<EMI ID=1.1>
<EMI ID=2.1>
<EMI ID=3.1>
hêpatopathies aiguës et chroniques et des séquelles d'intoxications.
De plus, l'invention a pour objet les compositions pharmaceutiques dotées d'activités mucolytique et antibronchospasmodique,
<EMI ID=4.1>
quelles d'intoxications. Malheureusement, la 2-mercaptopropionylglycine (II) présente divers inconvénients, dus à sa faible stabilité. Le plus notable de ces inconvénients consiste en l'odeur désagréable que les formulations du composé (II) dégagent après une période de conservation même relativement brève. Cette caractéristique entraîne évidemment des effets psychologiques négatifs sur le patient et se répercute, .en outre, désavantageusement sur les propriétés thérapeutiques des formulations. Cette instabilité de la 2-mercaptopropionylglycine (II) s'accentue, évidemment, avec l'augmentation de la température, telle qu'elle peut se produire dans des pays chauds où simplement tropicaux.
On a maintenant trouvé,'dans le cadre de l'invention, que la
<EMI ID=5.1>
dessus, possède des caractéristiques-pharmacologiques optimales qui la rendent au moins tout autant adaptée à la thérapie des hépatopathies aiguës et chroniques ainsi que des séquelles d'intoxication, <EMI ID=6.1>
L'absence d'odeur et de saveur caractéristique du composé de l'invention lui assure, en outre, une tolérance clinique optimale au niveau gastrique dans les diverses conditions d'expérience.
On a, en outre, trouvé d'une manière surprenante, dans le cadre de l'invention, que la 2-(2-thénoylthio)-propionylglycine est aussi dotée d'une intéressante activité mucolytique et anti-
<EMI ID=7.1>
conditions infectieuses aiguës de l'appareil respiratoire avec hypersécrétions bronchiques, des syndromes mucoviscidotiques et analogues.
Conformément au procédé de l'invention, on obtient le composé CI) en faisant réagir le chlorure de l'acide thiophëne-2carboxylique avec la 2-thiopropionylglycine, en présence d'une base. On peut effectuer la réaction en milieu aqueux, en employant comme base le carbonate d'un métal alcalin, en particulier le carbonate de sodium ou de potassium. On illustre l'invention par l'exemple de préparation suivant, nullement destiné à limiter ladite invention, dans son cadre et son esprit.
EXEMPLE
Dans 1600 ml d'eau, on introduit 278 g de 2-mercaptopropionylglycine. A la suspension, on ajoute avec précaution, en agitant, 653 g de carbonate de potassium. A la solution résultante, toujours sous agitation, on ajoute goutte à goutte 240 gde chlorure de l'acide thiophène-2-carboxylique.
On maintient la température à 20[deg.]C.
On agite jusqu'à disparition des gouttes du chlorure d'acyle
<EMI ID=8.1>
Puis, on acidifie avec précaution à pH 3 avec de l'acidesulfurique à 10 %.
On obtient un précipité cristallisé que, peu après, on récol-
<EMI ID=9.1>
40[deg.]C. Par recristallisation à partir d'acétonitrile, on obtient
<EMI ID=10.1>
Le composé (I) est soluble dans une solution saturée de bicarbonate de sodium et, en outre,_ dans le chloroforme, tandis qu'il est faiblement soluble dans les autres solvants organiques. Ledit composé est inodore et pratiquement insipide.
<EMI ID=11.1>
né ci-dessus, une notable activité hépato-protectrice qui, d'après les essais effectués (indiqués ci-après), s'avère toujours nettement supérieure à celle de la 2-mercaptopropionylglycine, utilisée comme médicament de référence. De même, les valeurs toxicologiques s'avèrent pleinement satisfaisantes, comme le montre la description qui suit.
ESSAI DE TOXICITE
a) Toxicité aiguë chez la souris
On a utilisé des souris albinos, souche Swiss, poids 20.- 23 g, réparties en groupes de 5 sujets, placés à jeun 16 heures avant l'expérience, et recevant de l'eau à volonté. La 2-(2-thënoylthio)propionylglycine (1) et la 2-mercaptopropionylglycine (II) ont été administrées par voies orale et intraveineuse, l'administration portant sur des doses unitaires successivement croissantes, fournies à intervalle constant.
<EMI ID=12.1>
vée, à la dose de 2500 mg/kg la substance de référence a entraîné une mortalité de 20 % des animaux (Voir Tableau I).
<EMI ID=13.1>
substances. Même dans ce cas, on n'a pas constaté de décès avec le composé (I), tandis que le médicament de référence a présenté une mortalité de 30 % à 1250 mg/kg (Voir Tableau II).
b) Toxicité aiguë chez le rat
<EMI ID=14.1>
120 - 135 g, répartis en groupes de 5 animaux chacun. Aux animaux, placés à jeun 16 heures avant le traitement, on a administré, par voies orale et intramusculaire, la 2-(2-thénoylthio)-propionylglycine
<EMI ID=15.1>
Chez le rat également, on n'a pas observé de décès jusqu'à la plus haute dose du composé (I), tandis qu'avec le médicament de référence, on a enregistré, à la dose la plus élevée, une mortalité de 20 % (Voir tableau III).
<EMI ID=16.1>
1630 mg/kg (Voir Tableau IV).
TABLEAU I
<EMI ID=17.1>
<EMI ID=18.1>
TABLEAU II
<EMI ID=19.1>
<EMI ID=20.1>
<EMI ID=21.1>
<EMI ID=22.1>
TABLEAU IV
<EMI ID=23.1>
<EMI ID=24.1>
c) Toxicité chronique chez le rat et chez le chien
Rat : On a utilisé 80 rate albinos (Sprague-Dawley - pesant 100 g), répartis en 4 groupes 1) témoin (carboxyméthylcellulose),
2) 2-(2-thênoylthio)-propionylglycine (200 mg/kg/i.m.).
Les traitements ont été effectués quotidiennement, à raison de 6 fois par semaine et pendant 16 semaines.
Résultats :
Mortalité dans la norme
Etat général optimal
Tolérance optimale
Comportement normal chez les animaux traités
et chez les témoins Croissance corporelle Supérieure par rapport aux témoins Paramètres hématologiques
et hématochimiques comme chez les témoins
Poids des organes comme chez les témoins
Sur le chien, les résultats ont été également optimaux.
ACTIVITE PROTECTRICE DANS L'INTOXICATION PAR LE TETRACHLORURE DECARBONE
On a utilisé 50 rats mâles (Sprague-Dawley - pesant 180-200 g) répartis en 5 groupes : un groupe ne recevant aucun traitement, tandis que les 4 groupes restants ont été intoxiqués pendant 7 jours consécutifs avec 0,5 ml/mg de CC14 par voie sous-cutanée, Simultanément, les animaux ont reçu par voie i.m. la 2-(2-thénoylthio)- propionylglycine (200 et 300 mg/kg) et la 2-thiopropionylglycine
(300 mg/kg).
Résultats :
Aussi bien le composé soumis à l'examen que la 2-thiopropionylglycine sont en mesure de s'opposer à l'augmentation de
<EMI ID=25.1>
En outre, les deux médicaments ont exercé un effet favorable sur les lipides du foie (la teneur en graisses s'avère réduite) et sur les protéines (dont la teneur est supérieure de façon significative par rapport aux valeurs relevées chez les animaux recevant le seul traitement intoxicant).
A doses égales, le composé (I) a révélé, par rapport à la 2-mercaptopropionylglycine, une efficacité statistiquement significative dans l'inhibition de l'augmentation pondérale du foie et dans la réduction des taux hépatiques de graisses.
ACTIVITE PROTECTRICE DANS L'INTOXICATION PAR LE BROMOBENZENE
On a utilisé 50 rats mâles (Sprague-Dawley - pesant 180-200 g) , répartis en 5 groupes de 10 animaux auxquels on a administré par voie orale les substances suivantes :
1) gomme arabique à 5 % en eau de source
2) gomme arabique à 5 % en eau de source
<EMI ID=26.1>
5) 2-mercaptopropionylglycine (300 mg/kg) .
Après 7 jours, on a administré aux animaux des groupes 2 3 - 4 - 5, du bromobenzène (150 mg/rat) par voie sous-cutanée, tandis que le groupe restant (témoin) a reçu un volume égal de solution physiologique.
<EMI ID=27.1>
Après 7 jours supplémentaires, on a administré à 5 des animaux * de chaque groupe, 25 mg/kg de Nembutal/e.p. et on a compté la durée du sommeil.
Aux 5 animaux restants de chaque groupe, on a injecte par voie intra-veineuse 50 mg de bromophtaléine. Après 30 minutes, on les a sacrifiés et on a déterminé, dans le sang, la bromophtaléine présente et la transaminase glutamique-pyruvique.
Résultats :
Le médicament soumis à l'examen s'avère en mesure de limiter le dommage hépatique produit par le bromobenzène avec une diminution consëcutive, statistiquement significative, du temps de sommeil.
Le traitement par le médicament a détermine une diminution significative des concentrations sériques de SGPT, notablement
<EMI ID=28.1>
glycine que chez les témoins intoxiqués.
Sur ces paramètres, la 2-thiopropionylglycine a présenté un effet hëpato-protecteur inférieur à celui du composé soumis à l'examen et non statistiquement significatif.
ACTION PROTECTRICE CONTRE LES COMPOSES MERCURIELS "IN VIVO"'
On a utilisé 40 souris mâles (Swiss - pesant en moyenne 22 g), répartis en 4 groupes :
1) 20 mg/kg/i.p. de chlorure mercurique
2) 20 mg/kg/i.p. de chlorure mercurique + 200 mg/kg/e.p. de
composé (I)
3) 20 mg/kg/i.p. de chlorure mercurique +'300 mg/kg/e.p. de
composé (I)
4) 20 mg/kg/i.p. de chlorure mercurique + 300 mg/kg/e.p. de
<EMI ID=29.1>
Le nombre de décès a été relevé toutes les heures pendant les 5 premières heures et ensuite après 24 heures.
Résultats :
Tous les animaux traités par le chlorure mercurique seulement sont morts dans les 24 heures consécutives au traitement. Chez les souris traitées, on a obtenu les résultats suivants :
200 mg/kg/e.p. de composé (I) : 10 % de décès
300 mg/kg/e.p. de 2-thiopropionylglycine : 10 % de décès
300 mg/kg/e.p. de composé (I) : Aucun décès
<EMI ID=30.1>
Comme on l'a mentionné initialement ci-dessus, la 2-(2thénoylthio)-propionylglycine s'avère notablement plus stable que le 2-thiopropionylglycine correspondante.
Les essais de stabilité ont été conduits selon la méthode non isothermique de Rogers, convenablement complétée par l'évaluation des caractéristiques organoleptiques, du point de fusion, de la variation de poids et du titre spectrophotomëtrique. On a effectué lesdits essais, sur chacune des deux substances, sur une série d'échantillons d'un poids de 100 milligrammes, additionnés pour les essais à l'état humide de 1 ml d'eau distillée.. Dans le cas du composé (I), on a ainsi obtenu une suspension blanche, tandis que la 2-thiopropionylglycine a donné lieu à la formation
<EMI ID=31.1>
laspect, aux caractéristiques organoleptiques et aux variations de poids. On a maintenu les échantillons en thermostat à températures
<EMI ID=32.1>
tenant compte du point de fusion le plus bas des deux substances soumises aux essais (2-thiopropionylglycine, p.f. 93-95[deg.]C). La température, programmée selon la formule de Rogers, s'est avérée de
<EMI ID=33.1>
la quatrième heure, de 69[deg.]C à la fin de la cinquième heure, de
73[deg.]C à la fin de la sixième heure, de 77[deg.]C à la fin de la septième
<EMI ID=34.1>
heure.
Toujours dans le tableau V, les échantillons de 1 à. 5 concernent, pour chacun des deux composés, la substance sèche, tandis que les échantillons 6-10 se réfèrent à la solution ou à la suspension aqueuse obtenue comme indiqué ci-dessus.
On a déterminé le poids final des divers échantillons au moment de leur retrait du thermostat : une heure et demi pour les échantillons N[deg.] 1 ; 3 heures pour les échantillons N[deg.] 2 ; 5 heures et quart pour les échantillons ? 3 ; 8 heures pour les échantillons N[deg.] 4 et 5. Dans le cas des échantillons traités à l'état humide, on a déterminé le point final seulement sur les échantillons ? 10,
<EMI ID=35.1>
<EMI ID=36.1>
<EMI ID=37.1>
<EMI ID=38.1>
<EMI ID=39.1>
<EMI ID=40.1>
dans les conditions précitées, et sur les échantillons N[deg.] 10, après chauffage et évaporation à siccité comme décrit ci-dessus, on a déterminé le point de fusion en tube capillaire, dans des conditions identiques. Les résultats sont répertoriés dans le tableau VI :
tandis que le composé (I) ne présente pas de variation, la 2-thiopropionylglycine (II) subit un net abaissement du point de fusion dans le cas de l'échantillon à l'état humide.
TABLEAU VI
POINT DE FUSION
<EMI ID=41.1>
La variation du titre spectrophotomêtrique des deux composés en fonction des temps de chauffage se prête également à des remarques significatives.
On tiendra compte de la 2-thiopropionylglycine possède une extinction maximale E = 0,329 à 232 nm, tandis que le composé (I) présente une valeur E = 0,438 à 292 nm.
Les échantillons 1 - 9 des deux substances, avec les temps
de chauffage précisés ci-dessus, présentent les variations d'extinc-
<EMI ID=42.1>
tableau VII : la stabilité supérieure du composé selon l'invention 'est manifeste.
TABLEAU VII
EXTINCTIONS ET TITRE SPECTROPHOTOMETRIQUE
<EMI ID=43.1>
Les données du tableau VII ont été traitées selon la méthode de Rogers, permettant de déduire .les valeurs des énergies d'activation des réactions de décomposition à l'état sec et à l'état humide, les constantes de vitesse spécifique et la durée de validité. Les résultats sont répertoriés dans le tableau VIII.
<EMI ID=44.1>
ENERGIES D'ACTIVATION, VITESSES SPECIFIQUES
ET DUREES DE VALIDITE
<EMI ID=45.1>
Egalement, d'après le tableau VIII, la nette supériorité de stabilité de la 2-(2-thénoylthio)-propionylglycine (1) est évidente.
Pour l'emploi thérapeutique comme hépato-protecteur, le composé (I) peut être formulé sous forme de capsules à 100 �- 400 mg, et de sirops à concentrations propres à fournir des doses unitaires correspondantes.
La posologie journalière prévue est de 2 à 4 capsules à
250 mg, d'une ou de plusieurs ampoules de 250 mg, par voie intramusculaire ou intra-veineuse, de 2 à 3 cuillerées de sirop, à raison d'environ 250 mg par cuillerée.
ACTIVITE MUCOLYTIQUE ET ANTIBRONCHOSPASMODIQUE
a) Bronchite expérimentale chez le rat
L'évaluation de l'activité mucolytique du composé (I) a été effectuée sur le rat chez lequel on a produit une souffrance au
<EMI ID=46.1>
utilisé 40 rats de race Sprague-Dawley, mâles d'un poids de 320 g
à 370 g, répartis en 4 groupes de 10 sujets, soumis aux traitements suivants :
Groupe 1 : Traitement intoxicant (S02) .
<EMI ID=47.1>
par voie orale.
<EMI ID=48.1>
par aérosol.
<EMI ID=49.1>
par voie sous-cutanée.
Dans chaque cas, la dose de composé (I) était de 50 mg/kg.
Pour l'intoxication, les animaux ont été exposés à un flux
<EMI ID=50.1>
Le traitement intoxicant a été effectué pendant 15 jours en soumettant les rats à 2 heures par jour d'inhalation de S02 par périodes de 15 minutes. Simultanément, dans les groupes prévus à cet effet, on a effectué le traitement protecteur par le composé
(I). Les animaux ont été_sacrifiés le jour succédant à l'inhalation finale.
On a prélevé les poumons en même temps que la trachée, on les a fixés dans la formaline à 10 % et soumis à un examen macroscopique ; puis, on les a introduits dans le même fixateur pendant 24 heures et, ensuite, pendant une heure, dans de l'alcool absolu.
On a ensuite mis en évidence l'arbre bronchique avec le Bleu Alcian, puis on a effectué une coloration successive avec le réactif de Schiff, pour mettre en évidence les mucopolysaccharides.
On a assigné à chaque poumon les notations arbitraires suivantes :
1) Examen macroscopique :
0 = poumon normal ;
1 = poumon rouge ;
2 = peu de points hémorragiques
3 = nombreux points hémorragiques ;
4 = quelques taches hémorragiques ;
5 = vastes taches hémorragiques.
2) Visualisation de l'arbre bronchique par le Bleu Alcian
0 = coloration uniforme ;
1 = coloration quasi uniforme ;
2 = coloration irrégulière ;
3 = coloration tout à fait irrégulière.
3) Altérations broncho-pulmonaires à l'examen microscopique :
0 = aucune altération ;
1 = légères altérations ;
2 = altérations discrètes ;
3 = altérations prononcées.
Les résultats sont répertoriés dans les tableaux suivants.
TABLEAU IX EXAMEN MACROSCOPIQUE
<EMI ID=51.1>
E = Evaluation : moyenne � erreur type
S = significative par rapport aux témoins
h.s. = hautement significative
TABLEAU X
VISUALISATION DE L'ARBRE BRONCHIQUE
<EMI ID=52.1>
N.B.: pour les symboles, voir le tableau IX
TABLEAU XI
EXAMEN MICROSCOPIQUE
<EMI ID=53.1>
N.B.: pour les symboles, voir le tableau IX
Les résultats obtenus et leur haute significativité permettent d'affirmer que le composé (I) exerce une action protectrice spécifique dans les essais de bronchite expérimentale induite chez
<EMI ID=54.1> b) Bronchite expérimentale par l'acide citrique chez le cobaye
On a utilisé 24 cobayes tachetés, de souche Morini, d'un poids d'environ 450 g, répartis en 4 groupes de 6 animaux chacun, soumis aux traitements suivants :
Groupe 1 : traitement intoxicant par l'acide citrique, Croupe 2 : intoxication par l'acide citrique puis traitement par
<EMI ID=55.1>
Groupe 4 : intoxication par l'acide citrique puis traitement par
le composé (I) par voie rectale.
<EMI ID=56.1>
On a effectué l'intoxication en plaçant les animaux dans des cages en plexiglas, étanches, contenant une solution d'acide citrique à 7,5 %, pendant 15 minutes par jour, pendant 6 jours de la semaine, à raison de 4 semaines. Simultanément au traitement intoxicant, on a procédé, dans les groupes prévus à cet effet, le traitement par le composé (I).
On a sacrifié les animaux le jour suivant l'application finale et on a soumis les poumons aux mêmes traitements et aux mêmes évaluations, avec les mêmes notations, que ceux déjà décrits cidessus à propos du rat.
Les résultats sont répertoriés dans les tableaux suivants.
TABLEAU XII
EXAMEN MACROSCOPIQUE
<EMI ID=57.1>
N.B.: Pour les symboles, voir le tableau IX
TABLEAU XIII
VISUALISATION DE L'ARBRE BRONCHIQUE
<EMI ID=58.1>
N.B.: Pour les symboles, voir le tableau IX <EMI ID=59.1>
<EMI ID=60.1>
N.B.: Pour les symboles, voir le tableau IX
Les résultats obtenus permettent d'affirmer que le composé
(I) exerce une action protectrice distincte dans le cas de la bronchite expérimentale induite chez le cobaye par inhalation
<EMI ID=61.1>
c) Spasme bronchique par aêrol d'histamine chez le cobaye
On a utilisé 30 cobayes tachetés de souche Morini, mâles, d'un poids de 400 à 500 g, répartis en 5 lots de 6 animaux. On a placé les animaux un à un dans une cage de plexiglas parfaitement étanche dans laquelle on a nébulisé une solution aqueuse à 0,1 � de chlorhydrate d'histamine. On a déterminé le temps de résistance au spasme depuis le moment d'introduction dans la cage jusqu'au
<EMI ID=62.1>
après 24 heures et après une heure à partir des traitements suivants :
Groupe 1 : témoins sans aucun traitement
Groupe 2 : traitement par le composé (I) par voie orale
Groupe 3 traitement par le compose (I) par aérosol
Groupe 4 traitement par le composé (I) par voie intrapéritonéale Groupe 5 : traitement par le composé (I) par voie rectale.
Dans chaque cas, la dose était de 50 mg/kg.
Les résultats obtenus sont répertoriés dans les tableaux suivants.
Les résultats obtenus permettent d'affirmer que le composé
(I) exerce une action antibronchospasmodique notable par toutes les voies d'administration adoptées.
L'issue favorable de l'expérimentation pharmacologique, conjointement avec la valeur extrêmement basse de la toxicité du composé (I), ont permis de passer à l'expérimentation chez l'homme.
Les résultats obtenus peuvent être résumés dans les termes suivants.
<EMI ID=63.1>
<EMI ID=64.1>
<EMI ID=65.1>
<EMI ID=66.1>
<EMI ID=67.1>
d) Essais cliniques
Le médicament a été essayé, pour son action, mucolytique sur trente patients âgés (âge minimal 57 ans, maximal 87 ans, âge moyen
72 ans). Vingt-six d'entre eux ont présenté une nette amélioration par rapport à leur état clinique de départ, après avoir reçu quotidiennement, pendant six jours consécutifs, deux suppositoires par jour contenant chacun 0,36 g du composé (I). L'amélioration a été évaluée sur la base des paramètres suivants :
- diminution de la quantité journalière d'expectoration ;
- diminution de la viscosité de l'expectoration ;
- augmentation de l'indice de Tiffeneau ;
- amélioration de la vitesse d'érythro-sédimentation.
A un groupe de vingt patients de même âge moyen, on a administré, à titre de préférence, un médicament connu, à savoir la Nacétylcystéine. Bien que les résultats obtenus avec la N-acétylcystéine soient, dans l'ensemble, comparables à ceux qui sont obtenus avec le composé (I) en ce qui concerne la diminution de l'expectoration, on a observé que le composé (I) est nettement supérieur dans sa rapidité d'action.
La supériorité du composé (I) par rapport à la N-acëtyl- ' cystéine se révèle, en outre, dans l'administration sous forme d'aérosol : on n'observe, en effet, pour le composé (I) aucun accès de toux comme c'est, au contraire, fréquemment le cas chez les patients soumis à un aérosol de N-acétylcystéine.
e) Essais cliniques (en pédiatrie)
Au cours d'une expérimentation visant à établir l'efficacité mucolytique du composé (I) dans les bronchopneumopathies de l'âge pédiatrique, on a traité cinquante patients d'âge compris entre
3 mois et 9 années (en moyenne 26 mois) en présence d'un état phlogistique infectieux aigu, de l'appareil respiratoire avec hypersécrétion bronchique ou, dans certains cas, d'un syndrome mucovisc idotique .
Les résultats sont nettement positifs pour 45 patients (90 %), avec normalisation des paramètres suivants :
- toux
- dyspnée <EMI ID=68.1>
On a, en outre, mis en évidence une diminution moyenne de la valeur viscosimétrique du mucus de 292,4 � 92,1 g/Hg
à 155,4 � 61,3 g/Hg statistiquement P < 0,05. f ) Formulations pharmaceutiques
Ampoules pour aérosol ou pour voie intramusculaire
Chaque ampoule contient :
- 2-(2-thénoylthio)-propionylglycine, sel de sodium 0,360 g
- mêtabisulfite de sodium 10 mg
- eau distillée apyrogène 3 ml Sirop
- 2-(2-thénoylthio)-propionylglycine, sel de sodium 3,60 g
- sorbitol 70 % 15 g
- saccharose 50 g
- éthanol ' 1 ml
- p-hydroxybenzoates 0,2 mg
- essences aromatisantes 0,5 ml
- eau distillée, quantité suffisante pour 100
- saccharine 0,20 g Suppositoires pour adultes
- 2-(2-thénoylthio)-propionylglycine, sel de sodium 0,360 g
- métabisulfite de sodium 0,020 g
- excipients, q.s.p. un suppositoire
Suppositoires pédiatriques
- 2-(2-thénoylthio)-propionylglycine, sel de sodium 0,180 g
- métabisulfite de sodium 0,010 g
- excipient, q.s.p. un suppositoire
Suppositoires pour nourrissons
- 2-(2-thénoylthio)-propionylglycine, sel de sodium 0,090 g
- métabisulfite de sodium 0,005 g
- excipient, q.s.p. un suppositoire
Sachets monodoses de 5 g
<EMI ID=69.1>
- 2-(2-thénoylthio)-propionylglycine, sel de sodium 3,6.0 g
- saccharine 0,20 g
- arome d'orange 0,5 g
- lyophilisat d'orange 10 g
- saccharose, q.s.p. 100 g
REVENDICATIONS
1. A titre de produit industriel nouveau, le composé 2-(2-
<EMI ID=70.1>
<EMI ID=71.1>
ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables.
2. Procédé pour la préparation de la 2-(2-thénoylthio)propionylglycine, caractérisé par le fait que l'on fait réagir la 2-thiopropionylglycine avec le chlorure de l'acide thiophène-2carboxylique en présence d'une base.
<EMI ID = 1.1>
<EMI ID = 2.1>
<EMI ID = 3.1>
Acute and chronic hepatopathies and sequelae of intoxication.
In addition, the invention relates to pharmaceutical compositions endowed with mucolytic and antibronchospasmodic activities,
<EMI ID = 4.1>
what poisonings. Unfortunately, 2-mercaptopropionylglycine (II) has various drawbacks, due to its poor stability. The most notable of these drawbacks is the unpleasant odor which the formulations of compound (II) give off after even a relatively short storage period. This characteristic obviously leads to negative psychological effects on the patient and, moreover, disadvantageously affects the therapeutic properties of the formulations. This instability of 2-mercaptopropionylglycine (II) is obviously accentuated with the increase in temperature, such as can occur in hot or simply tropical countries.
It has now been found, 'in the context of the invention, that the
<EMI ID = 5.1>
above, has optimal pharmacological characteristics which make it at least equally suitable for the therapy of acute and chronic liver disease as well as the sequelae of intoxication, <EMI ID = 6.1>
The absence of odor and flavor characteristic of the compound of the invention furthermore ensures optimal clinical tolerance at the gastric level under the various experimental conditions.
It has, moreover, surprisingly been found, in the context of the invention, that 2- (2-thenoylthio) -propionylglycine is also endowed with an interesting mucolytic and anti- activity.
<EMI ID = 7.1>
acute infectious conditions of the respiratory system with bronchial hypersecretions, cystic fibrosis syndromes and the like.
In accordance with the process of the invention, the compound CI) is obtained by reacting the chloride of thiophene-2carboxylic acid with 2-thiopropionylglycine, in the presence of a base. The reaction can be carried out in an aqueous medium, using as base the carbonate of an alkali metal, in particular sodium or potassium carbonate. The invention is illustrated by the following example of preparation, in no way intended to limit said invention, within its scope and spirit.
EXAMPLE
278 g of 2-mercaptopropionylglycine are introduced into 1600 ml of water. To the suspension is carefully added, with stirring, 653 g of potassium carbonate. 240 g of thiophene-2-carboxylic acid chloride are added dropwise to the resulting solution, still under stirring.
The temperature is maintained at 20 [deg.] C.
Stirred until the drops of acyl chloride disappear.
<EMI ID = 8.1>
Then, it is carefully acidified to pH 3 with 10% sulfuric acid.
A crystalline precipitate is obtained which, shortly afterwards, is collected.
<EMI ID = 9.1>
40 [deg.] C. By recrystallization from acetonitrile, one obtains
<EMI ID = 10.1>
Compound (I) is soluble in saturated sodium bicarbonate solution and, further, in chloroform, while it is poorly soluble in other organic solvents. Said compound is odorless and practically tasteless.
<EMI ID = 11.1>
born above, a notable hepato-protective activity which, according to the tests carried out (indicated below), always proves to be clearly superior to that of 2-mercaptopropionylglycine, used as reference drug. Likewise, the toxicological values are found to be fully satisfactory, as the following description shows.
TOXICITY TEST
a) Acute toxicity in mice
Albino mice, Swiss strain, weight 20-23 g, were used, divided into groups of 5 subjects, placed on an empty stomach 16 hours before the experiment, and given ad libitum water. 2- (2-thenoylthio) propionylglycine (1) and 2-mercaptopropionylglycine (II) were administered orally and intravenously, the administration being in successively increasing unit doses, provided at constant intervals.
<EMI ID = 12.1>
At a dose of 2500 mg / kg the reference substance resulted in 20% mortality of the animals (see Table I).
<EMI ID = 13.1>
substances. Even so, no death was observed with compound (I), while the reference drug showed 30% mortality at 1250 mg / kg (See Table II).
b) Acute toxicity in rats
<EMI ID = 14.1>
120 - 135 g, divided into groups of 5 animals each. Animals, fasted 16 hours before treatment, were administered, orally and intramuscularly, 2- (2-thenoylthio) -propionylglycine
<EMI ID = 15.1>
In rats, too, no death was observed up to the highest dose of compound (I), while with the reference drug, a mortality of 20% was observed at the highest dose. % (See Table III).
<EMI ID = 16.1>
1630 mg / kg (See Table IV).
TABLE I
<EMI ID = 17.1>
<EMI ID = 18.1>
TABLE II
<EMI ID = 19.1>
<EMI ID = 20.1>
<EMI ID = 21.1>
<EMI ID = 22.1>
TABLE IV
<EMI ID = 23.1>
<EMI ID = 24.1>
c) Chronic toxicity in rats and dogs
Rat: We used 80 albino spleen (Sprague-Dawley - weighing 100 g), divided into 4 groups 1) control (carboxymethylcellulose),
2) 2- (2-thenoylthio) -propionylglycine (200 mg / kg / i.m.).
The treatments were carried out daily, 6 times a week and for 16 weeks.
Results:
Mortality within the norm
Optimal general condition
Optimal tolerance
Normal behavior in treated animals
and in controls Higher body growth compared to controls Hematological parameters
and hematochemicals as in the controls
Organs weight as in witnesses
In the dog, the results were also optimal.
PROTECTIVE ACTIVITY IN DECARBON TETRACHLORIDE POISONING
50 male rats (Sprague-Dawley - weighing 180-200 g) were used divided into 5 groups: one group receiving no treatment, while the remaining 4 groups were intoxicated for 7 consecutive days with 0.5 ml / mg of CC14 subcutaneously, Simultaneously, animals received im 2- (2-thenoylthio) - propionylglycine (200 and 300 mg / kg) and 2-thiopropionylglycine
(300 mg / kg).
Results:
Both the compound under examination and 2-thiopropionylglycine are able to counteract the increase in
<EMI ID = 25.1>
In addition, the two drugs had a favorable effect on liver lipids (the fat content was found to be reduced) and on proteins (the content of which was significantly higher compared to the values observed in animals receiving the only intoxicating treatment).
At equal doses, compound (I) has shown, compared with 2-mercaptopropionylglycine, statistically significant efficacy in inhibiting increased liver weight and in reducing hepatic fat levels.
PROTECTIVE ACTIVITY IN BROMOBENZENE POISONING
50 male rats (Sprague-Dawley - weighing 180-200 g) were used, divided into 5 groups of 10 animals to which the following substances were orally administered:
1) gum arabic at 5% in spring water
2) gum arabic at 5% in spring water
<EMI ID = 26.1>
5) 2-mercaptopropionylglycine (300 mg / kg).
After 7 days, animals in groups 2 3 - 4 - 5 were administered bromobenzene (150 mg / rat) subcutaneously, while the remaining group (control) received an equal volume of physiological solution.
<EMI ID = 27.1>
After an additional 7 days, 5 of the animals * in each group were administered 25 mg / kg of Nembutal / e.p. and we counted the duration of sleep.
The remaining 5 animals in each group were injected intravenously with 50 mg of bromophthalein. After 30 minutes, they were sacrificed and the bromophthalein present and the glutamic-pyruvic transaminase were determined in the blood.
Results:
The drug under examination was found to be able to limit the hepatic damage produced by bromobenzene with a consequent statistically significant decrease in sleep time.
Treatment with the drug resulted in a significant decrease in serum SGPT concentrations, notably
<EMI ID = 28.1>
glycine than in intoxicated controls.
On these parameters, 2-thiopropionylglycine exhibited a hepato-protective effect lower than that of the compound under examination and not statistically significant.
PROTECTIVE ACTION AGAINST MERCURIAL COMPOUNDS "IN VIVO"
40 male mice (Swiss - weighing on average 22 g) were used, divided into 4 groups:
1) 20 mg / kg / i.p. mercuric chloride
2) 20 mg / kg / i.p. of mercuric chloride + 200 mg / kg / e.p. of
compound (I)
3) 20 mg / kg / i.p. of mercuric chloride + '300 mg / kg / e.p. of
compound (I)
4) 20 mg / kg / i.p. of mercuric chloride + 300 mg / kg / e.p. of
<EMI ID = 29.1>
The number of deaths was recorded every hour for the first 5 hours and then after 24 hours.
Results:
All animals treated with mercuric chloride only died within 24 hours of treatment. In the treated mice, the following results were obtained:
200 mg / kg / e.p. of compound (I): 10% death
300 mg / kg / e.p. 2-thiopropionylglycine: 10% deaths
300 mg / kg / e.p. of compound (I): No deaths
<EMI ID = 30.1>
As initially mentioned above, 2- (2thénoylthio) -propionylglycine is found to be significantly more stable than the corresponding 2-thiopropionylglycine.
The stability tests were carried out according to the non-isothermal method of Rogers, suitably supplemented by the evaluation of the organoleptic characteristics, the melting point, the variation in weight and the spectrophotometric titer. Said tests were carried out, on each of the two substances, on a series of samples weighing 100 milligrams, added for the wet tests of 1 ml of distilled water. In the case of the compound ( I), a white suspension was thus obtained, while 2-thiopropionylglycine gave rise to the formation
<EMI ID = 31.1>
appearance, organoleptic characteristics and variations in weight. The samples were kept thermostatically at temperatures
<EMI ID = 32.1>
taking into account the lower melting point of the two substances tested (2-thiopropionylglycine, mp 93-95 [deg.] C). The temperature, programmed according to the Rogers formula, was found to be
<EMI ID = 33.1>
the fourth hour, from 69 [deg.] C to the end of the fifth hour, from
73 [deg.] C at the end of the sixth hour, 77 [deg.] C at the end of the seventh
<EMI ID = 34.1>
hour.
Still in Table V, samples from 1 to. 5 relate, for each of the two compounds, to the dry substance, while samples 6-10 refer to the aqueous solution or suspension obtained as indicated above.
The final weight of the various samples was determined when they were removed from the thermostat: one and a half hours for the N [deg.] 1 samples; 3 hours for samples N [deg.] 2; Quarter past five for samples? 3; 8 hours for samples N [deg.] 4 and 5. For wet-treated samples, end point was determined only on samples? 10,
<EMI ID = 35.1>
<EMI ID = 36.1>
<EMI ID = 37.1>
<EMI ID = 38.1>
<EMI ID = 39.1>
<EMI ID = 40.1>
under the aforementioned conditions, and on the samples N [deg.] 10, after heating and evaporation to dryness as described above, the melting point was determined in a capillary tube, under identical conditions. The results are listed in Table VI:
while compound (I) shows no variation, 2-thiopropionylglycine (II) undergoes a marked lowering of the melting point in the case of the wet sample.
TABLE VI
FUSION POINT
<EMI ID = 41.1>
The variation in the spectrophotometric titer of the two compounds as a function of the heating times also lends itself to significant remarks.
We take into account the 2-thiopropionylglycine has a maximum extinction E = 0.329 at 232 nm, while the compound (I) has an E value = 0.438 at 292 nm.
Samples 1 - 9 of the two substances, with the times
heating values specified above, show the variations in
<EMI ID = 42.1>
Table VII: the superior stability of the compound according to the invention is evident.
TABLE VII
EXTINCTIONS AND SPECTROPHOTOMETRIC TITLE
<EMI ID = 43.1>
The data in Table VII were processed according to the Rogers method, making it possible to deduce the values of the activation energies of the decomposition reactions in the dry and in the wet state, the specific rate constants and the duration of the decomposition. validity. The results are listed in Table VIII.
<EMI ID = 44.1>
ACTIVATION ENERGIES, SPECIFIC SPEEDS
AND DURATION OF VALIDITY
<EMI ID = 45.1>
Also, from Table VIII, the clear superiority in stability of 2- (2-thenoylthio) -propionylglycine (1) is evident.
For therapeutic use as a hepato-protector, the compound (I) may be formulated in the form of capsules at 100–400 mg, and syrups at concentrations capable of providing corresponding unit doses.
The expected daily dosage is 2 to 4 capsules
250 mg, of one or more 250 mg ampoules, intramuscularly or intravenously, from 2 to 3 tablespoons of syrup, at a rate of approximately 250 mg per tablespoon.
MUCOLYTIC AND ANTIBRONCHOSPASMODIC ACTIVITY
a) Experimental bronchitis in rats
The evaluation of the mucolytic activity of the compound (I) was carried out on the rat in which pain was produced at the
<EMI ID = 46.1>
used 40 Sprague-Dawley rats, male weighing 320 g
at 370 g, divided into 4 groups of 10 subjects, subjected to the following treatments:
Group 1: Intoxicating treatment (S02).
<EMI ID = 47.1>
orally.
<EMI ID = 48.1>
by aerosol.
<EMI ID = 49.1>
subcutaneously.
In each case, the dose of compound (I) was 50 mg / kg.
For intoxication, the animals were exposed to a flux
<EMI ID = 50.1>
The intoxicating treatment was carried out for 15 days by subjecting the rats to 2 hours per day of SO2 inhalation in periods of 15 minutes. Simultaneously, in the groups provided for this purpose, the protective treatment with the compound was carried out.
(I). The animals were sacrificed on the day following the final inhalation.
The lungs were removed along with the trachea, fixed in 10% formalin and subjected to gross examination; then, they were introduced into the same fixer for 24 hours and, then, for one hour, in absolute alcohol.
The bronchial tree was then demonstrated with Alcian Blue, then a successive staining was carried out with Schiff's reagent, in order to demonstrate the mucopolysaccharides.
Each lung was assigned the following arbitrary notations:
1) Macroscopic examination:
0 = normal lung;
1 = red lung;
2 = few bleeding points
3 = many bleeding points;
4 = some bleeding spots;
5 = large bleeding spots.
2) Visualization of the bronchial tree by Alcian Blue
0 = uniform coloring;
1 = almost uniform coloring;
2 = irregular coloring;
3 = completely irregular coloring.
3) Broncho-pulmonary alterations on microscopic examination:
0 = no alteration;
1 = slight alterations;
2 = discrete alterations;
3 = pronounced alterations.
The results are listed in the following tables.
TABLE IX MACROSCOPIC EXAMINATION
<EMI ID = 51.1>
E = Rating: average � standard error
S = significant compared to controls
h.s. = highly significant
PAINTINGS
VISUALIZATION OF THE BRONCHIC TREE
<EMI ID = 52.1>
N.B .: for symbols, see table IX
TABLE XI
MICROSCOPIC EXAMINATION
<EMI ID = 53.1>
N.B .: for symbols, see table IX
The results obtained and their high significance make it possible to affirm that the compound (I) exerts a specific protective action in the tests of experimental bronchitis induced in
<EMI ID = 54.1> b) Experimental citric acid bronchitis in guinea pigs
24 spotted guinea pigs, of Morini strain, weighing approximately 450 g, were used, divided into 4 groups of 6 animals each, subjected to the following treatments:
Group 1: intoxicating treatment with citric acid, Croup 2: intoxication with citric acid then treatment with
<EMI ID = 55.1>
Group 4: citric acid poisoning followed by treatment with
the compound (I) rectally.
<EMI ID = 56.1>
The poisoning was carried out by placing the animals in waterproof plexiglass cages containing 7.5% citric acid solution for 15 minutes per day for 6 days of the week for 4 weeks. Simultaneously with the intoxicating treatment, the treatment with compound (I) was carried out in the groups provided for this purpose.
The animals were sacrificed the day after the final application and the lungs were subjected to the same treatments and evaluations, with the same notations, as those already described above for the rat.
The results are listed in the following tables.
TABLE XII
MACROSCOPIC EXAMINATION
<EMI ID = 57.1>
N.B .: For symbols, see table IX
TABLE XIII
VISUALIZATION OF THE BRONCHIC TREE
<EMI ID = 58.1>
N.B .: For symbols, see table IX <EMI ID = 59.1>
<EMI ID = 60.1>
N.B .: For symbols, see table IX
The results obtained confirm that the compound
(I) exerts a distinct protective action in the case of experimental bronchitis induced in guinea pigs by inhalation
<EMI ID = 61.1>
c) Bronchial spasm due to histamine aerol in guinea pigs
30 speckled guinea pigs of Morini strain, male, weighing 400 to 500 g, were used, divided into 5 groups of 6 animals. The animals were placed one by one in a perfectly sealed Plexiglas cage in which a 0.1% aqueous solution was nebulized. of histamine hydrochloride. The time of resistance to spasm was determined from the moment of introduction into the cage until
<EMI ID = 62.1>
after 24 hours and after one hour from the following treatments:
Group 1: controls without any treatment
Group 2: treatment with compound (I) by the oral route
Group 3 treatment with compound (I) by aerosol
Group 4 treatment with compound (I) by intraperitoneal route Group 5: treatment with compound (I) by rectal route.
In each case the dose was 50 mg / kg.
The results obtained are listed in the following tables.
The results obtained confirm that the compound
(I) exerts a notable antibronchospasmodic action by all the routes of administration adopted.
The favorable outcome of the pharmacological experiment, together with the extremely low toxicity value of compound (I), made it possible to proceed to the experiment in humans.
The results obtained can be summarized in the following terms.
<EMI ID = 63.1>
<EMI ID = 64.1>
<EMI ID = 65.1>
<EMI ID = 66.1>
<EMI ID = 67.1>
d) Clinical trials
The drug has been tried, for its mucolytic action on thirty elderly patients (minimum age 57 years, maximum 87 years, average age
72 years old). Twenty-six of them showed a marked improvement compared to their starting clinical state, after having received daily, for six consecutive days, two suppositories per day each containing 0.36 g of compound (I). The improvement was assessed on the basis of the following parameters:
- decrease in the daily quantity of sputum;
- decrease in the viscosity of the sputum;
- increase in the Tiffeneau index;
- improvement of the rate of erythro-sedimentation.
To a group of twenty patients of the same average age, a known drug, namely Nacetylcysteine, was preferably administered. Although the results obtained with N-acetylcysteine are, on the whole, comparable to those obtained with compound (I) with regard to the decrease in sputum, it has been observed that compound (I) is clearly superior in its speed of action.
The superiority of compound (I) over N-acetylcysteine is revealed, moreover, in the administration in aerosol form: in fact, no access of compound (I) is observed. cough, as is, on the contrary, frequently the case in patients subjected to an aerosol of N-acetylcysteine.
e) Clinical trials (in pediatrics)
In an experiment aimed at establishing the mucolytic efficacy of compound (I) in bronchopneumopathies of pediatric age, fifty patients of age between
3 months and 9 years (on average 26 months) in the presence of an acute infectious phlogistic state, of the respiratory system with bronchial hypersecretion or, in certain cases, of an idotic cystic fibrosis syndrome.
The results are clearly positive for 45 patients (90%), with normalization of the following parameters:
- cough
- dyspnea <EMI ID = 68.1>
In addition, an average decrease in the viscosimetric value of mucus of 292.4% was demonstrated. 92.1 g / Hg
at 155.4 � 61.3 g / Hg statistically P <0.05. f) Pharmaceutical formulations
Ampoules for aerosol or intramuscular use
Each ampoule contains:
- 2- (2-thenoylthio) -propionylglycine, sodium salt 0.360 g
- sodium metabisulphite 10 mg
- non-pyrogenic distilled water 3 ml Syrup
- 2- (2-thenoylthio) -propionylglycine, sodium salt 3.60 g
- sorbitol 70% 15 g
- sucrose 50 g
- ethanol '1 ml
- p-hydroxybenzoates 0.2 mg
- flavoring essences 0.5 ml
- distilled water, sufficient quantity for 100
- saccharin 0.20 g Suppositories for adults
- 2- (2-thenoylthio) -propionylglycine, sodium salt 0.360 g
- sodium metabisulphite 0.020 g
- excipients, q.s.p. a suppository
Pediatric suppositories
- 2- (2-thenoylthio) -propionylglycine, sodium salt 0.180 g
- sodium metabisulphite 0.010 g
- excipient, q.s.p. a suppository
Suppositories for infants
- 2- (2-thenoylthio) -propionylglycine, sodium salt 0.090 g
- sodium metabisulphite 0.005 g
- excipient, q.s.p. a suppository
5 g single-dose sachets
<EMI ID = 69.1>
- 2- (2-thenoylthio) -propionylglycine, sodium salt 3.6.0 g
- saccharin 0.20 g
- orange flavor 0.5 g
- orange lyophilisate 10 g
- sucrose, q.s.p. 100 g
CLAIMS
1. As a new industrial product, the compound 2- (2-
<EMI ID = 70.1>
<EMI ID = 71.1>
or one of its pharmaceutically acceptable salts.
2. Process for the preparation of 2- (2-thenoylthio) propionylglycine, characterized in that the 2-thiopropionylglycine is reacted with thiophene-2carboxylic acid chloride in the presence of a base.