<EMI ID=1.1> <EMI ID=2.1>
obstacles, les principaux étant la formation de produits de fermentation dangereux pour la santé des animaux, voire des humains qui consomment, la viande et les
<EMI ID=3.1>
contenues.- dans le milieu de produire de l'acide lactique à partir de- sucres solubles
<EMI ID=4.1>
<EMI ID=5.1>
de sucres fermentescibles, la prolifération des seules bactéries lactiques contenues dans le milieu est insuffisante, le pH ne descend pas assez rapidement à 4, et les
<EMI ID=6.1>
résiduels en acides butyrique et acétique, en gaz carbonique et en hydrogène ; les
<EMI ID=7.1>
<EMI ID=8.1>
est-connu d'effectuer une acidification chimique par addition d'acides divers. Mais ces procédés ne sont pas sans danger. Il est également connu d'effectuer une acidi-
<EMI ID=9.1>
acidification biologique est difficile dans sa réalisation.
<EMI ID=10.1>
<EMI ID=11.1>
<EMI ID=12.1>
Dans le brevet français 2.361.828, il est décrit un procédé de conservation .. et valorisation de végétaux en .vert par acidification lactique, qui comprend l'adjonction à ces végétaux, avant l'ensilage, de-bactéries capables .(le provoquer
<EMI ID=13.1>
produisant la fermentation lactique. Ce. facteur de dégradation est constitué par des bactéries gram + qui fermentent, l'amidon, le glucose, le. mannitol , le rahnnose, le <EMI ID=14.1>
nécessite plusieurs enzymes ou une seule .remplissant plusieurs fonctions qui sont :
- 1'hydrolyse des zones amorphes, <EMI ID=15.1> <EMI ID=16.1> liaisons irrégulières de là cellulose et de ses produits primaires d'hydrolyse.
Le complexe cellulolytique a été choisi en fonction des critères ci-dessus et après un-grand nombre d'essais sur divers végétaux.
-se, est définie par son activité exprimée en unités internatio- <EMI ID=17.1>
Les activités varient en fonction du substrant utilisé: <EMI ID=18.1> <EMI ID=19.1> <EMI ID=20.1>
Le complexe utilisé selon l'invention possède une très haute activité cellulolytique ainsi que des activités secondaires du type hemicellulolytique. Le
<EMI ID=21.1>
une activité de cellcbiase (téta-glucosidase) .
<EMI ID=22.1>
<EMI ID=23.1>
<EMI ID=24.1>
<EMI ID=25.1>
<EMI ID=26.1>
<EMI ID=27.1>
pouvoir réducteur des endo et exoglucanases. Ces enzymes agissent principalement
<EMI ID=28.1>
cellobiose obtenues après l'action de C .
Ces différentes activités ne peuvent pas être prises séparément. Il existe un mécanisme de synergie entre C, et C pour la dégradation de ces homopolymères.
<EMI ID=29.1>
celle-ci est ensuite hydrolysée par une béta-glucosidase pour donner deux unités de glucose.
Les réactions d'hydrolyse de la cellulose semblent se décomposer selon le schéma suivant :
<EMI ID=30.1>
<EMI ID=31.1>
<EMI ID=32.1>
(DP) supérieur à 3.500 monomères de glucose] et produit de la cellulose réactive
(cellulose amorphe)..
<EMI ID=33.1>
chaînes de cellulose réactive sont découpées, soit à l'intérieur et au hasard dans le cas des endo-glucanases, soit à partir des extrémités non réductrices dans le
<EMI ID=34.1>
L'ensemble de ces réactions donne des unités de cellobiose.
Ces unités de cellobiose sont hydrolysées par une béta-glucosidase pour donner deux molécules de glucose.
Dans le cas des cellulases fongiques selon l'invention, le complexe
<EMI ID=35.1>
glucose.
Les cellulases selon l'invention ont été choisies, non seulement en fonction des critères généraux indiqués ci-dessus, mais également en tenant compte du milieu d'ensilage qui est particulier, en fonction du comportement polysaccharolytique de ces cellulases.
Ce comportement polysaccharolytique a été déterminé sur deux types de substrats : a) - des substrats= purs ; b) - des substrats déshydratés.
CAS DES SUBSTRATS PURS :
On a déterminé l'activité des cellulases A, B, C, D, E, F, sur divers substrats à une concentration donnée dans un milieu tampon acétate 10" M.
L'activité est testée selon les normes habituelles, c'est-à-dire à
pH 4,8, à 50[deg.]C, après 20 minutes d'hydrolyse. Le pouvoir réducteur est déterminé en utilisant la technique à lrnexaferrocyanure.
<EMI ID=36.1>
<EMI ID=37.1>
<EMI ID=38.1>
<EMI ID=39.1>
<EMI ID=40.1>
<EMI ID=41.1>
de l'élimination du glucose ; ce déplacement d'équilibre enzymatique' est obtenu en utilisant des bactéries à haut pouvoir fermentaire ; l'acidification du milieu est
<EMI ID=42.1>
<EMI ID=43.1> <EMI ID=44.1>
<EMI ID=45.1>
<EMI ID=46.1>
La mise en¯oeuvre.de' ces nouvelles souches de bactéries pour l'ensilage, des végétaux, seuls ou en association .avec d'autres souches bactériennes et/où enzymes, s'effectue selon les modalités décrites dans l'art antérieur . les bactéries peuvent
<EMI ID=47.1>
déposées sur. support solfie ou non, avec-le mélange des enzymes préconisées dans
<EMI ID=48.1>
Une forme préférée de l'invention consiste à mettre'- les enzymes et les bactéries sur un support de céréales (blé, orge, orge germé) de préférence sous forme
<EMI ID=49.1>
Une autre forme préférée de l'invention consiste à mette les bactéries et
<EMI ID=50.1> <EMI ID=51.1>
Lorsque les enzymes sont déposées sur support de céréales selon la. forme préférée de l'invention, le produit à incorporer dans l'ensilage peut contenir 1 kg
<EMI ID=52.1>
rapports de concentration de l'enzyme par rapport' au support changent et peuvent
<EMI ID=53.1>
' Cette incorporation de cellulase dans le support va augmenter la quantité
<EMI ID=54.1>
mini-silos/ Les différents paramètres de conservation sont étudiés ainsi que ceux traduisant la structure végétale.
<EMI ID=55.1>
<EMI ID=56.1> <EMI ID=57.1>
Ces expérimentations ont été effectuées au mois de niai, sur de la luzerne :
<EMI ID=58.1>
ensilée en suivant le protocole expérimental ci-après :
A-Une série de micro-silos fut traitée en utilisant l'additif de conservation dont la formule générale est la suivante.; <EMI ID=59.1>
C- Une série de micro-silos témoins : ,
<EMI ID=60.1>
<EMI ID=61.1>
<EMI ID=62.1>
<EMI ID=63.1>
<EMI ID=64.1>
<EMI ID=65.1>
Ces essais' ont été effectues pendant le mois de juin sur de la luzerne dans
<EMI ID=66.1>
La luzerne était hachée: finement, puis soumise à l'ensilage en suivant le protocole expérimental ci-dessous.
<EMI ID=67.1>
B - Une série de mini-silos fut traitée en utilisant la fonnule et la dose indiquées
<EMI ID=68.1>
de 2 g/T.
<EMI ID=69.1>
<EMI ID=70.1>
<EMI ID=71.1>
<EMI ID=72.1>
cellulase au complexe bactéries + enzymes décrites dans le brevet 2.390.908.
Cette addition produit : <EMI ID=73.1> <EMI ID=74.1>
[deg.]: la partie protéique de l'ensilage est bien mieux conservée lorsque l'on supplémente par une cellulase ; ceci est confirmé par l'analyse. On a dans ce
<EMI ID=75.1> <EMI ID=76.1>
Cette plus grande vitesse d'acidification peut s'expliquer par le fait que les bactéries vont disposer plus rapidement d'une masse importante de sucres fermen-
<EMI ID=77.1>
retrouve l'effet de la cellulase introduite dans le milieu.
Dans les exemples qui suivent, le mélange sur support selon le procédé de la présente invention est constitué par le complexe décrit dans le brevet français
2.361.828 et/ou'le brevet 2.390.908, le complexe enzymatique décrit dans la présente
<EMI ID=78.1>
<EMI ID=79.1>
<EMI ID=80.1>
EXEMPLES
Des essais ont été effectués dans des silos de 4 m<3> de capacité sur du dactyle Lucifer récolté en juin, en début d'épiaison. Le fourrage finement haché est soumis à stockage dans 4 conditions :
A : ensilage sans traitement
B : ensilage .réalisé avec 4 litres d'acide formique/tonne, à la manière
connue de l'art antérieur
C : ensilage réalisé avec le prémélange dont la composition est donnée dans
les brevets français 2.361.828 et 2.390.908 : ensilage additionné de
<EMI ID=81.1>
<EMI ID=82.1>
<EMI ID=83.1>
<EMI ID=84.1>
<EMI ID=85.1>
Après 90 à 100 jours, les différents ensilages sont ouverts, et les analyses des végétaux sont effectués. Elles conduisent aux résultats ci-après (Tableau II).
<EMI ID=86.1>
<EMI ID=87.1>
<EMI ID=88.1>
<EMI ID=89.1>
Ce mélange présentait l'avantage de ne donner- lieu à aucune formation d'acide propionique et d'acide butyrique.
Le mélange suivant la présente'invention apporte une amélioration suppléa mentaire se traduisant par ;
<EMI ID=90.1>
<EMI ID=91.1>
une meilleure protection protéique qui se traduit par une diminution du rapport N-NH3/N total. Celui-ci passe de 14 à 8 et du
<EMI ID=92.1>
Ce mélange présente l'avantage de ne donner lieu à aucune fermentation d'acide propionique et d'acide butyrique.
<EMI ID=93.1>
des moutons ; après les divers traitements, il a été trouvé :
<EMI ID=94.1>
C : traitement suivant les brevets français 2.361.328 et 2.390.903 : 0,74 UF/kg , D : traitement suivant l'invention : 0,82 UF/kg
Le bilant azoté sur animaux en croissance conduit à des résutlats montrant l'intérêt des traitements avec des produits d'ensilage selon la présente invention
<EMI ID=95.1>
<EMI ID=96.1>
<EMI ID=97.1>
<EMI ID=98.1> <EMI ID=99.1>
<EMI ID = 1.1> <EMI ID = 2.1>
obstacles, the main ones being the formation of fermentation products dangerous to the health of animals and even humans who consume meat and
<EMI ID = 3.1>
contained.- in the medium to produce lactic acid from soluble sugars
<EMI ID = 4.1>
<EMI ID = 5.1>
of fermentable sugars, the proliferation of only lactic acid bacteria contained in the medium is insufficient, the pH does not drop quickly enough to 4, and the
<EMI ID = 6.1>
residual in butyric and acetic acids, carbon dioxide and hydrogen; the
<EMI ID = 7.1>
<EMI ID = 8.1>
It is known to carry out chemical acidification by adding various acids. But these processes are not without danger. It is also known to carry out an acidi-
<EMI ID = 9.1>
biological acidification is difficult in its realization.
<EMI ID = 10.1>
<EMI ID = 11.1>
<EMI ID = 12.1>
In French patent 2,361,828, there is described a process for preserving and enhancing plants in green by lactic acidification, which comprises the addition to these plants, before ensilage, of capable bacteria.
<EMI ID = 13.1>
producing lactic fermentation. This. degradation factor consists of gram + bacteria which ferment, starch, glucose,. mannitol, rahnnose, <EMI ID = 14.1>
requires several enzymes or one. fulfilling several functions which are:
- hydrolysis of amorphous zones, <EMI ID = 15.1> <EMI ID = 16.1> irregular bonds of the cellulose and its primary hydrolysis products.
The cellulolytic complex was chosen according to the above criteria and after a large number of tests on various plants.
-se, is defined by its activity expressed in international units- <EMI ID = 17.1>
The activities vary according to the substrate used: <EMI ID = 18.1> <EMI ID = 19.1> <EMI ID = 20.1>
The complex used according to the invention has a very high cellulolytic activity as well as secondary activities of the hemicellulolytic type. The
<EMI ID = 21.1>
cellcbiase (teta-glucosidase) activity.
<EMI ID = 22.1>
<EMI ID = 23.1>
<EMI ID = 24.1>
<EMI ID = 25.1>
<EMI ID = 26.1>
<EMI ID = 27.1>
reducing power of endo and exoglucanases. These enzymes act mainly
<EMI ID = 28.1>
cellobiose obtained after the action of C.
These different activities cannot be taken separately. There is a synergistic mechanism between C, and C for the degradation of these homopolymers.
<EMI ID = 29.1>
this is then hydrolyzed by a beta-glucosidase to give two units of glucose.
Cellulose hydrolysis reactions seem to break down according to the following scheme:
<EMI ID = 30.1>
<EMI ID = 31.1>
<EMI ID = 32.1>
(DP) greater than 3,500 glucose monomers] and produces reactive cellulose
(amorphous cellulose) ..
<EMI ID = 33.1>
reactive cellulose chains are cut, either inside and at random in the case of endo-glucanases, or from the non-reducing ends in the
<EMI ID = 34.1>
All of these reactions give units of cellobiose.
These cellobiose units are hydrolyzed by a beta-glucosidase to give two glucose molecules.
In the case of fungal cellulases according to the invention, the complex
<EMI ID = 35.1>
glucose.
The cellulases according to the invention were chosen, not only according to the general criteria indicated above, but also taking into account the silage medium which is particular, according to the polysaccharolytic behavior of these cellulases.
This polysaccharolytic behavior was determined on two types of substrates: a) - substrates = pure; b) - dehydrated substrates.
CASE OF PURE SUBSTRATES:
The activity of cellulases A, B, C, D, E, F, was determined on various substrates at a given concentration in an acetate buffer medium 10 "M.
The activity is tested according to the usual standards, i.e.
pH 4.8, at 50 [deg.] C, after 20 minutes of hydrolysis. The reducing power is determined using the annexaferrocyanide technique.
<EMI ID = 36.1>
<EMI ID = 37.1>
<EMI ID = 38.1>
<EMI ID = 39.1>
<EMI ID = 40.1>
<EMI ID = 41.1>
elimination of glucose; this enzymatic equilibrium shift is obtained by using bacteria with high fermentative power; the acidification of the medium is
<EMI ID = 42.1>
<EMI ID = 43.1> <EMI ID = 44.1>
<EMI ID = 45.1>
<EMI ID = 46.1>
The implementation of these new strains of bacteria for silage, plants, alone or in combination with other bacterial strains and / or enzymes, is carried out according to the methods described in the prior art. bacteria can
<EMI ID = 47.1>
deposited on. support solfie or not, with the mixture of enzymes recommended in
<EMI ID = 48.1>
A preferred form of the invention consists in putting the enzymes and the bacteria on a cereal support (wheat, barley, germinated barley) preferably in the form
<EMI ID = 49.1>
Another preferred form of the invention is to introduce bacteria and
<EMI ID = 50.1> <EMI ID = 51.1>
When the enzymes are deposited on a cereal support according to the. preferred form of the invention, the product to be incorporated into the silage may contain 1 kg
<EMI ID = 52.1>
ratios of enzyme concentration to carrier change and may
<EMI ID = 53.1>
'This incorporation of cellulase in the support will increase the amount
<EMI ID = 54.1>
mini-silos / The different conservation parameters are studied as well as those reflecting the plant structure.
<EMI ID = 55.1>
<EMI ID = 56.1> <EMI ID = 57.1>
These experiments were carried out in niai, on alfalfa:
<EMI ID = 58.1>
ensiled following the experimental protocol below:
A-A series of micro-silos was treated using the conservation additive, the general formula of which is as follows; <EMI ID = 59.1>
C- A series of control micro-silos:,
<EMI ID = 60.1>
<EMI ID = 61.1>
<EMI ID = 62.1>
<EMI ID = 63.1>
<EMI ID = 64.1>
<EMI ID = 65.1>
These tests were carried out during June on alfalfa in
<EMI ID = 66.1>
The alfalfa was minced: finely, then subjected to silage following the experimental protocol below.
<EMI ID = 67.1>
B - A series of mini-silos was treated using the formula and the dose indicated
<EMI ID = 68.1>
of 2 g / T.
<EMI ID = 69.1>
<EMI ID = 70.1>
<EMI ID = 71.1>
<EMI ID = 72.1>
cellulase with the bacteria + enzymes complex described in patent 2,390,908.
This addition produces: <EMI ID = 73.1> <EMI ID = 74.1>
[deg.]: the protein part of the silage is much better preserved when supplemented with a cellulase; this is confirmed by the analysis. We have in this
<EMI ID = 75.1> <EMI ID = 76.1>
This higher rate of acidification can be explained by the fact that the bacteria will dispose of a large mass of closed sugars more quickly.
<EMI ID = 77.1>
finds the effect of the cellulase introduced into the medium.
In the examples which follow, the mixture on a support according to the process of the present invention consists of the complex described in the French patent
2,361,828 and / or patent 2,390,908, the enzyme complex described herein
<EMI ID = 78.1>
<EMI ID = 79.1>
<EMI ID = 80.1>
EXAMPLES
Tests were carried out in silos of 4 m <3> capacity on cocksfoot Lucifer harvested in June, at the beginning of the heading. Finely chopped fodder is subjected to storage under 4 conditions:
A: silage without treatment
B: silage made with 4 liters of formic acid / ton,
known from the prior art
C: ensilage made with the premix, the composition of which is given in
French patents 2,361,828 and 2,390,908: silage with added
<EMI ID = 81.1>
<EMI ID = 82.1>
<EMI ID = 83.1>
<EMI ID = 84.1>
<EMI ID = 85.1>
After 90 to 100 days, the various silages are opened, and the analyzes of the plants are carried out. They lead to the results below (Table II).
<EMI ID = 86.1>
<EMI ID = 87.1>
<EMI ID = 88.1>
<EMI ID = 89.1>
This mixture had the advantage of not giving rise to any formation of propionic acid and butyric acid.
The mixture according to the present invention provides an additional improvement resulting in;
<EMI ID = 90.1>
<EMI ID = 91.1>
better protein protection which results in a reduction in the total N-NH3 / N ratio. This goes from 14 to 8 and from
<EMI ID = 92.1>
This mixture has the advantage of not giving rise to any fermentation of propionic acid and butyric acid.
<EMI ID = 93.1>
sheep; after the various treatments, it was found:
<EMI ID = 94.1>
C: treatment according to French patents 2,361,328 and 2,390,903: 0.74 UF / kg, D: treatment according to the invention: 0.82 UF / kg
The nitrogen balance on growing animals leads to results showing the advantage of the treatments with silage products according to the present invention.
<EMI ID = 95.1>
<EMI ID = 96.1>
<EMI ID = 97.1>
<EMI ID = 98.1> <EMI ID = 99.1>