Dérivés d'hormones stéroides antitumoraux et leur procédé de
préparation.
<EMI ID=1.1>
La présente invention'concerne les nouveaux dérivés d'hormones stéroïdes antitumoraux, ainsi que leur procédé de préparation. Plus particulièrement, elle concerne une méthode pour modifier un médicament antitumoral afin d'améliorer son effet antitumoral et d'abaisser sa toxicité par liaison dudit médicament antitumoral à un dérivé d'acide carboxylique d'une hormone stéroïde spécifique.
Lorsqu'on administre et transfère des médicaments dans des organes et tissus du corps, le taux du médicament transféré dans les organes ou cellules malades est remarquablement faible, alors que le taux du médicament décomposé ou excrété sans avoir atteint les organes ou cellules malades est remarquablement grand. La plupart des médicaments antitumoraux connus détruisent les cellules tumorales ou cancéreuses en endommageant également fortement les cellules normales. Par suite, il est difficile d'administrer les médicaments antitumoraux connus pendant une longue durée et il est difficile de détruire complètement les cellules tumorales ou cancéreuses.
Par suite, un médicament antitumoral qui n'attaque seulement de façon sélective que les cellules tumorales ou cancéreuses devait constituer un moyen remarquablement efficace en thérapeutique.
La demanderesse a fait des recherches pour trouver une méthode permettant à la substance physiologiquement active d'atteindre les organes ou cellules visés. Elle a trouvé en conséquence que les dérivés d'hormones stéroïdes antitumoraux obtenus en liant une substance physiologiquement active, en particulier, un médicament antitumoral à un dérivé d'hormones stéroïdes, sont remarquablement efficaces dans le but précité.
Selon un objectif de l'invention, on propose une méthode pour améliorer l'effet antitumoràl et abaisser la toxicité en modifiant ledit médicament antitumoral par un dérivé particulier d'hormones stéroïdes.
Selon un autre objectif de l'invention, on propose un procédé pour lier sélectivement un groupe réactif modifié ou
<EMI ID=2.1>
d'hormones stéroïdes.
Les objectifs précités ainsi que d'autres sont atteints <EMI ID=3.1>
selon l'invention procurant des dérivés d'hormones stéroïdes antitumoraux permettant d'attaquer sélectivement des cellules tumorales ou cancéreuses, qui sont obtenus en liant le groupe X d'un dérivé d'hormones stéroïdes répondant à la formule ;, .
<EMI ID=4.1>
dans laquelle ST représente un fragment stéroïde présentant le squelette hydrocarboné d'un cylopentanophénanthrène, tel que le squelette hydrocarboné du gonane, de l'oestrane ou de l'androstane qui est relié au groupe carboxyle par estérifi-
<EMI ID=5.1>
sente un groupe al-
<EMI ID=6.1>
groupe amino, un groupe hydroxyle, un groupe carboxyle ou l'un de leurs sels, avec un groupe réactif modifié ou non modifié d'un agent antitumoral en formant ainsi un groupement de liaison par l'intermédiaire de -0-, -COO-, -CONH-, -NH- où
-N-.
<1> Les dérivés d'hormones stéroïdes antitumoraux de l'invention (désignés ci-après en tant que dérivés antitumoraux) sont des composés obtenus en liant une hormone stéroïde particulière (celle-ci se fixant sélectivement sur des cellules particulières) à un médicament antitumoral (ce dernier détruisant les cellules particulières) par l'intermédiaire d'un groupement de liaison . Par suite, le dérivé antitumoral de l'invention fait parvenir sélectivement un médicament antitumoral véhiculé par une hormone stéroïde à une cellule réceptrice d'hormones stéroïdes, en détruisant ainsi sélectivement des organes et cellules de tissus du corps, récepteurs d'hormones stéroïdes particulières.
Les combinaisons des hormones stéroïdes particulières et de la substance physiologiquement active comme agent antitumoral peuvent être maniées aisément par des personnes versées dans l'art médical.
Les cellules réceptrices d'hormones stéroïdes sont bien connues. Par ailleurs, les relations entre les médicaments antitumoraux et les cellules tumorales ou cancéreuses sont également bien connues par de nombreuses données cliniques et données pharmacologiques.
Les hormones stéroïdes sont de préférence des composés <EMI ID=7.1> possédant le squelette carboné du cyclopentanophénanthrène et un groupe OH sur le noyau D, en particulier des stéroïdes présentant le squelette carboné du cyclopentanophénanthrène ayant jusqu'à 35 atomes de carbone (y compris les substituants) tels que le squelette hydrocarboné du gonane., de l'oestrane ou de l'androstane, et présentant un groupe OH sur le noyau D, en particulier en position 17.
Les substituants convenables comprennent des groupes alkyle, tels qu'un groupe méthyle et éthyle, des atomes d'halogène tels que des atomes de chlore, brome et iode, un groupe éthynyle, un groupe hydroxyle, un groupe cétone, un groupe acyle tel qu'acétoxy, un groupe propionyloxy, un groupe alkoxyle, un groupe benzoÿloxy ou une double liaison dans ledit squelette. Le substituant peut être introduit jusqu'à 4 positions,en particulier en position 3. Les iso-
<EMI ID=8.1>
inclus.
Des hormones stéroïdes convenables comprennent les suivantes :
<EMI ID=9.1>
17�-hydroxy-4-androstén-3-one(testostérone) ;
17�-hydroxy-17a-méthyl-4-androstén-3-one(méthyltestoestérone)
<EMI ID=10.1> oestrénorie).
Les dérivés desdites hormones stéroïdes dont le groupe OH en position 3 est converti en un groupe acyle tel qu'acétoxy, priopionyloxy ou benzoyloxy sont particulièrement préférables. On peut aisément effectuer la conversion en faisant réagir le groupe OH en position 3 de l'hormone stéroïde avec un halogénure d'acyle.
On convertit l'hormone stéroïde ou son dérivé acylé en
<EMI ID=11.1>
0
dicament antitumoral. La position dans laquelle le groupe
-O-C-R'X est introduit doit être choisie de façon à préser-
<EMI ID=12.1>
le noyau D suivant la nomenclature des stéroïdes.
On peut obtenir le dérivé d'hormone stéroïde en faisant agir un agent de liaison avec l'hormone stéroïde ou son dérivé. L'agent de liaison ne doit pas entraîner une toxicité. L'agent de liaison constituant une liaison ester réagit avec le groupe OH du noyau D de l'hormone stéroïde.
L'agent de liaison peut être un composé répondant à la
<EMI ID=13.1>
dans laquelle n est un nombre entier de 1 à 4 et X' est un atome d'halogène (Br, Cl); tel que l'acide a-monochloroacétique, l'acide a-monobromoacétique, l'acide �-monobromopropionique et l'acide monobromobutyrique ; un composé répondant à
<EMI ID=14.1>
dans laquelle n est un nombre entier de 1 à 4, X' est un atome d'halogène (Br, Cl) et X" est un atome d'halogène (Br, Cl) tel que le chlorure de a-monochloroacétyle et le bromure de a-monobromoacétyle ; un composé répondant à la formule
<EMI ID=15.1>
tel que l'acide malonique, l'acide succinique, l'acide glutarique, l'acide adipique, l'acide glycolique, un de leurs halogénures d'acyle ou anhydrides d'acides ; ou un composé répondant à la formule HN2(CH2)nCOOH
tel que l'acide a-aminoacétique et l'acide �-aminopropionique; ou le succinate de méthyle ou le glutarate de méthyle.
Par ailleurs, le groupe X de l'agent de liaison est réactif vis-à-vis du groupe réactif du médicament antitumoral, ledit groupe X devant être choisi de façon à obtenir aisément les dérivés d'hormones stéroïdes antitumoraux. Pour le choix de X, une personne versée dans la technique peut choisir un groupe qui est hautement réactif vis-à-vis du groupe réactif du médicament antitumoral ou de son groupe convertible.
Il est également possible de faire réagir l'agent de liaison avec le médicament antitumoral, puis de faire réagir le médicament antitumoral modifié avec le groupe OH du noyau D de l'hormone stéroïde.
L'invention vise à transférer efficacement le médicament antitumoral aux cellules tumorales ou cancéreuses. On peut choisir les médicaments antitumoraux utiles dans le cadre de l'invention parmi les médicaments antitumoraux connus.
Les médicaments antitumoraux convenables pour être utilisés conformément à l'invention, sont décrits ci-après suivant une certaine classification.
(A) Agents alkylants :
(I) type moutardes à l'azote :
p-[bis(2-chloroéthyl)amino]-L-phénylalanine ;
5-bis(2-chloroéthyl)amino-2,4-dioxo-pyrimidine; N,N-bis
<EMI ID=16.1>
Chlorhydrate de tris(2'-chloroéthyl)-amine ;
N-(2-chloroéthyl), N'-(2-chloroéthyl)diamide de l'ester N',O-propylène phosphorique ; et
4-hydroperoxy-isophosphamide.
(II) Ethylèneimines :
<EMI ID=17.1>
6-méthyl-1,4-benzoquinone.
(III) Nitrosourées :
1,3-bis(2-chloroéthyl)-1-nitrosourée ;
<EMI ID=18.1> <EMI ID=19.1>
désoxy-D-glucopyranoside ; et
1-(2-chloroéthyl)-3-cyclohexyl-1-nitrosourée.
(B) Antimétabolites :
Acide 4-aminoptéroyl-glutamique ;
<EMI ID=20.1>
6-mercaptopurine ;
6-mercaptopurineriboside ;
2-amino-6-hydroxy-8-azapurine ; o-diazoacétyl-L-sérine ;
6-diazo-5-oxo-L-norleucine ;
5-fluorouracile
5-fluorouridine ;
5-fluoro-2'-désoxyuridine ;
<EMI ID=21.1>
cytosinearabinoside ;
N 4 -acyl-cytosinearabinoside ;
<EMI ID=22.1>
nate de méthyle ; et
5-azacytidine.
(c) Antibiotiques :
Mitomycine C,
<EMI ID=23.1>
Daunorubicine, Doxorubicine,
Sarcomycine,
Rubidazone.
(D) Produits antitumoraux naturels
Vincristine,
Vinblastine,
Mytansine,
VP-16,
VM-26.
On décrit ci-après les conditions typiques utilisées dans les réactions.
On fait réagir l'agent de liaison avec le groupe OH du noyau D de l'hormone stéroïde en présence ou en l'absence d'un catalyseur dans un solvant tel que le tétrachlorure de carbone le chloroforme, le tétrahydrofuranne, le diméthylsulfoxyde
(DMSO), le diméthylformamide (DMF), la pyridine et l'acétone. La température de réaction s'étend couramment dans l'intervalle de -50[deg.]C à 200[deg.]C, de préférence de -20[deg.]C à 100[deg.]C. La durée de réaction s'étend couramment dans l'intervalle d'une demi-heure à 48 heures, de préférence de 1 à 24 heures.
Les catalyseurs peuvent être choisis parmi des acides tels quel l'acide p-toluènesulfonique, et des amines telles que la pyridine et la triéthylamine.
On fait-réagir les médicaments antitumoraux avec le produit réactionnel ainsi obtenu, en présence ou en l'absence d'un catalyseur dans un solvant tel que le DMSO, le DMF, l'éther, la pyridine, le toluène, le tétrachlorure de carbone, le chloroforme, le tétrahydrofuranne (THF).
<EMI ID=24.1>
tervalle de -20[deg.]C à 100[deg.]C, de préférence de -10[deg.]C à 80[deg.]C. Le temps de réaction s'étend couramment dans l'intervalle de 2 à 100 heures.
On purifie le produit résultant en obtenant les dérivés d'hormones stéroïdes antitumoraux.
<EMI ID=25.1>
acides tels que l'acide paratoluènesulfonique.
On peut également préparer le même composé en faisant réagir l'agent de liaison avec le médicament antitumoral, puis en faisant réagir le produit réactionnel ainsi obtenu avec un groupe OH du noyau D de l'hormone stéroïde en formant une liaison ester.
Les préparations desdits produits seront mieux comprises dans les exemples suivants gui ne montrent seulement que certains modes de mise en oeuvre, les conditions des réactions pouvant être modifiées.
On confirme la structure des dérivés d'hormones stéroïdes antitumoraux résultants, conformes à l'invention, entre autres par le spectre IR, la spectrométrie de masse, l'analyse élémentaire et le point de fusion.
On a en outre confirmé par des essais portant sur la toxicité aiguë, sur la fonction de fixation dans des. cellules tumorales ou cancéreuses et sur l'effet antitumoral, que les dérivés d'hormone stéroïde antitumoraux de l'invention ont une toxicité remarquablement basse, une excellente fonction de fixation dans les cellules tumorales ou cancéreuses et un excellent effet antitumoral.
Les dérivés d'hormone stéroïde antitumoraux de l'invention ont une toxicité remarquablement plus faible par comparaison avec les médicaments antitumoraux connus. La raison n'en est pas comprise en l'état actuel des connaissances et nécessite des études complémentaires. On considère que ces effets sont favorisés par un certain mécanisme inconnu accompagnat l'effet médical fondé sur le concept classique du récepteur.
On peut envisager l'utilisation des dérivés d'hormone stéroïde antitumoraux de l'invention pour obtenir des effets antitumoraux divers suivant les types de médicaments antitumoraux utilisés, ceci pour traiter le cancer utérin, le cancer du sein, le carcinome prostatique, le carcinome de la thyroïde, le cancer de l'estomac, le cancer-du rectum, le carcinome laryngé, le carcinome de l'oesophage, le cancer
du poumon, le cancer de la peau, le leucosarcome, le cancer du pancréas, la lymphogranulomatose maligne, les tumeurs de la vessie, le sarcome de l'ovaire, les tumeurs du cerveau,
le cancer villeux et le granulome malin.
Pour l'utilisation des dérivés d'hormone stéroïde antitumoraux de 1!invention, comme médicaments en thérapeutique, on peut préparer des compositions médicinales en vue de leur administration par les méthodes classiques pour les agents antitumoraux connus.
On peut transformer les dérivés d'hormone stéroïde antitumoraux de l'invention en formes d'administrations dosées, notamment en forme désirable pour l'injection, l'administration par voie orale, l'administration intravaginale ou l'administration par voie locale. Lorsqu'on les met sous des formes solides pour une administration orale, telles que des comprimés, pillules, granules, poudres, capsules, il est possible d'adjoindre à la préparation un liant, un agent diluant, une charge, un lubrifiant, un agent tensio-actif ou un agent de délitement. Lorsqu'on les met.sous des formes liquides,. en vue d'une administration orale, les préparations peuvent être constituées par une suspension aqueuse, une suspension
/ - huileuse, une solution, un sirop ou un mélange à agiter. Lorsqu'on les met sous forme de suppositoires, les préparations peuvent être réalisées en utilisant une base hydrophobe ou hydrophile et un stabilisant, un agent de délitement ou un agent colorant. Lorsqu'on les met sous forme de solutés injectables, on peut ajouter aux préparations une solution aqueuse, un solubilisant, une agent nutritif, un stabilisant, un agent tensio-actif. Pour maintenir ou améliorer l'effet médical, on peut incorporer comme désiré, une base, un acide ou un sel.
On peut préparer lesdites compositions en incorporant l'ingrédient actif au taux de 0,001 - 90 % en poids, de préférence 0,01 - 60 % en poids.
On peut administrer les préparations dosées contenant les dérivés d'hormone stéroïde antitumoraux de l'invention par administration orale, adsorption percutanée, injection intramusculaire, injection intrapéritonéale, injection intraveineuse, injection intrarectale, administration locale et injection sous-cutanée.
La dose de dérivé d'hormone stéroïde antitumoral de l'invention est comprise dans l'intervalle d'environ 0,01 à
50 mg/kg/jour/(personne) dans l'administration orale et elle est comprise dans l'intervalle d'environ 0,001 à 20 mg/kg/ jour/(personne) dans le cas de l'injection intraveineuse.
Les dérivés d'hormones stéroïdes antitumoraux de l'invention.ont les caractéristiques suivantes.
(1) Lorsque le cancer se forme dans un tissu présentant son récepteur, le produit attaque sélectivement les cellules tumorales ou cancéreuses du tissu de façon à détruire lesdites cellules tumorales ou cancéreuses. Ainsi, ledit produit est efficace pour une faible dose d'administration seulement.
(2) Le produit entraîne des effets secondaires inférieurs par comparaison avec ceux qui résultent de l'administration des médicaments antitumoraux connus. Ainsi, il peut être administré pendant un temps prolongé et, par suite, on peut détruire complètement les cellules tumorales et cancéreuses.
(3) L'hormone stéroïde utilisée comme composant porteur ou véhiculeur dans le dérivé d'hormone stéroïde antitumoral-présente une composition structurale unique.dont l'activité physiologique est clairement connue. Ainsi, le produit peut être administré sans aucune crainte.
(4) La structure et l'activité du composant antitumoral du dérivé d'hormone stéroïde antitumoral de l'invention sont déjà connues. Ainsi, c'est également sans aucune crainte que l'on peut administrer le produit.
(5) On peut analyser le récepteur des cellules tumorales ou cancéreuses. On peut choisir de façon correspondante, l'hormone stéroïde ou son dérivé comme composant véhiculeur du dérivé d'hormone stéroïde antitumoral. On peut envisager la thérapeutique de divers cancers par un choix du composant véhiculeur.
(6) On peut administrer le dérivé d'hormone stéroïde antitumoral par une forme dosée classique d'administration, telle que pour une administration orale, une injection ou. une forme en suppositoires.
(7) Les produits de l'invention ont d'excellentes caractéristiques et apportent ainsi leur haute contribution au bien-être humain, ainsi qu'au progrès de la médecine.
Dans un autre domaine d'application, les produits de l'invention sont également efficaces comme stabilisants pour hauts polymères, en particulier des polyoléfines.
L'invention sera illustrée ci-après avec plus de détails par des exemples toutefois nullement destinés à limiter ladite invention dans son cadre et son esprit.
EXEMPLE 1 :
(1-1)
<EMI ID=26.1>
dans 400 ml de tétrahydrofuranne (THF) anhydre, puis on y ajoute 8,8 g de pyridine.
A la solution résultante, on ajoute goutte-à-goutte une solution de 22,5 g de bromure de.monobromoacétyle dans 74 g de tétrachlorure de carbone, à une température.d'environ -5[deg.]C à -7[deg.]C. On abandonne le mélange pendant une nuit. Après la réaction, on sépare par filtration le précipité résultant. On chasse le solvant par distillation à partir du filtrat. On dissout le résidu dans de l'éther et on le recristallise à partir d'éther en obtenant le 3,17�-bis(monobromoacétate) de
<EMI ID=27.1>
dans 900 ml de méthanol et on refroidit la solution à -5[deg.]C. On ajoutte goutte-à-goutte à la solution résultante, une solution de 0,24 g de K2C03 dans 20 ml d'eau. Après la réaction pendant 30 minutes, on ajoute 1000 ml d'eau et on sépare et sèche le précipité résultant.
Les résultats de l'analyse élémentaire, le point de fusion et le spectre IR sont les suivants :
<EMI ID=28.1>
<EMI ID=29.1>
<EMI ID=30.1>
monobromopropionate
On dissout 2,0 g de 1,3,5(10)-oestratriène-3,17�-diol dans 50 ml de tétrahydrofuranne anhydre, puis on y ajoute 2 g d'acide paratoluènesulfonique monohydraté comme catalyseur de réaction, puis on ajoute 2,2490 g d'acide monobromopropionique avant deporter le mélange au reflux à 80[deg.]C pendant environ 16 heures. Après la réaction, on évapore le solvant sous vide à la température ambiante. On ajoute le résidu dans de l'eau et.on le lave 3 à 4 fois avec de l'eau (environ 1000 ml à chaque fois) pour éliminer l'acide par un toluène sulfonique. On sépare le précipité par filtration et on le sèche sous
vide dans un dessiccateur en obtenant 2,42 g d'un produit
(rendement 80,90 %). On purifie le produit brut par chromatographie sur colonne 'avec un mélange de solvants en prenant le cyclohexane et l'acétate d'éthyle dans le rapport de 50 :30 en volumes. Les résultats de l'analyse élémentaire et le point de fusion sont les suivants.
Analyse élémentaire :
<EMI ID=31.1>
(1-3) Préparation du 3-hvdroxy-
<EMI ID=32.1>
On dissout 2,0 g de 1,3,5(10)-oestratriène-3-17S-diol dans 50 ml de tétrahydrofuranne anhydre, puis on y ajoute
2,0 g d'acide paratoluènesulfonique monohydraté comme catalyseur de réaction et ensuite, on ajoute 3 g d'acide monochloropropionique avant deporter le mélange au reflux à 180[deg.]C pendant environ une nuit. Après la réaction, on évapore le solvant sous vide à la température ambiante. On ajoute le résidu dans de l'eau et on le lave trois fois avec de l'eau
(environ 100 ml à chaque fois) pour éliminer l'acide paratoluènesulfonique. On sépare le précipité par filtration et on le sèche sous vide dans un dessiccateur en obtenant 2,5 g du produit brut. On purifie le produit brut par recristallisation à partir d'éther éthylique en obtenant des cristaux.
Les résultats de l'analyse élémentaire et le point.de fusion sont les suivants :
<EMI ID=33.1>
(1-4) Préparation du 3-hydroxv-l
<EMI ID=34.1>
On dissout 2,0 g de 1,3,5(10)-oestratriène-3,17�-diol. dans 50 ml de tétrahydrofuranne anhydre, puis on y ajoute
2,0 g d'acide paratoluènesulfônique monohydraté comme catalyseur de réaction, et ensuite, on ajoute 2,6 g d'acide monochloroacétique avant de porter le mélange au reflux à 80[deg.]C pendant une nuit. Après la réaction, on évapore le solvant sous vide. On lave le résidu trois fois avec de l'eau (environ 100 ml à chaque fois) pour éliminer l'acide paratoluènesulfonique. On sépare le précipité par filtration et on le sèche sous vide dans un dessiccateur en obtenant 2,5 g d'un produit brut. On purifie le produit brut par recristallisation à partir d'éther éthylique en obtenant des cristaux.
Les résultats de l'analyse élémentaire et le point de fusion sont les suivants :
Analyse élémentaire :
<EMI ID=35.1>
Point de fusion : 187 - 190[deg.]C
On prépare également les composés suivants par le même mode opératoire, excepté que l'on utilise des composés de départ correspondants.
<EMI ID=36.1>
EXEMPLE 2 :
(2-1) Préparation du 3-acétoxy-1,3,5(10)-oestratrién-
<EMI ID=37.1>
<EMI ID=38.1>
<EMI ID=39.1>
résultante, une solution de 15 g de bromure de monobromoacétyle dans 75 g de tétrachlorure de carbone, à environ -5[deg.]C à
-7[deg.]C. On abandonne le mélange pendant une nuit. Après la réaction, on sépare par filtration le précipité résultant. On chasse le solvant par distillation à partir du filtrat. On dissout le résidu dans de l'éther et on le fait recristalliser à partir d'éther en obtenant 14 g de <EMI ID=40.1>
<EMI ID=41.1>
Les résultats de l'analyse élémentaire sont les suivants Analyse élémentaire :
<EMI ID=42.1>
Dans le spectre IR, on ne trouve pas de bande d'absorp-
<EMI ID=43.1>
On prépare également les composés suivants par le même mode opératoire, excepté que l'on utilise les composés de départ correspondant.
<EMI ID=44.1>
<EMI ID=45.1>
17� -monobrdmoacétate
On dissout 10 g (3,67 mM) de 1,3,5(10)-oestratriène-3,
17S-diol danslOO ml de THF et on y ajoute 10 ml d'une solution aqueuse contenant 1,47 g de NaOH. On agite le mélange à environ 30[deg.]C jusqu'à ce qu'il devienne une solution transparente. Ensuite, on concentre le mélange réactionnel et on le sèche sous pression réduite en le faisant passer sous forme d'un sirop à celle de cristaux blancs. Afin d'éliminer l'eau, on dissout les cristaux dans 100 ml de méthanol et on les sèche sous pression réduite au bain-marie à 80[deg.]C pendant 3 heures.
<EMI ID=46.1>
ajoute goutte-à-goutte 50 ml d'une solution en éther contenant 5,5 g (39,1 mM) de chlorure de benzoyle. On agite le mélange
à la température ambiante pendant 16 heures. Après la réaction, on sépare le chlorure de sodium résultant par la méthode classique. On évapore le filtrat à siccité. Afin de décomposer le chlorure debenzoyle n'ayant pas réagi, on ajoute 200 ml d'une solution aqueuse de NaOH 0,1 N. On agite le mélange à
la température ambiante. Après 15 minutes, on sépare les cristaux, blancs résultants par filtration à travers un filtre G-3 et on les lave avec de l'eau distillée, on les sèche, puis on les recristallise.
On analyse le produit par chromatographie sur une couche mince de gel de silice avec un mélange de solvants de développement (acétate d'éthyle et cyclohexane dans le rapport de 50 : 30 en volume) en obtenant la tache principale de
Rf : 0,34.
D'après les essais faits en ce qui concerne l'analyse élémentaire, le point de fusion et le spectre IR du produit, on trouve des résultats identiques à ceux des valeurs connues par suite, il se confirme que le produit est le
<EMI ID=47.1>
Analyse élémentaire :
<EMI ID=48.1>
Point de fusion : 190 - 194[deg.]C (valeurs connues : 191 -
196[deg.]C)
Spectre IR : Tableau III
Dans 100 ml de THF, on dissout 7,0 g (18,6 mM) du produit ainsi obtenu et 2,0 g (25,3 mM) de pyridine, et on refroidit le mélange à environ -5[deg.]C. On ajoute graduellement goutte-à-goutte au mélange résultant, une solution contenant
15,5 g de bromure de monobromoacétyle à 30 % dans du tétrachlorure de carbone, dans 50 ml de THF. Après l'addition, on agite le mélange à -5[deg.]C pendant 2 heures, puis au bain de glace pendant quelques heures et on le maintient au réfrigérateur pendant 16 heures. Après la réaction, on sépare le précipité blanc résultant à travers un filtre G-4 et on le sèche sous pression réduite au bain-marie à 30[deg.]C avant d'y ajouter 200 ml d'éther éthylique et d'agiter le mélange en obtenant5,3 g de cristaux blancs.
On dissout les cristaux bruts dans 50 ml de méthanol à 30[deg.]C et ensuite, on les refroidit en obtenant 5,0 g de cristaux blancs.
On analyse le produit par une chromatographie sur couche mince de gel.de silice avec un développeur constitué par un mélange de solvants (acétate d'éthyle et cyclohexane dans le rapport de 50 : 30 en volumes) en obtenant une seule tache
<EMI ID=49.1>
Le point de fusion du produit est de 145 à 146[deg.]C.
Le rapport d'écoulement Rf du produit est différent du rapport d'écoulement Rf : 0,34 du composé de départ constitué par le benzoate de 17�-hydroxy-1,3,5(10)-oestratrién-3-yle.
Dans le spectre IR, on ne trouve pas de bande d'absorption
à 3600 - 3200 cm . Il se confirme que le produit est le
<EMI ID=50.1>
On prépare également les composés suivants par le même mode opératoire, excepté que l'on utilise les composés de départ correspondant.
<EMI ID=51.1>
<EMI ID=52.1>
ridine anhydre à température ambiante et on les agite pendant
18 heures pour les laisser réagir. On verse le mélange réactionnel sur 1,5 litre d'un mélange de glace et d'eau et on le neutralise avec HC1 3N, puis on le dilue avec de l'eau. On sépare les cristaux ayant précipité par lavage avec de l'eau et on les sèche en obtenant 16,5 g de 3-acétoxy-
<EMI ID=53.1>
Dans le spectre IR du produit recristallisé, on ne trou-
<EMI ID=54.1> de l'analyse élémentaire du produit sont les suivants.
Analyse élémentaire
<EMI ID=55.1>
On prépare également les composés suivants par le même mode opératoire, excepté que l'on utilise les composés de départ correspondants.
<EMI ID=56.1>
0,80 g d'acide glycolique, puis on ajoute encore 1,8 g d'acide paratoluènesulfonique. On porte le mélange au reflux au bain-marie à 80[deg.]C pendant 16 heures. Après la réaction, on refroidit le mélange et on sépare l'acide paratoluène sulfo-1 nique et l'acide glycolique n'ayant pas réagi en utilisant
20 g d'une résine échangeuse d'ions faiblement basique (Amberlite A-21) en obtenant une solution transparente jaune pâle On chasse le THF par distillation sous pression réduite en obtenant 2,0 g de cristaux jaunes blancs. On recristallise le produit à partir d'un mélange de solvants composés d'éthanol et d'éther éthylique (1 : 1) en obtenant 1,5 g de cristaux blancs.
D'après l'analyse élémentaire et le spectre IR, il se confirme que le produit est le 3-ben-
<EMI ID=57.1>
Analyse élémentaire :
<EMI ID=58.1>
Dans le spectre IR, on trouve les bandes d'absorption <EMI ID=59.1>
l'ester.
On prépare également les composés suivants par le même mode opératoire, excepté que l'on utilise les composés de départ correspondants.
<EMI ID=60.1>
Dans 50 ml de DMSO, on dissout 3,31 g de
<EMI ID=61.1>
ajoute 3,8 g de méthyl-N-benzoyloxycarbonyl-a-D-glucosamineuronate d'argent en les laissant réagir à température ambiante pendant 3 heures dans l'obscurité. On sépare le précipité de AgBr par filtration à travers un filtre G-4 à raison de deux fois, puis on le lave avec de l'acétone. On concentre le filtrat à 70[deg.]C en formant un sirop. Puis, on ajoute 100 ml d'eau distillée pour éliminer le DMSO. On refroidit le mélange à 5[deg.]C et on l'abandonne pendant 1 heure. On sépare le précipité par filtration, on lave le résidu avec de l'eau, puis avec de l'éther de pétrole et encore avec de l'éther éthyli-
<EMI ID=62.1>
ture ambiante en obtenant 5,31 g d'un produit pulvérulent.
Dans 150 ml de THF, on dissout 5,0 g du produit et on charge la solution dans un autoclave de 500 ml, puis on y ajoute 5,0 g d'un catalyseur à 10 % de Pd sur carbone. On purge l'autoclave avec de l'hydrogène gazeux. On agite le mélange en l'alimentant en hydrogène pour maintenir une pression manométrique de 0,3 kg/cm<2> pendant 64 heures.
On confirme que l'hydrogénation a été réalisée par l'élimination de la tache due à la substance de départ dans une plaque en couche mince de gel de silice. Après la réaction, on sépare le catalyseur et on le lave avec une petite quantité de THF. On concentre le filtrat et on le sèche sous pression réduite au bain-marie. On ajoute de l'éther de pétrole au produit et on sépare et sèche les cristaux ayant précipité.
Afin d'éliminer les impuretés solubles dans l'eau, on disperse le produit dans de l'eau, on sépare le solide jaune
<EMI ID=63.1>
Dans un mélange de 150 ml d'acétonitrile et 20 ml d'eau, on disperse 3,8 g du produit. On agite la dispersion
à la température ambiante pendant 30 minutes. On admet en mélange dans la dispersion 0,93 g d'isocyanate de 2-chloroéthyle et on agite le mélange à la température ambiante pendant 1 heure. Après la réaction, on élimine l'isocyanate et l'on obtient une solution transparente.
On concentre le mélange réactionnel sous pression réduite à 30[deg.]C et on ajoute 100 ml d'eau au mélange condensé que l'on agite pendant 1 heure en obtenant des cristaux blancs. On sépare les cristaux par filtration et on les sèche
(rendement : 92,8 %) et purifie par chromatographie sur gel de silice avec un mélange de développeur constitué par 45 ml d'acétate d'éthyle, 45 ml de cyclohexane et 10 ml d'éthanol en obtenant un produit de haute pureté (rendement : 40 %).
Dans un mélange de solvants composés de 3,2 ml d'acide acétique et 6 ml d'éthanol, on dissout 200 mg du produit. On ajoute goutte-à-goutte à la solution résultante une solution aqueuse de NaN02 (4 ml d'eau et 344 mg de NaN02), à 5[deg.]C en agitant et on poursuit la réaction pendant.16 heures. Après la réaction, on concentre le mélange réactionnel sous pression réduite jusqu'au volume de 2 ml à 30[deg.]C, puis on ajoute
50 ml d'eau au produit concentré en précipitant des cristaux <EMI ID=64.1>
rouges jaunâtres. On sépare les cristaux par filtration et on les sèche (rendement : 91 %).
On purifie le produit par chromatographie sur gel de silice avec un mélange de développeur composé d'acide d'éthyle et de cyclohexane (50 : 50'en volumes). D'après l'analyse élémentaire, le spectre IR et le point de fusion, on confirme que le produit est le composé de l'invention désiré.
Analyse élémentaire :
<EMI ID=65.1>
On prépare également les composés suivants par le même mode opératoire, excepté que l'on utilise les composés de départ correspondants.
<EMI ID=66.1> <EMI ID=67.1>
EXEMPLE 6 :
<EMI ID=68.1>
noyloxy acétate.
Dans 70 ml de DMSO, on dissout 3,465 g de monobromoacétate de 3-hydroxy-l , 3 ,5 (10) -oestratrién-173-yle et on ajoute
à la-solution 4,634 g de benzyl-N-benzyloxycarbonyl-a-D-glucosamineuronate d'argent avant d'agiter le mélange à la température ambiante pendant trois jours pour laisser réagir ses constituants, dans l'obscurité. On sépare le précipité d'AgBr par filtration à travers un filtre G-4 à raison de deux fois et on le lave avec de l'acétone. On concentre le filtrat pour l'amener à un volume de 10 ml à 70[deg.]C. Puis on y ajoute
100 ml d'eau distillée pour éliminer le DMSO à partir du filtrat. On refroidit le produit réactionnel à 5[deg.]C et on l'abandonne pendant une heure, puis on sépare le précipité obtenu par filtration et.on le lave avec de l'eau, avec de l'éther de pétrole et ensuite avec de l'éther éthylique, et on le sèche à la température ambiante sous pression réduite en obtenant 6,1 g d'un produit pulvérulent.
Dans 70 ml de THF, on dissout 3,5 g du composé résultant et on ajoute 3,5 g d'un catalyseur à base de 10 % de Pd sur carbone. On alimente le mélange en hydrogène gazeux à la vitesse de 15 ml/minute en l'agitant vigoureusement pendant
60 heures pour laisser réagir ses constituants. Après la réaction, on sépare.le catalyseur par filtration à travers un filtre G-4 et on le lave avec une faible quantité de méthanol. On évapore le filtrat à siccité sous pression réduite à la température ambiante. On adjoint au mélange le résidu dans
de l'éther de pétrole et on sépare le précipité pour le sécher. Afin d'éliminer les impuretés solubles dans l'eau, on disperse le produit dans de l'eau et on sépare le solide jaune blanc résiduel que l'on sèche en obtenant 2,0 g du composé.
Dans un mélange desolvants composés de 30. ml d'acétonitrile et 2 ml d'eau, on dissout 0,8 g du produit à 40[deg.]C et on refroidit la solution à 10-20[deg.]C avant d'y ajouter 0,20 ml d'isocyanate de 2-chloroéthyle, puis on agite le mélange pendant 60- minutes pour le laisser réagir.- Après la réaction, on évapore le mélange réactionnel à siccité sous pression réduite à 40[deg.]C. On ajoute le résidu à 50 ml d'eau en agitant pour obtenir un précipité blanc. On sépare le précipité et on le lave avec de l'éther et de l'acétate d'éthyle, puis avec de l'eau et on le sèche sous pression réduite. Dans 6 ml d'éthanol, on dissout 0,2 g du produit résultant et on ajoute 3,2
ml d'acide acétique et on maintient le mélange à 5[deg.]C, puis on y ajoute en agitant, une solution aqueuse de NaN02 (4 ml d'eau et 344 mg de NaN02) et on agite le mélange pendant 18 heures pour le laisser réagir. Après la réaction, on concentre le mélange réactionnel sous pression réduite et on ajoute le résidu à 50 ml d'eau en obtenant le précipité. On sépare le précipité, on le lave avec une faible quantité d'eau et on
le sèche sous pression réduite à la température ambiante.
On putifie le produit par chromatographie sur gel de silice avec un développeur constitué par un mélange de solvants composés de cyclohexane et d'acide acétique dans la proportion de 50 : 50 en volumes, que l'on fait passer à travers une colonne de gel de silice ayant une granulométrie supérieure à 0,15 mm à la vitesse de 0,172 cm/minute.
D'après l'analyse élémentaire, le spectre IR et le point de fusion, on confirme que le produit est le composé
de l'invention.
Analyse élémentaire :
<EMI ID=69.1>
Point de fusion : 110 - 115[deg.]C (décomposé)
Spectre IR : Tableau V
On prépare également les composés suivants par le même mode opératoire, excepté que l'on utilise les composés de départ correspondants.
<EMI ID=70.1> <EMI ID=71.1>
tate.
Dans 70 ml de DMSO, on dissout 13,465 g de <EMI ID=72.1> najoute à la solution 4,634 g de benzyloxy-N-benzyloxycatbonyl
-D-glucosamineuronate d'argent pour les laisser réagir à la température ambiante pendant 3 jours dans l'obscurité. On sépare le précipité de AgBr par filtration à travers un filtre G-4 à raison de deux fois et on le lave avec de l'acétone. On concentre le filtrat à 70[deg.]C pour l'amener au volume de
10 ml, puis on ajoute 100 ml d'eau distillée pour éliminer le DMSO à partir du filtrat. On refroidit la solution à 5[deg.]C et on l'abandonne pendant 1 heure pour former le précipité. On sépare le précipité par filtration et on le lave avec de l'eau, avec de l'éther de pétrole, puis avec de l'éther éthylique et on le sèche sous pression réduite à la température ambiante en obtenant 6,1 g du produit pulvérulent.
Dans 70 ml de THF, on dissout 3,5 g du produit, puis on y ajoute 3,5 g d'un catalyseur à 10 % de Pd sur carbone. On alimente le mélange en hydrogène gazeux au débit de 15 ml/minute en agitant vigoureusement pendant 60 heures pour les laisser réagir. Après la réaction, on sépare le catalyseur <EMI ID=73.1>
<EMI ID=74.1>
faible quantité de méthanol. On évapore le filtrat à siccité sous pression réduite à la température ambiante. On ajoute le résidu dans de l'éther de pétrole et on sépare le précipité pour le sécher. Afin d'éliminer les impuretés solubles dans l'eau, on disperse le produit dans de l'eau et on sépare le solide jaune blanc résiduel que l'on sèche en obtenant 2,0 g du composé.
Dans un mélange de solvants composés de 30 ml d'acétonitrile et 2 ml d'eau, on dissout 0,8 g du produit à 40[deg.]C et on refroidit la solution à 10[deg.]C - 20[deg.]C avant d'y ajouter 0,16 ml d'isocyanate de méthyle, puis on agite le mélange pendant 60 minutes pour le laisser réagir. Après la réaction, on évapore le mélange réactionnel à siccité sous pression réduite à 40[deg.]C. On ajoute le résidu à 50 ml d'eau en agitant pour obtenir un précipité blanc. On sépare le précipité et on le lave avec de l'éther, avec de l'acétate d'éthyle, puis on le lave avec de l'eau et on le sèche sous pression réduite en obtenant le produit (point de fusion : 230[deg.]C - 137[deg.]C).
Dans 6 ml d'éthanol, on dissout 0,2 g du produit résultant et on ajoute 3,2 ml d'acide acétique, puis on abandonne le mélange à 5[deg.]C et ensuite on y ajoute une solution aqueuse de NaN02 (4 ml d'eau ; 344 mg de NaN02) en agitant et l'on continue d'agiter le mélange pendant 18 heures pour le laisser réagir. Après la réaction, on concentre le mélange réactionnel sous pression réduite et on ajoute le résidu à 50 ml d'eau pour former le précipité. On sépare le précipité par filtration et on le lave avec une faible quantité d'eau avant de le sécher sous pression réduite à la température ambiante.
On purifie le produit par chromatographie sur gel de silice avec un développeur constitué par un mélange de solvants composés de cyclohexane et d'acide acétique dans la proportion de 50 : 50 en volumes que l'on fait passer à travers une colonne de gel de silice ayant une granulométrie supérieure à 0,15 mm à la vitesse de 0,172 cm/minute.
D'après l'analyse élémentaire, le spectre.IR et le point de fusion, on confirme que le.produit est.le composé de l'invention.
Analyse élémentaire :
<EMI ID=75.1>
Point de fusion : 109 - 115[deg.]C
Spectre IR : Tableau VI
On prépare également les composés suivants dans le même mode opératoire, excepté que l'on utilise les composés de départ correspondants.
<EMI ID=76.1>
Dans 5 ml d'eau distillée, on disperse 100 mg de 5-fluoro-2,24-dioxo-pyrimidine (5-Fu), puis on y ajoute lentement une. solution aqueuse de KOH (la ml d'eau ; 50,8 mg de KOH) . Après l'addition, on agite le mélange pendant 30 minutes en formant une solution transparente ayant un pH de 8 à 9 et ensuite, on ajoute goutte-à-goutte une solution aqueuse de
<EMI ID=77.1> <EMI ID=78.1>
l'obscurité. On sépare le précipité par filtration et on le lave avec de l'eau puis on le sèche sous pression réduite en obtenant le sel d'argent de 5-Fu (rendement : 93,4 %).
Dans 10 ml de DMSO, on ajoute 130 mg du sel d'argent
de 5-Fu et 215 mg de 3-hydroxy-1,3,5(10)-
<EMI ID=79.1>
jours dans l'obscurité. On sépare le précipité par filtration On concentre le filtrat sous pression réduite, puis on y ajoute de l'eau en précipitant le produit. On lave le précipité avec de l'eau et on le sèche. On purifie le produit par chromatographie sur gel de silice avec un mélange de solvants
<EMI ID=80.1>
proportion de 50 : 50 en volumes que l'on fait passer à travers une colonne de gel de silice.
D'après l'analyse élémentaire, le spectre IR et le point de fusion, on confirme que le produit est le composé de l'in-
<EMI ID=81.1>
Analyse élémentaire :
<EMI ID=82.1>
Point de fusion : 282 à 286[deg.]C (décomposé par fusion) Spectre IR : Tableau VII
<EMI ID=83.1>
dans 50 ml de DMF à la température ambiante en les laissant réagir à ladite température ambiante pendant 24 heures. Après la réaction, on évapore le DMF sous pression réduite au bainmarie à 50[deg.]C. On ajoute le mélange dans de l'eau et on l'agite à la température ambiante. On obtient en conséquence la précipitation d'un produit blanc-jaune. On sépare les cristaux par séparation centrifuge et on les lave deux fois avec la quantité égale d'eau, puis on recueille les cristaux par l'intermédiaire d'un séparateur centrifuge et on les sèche sous pression réduite. On ajoute 100 ml d'éthanol et on sépare le constituant soluble dans l'ëthanol pour le sécher sous pression réduite en obtenant 4,5 g de cristaux blancs.
On analyse le produit par chromatographie sur couche mince de gel de silice avec un développeur constitué par un mélange de solvants (acétate d'éthyle et cyclohexane dans
le rapport de 50 : 50 en volumes) en obtenant une tache principale de Rf : 0,32.
On fait recristalliser les cristaux bruts à partir d'un mélange de solvants composés d'acétate d'éthyle et de cyclohexane. On analyse le produit par chromatographie sur couche mince dans les mêmes conditions en obtenant une seule tache de Rf : 0,32.
D'après l'analyse élémentaire, le point de fusion et le spectre IR, il se confirme que le produit est le composé de l'invention.
Analyse élémentaire :
<EMI ID=84.1>
Point de fusion : 205 - 208[deg.]C
Spectre IR : Tableau VIII
<EMI ID=85.1>
5-Fu dans 50 ml de DMSO en les laissant réagir à la tempéra- ture ambiante pendant 48 heures dans l'obscurité. Après la réaction, on sépare le AgBr résultant par filtration à travers un filtre G-4. On évapore le filtrat à siccité au bainmarie à 80[deg.]C sous pression réduite. On ajoute le résidu dans
50 ml d'acétone et on sépare une substance insoluble par filtration à travers un filtre G-4. On évapore encore le filtrat à siccité sous pression réduite.
On ajoute le résidu sirupeux résultant ayant une viscosité élevée, dans 100 ml d'eau distillée et on agite le mélange pendant 1 heure en précipitant des cristaux blancs. On filtre les cristaux à travers un filtre G-4 et on le lave avec de l'eau distillée pour éliminer le DMSO.
On sèche les cristaux résultants sous pression réduite dans un dessiccateur en obtenant 3,0 g de cristaux bruts. On dissout les cristaux bruts dans un mélange de solvants composés de cyclohexane et d'acétate d'éthyle dans le rapport de
50 : 50 en volumes. On purifie le produit par chromatographie sur colonne avec du gel de silice.
D'après l'analyse élémentaire, le point de fusion et le spectre IR, il se confirme que le produit est le composé de l'invention.
Analyse élémentaire :
<EMI ID=86.1>
Point de fusion : 190 - 198[deg.]C
Spectre IR : Tableau IX
<EMI ID=87.1>
dans 50 ml de DMSO en les laissant réagir pendant 3 jours dans l'obscurité. On filtre le mélange réactionnel à travers un filtre G-4 pour éliminer AgBr. On évapore le filtrat à siccité sous pression réduite au bain-marie à 80[deg.]C. On mélange le résidu avec 50 ml d'acétone et on filtrele mélange obtenu à travers un filtre G-4 en éliminant une substance insoluble. On évapore ensuite le filtrat à siccité sous pression réduite.
On mélange le résidu avec 100 ml d'eau distillée en agitant pendant 2 heures et l'on obtient ainsi un précipité blanc au bout des 2 heures. On recristallise le précipité à partir d'un mélange de solvants composés d'acétate d'éthyle et d'éther éthylique. On répète la recristallisation en obtenant 2,4 g de cristaux blancs.
D'après l'analyse élémentaire et le point de fusion, il se confirme que le produit est le composé de l'invention.
Analyse élémentaire :
<EMI ID=88.1>
Point de fusion : 201 - 204[deg.]C <EMI ID=89.1>
Dans 3 ml de diméthylformamide, on dissout 100 mg de 5-fluoro-2,4-dioxo-pyrimidine (5-Fu), puis on ajoute 85,6 mg de triéthylamine et on agite le mélange à 5[deg.]C pendant 30 minutes. On ajoute goutte-à-goutte au mélange résultant, une so- . lution de 302 mg de 3-hydroxy-1,3,5(10)-
<EMI ID=90.1>
te le mélange à 5[deg.]C pendant une heure et ensuite à la température ambiante pendant 22 heures pour le laisser réagir.
Après la réaction, on sépare le dérivé organique résultant par filtration. On évapore le filtrat à siccité sous pression réduite au bain-marie à 80[deg.]C. On précipite des fins cristaux blancs. On mélange les cristaux avec 20 ml d'eau distillée et on agite le mélange obtenu à la température ambiante pendant 1 heure avant de le refroidir. On sépare les cristaux blancs résultants par filtration et on les sèche sous pression réduite dans un dessiccateur en obtenant 150 mg de cristaux. On recristallise les cristaux résultants à partir d'un mélange de solvants composés d'alcool méthylique et d'éther dans le rapport de 1 : 1, en obtenant 120 mg de cristaux blancs.
On analyse le produit par chromatigraphie sur couche mince de gel de silice avec un mélange de solvants composés d'acétate d'éthyle et de cyclohexane dans le rapport de 50 :
50 en volumes en obtenant une seule tache de Rf : 0,24, par une technique de coloration avec l'acide sulfurique-bu avec l'iode.
Les résultats de l'analyse élémentaire et le point de fusion du produit sont les suivants.
Analyse élémentaire :
<EMI ID=91.1>
Point de fusion : 282 - 286[deg.]C (décomposé)
<EMI ID=92.1>
dioxo-5-fluoropyrimidin-l-yl) acétate résultant (350 mg) dans 2 ml de pyridine anhydre, et on y ajoute 2 ml d'anhydride . acétique, puis on abandonne le mélange dans un réfrigérateur <EMI ID=93.1>
pendant 16 heures pour le laisser réagir. Après la réaction, on évapore le mélange à siccité sous pression réduite au bainmarie à 30[deg.]C. On mélange le résidu avec de l'eau distillée et on agite le mélange obtenu pendant 1 heure en précipitant des cristaux blancs. On sépare les cristaux par filtration à travers un filtre G-4 et on les lave avec de l'eau distillée avant de les sécher sous pression réduite dans un dessiccateur en obtenant 330 mg de cristaux blancs. On recristallise les cristaux à partir d'un mélange de solvants composés d'acétate d'éthyle et d'éther éthylique. On analyse le produit par chromatographie sur couche mince de gel de silice avec un développeur constitué par un mélange de solvants (acétate d'éthyle et cyclohexane dans le rapport de 50 50 en volumes) en obtenant une seule tache de Rf : 0,38.
D'après l'analyse élémentaire, le point de fusion et le spectre IR, il se confirme que le produit est le composé de l'invention.
Analyse élémentaire :
<EMI ID=94.1>
Point de fusion : 200 - 204[deg.]C
Spectre IR : Tableau 10
<EMI ID=95.1>
propionique et on abandonne le mélange dans un réfrigérateur pour le laisser réagir. Après la réaction, on évapore le mélange à siccité sous pression réduite au bain-marie à 30[deg.]C. On mélange le résidu avec de l'eau distillée et on agite le mélange obtenu pendant 2 heures en obtenant des cristaux blancs. On sépare les cristaux par filtration à travers un filtre G-4. On recristallise le produit à partir d'un mélange de solvants composés d'acétate d'éthyle et d'éther éthylique en.obtenant 2,9 g de cristaux.
On prépare également les composés suivants par le même mode opératoire, excepté que l'on utilise les composés de <EMI ID=96.1>
fluorouracil-3-yl] acétate.
<EMI ID=97.1>
<EMI ID=98.1>
Dans 5 ml de DMSO, on dissourt 200 mg de 4-amino-N méthylptéroylglutamate d'argent, puis on ajoute 235 mg de 3-hydroxy-1,3,5(10)-oestratrién-17 -monobromoacétate et on agite le mélange à la température ambiante pendant deux jours dans l' obscurité. Après la réaction, on sépare le précipité de AgBr par filtration à travers un filtre G-4. On concentre le filtrat sous pression réduite à 80[deg.]C. On mélange le produit huileux résultant avec de l'eau distillée en obtenant un précipité jaune. On agite le mélange pendant 1 heure de façon à transférer le DMSO dans la phase aqueuse.
On séparé le précipité par filtration à travers un filtre G-4. On lave le précipité avec de l'eau distillée et on le sèche sous pression réduite dans un dessiccateur en obtenant 258,5 mg du produit brut (quantité théorique : 322,2 mg ; rendement en produit brut : 80,23 %).
Dans 25 ml de THF, on dissout 200 mg du produit brut puis on ajoute 10 ml d'eau distillée et ensuite, 1,2 g d'une résine échangeuse d'ions (mise sur le marché sous le nom de Diaion WA-20 : capacité échangeuse d'ions de 25 meq./ml ;
<EMI ID=99.1>
température ambiante pendant environ 1 heure. On fait passer le pH de la solution de 6 - 7 à 7 - 8. On sépare la résine échangeuse d'ions par filtration à travers un filtre G-4. On concentre le filtrat sous pression réduite au bain-marie pour éliminer le THF. On sèche le résidu par la méthode de dessiccation par congélation (lyophilisation) en obtenant 200 mg d'un produit pulvérulent jaune.
D'après le spectre IR, l'analyse élémentaire, la réaction à la ninhydrine et le point de fusion, il se confirme que le produit est le composé de l'invention.
Analyse élémentaire :
<EMI ID=100.1>
Point de fusion : 183 - 194[deg.]C
Spectre IR : Tableau XI
On prépare également les composés suivants par le même mode opératoire, excepté que l'on utilise les composés de départ correspondants.
<EMI ID=101.1>
acetate.
EXEMPLE 10
<EMI ID=102.1>
3',6'-tridésoxy-a-L-lyxo-hexapyranoside
Dans 5 ml de DMF, on dissout 100 mg de 3-glycoloyl-1,2, 3,4,6,11-hexahydro-3,5,12-trihydroxy-10-méthoxy-6,11-dioxo-
<EMI ID=103.1>
noside, puis on ajoute 600 mg d'une solution de triéthylamine
<EMI ID=104.1>
On agite le mélange pendant 15 minutes, puis on y ajoute 1 g d'une solution à 10 % de monobromoacétate de 3-hydroxy-1,3,5
(10)-oestratrién-17�-yle dans du DMF. On poursuit l'agitation du mélange pendant 30 minutes, puis on y ajoute 400 mg d'une solution de triéthylamine à 10 % dans du DMF et on agite le mélange en le refroidissant avec de la glace pendant 6 heures avant de le laisser réagir à la température ambiante pendant
24 heures. Le système réactionnel présente une couleur rouge foncée et contient un précipité blanc. On sépare le précipité blanc par filtration à travers un filtre G-4 et on le lave avec 200 ml d'acétate d'éthyle. On mélange le filtrat avec
200 ml d'eau et on règle le pH à 1-2 avec HC1 concentré. On agite le mélange pendant 1 heure, ce qui amène une transfor-. mation de la phase d'acétate d'éthyle en une solution transparente rouge vif, tandis que la phase aqueuse se transforme en une solution transparente rouge pâle.
On sépare la phase d'acétate d'éthyle. On mélange la phase aqueuse avec 200 ml d'acétate d'éthyle pour poursuivre l'extraction. On répète une fois de nouveau l'opération.
On receuille les phases d'acétate d'éthyle (600 ml) et on les lave avec 200 ml d'eau distillée à raison de trois fois On déshydrate la phase d'acétate d'éthyle sur du sulfate de sodium anhydre et on l'évapore à siccité sous pression réduite au bain-marie.
On dissout les cristaux bruts résultants dans 10 ml
<EMI ID=105.1>
clohexane et d'éthanol dans les proportions de 40 : 40 : 20 <EMI ID=106.1>
en volumes. On purifie le produit par la chromatographie centrifuge du type CLC-3 (gel de silice) avec le mélange de solvants en obtenant 23,1 mg du produit purifié.
D'après l'analyse élémentaire, le spectre IR, le spec-tre UV et le point de fusion, il se confirme que le produit
.est le composé de l'invention.
Analyse élémentaire :
<EMI ID=107.1>
Point de fusion : 117 - 120[deg.]C
Spectre IR : Tableau XII
EXEMPLE 11
Préparation du 3-glycolyl-1,2,3,4,6,11-hexahydro-3,5,,
<EMI ID=108.1>
6'-tridésoxy-a-L-lyxo-hexapyranoside
<EMI ID=109.1>
noside, puis on ajoute goutte-à-goutte à la solution, 600 mg d'une solution de triéthylamine à 10 % dans du DMF. On agite le mélange à la température ambiante pendant 15 minutes et on ajoute 200 mg d'une solution de triéthylamine à 10 % dans du DMF, avant d'agiter le mélange à la température ambiante pendant 20 heures. Pendant la réaction, il se forme un précipité blanc. Après la réaction, on ajoute 300 ml d'eau distillée
et 400 ml d'acétate d'éthyle et on règle le pH du mélange à
3 avec H2S04 concentré, puis on agite le mélange et on sépare la phase d'acétate d'éthyle.
On mélange la phase aqueuse avec 400 ml d'acétate d'éthyle pour poursuivre l'extraction du produit. On répète de nouveau l'opération et on recueille les phases d'acétate d'éthyle
(1200 ml) pour les laver deux fois avec de l'eau distillée.
La solution a un pH de 6,5 - 7. On déshydrate la phase d'acétate d'éthyle sur du sulfate de sodium anhydre et on l'évapore à siccité au bain-marie à 40[deg.]C en obtenant 108,7 mg de cristaux rouges foncés.
On dissout les cristaux dans 20 ml d'un mélange de solvants composés d'acétate d'éthyle, de cyclohexane et d'alcool éthylique dans les proportions de 45 : 45 : 20 en volu-. mes et on les purifie par chromatographie sur une colonne de gel de silice en obtenant un rendement de 45,1 mg.
On analyse le produit par chromatographie sur couche mince degel de silice avec le même mélange de solvants en obtenant une seule tache de Rf : 0,4. L'analyse élémentaire,
le point de fusion et le spectre IR sont les suivants :
Analyse élémentaire :
<EMI ID=110.1>
Point de fusion : 130 - 140[deg.]C
Spectre IR : Tableau XIII
EXEMPLE 12 :
Préparation du 3-glycoloyl-1,2,3,4,6,11-hexahydro-3,5,
<EMI ID=111.1>
6'-tridésoxy-a-L-lyxo-hexapyranoside
ans 5 ml de DMF, on dissout 100 mg de 3-glycoloyl-1,2,
<EMI ID=112.1>
noside, puis on ajoute goutte-à-goutte à la solution 600 mg d'une solution de triéthylamine à 10 % dans du DMF. On agite le mélange à la température ambiante pendant 15 minutes, puis on y ajoute 200 mg d'une solution de monobromoacétate de 3-
<EMI ID=113.1>
poursuit l'agitation du mélange pendant 15 minutes avant d'y ajouter 200 mg d'une solution de triéthylamine à 10 % dans du DMF et d'agiter le mélange à la température ambiante pendant 24 heures. Après la réaction, on ajoute 300 ml d'eau distillée et 400 ml d'acétate d'éthyle, et on amène le pH du mélange à environ 3 avec HC1 concentré, puis on agite le mélange. On sépare la phase d'acétate d'éthyle et on extrait la phase aqueuse deux fois avec 40 ml d'acétate d'éthyle, puis on réunit les phases d'acétate d'éthyle (1200 ml) et on les lave deux fois avec,300. ml d'eau distillée. On sépare la phase d'acétate d'éthyle et on la déshydrate sur du sulfate de sodium anhydre avant de l'évaporer à siccité sous pression <EMI ID=114.1> réduite à 40[deg.]C en obtenant 120 mg de cristaux rouges foncés.
On purifie les cristaux bruts par chromatographie sur une colonne de gel de silice avec un mélange de solvants composés d'acétate d'éthyle, de cyclohexane et d'alcool éthylique dans les proportions de 45 : 45 : 20 en volumes, en obtenant un rendement de 55 mg du produit.
L'analyse élémentaire et le spectre IR sont les suivants Analyse élémentaire :
<EMI ID=115.1>
Spectre IR : Tableau XIV
EXEMPLE 13 :
<EMI ID=116.1>
Dans 5 ml de DMF, on dissout 100 mg de 3-glycoloyl-1,2, 3,4,6,11-hexahydro-3,5,12-trihydroxy-10-méthoxy-6,11-dioxo-
<EMI ID=117.1>
noside, puis on ajoute goutte-à-goutte 600 mg d'.une solution de triméthylamine à 10 % dans du DMF. On agite le mélange à la température ambiante pendant 15 minutes, puis on ajoute
220 mg d'une solution de monobromoacétate de 3-propionyloxy1,3,5,(10)-oestratrién-17S-yle à 50 % dans du DMF et ensuite on agite le mélange à la température ambiante pendant 16 heures. Après la réaction, on ajoute 300 ml d'eau distillée et on règle le pH du mélange à environ 3. On extrait le produit trois fois avec 400 ml d'acétate d'éthyle. On lave deux fois la phase d'acétate d'éthyle (1200 ml) avec de l'eau distillée. On sépare la phase d'acétate d'éthyle et on la déshydrate sur du sulfate de sodium anhydre avant de la sécher à 40[deg.]C sous pression réduite en obtenant 130 mg de cristaux rouges foncés.
On purifie les cristaux bruts par chromatographie sur colonne de gel de silice avec un mélange de solvants composés d'acétate d'éthyle, de cyclohexane et d'alcool éthylique dans les proportions de 45-: 45 : 20 en volumes en.obtenant 50 mg du produit.
L'analyse élémentaire elle spectre IR sont les suivants.
Analyse élémentaire :
<EMI ID=118.1>
Spectre IR : Tableau XV
On prépare également le composé suivant par le même mode opératoire, excepté que l'on utilise le composé de départ correspondant :
<EMI ID=119.1>
L-lyxo-hexapyranoside.
EXEMPLE 14 :
Préparation du 3-acétyl-1,2,3,4,6,11-hexahydro-3,5,12-
<EMI ID=120.1>
tridésoxy-a-L-lyxo-hexapyranoside
Dans 2 g de DMSO, on dissout 50 mg (88,65pmole) de 3acétyl-1,2,3,4,6,11-hexahydro-3,5,12-trihydroxy-10-méthoxy-
<EMI ID=121.1>
-hexapyranoside, et on ajoute 98,7 mg (99,67 pmole) d'une solution de triêthylamine à 10,02 % dans du DMF. On agite le mélange pendant 1 heure en le refroidissant avec de la glace, puis on ajoute 400 mg (101,52 pmole) d'une solution de 17 monobromoacétate du dérivé oestradiol correspondant à 9,98 % dans du DMF. On agite le mélange pendant 30 minutes et on divise 400 mg (396,05 vmole) d'une solution de triéthylamine à
10,02 % dans du DMF en 4 portions que l'on ajoute respectivement toutes les 10 minutes. On agite le mélange pendant 1 heure en le refroidissant avec de la glace avant de l'agiter de nouveau.à la température ambiante. Après 1 heure, la précipitation commence. On agite le mélange à la température ambiante pendant 48 heures.
Après la réaction, on sépare une substance insoluble dans.l'eau par filtration à travers un filtre G-4 et on ajoute au filtrat 200 ml d'eau avant de régler le <EMI ID=122.1>
duit avec 150 ml d'acétate d'éthyle et on. lave deux fois la solution extraite avec 100 ml d'eau avant de la déshydrater sur du sulfate de sodium anhydre. On évapore la solution extraite à siccité sous pression réduite en obtenant 54,1 mg d'un produit solide rouge- foncé.
On dissout le produit dans 4 ml d'un mélange de solvants composés de cyclohexane, d'acétate d'éthyle et d'éthanol dans les proportions de 45 : 45 : 10 en volumes. On purifie le produit par chromatographie centrifuge du type CLC-3 (gel de silice) avec le mélange de solvants en obtenant 18,9 mg du produit purifié.
D'après l'analyse élémentaire, le spectre IR et le point de fusion, il se confirme que le produit est le composé de l'invention.
Analyse élémentaire :
<EMI ID=123.1>
Point de fusion : 145 - 150[deg.]C
Spectre IR : Tableau XVI
On prépare également les composés suivants par le même mode opératoire, excepté que l'on utilise les composés de départ correspondants.
3-acétyl-1,3,3,4,6,11-hexahydro-3,5-12-trihydroxy-10-méthoxy-
<EMI ID=124.1>
-hexapyranoside ; et 3-acétyl-1,2,3,4,6,11-hexahydro-3,5,12-trihydroxy-10-méthoxy6,11-dioxo-1-naphtacényl-3'-[3-benzoyloxy-1,3,5(10)-oestra-
<EMI ID=125.1>
hexapyranoside.
...EXEMPLE 15 :
<EMI ID=126.1>
no-s-triazine
Dans 50 ml de THF, on dissout 5 g de 3-benzoyloxy-1,3,5
<EMI ID=127.1>
le mélange à -5[deg.]C, puis on y ajoute graduellement 10 ml d'une
<EMI ID=128.1>
On ajoute graduellement à la solution résultante, une so�l.ution contenant 1,36 g de 2,4,6-triéthylèneimino-s-triazine dans 5 ml de THF.et on agite le mélange à -5[deg.]C pendant 2 heures puis à 18[deg.]C au bain-marie pendant 4 heures. Après la réaction, on ajoute graduellement au mélange réactionnel une solution aqueuse de NaOH 0,01N pour décomposer graduellement
le BF3 et pour amener le pH de la solution à 8 - 9. On concentre le mélange réactionnel et on le sèche sous pression réduite au bain-marie en obtenant un solide jaune. On extrait de façon répétée le produit solide avec un mélange de solvants composés de 200 ml d'acétate d'éthyle et 100 ml d'eau. On répète l'opération. On concentre le mélange réactionnel et on le sèche sous pression réduite au bain-marie pour éliminer l'acétate d'éthyle en obtenant 6,0 g de cristaux bruts.
On purifie le produit pour éliminer le3-benzoyloxy-1,3,5
<EMI ID=129.1>
sur colonne (gel=de silice) avec un développeur constitué par un mélange de solvants composés d'eau et de npropanol dans la proportion de 35 : 65 en volumes.
On effectue l'analyse élémentaire, la mesure du spectre IR et du poids moléculaire. Les résultats sont les suivants.
Poids moléculaire : 645 : méthode d'élévation du point d'ébullition (nitrobenzène) (PM théorique 637).
Analyse élémentaire :
<EMI ID=130.1>
Spectre IR : On trouve la bande d'absorption à 3080 cm
(vibration de valence C-H du noyau aziridinyle).
<EMI ID=131.1>
tion.
On prépare également les composés suivants par le même mode opératoire, excepté que l'on utilise les composés de départ correspondants.
2,3-bis(éthylèneimino)-5-(3-benzoyloxy-1,3,5(10)-oestratrién-
<EMI ID=132.1>
éthyl)amino-1,4-benzoquinone.
EXEMPLE 16 :
COMPOSITION
Formule 1 :
<EMI ID=133.1>
On mélange les constituants, on les réduit en poudre et on les soumet à une compression en obtenant un comprimé ayant un diamètre de 10 mm.
Formule 2 :
<EMI ID=134.1>
On malaxe les constituants et on les extrude à travers une pastilleuse sous forme de granules que l'on sèche et que l'on tamise pour garder les particules ayant une granulométrie dans l'intervalle de 0,70 - 1,65 mm, pour préparer des granulés pour l'administration orale.
Formule 3
On remplit une capsule disponible sur le marché à l'aide des granulés de Formule 2, pour préparer des capsules de
<EMI ID=135.1>
Formule 4 :
<EMI ID=136.1>
On mélange les constituants en les chauffant et on les stérilise pour préparer un soluté pour injection.
ESSAI 1 :
Toxicités aiguës et activités antitumorales.(in vivo)
(1) Toxicité aiguë (DL50)
<EMI ID=137.1>
ICR-JCL (âgées de 5 semaines) par groupes à élever dans une cage multiple transparente, et on dissout chaque médicament dans de l'huile d'olive que l'on administre auxdites souris par voies d'injection intrapéritonéale (i.p.), d'administration orale (p.o.) et injection sous-cutanée (s.c.) en une seule dose et, ensuite, on détermine les valeurs correspon-
<EMI ID=138.1>
coxon après 7 jours. Les résultats obtenus sont répertoriés dans le Tableau XVIII.
(2) Fonction de fixation sur les cellules sensibles aux
-oestrogènes
Fonction de fixation des ingrédients actifs sur les cellules sensibles aux oestrogènes.
On soumet à l'essai la fonction de fixation de l'ingrédient actif sur des cellules tumorales par la méthode décrite dans Biochemical Experiment text Hormone (I) (Nippon Seikagaku) (Tokyo Kagakudojin page 217-252, 25 avril 1977).
On fait incuber de l'oestradiol marqué par du tritium
<EMI ID=139.1>
ajoute l'échantillon ainsi préparé au système d'essai pour mesurer la quantité de <3>H-oestradiol libre qui a été remplacée par 1 'oestradiol ajouté. Les résultats sont présentés par le <3>H-oestradiol.de fixation (%) dans les cas d'une addition de 0,10 ou 100 nM del'êchantillon.
La valeur la plus basse indique la fixation la plus élevée dans les cellules sensibles aux oestrogènes.
(3) Essai antitumoral (in vivo)
On implante par voie sous-cutanée des fragments de cellules cancéreuses de sein humain pourvues d'un récepteur des hormones stéroïdes, sous l'aisselle de souris (BALB/C-nu/nu) (âgées de 5 semaines) pour former des tumeurs solides. Après l'établissement des tumeurs solides, on administre chaque dispersion ou solution de l'ingrédient actif dans de l'huile d'olive, par voie orale ou injection intrapéritonéale alternativement chaque autre jour pendant dix fois ou tous les jours pendant 20 fois. 25 jours après l'administration initiale, on excise les tumeurs. On mesure l'efficacité de l'inhibition de la prolifération tumorale d'après (A) chaque poids moyne des tumeurs excisées sur 10 souris (auxquelles on a administré l'ingrédient actif) et (D) chaque poids moyen de tumeur excisée sur 10 souris témoins.
L'effet inhibiteur des tumeurs (%). (1 - � x 100
On effectue les essais (1), (2), (3) pour différents ingrédients actifs. Les résultats sont représentés dans le Tableau XVIII.
Dans les essais de toxicité aiguë, la toxicité du dérivé antitumoral de l'invention s'avère remarquablement plus faible que celle de l'agent antitumoral correspondant luimême. La toxicité du dérivé antitumoral présentant un groupe oestradiol acylé au lieu d'un groupe hydroxyle en position 3, est par ailleurs inférieure à la toxicité correspondante.
SPECTRES IR
TABLEAU II
<EMI ID=140.1>
TABLEAU III
<EMI ID=141.1>
TABLEAU IV
<EMI ID=142.1>
TABLEAU V
<EMI ID=143.1>
TABLEAU VI
<EMI ID=144.1>
TABLEAU VII
<EMI ID=145.1>
TABLEAU VIII
<EMI ID=146.1>
TABLEAU IX
<EMI ID=147.1>
TABLEAU X
<EMI ID=148.1>
TABLEAU XI
<EMI ID=149.1>
TABLEAU XII
<EMI ID=150.1>
TABLEAU XIII
<EMI ID=151.1>
TABLEAU XIV
<EMI ID=152.1>
TABLEAU XV
<EMI ID=153.1>
TABLEAU XVI
<EMI ID=154.1>
TABLEAU XVII
<EMI ID=155.1>
Essai
N[deg.] Composés utilisés dans les essais du Tableau 17
<EMI ID=156.1>
désoxy-a-L-lyxo-hexapyranoside ;
5 3-acétyl-1,2,3,4,6,11-hexahydro-3,5,12-trihydroxy-10-
<EMI ID=157.1>
[5-fluoro-2,4-dioxo-pyrimidin-l-yl]acétate de
5-fluoro,2,4-dioxo-pyrimidine ;
<EMI ID=158.1>
mate
TABLEAU XVIII
<EMI ID=159.1>
TABLEAU XVIII (suite)
<EMI ID=160.1>
J
Essai
N[deg.] Composés utilisés dans les essais du Tableau XVIII 1 2-[N'-(2-chloroéthyl-N'-nitrosouréido]-2-désoxy-D-
glucopyranoside ;
<EMI ID=161.1>
12 4-amino-N -methylpteroyl glutamate;
<EMI ID=162.1>
soxy-a-L-lyxo-hexapyranoside ;
Essai
N[deg.] Composés utilisés dans les essais du Tableau XVIII/suite
16 3-glycoloyl-1,2,3,4,6,11-hexahydro-3,5,12-trihydroxy-
10-méthoxy-6,11-dioxo-1-naphtacényl-3'-[3-propionyloxy-
<EMI ID=163.1>
3',6'-tridésoxy-a-L-lyxo-hexapyranoside .
18 3-acétyl-1,2,3,4,6,11-hexahydro-3,5,12-trihydroxy-10-
méthoxy-6,11-dioxo-1-naphtacényl-3'-amino-2',3',6'-tridésoxy-a-L-lyxo-hexapyranoside ;
19 3-acétyl-1,2,3,4,6,11-hexahydro-3,5,12-trihydroxy-10-
méthoxy-6,11-dioxo-1-naphtacényl-3'-[3-hydroxy-1,3,5-
<EMI ID=164.1>
tratrién-17S-oxycarbonylméthyloxyéthyl)amino-s-triazine
21 p-[bis(2-chloroéthyl)amino]-L-phényl alanine ;
<EMI ID=165.1>
Les dérivés d'hormones stéroïdes antitumoraux typiques de l'invention sont les nouveaux composés ayant les formules suivantes.
<EMI ID=166.1>
dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupe acyle et n est un nombre entier de 1 à 3.
<EMI ID=167.1>
<EMI ID=168.1>
dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupe
<EMI ID=169.1>
<EMI ID=170.1>
dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupe acyle.
<EMI ID=171.1>
dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupe acyle.
Le groupe acyle est de préférence l'un des suivants :
<EMI ID=172.1>
<EMI ID=173.1>
REVENDICATIONS
1. Procédé pour préparer un dérivé d'hormone stéroïde
antitumoral qui attaque sélectivement les cellules tumorales
ou cancéreuses, ledit procédé étant caractérisé par le fait
que l'on fait réagir le groupe X d'un dérivé d'hormone stéroide répondant à la formule
ST-O-C-R'X
.1\ 0
dans laquelle ST représente un fragment stéroïde ayant le
squelette hydrocarboné d'un cyclophénathrène tel que gonane,
oestrane ou androstane, qui est lié au groupe carboxyle par estérification du groupe OH porté par le noyau D et R' repré-
<EMI ID=174.1>
un atome d'halogène, un groupe amino, un groupe hydroxyle, un
groupe carboxyle ou l'un de leurs sels, avec un groupe réactif modifié ou non modifié d'un médicament antitumoral de façon à former un groupe lié par l'intermédiaire de
-0-, -COO-, -CONH-, -NH- ou -N-
Anti-tumor steroid hormone derivatives and process for their preparation
preparation.
<EMI ID = 1.1>
The present invention relates to new derivatives of anti-tumor steroid hormones, as well as their preparation process. More particularly, it relates to a method for modifying an antitumor drug in order to improve its antitumor effect and to lower its toxicity by binding of said antitumor drug to a carboxylic acid derivative of a specific steroid hormone.
When administering and transferring drugs to organs and tissues in the body, the rate of the drug transferred to diseased organs or cells is remarkably low, while the rate of the drug decomposed or excreted without reaching diseased organs or cells is remarkably low tall. Most known anti-tumor drugs destroy tumor or cancer cells by also damaging normal cells strongly. As a result, it is difficult to administer known antitumor drugs for a long time and it is difficult to completely destroy tumor or cancer cells.
Consequently, an antitumor drug which only attacks selectively only tumor or cancer cells should constitute a remarkably effective means in therapy.
The Applicant has done research to find a method allowing the physiologically active substance to reach the targeted organs or cells. It has therefore found that the anti-tumor steroid hormone derivatives obtained by linking a physiologically active substance, in particular an anti-tumor drug to a steroid hormone derivative, are remarkably effective for the above-mentioned purpose.
According to an objective of the invention, a method is proposed for improving the anti-tumor effect and lowering the toxicity by modifying said anti-tumor drug with a particular derivative of steroid hormones.
According to another objective of the invention, a method is proposed for selectively linking a modified reactive group or
<EMI ID = 2.1>
of steroid hormones.
The above objectives as well as others are achieved <EMI ID = 3.1>
according to the invention providing anti-tumor steroid hormone derivatives making it possible to selectively attack tumor or cancer cells, which are obtained by binding group X of a steroid hormone derivative corresponding to the formula;,.
<EMI ID = 4.1>
in which ST represents a steroid fragment presenting the hydrocarbon skeleton of a cylopentanophenanthrene, such as the hydrocarbon skeleton of gonane, oestrane or androstane which is linked to the carboxyl group by esteri-
<EMI ID = 5.1>
feels a group al-
<EMI ID = 6.1>
amino group, hydroxyl group, carboxyl group or a salt thereof, with a modified or unmodified reactive group of an antitumor agent thereby forming a linking group via -0-, -COO- , -CONH-, -NH- where
-NOT-.
<1> The anti-tumor steroid hormone derivatives of the invention (hereinafter referred to as anti-tumor derivatives) are compounds obtained by binding a particular steroid hormone (which selectively binds to particular cells) to a drug antitumor (the latter destroying particular cells) via a linkage group. As a result, the anti-tumor derivative of the invention selectively sends an anti-tumor drug carried by a steroid hormone to a steroid hormone receptor cell, thereby selectively destroying organs and cells of body tissues, receptors of particular steroid hormones.
Combinations of the particular steroid hormones and the physiologically active substance as an anti-tumor agent can be readily handled by persons skilled in the medical art.
Steroid hormone receptor cells are well known. Furthermore, the relationships between antitumor drugs and tumor or cancer cells are also well known by numerous clinical and pharmacological data.
Steroid hormones are preferably compounds <EMI ID = 7.1> having the carbon skeleton of cyclopentanophenanthrene and an OH group on the D ring, in particular steroids presenting the carbon skeleton of cyclopentanophenanthrene having up to 35 carbon atoms (including the substituents) such as the hydrocarbon skeleton gonane., estrane or androstane, and having an OH group on the nucleus D, in particular in position 17.
Suitable substituents include alkyl groups, such as methyl and ethyl group, halogen atoms such as chlorine, bromine and iodine atoms, ethynyl group, hydroxyl group, ketone group, acyl group such as acetoxy, a propionyloxy group, an alkoxyl group, a benzoÿloxy group or a double bond in said backbone. The substituent can be introduced up to 4 positions, in particular in position 3. The iso-
<EMI ID = 8.1>
included.
Suitable steroid hormones include the following:
<EMI ID = 9.1>
17--hydroxy-4-androstén-3-one (testosterone);
17--hydroxy-17a-methyl-4-androsten-3-one (methyltestoesterone)
<EMI ID = 10.1> estenénorie).
Derivatives of said steroid hormones in which the OH group in position 3 is converted to an acyl group such as acetoxy, priopionyloxy or benzoyloxy are particularly preferable. The conversion can easily be carried out by reacting the OH group at position 3 of the steroid hormone with an acyl halide.
We convert the steroid hormone or its acyl derivative into
<EMI ID = 11.1>
0
antitumor drug. The position in which the group
-O-C-R'X is introduced must be chosen so as to preserve-
<EMI ID = 12.1>
nucleus D according to the steroid nomenclature.
The steroid hormone derivative can be obtained by acting a binding agent with the steroid hormone or its derivative. The binding agent should not cause toxicity. The binding agent constituting an ester bond reacts with the OH group of the D nucleus of the steroid hormone.
The binding agent can be a compound corresponding to the
<EMI ID = 13.1>
wherein n is an integer from 1 to 4 and X 'is a halogen atom (Br, Cl); such as a-monochloroacetic acid, a-monobromoacetic acid, &-monobromopropionic acid and monobromobutyric acid; a compound corresponding to
<EMI ID = 14.1>
in which n is an integer from 1 to 4, X 'is a halogen atom (Br, Cl) and X "is a halogen atom (Br, Cl) such as a-monochloroacetyl chloride and bromide of a-monobromoacetyl; a compound corresponding to the formula
<EMI ID = 15.1>
such as malonic acid, succinic acid, glutaric acid, adipic acid, glycolic acid, one of their acyl halides or acid anhydrides; or a compound corresponding to the formula HN2 (CH2) nCOOH
such as α-aminoacetic acid and amin -aminopropionic acid; or methyl succinate or methyl glutarate.
Furthermore, the group X of the binding agent is reactive with respect to the reactive group of the anti-tumor drug, said group X having to be chosen so as to easily obtain the derivatives of anti-tumor steroid hormones. For the choice of X, a person skilled in the art can choose a group which is highly reactive towards the reactive group of the antitumor medicament or its convertible group.
It is also possible to react the binding agent with the anti-tumor drug, then react the modified anti-tumor drug with the OH group of the D nucleus of the steroid hormone.
The invention aims to efficiently transfer the anti-tumor drug to tumor or cancer cells. The anti-tumor drugs useful in the context of the invention can be chosen from known anti-tumor drugs.
The anti-tumor drugs suitable for use in accordance with the invention are described below according to a certain classification.
(A) Alkylating agents:
(I) nitrogen mustard type:
p- [bis (2-chloroethyl) amino] -L-phenylalanine;
5-bis (2-chloroethyl) amino-2,4-dioxo-pyrimidine; N, N-bis
<EMI ID = 16.1>
Tris (2'-chloroethyl) -amine hydrochloride;
N- (2-chloroethyl), N '- (2-chloroethyl) diamide of the ester N', O-propylene phosphoric; and
4-hydroperoxy-isophosphamide.
(II) Ethyleneimines:
<EMI ID = 17.1>
6-methyl-1,4-benzoquinone.
(III) Nitrosoureas:
1,3-bis (2-chloroethyl) -1-nitrosourea;
<EMI ID = 18.1> <EMI ID = 19.1>
deoxy-D-glucopyranoside; and
1- (2-chloroethyl) -3-cyclohexyl-1-nitrosourea.
(B) Antimetabolites:
4-aminopteroyl-glutamic acid;
<EMI ID = 20.1>
6-mercaptopurine;
6-mercaptopurineriboside;
2-amino-6-hydroxy-8-azapurine; o-diazoacetyl-L-serine;
6-diazo-5-oxo-L-norleucine;
5-fluorouracil
5-fluorouridine;
5-fluoro-2'-deoxyuridine;
<EMI ID = 21.1>
cytosinearabinoside;
N 4 -acyl-cytosinearabinoside;
<EMI ID = 22.1>
methyl nate; and
5-azacytidine.
(c) Antibiotics:
Mitomycin C,
<EMI ID = 23.1>
Daunorubicin, Doxorubicin,
Sarcomycin,
Rubidazone.
(D) Natural anti-tumor products
Vincristine,
Vinblastine,
Mytansine,
VP-16,
VM-26.
The typical conditions used in the reactions are described below.
The binding agent is reacted with the OH group of the nucleus D of the steroid hormone in the presence or in the absence of a catalyst in a solvent such as carbon tetrachloride chloroform, tetrahydrofuran, dimethyl sulfoxide
(DMSO), dimethylformamide (DMF), pyridine and acetone. The reaction temperature commonly ranges from -50 [deg.] C to 200 [deg.] C, preferably from -20 [deg.] C to 100 [deg.] C. The reaction time commonly ranges from half an hour to 48 hours, preferably 1 to 24 hours.
The catalysts can be chosen from acids such as p-toluenesulfonic acid, and amines such as pyridine and triethylamine.
The anti-tumor drugs are reacted with the reaction product thus obtained, in the presence or in the absence of a catalyst in a solvent such as DMSO, DMF, ether, pyridine, toluene, carbon tetrachloride , chloroform, tetrahydrofuran (THF).
<EMI ID = 24.1>
tervalle from -20 [deg.] C to 100 [deg.] C, preferably from -10 [deg.] C to 80 [deg.] C. The reaction time commonly ranges from 2 to 100 hours.
The resulting product is purified by obtaining the anti-tumor steroid hormone derivatives.
<EMI ID = 25.1>
acids such as paratoluenesulfonic acid.
The same compound can also be prepared by reacting the binding agent with the anti-tumor drug, then reacting the reaction product thus obtained with an OH group of the D nucleus of the steroid hormone by forming an ester bond.
The preparations of said products will be better understood in the following examples which only show certain modes of implementation, the reaction conditions being able to be modified.
The structure of the resulting anti-tumor steroid hormone derivatives according to the invention is confirmed, among others by the IR spectrum, mass spectrometry, elementary analysis and the melting point.
It has also been confirmed by tests on acute toxicity, on the function of fixation in. tumor or cancer cells and on the anti-tumor effect, that the anti-tumor steroid hormone derivatives of the invention have a remarkably low toxicity, an excellent binding function in tumor or cancer cells and an excellent anti-tumor effect.
The anti-tumor steroid hormone derivatives of the invention have remarkably lower toxicity compared to known anti-tumor drugs. The reason is not understood in the current state of knowledge and requires additional studies. These effects are considered to be favored by a certain unknown mechanism accompanying the medical effect based on the classic concept of the receptor.
The use of the anti-tumor steroid hormone derivatives of the invention can be envisaged to obtain various anti-tumor effects according to the types of anti-tumor drugs used, this for treating uterine cancer, breast cancer, prostatic carcinoma, carcinoma of thyroid, stomach cancer, rectal cancer, laryngeal carcinoma, esophageal carcinoma, cancer
lung cancer, skin cancer, leukosarcoma, pancreatic cancer, malignant lymphogranulomatosis, bladder tumors, ovarian sarcoma, brain tumors,
villous cancer and malignant granuloma.
For the use of the anti-tumor steroid hormone derivatives of the invention as medicaments in therapy, medicinal compositions can be prepared for administration by conventional methods for known anti-tumor agents.
The anti-tumor steroid hormone derivatives of the invention can be transformed into dosage forms of administration, in particular into a form which is desirable for injection, oral administration, intravaginal administration or local administration. When put in solid forms for oral administration, such as tablets, pills, granules, powders, capsules, it is possible to add to the preparation a binder, a diluting agent, a filler, a lubricant, a surfactant or disintegrating agent. When put in liquid forms ,. for oral administration, the preparations may consist of an aqueous suspension, a suspension
/ - oily, a solution, a syrup or a mixture to be stirred. When put in the form of suppositories, preparations can be made using a hydrophobic or hydrophilic base and a stabilizer, a disintegrating agent or a coloring agent. When they are put in the form of injectable solutions, an aqueous solution, a solubilizer, a nutrient, a stabilizer, a surfactant can be added to the preparations. To maintain or improve the medical effect, a base, an acid or a salt can be incorporated as desired.
Said compositions can be prepared by incorporating the active ingredient at the rate of 0.001 - 90% by weight, preferably 0.01 - 60% by weight.
The dosage preparations containing the anti-tumor steroid hormone derivatives of the invention can be administered by oral administration, percutaneous adsorption, intramuscular injection, intraperitoneal injection, intravenous injection, intrarectal injection, local administration and subcutaneous injection.
The dose of the anti-tumor steroid hormone derivative of the invention is in the range of about 0.01 to
50 mg / kg / day / (person) for oral administration and is in the range of about 0.001 to 20 mg / kg / day / (person) for intravenous injection.
The anti-tumor steroid hormone derivatives of the invention have the following characteristics.
(1) When the cancer forms in a tissue presenting its receptor, the product selectively attacks the tumor or cancer cells of the tissue so as to destroy said tumor or cancer cells. Thus, said product is effective for a low dose of administration only.
(2) The product has lower side effects compared to those caused by the administration of known anti-tumor drugs. Thus, it can be administered for an extended time and, as a result, tumor and cancer cells can be completely destroyed.
(3) The steroid hormone used as a carrier or carrier component in the antitumor steroid hormone derivative has a unique structural composition, the physiological activity of which is clearly known. Thus, the product can be administered without any fear.
(4) The structure and activity of the anti-tumor component of the anti-tumor steroid hormone derivative of the invention are already known. Thus, it is also without any fear that one can administer the product.
(5) The receptor for tumor or cancer cells can be analyzed. The steroid hormone or its derivative can be chosen correspondingly as a carrier component of the antitumor steroid hormone derivative. The therapy of various cancers can be envisaged by a choice of the carrier component.
(6) The antitumor steroid hormone derivative can be administered by a conventional dosage form, such as for oral administration, injection or. a suppository form.
(7) The products of the invention have excellent characteristics and thus make their high contribution to human well-being, as well as to the progress of medicine.
In another field of application, the products of the invention are also effective as stabilizers for high polymers, in particular polyolefins.
The invention will be illustrated below in more detail by examples, however in no way intended to limit said invention in its scope and spirit.
EXAMPLE 1:
(1-1)
<EMI ID = 26.1>
in 400 ml of anhydrous tetrahydrofuran (THF), then 8.8 g of pyridine are added thereto.
To the resulting solution is added dropwise a solution of 22.5 g of monobromoacetyl bromide in 74 g of carbon tetrachloride, at a temperature of about -5 [deg.] C to -7 [ deg.] C. The mixture is left overnight. After the reaction, the resulting precipitate is filtered off. The solvent is distilled off from the filtrate. The residue is dissolved in ether and recrystallized from ether, obtaining 3.17 bis -bis (monobromoacetate) from
<EMI ID = 27.1>
in 900 ml of methanol and the solution is cooled to -5 [deg.] C. A solution of 0.24 g of K2CO3 in 20 ml of water is added dropwise to the resulting solution. After the reaction for 30 minutes, 1000 ml of water are added and the resulting precipitate is separated and dried.
The results of the elemental analysis, the melting point and the IR spectrum are as follows:
<EMI ID = 28.1>
<EMI ID = 29.1>
<EMI ID = 30.1>
monobromopropionate
2.0 g of 1.3.5 (10) -estratriene-3.17 & -diol are dissolved in 50 ml of anhydrous tetrahydrofuran, then 2 g of paratoluenesulfonic acid monohydrate are added as reaction catalyst, then 2.2490 g of monobromopropionic acid are added before bringing the mixture to reflux at 80 [deg.] C for approximately 16 hours. After the reaction, the solvent is evaporated in vacuo at room temperature. The residue is added in water and washed 3 to 4 times with water (approximately 1000 ml each time) to remove the acid with a toluene sulfonic acid. The precipitate is separated by filtration and dried under
vacuum in a desiccator by obtaining 2.42 g of a product
(yield 80.90%). The crude product is purified by column chromatography with a mixture of solvents, taking cyclohexane and ethyl acetate in the ratio of 50:30 by volume. The results of the elemental analysis and the melting point are as follows.
Elementary analysis:
<EMI ID = 31.1>
(1-3) Preparation of 3-hvdroxy-
<EMI ID = 32.1>
2.0 g of 1.3.5 (10) -estratriene-3-17S-diol are dissolved in 50 ml of anhydrous tetrahydrofuran, then added to it
2.0 g of paratoluenesulfonic acid monohydrate as reaction catalyst and then 3 g of monochloropropionic acid are added before bringing the mixture to reflux at 180 [deg.] C for about one night. After the reaction, the solvent is evaporated in vacuo at room temperature. The residue is added in water and washed three times with water
(about 100 ml each time) to remove the paratoluenesulfonic acid. The precipitate is separated by filtration and dried under vacuum in a desiccator, obtaining 2.5 g of the crude product. The crude product is purified by recrystallization from ethyl ether, obtaining crystals.
The results of the elementary analysis and the melting point are as follows:
<EMI ID = 33.1>
(1-4) Preparation of 3-hydroxv-l
<EMI ID = 34.1>
2.0 g of 1.3.5 (10) -estratriene-3.17 di -diol are dissolved. in 50 ml of anhydrous tetrahydrofuran, then added to it
2.0 g of paratoluenesulfonic acid monohydrate as reaction catalyst, and then 2.6 g of monochloroacetic acid are added before bringing the mixture to reflux at 80 [deg.] C overnight. After the reaction, the solvent is evaporated in vacuo. The residue is washed three times with water (about 100 ml each time) to remove the paratoluenesulfonic acid. The precipitate is separated by filtration and dried under vacuum in a desiccator, obtaining 2.5 g of a crude product. The crude product is purified by recrystallization from ethyl ether, obtaining crystals.
The results of the elementary analysis and the melting point are as follows:
Elementary analysis:
<EMI ID = 35.1>
Melting point: 187 - 190 [deg.] C
The following compounds are also prepared by the same procedure, except that the corresponding starting compounds are used.
<EMI ID = 36.1>
EXAMPLE 2:
(2-1) Preparation of 3-acetoxy-1,3,5 (10) -oestratrién-
<EMI ID = 37.1>
<EMI ID = 38.1>
<EMI ID = 39.1>
resulting, a solution of 15 g of monobromoacetyl bromide in 75 g of carbon tetrachloride, at about -5 [deg.] C to
-7 [deg.] C. The mixture is left overnight. After the reaction, the resulting precipitate is filtered off. The solvent is distilled off from the filtrate. The residue is dissolved in ether and recrystallized from ether, obtaining 14 g of <EMI ID = 40.1>
<EMI ID = 41.1>
The results of the elementary analysis are as follows: Elementary analysis:
<EMI ID = 42.1>
In the IR spectrum, there is no absorption band
<EMI ID = 43.1>
The following compounds are also prepared by the same procedure, except that the corresponding starting compounds are used.
<EMI ID = 44.1>
<EMI ID = 45.1>
17 � -monobrdmoacetate
10 g (3.67 mM) of 1.3.5 (10) -estratriene-3 are dissolved,
17S-diol in 100 ml of THF and 10 ml of an aqueous solution containing 1.47 g of NaOH is added thereto. The mixture is stirred at approximately 30 ° C. until it becomes a transparent solution. The reaction mixture is then concentrated and dried under reduced pressure, passing it in the form of a white crystal syrup. In order to remove the water, the crystals are dissolved in 100 ml of methanol and dried under reduced pressure in a water bath at 80 [deg.] C for 3 hours.
<EMI ID = 46.1>
add 50 ml of an ether solution containing 5.5 g (39.1 mM) of benzoyl chloride dropwise. We stir the mixture
at room temperature for 16 hours. After the reaction, the resulting sodium chloride is separated by the conventional method. The filtrate is evaporated to dryness. In order to decompose the unreacted benzoyl chloride, 200 ml of a 0.1 N aqueous NaOH solution are added. The mixture is stirred at
Room temperature. After 15 minutes, the resulting white crystals are separated by filtration through a G-3 filter and washed with distilled water, dried, and then recrystallized.
The product is analyzed by chromatography on a thin layer of silica gel with a mixture of development solvents (ethyl acetate and cyclohexane in the ratio of 50:30 by volume), obtaining the main spot of
Rf: 0.34.
From the tests carried out with regard to the elementary analysis, the melting point and the IR spectrum of the product, we find results identical to those of the values known as a result, it is confirmed that the product is the
<EMI ID = 47.1>
Elementary analysis:
<EMI ID = 48.1>
Melting point: 190 - 194 [deg.] C (known values: 191 -
196 [deg.] C)
IR spectrum: Table III
In 100 ml of THF, 7.0 g (18.6 mM) of the product thus obtained and 2.0 g (25.3 mM) of pyridine are dissolved, and the mixture is cooled to approximately -5 [deg.] C . A solution containing gradually is added dropwise to the resulting mixture.
15.5 g of 30% monobromoacetyl bromide in carbon tetrachloride in 50 ml of THF. After the addition, the mixture is stirred at -5 [deg.] C for 2 hours, then in an ice bath for a few hours and kept in the refrigerator for 16 hours. After the reaction, the resulting white precipitate is separated through a G-4 filter and dried under reduced pressure in a water bath at 30 [deg.] C before adding 200 ml of ethyl ether and stirring. the mixture, obtaining 5.3 g of white crystals.
The crude crystals are dissolved in 50 ml of methanol at 30 [deg.] C and then cooled to obtain 5.0 g of white crystals.
The product is analyzed by thin layer chromatography on silica gel with a developer consisting of a mixture of solvents (ethyl acetate and cyclohexane in the ratio of 50: 30 by volume), obtaining a single spot.
<EMI ID = 49.1>
The melting point of the product is 145 to 146 [deg.] C.
The flow ratio Rf of the product is different from the flow ratio Rf: 0.34 of the starting compound constituted by benzoate of 17--hydroxy-1,3,5 (10) -oestratrién-3-yl .
In the IR spectrum, there is no absorption band
at 3600 - 3200 cm. It is confirmed that the product is the
<EMI ID = 50.1>
The following compounds are also prepared by the same procedure, except that the corresponding starting compounds are used.
<EMI ID = 51.1>
<EMI ID = 52.1>
anhydrous curtain at room temperature and stirred for
6 p.m. to let them react. The reaction mixture is poured onto 1.5 liters of a mixture of ice and water and it is neutralized with 3N HCl, then it is diluted with water. The precipitated crystals are separated by washing with water and dried, obtaining 16.5 g of 3-acetoxy-
<EMI ID = 53.1>
In the IR spectrum of the recrystallized product, one does not find
<EMI ID = 54.1> of the elementary analysis of the product are as follows.
Elementary analysis
<EMI ID = 55.1>
The following compounds are also prepared by the same procedure, except that the corresponding starting compounds are used.
<EMI ID = 56.1>
0.80 g of glycolic acid, then another 1.8 g of paratoluenesulfonic acid are added. The mixture is brought to reflux in a water bath at 80 [deg.] C for 16 hours. After the reaction, the mixture is cooled and the paratoluene 1-sulfonic acid and the unreacted glycolic acid are separated using
20 g of a weakly basic ion exchange resin (Amberlite A-21), obtaining a pale yellow transparent solution. The THF is distilled off under reduced pressure, obtaining 2.0 g of white yellow crystals. The product is recrystallized from a mixture of solvents composed of ethanol and ethyl ether (1: 1), obtaining 1.5 g of white crystals.
According to the elementary analysis and the IR spectrum, it is confirmed that the product is 3-ben-
<EMI ID = 57.1>
Elementary analysis:
<EMI ID = 58.1>
In the IR spectrum, we find the absorption bands <EMI ID = 59.1>
the ester.
The following compounds are also prepared by the same procedure, except that the corresponding starting compounds are used.
<EMI ID = 60.1>
In 50 ml of DMSO, 3.31 g of
<EMI ID = 61.1>
add 3.8 g of methyl-N-benzoyloxycarbonyl-a-D-glucosamineuronate, leaving them to react at room temperature for 3 hours in the dark. The AgBr precipitate is separated by filtration through a G-4 filter at a rate of twice, then it is washed with acetone. The filtrate is concentrated to 70 [deg.] C by forming a syrup. Then, 100 ml of distilled water are added to remove the DMSO. The mixture is cooled to 5 ° C. and left for 1 hour. The precipitate is separated by filtration, the residue is washed with water, then with petroleum ether and again with ethyl ether.
<EMI ID = 62.1>
ambient ture by obtaining 5.31 g of a pulverulent product.
In 150 ml of THF, 5.0 g of the product are dissolved and the solution is loaded into a 500 ml autoclave, then 5.0 g of a catalyst containing 10% Pd on carbon is added thereto. The autoclave is purged with hydrogen gas. The mixture is stirred by supplying it with hydrogen to maintain a pressure of 0.3 kg / cm <2> for 64 hours.
It is confirmed that the hydrogenation was carried out by removing the stain due to the starting substance in a thin layer plate of silica gel. After the reaction, the catalyst is separated and washed with a small amount of THF. The filtrate is concentrated and dried under reduced pressure in a water bath. Petroleum ether is added to the product and the precipitated crystals are separated and dried.
In order to remove the water-soluble impurities, the product is dispersed in water, the yellow solid is separated
<EMI ID = 63.1>
3.8 g of the product are dispersed in a mixture of 150 ml of acetonitrile and 20 ml of water. We stir the dispersion
at room temperature for 30 minutes. 0.93 g of 2-chloroethyl isocyanate is admitted into the dispersion, and the mixture is stirred at room temperature for 1 hour. After the reaction, the isocyanate is removed and a transparent solution is obtained.
The reaction mixture is concentrated under reduced pressure at 30 ° C. and 100 ml of water are added to the condensed mixture which is stirred for 1 hour, obtaining white crystals. The crystals are separated by filtration and dried
(yield: 92.8%) and purifies by chromatography on silica gel with a developer mixture consisting of 45 ml of ethyl acetate, 45 ml of cyclohexane and 10 ml of ethanol, obtaining a high purity product ( yield: 40%).
200 mg of the product are dissolved in a mixture of solvents composed of 3.2 ml of acetic acid and 6 ml of ethanol. An aqueous solution of NaNO2 (4 ml of water and 344 mg of NaNO2) is added dropwise to the resulting solution, at 5 ° C. with stirring, and the reaction is continued for 16 hours. After the reaction, the reaction mixture is concentrated under reduced pressure to a volume of 2 ml at 30 [deg.] C, then added
50 ml of water to the concentrated product by precipitating crystals <EMI ID = 64.1>
yellowish red. The crystals are separated by filtration and dried (yield: 91%).
The product is purified by chromatography on silica gel with a mixture of developer composed of ethyl acid and cyclohexane (50:50 by volume). From the elementary analysis, the IR spectrum and the melting point, it is confirmed that the product is the desired compound of the invention.
Elementary analysis:
<EMI ID = 65.1>
The following compounds are also prepared by the same procedure, except that the corresponding starting compounds are used.
<EMI ID = 66.1> <EMI ID = 67.1>
EXAMPLE 6
<EMI ID = 68.1>
noyloxy acetate.
In 70 ml of DMSO, 3.465 g of 3-hydroxy-1,3,5 (10) -oestratrien-173-yl monobromoacetate are dissolved and added
to the solution 4.634 g of silver benzyl-N-benzyloxycarbonyl-a-D-glucosamineuronate before stirring the mixture at room temperature for three days to allow its constituents to react, in the dark. The AgBr precipitate is separated by filtration through a G-4 filter twice and washed with acetone. The filtrate is concentrated to bring it to a volume of 10 ml at 70 [deg.] C. Then we add
100 ml of distilled water to remove DMSO from the filtrate. The reaction product is cooled to 5 [deg.] C and left for one hour, then the precipitate obtained is filtered off and washed with water, with petroleum ether and then with ethyl ether, and dried at room temperature under reduced pressure to obtain 6.1 g of a powdery product.
In 70 ml of THF, 3.5 g of the resulting compound are dissolved and 3.5 g of a catalyst based on 10% Pd on carbon are added. The mixture is supplied with gaseous hydrogen at the speed of 15 ml / minute by vigorous stirring for
60 hours to allow its constituents to react. After the reaction, the catalyst is separated by filtration through a G-4 filter and washed with a small amount of methanol. The filtrate is evaporated to dryness under reduced pressure at room temperature. The residue is added to the mixture.
petroleum ether and the precipitate is separated to dry it. In order to remove the water-soluble impurities, the product is dispersed in water and the residual yellow white solid is separated and dried, obtaining 2.0 g of the compound.
In a mixture of solvents composed of 30 ml of acetonitrile and 2 ml of water, 0.8 g of the product is dissolved at 40 [deg.] C and the solution is cooled to 10-20 [deg.] C before d add to it 0.20 ml of 2-chloroethyl isocyanate, then the mixture is stirred for 60 minutes to allow it to react. After the reaction, the reaction mixture is evaporated to dryness under reduced pressure at 40 [deg.] vs. The residue is added to 50 ml of water with stirring to obtain a white precipitate. The precipitate is separated and washed with ether and ethyl acetate, then with water and dried under reduced pressure. 0.2 g of the resulting product is dissolved in 6 ml of ethanol and 3.2 is added.
ml of acetic acid and the mixture is kept at 5 ° C., then an aqueous solution of NaNO2 (4 ml of water and 344 mg of NaNO2) is added thereto with stirring and the mixture is stirred for 18 hours to let him react. After the reaction, the reaction mixture is concentrated under reduced pressure and the residue is added to 50 ml of water, obtaining the precipitate. The precipitate is separated, washed with a small amount of water and
dry it under reduced pressure at room temperature.
The product is putified by chromatography on silica gel with a developer consisting of a mixture of solvents composed of cyclohexane and acetic acid in the proportion of 50:50 by volume, which is passed through a column of gel of silica having a particle size greater than 0.15 mm at the speed of 0.172 cm / minute.
From elementary analysis, IR spectrum and melting point, it is confirmed that the product is the compound
of the invention.
Elementary analysis:
<EMI ID = 69.1>
Melting point: 110 - 115 [deg.] C (decomposed)
IR spectrum: Table V
The following compounds are also prepared by the same procedure, except that the corresponding starting compounds are used.
<EMI ID = 70.1> <EMI ID = 71.1>
tate.
In 70 ml of DMSO, 13.465 g of <EMI ID = 72.1> does not add 4.634 g of benzyloxy-N-benzyloxycatbonyl to the solution
-D-glucosamineuronate silver to let them react at room temperature for 3 days in the dark. The AgBr precipitate is separated by filtration through a G-4 filter twice and washed with acetone. The filtrate is concentrated at 70 [deg.] C to bring it to the volume of
10 ml, then 100 ml of distilled water is added to remove the DMSO from the filtrate. The solution is cooled to 5 ° C. and left for 1 hour to form the precipitate. The precipitate is separated by filtration and washed with water, with petroleum ether, then with ethyl ether and dried under reduced pressure at room temperature, obtaining 6.1 g of the product powdery.
In 70 ml of THF, 3.5 g of the product are dissolved, then 3.5 g of a catalyst containing 10% Pd on carbon is added thereto. The mixture is supplied with gaseous hydrogen at a flow rate of 15 ml / minute with vigorous stirring for 60 hours to let them react. After the reaction, the catalyst is separated <EMI ID = 73.1>
<EMI ID = 74.1>
small amount of methanol. The filtrate is evaporated to dryness under reduced pressure at room temperature. The residue is added in petroleum ether and the precipitate is separated to dry it. In order to remove the water-soluble impurities, the product is dispersed in water and the residual yellow white solid is separated and dried, obtaining 2.0 g of the compound.
In a mixture of solvents composed of 30 ml of acetonitrile and 2 ml of water, 0.8 g of the product is dissolved at 40 [deg.] C and the solution is cooled to 10 [deg.] C - 20 [deg .] C before adding 0.16 ml of methyl isocyanate, then the mixture is stirred for 60 minutes to allow it to react. After the reaction, the reaction mixture is evaporated to dryness under reduced pressure at 40 [deg.] C. The residue is added to 50 ml of water with stirring to obtain a white precipitate. The precipitate is separated and washed with ether, with ethyl acetate, then washed with water and dried under reduced pressure to obtain the product (melting point: 230 [ deg.] C - 137 [deg.] C).
0.2 g of the resulting product is dissolved in 6 ml of ethanol and 3.2 ml of acetic acid are added, then the mixture is left at 5 ° C. and then an aqueous NaNO 2 solution is added thereto (4 ml of water; 344 mg of NaNO2) with stirring and the mixture is continued to stir for 18 hours to allow it to react. After the reaction, the reaction mixture is concentrated under reduced pressure and the residue is added to 50 ml of water to form the precipitate. The precipitate is separated by filtration and washed with a small amount of water before drying under reduced pressure at room temperature.
The product is purified by chromatography on silica gel with a developer consisting of a mixture of solvents composed of cyclohexane and acetic acid in the proportion of 50:50 by volume which is passed through a column of silica gel having a particle size greater than 0.15 mm at a speed of 0.172 cm / minute.
From the elementary analysis, the IR spectrum and the melting point, it is confirmed that the product is the compound of the invention.
Elementary analysis:
<EMI ID = 75.1>
Melting point: 109 - 115 [deg.] C
IR spectrum: Table VI
The following compounds are also prepared in the same procedure, except that the corresponding starting compounds are used.
<EMI ID = 76.1>
100 mg of 5-fluoro-2,24-dioxo-pyrimidine (5-Fu) are dispersed in 5 ml of distilled water, then one is added slowly. aqueous KOH solution (ml of water; 50.8 mg KOH). After the addition, the mixture is stirred for 30 minutes, forming a transparent solution having a pH of 8 to 9, and then an aqueous solution of
<EMI ID = 77.1> <EMI ID = 78.1>
darkness. The precipitate is separated by filtration and washed with water and then dried under reduced pressure, obtaining the silver salt of 5-Fu (yield: 93.4%).
In 10 ml of DMSO, 130 mg of the silver salt are added
of 5-Fu and 215 mg of 3-hydroxy-1,3,5 (10) -
<EMI ID = 79.1>
days in the dark. The precipitate is separated by filtration. The filtrate is concentrated under reduced pressure, then water is added thereto, precipitating the product. The precipitate is washed with water and dried. The product is purified by chromatography on silica gel with a mixture of solvents
<EMI ID = 80.1>
proportion of 50:50 by volume which is passed through a column of silica gel.
From the elementary analysis, the IR spectrum and the melting point, it is confirmed that the product is the compound of the
<EMI ID = 81.1>
Elementary analysis:
<EMI ID = 82.1>
Melting point: 282 to 286 [deg.] C (decomposed by fusion) IR spectrum: Table VII
<EMI ID = 83.1>
in 50 ml of DMF at room temperature leaving them to react at said room temperature for 24 hours. After the reaction, the DMF is evaporated under reduced pressure in a water bath at 50 [deg.] C. The mixture is added to water and stirred at room temperature. The precipitation of a white-yellow product is consequently obtained. The crystals are separated by centrifugal separation and washed twice with the same amount of water, then the crystals are collected via a centrifugal separator and dried under reduced pressure. 100 ml of ethanol are added and the component soluble in ethanol is separated to dry it under reduced pressure, obtaining 4.5 g of white crystals.
The product is analyzed by thin layer chromatography on silica gel with a developer consisting of a mixture of solvents (ethyl acetate and cyclohexane in
the ratio of 50: 50 by volume) by obtaining a main spot of Rf: 0.32.
The crude crystals are recrystallized from a mixture of solvents composed of ethyl acetate and cyclohexane. The product is analyzed by thin layer chromatography under the same conditions, obtaining a single spot of Rf: 0.32.
From the elementary analysis, the melting point and the IR spectrum, it is confirmed that the product is the compound of the invention.
Elementary analysis:
<EMI ID = 84.1>
Melting point: 205 - 208 [deg.] C
IR spectrum: Table VIII
<EMI ID = 85.1>
5-Fu in 50 ml of DMSO, leaving them to react at room temperature for 48 hours in the dark. After the reaction, the resulting AgBr is separated by filtration through a G-4 filter. The filtrate is evaporated to dryness in a bain-marie at 80 [deg.] C under reduced pressure. The residue is added to
50 ml of acetone and an insoluble substance is separated by filtration through a G-4 filter. The filtrate is further evaporated to dryness under reduced pressure.
The resulting syrupy residue having a high viscosity is added to 100 ml of distilled water and the mixture is stirred for 1 hour, precipitating white crystals. The crystals are filtered through a G-4 filter and washed with distilled water to remove the DMSO.
The resulting crystals are dried under reduced pressure in a desiccator to obtain 3.0 g of crude crystals. The crude crystals are dissolved in a mixture of solvents composed of cyclohexane and ethyl acetate in the ratio of
50: 50 by volume. The product is purified by column chromatography with silica gel.
From the elementary analysis, the melting point and the IR spectrum, it is confirmed that the product is the compound of the invention.
Elementary analysis:
<EMI ID = 86.1>
Melting point: 190 - 198 [deg.] C
IR spectrum: Table IX
<EMI ID = 87.1>
in 50 ml of DMSO leaving them to react for 3 days in the dark. The reaction mixture is filtered through a G-4 filter to remove AgBr. The filtrate is evaporated to dryness under reduced pressure in a water bath at 80 [deg.] C. The residue is mixed with 50 ml of acetone and the mixture obtained is filtered through a G-4 filter, removing an insoluble substance. The filtrate is then evaporated to dryness under reduced pressure.
The residue is mixed with 100 ml of distilled water with stirring for 2 hours and a white precipitate is thus obtained after 2 hours. The precipitate is recrystallized from a mixture of solvents composed of ethyl acetate and ethyl ether. The recrystallization is repeated, obtaining 2.4 g of white crystals.
From the elementary analysis and the melting point, it is confirmed that the product is the compound of the invention.
Elementary analysis:
<EMI ID = 88.1>
Melting point: 201 - 204 [deg.] C <EMI ID = 89.1>
In 3 ml of dimethylformamide, 100 mg of 5-fluoro-2,4-dioxo-pyrimidine (5-Fu) are dissolved, then 85.6 mg of triethylamine is added and the mixture is stirred at 5 [deg.] C for 30 minutes. A solution is added dropwise to the resulting mixture. 302 mg of 3-hydroxy-1,3,5 (10) -
<EMI ID = 90.1>
te the mixture at 5 [deg.] C for one hour and then at room temperature for 22 hours to let it react.
After the reaction, the resulting organic derivative is separated by filtration. The filtrate is evaporated to dryness under reduced pressure in a water bath at 80 [deg.] C. Fine white crystals are precipitated. The crystals are mixed with 20 ml of distilled water and the mixture obtained is stirred at room temperature for 1 hour before cooling. The resulting white crystals are separated by filtration and dried under reduced pressure in a desiccator to obtain 150 mg of crystals. The resulting crystals are recrystallized from a mixture of solvents composed of methyl alcohol and ether in the ratio of 1: 1, obtaining 120 mg of white crystals.
The product is analyzed by thin layer chromatography on silica gel with a mixture of solvents composed of ethyl acetate and cyclohexane in the ratio of 50:
50 by volume, obtaining a single spot of Rf: 0.24, by a staining technique with sulfuric acid-drunk with iodine.
The results of the elemental analysis and the melting point of the product are as follows.
Elementary analysis:
<EMI ID = 91.1>
Melting point: 282 - 286 [deg.] C (decomposed)
<EMI ID = 92.1>
dioxo-5-fluoropyrimidin-1-yl) acetate resulting (350 mg) in 2 ml of anhydrous pyridine, and 2 ml of anhydride are added thereto. acetic, then the mixture is left in a refrigerator <EMI ID = 93.1>
for 16 hours to let it react. After the reaction, the mixture is evaporated to dryness under reduced pressure in a water bath at 30 [deg.] C. The residue is mixed with distilled water and the mixture obtained is stirred for 1 hour by precipitating white crystals. The crystals are separated by filtration through a G-4 filter and washed with distilled water before drying under reduced pressure in a desiccator, obtaining 330 mg of white crystals. The crystals are recrystallized from a mixture of solvents composed of ethyl acetate and ethyl ether. The product is analyzed by thin layer chromatography on silica gel with a developer consisting of a mixture of solvents (ethyl acetate and cyclohexane in the ratio of 50 to 50 by volume), obtaining a single spot of Rf: 0.38.
From the elementary analysis, the melting point and the IR spectrum, it is confirmed that the product is the compound of the invention.
Elementary analysis:
<EMI ID = 94.1>
Melting point: 200 - 204 [deg.] C
IR spectrum: Table 10
<EMI ID = 95.1>
propionic and the mixture is left in a refrigerator to allow it to react. After the reaction, the mixture is evaporated to dryness under reduced pressure in a water bath at 30 [deg.] C. The residue is mixed with distilled water and the mixture obtained is stirred for 2 hours, obtaining white crystals. The crystals are separated by filtration through a G-4 filter. The product is recrystallized from a mixture of solvents composed of ethyl acetate and ethyl ether, obtaining 2.9 g of crystals.
The following compounds are also prepared by the same procedure, except that the compounds of <EMI ID = 96.1>
fluorouracil-3-yl] acetate.
<EMI ID = 97.1>
<EMI ID = 98.1>
In 5 ml of DMSO, 200 mg of silver 4-amino-N methylptoylglutamate are dissolved, then 235 mg of 3-hydroxy-1,3,5 (10) -estratrien-17 -monobromoacetate is added and the mixture is stirred at room temperature for two days in the dark. After the reaction, the AgBr precipitate is separated by filtration through a G-4 filter. The filtrate is concentrated under reduced pressure at 80 [deg.] C. The resulting oily product is mixed with distilled water, obtaining a yellow precipitate. The mixture is stirred for 1 hour so as to transfer the DMSO into the aqueous phase.
The precipitate is separated by filtration through a G-4 filter. The precipitate is washed with distilled water and dried under reduced pressure in a desiccator, obtaining 258.5 mg of the crude product (theoretical quantity: 322.2 mg; yield of crude product: 80.23%).
In 25 ml of THF, 200 mg of the crude product are dissolved, then 10 ml of distilled water are added and then 1.2 g of an ion exchange resin (marketed under the name of Diaion WA-20 : ion exchange capacity of 25 meq./ml;
<EMI ID = 99.1>
room temperature for about 1 hour. The pH of the solution is changed from 6 - 7 to 7 - 8. The ion exchange resin is separated by filtration through a G-4 filter. The filtrate is concentrated under reduced pressure in a water bath to remove the THF. The residue is dried by the freeze-drying method (lyophilization), obtaining 200 mg of a yellow pulverulent product.
According to the IR spectrum, the elementary analysis, the reaction to ninhydrin and the melting point, it is confirmed that the product is the compound of the invention.
Elementary analysis:
<EMI ID = 100.1>
Melting point: 183 - 194 [deg.] C
IR spectrum: Table XI
The following compounds are also prepared by the same procedure, except that the corresponding starting compounds are used.
<EMI ID = 101.1>
acetate.
EXAMPLE 10
<EMI ID = 102.1>
3 ', 6'-trideoxy-a-L-lyxo-hexapyranoside
In 5 ml of DMF, 100 mg of 3-glycoloyl-1,2, 3,4,6,11-hexahydro-3,5,12-trihydroxy-10-methoxy-6,11-dioxo- are dissolved.
<EMI ID = 103.1>
noside, then add 600 mg of a triethylamine solution
<EMI ID = 104.1>
The mixture is stirred for 15 minutes, then 1 g of a 10% solution of 3-hydroxy-1,3,5 monobromoacetate is added thereto.
(10) -oestratrién-17 &-65533; -yle in DMF. Stirring of the mixture is continued for 30 minutes, then 400 mg of a 10% solution of triethylamine in DMF is added thereto and the mixture is stirred while cooling with ice for 6 hours before being allowed to react. room temperature for
24 hours. The reaction system has a dark red color and contains a white precipitate. The white precipitate is separated by filtration through a G-4 filter and washed with 200 ml of ethyl acetate. The filtrate is mixed with
200 ml of water and the pH is adjusted to 1-2 with concentrated HCl. The mixture is stirred for 1 hour, which brings about a transformation. The ethyl acetate phase is transformed into a bright red transparent solution, while the aqueous phase is transformed into a pale red transparent solution.
The ethyl acetate phase is separated. The aqueous phase is mixed with 200 ml of ethyl acetate to continue the extraction. The operation is repeated once again.
The ethyl acetate phases (600 ml) are collected and washed with 200 ml of distilled water three times. The ethyl acetate phase is dried over anhydrous sodium sulfate and washed. evaporates to dryness under reduced pressure in a water bath.
The resulting crude crystals are dissolved in 10 ml
<EMI ID = 105.1>
clohexane and ethanol in the proportions of 40: 40: 20 <EMI ID = 106.1>
in volumes. The product is purified by centrifugal chromatography of the CLC-3 type (silica gel) with the mixture of solvents, obtaining 23.1 mg of the purified product.
From the elementary analysis, the IR spectrum, the UV spectrum and the melting point, it is confirmed that the product
.is the compound of the invention.
Elementary analysis:
<EMI ID = 107.1>
Melting point: 117 - 120 [deg.] C
IR spectrum: Table XII
EXAMPLE 11
Preparation of 3-glycolyl-1,2,3,4,6,11-hexahydro-3,5 ,,
<EMI ID = 108.1>
6'-trideoxy-a-L-lyxo-hexapyranoside
<EMI ID = 109.1>
noside, then 600 mg of a 10% solution of triethylamine in DMF are added dropwise to the solution. The mixture is stirred at room temperature for 15 minutes and 200 mg of a 10% solution of triethylamine in DMF is added, before the mixture is stirred at room temperature for 20 hours. During the reaction, a white precipitate is formed. After the reaction, 300 ml of distilled water are added
and 400 ml of ethyl acetate and the pH of the mixture is adjusted to
3 with concentrated H 2 SO 4, then the mixture is stirred and the ethyl acetate phase is separated.
The aqueous phase is mixed with 400 ml of ethyl acetate to continue the extraction of the product. The operation is repeated again and the ethyl acetate phases are collected.
(1200 ml) to wash them twice with distilled water.
The solution has a pH of 6.5 - 7. The ethyl acetate phase is dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated to dryness in a water bath at 40 [deg.] C obtaining 108, 7 mg of dark red crystals.
The crystals are dissolved in 20 ml of a mixture of solvents composed of ethyl acetate, cyclohexane and ethyl alcohol in the proportions of 45:45:20 by volume. mes and they are purified by chromatography on a column of silica gel, obtaining a yield of 45.1 mg.
The product is analyzed by chromatography on a thin layer of silica thaw with the same mixture of solvents, obtaining a single spot of Rf: 0.4. Elementary analysis,
the melting point and the IR spectrum are as follows:
Elementary analysis:
<EMI ID = 110.1>
Melting point: 130 - 140 [deg.] C
IR spectrum: Table XIII
EXAMPLE 12:
Preparation of 3-glycoloyl-1,2,3,4,6,11-hexahydro-3,5,
<EMI ID = 111.1>
6'-trideoxy-a-L-lyxo-hexapyranoside
in 5 ml of DMF, 100 mg of 3-glycoloyl-1,2 is dissolved,
<EMI ID = 112.1>
noside, then 600 mg of a 10% solution of triethylamine in DMF are added dropwise to the solution. The mixture is stirred at room temperature for 15 minutes, then 200 mg of a solution of 3- monobromoacetate is added thereto.
<EMI ID = 113.1>
continues stirring the mixture for 15 minutes before adding 200 mg of a 10% triethylamine solution in DMF and stirring the mixture at room temperature for 24 hours. After the reaction, 300 ml of distilled water and 400 ml of ethyl acetate are added, and the pH of the mixture is brought to about 3 with concentrated HCl, then the mixture is stirred. The ethyl acetate phase is separated and the aqueous phase is extracted twice with 40 ml of ethyl acetate, then the ethyl acetate phases (1200 ml) are combined and washed twice with , 300. ml of distilled water. The ethyl acetate phase is separated and dried over anhydrous sodium sulfate before being evaporated to dryness under pressure. <EMI ID = 114.1> reduced to 40 [deg.] C by obtaining 120 mg of dark red crystals.
The crude crystals are purified by chromatography on a column of silica gel with a mixture of solvents composed of ethyl acetate, cyclohexane and ethyl alcohol in the proportions of 45:45:20 by volume, obtaining a yield 55 mg of the product.
The elementary analysis and the IR spectrum are as follows Elementary analysis:
<EMI ID = 115.1>
IR spectrum: Table XIV
EXAMPLE 13:
<EMI ID = 116.1>
In 5 ml of DMF, 100 mg of 3-glycoloyl-1,2, 3,4,6,11-hexahydro-3,5,12-trihydroxy-10-methoxy-6,11-dioxo- are dissolved.
<EMI ID = 117.1>
noside, then 600 mg of a 10% solution of trimethylamine in DMF is added dropwise. The mixture is stirred at room temperature for 15 minutes, then added
220 mg of a solution of 3-propionyloxy1,3,5 monobromoacetate, (10) -oestratrién-17S-yl at 50% in DMF and then the mixture is stirred at room temperature for 16 hours. After the reaction, 300 ml of distilled water are added and the pH of the mixture is adjusted to approximately 3. The product is extracted three times with 400 ml of ethyl acetate. The ethyl acetate phase (1200 ml) is washed twice with distilled water. The ethyl acetate phase is separated and dried over anhydrous sodium sulfate before drying at 40 [deg.] C under reduced pressure to obtain 130 mg of dark red crystals.
The crude crystals are purified by chromatography on a column of silica gel with a mixture of solvents composed of ethyl acetate, cyclohexane and ethyl alcohol in the proportions of 45:45:20 by volume in. Obtaining 50 mg of the product.
The elementary analysis it IR spectrum are as follows.
Elementary analysis:
<EMI ID = 118.1>
IR spectrum: Table XV
The following compound is also prepared by the same procedure, except that the corresponding starting compound is used:
<EMI ID = 119.1>
L-lyxo-hexapyranoside.
EXAMPLE 14:
Preparation of 3-acetyl-1,2,3,4,6,11-hexahydro-3,5,12-
<EMI ID = 120.1>
trideoxy-a-L-lyxo-hexapyranoside
In 2 g of DMSO, 50 mg (88.65 pmol) of 3acetyl-1,2,3,4,6,11-hexahydro-3,5,12-trihydroxy-10-methoxy- are dissolved.
<EMI ID = 121.1>
-hexapyranoside, and 98.7 mg (99.67 pmol) of a 10.02% triethylamine solution in DMF are added. The mixture is stirred for 1 hour while cooling with ice, then 400 mg (101.52 pmol) of a solution of 17,98% monobromoacetate of the estradiol derivative corresponding to DMF is added. Stir the mixture for 30 minutes and divide 400 mg (396.05 vmole) of a triethylamine solution to
10.02% in DMF in 4 portions which are added respectively every 10 minutes. The mixture is stirred for 1 hour, cooled with ice before stirring again at room temperature. After 1 hour, precipitation begins. The mixture is stirred at room temperature for 48 hours.
After the reaction, a water-insoluble substance is separated by filtration through a G-4 filter and 200 ml of water are added to the filtrate before adjusting the <EMI ID = 122.1>
duit with 150 ml of ethyl acetate and. wash the extracted solution twice with 100 ml of water before drying it over anhydrous sodium sulfate. The extracted solution is evaporated to dryness under reduced pressure, obtaining 54.1 mg of a dark red solid product.
The product is dissolved in 4 ml of a mixture of solvents composed of cyclohexane, ethyl acetate and ethanol in the proportions of 45:45:10 by volume. The product is purified by centrifugal chromatography of the CLC-3 type (silica gel) with the mixture of solvents, obtaining 18.9 mg of the purified product.
From the elementary analysis, the IR spectrum and the melting point, it is confirmed that the product is the compound of the invention.
Elementary analysis:
<EMI ID = 123.1>
Melting point: 145 - 150 [deg.] C
IR spectrum: Table XVI
The following compounds are also prepared by the same procedure, except that the corresponding starting compounds are used.
3-acetyl-1,3,3,4,6,11-hexahydro-3,5-12-trihydroxy-10-methoxy-
<EMI ID = 124.1>
-hexapyranoside; and 3-acetyl-1,2,3,4,6,11-hexahydro-3,5,12-trihydroxy-10-methoxy6,11-dioxo-1-naphtacenyl-3 '- [3-benzoyloxy-1,3 , 5 (10) -oestra-
<EMI ID = 125.1>
hexapyranoside.
... EXAMPLE 15:
<EMI ID = 126.1>
no-s-triazine
5 g of 3-benzoyloxy-1,3,5 are dissolved in 50 ml of THF
<EMI ID = 127.1>
the mixture at -5 [deg.] C, then gradually add 10 ml of a
<EMI ID = 128.1>
To the resulting solution is gradually added a solution containing 1.36 g of 2,4,6-triethyleneimino-s-triazine in 5 ml of THF. And the mixture is stirred at -5 [deg. ] C for 2 hours then at 18 [deg.] C in a water bath for 4 hours. After the reaction, a 0.01N aqueous NaOH solution is gradually added to the reaction mixture to gradually decompose
BF3 and to bring the pH of the solution to 8-9. The reaction mixture is concentrated and dried under reduced pressure in a water bath, obtaining a yellow solid. The solid product is repeatedly extracted with a mixture of solvents composed of 200 ml of ethyl acetate and 100 ml of water. We repeat the operation. The reaction mixture is concentrated and dried under reduced pressure in a water bath to remove the ethyl acetate, obtaining 6.0 g of crude crystals.
The product is purified to remove the 1,3-benzoyloxy-1,3,5
<EMI ID = 129.1>
on a column (gel = silica) with a developer consisting of a mixture of solvents composed of water and npropanol in the proportion of 35:65 by volume.
Elementary analysis is carried out, the IR spectrum and the molecular weight are measured. The results are as follows.
Molecular weight: 645: method of raising the boiling point (nitrobenzene) (theoretical PM 637).
Elementary analysis:
<EMI ID = 130.1>
IR spectrum: The absorption band is found at 3080 cm
(C-H valence vibration of the aziridinyl ring).
<EMI ID = 131.1>
tion.
The following compounds are also prepared by the same procedure, except that the corresponding starting compounds are used.
2,3-bis (ethyleneimino) -5- (3-benzoyloxy-1,3,5 (10) -oestratrién-
<EMI ID = 132.1>
ethyl) amino-1,4-benzoquinone.
EXAMPLE 16:
COMPOSITION
Formula 1 :
<EMI ID = 133.1>
The components are mixed, reduced to powder and subjected to compression to obtain a tablet having a diameter of 10 mm.
Formula 2:
<EMI ID = 134.1>
The components are kneaded and extruded through a pelleting machine in the form of granules which are dried and sieved to keep the particles having a particle size in the range of 0.70 - 1.65 mm, to prepare granules for oral administration.
Formula 3
A capsule available on the market is filled with the granules of Formula 2, to prepare capsules of
<EMI ID = 135.1>
Formula 4:
<EMI ID = 136.1>
The components are mixed by heating and sterilized to prepare a solution for injection.
TEST 1:
Acute toxicities and antitumor activities (in vivo)
(1) Acute toxicity (LD50)
<EMI ID = 137.1>
ICR-JCL (5 weeks old) in groups to be raised in a transparent multiple cage, and each drug is dissolved in olive oil which is administered to said mice by intraperitoneal (ip) injection routes, d oral administration (po) and subcutaneous injection (sc) in a single dose and then the corresponding values are determined.
<EMI ID = 138.1>
coxon after 7 days. The results obtained are listed in Table XVIII.
(2) Fixation function on cells sensitive to
-estrogens
Function for fixing the active ingredients on cells sensitive to estrogens.
The binding function of the active ingredient is tested on tumor cells by the method described in Biochemical Experiment text Hormone (I) (Nippon Seikagaku) (Tokyo Kagakudojin page 217-252, April 25, 1977).
Tritium-labeled estradiol is incubated
<EMI ID = 139.1>
add the sample thus prepared to the test system to measure the amount of <3> Free H-estradiol which has been replaced by the added estradiol. The results are presented by the <3> H-oestradiol.de fixation (%) in the case of addition of 0.10 or 100 nM of the sample.
The lowest value indicates the highest fixation in estrogen sensitive cells.
(3) Anti-tumor test (in vivo)
Fragments of human breast cancer cells with a steroid hormone receptor are implanted subcutaneously under the armpit of mice (BALB / C-nu / nu) (5 weeks old) to form solid tumors . After the establishment of solid tumors, each dispersion or solution of the active ingredient is administered in olive oil, orally or intraperitoneal injection alternately every other day for ten times or daily for 20 times. 25 days after the initial administration, the tumors are excised. The effectiveness of the inhibition of tumor proliferation is measured according to (A) each average weight of excised tumors on 10 mice (to which the active ingredient has been administered) and (D) each average weight of excised tumor on 10 control mice.
The tumor inhibitory effect (%). (1 - � x 100
Tests (1), (2), (3) are carried out for different active ingredients. The results are shown in Table XVIII.
In the acute toxicity tests, the toxicity of the antitumor derivative of the invention turns out to be remarkably lower than that of the corresponding antitumor agent itself. The toxicity of the antitumor derivative having an acylated estradiol group instead of a hydroxyl group in position 3, is moreover less than the corresponding toxicity.
IR SPECTRUM
TABLE II
<EMI ID = 140.1>
TABLE III
<EMI ID = 141.1>
TABLE IV
<EMI ID = 142.1>
TABLE V
<EMI ID = 143.1>
TABLE VI
<EMI ID = 144.1>
TABLE VII
<EMI ID = 145.1>
TABLE VIII
<EMI ID = 146.1>
TABLE IX
<EMI ID = 147.1>
PAINTINGS
<EMI ID = 148.1>
TABLE XI
<EMI ID = 149.1>
TABLE XII
<EMI ID = 150.1>
TABLE XIII
<EMI ID = 151.1>
TABLE XIV
<EMI ID = 152.1>
TABLE XV
<EMI ID = 153.1>
TABLE XVI
<EMI ID = 154.1>
TABLE XVII
<EMI ID = 155.1>
Test
N [deg.] Compounds used in the tests in Table 17
<EMI ID = 156.1>
deoxy-a-L-lyxo-hexapyranoside;
5 3-acetyl-1,2,3,4,6,11-hexahydro-3,5,12-trihydroxy-10-
<EMI ID = 157.1>
[5-fluoro-2,4-dioxo-pyrimidin-l-yl] acetate
5-fluoro, 2,4-dioxo-pyrimidine;
<EMI ID = 158.1>
mat
TABLE XVIII
<EMI ID = 159.1>
TABLE XVIII (continued)
<EMI ID = 160.1>
J
Test
N [deg.] Compounds used in the tests of Table XVIII 1 2- [N '- (2-chloroethyl-N'-nitrosouréido] -2-deoxy-D-
glucopyranoside;
<EMI ID = 161.1>
12 4-amino-N -methylpteroyl glutamate;
<EMI ID = 162.1>
soxy-a-L-lyxo-hexapyranoside;
Test
N [deg.] Compounds used in the tests in Table XVIII / continued
16 3-glycoloyl-1,2,3,4,6,11-hexahydro-3,5,12-trihydroxy-
10-methoxy-6,11-dioxo-1-naphthacenyl-3 '- [3-propionyloxy-
<EMI ID = 163.1>
3 ', 6'-trideoxy-a-L-lyxo-hexapyranoside.
18 3-acetyl-1,2,3,4,6,11-hexahydro-3,5,12-trihydroxy-10-
methoxy-6,11-dioxo-1-naphthacenyl-3'-amino-2 ', 3', 6'-trideoxy-a-L-lyxo-hexapyranoside;
19 3-acetyl-1,2,3,4,6,11-hexahydro-3,5,12-trihydroxy-10-
methoxy-6,11-dioxo-1-naphthacenyl-3 '- [3-hydroxy-1,3,5-
<EMI ID = 164.1>
tratrién-17S-oxycarbonylmethyloxyethyl) amino-s-triazine
21 p- [bis (2-chloroethyl) amino] -L-phenyl alanine;
<EMI ID = 165.1>
The typical anti-tumor steroid hormone derivatives of the invention are the new compounds having the following formulas.
<EMI ID = 166.1>
wherein R represents a hydrogen atom or an acyl group and n is an integer from 1 to 3.
<EMI ID = 167.1>
<EMI ID = 168.1>
in which R represents a hydrogen atom or a group
<EMI ID = 169.1>
<EMI ID = 170.1>
in which R represents a hydrogen atom or an acyl group.
<EMI ID = 171.1>
in which R represents a hydrogen atom or an acyl group.
The acyl group is preferably one of the following:
<EMI ID = 172.1>
<EMI ID = 173.1>
CLAIMS
1. Process for preparing a steroid hormone derivative
antitumor which selectively attacks tumor cells
or cancerous, said process being characterized by the fact
that we react group X of a steroid hormone derivative corresponding to the formula
ST-O-C-R'X
.1 \ 0
in which ST represents a steroid fragment having the
hydrocarbon skeleton of a cyclophenathrene such as gonane,
oestrane or androstane, which is linked to the carboxyl group by esterification of the OH group carried by the ring D and R 'represented
<EMI ID = 174.1>
a halogen atom, an amino group, a hydroxyl group, a
carboxyl group or a salt thereof, with a modified or unmodified reactive group of an antitumor medicament so as to form a group linked via
-0-, -COO-, -CONH-, -NH- or -N-