/1/5/-нар^бокси-3-фенилпропил/-Ь -лизил-L -пролин.

По метода, описан в пример 54, 2-оксо-4-фенилмеслена киселина и N-терц.Boc-L-лизил-L -пролин се кондензират в присъштвието на натриев цианоборхидрид. Продуктът се абсорбира върху силно кисело йонообменна смола и се елюира с 2Х-ен

- 50 разтвор на пиридин във вода. Богатите на продукт фракции се дестилират до сухо и се обработват с 4 N хлороводород в етилацетат за отстраняване на терц. Вос-защитна група. Получената в резултат хидрохлоридна сол се превръща в свободна база чрез абсорбиране върху силно кисела йонообменна смола и се елюира с 2Х-ен разтвор на пиридин във вода. Богатите на продукт фракции се сушат чрез замразяване и от тях се получава N·^/1-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -лизил- L-пролин във вид на бяло пухкаво вещество. ЯМР спектърът е в съответствие със структурата. Масспектърът показва молекулен йон при 549 за дисилилираните видове. Хроматографиронето води до получаване на желания изомер.

Пример 58. Ь1-/1.-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -3-флуораланил-L -пролин.

Към разтвор но D-3-флуораланин /420 мг/ в 4 мл ацетонвода /1:1/ се прибавя триетиламин /590 мг/ и 2-терц.бутоксикарбонилоксимино-2-фенилацетонитрил /1.060 г/. Сместа се разбърква в продължение на два часа и половина. Прибавя се студен 5Х-ен воден разтвор на калиев бикарбонат и сместа се екстрахира с етилацетат. Водната фаза се подкисляво с I N солна киселина и се екстрахира с етилацетат. Последният екстрат се промива с наситен воден разтвор на натриев хлорид, суши се над натриев сулфат и се концентрира до сухо за получаване но L -терц.Вос-З-флуораланин /800 мг/ с т.т. 91-93°С.

При разбъркване към разтвор на получения по-горе продукт /800 мг/ и пролин бензилов естер /1.5 г/ в метилен хлорид / мл/ при температура 0°С се прибавя дициклохексилкарбодиимид /845 мг/ в метилен хлорид /6 мл/ и сместа се поддържа при температура 0°С в продължение на 2 часа и при температура

- 51 20°С в продължение на 18 часа. Сместа се филтрира, утайката се промива с метилен хлорид, събират се филтратът и промивките и се екстрахират със студен I N-ен разтвор на солна киселина, със студен 5-Х-ен воден разтвор на калиев бикарбонат, с наситен воден разтвор на натриев хлорид, сушат се над натриев сулфат и се концентрират до сухо. Осъществява се суха колонна хроматография върху силикагел Н при елюиране с 6%-ен разтвор на ацетон в хлороформ до получаване н ачистия защитен дипептид.

Терц.Вос-група се отстранява чрез обработка с 4 N разтвор на хлороводород в етилацетат /8 мл/ при температура 0°С в продължение на един час. Прибавя се етер /около 20 мл/ и утаеният

1-3-флуораланил-Ь -пролин бензилов естер, хидрохлорид /450 мг/ се събира чрез филтриране/ т.т. 158-161°С. След хидриране в б мл вода и 2 мл етанол над 60 мг ЮХ-ен паладий/въглен при налягане една атмосфера и температура 20°С в продължение на 90 мин, последвано от филтриране и концентриране до сухо се получава L -З-флуораланил-L -пролин хидрохлорид /330 мг/. Масспектърът показва молекулен йон при 348 м/е за дитриметилсилилираните видове.

Към смес от 4-фенил-2-оксомаЙена киселина /375 мг/ и Ь-флуораланил-Ь -пролин хидрохлорид /100 мг/ в 3 мл вода/ pH, нагласено на 7 с натриев хидрохлорид /се прибавя натриев цианоборхидрид /80 мг/. Сместа се разбърква в продължение на 20 часа, след което се обработва по метода, описан в пример 24. Масспектърът на пречистения чрез L Н-20 продукт показва молекулен йон при 510 м/е за дитриметилсилилираните видове. Тънкослойната хроматография върху силикагел показва едно петно с = 0.7 при използване на система от етил ацетат/оцетна киселина/нбутанол/вода в съотношение 1:1:1:1.

- 52 Диастереоизомерите се разделят при хроматографиране върху смола XAD -2 по метода, описан в пример 25.

Ь1-/1'-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -З-ф л у орала ни лL -пролин се получава по метода, описан в пример 26.

Пример 59. Ь1-/1-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланилL -3,4-дехидропрояия.

По метода, описан в пример 26, L -аланил-L -3,4-дехидропролин, получен в пример 37, се превръща в 11-/1/-етоксикарбонил-

3-фенилпропил/-Ь -аланил-L -3,4-дехидропролин под формата на двукомпонентна диастереомерна смес. Тънкослойната хромотография върху силикегел показва две петна cR^ 0.79 / допълнително малко/ при две развивания в система от н-бутанол/вода/оцетна киселина в съотношение 4:1:1. Масспектърът показва молекулен Йон при 518 м/е за дитриметил силилираните видове.

Пример 60. 1М-/1/57-метоксикарбонил-2-/1Н-имидазол-4-ил/етил/-0 1галанил-Ь -пролин.

По метода, описан в пример 16, L -хистидин метилов естер се кондензира с пиррвоил- L -пролин в присъствието на натриев цианоборхидрид до получаване на М-/1-метоксикарбонил-2/1Н-имидазол-4-ил/етил/-1> 1халанил-Ь -пролин. ЯМР спектърът в деутерирана вода показва имидазолни протони при 8.6 и пря 7.3. Протоните, съседни на имидазола, и метил естерните протони се явяват при 3.7, а оланил метила - при 1.1 до 1.38.

Пример 61. И-/1/$/-карбокси-2-/1Н-имидазол-4-ил/етил/]> Ь-аланил-Ь -пролин.

По метод, подобен на описания в пример 17, продуктът, получен в пример 60, се характеризира до получаване на очакваната дикиселина. ЯМР спектърът в деутерирана вода показва имидазоловите протони при 7.2 и 8.5; и аяаниновия метил при

1.25 ί.

Пример 62. П-/1/Г/-етоксикарбонил-5-аминопентил/-1) ,L аланил-L -пролин.

Разтвор на е-бензилоксикарбонил-L -лизин етилов естер хидрохлорид /2.94 г/ във вода /10 мл/ се алкализира с 15 мл наситен разтвор на калиев бикарбонат и се акстрахира с метилен хлорид. Екстрактът се суши над магнезиев сулфат и се концентрира до сухо. Остатъкът от ^-бензил оксикарбонил-L-лизин етилов естер, се разтваря в тетрахидрофурат /ТХФ/ /20 мл/ и се прибавят пирувоилпролин /555 мг/ и прахообразно молекулно сито № 4А /1.0 г/. Сместа се разбърква при стайна температура в продължение на 4 часа. В продължение на 2 часа се прибавя разтвор на натриев цианборхидрид /630 мг/ в 1 мл метанол и сместа се разбърква в продължение на една нощ. След това се филтрира, концентрира се до сухо, и остатъкът се разпределя между вода /10 мл/ и метилен хлорид /15 мл/. Водната фаза се абсорбира върху силно кисела йонообменна смола и се елюира с 4Х-ен разтвор на пиридин във вода до получаването на 470 мг N-/I/5/етоксикарбонил-5-бензилоксикарбониламинопентил/-В ,L -аланилL -пролин. Защитната група се отстранява чрез хидриране в етонол-вода /1 към 1/ над 10%-ен паладий/ въглен при 40 пси/паунди на квадратен инч-абсолютно налягане. Сместа се фиртрира и филтратът се изпарява до сухо. Остатъкът се разтваря в метанол и се хроматографира върху колона L Н-20 до получаването на желания К-/1/$‘/-етоксикарбонил-5-аминопентил/-Ь ,Ь-аланил-L -пролин. Масспектърът на силилирания материал показва рпик при 559 м/е за трисилилираното производно и пик при 487 м/е за дисилилираното производно. ЯМР спектърът в деутерирана вода потвърждава структурата.

- 54 Пример 63. М-/1/5/>карбокси-5-оминопентил/-Ь -аланил-L пролин.

Полученият в пример 62 М-/1/5/-етоксикарбонил-5-бензилоксикарбонил-аминолентил/-]) ,L -аланил-L -пролин се обработва с 0.1 М - разтвор на натриев хидроксид при стайна температура в продължение на една нощ. След абсорбция на продукта върху силно кисела йонообменна смола, продуктът се елюира с 4%-ен разтвор на пиридин във вода до получаването на Г1-/1/$/-карбокси-

5-бензилоксикарбониламинопентил/-Ь ,L -аланил-L -пролин, който при тънкослойна хроматография показва едно петно с R 0.4 , /проявителна система бутанол-вода-пиридин-оцетна киселина в отношение 10:4:3:1/. По метод, подобен на описания в пример 62, защитната група се отстранява чрез хидриране до получаването на 1Ч-/1///-карбокси-5-оминопентил/-5 ,L -аланил-Ь -пролин. Масспектърът на триметилсилилирания продукт е в съответствие със структурата и има масов пик при 531 м/е. Хроматографията води до получаване на желания изомер.

Пример 64. 1\1-/Ь-карбокси-6-аминохексил/-Ь -аланил-L пролин.

Бензил 2-оксо-7-фталимидохептаноат, получен след алкилиране на бензил 1,3-дитиан-2-карбоксилат с 5-фталимидопентил бромид и след окислителна конверсия до кетона с N-бромсукцинимид се кондензира с L -аланил-L -пролин в присъствието на излишък от натриев цианобърхидрид. Кондензационният продукт К-/1гбензилонсикарбонил-6-фталимидохексил/-Ь -аланил-L пролин /390 мг/ в 25 мл 50% смес от етанол и вода се хидрира при 40 пси/абс. налягане в паунди на квадратен инч/ върху ЮХ-ен паладий/въглен. С отстраняването на разтворителя и катализатора се получава 1Ч-/1-карбокси-6-фталимидохексил/- 55 L -аланил-Ь -пролин /320 мг/, който има очакваните спектрални и хроматографски характеристики. Част от получения по-горе междинен продукт /152 мг/ в 2 мл етанол се кипи на обратен хладни/* с хидразин /32 мг/ в продължение на час и половина. Фталхидразидът се отстранява чрез филтриране; етанолът се дестилира във вакуум и остатънът се обсорбира върху силно кисела йонообменна смола. Елюирането с 2£-ен воден разтвор на пиридин и сушенето чрез замразяване дава желания К-/1-карбокси-

6-аминохексил/-Ь -аланил-L -пролин /58 мг/. Спектралните данни са в съответствие със структурата. Масспектърът показва пик при 311 за молекулния йон минус вода / 329-18/.

Пример 65. К-/1гбензилоксикарбонил-6-аминохексил/-Ь аланил-L пролин.

При осъществяване на хидролизата по описания в пример 64 начин, на Ь1-/Ь-бензилоксикарбонил-б-фталимидохексил/-Ь -аланилL -пролин се получава смес, от която може да се изолира N-/Lбензилоксикарбонил-6-аминохексил/^ -аланил-L -пролин. Тънкослойната хроматография върху силикагел при елюиране със смес от 50 бутанол, 41 оцетна киселина и 30 вода, дава петно с R_F0,32.

Пример 66. М-/1-карбокси-2-феноксиетил/-Ь -алинил-L· пролин.

Суспензия на феноксипирвгроздена киселина /1.8 г/, получена чрез кондензация на етил феноксиацетат с диетил оксалат, последвана от католитична кисела хидролиза и декарбоксилиране, и Lаланил-L-пролин /0.37Г* / в 10 мл вода, с pH, нагласено на 7 с разредена натриева основа, се обработва натриев цианоборхидрид /0.18 г/ и се разбърква при стайна температура в продължение на пет дни. На втория и третия ден се прибавят допълнително кетокиселина /0.9 г/ и натриев цианоборхидрид /0.18 г/.

- 56 Продуктът се абсорбира върху силно кисела йонообменна смола, елюира се с 2%-ен разтвор на пиридин във вода и след сушене чрез замразяване се получава 0.5 г 1Ч-/1-карбокси-2-феноксиетил/-Ь -аланил-L -пролин. ЯМР спектърът е в съответствие със структурата. Масспектърът показва пик при 479 за силилирвния молекулен йон минус метил /494-15/.

Пример 67. 1Ч-/1~етоксикарбонил-2-феноксиетил/-Ь -аланилL -пролин.

Чрез взаимодействие на етил фенокси пируват, получен чрез естерификация, катализирана с киселина, от съответната киселина,и L -аланил-L -пролин с натриев цианоборхидрид в етанолов разтвор и чрез изолиране на продукта по описания в пример 66. начин може да се получи Ь1-/1-етоксикарбонил-2-феноксиетил/L -аланил-L - пролин.

Пример 68. Ь[-/1-карбокси-2-фенилтиоетил/-Ь -аланил-L пролин.

Смес от фенилтиопирогроздена ниселина /1.96 г/, получена чрез кондензация на етил фенилтиоацетат с диетилоксалат и след това чрез кисела хидролиза и декарбоксилиране, и L -аланилL -пролин /0.37 г/ в 10 мл вода, с pH, нагласено на 7.0 с разреден разтвор на натриев хидроксид, се обработва с натриев цианоборхидрид /0.18 г/ в 2 мл вода. След разбъркване в продължение на една нощ при стайна температура продуктът се абсорбира върху силно кисела йонообменна смола и се елюира с 2*-ен разтвор на пиридин във вода до получаването на 0.36 г 1\[-/1-нарбокси-

2-фенилтиоетил/^-аланил-L-пролин. ЯМР и масспектрите потвърждават желаната струнтура. Масов пик при 348 показва молекулния йон /366/ минус вода /18/.

- 57 Пример 69. М-/1'-етоксикарбонил-2-фенилтиоетил/-Ь -аланилL -пролин.

Чрез взаимодейъствие на етил фенилтиопируват, получен от киселината чрез естерификация, и L -аланил-L -пролин с натриев цианоборхидрид в етанолов разтвор по описания в пример 68. начин и чрез изолиране на продукта по описания също там начин може да се получи И-/1^етоксикарбонил-2-фенилтиоетил/-Ь аланил-L -пролин.

Пример 70. 1М-/1-етоксикарбонил-3-р-хлорфенилпропил/^ аланил-L -пролин.

Разтвор на етил 4-р-хлорфенил-2-оксобутират, получен от киселината чрез естерификация с етанол в тетрахлорметан при кипене на обратен хладник, и L -аланил-L -пролин в етанол се обработва с излишък от натриев цианоборхидрид при стайна температура и разбъркване до завършване на реакцията. Етанолът се отстранява във вакуум и продуктът се абсорбира върху силно кисела йонообменна смола. Чрез елюиране с 2Х-ен разтвор на пиридин във вода може да се получи И-/1гетокси-карбонил-3-р-хлорфенилпропил/-Ь -аланил-L -пролин.

Пример 71. ?1-/1>-етоксикарбонил-2-/3-иидолил/етил/^аланил-L -пролин.

По описания в пример 26 начин, етиловият естер на индол-3-пирогроздената киселина се кондензира с L-аланил-Ь пролин в смес 1:1 етанол и вода с помощта на тариев цианоборхидрид. Чрез изолиране върху Dowex 50 по описания начин се получава смес от изомери на М-/1-етоксикарбонил-2/3-индолил /етил/-Ъ -аланил-L -пролин. ЯМР спектърът показва абсорбция при 7.0 ί /5Н/, 4.2 /5Н/, 3.4 <Г /2Н/, 2.9 672Н/, 1.9 /6Н/ и 1.2 if/бН/.

- 58 Пример 72. 1М-/1~етоксикарбонил-2-р-аминометилфенилетил/L -аланил-L· -пролин.

Етил 2-оксо-З-р-цианофенилпроланоат, получен при взаимодействие на р-цианобензил бромид с етил 1,3-дитиан-2-карбоксилат и последваща окислителна хидролиза по метода, описан от Eliel and Hartmann, J. Org, Chem., 37, 505 (1972) се кондензира c L -аланил-L -пролин и продуктът се пречиства по метода, описан в пример 1. Хидриране на получената в резултат смес от изомери на М-/1-етоксикарбонил-2-р-цианофенилетил/~ L -аланил-L -пролин в етанолов разтвор, съдържащ хлороводород и паладий върху въглен като катализатор. Дестилиране на разтворителя и излишния хлороводород във вакуум, заливане с етанол и концентриране до сухо за получаване на хидрохлоридите на смесите от диастереоизомери на желаното съединение.

Пример 73. Ь1-/1”Карбокси-2-р-аминометилфенилетил/-Ъ аланил-L -пролин.

Проба от М-/1-етоксикарбонил-2-р-цианофенилетил/^ аланил-L -пролин, получен по-горе в пример 72, се обработва с един еквивалент натриев хидроксид в смес от метанол и вода като разтворител при стайна температура в продължение на една нощ. Чрез дестилирането на разтворителите във вакуум се получават натриевите соли на сместа от изомери на N-/Lкарбокси-2-цианофенилетил/-Ь -аланил-L -пролин. Този смес се хидрира в разтвор на етанолова солна киселина и се разработва по описания в пример 72 начин до получаване на хидрохлоридите на сместа от диастереоизомери на желания продукт.

Пример 74. 1М-/1~етоксикарбонил-2/5/-амино-3-фенилпропил/D ,1галанил-Ь -пролин.

Към смес от М-фталоил-L -2-амино-З-фенилпропионалдехид

- 59 (Petf.rson et al., J. Am. Chem. Soc., 79, 1398 (1957), /2.18 г/ и калиев метабисулфид /0.87 г/ в смес от вода и метанол в съотношение 1:1 се прибавя натриев цианид /0.55 г/ при енергично разбъркване. Разбъркването продължава 90 мин, след което сместа се разрежда с етилацетат и се филтрира. Органичният слой се промива с вода и се суши над магнезиев сулфат. Разтворителят се отстранява във вакуум до получаването на N-фталиол-

3-амино-4-фенил-2-хидроксибутиронитрил, тънкослойна хроматография с етилацетат /хексан в съотношение 1:1 дава петно с RF 0.5.

Приготвя се разтвор на този продукт в абсолютен етанол, който се насища с амоняк и престоява в продължение на 6 дни при стайна температура. Разтворителят се отстранява, остатъкът се поема в диоксан/концентрирана солна киселина в съотношение 1:1, затопля се до температура 70°С и се държи при тази температура в продължение на 20 часа. Изпаряване на разтворителя до сухо суспендиране на остатъка с топла вода, филтриране и пречистване върху силно кисела Йонообменна смола по обичайния начин до получаването на /2R,S ; 35 /-2-амино-4-фенил-3-фталоиламинобутаноена киселина. Разтварянето на киселината в безводен етанол, пропускане на безводен хлороводород до насищане и поддържане на сместа при стайна температура в продължение на 16 часа. Отстраняване на разтворителя във вакуум до получаване на хидрохлорида на етиловия естер на амино-киселината. Кондензиране на този етил 2-амино-4-фенил-3-фталиламино-бутаноат с пирувоил-L -пролин натриев цианоборхидрид, както е описано в пример 16, до получаването на Ь1-/1-?етоксикарбонил-3-фенил-

2-фталоиламинопропил/-Ь ,L -аланил-L -пролин под формата на смес от изомери. Кипене на обратен хладник на този материал в етанол с един енвивалйт хидразин в продължение на час и половина охлаждане, филтриране на фталхидразида и изолиране на желания продукт от получената смес чрез хроматографски методи до получаването на М-/1-карбетокси-2/5/-амино-3-фенилпропил/-Р ,L аланил-L -пролин. ЯМР спектърът при 300 МН* има пикове при 7.3 <Г /5Н/, 3.2 и 4.4 <?/ЗН/, 2.75 <Г /2Н/, 2.0 ί /4Н/ и 1.1 8 !(М/.

Пример 75. К-/1гкарбокси-2/5/-амино-3-фенилпропил/-Ь ,L аланил-L -пролин.

Получената в пример 74 2-амино-4-фенил-3-/5/-3-фталоиламинобутаноена киселина се кондензира с пирувоил L -пролин с помощта на натриев цианоборхидрид, както е описано в пример 16, до получаването на Ь1-/1гкарбокси-3-фенил-2-фталоиламино-1> ,L аланил-L -пролин като смес от изомери. Кипи се на обратен хладник този материал в етанол заедно с един еквивалент хидразин в продължение на час и половина, охлаждане, филтриране на фталоилхидразида, изолиране на желания продукт чрез хроматографски методики до получаване на посоченото в заглавието съединение. Тънкослойната хроматография върху силикагел при елюиране с етилацетат към 5 пиридин към I оцетна киселина към 3 вода дава нетно петно с R_F0,15.

Пример 76. М-/1-карбокси-2/5/-бензоиламино-3-фенилпропил/· D ,L -аланил-L -пролин.

Оставя се разтвор на П-фталоил-3-амино-4-фенил-2-хидрокси бутиронитрил, получен в пример 74, в етанол, наситен с безводен амоняк, да престои в продължение на 3 дни при стайна температур Отстранява се разтворителят във вакуум и остатъкът се кипи на обратен хладник в продължение на 6 часа в концентрирана солна киселина. Изпарява се до сухо, пречиства се остатъкът в колона от Dowex 50 (Н+) ί йонообменна смола, при елюиране

- 61 последователно с вода /метанол/ 10:1, вода/пиридин/50:1 и накрая с 0.5 М разтвор на амониев хидроксид. От този последен елюент се изолира след концентриране до сухо желаната 2,3-диамино-4фенил пропионова киселина. Приготовлява се разтвор на меден комплекс на тази аминокиселина и бензоилат при аминогрупата в трета'позиция ин ситу с бензоил хлорид при алкални условия и по метода, описан от R· Hoeske ет al., J, Am. Снем. Soc. ,> 73, 5883 (1956).Разцепване на медния комплекс със сяроводород и обработка на сместа по описания начин до получаването на 2амино-3-/$/-бензоиламино-4-фенил маслена киселина. Кондензиране на този междинен продукт с пирувоил 2-пролин с помощта на натриев цианоборхидрид по начина, описан в пример 16, до получаването на желания Г1-/(-карбокси-2/5/-бензоиламино-3фенилпропил/-В _L __аланил- L -пролин под формата на смес от изомери, които могат да бъдат разделени чрез хроматографски методи в даден случай. Масспектралният анализ показва пик при 596 м/е за дисилилирания молекулен йон минус IS. ЯМР спектърът показва абсорбция за два фенила при 7.0-7.5 $ и за диастереомерни метили при I.I cP .

Пример 77. П-/1-етоксикорбонил-2-/$/-бензоиламино-3фенил-пропил/-]> ,L -аланил-L -пролин.

Чрез обработване на 2-амино-3-бензоиламино-4-фенил маслена киселина, получена в пример 76, с наситен разтвор на хлороводород в абсолютен етанол в продължение на 4 ч и последващо дестилиране на разтворителя във вакуум може да се получи етил

2-амино-3-бензоиломино-4-фенил бутират хидрохлорид. Чрез кондензирането на този междинен продукт с пирувоил -L -пролин с помощта на натриев циано борхидрид по начина, описан в пример 16, и изолирането на продукта по описания пак там начин може да

- 62 се получи посоченото в заглавието съединение.

Пример 78. И-/2-амино-1-карбокси-4-метилпентил/-1> ,L аланил-L -пролин.

Разтвор на 0.731 г транс-3-амино-4-/2-метилпропил/-2азетидинон, получен чрез прибавяне на хлорсулфонил изоцианат към 4-метил-1г-пентен; получениятJ^-лактам се защитава като терц. бутилдиметилсилилно производно и след това се обработва с литиев диизопропиламид, последван от тозил азид и хлотриметилсилан; след подкисляването и хроматографирането върху силикагел се получава тронс-3-азидо-4-/2-метилпропил/-2-азетидинон, който се хидрира с 10% паладий/въглен в етанол до съответното аминопроизводно и 4.58 г бензилпируват в 20 мл абсолютен етанол, съдържащ 10 г прахообразно молекулно сито 4А, се обработва на капки с разтвор на натриев цианоборхидрид /0.65 г/ в 8 мл абсолютен етанол при разбъркване до завършване на реакцията. Реакционната смес се филтрира и филтратът се концентрира. Остатъкът се разтваря в 50 мл вода и се подкислява с I N разтвор на солната киселина до рНЗ. Сместа се алкализира с ЮХ-ен разтвор на натриев карбонат, водният разтвор се насища с натриев хлорид и се екстрахира с етилацетат /5x40 мл/. Събраните органични слоеве се сушат над натриев сулфат и се концентрират до получаването на масло /4.94 г/. Чрез хрйатографирането върху силикагел /етилацетат/ се получава I.N г продукт. ЯМР и масспектрограмите са в съответствие със структурата на П-/транс-4-/2-метилпропил/-2-оксо-3-азетидинил/-1> ,L -аланин бензилов естер. Дебензилирането се осъществява чрез хидриране с ЮХ-ен паладий/въглен, в смес от етанол/вода при съотношение 2:1. Студен разтвор с температура 0°С на киселината /428 мг/

- 63 и на L -пролин терц.бутилов естер /377 мг/ е 5 мл диметилформамид се обработва с разтвор на дифенилфосфорил азид /605 мг/ в 5 мл диметилформамид и след това с разтвор на триетиламин /223 мг в 5 мл диметилформамид/ в продължение на 20 минути. След три часа ледената баня се отстранява и реакционната смес се разбърква при стайна температура в продължение на една нощ. Прибавя се етилацетат /100 мл/ и полученият разтвор се промива с вода /2x40 мл/, 5Х-ен разтвор на натриев карбонат /3 х 30 мл/ и вода /1 х 50 мл/ преди сушене с натриев сулфат. Чрез концентрирането се получава масло 0.78 г, чиито ЯМР и масспектри са в съответствие със структурата на 1Ч-/транс-4-/

2-метилпропил/-2-оксо-3-азетидинил/-0 ,1/ -аланил-L·-пролин бутилов естер. Суровият продукт се разтваря в 25 мл трифлуороцетна киселина при температура 0°С. Реакционната смес се разбърква при 0°С в продължение на 20 мин и след това при стайна температура в продължение на два часа и половина. Реакционната смес се концентрира до суха и остатъкът се обработва с I N разтвор на натриев хидроксид /30 мл/ в продължен та четири и половина часа при стайна температура. Алн' а смес бавно се прибавя към силно кисела йонообменн^г <- ,^\α и продуктът се извлича с 2%-ен разтвор на пиридин V вода. Сушенето чрез за-

S' мразяване води до получаване ^г а г М-/2-амино-1-карбокси-

4-метилпентил/-Р ,Ь-алаи сл -пролин, състоящ се от четири

V диастереомера (S,S,S,о, R,$; R,R, R, 5 ; R, R, 5 » S'; /които могат да се разделят чрез хроматография. ЯМР и масспектрите са в съответствие със структурата. ЯМР спектърът показва мултиплети, центрирани при 4,5, 3.85, 2.3, 1.79 и при 1.16 ррм. Масспектрограмата сочи пик при 458 м/е /молекулен йон на дисилилиран материал минус 15/.

BAD ORIGINAL $

- 64 Пример 79. Ν-/2-ομμηο-Ι· -етоксикарбонил-4-метилпентил/Р ,L -аланил-L· -пролин.

Един междинен продукт, получен в пример 78, И-/транс-

4-/2-метилпропил/-2-оксо-3-азетидинил/-В ,L -аланин /125 мг/ може да кондензира с L -пролин бензилов естер хидрохлорид /167 мг/ в присъствието на дифенилфосфорил азид /191 мг/ и триетиламин /140 мг/ в диметилформамид разтвор до получаването на 217 мг М-/транс-4/2-метилпропил/-2-оксо-3-азетидионил/ -Р ,L· -аланил-L -пробензилов естер. Бензиловата защитна група може да бъде отстранена чрез хидриране и ^-лактамът може да бъде отворен с безводен нотри^ев етоксид в етанол и така може да се получи Ь1-/2-амино-1 -етоксикарбонил-4-метил-пентил/D ,L -аланил-L· -пролин.

Пример 80. М-/2-бензамидо-1’Корбокси-4-метилпентил/Р ,L -аланил-L -пролин.

Разтвор на И-/2-амино-1'Карбокси-4-метилпентил/-Р ,L аланил-L -пролин/, получен по описания в пример 78 начин, във водна алкална среда се обработва с бензоил хлорид до получаването на М-/2-бензамидо-1-карбокси-4-метилпентил/-Р ,L аланил-L -пролин. Масслектърът на дисилилирания материал има пикове при 562 /М⁺ -15/, 460, 389 /основен пик/, 364, 242 и 174 м/е.

Пример 81. Ь1-/2-бензамидо-1-етоксикарбонил-4-метилпентил/Р ,L -аланил-L -пролин.

При обработване на разтвор на И-/2-амино-1· -етоксикарбониj

4-метилпентил/-Р ,L -аланил-L -пролин/, получен по описания в пример 79 начин, в органичен разтворител с бензоил хлорид може да се получи И-/2-бензамидо-1 -етоксикарбонил-4-метил- 65 пентил/ Г ,L -аланил-L -пролин.

Пример 82. N- tZ -/1-етоксикорбонил-3-фенилпропил/-Ь алгинил- Ь -пролин.

По метода, описан в пример 37, се нондензира N-^-терц. Boc-N-W-нитро-Ъ -аргинин N-хидрокси сукцинимидов естер с L -пролин в смес от диоксан и вода, отстранява се защитната група N-<Z -терц.Вос с трифлуороцетна киселина и дипептидът се изолира по описания начин. Присъединяването на получения продукт с етил 2-оксо-4-фенилбутират и изолирането по описания в промер 26 начин води до получаването на материал с U -азотен атом на аргенина, все още зощитен с нитрогрупа. Отстраняването на защитната група с каталитично хидриране в етанол-оцетна киселина над паладий/върху въглен като катализатор при стайна температура и 40 паунда налягане на водорода. Чрез филтрирането на катализатора и дестилирането на разтворителите във вакуум се получава смес от изомери на N-./-/1 -етоксикорбонил/-3фенилпропил/-Ь -аргинил-L -пролин.

Пример 83. Ν-Z, -/1-карбокси-3-фенилпропил/-В ,L -хомолизил-L -пролин.

Кондензацията на N-^-бензилокси-карбонил-Ν-,Ζ,-3°бутоксикарбонил-D ,L -хомолизин/, получен от хемолизин през меден комплекс с L-пролин-З⁰ бутилов естер, може да се осъществи с помощта на дефинилфосфорилазид. След това 3° бутилните групи могат да бъдат отстранени с трифлуороцетна киселина и продуктът UJ-бензилоксикарбонил-D , Хгхомозолил-Ь-пролин може да взаимо действа с 2-оксо-4-фенилмаслена киселина и натриев цианоборхидрид Кондензационният продукт може да бъде дебензилиран чрез каталитич но хидриране, така че да се получи N-<£-/!· -карбокси-3-фенилпропил/-Р ,L -хомолизил-L -пролин.

- 66 Пример 84. N-Z -/I’еток_сикарбонил-3-фенилпропил/-В ,

L -хомолизил-L· -пролин.

Междинният продукт, описан в пример 83, N- и) -бензилоксикарбонил -D ,L -хомолизил-L -пролин, може да взаимодейства с етил 2-оксо-4-фенилбутират и натриев цианоборхидрид. Кондензационният продукт може след това да се хидрира над паладий/въглен, така че да се получи N-^ -/1-етонсикарбонил-

3- фенилпропил/-Р ,L -хомолизил-L -пролин.

Пример 85. М-5/-/Т-карбокси-3-фенилпропил/-^-аминоР ,L -аланил-L -пролин.

При алкални условия В ,Ь-^, β-диоминопропионова киселина взаимодейства с излишък от бензилоксикарбонилхлорид да получаването при подкисляване на D , L - А / -бис/бензилоксикарбониламино /-пропионова киселина/ т.т. 123.5 - 124°С. Към хлороформен разтвор, съдържащ този продукт, се прибавя фосфорен пентахлорид до получаване при разработка на D,L-

4- /бензилонсикарбониламинометил/-оксазолидин-2,5-дион. Разтвор на L -пролин терц. бутилов естер в метилен хлорид се прибавя към М-карбок_сианхидрида в тетрахидрофуран при температура -60°С. След престояване в продължение на една нощ в условия на замразяване сместа се изпарява до сухо. Получава се суров продукт. Трифлуороцетната киселина, която ефективно отцепва терц.бутил естерна група в продължение на два часа при стайна температура и в резултат се получава смес от L -пролин и £-бензи локсикарбониламино-Ь ,L -аланил-L -пролин. Чрез гел хромото графско филтриране в колона Ь Н-20 се получава чист дипептид.

Кондензират се 2-оксо-4-фенилмаслена ниселина и бензилоксиШ1 UP

BAD ORIGINAL Д ^каР^бони/,амин°-1) ,L-аланил-L-пролин в присъствието на натриев ^{1 11} ' ..... цианоборхидрид. След отстраняването на защитната група от получения продукт се получава Г1-/1-карбокси-3-фенил-пропил/ ^-амино-D ,L-аланил- L>-пролин. ЯМР спектърът в деутерирана . ------„„ нплнлтии ппптпни пои 7.4 cP. метинови протони

- 67 при 4.2 о и мултиплети при 3.7, 3.2, 2.9 и 2.1

Пример 86. Ν-Ζ-/Ι -етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь амино-D ,L -аланил-L -пролин.

Разтвор на β -бензилоксикарбониламино-Р ,L -аланил-L пролин, получен при описания в пример 85 начин, и етил 2оксо-4-фенилбутират се кондензират в етанол с натриев цианоборхидрид. Защитната група може да се отстрани от продукта чрез каталитично хидриране до получаването на И-^-/1гетоксикарбонил-3-фенилпропил/-^ -амино-Р ,L -аланил-L -пролин.

Пример 87. 1Ч-/1/5/-етоксикарбонил-3-фенилпропил-0,L р-аминометилфенилаланил-L -пролин.

Етил 2-оксо-З-р-цианофенилпропионат, получен в пример

72, се хидролизира чрез разбъркване с 5*-ен разтвор на натриев хидроксид при стайна температура в продължение на една нощ. Реакционната смес се промива с етер, подкислява се водният слой до pH 2 с концентрирана солна киселина, екстрахира се продуктът в смес от етер и етилацетат и разтворителят се отстранява до получаването на 2-оксо-З-р-цианофенилпропионова киселина. След редуктивното присъединяване на киселината с етилов естер на L -хомофенилаланин в присъствието на натриев цианоборхидрид и следващо пречистване, както е описано в пример 13, се получава сместа от диастереоизомери на N-/I-/5/карботекси-3-фенил-пропил/-Р ,L -р-цианофенилаланил-L -пролин като бензилов естер. След хидрирането на този междинен продукт в етанол, съдържащ хлороводород върху паладий/въглен, по описания в пример 72 начин и обработка на сместа по посочения в с същия пример начин се получава желаният продукт под формата на смес от диастереоизомери.

- 68 Пример 88. N-Z -/1/5/ карбокси-3-фенилпропил/-Р ,L-pамино-метилфемилаланил-L -пролин.

М-/1-/5/-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Р , Ь--р-цианофенилаланил-L -пролин бензилов естер, получен в пример 87, се хидролизира чрез обработване с два еквивалента натриев хидроксид в смес от метанол и вода при стайна температура в продължение на една нощ. Разтворителят се отстранява от реакционната смес, чрез дестилация във вакуум и остатъкът се хидрира в етанолова солна киселина по описания в пример 72 метод. След обработване на сместа по-нататък по описания в същия пример начин се получава смес от диастереоизомерите на желания продукт.

Пример 89. -/1 -етоксикорбонил-3-фенилпропил/-Мацетил-L - лизил-L -пролин.

По описания в пример 26 метод етил 2-оксо-4-фенилбутират се присъединява към К-£-ацетил-Ь -лизил-L -пролин в разтворител смес от етанол и вода в присъствието на натриев цианоборхидрид. След изолирЯето с помощта на Dowex 50 по описания начин и сушенето чрез замразяване на богатите на желания продукт фракции се получава сместа от изомери на N-/Tетоксикарбонил-3-фенилпропил-/-11-£. -ацетил-L -лизил-L -пролин. Масспектърът на трисилилирания материал има пикове при 663 /М*/, 648 /М + - 15/ и при 546 м/е.

Пример 90. N-Ζ -/Ь-етоксикарбонил/-Ь -хистидил-L -пролин.

Както е описано в пример 26 етил 2-оксо-4-фенилбутират взаимодейства с L -хистидил-L -пролин в присъствието на натриев цианоборхидрид. След пречистването по описания начин се получава сместа от диастереоизомери на M-X-/I -етоксикарбонил/-Ь -хистидил-L -пролин.

- 69 Пример 91. N-/-/ етоксикарбонил-3-/-нафтилпропил/-Ь лизил-L -пролин.

Етил А-^-нафтил -2-оксобутират, получен чрез алкилироне на етил 1,3-дитиан-2-карбоксилат с 2-</-нафталитил бромид и последващо превръщане с кетон с N-бромсукцинимид във воден ацетон се кондензира с£-3° бутоксикарбонил-L -лизил-L -пролин в етанол в присъствието на натриев цианоборхидрид и молекулни ситат След това продуктът се абсорбира върху силно кисела йонообменна смола и се елюира с 2%-ен разтвор на пиридин във вода. Отцепването на терц.Вос защитна група може да се осъществи чрез обработване с 4.0 N разтвор на солна киселина в етилацетат и така да се получи М-/-/>етоксикарбонил-3-/,-нафтилпропил/L -лизил-L -пролин.

Б. Г'1-_!/,-/1'-карбокси-3-/-нафтилпропил/-Ь -лизил-L -пролин.

4-Ζ -нафтил-2-оксомаслена киселина, получена от естера чрез хидролиза, се суспендира във вода и pH на средата се нагласява наа 7 с помощта на разредена натриева основа, след което се подлага на сушене чрез замразяване. Остатъкът се обработва с -зО-бутоксикарбонил-L -лизил-L -пролин по описания в част А. начин до получаването на Ь1-/-/Ь-карбокси-3/-нафтилпропил/^ -лизил-L -пролин.

Пример 92. N-</-/1/5/ карбокси-3-р-хлорфенилпропил/-Ълизил-L -пролин.

Разтвор Ha£-3°-6yTOKCHKap6oHnn-L -лизил-L -пролин /0.36 г/ и 4-р-хлорфенил-2-оксомаслена киселина /1,1 г/ в 5 мл вода след нагласяване на pH на средата на 7 с помощта на разредена натриева основа, се обработва с 0.07 г цианоборхидрид в 1 мл вода в продължение на няколко часа. След разбъркване на сместа при стайна температура в продължение на една нощ продуктът се

- 70 абсорбира върху силно кисела йонообменна смола и се елюира с 2^-ен разтвор на пиридин във вода до получаването на 0.058 г продукт. ЯМР спектърът показва, че терц.Вос-защитна група не е отцепена напълно. Продуктът се обработва с 4.5 N хлороводород в етилацетат, последвано от изолиране с помощта на йонообменна смола до получаването на 0.048 г И-_</-/1гкарбокси-

3-р-хлорфенилпропил/-Ь -лизил-L -пролин. ЯМР и масспектрите са в съответствие със структурата- Пик при 584 отговаря на силилирания молекулен йон. Чрез хромотографиране се получава желаният изомер.

Пример 93. К-,/-/1-етоксикарбонил-3-р-хлорфенил/-Ь -лизилL -пролин.

При кондензиране на етил 4-р-хлорфенил-2-оксобутират и £-3°-бутоксикарбонил-Ь -лизил-L -пролин в етанолов разтвор в присъствие на излишък от натриев цианоборхидрид и изолиране на продукта по описания в лр_имер 92 начин се получава N-//1гетоксикарбонил-3-р-хлорфенилпролил/-Ь -лизил-L -пролин.

Пример 94. Ν-ο(-/Ι карбокси-3-/3,4-дихлорфенил/-пропил/L -лизил-L -пролин.

Разтвор на 4-/3,4-дихлорфенил/-2-оксомаслена киселина, получена от дихшордихидроцинаматен естер чрез кондензиране с етилоксалат и последваща кисела хидролиза и частично декарбоксилиране, се обработва във вода по описания в пример 92 метод до получаване на N-/-/L карбокси-3-/8,4-дихлорфенил/ пропил-L -лизил-L -пролин. ЯМР спектърът в деутерирана вода показва ароматен водород при 7.30 £ широк синглет при 4.35 δ и широки мултиплети при 3.53, 3.00, 2.68, 1.98 и 1.65 §. Масспектърът показва пик при 455 м/е, който съответства на загуба!

- 71 на вода от съответната структура. Голям М+2 /457 м/е/ изотоп показва присъствието на 2 CI.

Пример 95. М-^(-/1/6/-карбокси-3-/3-индолил/пропил/-Ь лизил-L -пролин.

Получава се 2-оксо-4-/3-индолил/-маслена киселина от хомотриптофан по метода описан от Weygand ет al., Ann. 658,128 (1962). Тази киселина се кондензира с е-терц.Вос-L -лизил-L -пролин в присъствието на натриев цианоборхидрид по описания в пример 54 начин до получаването на сурова смес от диастереоизомери на М-^-/1”Нарбокси-3-/3-индолил/пролил-Ь1-£ -терц.Вос-L -лизилL -пролин. Масспектърът на трисилилирания материал има пикове при 732 /М*/, 717 /М* -15/, 615, 660, 645 м/е. Защитната група на лизиновата странична верига се отцепва чрез обработка с 4 N хлороводород в етилацетат и прочистване върху силно кисела йонообменна смола по описания в пример 54 начин до получаване на желания продукт. Чрез хроматографиране може да се получи желаният изомер.

Пример 96. N~t/-/6-aMMHO-Ir нарбоксиетил/-Ь-лизил-Lпролин.

Бензил 2-оксо-7-фталимидохептаноат и 6-3°-бутоксикарбонилL -лизил-L -пролин се кондензират с излишък от натриев цианоборхидрид в етанолов разтвор до получаването на N-Ζ -/1-бензилоксикарбонил-6-фталимидохексид/-К1-£-3⁰-бутоксикарбонил-Ь лизил-L -пролин. След това може да се отстрани бензиловата група чрез хидриране над паладий/въглен, а терц.Вос защитна група може да се отцепи с 4.5 N хлороводород в етилацетат, и фталимидната група чрез обработка с хидразин до получаване на М-₀/-/6-амино-Ь-карбоксихексил/-Ь -лизил-L· -пролин.

Пример 97. М-₀£-/6-амино-Ь-бензилоксикарбонилхексил/- 72 L- лизил-L -пролин.

Чрез обработване на М-^/Ь-бензилоксикарбонил-б-фталимидохексил/-И-£ -З-бутоксикарбонил-L -лизил-L -пролин, получен по описания в пример 96 метод с 4.0 N хлороводород в етилацетат и след това с един еквивалент хидразин при кипене на обратен хладник 8 етанол, при което може да се получи смес, от която да се изолира М-^/б-амино-Т -бензилоксинарбонилхексил/-Ь -лизил-L -пролин.

Пример 98. М-/-/5-амино-1-/5/-карбоксипентил/^ -лизилL-пролин.

Бензил 2-оксо-6-фталимидохексаноат се обработва по описания в пример 96 начин до получаването на Н-^/Б-амино-

1-карбоксипентил/-Ь -лизил-L -пролин. След хроматографирането се изолира желаният изомер. Масспектърът показва молекулен йон за дисилилираните видове при 516 м/е, М* - 15 йон при 501 м/е и пик при 399 м/е, съответващ на загубата но силилиран карбоксил.

Пример 99. Г1-₀(-/5-амино-1’-бензилоксикарбонилпентил/L -лизил-L -пролин.

Бензил 2-оксо-6-фталимидохексаноат може да се обработи по описания в пример 96 начин, с изключение на това, че дебензилирането с водород върху паладий се изпуска. От сместа на продуктите може да се изолира желаният N-_£/-/5-omhho-I’бензилоксикарбонилпентил/-Ь -лизил-L пролин.

Пример 100. А. К-</-/1?-карбокси-2-феноксиетил/-Ь-лизилL-пролин.

Феноксипирогроздена киселина /0.9 г/ се разтваря във вода, pH се нагласява на 7 с разреден разтвор на натриев хироксид и разтворът се подлага на сушене чрез замразяване. Остатъкъ

- 73 Остатъкът се разтваря в 10 мл етанол и се обработва с£-3°бутоксикарбонил-L -лизил-L -пролин /0.36 г/ и прахообразно молекулно сито ‘ί^? 4А /3.0 г/. На порции към сместа се прибавя натриев цианоборхидрид /0.18 г в 3.5 мл етанол/ и реакционната смес се разбърква при стайна температура до завършване на реакцията. Продуктът се изолира чрез абсорбция върху силно кисела йонообменна смола и елюиране с 2Х-ен разтвор на пиридин във вода, последвано от сушене чрез замразяване до получаване на 0.25 г незащитен продукт, N-</-/1 'Карбокси-2-феноксиетил/-Ь лизил-L -пролин. ЯМР и масспектрите на продукта са в съответствие със структурата му.

Б. М-_с/-/1’-етоксикарбонил-2-феноксиетил/-Ь лизил-Lпролин.

Етил феноксипируват се обработва с £-3°-бутоксикарбонилL -лизил-L -пролин по описания в пример 100 А начин до получаването на М-^-/1-зтоксикарбонил-2-феноксиетил/-Ь-лизил-Lпролин. ЯМР спектърът показва фенилна абсорбция, центрирана при 7.3 о и широки пикове при 4.6, 4.4, 4.2, 3.7, 3.2 и 1.9 (?.

Пример 101т А. 1Ч-_с/-/1/5/-карбО1{СИ-2-фенилтиоетил/-Ь лизил-L -пролин.

Фенилтиопирогроздена киселина се обработва с£-3°бутоксикарбонил-L -лизил-L·-пролин по описания в пример 100 начин до получаването на М-_с£-/1'-карбокси-2-фенилтиоетил/-Б лизил-L -пролин. Масспектърът показва силилиран молекулен йон при 567 м/е. След хроматографирането се получава желаният изомер.

Б. Ь1-₀(-/1-етоксикарбонил-2-фенилтиоетил/^ -лизил-L пролин.

Обработва се аналогично етил фенилтиопируват с4-3°- 74 бутоксикарбонил-L -лизил-L -пролин по описания в пример 100А начин до получаването на Г1т/-/1.-етоксикарбонил-2-$енилтиоетил/L -лизил-L· -пролин.

Пример 102. К-_с/-/1-карбокси-2-/57-амино-3-фенилпропил/£>,L -лизил-L· -пролин.

Етил 2-амино-4-фенил-3-фталимидобутаноат може да се кондензира с 2-оксо-6-фталимидохексаноена киселина, получена чрез алкилиране на бвнзил 1,3-дитиан-2-карбоксилат с фталимидобутилбромид, последване от окисляване и хидролиза в присъствието на натриев цианоборхидрид по метода описан в пример 13. Полученият в резултат на междинен продукт може след това да взаимодейства с L -пролин бензилов естер хидрохлорид с помощта на дифенилфосфорил азид, както е описано в същия пример, до получаването на смес от изомери на М-/-/1г-етоксикарбонил-2/5 /-фталимидо-3-фенилпропил/-Ь1-£ -фталоил-D ,L -лизил-L· пролин бензилов естер, пречистен чрез колонна хроматография. След това продуктът може да се оброботи с два еквивалента натриев хидроксид в етанол-вода в продължение на четири часа при стайна температура, да се неутрализира до pH 4 с концентрира на солна киселина, да се отдестилира етанолът във вакуум, продуктът да се екстрахира с етилацетат и разтворителят да се отстрани във вакуум. След това полученият остатък се кипи на обратен хладник в етанол, съдържащ 2 еквивалента хидрадин в продължение но час и половина, и се изолира по описания в пример 74 начин, така че в резултат се получава желаното съединение.

Пример 103. М-/-/1-карбокси-2-/5/-бензоиламино-3фенилпропил/-Р ,Ь -лизил-L· -пролин.

Етил 2-амино-3-бензоиламино-4-фенилбутаноат, получен в пример 77/, се нондензира с 2-оксо-6-фталимидо хексаноена

- 75 коселина в присъствието на натриев цианоборхидрид по метода, описан в Пример 13. Полученият в резултат Ь1-/-/1-Карбетокси-2/ 5/-бензоиламино-3-фенилпропил/-К1-£ -фталоил-D ,L -лизин след това може до се присъедини към L -пролин бензилов естер хидрохлорид с помощта на дифенилфосфорилазид по описания в пример начин до получаването на смес от изомери на Ν-,/-/1-καρ6βτοκοπ2/б/-бензоиламино-3-фенилпропил/-И-£-фталоил-D ,Ь -лизилЬ- пролин бензилов естер, пречистен чрез хроматография. След обработването на този продукт с два еквивалента натриев хидроксид в смес от етанол-вода в продължение на четири часа при стайна температура и след разработка на сместа по описания в пример 102 начин се получава 1М-_с/-/1гкарбонси-2-/5/-бензоиламино-3фенилпропил/-Г1- ^-фталоил-D ,L -лизил-L -пролин. При кипене на този продукт на обратен хладник в продължение на час и половина в етанол и присъствието на един еквивалент хидразин и изолиране на продукта, както е описано в пример 74, може да се получи желаното съединение като смес от изомери.

Пример 104. И-_</-/2-амино-1-карбокси-4-метилфенил/-Р , L -лизил-L -пролин.

Транс-3-амино-4-/2-метилпропил/-2-азетидинон, получен в пример 78, в етанол може редуктивно да се присъедини към банзил

2-оксо-6-фталимидохексаноат при използването на натриев цианоборхидрид и молекулни сита. След това продуктът N-/-/4-/2метилпропил/-2-оксо-3-азетидинил/-М-£-фталоил-В ,L- лизинбензилов естер може да бъде дебензилиран чрез хидриране върху паладий, получената свободна киселина и бензилов естер на пролина могат да взаимодействат в присъствието на дифенилфосфорил азид. След това полученият продукт може да бъде дебензилиран, както е описано по-горе, и да се получи N-</-/4 /2-метилпропил/-2-оксо-3-азетидинил/-М-£-фталоил-D ,L лизил-L -пролин. Фталоилната група може да бъде отстранена в етанолое разтвор с един моларен еквивалент хидразин при стайна температура до получаването на Ь1-_а(-/4/2-метиллропил/-2-оксо-3азетидинил/-Р ,L -лизил-L -пролин. Чрез хидролиза с разреден разтвор на натриев хидроксид при разтваряне на β -лактамния пръстен може до се получи К-д(-/2-амино-и -карбокси-4-метилпентил/-Р ,L -лизил-L -пролин.

Пример 105. М-^-^-бензамидо-! -карбокси-4-метилпентил/D ,L-лизил-L -пролин. М-с/-/4/2-метилпропил/-2-оксо-3-азетидинил/-Н-⁴£-3°-бутоксикарбонил-0 ,L -лизин бензилов естер може да бъде получен от 3-транс-4-/2-метилпропил/-2-азетидинон /пример 78/ и бензил 3°-бутокси карбониломино-2-оксохексаноат. Бензилната група може да бъде отцепена чрез хидриране и полученият продукт да се присъедини с L-пролин бензилов естер, полученият продукт М-_</-/4-/2-метилпропил/-2-оксо-3-азетидинил/-И-£-3°-бутоксинарбонил-Р ,L -лизил-L -пролин бензилов естер след това може да се дебензилира чрез хидриране и L лактамът да се хидролизира с разредена основа до получаването на М-/-/2-амино-1· -карбонси-4-метилпентил/-И-£-3°-бутоксикарбонил-D ,L -лизил/-Ь-пролин. След бензоилирането с бензоил хлорид в органичен разтворител и отцепване на терц. Вос защитна група с трифлуороцетна киселина може да се получи М-о(-/2-бензоамидо-Ь-карбокси-4-ментилпентил/-1) ,L -лизилL- пролин.

Пример 106. Ь1-/-/1-/5/-карбонси-3-р-хлорфенилпропил/-Ьлизил-транс-4-метонси-Ь-пролин.

Метил-транс-4-метокси-Ь-пролинат хидрохлорид се присъединява към N-^-Tepq.Boc-N-t-Cbz -L -лизин при използване на

- 77 дициклохексилкарбодиимид и триетиламин в метиленхлорид по описания в пример 20 начин. Полученият продукт се пречиства чрез хроматография, естерът се хидролизира, и терц.Вос-защитна група се отстранява по описания в посочения пример начин. След това този t-Cbz -L -лизил-L -4^-метоксипролин се присъединява редуктивно към 2-оксо-4-р-хлор|енил маслена киселина, получена от р-хлорхидроканелена киселина, етилов естер, чрез катализирано с алналии кондензиране с диетилоксалат, последвано от декарбоксилиране с безводен хлороводород в оцетна киселина, в присъствието на натриев цианоберхидрид и по-нататъшна обработка на сместа по описания в пример 24 начин до получаване на смес от изомери но М-_</-/Ь-карбокси-3-р-хлорфенилпропил/-М-Cbs -L -лизил-транс-4-метокси-Ь пролин. Отцепва се бензилоксикарбонилна защитна група чрез каталитично хидриране върху паладий върху въглен като катализатор по известния начин.

След хроматографирането на получената смес се изолира желаният изомер. Масспектърът има пикове при 584/М⁺ ♦!/, 568 /м⁺ -15/, 466, 397, 366 и 352 /основен пик/ за дисилирания материал.

Пример 107. N-/-/I -корбокси-3-р-хлорфенилпропил/-Ь лизил-L -4-тиазолидин карбонсилова киселина.

N-<Z-Tepq.Boc-bI-е-Cl^ -L -лизин може да се присъедини към I -тиазолидин-4-карбоксилова киселина, бензилов естер, хидрохлорид, полученият продукт да се пречисти чрез хроматография, естерът да се хидролизира и терц.Вос-защитната група да се отстрани по описания в пример 20 начин. Чрез редуктивно присъединяване на получения продукт с 2-оксо-4-р-хлорфенилмасйната киселина по описания в примера начин може да се получи смес от изомерите на N-/-/J- карбокси-3-хлорфенилпропил/- 78 N-£-Cb2 -L -лизил-L· -4-тиазолидин карбоксилова киселина.

Чрез отстраняване на бензилоксикарбонилната защитна група чрез обработна с бромводород в оцетна киселина при стайна температура по начин, стандартен за пептидната химия, дистилиране на разтворителя във вакуум, заливане с вода на остатъка и сушене чрез замразяване може да се получи желаният продукт.

Пример 108. N-^-/1 -карбокси-З-р-хлорфенилпропил/Ь лизил-D ,L -транс-5-метилтиазолидин-4-карбоксилова киселина.

3.7 от транс-5-метилтиозолидин-4-карбоксилова киселина етилов естер, хидрохлорид, получен от /, -бромкротонова киселина и тиаоцетамид, кисела хидролиза на получения продукт до L метилцистеин и последващо взаимодействие с формалдехид аналогично на метода /използван от Ч, F. Nutt et al., Abstractsj of the бтн American Peptide Symposium, Washington, d.C.

(1979), 1+16, P.95) . взаимодейства c 7.4 r N-/ -терц.Вос-СЬг-L -лизин, при използване на 2.8 мл триетиламин и

4.5 г дициклохексилкарбодиимид в метилен хлорид по описания в пример 20 начин. При редуктивно присъединяване на получения междинен продукт към 2-оксо-4-р-хлорфенилмаслено киселина при използване на натриев цианоборхидрид и след това отстраняване на бензилоксикарбонил защитната група по описания в пример 107 начин, може да се получи H-/-/I· -карбокси-3-рхлорфенилпропил/-!/ -лизил-D ,L -транс-5-метилтиазолидин-

4-карбоксилова киселина под формата на смес от изомери.

Пример 109. N-/-/I -карбокси-3-р-хлорфенилпропил/-Ь лизил-L· -3,4-дехидропролин.

Конденз^ане на L -3,4-дехидропролин, етил естер, хидрохлорид с Ь1-/-терц.Вос-Ь1-£.-СЬг-11 -лизин, отстраняване на терц.Вос защитна г_рупа с 4 М хлорводород в етилацетат,

- 79 редуктивно присъединяване на междинния продукт с 2-оксо-4-рхлорфенилмаслена киселина. След отстраняване на защитната група с бромводород в оцетно киселина и по-нататъшна обработка на реакционната смес по описания в пример 107 начин се получава смес от изомерите на И-^-УЬ-карбокси-З-р-хлорфенилпропил/-Ь -лизил-L -3,4-дехидролролин.

Пример 110. 1'1-/1~карбонси-4-метилфенил/-Ь -аланилL -пролин.

Разтвор на 5-метил-2-оксохексаноена киселина /1.44г/ и L -аланил-L -прЯин /0.37 г/ в пет мл вода с pH, нагласено на 7, се обработва с натриев цианоборхидрид /0.31 г/. След разбъркване при стайна температура в продължение на пет дни, реакционният продукт се абсорбира върху силно кисела йонообменна смола и се елюира с 2°4-ен разтвор на пиридин във вода до получаването на 0.6 г изсушено чрез замразяване твърдо вещество. Част от него /0.2 г/ се пречиства чрез хроматография върху L Н-20 до получаване на 0.18 г Г1-/1--карбокси-4-метилфенил/-Ь -аланил-L -пролин. ЯМР и масспектрите са в съответствие с очакваната структура. Диастереомерите могат да бъдат изолирани чрез хроматография. В масспектъра се наблюдават пинове на дисилилирания материал при 458 /М⁺/, 443 /М⁺ -15/, 341, зо1 и 244 м/е/ основен пик/.

Пример III- К-/1/б/-етоксикарбонил-4-метилфенил/-Ь аланил-L -пролин.

Етил 5-метил-2-оксохексаноат /3.44 г/ и L -аланил-L пролин /0.74 г/ се разбъркват в 15 мл етанол с 6 г прахообразно молекулно сито 4А. В продължение на няколко дни на капки се прибавя разтвор на натриев ционборхидрид /0.23 г/

- 80 в етанол. След това етанолът се отстранява във вакуум, продуктът се абсорбира върху силно кисела йонообменна смола и се елюира с 2% разтвор на пиридин 8ъв вода до получаването на 1.08 г 1\1-/1~етонсинарбонил-4-метилфенил/-Ь -аланил-L -пролин. Част от продукта се пречиства върху колона L Н-20 /хроматогрофски/ за целите на спектралния анализ. ЯМР спектърът е в съответствие със структурата. Масспектърът показва пик при 414 /силилиран молекулен йон - 15/. След хромотографиране на продукта се получава желаният изомер.

Пример 112. N-/L -нарбон_си-3-р-феноксифенилпропил/-Ь аланил-L -пролин.

Смес от 2-оксо-4-р-феноксифенилмаслена киселина, получена при взаимодействие на р-феноксифенил Гринярдов реактив с етилен оксид, превръщане на получения в резултат алкохол в бромид и кондензация на продукта с етил 1,3-дитиан-2-карбоксилат. След окислително отцепване на дитиана, последвано от алкална хидролиза, се получава кето киселината и L -аланил-L -пролин във вода с pH, нагласено на 7, с разредена основа, се обработва с излишък от натриев цианоборхидрид. Продуктът N-/Irкарбокси-3-р-феноксифенилпропил/-Ь -аланил-Ь -пролив се изолира чрез хромотография. Масспектърът на дисилилирания материал съдържа пинове при 584/М*/, 569 /М⁺ -15/, 468 и 370 м/е/ основен пик/.

Пример 113. И-/1-етоксикарбонил-3-р-феноксифенилпропил/-Ь аланил-L -пролин.

Етил 2-оксо-4-феноксифенилмаслена киселина, получена по описания в пример 112 начин, като само крайната алкална хидролиза е пропусната, се кондензира с L -аланил-L -пролин в присъствието на натриев цианоборхидрид, така че да се получи

- 8] М-/1^етоксикарбонил/-3-р-феноксифенилпропил/-Ь -аланил-L· пролин.

Пример 114. Ь1-/Ь-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L D ,L -3,3-диметил-пролин.

3,3-диметил-Г ,L -пролин се получава от З-метил-2-бутенал по метода на Cox, J. Снем, Soc., 1964, 5024 ^{и се}превръща в метилов естер хидрохлорид с метанолова киселина. Полученият продукт се присъединява към терц.Вос-аланин, след това междинното вещество се кондензира с 2-оксо-4-фенилмаслена киселина по метода, описан в пример 47, до получаването на смес от изомери на желания продукт.

Пример 115.

А. Ь1-/1-карбокси-3-фенилпропил/^ -5-бензил-цистеинил L -пролин.

Кондензирането на 1-М-терц.Вос-5-бензилцистеин с L-пролин терц. бутилов естер в присъствието надицикловексил карбодиимид по обичайния начин води до получаването на I -/N-терц.Вос-бензилцистеинил/-Ь -пролин-терц.Вос бутилов естер. Този блокиран дипептид се обработва след това с 4N хлороводород в етилацетат при температура 0°С до получаването на L -/£ бензилцистеинил/-Е -пролин. След обработката на този дипептид с 2-оксо-4-фенилмаслено киселина в присъствието на натриев цианоборхидрид се образува Н-/1-карбонси-3-фенилпропил/-Ь /5 -бензилцистеинил/-Ь -пролин под формата на смес от изомери.

Б. Ь1-/1-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -цистеинил-L -пролин. ГТ-/1~карбокси-3-фенилпропил/-Ь -5-бензилцистеинил-Ь пролин, получен по-горе в част А, се обработва с натрий в течен амоняк до получаването на желаното съединение.

- 82 Пример 116. N-</-/1 -карбокси-3-фенилпропил/-1/-орнитил-L пролин.

N-S-Tepq.Boc-L -орнитил-Ь -пролин и 2-оксо-4-фенилмослена киселина кондензират в присъсътвието на натриев цианобор_хидрид по описания в пример 54 начин. Защитната група се отстранява от получения продукт при използване на етилацетат с 4 N газообразен хлороводород. Суровият диастеомерен хидрохлорид се абсорбира върху силно кисела йонообменна смола и се елюира с 2Х-ен воден разтвор на пиридин. Масспектърът показва молекулен йон при 355 м/е за продукта минус 36. ЯМР спектърът съответства на структурата на продуктат

Пример 117. Ь1-_с/-/1/5/-етоксикорбонил-3-фенилпропил/-Ь лизил-L -пролин.

Етил 2-оксо-4-фенилбутират/2.58 г/ и М-терц.Вос-L лизил-L -пролин /859 мг/ се разтварят в абсолютен етанол /5 Омл/ и към разтвора се прибавят /2.0 г/ смлени молекулни сита 4А. При завършване на реакцията, ситото се отстранява чрез филтриВне. След изпаряване на филтрата остатъкът се разтваря във вода, екстрахира се с естер и се абсорбира върху силно кисела йонообменна смола. След елюирането с 2^-ен разтвор но пиридин във вода се получава 639 мг суров продукт етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь1-£_-терц.Вос-Ь -пролин. Защитната група се отстранява с етилацетата, нойто е 4 N в газообразен хлороводород. Полученият в резултат хидрохлорид се абсорбира върху силно кисела йонообменна смола и се елюира с 2л-ен воден разтвор на пиридин до получаването на 270 мг продукт. Масспектърът показва молекулен йон при 678 м/е за дисилилироните видове плюс единица. ЯМР спектърът е в съответствие със структурата.

- 83 При хроматографиране се получава желаният изомер.

Пример 118. М-7-/1-карбокси-3-фенилпропил/-Н-£-М-^диметил-L -лизил-L -пролин.

Ь1-/-терц.Вос-Ь1-£,-СЬг-Ь -лизил-L -пролин бензилов естер се метилира редуктивно във формалдехид/ 10%-ен паладий/въглен, при 40 паунда/квадратен инч налягане на водорода. /-терц.Восзащитна група се отцепва с етилацетат, който е 4N в газообразен хлороводород. По метода, описан в пример 54, 2-оксо-4фенилмаслена киселина и N-^-N-£-диметил-L-лизил-L -пролин се кондензират в присъствието на натриев цианоборхидрид. Масе спектърът показва молекулен йон при 415 за продукта, минус 18. ЯМР спектърът е в съответствие със структурата.

Пример 119. М-_х/-/1/5/-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -лизилL -пролин.

N-/ -/1-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -лизил-L -пролин, смес от диастереомери, получена по метода от пример 57Б, се пречиства чрез гел филтриране върху хромотографска колона L Н-20. XAD -2 колона, получена по описания в пример 25 начин се еквилибрира при температура 53^РС, с 0.1 М-ен овониев хидроксид, съдържащ 4% ацетонитрил. Изомерната смес /250 мг/ се разтваря в 10 мл от посочения по-горе разтаворител и се я прибавя към колоната. Когато колоната се елшата със същия разтворител, първият изомер се появява при обема на елюира в границите от 320-360 мл. Вторият изомер се появява в границите от 450-540 мл елюат. Междинните фракции съдържат смес от изомерите. когото фракциите, съдържащи първия изомер, се сушат чрез замразяване, се получават 72 мг от пухкаво бяло твърдо вещество, което представлява по-активния изомер и представлява SSSконфигурация по аналогия с по-активния изомер на Г1-./-/1.-карбонси-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L-пролин, за който чрез анализ с X лъчи е установено, че има SSS конфигурация. При тънкослойна хроматография върху силикагел в смес в съотношение 1:1:1:1:1 от етилацетат/п-бутанол/вода/оцетна к киселина, твърдото вещество дава едно единствено петно, което има Rf от 0.43.300 MHZ ,ЯМР спектър показва триплет за метиновия протон у до фенилния заместител при 3.40 ррм. Когато фракциите, съдържащи втория изомер, се сушат чрез замразяване, се получават 72 мг от бяло пухкафо твърдо вещество, което вещество при тънкослойно хроматография върху силикагел дава единствено петно с Rf от 0.39.300' MHZ , ЯМР спектър показва триплета на метиновия протон у спрямо фенилния заместител при 3.61 ррм.

Пример 120. М-у-/1гкарбокси-3-Фенилпропил/-Ь1-£-оцетилL -лизил-L -пролин.

По метода, описан в промер 54, 2-оксо-4-фенилмеслената киселина и N-£-ацетил-L -лизил-L -пролин се кондензират в присъствието на натриев цианоборхидрид до получаването на Г1-,/-/Ь-карбокси-3-фенилпропил/-]М-£-ацетил^ -лизил-L -пролин. ЯМР спектърът на получения продукт е в съответствие със структурата му. масспектърът показва молекулен йон при 663 за трисилилираните видове.

Пример 121. N-^-/1-карбокси-З-фенилпропил/^-аргинилL -пролин.

Необходимият дипептид се получава при кондензация на N-_/-Tepa.Boc-N-u/-HHTpo-L -аргинин и L-пролин бензилов естер хидрохлорид по карбодиимидния метод. Защитната -терц. Вос група се отстранява по известен метод с 4 N хлорводород газ в етилацетат и полученият в резултат N-VU-hhtpo-L * аргинил-L -пролин бензилов естер се кондензира с 2-оксо-4фенилмаслена киселина, както е описано в пример 24.

При реакцията се получава Н-/-/1гкарбокси-3-фенилпропил/N -О-нитро-L -аргинил-L -пролин бензилов естер със сравнително нисък добив /25-33%/. Това съединение /159 мг/ се разтваря в смес /2.5 мл/ на оцетна киселина /вода/метанол /84%, 8Х, 8$/ и се хидрира при 40 паунда/инч'¹ налягане водород при стайна температура в присъствие на 130 мг 10%-ен паладий/ въглен за едновременно отстраняване на W-нитро- и бензилестерната защитна група. Катализаторът се филтрира и филтратът се изпарява до сухо /94 мг/, водоразтворимата част на получения остатък се суши чрез замразяване до получаването на пухкаво бяло вещество /90 мг/. Това твърдо вещество представлява ацетатната сол на желания продукт и свободната база се получава чрез абсорбиране върху силно кисела йонообменна смола, промиване с вода и след това елюиране с 2%-ен разтвор на пиридин във вода. При сушене чрез замразяване на богатите на продукт фракции се получават 60 мг М-^~/Т'-карбокси-3-фвнилпролил/^ -аргинилL-пролин. ЯМР спектърът е в съответствие със структурата, масспектърът показва молекулен йон при 793 за пентасилилираните видове.

Пример 122. К-/1'Карбокси-3-фенилпропил/-Ь -хистидилL -пролин.

По метода, описан в пример 54, 2-оксо-4-фенилмеслена киселина и L-хистидил-L -пролин се кондензират в присъствието на натриев цианоборхидрид до получаването на N-/L -карбокси-

3-фенилпропил/-Ь -хистидил-L -пролин. Продуктът се пречиства чрез гел филтриране в хроматографска колона /L Н-20/ в метанол. ЯМР спектърът му е в съответствие със структурата. Масспентърът

- 86 показва молекулен йон при 657 за дисилилираните видове.

Пример 123. N-/-/L -карбонси-2-/3-индолил/етил/-Ь лизил-L -пролин.

По метода описан в пример 54, индол-3-пирогроздена киселина се кондензира с N-£-Tepq.Boc-L-лизил-L-пролин в присъствието на натриев цианоборхидрид. Защитната-^.-терц.Вос група се отцепва от продукта с 4 N хлороводород в етилацетат. полученият в резултат хидрохлорид се абсорбира върху Dowex 50 /Н⁺/ и се елюира с 2%-ен разтвор на пиридин във вода. Сушенето чрез замразяване на фракциите, богати на продукта води до получаване на свободната база във вид на светлокафяво пухкаво вещество. ЯМР спектърът на този продукт е в съответствие със структурата му. Масспектърът показва молекулен йон при 718 за трисилилираните видове.

Пример 124. N-./-/I -етоксикорбонил-4-метилпентил/-Ьлизил-L пролин.

Разтваря се 2-оксо-4-метил-етилпентаноат /2.75 г/ в 150 мл етанол, съдържащ 16 г прахообразно молекулно сито 4А. Хидрира се при абсолюютно налягане 40 паунда/инч на водорода при стайна температура върху 1 г 10%-ен паладий/въглен. След като се поеме 1 мол водород, катализаторът се филтрира, като филтърният кейк се промива внимателно с етанол. Разтворителят се изпарява до получаването на 5.87 г масло. Маслото се суспендира във вода, рН на средата се нагласява на 8.5, и се екстрахира с етилацетат /3 х 60 мл/, за отстраняване на неутралните материали. рН на средата се нагласява на 7, насища се с натриев хлорид и се екстрахира с етилацетат /3 х 100 мл/. Разтворът на продуктът се суши над безводен магнезиев сулфат. Етилацетатът се изпарява до получаването на 4.38 г суров N-/-/L -етоксинарбонил-4-метилпентил/-Ь1£-терц.Вос-Ь -лизил-L -пролин. Терц.Вос-защитна група се отстранява по обичайния начин с 4 N хлороводород гад в етил ацетат. Превръщане на получения хидрохлорид в свободна база със силно кисела йонообменна смола, която се елюира с 2%-ен разтвор на пиридин във вода. При сушене чрез замразяване на богатите на продукт фракции се получават 2.1 г хигроскопично ронливо вещество. ЯМР спектърът на този продукт е в съответствие със структурата на М-/-/1гкарбетокси-4-метилфенил/-Ь -лизилL -пролин. Масспектърът дава пик при 472 за моносилилирания молекулен йон плюс единица.

Пример 125. Ь1-/-/1-карбокси-4-метилпентил/-Ь -лизил-L пролин.

Хидролизира се Г1-/-/1-етоксикарбонил-4-метилпентил/-Ь лизил-L -пролин до съответната карбоксилова киселина при разбъркване във воден разтвор на натриев хидроксид /2.5 еквивалента/ при стайна температура в продължение на няколко дни. Реакционната смес се подкислява до pH 5, абсорбира се върху силно кисела йонообменна смола и се елюира с 2%-ен разтвор на пиридин във вода. Богатите на продукт фракции се сушат чрез замразяване до получаване на N-/L -карбокси-

4-метилпентил/-Ь -лизил-L -пролин във вид на бяло пухкаво вещество. ЯМР спектърът е в съответствие със структурата му. Масспектърът показва молекулен йон при 516 за дисилилираните видове.

Пример 126. N-/-/I -карбокси-3-фенилпропил/-Ь -левцилЬ -тринтофан.

По метода, описан в пример 54, 2оксо-4-фенилмаслена

- 88 киселина и L -левцил-L -триптофан се кондензират в присъствието на натриев цианоборхидрид. Продуктът се суши чрез замразяване из смес от диоксан/вода, докато стане само леко водоразтворим. ЯМР спектърът е в съгласие със структурата. Масспектърът показва молекулен йон при 695 за трисилилираните видове.

Пример 127.

A. Таблетки. Типичната таблетка съдържа И-/1/5/-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L -пролин /25 мг/, предварител но желатинизирано нишестеc/SP /82 мг/, микрокристална целулоза /82 мг/ и магнезиев стеарат/I мг/. По подобен начин например Н-/1/5/-нарбокси-3-фенилпропил/-Ь -лизил-L -пролин/20 мг/ може да бъде та_блетиран на мястото на М-/1-/$/-етоксикарбонилЗ-фенилпропил/^-аланил-L-пролин, със състава от предварително желатинирано нишесте, микрокристална целулоза и магнезиев стеарат, описан по-горе.

Б. Комбинирани таблетки. Комбинирана таблетка с диуретик, като хидрохлоротиазид обикновено съдържа Ь1-/1/б/-етоксикарбонил-3-фенил-пропил/-1галанил-Ь -пролин /7.5 мг/, хидрохлоротиазид /5 Омг/, предварително желатинизирано нишесте//5Р /82 мг/, микрокристална целулоза /82 мг/ и магнезиев стеарат /I мг/. Таблетки, с например М-/1/5'/-карбокси-3-фенилпропил/L -лизил--Ь -пролин/ 5 мг/ и хидрохлоротиазид /50 мг/ се приготвят като посоченото активно вещество се използва на мястото на Ь1-/1/5/-етоксикарбонил-3-фенилпропил. в сътава, описан по-горе.

B. Инжекции. Типичната форма за инжекции съдържа N-/I/S/каарбокси-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L -пролин /5.42 мг/, безводен натриев фосфат /11.4 мг/, бензилов алкохол /0.01 мл/ и вода за инжекции /1.0 мл/. Аналогично, тази формулировка може да бъде приготвена рпри използване, например на N-/I/5/карбокси-3-фенил-пропил/-Ь -лизил-L -пролин на мястото на Г1-/1/5/-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L -пролин. Такава форма за инжекции може да съдържа също фармацевтично ефективно количество от друго антихилертензивно или диуретично средство, например хидрохлортиазид, както е описано в пример Б по-горе.

Г. Супозитории. Типичните супозитории за реактално приложение съдържат ГТ-/1/5/-етоксикарбонил-3-фенилпролил/-Ь аланил-L· -пролин/1-25 мг/ бутилиран хидроксианизол /0.08-1.0 мг/, динатриев калциев етилендиаминтетраацетат /0.25-0.5 мг/ и полиетилен гликол / 775-1600 мг/. Други супозиторийни форми могат да бъдат приготвени, например като замести посоченото по-горе активно вещество с М-/1-/5/-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -лизил-L -пролин и при замяна например на динатриевия калциев етилендиаминотвтраацетат с бутилиран хидрокситолуол /0.04-0.08 мг/ и полиетилен гликола с хидрирано растително масло /675-1400 мг/, като Супозир L ,векобее Р5 ,Векобее

I.’, Витепсоли и др. подобни. По-нататък тези супозиторийни форми могат да включват други антихипертензивни или диуретични седства във фармацевтично ефективно количество, както е описано например в частите Б и В на същия пример.

Пример 128. М-/1-етоксикарбонил-3-/3-индолилпропил/-Ь аланил-L -пролин.

Разтвор на L -аланил-L -пролин /0.35 г/ и на етил-4/3-индолил/-2-оксобутират /1.0 г/ в 30 мл етанол се хидрира с 10%-ен паладий/ въглен в присъствието на 3.2 г прахообразно молекулно сито /34А/ при абсолютно водородно налягане 40 паунда на квадратен инч. След завършване на реакцията,

- 90 суспензията се филтрира и филтратът се концентрира до сухо. Овтанолото масло се разтваря в 5 мл метанол и се хроматографира върху Сефадекс L Н-20 колона до получаването на 0.67 г суров продукт под формата на оранжево масло. Част от суровия продукт /0.3 г/ се пречиства чрез разтваряне във вода и екстрахиране с етер. Продуктът се извлича от водната фаза чрез разреждане с равен обем наситен разтвор на натриев хлорид и екстрахиране с етилацетат до получаването на 80 мг N-/I -етоксикарбонил-

3-/3-индолил/ пропил/-Ь -аланил-Ь -пролин под формата на жълто масло. Масспектърът показва пикове при 559 за дисилилирания продукт и при 632 за три-силилирания продукт.

Пример 129. Бензил М-/1/6/-карбонси-3-фенилпропил/-!/ аланил-L· -пролинат.

Тионил хлорид /13.1 мл/ се прибавят към 150 мл бензилов алкохол при поддържане на температурата, по-ниска от 0°С /екзотермична реакция/. На порции към студения разтвор се прибавят 15г К-/1/4/-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L· пролин. Охлаждащата баня се отстранява и реакционната смес се разбърква при стайна температура в продължение на една нощ. След нагряване до температура 45°С във вакуум за отстраняване на разтворените газове, реакционната смес се разрежда с 500 мл етер и се промива с 10 х 100 мл вода. Твърдото вещество, което се появява в органичния слой се филтрира и суши до получаване на 4.9 г суров монобензилов естер.

Събраните водни екстрати се неутрализират с натриев бикарбонат, при кое<5 се получава втора реколта от 1»4 г продукт. Продуктът от двете реколти се събира и част от него /1.0г/ се прекристализира из етанол-вода до получаването на 0.95 г чист монобензилов естер, т.т. 120-125°С. Уасспектърът

- 91 показва, че бензиловият естер е прикрепен към пролиновия пръстен. Пример 130. етил М-/1-/6/-етоксикарбонил-3-фениллропил/-Ь аланил-L -пролинат хидрохлорид.

Разтвор на 3.0 г М-/1/5/-етоксикарбонил-/3-фенилпропил/L -аланил-L -пролин в 50 мл абсолютен етанол се насища с газообразен хлороводород при температура 0°С. След престояване при температура 0°С в продължение на една нощ, хлороводородът и етанольт се отстраняват във вакуум до получаване на 3.1 г масло, което при сушене чрез замразяване дава бяло твърдо вещество. Тънкослойната хроматография и високоефективната течна хроматография /ВЕТХ/ сочат, че продуктът се състои само от един компонент. ЯМР спектърът поназва две етилни групи за ароматно ядро. Масспектърът показва молекулен йон при 404 м/е.

Пример 131. Г1-/1.-етоксикарбонил-3-/2-хлорфенил/пропил/L -аланил-L -пролин.

По метода, описан в пример 26, етил-2-оксо-4-/2-хлорфенил/ бутират и L -оланил-L -пролин се кондензират в присъствието на натриев цианоборхидрид до получаването на Н-/Ьетонсикарбонил-3-/2-хлорфенил/пропил/-Ь -аланил-L -пролин. Масспектърът показва пик при 411 /М +1/ и силен пик при 392 /М - 18/.

Пример 132. Ь1-/1~етоксикарбонил-3-/4-флуорфенил/пропил/L -аланил-L -пролин.

По метода, описан в пример 26, етил 2-оксо-4-/4-флуорфенил/бутират и L -аланил-L -пролин се нондензират в присъствието на натриев цианоборхидрид до получаването на N/1.’-етоксикарбонил-/3-/4-флуорфенил/-пропил/-Ь -аланил-L -пролин. Масспектърът показва молекулен йон при 394 и силни пикове при 376 /М - 18, вода/ и 375 /М -19, флуор/. ЯМР спектърът е в съответствие със структурата.

- 92 Елементният анализ показва, че продуктът е във вид на сескихидрат.

Пример 133. Н-/Т-етоксикарбонил-3-/2-нафтил/пропил/-Ь аланил-L -пролин.

по метода, описан в пример 26, етил 2-оксо-4-/2-нафтил/ бутират и L -аланил-L -пролин се кондензират в присъствието на натриев цианоборхидрид до получаването на М-/1гетоксинарбонил-/3-/2-нафтил/-пропил/-L -аланил-L -пролин. Масспектърът показва молекулен йон при 426 и пик при 408 /М-18, вода/. ЯМР спектърът е в съответствие с предложената структура. Елементният анализ показва, че продуктът е под Формата на хемихидрат.

Пример 134. N-Z-/I'-карбокси-3-/2-хлорфенил/пропил/-Ьлизил-L -пролин.

По метода, описан в пример 26, етил 2-оксо-4-/2-хлорфенил/бутират и М-терц.Вос-Ь -лизил-L -пролин се кондензират в присъствието на натриев цианоборхидрид до получаването на N-Z-/I -етоксикарбонил-3-/2-хлорфенилпропил/-М-£-терц.Вос L -лизил-L -пролин.

Терц.Вос-защитна група се отстранява чрез обработка с

N хлорводород газ в етилацетат и след това етилестерната група се осалунва с разреден разтвор на натриев хидроксид до получаване на N-/-/I -карбокси-3-/2-хлорфенил/пропил/L -лизил-L -пролин след абсорбция върху силнокисела йонообменна смола и елюиране от нея. Елементният анализ показва солватиране с молекула и половина вода. ЯМР спектърът е в съответствие с предложената структура на съединението. Масспектърът на силилираната проба показва пик при 568, който съответства на загуба на маса 15 /метил/ от дисилилираните видове.

- 93 Пример 135. N-7-/L -карбокси-3-/4-флуорфенил/пропил/-

L -лизил-L -пролин.

По метода, описан в пример 134, етил 2-оксо-4-/4-флуорфенил/бутират и И-^-терц-Вос-Ь -лизил-L -пролин се кондензират в присъствието на натриев цианоборхидрид. Полученият в резултат продукт се деблокира по посочения в пример 4 начин до получаването на N-,/-/1 -карбонси-3-/4-флуорфенил/пропил/-L -лизилL -пролин. Елементният анализ показва, че продуктът е под формата на сескихидрат. ЯМР спектърът потвърждава предложената структура. Масспектърът на силилирано проба показва молекулен йон при 711 за тетрасилилираните видове.

Пример 136. 1М-₃/-/Ь-карбокси-3-/2-нафтил/пропил/-Ь лизил-L -пролин.

По метода, описан в пример 134, замествайки етил 2-оксо-

4-/2-Хлорфенил/бутират с етил 2-оксо-4-/2-нафтил/бутират се получава Н-₃/-/1-карбокси-3-/2-нафтил/лропил/^ -лизил-L пролин. ЯМР спектърът е в съответствие с предложената структура, масспектърът показва молекулен йон при 599 за дисилилираните видове.

Пример 137. Етил 2-оксо-4-/2-тианил/-бутират.

Смес от фосфорен трибромид /18.95 г/ и пиридин /3.76 см³/ в 10 мл бензол се охлажда до температура - 5°С и се обработва с разтвор на 2-/2-тианил/-етанол/25 г/ в 10 мл бензол, съдържащ 1.25 см³ пиридин, с такава скорост, че реакционната температура никога да не надвишава 0°С. След това сместа се оставя да се затопли до стайна температура, като се разбърква в продължение на една нощ. След това реакционната смес се концентрира на водна помпа при 30-40°С за отстраняване на разтворителя и други летливи вещества, а остатъкът се подлага

- 94 на клайзенова дестилация под вакуум, осигурен от водна помпа до получаването на 21 г суров продукт/т.к. 115 - 119°С/.

Този продукт след това се подлага но фракционна дестилация при 0.3 мм живак до получаване на 19 г. чист 2-/2-тианил/етилбромид /т.н. 50 - 51°С; чистота 99.9%, определена чрез газ-хроматография/. Този бромид се разтваря в сух тетрахидрофуран /40 мл/ и се прибавя на капки, при разбъркване към смес от магнезиевии стружки /2.4 г/ и 15 мл сух тетрахидрофуран в азотна атмосфера. След това сместа се разбърква и кипи на обратен хладник в продължение на един час, охлажда се до стайна температура и се прибавя на капки в азотна атмосфера и при разбъркване към смес от диетил оксалат /17.5 г/ в 25 мл сух тутрахидрофуран при температура -15°С на банята. След завършване на реакцията сместа се разбърква при температура -10°С в продължение на 15 мин, след това се оставя да се затопли до температура 10°С и се обработва с 60 мл наситен разтвор на амониев хлорид. Водният слой се екстрахира двукратно с толуол, Събраните органични слоеве се сушот над магнезиев сулфат и се концентрират във вакуум до получаване на 16.7 г смес, съдържаща в % тегл. според газ-хроматографския анализ: разтворител 26; диетил оксалат 10.3 и етил 2-оксо-/2-тиенил/бутират 63.4. ЯМР спектърът в деутериран хлорофррм е в съответствие с тази смес, показвайки наличието на два специфични типа етилни естери и масспектърът показва пик при м/е=212 за молекулния йон на един кето-естер заедно с фрагментационния модел, съответстващ на структурата.

Пример 138. N-/L -етоксикарбонил-3-/2-тиенил/пропил/L -аланил-L -пролин.

Прибавя се 4 г молекулно сито тип 4А /прахообразно/ към

- 95 смес от L -аланил-L -пролин /0.93 г/ и етил-2-оксо-4-/2--_ тиенил/бутират/3.18 г/ в 25 мл безводен етилов алкохол. Сместа се разбърква в продължение на 15 минути при стайна температура последвано от бавно прибавяне в продължение на три и половина часа на разтвор на натриев цианоборхидрид /0.785 г/ в 15 мл безводен етилов алкохол и се разбърква в продължение на една нощ при стайна температура. Реакционната смес се прави леко кисели с помощта на ледена оцетна киселина, филтрира се и филтратът се концентрира във вакуум до получаване на оранжево масло.

След екстрахирането на хлороформения разтвор на това масло с 10%-ен разтвор на калиев бикарбонат, последвано от реакстракция на подкислените /до pH 3/ бикарбонатни екстракти с хлороформ и след сушене и изпаряване на разтворителя се получават 400 мг от желания заместен дипептид. ЯМР спектърът в деутериран хлороформ показва тиенилния протон като мултиплет при 7.0 ррм, два активни протона при 6.2 ррм като широк синглет, шест метилни протона като широк мултиплет при 1.22-1.43 ррм и серия от мултиплети в областта на 1.8-4.4 ррм.

Пример 139. N-/I карбокси-3-/2-тиенил/-пропил/-Ь -лизилL -пролин.

Прибавят се 6.95 г молекулни сита от типа 4А/прахообразни/ към смес от L·-И-£-Вос-лизил-Ь-пролин /2.98 г/ и етил-2-оксо-4-/2-тиенил/-бутират /6.4 г/ в 40 мл безводен етилов алкохол. Сместа се разбърква при стайна температура в продължение на 45 мин, последвано от бавно прибавяне /в продължение на четири и половина часа/ на разтвор на натриев цианоборхидрид /1.36 г/ в 25 мл безводен етилов алкохол, разбъркването продължава една нощ при стайна температура, което реакционната смес се прави леко кисела с помощта на ледена

- 96 оцетна киселина, филтрира се и се концентрира във вакуум до получаването но оранжева пяна /16.4 г/. Претриването на този суров продукт с три порции етер и деконтирането на етерния разтвор отстранява значително количество от излишъка на наличния кетоестер. Неразтворимото в етер масло се разбърква в 150 мл 4 N хлороводород /етил ацетат при температура 0°С в продължение на един час и се излива в 1 л. студен етер, филтрира се и се концентрира във вакуум до получаване на оранжево масло. Разтвор на този деблокиран продукт в 250 мл етилов алакохол се обработва с 5 г натриев хидроксид в 35 мл вода и се разбърква при стайна температура в продължение на една нощ. След внимателното подкисляване с 0.5 N солна киселина, концентрирането във вакуум и последващото пречистване чрез елюиране от колона с 150 мл Dowex 50W-X2(H+) с вода, съдържаща 2% пиридин, се получава заместеният дипептид, като дикарбоксилова киселина. ЯМР спектърът в деутерирана вода D CI е в съответствие със структурата.

Пример 140. N-/I -карбокси-3-фенилпропил/-Ь -оланил-Хаминоизомеслена киселина.

Приготвя се смес от 3.9 г метил 7-амино-изобутират хидрохлорид, 8.7 мл триетиламин и 11.9 г Boc-L -аланин в 135 мл метилендихлорид. Прибавя се разтвор на 14.2 г дициклохексилкарбодиимид в 20 мл метиленхлорид и сместа се разбърква при стайна температура в продължение на 48 часа. Сместа се филтрирс и филтратът се концентрира, остатъкът се разпределя между вода и етил ацетат. Органичната фаза се промива с 10%-тна лимонена киселина, с вода, с 5%-ен разтвор на натриев бикарбон и с вода. Суши се над магнезиев сулфат и се концентрира до получаване на суровия дипептид. Суровият продукт се пречиства * 97 върху силикагел чрез елюиране със смес от хексан-етил ацетат в съотношение 7:3. 1.2 г от този дипептид се разтварят в 30 мл 4N хлороводород/етил ацетат и се държи един час при стайна температура. Сместа се концентрира и се суши чрез замразяване из вода до получаване на L -аланил- 7 -аминоизомеслена киселина, метилов естер, хидрохлорид.

Приготвя се разтвор на 688 мг от тази аминокиселина във вид на естер от 949 мг етил 2-оксо-4-фенилбутират и 328 мг натриев ацетат в 10 мл етанол. Тази смес се хидрира над 0.5 г 10%-ен па-ладий/въглен като катализатор и при абсолютно налягане 40 паундо/квадратен инч на водорода. Филтрира се и филтратът се концентрира. Прибавя се 4 мл смес от хексан/етил ацетат в съотношение 7:3, филтрира се и филтратът се хроматографира върху силикагел до получаването на метил Ь1-/-етоксикарбонил-

3-фенилпропил/-/Ь /-аланил- £ -амино-изобутират.

Елементен анализ: Изчислено за Сго^нЗО^2^5^: С, 63.30;

Н, 8.24, N,7.38.

Намерено: С₍ 63.58; Н₍8.13 и N,7.27.

460 мг от този диестер се разбърква с 3 мл 2 N натриев хидроксид при стайна температура в продължение на една нощ. Полученият разтвор се зарежда към колона с Dowex 50 (Н+) и се елюира с 5%-ен разтвор на пиридин във вода. След концентрирането на подходящите фракции се получава И-/1-карбокси3-фенилпропил/-Ь-аланил-с/. -аминоизамеслена киселина.

Елементен анализ. Изчислено за С-2Н27М2О52Н2О2 С, 54.82; Н,7.58; N,7.52. Намерено: С 54.94; Н 7.50 и N 7.48.

ЯМР спектърът е в съответствие със структурата на съеди нението.

- 98 Пример 141. И-/1-карбокси-3-фенилпролил/-Ь -аланил-L / - метилфенилаланин.

Съединениуто се получава по описания в пример 140 метод, като се излезе от L -/ -метилфенилаланин метилов естер хидрохлорид на мястото на -аминоизомеслена киселина, метилов естер, хидрохлорид.

Пример 142. N-/I -карбокси-3-/4-/I -бензилимидазолил/ пропил-L -аланин - L -пролин.

Излишък от 4-/4-/J -бензилимидазолил//-2-нетомаслена киселина-, получена чрез дибензилиране на 3-/4-имидазолил/ пропионова киселина и последваща кондензияция с диетил оксалот, последвана от кисела хидролиза и декарбоксилиране, се кондензира с L -аланил-L -пролин във вода /рН 6.7/ в присъствието на излишък от натриев цианоборхидрид. След три_дневен престой при стайна температура продуктът се абсорбира върху силно кисела йонообменна смола. След елюирането с 2%-ен воден разтвор на пиридин и сушенето чрез замразяване се получава суровият продукт, който по-нататък се пречиства върху Сефадекс L Н-20 хроматографска колона при използване на метанол. Данните от и hP ЯМР спектри и от ИЧ /инфрачервения/ спектър са в съответствие със структурата. Задоволителен горивен анализ се получава за монохидрата. Масспектърът след силилиране показва пикове при 572 /М⁺/, 557 /М⁺ -15/ и при 455/М+ - СО^^' Ме₃/м/е.

Пример 143. N-p -карбокси-3-/4-имидазолил/пропил/L -аланил-L - пропия.

N-/I -карбоксИ-3-/4-/L· -бензилимидазолил/пропил/ L -аланил-L -пролин, получен по описания в пример 142 начин, се подлага на хидриране при 40 манометрично налягане /паунда/

- 99 2 инч / но водоподо върху еквивалентно тегло 5Ч-ен паладиН/въглен я смес ст оцетна киселина /вода в съотношение 3 чъ^ 1 пои те-пс-пату?с ^Г'^/3С '2 пгсдъл.яниг на 3 дни. Cf?,.· отстоаязането на потслизатсоа чрез ’илтрипсче на .‘илтрато супеният продукт

ВЪ^ху силно кисело

смола, последвано от елииоане с 2;-ен воден разтвор нс пиридин и суиенс чрез замразяване. !'о-натстъи:но пречистване се осъществява върху колона със Секодекс L Н-20 пои използване на метанол. Протонният Г‘Р спектър и тонкослоПната хроматография но тодукта покоззе, че бечзилнста група е отстранена до полу чавано на посеченото с заглавието съединение, псспектъпът леназве пик за / ♦ - 10/ при м/е 320.

Пример 144. N-(1 -карбоксм-3-jJ·/! -бензилимидазолил/у поопил/-Ь -лизил-L -пролин и N-^1 - чаобочс'л-3-/‘4-иуилазолил/

ПРОПИл/-Ъ -лизил-L -ПРОЛИН.

Двете посочени в заглавието съединения се получават по същия начин, както И-/1-нарбокси-3-/4-/1 -бензилимидазолил/ /поопил^Ь -алоннл-L -поолин/пример 142/ и N-/L -корбоксиЗ-А-иядазолил/поопил/^ -аланил-L -пролин чрез заместване по L-алан/л-Ъ -пчелин с Et-^oc-L-лизпл- L-^o/irH и отстраняване на терц. Зос група с три’луороцетиа киселина при тяпеостурс 0^иС в продълненио но 3 ч след етспо на конден зация.

Пример 145. N-/I. -етонсикаебонил-5-/4-/1 -сензилимидазолил/пропил/-Ь -оланил-L -пролин и N-/L -етоксинорбонил/ -?-/4-и’,:идазолил/пропил-Ь -алонил-L -пролин..

Двете съединения,посочени в заглавното, се получавот по същия начин, както и N-/1 -кообокси-5-/4-/1 -бензилимидазолил//поопил/-Ь -слонил-L -пролин/поимер 142/ и

BAD ORIGINAL

100 N-/I -карбокси-З/4-имидазолил/пропиn/-L· -аланил-L -пролин/ пример 143/ при използване на етилов естер на 4-/4-/I- -бензилимидазолил//-2-кетомаслена киселина и осъществяване на кондензацията в етанол/ в присъствието на молекулни сита 4А/ вместо във вода.

ЛИТЕРАТУРА

1. US 4129571

2. US 4154960

3. US 4052511

4. Cushman D.W. et al., Biochemistry 16, 5484, 1977

5. PlQUILLOUD Y., A. REINHARZ AND M. ROTH, BlOCHEM BlOPHYS.

Acta 206, 136, 1970

6. Weeks J.R. and J.A. Jones, Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 104, 646, 1960

7. Koletsky S. et al., Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 125, 96, 1967

Claims

Съединение с формула

II с

NH ci

II в която са еднакви или различни и означават хидрокси, нисш алкокси, , динисшалкиламино нисш алкокси, ациламино нисш алкокси, ацилокси нисш алкокси арилокси, арилнисшалкилокси, заместен арилокси или заместен арилнисшалнилокси, като заместителят е метил, хало, или метокси амино, нисшалкиламино, динисшалкиламино, арилнисшалкиламино,

R-] означава водород, алкил, съдържащ 1 до 20 или хидроксиамино;

въглеродни атома, включително разклонени, циклични и ненаситени алкилни групи;

заместен нисш алкил, като заместителят е хало, хидрокси, нисш алкокси, арилокси, амино, нисшалкиламино, динисшалкиламино,ацилаΜΤϊίΡί'ίΐ^Ρψίί’^идино, имидазолил, индолил, меркапто, нисшалкилтио, арил тио, карбокси, карбоксамидо, карбонисшалкокси, фенил, заместен фенил, при което заместителят е нисш алкил, нисш алкокси или хало; арилнисшалкил или хетероарилнисшалкил, арилнисшалкенил или хетероарилнисшолкенил, заместен арилнисшалкил, заместен хетероарилнисшалкил, заместен арилнисшалкенил или заместен хетероарилнисшолкенил, като заместителят е хало или дихало, нисш алкил, хидрокси, нисш алкокси, амино, аминометил, ациламино, динисшалкиламино, нисшалкиламино, карбоксил, халонисшалкил, циано или сулфонамидо; арилнисшалкил или хетероарилнисшалкил, заместен в алкилната част с амино или ациламино групи;

₽2 и Ry означават водород или алкил;

означава водород, нисш алкил, фенил нисш алкил, аминометил фенил нисш алкил, хидроксифенил нисш алкил, хидрокси нисш алкил, ацетиламино нисш алкил, ациламино нисш алкил, амино нисш алкил, диметиламино нисш алкил, хало нисш алкил, гуанидино нисш алкил, имидозолил нисш алнил, индолил нисш алкил, мернапто нисш алкил и нисш алкилтио нисш алкил;

R^ означава водород или нисш алкил;

R^ означава водород, нисш алкил, фенил, фенил нисш алкил, хидрокси фенил нисш алкил, хидрокси нисш алкил, амино нисш алкил, гуанидино нисш алкил, имидозолил нисш алкил, индолил нисш алкил, меркапто нисш алкил или нисш алкилтио нисш алкил;

и R5 могат да бъдат свързани заедно и да образуват алкиленов маст от 2 до 4 въглеродни атома, алкиленов мост с 2 или 3 въглеродни атома и един атом сяра, алкиленов мост с 3 или 4 въглеродни атома, съдържащ двойна връзка, или алкиленов мост от типа на посочените по-горе, заместен с хидрокси нисш алкокси, нисш алкил или динисш алкил и техните фармацевтично приемливи соли, където посоченият арил е член от групата, състояща се от фенил или нафтил, и посоченият хетероарил е член от групата, състояща, се от пиридил, тиенил, фурил, индолил, бензтиенил, имидозолил или тиазрлил.
2. Съединение съгласно претенеция 1, в което въглеродният атом, който носи заместителя^, е в5 конфигурация и другите абсолютни конфигурации принадлежат на Ь-аминокиселините.
3. Съединение с формула

0 I/ ,^R1 *з ( ^J *5 0 Н I? - с - C -NH I -СН -с II -N - - С - 1 С - Rg ^R2 0 ^?7

в която

R и Rg могат независимо един от друг да означават хидрокси,нисш алкою нисш алкенилокси, арилнисшалкилокси, амино, динисшалкиломино нисш алкокси, ациламино нисш алкокси или ацилокси нисш алкокси;

R<l означава водород, алкил, съдържащ I до 20 въглеродни атома, включващ разклонение, циклични и ненаситени алкилни групи; заместен нисш алкил, като заместителят е хало, хидрокси, нисш алкокси, арилокси, амино, нисшалкиламино, динисшалкиламино, ациламино, ариламино, гуанидино, имидазоил, индолил, меркапто, нисшалкилтио, арилтио, карбокси, карбоксамидо или карбонисшалкокси, фенил, заместен фенил, при което заместителят е нисш алкил, нисш алкокси или хало; арилнисшалкил или хетероарилнисш алкил, арилнисшалкенил, или хетероарилнисш алкенил, заместен арил нисшалкил, заместен хетероарилнисшалнил, заместен арилнисшалкенил или заместен хетероарилнисшалкенил, при крето заместителят е хало, дихала, нисш алкил, хидрокси, нисш алкокси, амино, аминометил, ациламино, динисшалкиламино, нисшалкиламино, карбоксил, халоалкил циано или сулфонамидо, арилнисшалкил или хетероарилнисш алнил, заместени в алкилната част с амино или ациламиногрупи;

R? и R₇ означават водород;

R₃ означава нисш алкил амино нисш алкил имидазолил нисш алкил, хало нисш алкил;

5 са свързани заедно до въглеродни

R₄ и R съдържащ от 2 до 4 образуването на алкиленов атома или алкиленов мост,

МОСТ, съдържащ

2 или 3 въглеродни атома, и един атом сяра или алкиленов , съдържащ от 3 до 4 въглеродни атома мост, съдържащ двойна връзна_/ или алкиленов мост от посочения по-горе тип, заместен с хидрокси, нисш алкокси или нисш алкил, или неговите фармацевтично приемливи соли, при което посоченият арил е избран от групата, състояща се от фенил или нафтил, и посоченият хетеро арил е избран ат групата, състаяща се от пиридил, тиенил, фурил, индолил, бензтиенил, имидазоил, или тиазолил.
4. Съединение съгласно претенция 3, в което въглеродният

- 4 атом, нойто носи заместителя R-^e в 6 конфигурация и другите абсолютни конфигурации принадлежат на L -аминокиселините.
5. Съединение съгласно претенция 3, в което R^ и Rg са свързани заедно и въглеродният и азотният атом. , към които са прикрепени, образуват пръстен с формула

ΟΰΰΖζ в която У означава СН^, серен атом или СН-ОСН₃ и

Rp Rg и R? имат значенията, посочени в претенция 3.
6. Съединения съгласно претенция 5, в които въглеродният атом, който носи знаменателя има S конфигурация и другите абсолютни конфигурации принадлежат на L -аминокиселините.
7. Съединение с формула

0 % ^R4 е₅о 1' I 1 1 II R - С -С -NH-CH - - С -N II -С-С -Rg 0 ^R7

в която

R и Rg могат независимо един от друг да означават хидрокси, нисш алкокси, нисш аленилокси, арилнисшалкилокси, амино, динисшалкиламино нисш алкокси, ациламино нисш алкокси или ацилокси нисш алкокси;

1?1 означава алкил, съдържащ 1 до 8 въглеродни атома, заместен нисш алнил, като олнилната група има 1 до 5 въглеродни атома и заместителят представлява амино, орилтио, орилокси, ариламино, арилолкил или хетероарилалкил, като олкилнато част има 1 до 3 въглеродни атома, заместен арилалкил или хетероарилалкил, като алкилната част има 1 до 3 въглеродни атома и заместителят /ите/ представляват хало, дихало, амино, аминоалкил, хидрокси, нисш алкокси или нисш алкил;

^и ^7 означават водород;

R₃ означава нисш алнил или амино нисш алкил;

R^ и Rg са свързани заедно и с въглеродния и с азотния атом, към които са прикрепени, образуват пръстен с формула в която У означава СН₂, серен атом или СН-ОСН₃ или неговите фармацевтично приемливи соли, при което посоченият арил е избран от групата, състояща се от фенил или нафтил, и посоченият хетероарил е избран от групата, състояща се от пиридил, тиенил, фурил, индоЛИЛ, бензткенил , ИМИД030ИЛ ИЛИ ТИ030ЛИЛ.
8. Съединения съгласно претенция 7, в които въглеродният атом, който носи заместителя R^ е в S конфигурация и другите абсолютни конфигурации принадлежат на L -аминокиселините.
9. Съединение с формула ^{0 R}1 ^R3 ^R4 ^R5 i· I II *

R -C-C-NH-CH-C-N-C-C-R₆ ’ II

R₂ 0R в която

R и Rg независимо един от друг означават хидрокси, нисш алкокси, арилалкилокси; R? и Ry означават водород; R₃ означава метил, аминонисшалкил; R^ и Rg са свързани заедно и с въглеродния и азотния атом, към които са прикрепени, образуват пролин, 4-тиапролин или 4-метоксипролин и

R^ означава алкил, съдържащ от 1 до 8 въглеродни атома, заместен нисш алкил, като алкидната група има 1 до 5 въглеродни атома и заместителят е амино, арилтио, арилокси, арилалкил или хетероарилалкил, като алкилната част има 1 до 3 въглеродни атома, заместен арилалкил или хетероарилалкил, като алкидната група има 1 до 3 въглеродни атома и заместителят/ите/ са хало, дихало, амино, аминоалкил, хидрокси, нисш алкокси или нисш алкил и неговите фармацевтично приемливи соли, при което посоченият арил е избран от групата, състояща се от фенил или нафтил, и посоченият хетероарил е избран от групата, състояща се от пиридил, тиенил, фурил, индолил, бензтиенил, имидазоил или тиазолил.
10. Съединения съгласно претенция 9, в които въглеродният атом, който носи заместителя е в 5 конфигурация и другите абсолютни конфигурации принадлежат на L -аминокиселините.
11. Съединение съгласно претенция 9, което представлява

N-/1-карбокси-3-фенилпропил/-1з -аланил-L -пролин.
12. Съединение съгласно претенция 9, което представлява Ν-./ϊ-етоксикарбонил-З-фенилпропил/- L -аланил- L-пролин.
13. Съединение, съгласно претенция 9, което представлява Т<-/1-етоксикарбонил-4-метилпентил/-Ь -аланил- L -пролин.
14. Съединение съгласно претенция 9, което представлява N-У 1-ка_рбокси-5-оминопентил/- L-аланил- L-пролин.
15. Съединение съгласно претенция 9, което представлява N-У -/1-карбокси-3-фенилпролил/-Ь -лизил-L -пролин.
16. Съединение съгласно претенция 9, което представлява М-У.-/1-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь-лизил- L -пролин.
17. Съединение съгласно претенция 9, което представлява М-./-/1-карбокси-3-/3-индолил/-пропил/- L -лизил-L -пролин.
18. Съединение съгласно претенция 9, което представлява Ь1-у-/1-корбонси-3/4-хлорфенил/пропил/- L -лизил- L -пролин.
19. Съединение съгласно претенция 9, което представлява 1М-£-/1-корбокси-2-фенилтиоетил/- Ь -лизил-Ь -пролин.
20. Съединение съгласно претенция 9, ноето представлява М-о/-/1-карбокси-3-/4-хлорфенил/пропил/^ -лизил-транс-4метокси-L -пролин.
21. Съединение съгласно претенция 9, което представлява N-/-/1-к а рбокси-5-а мин опен ти л/-1г лизил-L -пролин.
22. Съединение съгласно претенция 9, което представлява М-/-/1-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -орнитил-Ij -пролин.
23. Съединение съгласно претенция 9, което представлява етил К-/1-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L - пролинат хидрохлорид.
24. Съединение съгласно претенция 9, което представлява М-/1-/етоксикарбонил/-3-/4-имидазолил/пропил/-Ь - аланил-L пролин.
25. Съединение съгласно претенция 9, което представлява Ь1-/1-/карбонси-3-/4-имидазолил/пропил/-Ь -лизил-1» -пролин.
26. Съединението N-/I/6 /-карбокси-3-фенилпропил/-Ъ аланил-L -пролин.
27. Съединението N-/I/5/-етоксикарбонил-3-фенил-пропил/L -аланил-L -пролин.
28. Съединението N-/1/5 /-етоксикарбонил-3-фенил-пропил/L -аланил-L -пролин малеат.
29. Съединението NV-/I/S /-карбокси-3-фенил-пропил/-Ь лизил-L -пролин.
30. Съединението етил N-/1/5/-етоксикарбонил-3-фенилпропил /-Ь-аланил-L -пролинат хидрохлорид.
31. Съединението N-2-/I/5 /-етоксикарбонил-3-фенилпропил/L -лизил-L -пролин.
32. Фармацевтичен състав за лечение на повишено кръвно налягане, който включва фармацевтично приемлив носител и форма- 8 цевтично приемлив носител и фармацевтично ефективно количество от съединение с формула |И ϊ I I П

R-C-C-NH-CH-C-N-C-C-Rr > II I ⁶ ξ₂ 0 r₇ в която

R и Rg могат да бъдат еднанви или различни и означават хидрокси нисш алкокси, нисш алкенилокси, динисшалкиламино нисш алкокси, ациламино нисш алкокси, ацилонси нисш алкокси, арилонси, арилнисшалкилокси, заместен арилокси или заместен арилнисшалнокси, като заместителят е метил, хало или метокси, амино, нисшалкилдинисшалкиламино.

амино,уарилнисшалкиламино, хидроксиамино;

R.J представлява водород, алкил, съдържащ I до 20 въглеродни атома, включително разклонени, циклични или ненаситени алкилни групи; заместен нисш алкил, като . заместителят е хало, хидрокси, нисш алкокси, арилокси, амино, нисшалкиламино, динисшалкиламино, ациламино, ариламино, гуанидино, имидазолил, индолил, меркапто, нисшалкилтио, арилтио, карбокси, карбоксамидо, карбонисшалкокси, фенил, заместен фенил, при което заместителят представлява нисш алкил, нисш алкокси или хало,арилнисшалкил или хетероарилнисшалкил, арилнисшалкенил или хетероарилнисшалкенил, заместен арилнисшалкил, заместен хетероарилнисшалкил, заместен арилнисшалкенил или заместен хетероарилнисшалненил, като заместителят е хало или дихало, нисш алкил, хидрокси, нисш алнокси, амино, аминометил, ациламино, динисшалкиламино, нисшалкиламино, карбоксил, халонисшалкил, циано иии сулфонамидо; арилнисшалкил или хетероарилнисшалкил, заместен в алкидната част с амино или ациламино;

и R₇ означават водород или нисш алкил;

R₃ означава водород, нисш алкил, фенилнисшалкил, оминометил фенил нисшалнил, хидроксифенил нисшалкил, хидроксинисшалкил, ацетиламинонисш алкил, ациламино нисш алкил, амино нисш алкил, диметиламино’нисш(алкил, гуанидино нисш алкил, хало|нисш^алкил, имидазалил нисш алкил, индолил'нисш’алкил, мерканто)нисш[алкил, нисшалкилтио нисш алкил;

означава водород или нисш алкил;

1?5 означава водород, нисш алкил, фенил, · , фенил нисшалкил, хидроксифенил нисш алкил, хидрокси нисш алкил, амино нисш алкил, гуанидино нисш алкил, имидазолил нисш алкил, индолил нисшалкил, меркаптонисшалкил или нисшалкилтио нисш алкил;

и са свързани заедно и с въглеродния и азотния атоми, към които са прикрепени, образуват алкиленов мост, съдържащ 2 до 4 въглеродни атома, алкиленов мост, съдържащ 2 или 3 въглеродни атома и един серен атом, алкиленов мост, съдържащ 3 до 4 въглеродни атома, съдържащ двойна връзка или алкиленов мост от посочения по-горе тип, заместен с хидрокси, нисшалкокси, или нисш алнил и неговите фармацевтично приемливи соли, нато посоченият арил е избран от групата, състояща се от фенил или нафтил и посоченият хетероарил е избран от групата, състояща се от пиридил, тиенил, фурил, индолил, бензтиенил, имидазоил, или тиазолил.
33. Фармацевтичен състав за лечение на високо кръвно наляганб, който включва фармацевтично приемлив носител и фармацевтично ефективно количество от съединение с формула

0 *1 R₃ 1^5

II I I 11

R-C-C-NH-CH-C'N-C-C-Rzi li I и ^b

1^2 θ в която

Р и Rg означавот независимо един от друг хидрокси, нисшалкокси, нисш олкенилокси, орилнисшалконси, амино, динисшалкил амино нисш алкокси, ациламино нисш алкокси или ацилонси нисш алкокси;

означава алкил, съдържащ 1 до 8 въглеродни атома, заместен нисш алкил, като алкилната група има 1 до пет въглеродни атома и заместителят е амино, арилтио, арилокси, или ариламино, арилалкил или хетероарилалкил, като алкилната част има 1 до 3 въглеродни атома, заместен арилалкил или хетероарилалнил, като алкилната част има 1 до 3 въглеродни атома и заместителят/ите/ са хало, дихало, амино, аминоалкил, хидрокси, нисш алкокси или нисш алкил;

R₂ и Ry означават водород;

1?₃ означава нисш алкил или амино нисш алкил;

и са свързани заедно с въглеродния и азотния атом , към които са прикрепени и образуват пръстен с формула в която У означава СН₂, серен атом или СН-ОСН₃ или неговите фармацевтично приемливи соли, при което посоченият арил е избран от групата, състояща се от фенил или нафтил и посоченият хетероарил е избран от групата, състояща се от пиридил, тиенил,Уиндолил бензтиенил, имидазоил или тиазолил.
34. Фармацевтичен състав за лечение на повишено кръвно налягане, нойто включва фармацевтично приемлив носител и фармацевтично ефективно количество от съединение с обща формула

0 R-> R ~ Rд Rc к ι ι ³ ) ⁴ Р

R-C-C-NH-CH-C-N-C-C-R, ¹ II I I. ⁶ ^R2 0 Р_?0 в която ₽ и Rg независимо един от друг означават хидрокси, нисш алкокси, арилалкилокси; р _и означават водород;

R₃ означава метил, аминонисшалкил;

R^ и Rg са свързани заедно с въглеродния и азотния атом, към които са прикрепени^и образуват пролин, 4-тиапролин, 4-метоксипролин и

R-Ι означава алкил, съдържащ 1 до 8 въглеродни атома, заместен нисш алкил, нато алкилната група има един до пет въглеродни атома и заместителят е амино, арилтио, арилокси; арилалкил или хетероарилалкил, като алкилната част съдържа 1 до 3 въглеродни атома, заместенарилалкил или хетероарилалкил, като алкилната част съдържа 1 до 3 въглеродни атома и заместителят /ите/ е хало, дихало, амино, аминоалкил, хидрокси, нисш алкокси или нисшалкил, и неговите фармацевтично приемливи соли, при което посоченият арил е избран от групата, състояща се от фенил или нафтил, и посоченият хетероарил е избран от групата, състояща се от пиридил, тиенил, фурил, индолил, бензтиенил, имидазоил или тиазолил.
35. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е ]\[-/1-карбокси-3-фенилпропил/-Ь-аланил- L -пролин.
36. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е М-/1-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ъ -аланил-L· пролин.
37. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е 1\[-/1-етоксикарбонил/-4-метилпентил-L -аланил- L пролин.
38. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е ]Ч-/1-карбокси-5-аминопентил/-Ь -оланил-L -пролин.
39. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е М-₀/-/1-карбокси-3-фенилпропил/- L-лизил-L· -пролин.
40. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е М-^-/1-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -лизилL -пролин.
41. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е 1М-_с/-/1-карбокси-3-/3-индолил/-пропил/-Ь -лизил-

L -пролин.
42. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е Ν-₀/-/Ι-καρ6οκοπ-3-4-χлорфенил/пропил/-L· -лизил-L пролин.
43. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е Ь1-/-/1-карбокси-2-фенилтиоетил/- L -лизил-L· -пролин.
44. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е И-./-/1-карбокси-3-/4-хлорфенил/пропил/-Ь -лизилтранс-4-метокси-Ь -пролин.
45. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е М-_е/-/1-карбокси-5-оминопентил/-Ь -лизил-L -пролин.
46. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е N-_ъ/-/1-нарбонси-3-фенилпропил/-Ъ -орнитил-L -пролин.
47. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е етил М-/1-етоксинорбонил/-3-фенилпропил/-Ь -алонилL -пролинат хидрохлорид.
48. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е И-_в/-/1-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -орнитил-L· пролин.
49. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е етил Ь1-/1-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланилЬ -пролинат хидрохлорид.
50. Състав съгласно претенция 34, в нойто посоченото съединение е И-/1-етоксикарбонил-3-/4-имидазолил/пропил/-Ь- аланил-Ъ -пролин.
51. Състав съгласно претенция 34, в който споменатото съединение е М-/1-карбокси-3/-4-имидазолил/пропил/-Ь -лизил-

L· -пролин.
52. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е M-/I/5 /-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -олонил-L пролин.
53. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е N-/I/5 /-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-

L· -пролин.
54. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е N-/1/5/-етоксикаронил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-

L· -пролин малеат.
55. Състав съгласно претенция 34, в който посоченото съединение е N-/-/I/5 /-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -лизил-L -пролин.
56. Състав съгласно претенция 34, в нойто посоченото съединение е етил N-/I/5 /-етоксикарбонил-3-фениллропил/-Ь аланил- L -пролинат хидрохлорид.
57. Състав съгласно претенция 34, в нойто посоченото съединение е N-/-/1/5 /-етоксикарбонил-3-фениллропил/-Ъ -лизилL -пролин.
58. Метод за лечение на повишено нръвно налягане, който се състои във въвеждане в тялото на пациента, на фармацевтично ефективно количество от съединение с формула

0 и *5 0 II R-C- -C-NH 1 -сн - с - II - N · - С - 1 С -R₆ *2 0 ^R7

в ноято

R и Rg co еднакви или различни и означават хидрокси, нисш алкокси, нисш алкенилокси, динисшалкиламино нисш алкокси, ациламино нисш алкокси, ацилокси нисш алнокси, арилокси, арилнисшалкилокси, заместен арилокси или заместен арилнисшалкилокси, при което заместителят е метил, хало или метокси; амино, нисшалкиломино, динисшалкиламино, арилнисшалкиламино или хидроксиамино;

означава водород, алкил, съдържащ 1 до 20 въглеродни атома, включително разнлонен, цикличен или ненаситен алкил; заместен нисш алкил, при което заместителят е хало, хидрокси, нисш алкокси арилокси, амино, нисшалкиломино, динисшалкиламино, ациламино, ариламино, гуанидино, имидазолил, индолил, меркапто, нисшалкилтио, арилтио, карбокси, карбоксамидо, карбонисшалкилокси, фенил, заместен фенил, при което заместителят е нисш алкил, нисш алкокси или хало; арилнисшалкил или хетероарилнисшалкил, арилнисшалкенил, или хетероарилнисшалкил, заместен арилнисшалкил, заместен хетероарилнисшалкил, заместен арилнисшалкенил или заместен хетероарилнисшалкенил, при което заместител е хало или дихало, нисш алкил, хидрокси, нисш алкокси, амино, аминометил, ациламино, динисшал-ниламино, нисшалкиломино, карбоксил, хало нисшалкил, циано или сулфонамидо; арилнисшалкил или хетероарилнисшалкил, заместени в алкилната част с амино или ациламино;

R2 и Ry означават водород или нисш алкил;

R₃ означава водород, нисш алкил, фенил нисш алкил, аминометил фенил нисшалкил, хидроксифенил нисшалнил, хидроксинисшалкил, ацетиламино нисшалкил, ациламинонисшалкил, амино нисшалкил, диметиламино нисш алкил, гуанидино нисш алкил, хало нисшалкил, имидазолил нисшалкил, индолил нисш алкил, меркапто нисшалкил и нисшалкилтио нисшалкил;

R^ означава водород или нисш алкил;

^5 означава водород, нисш алкил, фенил, фенил нисш алкил, хидрсксифенил нисш алкил, хидрокси нисшолнил, амино нисш алкил, гуани дино нисш алнил, имидазолил нисш алкил, индолил нисш алкил,

меркапто нисшалкил, нисшалкилтио нисш алнил; ^R4 и R₅ могат да бъдат свързани заедно и да образуват алкиленов

мост, съдържащ от 2 до 4 въглеродни атома, алкиленов мост, съдържащ от 2 до 3 въглеродни атома и един серен атом, алкиленов мост, съдържащ 3 до 4 въглеродни атома и двойна връзка или алкиленов мост от посочения по-горе тип, заместен с хидрокси, нисш алкокси или нисш алнил, и неговите фармацевтично приемливи соли, при което посоченият арил е избран от групата, състояща се от фенил или нафтил, и посоченият хетероарил е избран от групата, състояща се от пиридил, тиенил, фурил, индолил, бенз тиенил, имидазолил или тиазолил.
59. Метод за лечение на повишено кръвно налягане, който включва въвеждане в тялото на пациента на фармацевтично ефективно количество от съединение с формула

0 tl у ь R - С - - с - 1 NHCH - с - 1» - N - - С - 1 С - R< 11 ⁶ У 0 ^R7 0 в която

R и Rg означават независимо един от друг хидрокси, нисш алкокси, арилалкилокси,

R.] означава алкил, съдържащ 1 до 8 въглеродни атома, заместен нисш алкил, при което алкилната група има от един до пет въглеродни атома и заместителят е амино, арилтио или арилокси, арилалкил или хетероарилалкил, като алкилната част съдържа от

1 до 3 въглеродни отома, заместен арилалкил или хетероарилалкил нато алкилната част съдържа 1 до 3 въглеродни атома и заместителя /ите/ са хало, дихало, амино, аминоалкил, хидрокси, нисш алкокси, нисшалкил;

1?2 и Ry означават водород;

R₃ означава метил, аминонисшалкил;

и могат да бъдат свързани заедно и с въглеродния и азотния атом, към които са прикрепени, образуват пролин, 4-тиалролин, или 4-метоксипролин, или неговите фармацевтично приемливи соли, при което посоченият арил е избран от групата, състояща се от фенил или нафтил, и посоченият хетероарил е член, избран от групата, състояща се от пиридил, тиенил, фурил, индолил, бензтиенил, имидазоил или тиазолил.
60. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е И-/1-карбок_си-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L пролин.
61. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е Ь1-/1-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-11 -аланилL -пролин.
62. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е М-/1-етоксинарбонил-4-метилпентил/- Jj -аланилL -пролин.
63. Метод, съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е 1Ч-/1-карбокси-5-аминопентил/-1и -аланил-b пролин.
64. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е М-/-/1-карбокси-3-фениллропил/-Ь -лизил- L· - пролин.
65. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е К-^-Л-етоксикарбонил-З-фенилпропил/- L -лизилL· -пролин.
66. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е И-_с/-/1-карбокси-3-/3-индолил/-пропил/ -L -лизилL -пролин.
67. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е М-_в/-/1-карбокси-3-/4-хлорфенил/пропил/-Ь -лизил-

Ь -пролин.
68. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е И-₀/-/1-карбокси-2-фенилтиоетил/-Ь -лизил-

L -пролин.
69. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е 1М-/-/1-карбокси-3-/4-хлорфенил/пропил/-Ь-лизилтранс-4-метокси-Ь -пролин.
70. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е М-/-/1-карбокси-5-аминопентил/-1> -лизил-L пролин.
71. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е Ь1-£-/I-корбокси-З-фенил пропи л/-Ь» -орнитил-L пролин.
72. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е етил К71-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил L -пролинат хидрохлорид.
73. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е М-^-/1-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -орнитил- L пролин.
74. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е етил М-/1-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланилL -пролинат хидрохлорид.
75. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е 1М-/1-/етоксикорбонил/-3-/4-имидазолил/пропил/ L· -аланил-L· -пролин.
76. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е Ь1-/1-карбокси-3-/4-имидазолил/пропил/-Ь -лизилL· -пролин.
77. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е N-/I/5 /-карбокси-3-фенилпропил/-Ь -аланил-L пролин.
78. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е N-/1/б /-етоксикарбонил-3-фенилпропил/-Ь -аланил-I» -пролин.
79. Метод съгласно претенция 59, при нойто посоченото съединение е N-/1/5 /-е токсикарбонил-3-фенилпропил/-аланил-L· -пролин малеат.
80. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е N-/I/5 /-карбокси-3-фенилпропил/-Ь-лизил-L· пролин.
81. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е етил N-/I/5/-етоксикарбонил~3-фенил-пропил/-Ь аланил-L· -лролинат хидрохлорид.
82. Метод съгласно претенция 59, при който посоченото съединение е N-/-/I/5 /-етонсикарбонил-3-фенилпропил/-Ь лизил-L· -пролин.