Nouveaux sels d'addition d'acides du 4'-(9-acridinylamino)méthanesulf-m-anisidide, leur procédé de production et composition pharmaceutique les contenant.
La présente invention concerne des nouveaux sels d'addition d'acides d'un compose connu sous la forme de la base libre, qui sont doués de propriétés antitumorales avantageuses et qui ont en outre une très grande solubilité dans l'eau, ce qui permet donc la préparation de formes posologiques cliniques utiles pour l'administration intraveineuse.
Le dérivé d'acridine appelé m-AMSA (4'-(9-
<EMI ID=1.1>
Cain et collaborateurs, Europ. J. Cancer 10:539-549 (1974),
une activité antitumorale importante dans les systèmes de tumeurs que présentent des animaux. Par conséquent, ce composé a été soumis à une évaluation clinique et a donné de premiers résultats très prometteurs.
Lorsqu'un agent antitumoral tel que le m-AMSA est utilisé cliniquement en médecine humaine, on constate.que la solubilité de cet agent constitue souvent le facteur déterminant dans le choix de la voie d'administration et des formes posologiques. Par exemple, une substance hydrosoluble
peut en général être administrée par voie intraveineuse,
tandis qu'une substance insoluble dans l'eau est limitée à d'autres formes d'administration parentérale, par exemple la voie intramusculaire et la voie sous-cutanée. Un agent thérapeutique doué de solubilité dans l'eau facilite également la préparation de formes posologiques orales et parentérales non intraveineuses pour l'administration humaine. Ainsi, il est incontestablement avantageux qu'un
agent thérapeutique soit soluble dans l'eau, notamment si
l'on considère que la voie la plus directe pour établir des
taux sanguins thérapeutiques d'un médicament dans le corps
humain est l'administration intraveineuse.
La forme base libre du m-AMSA a une solubilité
dans l'eau très limitée et on ne peut donc pas l'utiliser
comme forme posologique pour l'administration intraveineuse.
On a tenté de préparer des sels d'addition d'acides pour
vaincre ce problème de solubilité, mais le monochlorhydrate
et le monométhanesulfonate, sels dont il a été question, se
sont aussi montrés insuffisamment hydrosolubles pour une application clinique. La formulation actuellement en usage clinique se compose de deux liquides stériles que l'on mélange avant l'usage. Une solution de m-AMSA dans du N,Ndiméthylacétamide anhydre est contenue dans une ampoule. Une fiole séparée contient une solution aqueuse d'acide L(+) lactique destinée à être utilisée comme diluant. Après le mélange, la solution de m-AMSA résultante est administrée par infusion intraveineuse.
Bien que la formulation clinique en question constitue une forme posologique intraveineuse, elle présente plusieurs inconvénients. Outre les difficultés évidentes de la préparation et de l'administration de la forme posologique, cette forme contient comme véhicule du diméthylacétamide. On a attribué à ce dernier divers symptômes de toxicité chez les animaux et il s'avère donc que ce composé est inacceptable ou indésirable comme véhicule pharmaceutique.
En conséquence, la présente invention a pour but de trouver une forme hydrosoluble stable, thérapeutiquement acceptable, du m-AMSA que l'on puisse administrer par voie intraveineuse (ainsi que par d'autres voies) et qui ne renferme ou ne nécessite pas de diméthylacétamide comme véhicule pharmaceutique. Cet objectif, ainsi que d'autres caractéristiques et avantages de la présente invention, ressortiront nettement de la description détaillée qui va suivre.
La présente invention propose de nouveaux sels hydrosolubles d'addition d'acides de m-AMSA qui, par reconstitution avec de l'eau stérilisée ou un véhicule aqueux stérilisé, peuvent être administrés par voie intraveineuse sans présenter les inconvénients associés aux formes intraveineuses connues de cet agent.
L'invention propose plus particulièrement (1) l'hémiacétonate de L(+)-monolactate cristallin de m-AMSA contenant environ 0,5 mole d'acétone par mole de lactate,
(2) le produit cristallin de solvatation à l'acétone du DLmonolactate de m-AMSA contenant environ 0,6 à 0,7 mole d'acétone par mole de lactate et (3) l'hémiacétonate de D(-)- <EMI ID=2.1>
d'acétone par mole de lactate.
Sur les dessins annexés :
- la figure 1 représente le spectre d'absorption infrarouge de l'hémiacétonate de mono-L(+)-lactate de m-AMSA en pastille dans du bromure de potassium ;
- la figure 2 représente le spectre de résonance magnétique nucléaire de l'hémiacétonate de mono-L(+)-lactate de m-AMSA dans le diméthylsulfoxyde (100 MHz) ;
- la figure 3 représente le spectre d'absorption infrarouge du produit de solvatation à l'acétone du DLmonolactate de m-AMSA en pastille dans du bromure de potassium ;
- la figure 4 représente le spectre de résonance magnétique nucléaire du produit de solvatation à l'acétone du DL-monolactate de m-AMSA dans le diméthylsulfoxyde <EMI ID=3.1> en pastille dans du bromure de potassium et
- la figure 6 représente le spectre de résonance magnétique nucléaire de l'hémiacétonate du D(-)-monolactate de m-AMSA dans le diméthylsulfoxyde (100 MHz).
De nombreux sels classiques d'addition d'acides acceptables du point de vue pharmaceutique du m-AMSA ne sont que légèrement solubles dans l'eau et ne conviennent par conséquent pas pour la préparation de solutions aqueuses intraveineuses. Cela ressort des références bibliographiques concernant les sels d'acide chlorhydrique et d'acide méthanesulfonique ainsi que des tests de solubilité qui ont été conduits parallèlement à la présente invention sur des sels tels que le sulfate, le lévulinate et le citrate.
En étudiant les propriétés de solubilité des sels d'addition d'acides du m-AMSA, on a découvert le fait surprenant que les produits cristallins de solvatation à l'acétone du L(+)-monolactate, du D(-)-monolactate et du DLmonolactate de m-AMSA sont doués d'une hydrosolubilité suffisamment grande à la température ambiante pour donner des formes posologiques intraveineuses acceptables du point de vue clinique. De plus, ces trois sels cristallins (1) ont une excellente stabilité tant sous la forme solide qu'après reconstitution avec de l'eau et (2) peuvent être reconstitués avec de l'eau pour former des solutions diluées (par exemple à 3-5 mg/ml) de m-AMSA pour l'administration intraveineuse qui restent limpides (sans précipitation de sel) pendant au moins plusieurs heures.
La préparation des lactates cristallins de la présente invention est effectuée par réaction du m-AMSA base avec l'acide L(+)-lactique, l'acide D(-)-lactique ou l'acide DL-lactique dans l'acétone utilisée comme solvant. Sous l'effet de l'agitation de préférence à la température ambiante, le sel désiré cristallise dans la solution et peut être recueilli par exemple par filtration.
Dans la mise en oeuvre du procédé décrit cidessus, il est préférable de préparer tout d'abord des solutions acétoniques de m-AMSA base et d'acide lactique, puis de les filtrer avant de les mélanger pour former le produit
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AMSA base en proportions d'environ 1 à 4 équivalents molaires d'acide lactique par mole de m-AMSA. Toutefois, pour obtenir les meilleurs résultats, on utilise un excès d'acide lactique
(de préférence au moins deux et notamment environ 2,5 équivalents molaires). On peut conduire la réaction dans une large plage de température, par exemple d'environ 0 à
<EMI ID=5.1>
température ambiante. Le cas échéant, des germes cristallins du lactate cristallin désiré peuvent être ajoutés au mélange réactionnel pour provoquer et/ou favoriser la cristallisation. Lorsque le sel cristallin a été recueilli, il est lavé à l'acétone et séché par des opérations classiques, par
<EMI ID=6.1>
On a découvert qu'il importe, dans la préparation des monolactates, d'éviter la contamination par des ions chlorure, sulfate, phosphate et carbonate contenus dans les matières de départ et dans le solvant. La présence de tels ions peut éventuellement entraîner (1) une réduction progres-sive de la solubilité initiale apparente du sel, (2) une prolongation du temps de reconstitution et (3) une précipitation du sel au repos dans la solution aqueuse.
Selon un autre de ses aspects, la présente invention propose une forme posologique pharmaceutique solide stable, soluble dans l'eau, en vue de la reconstitution avec de l'eau ou avec un véhicule aqueux pour former une solution stable de m-AMSA, cette forme posologique étant produite par des étapes de
(1) formation d'une solution aqueuse d'hémiacétonate de L(+)-monolactate de m-AMSA cristallin contenant environ 0,5 mole d'acétone par mole de lactate, d'un produit cristallin de so lvatation à l'acétone du DL-monolactate de m-AMSA contenant environ 0,6 à 0,7 mole d'acétone par mole de lactate ou d'un hémiacétonate de D(-)-monolactate de m-AMSA cristallin contenant environ 0,5 mole d'acétone par mole de lactate ; et
(2) lyophilisation de la solution aqueuse ainsi
produite.
La préparation d'acétonates de lactates lyophilisés s'effectue par simple dissolution de l'hémiacétonate de L(+)-monolactate, de l'hémiacétonate de D(-)monolactate ou du produit de solvatation à l'acétone du DLmonolactacte cristallins dans un volume convenable d'eau pour former une solution totale, la solution aqueuse étant ensuite soumise (après une étape éventuelle de filtration) à une opération classique de lyophilisation. On constate que les matières solides lyophilisées contiennent environ 1 mole d'acide lactique par mole de m-AMSA et qu'elles sont dépourvues d'acétone. On peut les reconstituer aisément avec de l'eau ou avec un véhicule aqueux pour obtenir des solutions vraies à au moins 3-5 mg/ml de m-AMSA ayant d'excellentes caractéristiques de stabilité.
Les acétonates de monolactates cristallins et les produits lyophilisés obtenus conformément à la présente invention déploient sensiblement les mêmes propriétés anti-tumorales que les formes connues de m-AMSA. Mais en raison de leur grande solubilité dans l'eau, on peut les utiliser pour préparer des formes posologiques cliniques en fioles individuelles à charge sèche et lyophilisées pour l'administration intraveineuse, qui ne renferment pas de véhicule pharmaceutique indésirable tel que le diméthylacétamide. Les nouvelles formes posologiques conviennent toutes à une reconstitution rapide et pratique avec de l'eau ou un véhicule aqueux stérilisé.
On a trouvé qu'une solution aqueuse des acétonates de lactates ou des produits lyophilisés, renfermant une activité en m-AMSA de 3-5 mg/ml, représente une forme posologique particulièrement appréciable pour l'administration intraveineuse.
Les sels de m-AMSA et les produits lyophilisés de la présente invention peuvent être utilisés pour préparer des formes posologiques orales ou parentérales non intraveineuses de même que le produit préféré injectable par voie intraveineuse.
Dans le traitement de tumeurs chez les mammifères, les formes posologiques de la présente invention peuvent être administrées oralement ou par voie parentérale, mais de préférence par voie parentérale, aux doses et selon les posologies déjà indiquées dans la littérature.
L'invention est illustrée par les exemples suivants, donnés à titre non limitatif.
EXEMPLE 1
Préparation de l'hémiacétonate du L(+)-monolactate de m-AMSA
400 mg de m-AMSA sont dissous dans 35 ml d'acétone après 10 minutes d'agitation. On ajoute à cette solution, en agitant, une solution de 450 mg (4 équivalents) d'acide L(+) lactique dans 10 ml d'acétone. Une portion aliquote du mélange résultant est grattée à l'aide d'une tige de verre dans un petit tube à essai en verre pour former des cristaux. Les cristaux sont ajoutés au mélange réactionnel et
<EMI ID=7.1>
ambiante. Les cristaux de couleur orangée qui se forment sont séparés par filtration, lavés avec 10 ml d'acétone et séchés
r <EMI ID=8.1>
lactate cristallin est de 0,53 g.
Propriétés de l'hémiacétonate du mono-L(+)-lactate <EMI ID=9.1>
(b) Analyse spectrale : le spectre infrarouge, le spectre de résonance magnétique nucléaire et le spectre ultraviolet sont concordants, pour un monolactate solvaté contenant 0,5 mole d'acétone par mole de m-AMSA
(c) Teneur en eau (méthode Karl Fischer) = 0,64 %
(d) Analyse élémentaire : C = 58,44 % ; H = 5,58 % ;
N = 7,70 % ; S = 5,95 %.
(e) Solubilité dans l'eau : 5 mg/ml
(f) Stabilité : 15 mg de sel ont été reconstitués avec 10 ml d'eau stérilisée. La solution s'est montrée stable pendant au moins 24 heures et a présenté une perte d'activité de moins de 6 % après deux semaines d'entreposage à 45[deg.]C.
EXEMPLE 2
Préparation de l'hémiacétonate de L(+)-monolactate de m-AMSA lyophilisé
L'hémiacétonate de monolactate de m-AMSA cristallin (10 mg) préparé conformément à l'exemple 1 est dissous dans 0,5 ml d'eau stérilisée, dans une fiole en verre flint de 8,2 ml. La fiole est lyophilisée dans un appareil de lyophilisation de laboratoire pendant 16 heures. De l'eau stérilisée (0,5 ml) est ajoutée à la fiole. Une solution est obtenue après agitation par secousses pendant 2 minutes.
On répète cette expérience en utilisant 10 mg de l'hémiacétonate de monolactate dissous dans 15 ml d'eau stérilisée. La solution plus diluée est préférable pour la préparation du produit lyophilisé.
EXEMPLE 3
Cristallisation stérile de l'hémiacétonate de mono-L(+) lactate de m-AMSA
1. Délayer 1,0 g de m-AMSA base libre dans 100 ml d'acétone à 22-28[deg.]C. Une dissolution totale ou quasi totale est obtenue en 10 minutes.
2. En utilisant une technique aseptique, faire
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"Millipore-Fluoropore" ou "Mitex" stérile. Recueillir le filtrat dans un récipient stérile en verre ou en acier inoxydable.
Laver le filtre avec 15 ml d'acétone et ajouter au filtrat ci-dessus l'acétone qui a traversé le filtre. On obtient ainsi une Solution A. Utiliser la Solution A dans l'étape 5 dans un intervalle de 5 heures.
3. Dissoudre 1 g d'acide L(+) lactique dans une quantité suffisante d'acétone pour obtenir 10 ml de solution
(100 mg/ml d'acide L(+)-lactique). Agiter pendant 5 minutes.
4. En opérant dans des conditions aseptiques, faire passer la solution acétonique d'acide L(+)-lactique à travers un filtre "Millipore-Fluoropore" ou "Mitex" stérile. Recueillir le filtrat dans un récipient stérile en verre ou en acier inoxydable. On obtient ainsi la Solution B. Ne pas laver le filtre.
5. En agitant modérément, ajouter 5,8 ml de Solution B à la totalité de la Solution A en une période de 1 à 2 minutes. Cela représente 2,5 équivalents (0,5B g) d'acide L(+)-lactique. Des cristaux doivent se former en une période d'agitation de 10 minutes. Si des cristaux ne se forment pas, des cristaux d'ensemencement d'hémiacétonate de monolactate de m-AMSA stérile peuvent être ajoutés ou bien les côtés du récipient peuvent être grattés avec une baguette de verre stérile pour provoquer la cristallisation.
6. Agiter pendant encore une heure après le début de la cristallisation.
7. Séparer les cristaux par une technique de filtration stérile ne laissant pas de fibrilles. Laver les cristaux avec 25 ml d'acétone préalablement filtrée sur un filtre "Millipore-Fluoropore" ou "Mitex" stérile.
<EMI ID=11.1>
16 à 24 heures. Le rendement en hémiacétonate de mono-L(+)lactate de m-AMSA est égal à 1,1 g.
EXEMPLE 4
Préparation du produit cristallin de solvatation à l'acétone du mono-DL-lactate de m-AMSA
On maintient en suspension pendant 15 minutes à
<EMI ID=12.1>
par filtration sous vide sur un filtre en verre fin de 15 cm une petite quantité de matières insolubles. On ajoute au filtrat 0,15 ml d'une solution à 80 % d'acide DL-lactique en agitant rapidement. Des cristaux se forment en 10 minutes environ. Le mélange est ensuite agité pendant encore
30 minutes. Les cristaux sont recueillis par f iltration sous vide sur un filtre en verre fin de 15 cm. Ils sont ensuite lavés avec 2 ml d'acétone et séchés sous vide à 50[deg.]C pendant
16 heures. On obtient 180 mg du sel indiqué dans le titre.
<EMI ID=13.1>
Teneur en eau (Karl Fischer) = 1,03 %
Point de fusion (méthode capillaire, valeur
<EMI ID=14.1>
Le spectre de résonance magnétique nucléaire du produit est conforme à un monolacte de mAMSA contenant 0,6 mole d'acétone par mole de sel. Le produit contient comme impureté 0,1 mole % de lactate de lactyle qui est formé à cause de la présence d'une proportion atteignant 20 % d'acide lactyl-lactique dans l'acide DL-lactique * de pureté ACS. Le sel obtenu comme produit peut être reconstitué avec de l'eau pour former une solution à 5-
<EMI ID=15.1>
moins 6 heures. Des solutions aqueuses reconstituées de 5, 7,5 et 10 mg/ml sont faciles à obtenir par agitation par secousses à 23,9[deg.]C pendant 3 minutes. La solubilité du sel dans l'eau à la température ambiante est d'au moins 15 mg/ml.
On peut l'éviter en utilisant à la place d'acide DLlactique un mélange équimolaire d'acide L(+)-lactique r pur et d'acide D(-)-lactique pur.
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Préparation du produit cristallin de solvatation à l'acétone du mono-DL-lactate de m-AMSA
On maintient en suspension pendant 10 minutes
15 g de m-AMSA base dans 1,5 litre d'acétone à 22-24[deg.]C. On filtre ce mélange sous vide et on lave les matières insolubles avec 50 ml d'acétone. On ajoute la liqueur de lavage au filtrat et on place ensuite le filtrat dans une fiole d'Erlenmeyer de 2 litres. On ajoute en un intervalle
<EMI ID=17.1>
lactique (2,5 équivalents). On ensemence le mélange réactionnel avec des cristaux de produit de solvatation à l'acétone du DL-lactate de m-AMSA. Les cristaux commencent à se former en 5 minutes. Le mélange est agité pendant une heure à 20-23[deg.]C. Les cristaux sont séparés par filtration sous vide et lavés avec 150 ml d'acétone. Les cristaux lavés
<EMI ID=18.1>
17,8 g de produit indiqué dans le titre.
Propriétés Le spectre de résonance magnétique nucléaire
et le spectre infrarouge concordent avec un monolactate de m-AMSA ayant environ 0,7 mole d'acétone de solvatation par mole de sel. On note également la présence de petites quantités de lactate de lactyle comme impureté.
<EMI ID=19.1>
Teneur en eau (Karl Fischer) = 0,81 %.
Le sel a pu être aisément reconstitué avec de l'eau stérilisée pour former une solution à 7,5 mg/ml. Des solutions aqueuses ayant des concentrations de 5 et 7,5 mg/ml sont restées limpides pendant au moins 16 heures à la température ambiante (17[deg.]C).
EXEMPLE 6
Préparation du produit cristallin de solvatation à l'acétone du mono-DL-lactate de m-AMSA
On maintient en suspension pendant 10 minutes
20 g de m-AMSA base dans 2 litres d'acétone à 25[deg.]C. Le mélange est filtré sous vide et les matières insolubles sont lavées avec 100 ml d'acétone (la liqueur de lavage est ensuite ajoutée au filtrat). On ajoute au filtrat en agitant rapidement en un intervalle d'une minute 11,45 ml d'acide DL-
<EMI ID=20.1>
5 minutes. On agite le mélange pendant encore une heure. On sépare les cristaux par filtration sous vide et on les lave avec 150 ml d'acétone. En séchant les cristaux sous vide à
<EMI ID=21.1>
dans le titre.
<EMI ID=22.1>
Le spectre infrarouge et le spectre de résonance magnétique nucléaire sont conformes à un.monolactate de m-AMSA renfermant environ 0,67 mole d'acétone solvatée par mole de lactate. On note également la présence de petites quantités de lactate de lactyle comme impureté.
Essai de solubilité : Des solutions aqueuses reconstituées de 7,5 et 10 mg du sel par ml d'eau restent limpides pendant 24 heures à la température ambiante. Une solution à 15 mg/ml reste limpide pendant 6 heures à la température ambiante.
EXEMPLE 7
'Lyophilisation du produit de solvatation à l'acétone du monoDL-lactate de m-AMSA
On dissout en agitant 180 mg du produit de solvatation à l'acétone du DL-lactate de m-AMSA (préparé dans l'exemple 6) dans 24 ml d'eau stérilisée. On fait passer la solution claire résultante (pH 4,2) à travers un filtre "Millipore" de 25,4 mm, à pores de 0,45 micromètre. On introduit 2 ml du filtrat dans une fiole en verre flint de
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L'addition de 2 ml d'eau stérilisée à la fiole lyophilisée donne une solution limpide à 7,5 mg/ml. La solution reste limpide pendant au moins 6 heures à 17[deg.]C.
L'agitation par secousses de la solution sur une secoueuse horizontale à faible vitesse donne une solution limpide pendant une période atteignant 5 heures.
EXEMPLE 8
Cristallisation stérile du produit de solvatation à l'acétone du DL-lactate de m-AMSA
1. Mettre en suspension 1,0 g de m-AMSA base dans
100 ml d'acétone à 22-28[deg.]C. On obtient une dissolution totale ou quasi totale en 10 minutes.
2. En opérant dans des conditions aseptiques, faire passer la solution acétonique à travers un filtre
<EMI ID=24.1>
filtrat dans un récipient stérile en verre ou en acier inoxydable.
Laver le filtre avec 10 ml d'acétone et ajouter l'acétone filtrée au filtrat. On obtient ainsi une Solution A. Utiliser la Solution A dans l'étape 5 dans les 5 heures qui suivent.
3. Dissoudre 1 g d'acide DL-lactique (1,18 ml de solution à 85 % d'acide DL-lactique) dans une quantité suffisante d'acétone pour obtenir 10 ml de solution acétonique
(100 mg/ml d'acide DL-lactique). Agiter pendant 5 minutes.
4. En opérant dans des conditions aseptiques, faire passer la solution acétonique d'acide DL-lactique à
<EMI ID=25.1>
Recueillir le filtrat dans un récipient stérile en verre ou en acier inoxydable. On obtient ainsi la Solution B. Ne pas laver le filtre.
5. En agitant modérément, ajouter 5,8 ml de Solution B à la totalité de la Solution A en une période <EMI ID=26.1>
(0,58 g) d'acide DL-lactique. Des cristaux doivent se former en une période d'agitation de 10 minutes. Si des cristaux ne se forment pas, des germes cristallins stériles du produit de solvatation à l'acétone du DL-lactate de m-AMSA peuvent être ajoutés ou bien les côtés du récipient peuvent être grattés avec une baguette stérile en verre pour provoquer la cristallisation.
6. Agiter pendant encore une heure après le début de la cristallisation.
7. Séparer les cristaux par une technique de filtration stérile ne laissant pas de fibrilles. Laver les cristaux avec 10 ml d'acétone préalablement filtrée sur un filtre stérile "Millipore-Fluoropore" ou "Mitex".
8. Sécher les cristaux sous vide à 50[deg.]C pendant
16 à 24 heures. Le rendement attendu en produit de solvatation à l'acétone du DL-lactate est de 1,1 g.
Propriétés : Spectre infrarouge (voir figure 3).
Spectre de résonance magnétique nucléaire
(voir figure 4). On note qu'environ 0,7 mole d'acétone est solvatée avec le sel et on observe la présence d'environ 0,1 mole % de lactate de lactyle comme impureté.
Point de fusion = 159-166[deg.]C (décomposition). m-AMSA dans le sel - 72 % (d'après l'analyse par chromatographie en phase liquide sous haute pression).
Solubilité dans l'eau =* 25 mg/ml à la température ambiante.
<EMI ID=27.1>
Formulation parentérale à charge sèche de produit de solvatation à l'acétone au DL-lactate de m-AMSA
<EMI ID=28.1>
1. En procédant dans des conditions aseptiques, placer la quantité désirée de DL-lactate de m-AMSA stérile en particules de 0,25 à 0,42 mm dans des fioles stériles. Boucher avec des bouchons stériles de caoutchouc. Obturer avec des capsules d'aluminium. Les fioles sont conservées à l'obscurité jusqu'à ce qu'elles soient prêtes à la reconstitution.
2. Pour effectuer la reconstitution, ajouter une quantité suffisante d'eau stérile pour injectables de manière à obtenir une solution renfermant une activité en m-AMSA de 5 mg/ml. Les solutions reconstituées peuvent être conservées à 20-25[deg.]C pendant 16 heures. Précaution à observer : les solutions de m-AMSA sont incompatibles avec les ions chlorure, sulfate et phosphate. Des sels insolubles sont formés.
On observe le fait que l'addition de 100 mg de mannitol raccourcit le temps de reconstitution avec l'eau.
** La quantité nécessaire de produit de solvatation à
l'acétone du DL-lactate de m-AMSA est fonction de la concentration du sel, du sur-remplissage nécessaire et de la retenue aiguille-seringuefiole. Si l'on prend par exemple un produit renfermant 0,7 mole d'acétone par mole de sel, la
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Ainsi, pour obtenir une activité en m-AMSA de 0,2 g, on doit utiliser 0,27 g de produit de solvatation à l'acétone du DL-lactate de m-AMSA d'une pureté de 100 %. On ajuste ensuite cette quantité pour tenir compte de la concentration réelle du produit, du sur-remplissage nécessaire, etc.
EXEMPLE 10
Préparation d'hémiacétonate de D(-)-monolactate de m-AMSA cristallin
1. Mettre en suspension 1,0 g de m-AMSA base dans
100 ml d'acétone à 22-28[deg.]C. On obtient une dissolution totale ou quasi totale en 10 minutes.
2. En opérant dans des conditions aseptiques, faire passer la solution acétonique de m-AMSA à travers un filtre stérile de "Millipore-Fluoropore" ou "Mitex". Recueillir le filtrat dans un récipient stérile en verre ou en acier inoxydable.
Laver le filtre avec 10 ml d'acétone et ajouter au filtrat l'acétone filtrée sur "Millipore". On obtient ainsi la Solution A. Utiliser la Solution A dans l'étape 5 dans un délai de 5 heures.
3. Dissoudre 1 g d'acide D-(-)-lactique dans une quantité suffisante d'acétone pour obtenir 10 ml de solution acétonique (100 mg/ml) d'acide D(-)-lactique. Agiter pendant 5 minutes.
4. En opérant dans des conditions aseptiques, faire passer la solution acétonique d'acide D(-)-lactique à travers un filtre "Millipore-Fluoropore" ou "Mitex". Recueillir le filtrat dans un récipient stérile en verre ou en acier inoxydable. On obtient ainsi la Solution B. Ne pas laver le filtre.
5. En agitant modérément, ajouter 5,8 ml de Solution B à la totalité de la Solution A en une période d'une à deux minutes. Cela représente 2,5 équivalents
(0,58 g) d'acide D-lactique. Des cristaux doivent se former en une période d'agitation de 10 minutes. Si des cristaux ne se forment pas, des germes cristallins stériles de produit de solvatation à l'acétone du D-(-)-lactate de m-AMSA peuvent être ajoutés ou bien les côtés du récipient peuvent être grattés avec une baguette stérile en verre pour provoquer la cristallisation.
6. Agiter pendant encore une heure après le début de la cristallisation.
7. Séparer les cristaux par une technique convenable de filtration stérile ne laissant pas de fibrilles.
Laver les cristaux avec 10 ml d'acétone préalablement filtrée
<EMI ID=30.1>
pendant 16-24 heures. Le -rendement habituel en produit de solvatation à l'acétone du D-(-)-monolactate de m-AMSA est de 1,1 g.
Propriétés : Spectre infrarouge, voir figure 5.
Spectre de résonance magnétique nucléaire, voir figure 6. On constate qu'environ 0,4 mole d'acétone est fixée au sel par solvatation.
Point de fusion (méthode capillaire, valeur non corrigée): 180-184[deg.]C (décomposition). m-AMSA dans le sel : 78,4 % (d'après l'analyse par chromatographie en phase liquide sous haute pression).
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Teneur en eau (Karl Fischer) = 0,39 %.
EXEMPLE 11
Lyophilisation de l'acétonate de D(-)-monolactate de m-AMSA
En répétant le mode opératoire de l'exemple 7 et en remplaçant le produit de solvatation à l'acétone du DLlactate de m-AMSA par une quantité équimolaire du produit de solvatation à l'acétone du D(-)-monolactate de m-AMSA préparé dans l'exemple 10, on obtient une substance solide lyophilisée qui peut être reconstituée avec de l'eau pour former une solution ayant une activité en m-AMSA d'au moins 3-5 mg/ml. La substance solide contient d'après l'analyse une
<EMI ID=32.1> mole de m-AMSA par mole d'acide D(-)-lactique et ne renferme pas d'acétone.
New acid addition salts of 4 '- (9-acridinylamino) methanesulf-m-anisidide, their production process and pharmaceutical composition containing them.
The present invention relates to new acid addition salts of a compound known in the form of the free base, which are endowed with advantageous antitumor properties and which, moreover, have a very high solubility in water, which allows therefore the preparation of clinical dosage forms useful for intravenous administration.
The acridine derivative called m-AMSA (4 '- (9-
<EMI ID = 1.1>
Cain et al., Europ. J. Cancer 10: 539-549 (1974),
significant antitumor activity in tumor systems in animals. Consequently, this compound has been subjected to clinical evaluation and has given very promising initial results.
When an antitumor agent such as m-AMSA is used clinically in human medicine, it is found that the solubility of this agent often constitutes the determining factor in the choice of the route of administration and the dosage forms. For example, a water-soluble substance
can usually be administered intravenously,
while a water-insoluble substance is limited to other forms of parenteral administration, for example the intramuscular and subcutaneous routes. A water-soluble therapeutic agent also facilitates the preparation of non-intravenous oral and parenteral dosage forms for human administration. Thus, it is unquestionably advantageous that a
therapeutic agent is soluble in water, especially if
the most direct route to establishing
therapeutic blood levels of a drug in the body
human is intravenous administration.
The free base form of m-AMSA has a solubility
in very limited water and therefore cannot be used
as a dosage form for intravenous administration.
Attempts have been made to prepare acid addition salts for
overcome this solubility problem but the monohydrochloride
and the monomethanesulfonate, salts discussed, are
are also shown to be insufficiently water-soluble for clinical application. The formulation currently in clinical use consists of two sterile liquids that are mixed before use. A solution of m-AMSA in anhydrous N, Ndimethylacetamide is contained in an ampoule. A separate vial contains an aqueous solution of L (+) lactic acid intended for use as a diluent. After mixing, the resulting m-AMSA solution is administered by intravenous infusion.
Although the clinical formulation in question is an intravenous dosage form, it has several drawbacks. In addition to the obvious difficulties in the preparation and administration of the dosage form, this form contains as a vehicle dimethylacetamide. Various symptoms of toxicity have been attributed to the latter in animals, and it therefore appears that this compound is unacceptable or undesirable as a pharmaceutical carrier.
Consequently, the object of the present invention is to find a stable, therapeutically acceptable, water-soluble form of m-AMSA which can be administered intravenously (as well as by other routes) and which does not contain or does not require dimethylacetamide as a pharmaceutical vehicle. This objective, as well as other characteristics and advantages of the present invention, will emerge clearly from the detailed description which follows.
The present invention provides novel water-soluble acid addition salts of m-AMSA which, by reconstitution with sterilized water or a sterilized aqueous vehicle, can be administered intravenously without the disadvantages associated with known intravenous forms of this agent.
The invention more particularly provides (1) the hemiacetonate of L (+) - crystalline monolactate of m-AMSA containing approximately 0.5 mole of acetone per mole of lactate,
(2) the crystalline acetone solvation product of DLmonolactate of m-AMSA containing approximately 0.6 to 0.7 mole of acetone per mole of lactate and (3) hemiacetonate of D (-) - <NDE ID = 2.1>
acetone per mole of lactate.
In the accompanying drawings:
- Figure 1 shows the infrared absorption spectrum of mono-L (+) hemiacetonate - m-AMSA lactate in tablet in potassium bromide;
- Figure 2 shows the nuclear magnetic resonance spectrum of mono-L (+) hemiacetonate - m-AMSA lactate in dimethyl sulfoxide (100 MHz);
- Figure 3 shows the infrared absorption spectrum of the acetone solvate of DLmonolactate from m-AMSA in tablet in potassium bromide;
FIG. 4 represents the nuclear magnetic resonance spectrum of the acetone solvate of DL-monolactate of m-AMSA in dimethylsulfoxide <EMI ID = 3.1> in a tablet in potassium bromide and
- Figure 6 shows the nuclear magnetic resonance spectrum of the hemiacetonate of D (-) - monolactate of m-AMSA in dimethyl sulfoxide (100 MHz).
Many conventional pharmaceutically acceptable acid addition salts of m-AMSA are only slightly soluble in water and are therefore unsuitable for the preparation of aqueous intravenous solutions. This is apparent from the bibliographical references concerning the hydrochloric acid and methanesulfonic acid salts as well as the solubility tests which have been carried out in parallel with the present invention on salts such as the sulfate, the levulinate and the citrate.
By studying the solubility properties of the acid addition salts of m-AMSA, we discovered the surprising fact that the crystalline acetone solvation products of L (+) - monolactate, D (-) - monolactate and DL-monolactate from m-AMSA are sufficiently soluble in water at room temperature to give clinically acceptable intravenous dosage forms. In addition, these three crystalline salts (1) have excellent stability both in solid form and after reconstitution with water and (2) can be reconstituted with water to form dilute solutions (for example 3 -5 mg / ml) of m-AMSA for intravenous administration which remain clear (without precipitation of salt) for at least several hours.
The preparation of the crystalline lactates of the present invention is carried out by reaction of the m-AMSA base with L (+) - lactic acid, D (-) - lactic acid or DL-lactic acid in the acetone used as a solvent. Under the effect of stirring preferably at room temperature, the desired salt crystallizes in the solution and can be collected for example by filtration.
In carrying out the process described above, it is preferable to first prepare acetone solutions of m-AMSA base and lactic acid, then to filter them before mixing them to form the product.
<EMI ID = 4.1>
AMSA base in proportions of about 1 to 4 molar equivalents of lactic acid per mole of m-AMSA. However, for best results, excess lactic acid is used
(preferably at least two and in particular approximately 2.5 molar equivalents). The reaction can be carried out over a wide temperature range, for example from about 0 to
<EMI ID = 5.1>
ambient temperature. If necessary, crystalline seeds of the desired crystalline lactate can be added to the reaction mixture to cause and / or promote crystallization. When the crystalline salt has been collected, it is washed with acetone and dried by conventional operations, by
<EMI ID = 6.1>
It has been discovered that it is important in the preparation of monolactates to avoid contamination by chloride, sulfate, phosphate and carbonate ions contained in the starting materials and in the solvent. The presence of such ions may possibly lead to (1) a progressive reduction in the apparent initial solubility of the salt, (2) an extension of the reconstitution time and (3) precipitation of the salt at rest in the aqueous solution.
According to another of its aspects, the present invention provides a stable solid pharmaceutical dosage form, soluble in water, with a view to reconstitution with water or with an aqueous vehicle to form a stable solution of m-AMSA, this dosage form being produced by stages of
(1) formation of an aqueous solution of L (+) hemiacetonate - crystalline m-AMSA monolactate containing approximately 0.5 mole of acetone per mole of lactate, of a crystalline product of acetone dissolution DL-m-AMSA monolactate containing approximately 0.6 to 0.7 mole of acetone per mole of lactate or of a D (-) hemiacetonate - crystalline m-AMSA monolactate containing approximately 0.5 mole of acetone per mole of lactate; and
(2) lyophilization of the aqueous solution as well
produced.
The lyophilized lactate acetonates are prepared by simply dissolving the L (+) - monolactate hemiacetonate, the D (-) monolactate hemiacetonate or the crystalline DLmonolactact acetone solvate in a suitable volume of water to form a total solution, the aqueous solution then being subjected (after an optional filtration step) to a conventional lyophilization operation. It is found that the lyophilized solids contain approximately 1 mole of lactic acid per mole of m-AMSA and that they are devoid of acetone. They can be easily reconstituted with water or with an aqueous vehicle to obtain true solutions containing at least 3-5 mg / ml of m-AMSA having excellent stability characteristics.
The crystalline monolactate acetonates and the lyophilized products obtained in accordance with the present invention display substantially the same anti-tumor properties as the known forms of m-AMSA. However, due to their high solubility in water, they can be used to prepare clinical dosage forms in individual vials with dry load and lyophilized for intravenous administration, which do not contain an undesirable pharmaceutical vehicle such as dimethylacetamide. The new dosage forms are all suitable for rapid and convenient reconstitution with sterilized water or aqueous vehicle.
It has been found that an aqueous solution of lactate acetonates or freeze-dried products, containing an m-AMSA activity of 3-5 mg / ml, represents a particularly desirable dosage form for intravenous administration.
The m-AMSA salts and the lyophilized products of the present invention can be used to prepare non-intravenous oral or parenteral dosage forms as well as the preferred product for intravenous injection.
In the treatment of tumors in mammals, the dosage forms of the present invention can be administered orally or parenterally, but preferably parenterally, at the doses and according to the dosages already indicated in the literature.
The invention is illustrated by the following examples, given without limitation.
EXAMPLE 1
Preparation of L (+) hemiacetonate - m-AMSA monolactate
400 mg of m-AMSA are dissolved in 35 ml of acetone after 10 minutes of stirring. To this solution is added, with stirring, a solution of 450 mg (4 equivalents) of L (+) lactic acid in 10 ml of acetone. An aliquot of the resulting mixture is scraped off using a glass rod in a small glass test tube to form crystals. The crystals are added to the reaction mixture and
<EMI ID = 7.1>
ambient. The orange-colored crystals which form are separated by filtration, washed with 10 ml of acetone and dried
r <EMI ID = 8.1>
crystalline lactate is 0.53 g.
Properties of mono-L (+) - lactate hemiacetonate <EMI ID = 9.1>
(b) Spectral analysis: the infrared spectrum, the nuclear magnetic resonance spectrum and the ultraviolet spectrum are consistent, for a solvated monolactate containing 0.5 mole of acetone per mole of m-AMSA
(c) Water content (Karl Fischer method) = 0.64%
(d) Elementary analysis: C = 58.44%; H = 5.58%;
N = 7.70%; S = 5.95%.
(e) Solubility in water: 5 mg / ml
(f) Stability: 15 mg of salt were reconstituted with 10 ml of sterilized water. The solution was shown to be stable for at least 24 hours and showed a loss of activity of less than 6% after two weeks of storage at 45 [deg.] C.
EXAMPLE 2
Preparation of L (+) hemiacetonate - lyophilized m-AMSA monolactate
The crystalline m-AMSA monolactate hemiacetonate (10 mg) prepared in accordance with Example 1 is dissolved in 0.5 ml of sterilized water in an 8.2 ml flint glass vial. The vial is lyophilized in a laboratory lyophilization device for 16 hours. Sterilized water (0.5 ml) is added to the vial. A solution is obtained after shaking for 2 minutes.
This experiment is repeated using 10 mg of the monolactate hemiacetonate dissolved in 15 ml of sterilized water. The more dilute solution is preferable for the preparation of the lyophilized product.
EXAMPLE 3
Sterile crystallization of the mono-L (+) lactate hemiacetonate from m-AMSA
1. Mix 1.0 g of free base m-AMSA in 100 ml of acetone at 22-28 [deg.] C. A total or almost total dissolution is obtained in 10 minutes.
2. Using an aseptic technique, make
<EMI ID = 10.1>
"Millipore-Fluoropore" or "Mitex" sterile. Collect the filtrate in a sterile glass or stainless steel container.
Wash the filter with 15 ml of acetone and add the acetone which has passed through the filter to the above filtrate. Solution A is thus obtained. Use Solution A in step 5 within 5 hours.
3. Dissolve 1 g of L (+) lactic acid in a sufficient quantity of acetone to obtain 10 ml of solution
(100 mg / ml L (+) - lactic acid). Shake for 5 minutes.
4. Operating under aseptic conditions, pass the acetone solution of L (+) - lactic acid through a sterile "Millipore-Fluoropore" or "Mitex" filter. Collect the filtrate in a sterile glass or stainless steel container. This gives Solution B. Do not wash the filter.
5. With moderate agitation, add 5.8 ml of Solution B to all of Solution A over a period of 1 to 2 minutes. This represents 2.5 equivalents (0.5B g) of L (+) - lactic acid. Crystals should form in a 10 minute shaking period. If crystals do not form, sterile m-AMSA monolactate hemiacetonate seed crystals can be added or the sides of the container can be scraped off with a sterile glass rod to cause crystallization.
6. Stir for another hour after the start of crystallization.
7. Separate the crystals using a sterile filtration technique that leaves no fibrils. Wash the crystals with 25 ml of acetone previously filtered on a sterile "Millipore-Fluoropore" or "Mitex" filter.
<EMI ID = 11.1>
16 to 24 hours. The yield of mono-L (+) lactate hemiacetonate from m-AMSA is equal to 1.1 g.
EXAMPLE 4
Preparation of the crystalline acetone solvation product of the mono-DL-lactate of m-AMSA
It is kept in suspension for 15 minutes at
<EMI ID = 12.1>
by vacuum filtration on a 15 cm fine glass filter a small amount of insoluble matter. 0.15 ml of an 80% solution of DL-lactic acid is added to the filtrate with rapid stirring. Crystals form in about 10 minutes. The mixture is then stirred for a further
30 minutes. The crystals are collected by vacuum filtration on a 15 cm fine glass filter. They are then washed with 2 ml of acetone and dried under vacuum at 50 [deg.] C for
16 hours. 180 mg of the salt indicated in the title are obtained.
<EMI ID = 13.1>
Water content (Karl Fischer) = 1.03%
Melting point (capillary method, value
<EMI ID = 14.1>
The nuclear magnetic resonance spectrum of the product is in accordance with a mAMSA monolact containing 0.6 mole of acetone per mole of salt. The product contains 0.1 mole% lactyl lactate as an impurity, which is formed due to the presence of up to 20% lactyl lactic acid in DL-lactic acid * of ACS purity. The salt obtained as a product can be reconstituted with water to form a solution at 5-
<EMI ID = 15.1>
minus 6 hours. Reconstituted aqueous solutions of 5, 7.5 and 10 mg / ml are easy to obtain by shaking at 23.9 [deg.] C for 3 minutes. The solubility of salt in water at room temperature is at least 15 mg / ml.
This can be avoided by using an equimolar mixture of L (+) - pure r lactic acid and D (-) - pure lactic acid instead of DLlactic acid.
<EMI ID = 16.1>
Preparation of the crystalline acetone solvation product of the mono-DL-lactate of m-AMSA
It is kept in suspension for 10 minutes
15 g of m-AMSA base in 1.5 liters of acetone at 22-24 [deg.] C. This mixture is filtered under vacuum and the insoluble materials are washed with 50 ml of acetone. The wash liquor is added to the filtrate and then the filtrate is placed in a 2 liter Erlenmeyer flask. We add in an interval
<EMI ID = 17.1>
lactic (2.5 equivalents). The reaction mixture is inoculated with crystals of acetone solvate from DL-lactate from m-AMSA. The crystals begin to form in 5 minutes. The mixture is stirred for one hour at 20-23 [deg.] C. The crystals are separated by vacuum filtration and washed with 150 ml of acetone. Washed crystals
<EMI ID = 18.1>
17.8 g of product indicated in the title.
Properties The nuclear magnetic resonance spectrum
and the infrared spectrum agree with an m-AMSA monolactate having about 0.7 mole of solvating acetone per mole of salt. We also note the presence of small amounts of lactyl lactate as an impurity.
<EMI ID = 19.1>
Water content (Karl Fischer) = 0.81%.
The salt could be easily reconstituted with sterilized water to form a 7.5 mg / ml solution. Aqueous solutions with concentrations of 5 and 7.5 mg / ml remained clear for at least 16 hours at room temperature (17 [deg.] C).
EXAMPLE 6
Preparation of the crystalline acetone solvation product of the mono-DL-lactate of m-AMSA
It is kept in suspension for 10 minutes
20 g of m-AMSA base in 2 liters of acetone at 25 [deg.] C. The mixture is filtered under vacuum and the insoluble materials are washed with 100 ml of acetone (the washing liquor is then added to the filtrate). 11.45 ml of DL- acid are added to the filtrate with rapid stirring over an interval of one minute.
<EMI ID = 20.1>
5 minutes. The mixture is stirred for another hour. The crystals are separated by vacuum filtration and washed with 150 ml of acetone. By drying the crystals under vacuum at
<EMI ID = 21.1>
in the title.
<EMI ID = 22.1>
The infrared spectrum and the nuclear magnetic resonance spectrum conform to a monolactate of m-AMSA containing approximately 0.67 mole of solvated acetone per mole of lactate. We also note the presence of small amounts of lactyl lactate as an impurity.
Solubility test: Reconstituted aqueous solutions of 7.5 and 10 mg of the salt per ml of water remain clear for 24 hours at room temperature. A 15 mg / ml solution remains clear for 6 hours at room temperature.
EXAMPLE 7
'' Freeze-drying of acetone solvate from monoDL-lactate from m-AMSA
Dissolving with stirring 180 mg of the acetone solvate of DL-lactate from m-AMSA (prepared in Example 6) in 24 ml of sterilized water. The resulting clear solution (pH 4.2) is passed through a 25.4 mm "Millipore" filter, with 0.45 micrometer pores. 2 ml of the filtrate are introduced into a flint glass vial of
<EMI ID = 23.1>
The addition of 2 ml of sterilized water to the lyophilized flask gives a clear solution at 7.5 mg / ml. The solution remains clear for at least 6 hours at 17 [deg.] C.
Shaking the solution on a horizontal shaker at low speed gives a clear solution for up to 5 hours.
EXAMPLE 8
Sterile crystallization of the acetone solvate from DL-lactate from m-AMSA
1. Suspend 1.0 g of m-AMSA base in
100 ml of acetone at 22-28 [deg.] C. A total or almost total dissolution is obtained in 10 minutes.
2. Operating under aseptic conditions, pass the acetone solution through a filter
<EMI ID = 24.1>
filtrate in a sterile glass or stainless steel container.
Wash the filter with 10 ml of acetone and add the filtered acetone to the filtrate. Solution A is thus obtained. Use Solution A in step 5 within 5 hours.
3. Dissolve 1 g of DL-lactic acid (1.18 ml of 85% solution of DL-lactic acid) in a sufficient quantity of acetone to obtain 10 ml of acetonic solution
(100 mg / ml DL-lactic acid). Shake for 5 minutes.
4. Operating under aseptic conditions, pass the DL-lactic acid acetone solution to
<EMI ID = 25.1>
Collect the filtrate in a sterile glass or stainless steel container. This gives Solution B. Do not wash the filter.
5. With moderate agitation, add 5.8 ml of Solution B to the whole of Solution A in one period <EMI ID = 26.1>
(0.58 g) DL-lactic acid. Crystals should form in a 10 minute shaking period. If crystals do not form, sterile seed cells from the acetone solvate of DL-lactate from m-AMSA can be added or the sides of the container can be scraped off with a sterile glass rod to cause crystallization. .
6. Stir for another hour after the start of crystallization.
7. Separate the crystals using a sterile filtration technique that leaves no fibrils. Wash the crystals with 10 ml of acetone previously filtered on a sterile "Millipore-Fluoropore" or "Mitex" filter.
8. Dry the crystals under vacuum at 50 [deg.] C for
16 to 24 hours. The expected yield of DL-lactate acetone solvate is 1.1 g.
Properties: Infrared spectrum (see figure 3).
Nuclear magnetic resonance spectrum
(see figure 4). It is noted that approximately 0.7 mol of acetone is solvated with the salt and the presence of approximately 0.1 mol% of lactyl lactate is observed as an impurity.
Melting point = 159-166 [deg.] C (decomposition). m-AMSA in salt - 72% (based on analysis by high pressure liquid chromatography).
Solubility in water = * 25 mg / ml at room temperature.
<EMI ID = 27.1>
Dry-loading parenteral formulation of m-AMSA DL-lactate acetone solvate
<EMI ID = 28.1>
1. Using aseptic conditions, place the desired amount of sterile m-AMSA DL-lactate in 0.25 to 0.42 mm particles in sterile vials. Stopper with sterile rubber stoppers. Seal with aluminum capsules. The vials are kept in the dark until they are ready for reconstitution.
2. To carry out the reconstitution, add a sufficient quantity of sterile water for injections so as to obtain a solution containing an activity in m-AMSA of 5 mg / ml. Reconstituted solutions can be stored at 20-25 [deg.] C for 16 hours. Caution: the solutions of m-AMSA are incompatible with chloride, sulfate and phosphate ions. Insoluble salts are formed.
It is observed that the addition of 100 mg of mannitol shortens the reconstitution time with water.
** The required amount of solvate to
the acetone of the DL-lactate of m-AMSA is a function of the salt concentration, the necessary overfilling and the needle-syringe-vial retention. If we take for example a product containing 0.7 mole of acetone per mole of salt, the
<EMI ID = 29.1>
Thus, to obtain an activity in m-AMSA of 0.2 g, it is necessary to use 0.27 g of solvate with acetone of DL-lactate of m-AMSA with a purity of 100%. This quantity is then adjusted to take into account the actual concentration of the product, the necessary overfilling, etc.
EXAMPLE 10
Preparation of D (-) hemiacetonate - crystalline m-AMSA monolactate
1. Suspend 1.0 g of m-AMSA base in
100 ml of acetone at 22-28 [deg.] C. A total or almost total dissolution is obtained in 10 minutes.
2. Operating under aseptic conditions, pass the acetone solution of m-AMSA through a sterile "Millipore-Fluoropore" or "Mitex" filter. Collect the filtrate in a sterile glass or stainless steel container.
Wash the filter with 10 ml of acetone and add to the filtrate the acetone filtered on "Millipore". Solution A is thus obtained. Use Solution A in step 5 within 5 hours.
3. Dissolve 1 g of D - (-) - lactic acid in a sufficient quantity of acetone to obtain 10 ml of acetonic solution (100 mg / ml) of D (-) - lactic acid. Shake for 5 minutes.
4. Operating under aseptic conditions, pass the acetone solution of D (-) - lactic acid through a "Millipore-Fluoropore" or "Mitex" filter. Collect the filtrate in a sterile glass or stainless steel container. This gives Solution B. Do not wash the filter.
5. With moderate agitation, add 5.8 ml of Solution B to all of Solution A over a period of one to two minutes. This represents 2.5 equivalents
(0.58 g) D-lactic acid. Crystals should form in a 10 minute shaking period. If crystals do not form, sterile seed crystals of D - (-) acetone solvate from m-AMSA lactate can be added or the sides of the container can be scraped off with a sterile glass rod. to cause crystallization.
6. Stir for another hour after the start of crystallization.
7. Separate the crystals by a suitable sterile filtration technique which leaves no fibrils.
Wash the crystals with 10 ml of acetone previously filtered
<EMI ID = 30.1>
for 16-24 hours. The usual yield of acetone solvate for D - (-) - m-AMSA monolactate is 1.1 g.
Properties: Infrared spectrum, see figure 5.
Nuclear magnetic resonance spectrum, see FIG. 6. It can be seen that about 0.4 mole of acetone is fixed to the salt by solvation.
Melting point (capillary method, uncorrected value): 180-184 [deg.] C (decomposition). m-AMSA in salt: 78.4% (from analysis by high pressure liquid chromatography).
<EMI ID = 31.1>
Water content (Karl Fischer) = 0.39%.
EXAMPLE 11
Lyophilization of D (-) acetonate - m-AMSA monolactate
By repeating the procedure of Example 7 and replacing the acetone solvate of the DL-lactate of m-AMSA by an equimolar amount of the acetone solvate of D (-) - monolactate of m-AMSA prepared in Example 10, a lyophilized solid is obtained which can be reconstituted with water to form a solution having an m-AMSA activity of at least 3-5 mg / ml. The solid contains, according to the analysis, a
<EMI ID = 32.1> mole of m-AMSA per mole of D (-) - lactic acid and does not contain acetone.