Procédé de préparation de l'acide 3-(2-
<EMI ID=1.1>
Priorité de deux demandes de brevet déposées aux Etats-Unis d'Amérique le 8 avril 1977 sous le n[deg.] 785 811 et le
<EMI ID=2.1> La présente invention est relative à l'acide
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hept-2-ène-2-carboxylique répondant à la formule de structure générale suivante:
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ainsi qu'à ses sels pharmaceutiquement acceptables, composés qui constituent des antibiotiques de valeur.
La présente invention concerne également des procédés de préparation du composé I et de ses sels, des compositions pharmaceutiques qui contiennent les substances précitées et des procédés de traitement caractérisés en ce que l'on administre le composé I ou l'un de ses sels lorsque l'on souhaite obtenir un effet antibiotique.
L'acide 3-(2-aminoéthylthio)-6-éthyl-7-oxo-
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commodément de l'antibiotique thiénamycine (II) par élimination du groupe 6-hydroxyle:
<EMI ID=6.1>
La thiénamycine est décrite et revendiquée
dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n[deg.] 3 950 357 accordé le 13 avril 1976.
La thiénamycine et tous ses isomères (sous forme pure et sous forme de mélanges) peuvent également s'obtenir par la synthèse totale. Tous ces isomères de la thiénamycine sont disponibles comme matières de départ pour la préparation des composés conformes à l'invention.
La présente invention concerne aussi des composés intermédiaires (III-IV) convenant pour la préparation du composé I:
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<EMI ID=8.1>
formules dans lesquelles R et R' représentent des atomes d'hydrogène ou des groupes protecteurs faciles à éliminer. R et R' seront définis de manière plus détaillée dans la suite du présent mémoire.
Il existe un besoin continu de nouveaux antibiotiques. Un antibiotique donné ne possède malheureusement pas d'efficacité statique parce que l'utilisation continue à grande échelle de cet antibiotique engendre sélectivement des souches d'organismes pathogènes qui lui résistent. Au surplus, les antibiotiques connus souffrent du désavantage de n'être seulement efficaces que contre certains types de microorganismes. Par conséquent, la recherche en vue de découvrir de nouveaux antibiotiques
se poursuit.
La présente invention a par conséquent pour objet un nouvel antibiotique ainsi que ses sels pharmaceutiquement acceptables, que l'on peut utiliser en thérapie animale et humaine et dans des systèmes inanimés. Ces antibiotiques sont actifs contre une large gamme d'organismes pathogènes dont on peut citer en exemples des bactéries Gram-positives, telles que S. aureus, Strep. pyogenes et B. subtilis, et des bactéries Gram-
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Serratia et Klebsiella.
La présente invention a aussi pour objet des procédés chimiques de préparation de ces antibiotiques et de leurs sels atoxiques pharmaceutiquement acceptables, des compositions pharmaceutiques qui contiennent au moins l'un des antibiotiques en question et des procédés de traitement caractérisés en-ce que l'on administre les antibiotiques et les compositions en question lorsque l'obtention d'un effet antibiotique est souhaitable.
En général, on prépare les composés conformes à la présente invention selon le schéma suivant:
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Dans les formules ci-dessus, le radical
OR du composé de la structure IIb est aisément éliminé par traitement par une base de façon à former une ènelactame III qui, par réduction, engendre le composé I conforme à la présente invention. Le radical OR est typiquement un radical sulfate ou sulfonate.
De manière plus spécifique, on prépare commo-
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la présente invention selon le schéma réactionnel suivant:
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<EMI ID=13.1>
où M représente un atome d'hydrogène ou n'importe quel cation non critique, tel qu'un métal alcalin ou une base
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radical aryle, tel que le groupe méthyle ou toluyle et R représente un groupe bloquant (ou protégeant) la fonc-
<EMI ID=15.1>
groupe bloquant la fonction N,facile à éliminer.
Des groupes bloquant la fonction carboxyle préférés,
R, sont les radicaux benzyle et benzyle substitués dans le noyau:
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X représentant un groupe nitro, alkoxy inférieur, tel
que méthoxy et analogues; on préfère cependart le radical benzyle. Comme groupes R' bloquant la fonction N convena- bles, on peut.citer les radicaux bromo-t-butoxycarbonyle, chloro-t-butoxycarbonyle, bromoéthoxycarbonyla, benzyloxycarbonyle, p-nitrobenzyloxycarbonyle et analogues. Un groupe bloquant la fonction N tout particulièrement pré- férés est le radical bromo-t-butoxycarbonyle.
En se référant au schéma réactionnel susmention- né, une thiénamine protégée de la manière appropriée
<EMI ID=17.1>
<EMI ID=18.1>
dans un solvant, tel que le chlorure de méthylène, le tétrahydrofuranne, le dioxanne, le chloroforme et analogues, par un agent de sulfonation, tel que le chlorure'de méthanesulfonyle, le chlorure de toluènesulfonyle et analogues, en présence d'une base,telle que l'un des
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pyridine, NaH à une température qui varie de -15 à
25[deg.]C pendant une durée de 1 à 10 heures. Les esters du
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-0 e M � ) conviennent également comme matières de départ et possèdent la formule de structure suivante:
<EMI ID=21.1>
dans laquelle M représente un atome d'hydrogène, un cation
<EMI ID=22.1>
dent les significations précitées.
Quant à la réaction impliquant les composés intermédiaires IIb, il faut noter que les symboles R
et R' peuvent également représenter des atomes d'hydrogène, outre les groupes protecteurs susmentionnés. De tels composés intermédiaires IIb se préparent en débloquant la forme protégée du composé IIb par mise en oeuvre de procédés classiques qui seront décrits dans
la suite du présent mémoire.
Il faut noter que les esters du type sulfate des composés intermédiaires IIb (R " est OH) peuvent également s'obtenir sous la forme de produits naturels.
En se référant de nouveau au schéma réactionnel
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à partir du composé IIb en traitant ce composé II par une base, telle que l'un des composés suivants NaHCO-,
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5-ène et analogues, dans un solvant, tel que le méthanol, le tétrahydrofuranne, le dioxanne et analogues, à une température qui varie de -20 à 25[deg.]C, pendant une durée qui varie de 1 à 20 heures.
On obtient le composé 6-éthylique intermédiaire IV à partir du composé III par réduction, de préférence, en traitant le composé III dans un solvant, tel que l'éthanol, l'acétate d'éthyle, le dioxanne, le benzène et analogues, en présence d'un catalyseur d'hydrogéna-
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l'hydrogène sous une pression de 1 à 4 atmosphères, à une température de 0 à 25[deg.]C pendant une durée variant de 0,5 à 5 heures. On peut débloquer le composé intermédiaire IV par mise en oeuvre du procédé d'hydrogénation décrit ci-dessus en vue d'obtenir le composé I ou bien, selon l'identité des groupes protecteurs R " et R, on peut réaliser le déblocage par mise en oeuvre de procédés séparés, oomme par hydrolyse ou hydrogénation dans des conditions différentes. Il faut encore faire remarquer que le déblocage peut s'opérer antérieurement dans le schéma sur le composé intermédiaire IIb. Le procédé de déblocage peut également être effectué sous forme de réaction à étape unique au cours de la conversion du composé III en composé IV. On peut réaliser un déblocage séparé IV-*-I par mise en oeuvre de n'importe lequel de toute
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hydrogénation. De préférence, le groupe R bloquant la fonction carboxyle est enlevé par hydrogénation dans un solvant, tel qu'un alcanol inférieur, par exemple l'éthanol, en présence d'un catalyseur d'hydrogénation, tel que le palladium, le platine ou des oxydes de ces métaux,
sous des pressions d'hydrogène de 1 à 40 atmosphères,
à une température de 0 à 50[deg.]C et pendant une durée qui varie de 1 à 10 heures.
Le groupe R' protégeant la fonction N peut également être éliminé par hydrogénation, mais lorsque l'on utilise le radical bromo-t-butoxy carbonyle préféré, on réalise commodément le déblocage en chauffant une solution du composé IV ou du composé IV à fonction carboxyle dé-bloquée, dans un solvant, tel que l'éthanol, l'isopropanol, l'eau et analogues, à une température de 25 à
80[deg.]C, pendant une durée qui varie de 10 minutes à 3 heures.
Le produit conforme à la présente invention (I) engendre toute une série de sels pharmaceutiquement acceptables avec des bases inorganiques et organiques; ces sels comprennent, par exemple, les sels de métaux qui proviennent de dicarbonates, carbonates ou hydroxydes de métaux alcalins ou de métaux alcalino-terreux et des sels provenant d'aminés primaires, secondaires ou tertiaires, comme des monoalkylamines, de dialkylamines, des trialkylamines, des alcanol inférieur amines, des dialcanol inférieur amines, des alkylène inférieur diamines, des N,N-diaralkyl alkylène inférieur diamines, des aralkylamines, des amino alcanols inférieurs, des N,N-di-alkyl inférieur amino alcanols inférieurs, des acides amino-, polyamino- et guanidino-alcanoiques inférieurs et des amines hétérocycliques contenant de l'azote.
A titre d'exemples illustratifs des sels en question, on peut citer les sels dérivés de l'hydroxyde de sodium, du carbonate de sodium, du bicarbonate de sodium, du carbonate de potassium, de l'hydroxyde depotassium, du carbonate de calcium, des amines suivantes: triméthylamine, triéthylamine, pipéridine, morpholine, quinine, lysine,
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benzylamine, éthylènediamine, N,N'-dibenzyléthylène- diamine, diéthanolamine, pipérazine, diméthylaminoéthanol, 2-amino-2-méthyl-1-propanol, théophylline, N-méthylglu- camine et analogues. Des sels de l'amine primaire des composés I avec des acides organiques et inorganiques pharmaceutiquement acceptables entrent également dans le cadre de l'invention. Ces sels comprennent notamment les suivants: méthanesulfonate, 2-naphtalènesulfonate, pamoate, 3-phényl propionate, triméthylacétate, t-butyl acétate, p-toluènesulfonate, maléate, lactate, cyclamate, fumarate, tartrate, oxalate, benzoate, acétate, succinate, citrate, glutamate, chlorhydrate, bromhydrate, sulfate, phosphoate, n-acétylglycinate, benzènesulfonate, hexa-
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et analogues et peuvent se préparer selon les procédés bien connus.
Les sels peuvent être des mono-sels, comme le sel monosodique obtenu en traitant un équivalent d'hydroxyde de sodium par un équivalent du produit (1)
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sels peuvent s'obtenir en traitant un équivalent d'une base possédant un cation bivalent, comme l'hydroxyde
de calcium, par un équivalent du produit (I). Les sels conformes à la présente invention sont des dérivés atoxiques pharmaceutiquement acceptables que l'on peut utiliser à titre d'ingrédient actif dans des compositions pharmaceutiques qui se présentent sous forme de doses unitaires appropriées. On peut aussi les combiner à d'autres médicaments de façon à obtenir des compositions à large spectre d'activité.
Les composés conformes à la présente inven-
<EMI ID=30.1>
des substances antimicrobiennes de grande valeur qui
sont actives contre divers organismes Gram-positifs
et Gram-négatifs. Ainsi, l'acide libre et, plus particulièrement les sels de ce dernier, comme les sels . d'amines et de métaux, en particulier les sels de métaux alcalins et de métaux alcaline-terreux, constituent des bactéricides intéressants et peuvent s'employer pour éliminer des organismes pathogènes sensibles de l'équipement dentaire et médical, pour séparer des microorganismes et pour le traitement thérapeutique d'êtres humains et d'animaux. Dans ce dernier cas, on peut utiliser des sels pharmaceutiquement acceptables avec des bases inorganiques et organiques, tels que les sels bien connus des spécialistes et utilisés pour l'administration de pénicillines et de céphalosporines. Par exempt on peut utiliser, à cette fin, des sels tels que les sels de métaux alcalins et de métaux alcalino-terreux et dessels d'aminés primaires, secondaires et tertiaires.
On peut combiner ces sels à des véhicules solides et liquides <EMI ID=31.1>
des doses unitaires convenables, comme des pillules, des comprimés, des capsules, suppositoires, des sirops,
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biotiques de valeur dont l'activité s'exerce contre diverses bactéries Gram-positives et Gram-négatives et, par conséquent, on peut les utiliser en médecine humaine et vétérinaire. Les composés conformes à la présente invention peuvent, par conséquent, s'utiliser comme substances antibactériennes pour le traitement d'infections provoquées par des bactéries Gram-positives et Gram-négatives, par exemple, on peut les utiliser contre les organismes suivants: Staphylococcus aureus, Escherichia
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Salmonella typhosa, Pseudomonas et Bacterium proteus.
Les composés antibactériens conformes à l'invention peuvent également s'utiliser sous forme d'additifs d'aliments pour animaux, pour la conservation d'aliments et comme désinfectants. Par exemple, on peut les utiliser sous la forme de compositions aqueuses, en concentrations variant de 0,1 à 100 parties d'antibiotique par million de parties de solution, afin de détruire et d'inhibter la croissance de bactéries nuisibles sur l'équipement médical et dentaire et on peut aussi les utiliser comme bactéricides destinés à des applications
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croissance de bactéries nuisibles.
On peut utiliser les produits conformes à la présente invention, seuls ou en combinaisons, à titre d'ingrédients actifs, dans l'une quelconque de toute
une série de préparations pharmaceutiques. Ces antibiotiques et leurs sels correspondants peuvent s'utiliser. sous la forme de capsules ou sous la forme de comprimés,
de poudres ou de solutions liquides ou sous la forme de suspensions ou d'élixirs. On peut les administrer par la voie orale, intraveineuse ou intramusculaire.
Les compositions conformes à l'invention se présentent, de préférence, sous une forme convenant à l'absorption par le tractus gastro-intestinal. On peut présenter les comprimés et les capsules à administrer
par la voie orale sous la forme de doses unitaires et
ces comprimés et capsules peuvent contenir des excipients, comme des agents liants, par exemple du sirop, de la
gomme d'accacia, de la gélatine, du sorbitol, de la
gomme adragante ou de la polyvinyl-pyrrolidone;
des charges,-par exemple, le lactose, le saccharose, l'amidon de mais, le phosphate de calcium, le sorbitol
ou la glycine; des lubrifiants, par exemple le stéarate de magnésium, le talc, le polyéthylène glycol, la silice; des agents de désintégration, par exemple la fécule de pomme de terre ou des agents mouillants acceptables,
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comme le lauryl sulfate de sodium. On peut enrober les
<EMI ID=37.1>
<EMI ID=38.1>
<EMI ID=39.1> d'émulsions, de solutions, de suspensions aqueuses
ou huileuses, etc., ou bien elles peuvent se présenter
sous la forme d'un produit sec à reconstituer avec de
l'eau ou avec tout autre véhicule approprié avant l'emploi. De telles préparations liquides peuvent contenir
des additifs classiques, comme des agents de mise en suspension, par exemple du sirop de sorbitol, de la
méthyl cellulose, du sirop de glucose/saccharose,
de la gélatine, de l'hydroxyéthylcellulose, de la carboxyméthyl cellulose, du gel de stéarate d'aluminium,
ou des huiles comestibles hydrogénées, par exemple
l'huile d'amande, l'huile de coprah fractionnée, des
esters huileux, le propylène glycol ou l'alcool éthylique; des conservateurs, par exemple les p-hydroxybenzoates de méthyle ou de propyle ou l'acide sorbique; les suppositoires contiendront des bases pour suppositoire classiques, par exemple le beurre de cacao ou tout autre glyceride convenable.
Les compositions destinées à l'injection peuvent se présenter sous la forme de doses unitaires dans
des ampoules ou dans des récipients qui en contiennent
des doses multiples en même temps qu'un conservateur. Les compositions en question peuvent se présenter sous la forme de suspensions, de solutions ou d'émulsions dans l'huile ou dans des véhicules aqueux et peuvent contenir des
agents de mise en composition, comme des agents de mise
en suspension, des agents stabilisants et/ou dispersants.
L'ingrédient actif peut aussi se présenter sous la forme d'une poudre destinée à être reconstituée avec un véhicule approprié, par exemple de l'eau apyrogène stérile, avant l'emploi.
On peut également préparer les compositions
sous des formes convenant à l'absorption à travers les muqueuses du nez et de la gorge ou à travers les tissus bronchiques et elles peuvent commodément prendre la forme de poudres, de produits à inhaler ou de sprays liquides, de pastilles, de compositions de badigeonnage de la gorge, etc. Pour le traitement des yeux ou des oreilles, les préparations peuvent se présenter sous la forme de capsules individuelles, qu'elles soient liquides ou seni-solides, ou bien on peut les utiliser sous la forme de gouttes, etc. On peut réaliser der applications topiques en incorporant les composés conformes à l'invention à des bases hydrophobes ou hydrophiles, comme des onguents, des crèmes, des lotions, des produits à badigeonner, des poudres des pommades, etc.
De même, outre un excir'ent, les compositions conformes à l'invention peuvent également contenir d'autres ingrédients, comme des stabilisants, des liants, des antioxydants, des conservateurs, des lubrifiants,
des agents de mise en suspension, des agents conférant
de la viscosité ou des agents aromatisants et analogues.
Au surplus, on peut également incorporer aux compositions conformes à l'invention, d'autres ingrédients actifs de façon à obtenir un spectre d'activité antibiotique plus large.
Pour l'usage en médecine vétérinaire, les compositions peuvent, par exemple, se présenter sous
la forme de préparations intramammaires dans des bases
à libération rapide de la substance médicamenteuse ou
à activité prolongée.
La dose que l'on administre dépend dans une grande mesure de l'état du sujet à traiter et du poids
de ce sujet, du mode et de la fréquence d'administration, la voie parentérale étant préférable pour le traitement d'infections généralisées et la voie orale étant préférable pour le traitement d'infections intestinales. En général, la dose quotidienne à administrer par la voie orale varie d'environ 15 à environ 600 mg d'ingrédient actif par kg de poids du corps du suje-t, en une ou plusieurs administrations par jour. Une dose quotidienne préférée pour l'être humain adulte varie d'environ 80 à
120 mg d'ingrédient actif par kg du poids du corps.
Les compositions conformes à l'invention peuvent s'administrer sous forme de plusieurs doses unitaires comme c'est le cas, par exemple, d'une forme solide ou liquide, administrée par la voie orale. Les compositions peuvent contenir, par dose unitaire, qu'elles soient soli-
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la proportion préférée de substance active variant d'en- viron 10 à 60 %. La composition contient généralement de
15 mg à environ 1500 mg d'ingrédient actif; cependant, en général, il est préférable d'utiliser une dose d'ingrédient actif dans la composition qui varie d'environ 250 mg à 1000 mg. Lors de 1'administration parentérale, la dose unitaire se présente habituellement sous forme du composé pur en solution dans de l'eau stérile légèrement acidifiée ou sous la forme d'une poudre soluble destinée à être mise en solution.
Les exemples qui suivent illustrent les produits, des procédés, les compositions et les méthodes de traitement conformes à l'invention sans pour autant limiter cette dernière.
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au spectre de résonance magnétique nucléaire.
EXEMPLE 1
Préparation du sel de sodium de la N-bromo-t-butyloxy-
<EMI ID=42.1>
de la solution entre 8,5 et 9,0 à l'aide de NaOH 1N, cependant que l'on ajoutait 480 mg de chloroformiate de bromo-t-butyle à la solution, en l'espace de 5 minutes. On a agité le mélange pendant 30 minutes et on l'a ensuite neutralisé jusqu'à un pH de 7,0 avec de l'acide chlorhydrique 1N et on l'a extrait par de l'éther. On a séparé la couche aqueuse, on l'a concentrée jusqu'à un volume de
<EMI ID=43.1>
50X8 (forme Na) (3,8 x 25,4 cm) et on a procédé à l'élution avec de l'eau de manière à obtenir 113 mg du produit souhaité après lyophilisation.
Méthode B: On a maintenu de la thiénamycine (95 mg) dans
10 ml d'un tampon au phosphate 0,1 M et 10 ml de dioxanne
à 0[deg.]C. On a ajusté et maintenu le pH de la solution à 8,5-9,0, cependant que l'on y ajoutait 240 mg de chloroformiate de bromo-t-butyle. On a agité le mélange pendant
30 minutes et on l'a ensuite acidifié jusqu'à un pH de
2,0 avec du H3P04. On a extrait la solution acidifiée avec 2 x 25 ml d'acétate d'éthyle. On a séparé la couche organique et on l'a réextraite par 10 ml d'une solution aqueuse
<EMI ID=44.1>
EXEMPLE 2
Préparation d' l'ester p-nitrobenzylique de la N-bromot-butyloxvcarbonyl thiénamycine
On a agité le sel de sodium de la N-bromo-tbutyloxycarbonylthiénamycine lyophilisé (100 mg) à 26[deg.]C, avec du bromure de p-nitrobenzyle (300 mg) dans 2 ml d'hexaméthylphosphoramide, pendant 1 heure. On a dilué
le mélange avec 10 ml d'acétate d'éthyle et on l'a ensuite vigoureusement lavé à l'eau. On a séparé la couche orga-
<EMI ID=45.1>
graphiée sur deux plaques de chromatographie en couche mince de gel de silice de 250 � GF en utilisant de l'acétate d'éthyle comme solvant (Rf: 0,45), de façon à obtenir 50 mg du produit souhaité. IR �CDC13): 1777 (P-lac-
<EMI ID=46.1>
max <EMI ID=47.1>
identique à celle décrite ci-dessus, sauf que l'on a substitué une quantité équivalente de bromure de benzyle au bromure de p-nitrobenzyle précité.
EXEMPLE 3
Préparation de l'ester benzylique de la N-benzyloxycarbonyl thiénamycine
<EMI ID=48.1>
On a dissous de la thiénamycine (214 mg,
<EMI ID=49.1>
on a agité la solution sous refroidissement au bain de glace; on a ajouté d'un seul coup du NaECO:; (995 mg,
11,85 mmoles) et on a poursuivi l'agitation pendant
5 minutes. On a ensuite ajouté du dioxanne (17,6 ml) et on a agité la solution pendant 5 minutes supplémentaires. On a ensuite ajouté une solution glacée de chloroformiate de benzyle (242 mg, 1,42 mmole) dans du tétrahydrofuranne
(5 ml), répartie en 5 fractions égales, en l'espace de
16 minutes. Après agitation pendant 15 minutes supplé mentaires dans le froid, on a recouvert le mélange réactionnel d'éther diéthylique glacé (Et 20) (40 ml) et on a acidifié le tout:,.-Jusqu un pH de 6,8 avec une solution aqueuse froide à 5 % de H3P04. On a séparé les couches et on a extrait la fraction aqueuse avec une quantité supplémentaire d'éther diéthylique (2 x 30 ml).
On a recouvert la phase aqueuse d'acétate d'éthyle glacé
(EtOAc, 35 ml) et on a rapidement agité le mélange sous refroidissement au bain de glace, cependant que l'on amenait le pH à 2,4 avec une solution aqueuse froide à
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fractim aqueuse avec une quantité supplémentaire d'acétate d'éthyle. On a lavé les solutions à l'acétate d'éthyle réunies avec une saumure glacée (20 ml), puis on les a séchées sur du Na2S04 dans le froid et on les a filtrées.
La solution ainsi obtenue contenait de la N-benzyloxycarbonyl thiénamycine.
On a ajouté du phényldiazométhane éthéré,
glacé (15 ml d'une solution 0,25 M) à la solution à l'acétate d'éthyle et on a laissé reposer la solution ainsi obtenue dans un réfrigérateur pendant 1 heure.
On a évaporé les solvants sous vide et on a dilué le résidu à deux reprises avec de l'acétate d'éthyle et on l'a débarrassé du dioxanne sous vide. On a dissous le résidu dans de l'acétate d'éthyle (5 ml) et on a lentement dilué
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servation au réfrigérateur jusqu'au lendemain, on a filtré le mélange afin d'en séparer le précipité. On a lavé cette
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On a réuni les liqueurs-mères et les liqueurs de lavage et on les a évaporées sous vide. On a trituré le résidu avec de l'hexane (3 x 50 ml), on l'a dissous dans de l'acétate d'éthyle et on a fait passer la solution à travers un filtre en verre fritté contenant du gel de silice (2 g). On a lavé le tampon de gel de silice avec une quantité supplémentaire d'acétate d'éthyle. On a évaporé l'acétate d'éthyle sous vide jusqu'à obtenir un volume d'environ 1 ml, on a dilué ce volume à l'aide d'éther diéthylique jusqu'à obtenir un volume de 5 ml et on a abandonné la solution dans un réfrigérateur pendant
2 jours. On a recueilli le précipité formé, on l'a lavé avec de l'éther diéthylique froid et on l'a séché sous vide de façon à obtenir de l'ester benzylique de N-benzyl-
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de paillettes blanches.
La première récolte de produit possédait les caractéristiques suivantes: P.F. 125-126[deg.] (stade mi-
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On a dissous de la thiénamycine (798 mg, 2,93 mmoles) dans de l'eau glacée (200 ml) et on a agité la solution ainsi obtenue sous refroidissement, au bain de glace. On a ajouté du bicarbonate de sodium solide (2,462 g, 29,3 mmoles) en une fraction et, après quelques minutes, on a ajouté du dioxanne (200 ml). On a agité le mélange ainsi obtenu dans le froid pendant 3 minutes et on l'a ensuite traité, goutte à goutte et en l'espace de
10 minutes, par une solution de chloroformiate de benzyle
(750 mg, 4,4 mmoles) dans du dioxanne anhydre (12 ml). Après agitation pendant 10 minutes supplémentaires dans le froid, on a extrait le méHaige réactionnel par de l'éther diéthylique glacé (2 x 120 ml).
On a recouvert la couche aqueuse d'acétate d'éthyle froid (100 ml) et on l'a vigoureusement agitée, tout en l'acidifiant jusqu'à un pH de 2,3 avec de l'acide sulfurique 1M froid. On a séparé les couches et on a extrai t la phase aqueuse
avec une quantité supplémentaire d'acétate d'éthyle froid,
(2 x 30 ml). On a lavé les solutions à l'acétate d'éthyle réunies avec une saumure glacée (50 ml) et on les a ensuite extraites avec de l'hydroxyde de lithium 0,05 N glacé (58,6 ml) . On a soumis l'extrait à l'hydroxyde de lithium aqueux à une évaporation rotative sous vide
de façon à chasser l'acétate d'éthyle et on l'a ensuite lyophilisé de façon à obtenir le sel de lithium de la N-benzyloxycarbonyl thiénamycine brut (1,0 g) sous la forme d'un solide jaune clair.
On a mis un échantillon du carboxylate de lithium susmentionné (864 mg) en suspension dans de l'hexaméthylphosphoramide.anhydre (HMPA) (15,7 ml) et
on a traité la suspension par du bromure de benzyle
(1,15 ml). On a agité le mélange ainsi obtenu sous atmosphère d'azote et à 25[deg.]C pendant 2 heures, puis on l'a dilué à l'aide d'acétate d'éthyle (350 ml) et on l'a lavé avec de l'eau (2 x 300 ml), du bicarbonate de sodium à 5 % (150 ml), de l'eau (2 x 150 ml) et une saumure
(150 ml). On a séché la solution à l'acétate d'éthyle avec du sulfate de magnésium,on l'a filtrée et on l'a évaporée sous vide jusqu'à obtenir un résidu gommeux.
On a trituré cette matière avec de l'hexane (5 x 10 ml), afin d'éliminer l'excès de bromure de benzyle et on l'a ensuite séchée sous vide de façon à obtenir un solide jaune clair (817 mg).. On a dissous le produit brut dans de l'acétate d'éthyle chaud (15 ml) et on a dilué la solution avec de l'éther diéthylique (15 ml). On a ensemencé la solution ainsi. obtenue et on l'a abandonnée dans un congélateur jusqu'au lendemain. On a recueilli le précipité, on l'a lavé à l'aide d'éther diéthylique froid et on l'a séché sous vide de façon à obtenir de l'ester benzylique de N-benzyloxycarbonyl thiénamycine (405 mg) <EMI ID=55.1>
On a évaporé les liqueurs-mères et les liqueurs de lavage sous vide jusqu'à obtenir un résidu huileux
que l'on a dissous dans de l'acétate d'éthyle chaud (envi-
<EMI ID=56.1>
(<-v 10 ml). On a abandonné la solution dans un congélateur pendant plusieurs jours de façon à obtenir une seconde récolte de produit (106 mg) sous la forme d'un solide jaune.
EXEMPLE 5
Ester benzylique de N-benzyloxycarbonyl 0-méthanesulfonyl thiénamycine
<EMI ID=57.1>
On a dissous de l'ester benzylique de N-benzyloxycarbonyl thiénamycine (50 mg, 0,1 mmole) dans du CH2C12
(3,0 ml) et on a agité la solution sous refroidissement au bain de glace, sous atmosphère d'azote. On a ajouté de la triéthylamine (Et3N) (27,9 (il), 0,2 mmole) à la solution, cette addition étant suivie de l'addition, goutte
à goutte et en l'espace de 5 minutes, d'une solution de chlorure de méthanesulfonyle (17,2 mg, 0,15 mmole) dans du CH2C12 (0,4 ml). On a agité la solution obtenue dans le froid pendant 90 minutes, puis on l'a diluée avec
du CH2C12 glacé (10 ml), on l'a lavée avec de l'eau froide
<EMI ID=58.1>
et du NaHC03 à 2 % froid (5 ml), on l'a séchée sur du
<EMI ID=59.1>
a permis d'obtenir l'ester benzylique du la N-benzyloxycarbonyl 0-méthanesulfonyl thiénamycine (57 mg), sous la
<EMI ID=60.1>
7,32 (m, 10, ArH).
En répétant le mode opératoire décrit cidessus, on a obtenu l'ester p-nitrobenzylique de la N-bromo-t-butylo::ycarbonyl 0-méthanesulfonyl thiénamycine lorsque l'on a remplacé l'ester benzylique de la
<EMI ID=61.1>
valente de l'ester p-nitrobenzylique de la N-bromo-tbutyloxycarbonyl thiénamycine.
EXEMPLE 6
6-éthylidène-3-(2-benzyloxycarbonylaminoéthyl)-thio-7-
<EMI ID=62.1>
benzyle
<EMI ID=63.1>
On a ajouté du NaHC03 pulvérulent (12,0 mg, 0,154 mmole) à une solution d'ester benzylique de N-benzyloxycarbonyl O-méthanesulfonyl thiénamycine
<EMI ID=64.1>
agité le mélange ainsi obtenu à 25[deg.]C pendant 10 minutes. On a dilué le mélange avec du CH2C12 (15 ml), on l'a
<EMI ID=65.1>
on l'a filtré et on l'a évaporé sous vide jusqu'à obtenir une huile (33 mg). On a purifié cette matière par chromatographie en couche mince sur une plaque de gel de silice GF 250 � x 20 x 20 cm en utilisant un mélange d'acétate d'éthyle et de chloroforme (3:1) comme solvant de développement. On a séparé la bande principale visible aux UV et on l'a éluée avec de l'acétate d'éthyle de façon à obtenir une huile (24 mg). On a rechromatographié cette matière de la manière décrite plus haut de façon à obtenir du 6-éthylidène-3-(2-benzyl-
<EMI ID=66.1>
et 210.
En répétant le mode opératoire décrit ci-dessus,
<EMI ID=67.1>
thiénamycine de l'exemple 6 par une quantité équivalente d'ester p-nitrobenzylique de la N-bromo-t-butyloxycarbonyl 0-méthanesulfonyl thiénamycine de l'exemple 5.
EXEMPLE 7
<EMI ID=68.1>
<EMI ID=69.1>
<EMI ID=70.1>
On a hydrogéné un mélange de 6-éthylidène-3-
<EMI ID=71.1>
dans une bombe en verre à une pression de 2,8 kg/cm2 pendant 2 heures. On a ajouté une quantité supplémentaire de catalyseur (5 mg) et on a poursuivi l'hydrogénation pendant 2 heures encore. On a filtré le mélange à travers
<EMI ID=72.1>
chacune de ces matières) en utilisant de l'acétate d'éthyle (20 ni) comme éluant. L'évaporation de l'acétate
<EMI ID=73.1> du 6-éthyl-3-(2-benzyloxycarbonylaminoéthyl)-thio-7-
<EMI ID=74.1>
hept-2-ène-2-carboxylate de p-nitrobenzyle lorsque l'on a remplacé le 6-éthylidène-3-(2-benzyloxycarbonyl-
<EMI ID=75.1>
hept-2-ène-2-carboxylate de p-nitrobenzyle.
EXEMPLE 8
<EMI ID=76.1>
<EMI ID=77.1>
<EMI ID=78.1> (4 ml) et on a traité la solution par un tampon au
<EMI ID=79.1>
10 % de palladium (20 mg). On a hydrogéné le mélange
à la pression atmosphérique à 25[deg.]C, pendant 1 heure et
on l'a filtré ensuite. On a concentré le filtrat sous vide jusqu'à obtenir un volume de 2 ml et on l'a extrait par de l'acétate d'éthyle. On a chromatographié la fraction aqueuse sur une colonne échangeuse d'ions du type Dowex-50 X 4 (forme sodium), en utilisant de l'eau désionisée comme solvant d'élution. On a réuni les fractions souhaitées et on les a lyophilisées de façon à obtenir le 6--éthylidène-3-(2-aminoéthyl)-thio-7-oxo-1-aza-
<EMI ID=80.1>
EXEMPLE 9
Acide 6-éthyl-3-(2-aminoéthyl)thio-7-oxo-1-azabicyclo-
<EMI ID=81.1>
<EMI ID=82.1>
On a hydrogéné un mélange de 6-éthyl-3-(2benzyloxycarbonylaminoéthyl)-thio-7-oxo-1-azabicyclo- <EMI ID=83.1> <EMI ID=84.1>
de 2,8 kg/cm2 pendant 1 heure. On a filtré le mélange de façon à en séparer le catalyseur que l'on a lavé avec
<EMI ID=85.1> les liqueurs de lavage et le filtrat réunis sous vide jusqu'à un volume de 2 ml et on a introduit ces 2 ml dans une colonne de résine échangeuse d'ions du type
<EMI ID=86.1>
élué la colonne avec de l'eau désionisée. On a rassemblé les fractions appropriées et on les a lyophilisées de façon à obtenir l'acide 6-éthyl-3-(2-aminoéthyl)-
<EMI ID=87.1>
que.
EXEMPLE 10
<EMI ID=88.1>
<EMI ID=89.1>
<EMI ID=90.1>
2-ène-2-carboxylate de p-nitrobenzyle (20 mg) dans 4 ml d'éthanol. A cette solution, on a ajouté 2 ml d'un tampon au phosphate 0,1 M d'un pH de 8,0 et 60 mg de carbone supportant 10% de palladium. On a agité le mélange sous une atmosphère d'hydrogène à 25[deg.]C pendant 75 minutes et on l'a ensuite filtré de façon à le débarrasser du catalyseur. On a neutralisé le filtrat jusqu'à un pH de 7,0 avec de l'acide chlorhydrique 2,5 N, on l'a concentré jusqu 'à un volume de 3 ml et on l'a rapidement extrait avec 5 ml d'éther. La solution aqueuse ainsi obtenue
<EMI ID=91.1>
xylate de sodium.
EXEMPLE 11
Préparation d'acide 6-éthyl-3-(2-aminoéthyl)thio-7-oxo-
<EMI ID=92.1>
<EMI ID=93.1>
On a chauffé la solution obtenue à l'exemple
<EMI ID=94.1>
1 heure. On a chromatographié le mélange sur une colonne échangeuse d'ions du type Dowex-50 X 8 (forme sodium)
et on a procédé à l'élution avec de l'eau de façon à obtenir l'acide 6-éthyl-3-(2-aminoéthyl)thio-7-oxo-1-aza-
<EMI ID=95.1>
EXEMPLE 12
Ester p-nitrobenzylique de la N-(p-nitrobenzyloxycar-
<EMI ID=96.1>
On a dissous de la thiénamycine (140 mg,
0,51 mmole) dans de l'eau glacée (35 ml) et on a traité la solution par du NaHCO- (428 mg, 5,1 mmole�. On. a ensuite ajouté du dioxanne (35 ml) sous agitation et refroidissement au bain de glace. Après 3 minutes, on a ajouté, goutte à goutte et en l'espace de 2 minutes, une solution de chloroformiate de p-nitrobenzyle (165 mg,
<EMI ID=97.1>
dans le froid pendant 10 minutes et on l'a ensuite extrait par de l'éther diéthylique glacé (2 x 20 ml). On a séparé la phase aqueuse, on l'a recouverte d'acétate d'éthyle glacé (35 ml) et on a acidifié le tout jusqu'à pH de
<EMI ID=98.1>
bain de glace. On a séparé les couches et on a extrait
la fraction aqueuse par une quantité supplémentaire d'acé-tate d'éthyle froid (2 x 5 ml). On a lavé les extraits à l'acétate d'éthyle réunis avec une saumure froide et
on les a ensuite vigoureusement extraits par une solution aqueuse de LiOH 0,05 N (10 ml). On a soumis l'extrait
au LiOH à une évaporation rotative de manière à éliminer l'acétate d'éthyle et on a ensuite procédé à une lyophilisation de façon à obtenir le sel de lithium de la N-(p-nitrobenzyloxycarbonyl)thiénamycine brut (288 mg), sous la forme d'un solide jaune.
On a agité une fraction du carboxylate de lithium brut (250 mg) et de bromure de p-nitrobenzyle
<EMI ID=99.1>
à la température ambiante pendant 105 minutes. On a dilué le mélange avec de l'acétate d'éthyle (60 ml), . on l'a lavé avec de l'eau (2 x 50 ml), une solution à
<EMI ID=100.1>
l'a filtré et évaporé sous vide de façon à obtenir un solide jaune (423 mg). On a trituré cette matière avec de l'éther diéthylique de façon à éliminer le bromure de p-nitrobenzyle en excès et on a séparé les cristaux résiduels par filtration et on les a séchés sous vide de façon à obtenir l'ester p-nitrobenzylique de la N-(p-nitrobenzyloxycarbonyl)thiénamycine (126 mg), sous la forme d'un solide jaune: P.F. 163,5-
<EMI ID=101.1>
EXEMPLE 13
Ester p-nitrobenzylique de la N-(p-nitrobenzyloxycar-
<EMI ID=102.1>
<EMI ID=103.1>
A une solution agitée et glacée d'ester p-nitrobenzylique de N-(p-nitrobenzyloxycarbonyl)thiénaaycine (186 mg, 0,32 mmole) dans du tétrahydrofuranne anhydre (9,5 ml), on a ajoute de
l'Et N (89 (il, 0,64 mmole) et, goutte à goutte en l'espace de 2 minutes, une solution de chlorure de méthanesulfonyle (55 mg, 0,48 mmole) dans du tétrahydrofuranne (1,0 ml). On a agité le mélange ainsi obtenu dans le froid et sous azote pendant 90 minutes et on l'aensuite dilué avec du CH2C12 glacé (50 ni) . On a lavé la solution avec de l'eau froide (20 ml),
<EMI ID=104.1>
et une solution à 5 % de NaHCO froide (20 ml), on l'a
<EMI ID=105.1>
vide de façon à obtenir une moussa jaune. On a trituré cette matière avec de l'éther diéthylique anhydre de manière à obtenir l'ester p-nitrobenzylique de la N-(p-nitrobenzyloxycarbonyl)-o-méthanesulfonyl thiénamycine (192 mg) sous la forme d'un solide jaune
<EMI ID=106.1>
4,25; N, 8,43; S, 9,65. Trouvé: C, 49,19; H, 4,36; N, 8,09; S, 9,61.
EXEMPLE 14
<EMI ID=107.1>
On a traité une solution d'ester p-nitrobenzylique de N-(p-nitrobenzyloxycarbonyl) 0-méthanesulfonyl thiénamycine (50 mg, 0,075 mmole) dans du
<EMI ID=108.1>
et du NaHC03 (12,6 ng, 0,15 mmole). On a agité le mélange ainsi obtenu à la température ambiante pendant 17 heures. On a séparé le précipité par filtration, on l'a lavé avec plusieurs fractions d'eau et on l'a séché sous
<EMI ID=109.1>
(m, l, -CH), 7,68 (m, ArH), et 8,25 (m, ArH); spectre de
<EMI ID=110.1>
EXEMPLE_15
Acide 6-éthyl-3-(2-aminoéthyl)-thio-7-oxo-1-azabicyclo-
<EMI ID=111.1> et à 25[deg.]C, pendant 2,5 heures. On a séparé le catalyseur par filtration et on l'a convenablement lavé avec un tampon au phosphate 0,1 M de pH 7 (5 ml). On a concentré les liqueurs de lavage et le filtrat réunis sous. vide de manière à éliminer la plus grande partie des solvants organiques. On a chromatographié le résidu aqueux sur une colonne de résine échangeuse d'ions
du type Dowex-50 X 4 (forme Na); on a procédé à l'élution du produit avec de l'eau désionisée. On a réuni les fractions appropriées et on les a lyophilisées de
<EMI ID=112.1>
<EMI ID=113.1>
A une solution de 50 mg d'ester p-nitrobenzylique de la N-(p-nitrobenzyloxycarbonyl) thiénamycine dans 0,5 ml de pyridine, on a ajouté 20 mg d'anhydride sulfurique dans de la pyridine. On a laissé réagir le mélange à 25[deg.]C pendant 4 heures, puis on a chassé l'excès de pyridine sous pression réduite. On a agité le résidu avec 20 ml de chlorure de méthylène et 20 ml d'une solution à 0,1 % de bicarbonate de sodium pendant 30 minutes, puis on a séparé la couche aqueuse et on l'a lyophilisée. On a dissous le sel de sodium de l'ester p-nitrobenzylique de la 0-sulfo N-(p-nitrobenzyloxy-
<EMI ID=114.1>
de dioxanne 1:1 et on a hydrogéné la solution pendant 4 heures en présence de 5,0 mg d'un catalyseur à base d'oxyde de platine, à une pression manométrique de
2,8 kg/cm2. On a séparé le catalyseur par filtration et on a extrait le filtrat à deux reprises avec de l'acétate d'éthyle. On a concentré la couche aqueuse jusqu'à un volume de 5 ml et on l'a chromatographiée sur 40 ml d'une résine XAD-2. On a élué la colonne avec de l'eau et on a récupère et lyophilisé la fraction contenant le sel de sodium de la 0-sulfo thiénamycine.
EXEMPLE 17
Préparation de compositions pharmaceutiques
Une forme de dose unitaire s'obtient en mélangeant 120 mg d'acide 3-(2-aminoéthylthio)-6-éthyl-7-
<EMI ID=115.1>
<EMI ID=116.1>
introduisant le mélange de 145 mg dans une capsule en gélatine n[deg.] 3. De manière similaire, en utilisant davantage d'ingrédient actif et moins de lactose, on peut obtenir d'autres doses unitaires dans des capsules en gélatine n[deg.] 3 et, s'il était nécessaire de mélanger
plus de 145 mg d'ingrédients, on pourrait se servir de capsules de plus grandes dimensions pour fabriquer des comprimés ou des pillules. Les exemples qui suivent illustrent.la préparation de compositions pharmaceutiques.
<EMI ID=117.1>
P.E.U.A. = pharmacopée des Etats-Unis d'Amérique.
On mélange l'ingrédient actif au phosphate dicalcique, au lactose et à environ la moitié de l'amidon de maïs. On granule ensuite le mélange avec une
<EMI ID=118.1>
tamisage grossier. On sèche les granules à 45[deg.]C et on les tamise à nouveau à travers des tamis n[deg.] 16. On ajoute le reste de l'amidon de maïs et le stéarate de magnésium
et on comprime le mélange en comprimés d'un diamètre d'approximativement 1,27 cm pesant chacun 800 mg.
SOLUTION PARENTERALE
<EMI ID=119.1>
Process for preparing 3- (2-
<EMI ID = 1.1>
Priority of two patent applications filed in the United States of America on April 8, 1977 under n [deg.] 785 811 and
<EMI ID = 2.1> The present invention relates to the acid
<EMI ID = 3.1>
hept-2-en-2-carboxylic acid corresponding to the following general structural formula:
<EMI ID = 4.1>
as well as its pharmaceutically acceptable salts, compounds which constitute valuable antibiotics.
The present invention also relates to processes for the preparation of compound I and its salts, to pharmaceutical compositions which contain the above substances and to methods of treatment characterized in that compound I or a salt thereof is administered when 'one wishes to obtain an antibiotic effect.
3- (2-aminoethylthio) -6-ethyl-7-oxo- acid
<EMI ID = 5.1>
conveniently from the antibiotic thienamycin (II) by elimination of the 6-hydroxyl group:
<EMI ID = 6.1>
Thienamycin is described and claimed
in U.S. Patent No. 3,950,357 granted April 13, 1976.
Thienamycin and all of its isomers (in pure form and in the form of mixtures) can also be obtained by total synthesis. All of these isomers of thienamycin are available as starting materials for the preparation of the compounds according to the invention.
The present invention also relates to intermediate compounds (III-IV) suitable for the preparation of compound I:
<EMI ID = 7.1>
<EMI ID = 8.1>
formulas in which R and R 'represent hydrogen atoms or easily removable protecting groups. R and R 'will be defined in more detail later in this memo.
There is a continuing need for new antibiotics. Unfortunately, a given antibiotic does not have static efficacy because the continued large-scale use of that antibiotic selectively generates strains of pathogenic organisms which resist it. In addition, the known antibiotics suffer from the disadvantage of only being effective against certain types of microorganisms. Therefore, research to discover new antibiotics
continues.
The present invention therefore relates to a novel antibiotic as well as its pharmaceutically acceptable salts, which can be used in animal and human therapy and in inanimate systems. These antibiotics are active against a wide range of pathogenic organisms, of which there may be mentioned as examples Gram-positive bacteria, such as S. aureus, Strep. pyogenes and B. subtilis, and Gram-
<EMI ID = 9.1>
Serratia and Klebsiella.
The present invention also relates to chemical processes for the preparation of these antibiotics and of their pharmaceutically acceptable non-toxic salts, to pharmaceutical compositions which contain at least one of the antibiotics in question and to treatment processes characterized in that one administers the antibiotics and the compositions in question when obtaining an antibiotic effect is desirable.
In general, the compounds in accordance with the present invention are prepared according to the following scheme:
<EMI ID = 10.1>
In the above formulas, the radical
OR of the compound of structure IIb is easily removed by treatment with a base so as to form an enelactam III which, on reduction, generates compound I in accordance with the present invention. The OR radical is typically a sulfate or sulfonate radical.
More specifically, one prepares commo-
<EMI ID = 11.1>
the present invention according to the following reaction scheme:
<EMI ID = 12.1>
<EMI ID = 13.1>
where M represents a hydrogen atom or any non-critical cation, such as an alkali metal or a base
<EMI ID = 14.1>
aryl radical, such as the methyl or toluyl group and R represents a group blocking (or protecting) the func-
<EMI ID = 15.1>
group blocking the N function, easy to remove.
Preferred groups blocking the carboxyl function,
R, are the benzyl and benzyl radicals substituted in the ring:
<EMI ID = 16.1>
X representing a nitro, lower alkoxy group, such
as methoxy and the like; however, the benzyl radical is preferred. As suitable N-blocking R 'groups, there may be mentioned bromo-t-butoxycarbonyl, chloro-t-butoxycarbonyl, bromoethoxycarbonyla, benzyloxycarbonyl, p-nitrobenzyloxycarbonyl and the like. A very particularly preferred blocking group for the N function is the bromo-t-butoxycarbonyl radical.
With reference to the above-mentioned reaction scheme, a suitably protected thienamine
<EMI ID = 17.1>
<EMI ID = 18.1>
in a solvent, such as methylene chloride, tetrahydrofuran, dioxane, chloroform and the like, by a sulfonating agent, such as methanesulfonyl chloride, toluenesulfonyl chloride and the like, in the presence of a base, such as one of
<EMI ID = 19.1>
pyridine, NaH at a temperature ranging from -15 to
25 [deg.] C for a period of 1 to 10 hours. The esters of
<EMI ID = 20.1>
-0 th M � ) are also suitable as starting materials and have the following structural formula:
<EMI ID = 21.1>
in which M represents a hydrogen atom, a cation
<EMI ID = 22.1>
dent the aforementioned meanings.
As for the reaction involving the intermediate compounds IIb, it should be noted that the symbols R
and R 'can also represent hydrogen atoms, in addition to the aforementioned protecting groups. Such intermediate compounds IIb are prepared by unblocking the protected form of compound IIb by carrying out standard methods which will be described in
the remainder of this brief.
It should be noted that the sulfate-type esters of intermediate compounds IIb (R "is OH) can also be obtained in the form of natural products.
Referring again to the reaction scheme
<EMI ID = 23.1>
from compound IIb by treating this compound II with a base, such as one of the following compounds NaHCO-,
<EMI ID = 24.1>
5-ene and the like, in a solvent, such as methanol, tetrahydrofuran, dioxane and the like, at a temperature which varies from -20 to 25 [deg.] C, for a period which varies from 1 to 20 hours.
Intermediate 6-ethyl compound IV is obtained from compound III by reduction, preferably by treating compound III in a solvent, such as ethanol, ethyl acetate, dioxane, benzene and the like, in the presence of a hydrogen catalyst
<EMI ID = 25.1>
hydrogen under a pressure of 1 to 4 atmospheres, at a temperature of 0 to 25 [deg.] C for a period varying from 0.5 to 5 hours. The intermediate compound IV can be unlocked by carrying out the hydrogenation process described above with a view to obtaining compound I or else, depending on the identity of the protective groups R "and R, the deblocking can be carried out by by carrying out separate processes, such as by hydrolysis or hydrogenation under different conditions. It should also be noted that the deblocking can take place previously in the scheme on the intermediate compound IIb. The deblocking process can also be carried out in the form of a reaction step during the conversion of compound III to compound IV Separate release IV - * - I can be achieved by carrying out any of any of the following.
<EMI ID = 26.1>
hydrogenation. Preferably, the R group blocking the carboxyl function is removed by hydrogenation in a solvent, such as a lower alkanol, for example ethanol, in the presence of a hydrogenation catalyst, such as palladium, platinum or oxides of these metals,
under hydrogen pressures of 1 to 40 atmospheres,
at a temperature of 0 to 50 [deg.] C and for a period which varies from 1 to 10 hours.
The R 'group protecting the N function can also be removed by hydrogenation, but when the preferred bromo-t-butoxy carbonyl radical is used, the deblocking is conveniently accomplished by heating a solution of compound IV or carboxyl-functional compound IV. deblocked, in a solvent, such as ethanol, isopropanol, water and the like, at a temperature of 25 to
80 [deg.] C, for a period which varies from 10 minutes to 3 hours.
The product in accordance with the present invention (I) generates a whole series of pharmaceutically acceptable salts with inorganic and organic bases; these salts include, for example, salts of metals which originate from dicarbonates, carbonates or hydroxides of alkali metals or alkaline earth metals and salts from primary, secondary or tertiary amines, such as monoalkylamines, dialkylamines, trialkylamines , lower alkanol amines, lower dialkanol amines, lower alkylene diamines, N, N-diaralkyl lower alkylene diamines, aralkylamines, amino lower alkanols, N, N-di-lower alkyl amino lower alkanols, amino acids -, lower polyamino- and guanidino-alkanoics and heterocyclic amines containing nitrogen.
By way of illustrative examples of the salts in question, mention may be made of salts derived from sodium hydroxide, sodium carbonate, sodium bicarbonate, potassium carbonate, potassium hydroxide, calcium carbonate, the following amines: trimethylamine, triethylamine, piperidine, morpholine, quinine, lysine,
<EMI ID = 27.1>
benzylamine, ethylenediamine, N, N'-dibenzylethylenediamine, diethanolamine, piperazine, dimethylaminoethanol, 2-amino-2-methyl-1-propanol, theophylline, N-methylglucamine and the like. Salts of the primary amine of compounds I with pharmaceutically acceptable organic and inorganic acids are also within the scope of the invention. These salts include in particular the following: methanesulfonate, 2-naphthalenesulfonate, pamoate, 3-phenyl propionate, trimethylacetate, t-butyl acetate, p-toluenesulfonate, maleate, lactate, cyclamate, fumarate, tartrate, oxalate, benzoate, acetate, succinate, citrate , glutamate, hydrochloride, hydrobromide, sulfate, phosphoate, n-acetylglycinate, benzenesulfonate, hexa-
<EMI ID = 28.1>
and the like and can be prepared according to well known methods.
The salts can be mono-salts, such as the monosodium salt obtained by treating one equivalent of sodium hydroxide with one equivalent of the product (1)
<EMI ID = 29.1>
salts can be obtained by treating one equivalent of a base having a divalent cation, such as hydroxide
of calcium, by an equivalent of the product (I). The salts according to the present invention are non-toxic, pharmaceutically acceptable derivatives which can be used as an active ingredient in pharmaceutical compositions which are presented in the form of appropriate unit doses. They can also be combined with other drugs so as to obtain compositions with a broad spectrum of activity.
The compounds according to the present invention
<EMI ID = 30.1>
valuable antimicrobial substances that
are active against various Gram-positive organisms
and Gram-negative. Thus, the free acid and, more particularly the salts of the latter, such as the salts. of amines and metals, in particular the alkali metal and alkaline earth metal salts, are valuable bactericides and can be used to eliminate susceptible pathogens from dental and medical equipment, to separate microorganisms and to therapeutic treatment of humans and animals. In the latter case, pharmaceutically acceptable salts with inorganic and organic bases can be used, such as salts well known to those skilled in the art and used for the administration of penicillins and cephalosporins. By free, salts such as alkali metal and alkaline earth metal salts and primary, secondary and tertiary amine salts can be used for this purpose.
These salts can be combined with solid and liquid vehicles <EMI ID = 31.1>
suitable unit doses, such as pills, tablets, capsules, suppositories, syrups,
<EMI ID = 32.1>
<EMI ID = 33.1>
valuable biotics whose activity is exerted against various Gram-positive and Gram-negative bacteria and, therefore, can be used in human and veterinary medicine. The compounds according to the present invention can therefore be used as antibacterial substances for the treatment of infections caused by Gram-positive and Gram-negative bacteria, for example, they can be used against the following organisms: Staphylococcus aureus , Escherichia
<EMI ID = 34.1>
Salmonella typhosa, Pseudomonas and Bacterium proteus.
The antibacterial compounds in accordance with the invention can also be used in the form of feed additives for animals, for preserving food and as disinfectants. For example, they can be used in the form of aqueous compositions, in concentrations varying from 0.1 to 100 parts of antibiotic per million parts of solution, to destroy and inhibit the growth of harmful bacteria on the equipment. medical and dental and can also be used as bactericides for
<EMI ID = 35.1>
growth of harmful bacteria.
The products according to the present invention can be used, alone or in combinations, as active ingredients, in any one of any
a series of pharmaceutical preparations. These antibiotics and their corresponding salts can be used. in the form of capsules or in the form of tablets,
powders or liquid solutions or in the form of suspensions or elixirs. They can be administered orally, intravenously or intramuscularly.
The compositions in accordance with the invention are preferably provided in a form suitable for absorption from the gastrointestinal tract. Tablets and capsules to be administered can be presented
orally in unit dose form and
these tablets and capsules may contain excipients, such as binding agents, for example syrup,
acacia gum, gelatin, sorbitol,
tragacanth or polyvinyl-pyrrolidone;
fillers, eg lactose, sucrose, corn starch, calcium phosphate, sorbitol
or glycine; lubricants, for example magnesium stearate, talc, polyethylene glycol, silica; disintegrating agents, for example potato starch or acceptable wetting agents,
<EMI ID = 36.1>
such as sodium lauryl sulfate. We can coat the
<EMI ID = 37.1>
<EMI ID = 38.1>
<EMI ID = 39.1> emulsions, solutions, aqueous suspensions
or oily, etc., or they may appear
in the form of a dry product to be reconstituted with
water or other suitable vehicle before use. Such liquid preparations may contain
conventional additives, such as suspending agents, for example sorbitol syrup,
methyl cellulose, glucose / sucrose syrup,
gelatin, hydroxyethyl cellulose, carboxymethyl cellulose, aluminum stearate gel,
or hydrogenated edible oils, for example
almond oil, fractionated coconut oil,
oily esters, propylene glycol or ethyl alcohol; preservatives, for example methyl or propyl p-hydroxybenzoates or sorbic acid; suppositories will contain conventional suppository bases, for example cocoa butter or any other suitable glyceride.
The compositions intended for injection may be provided in the form of unit doses in
ampoules or in containers that contain them
multiple doses at the same time as a preservative. The compositions in question may be in the form of suspensions, solutions or emulsions in oil or in aqueous vehicles and may contain
compounding agents, such as compounding agents
in suspension, stabilizers and / or dispersants.
The active ingredient may also be in the form of a powder to be reconstituted with a suitable vehicle, for example sterile pyrogen-free water, before use.
The compositions can also be prepared
in forms suitable for absorption through the mucous membranes of the nose and throat or through the bronchial tissues and may conveniently take the form of powders, inhalants or liquid sprays, lozenges, brushing compositions throat, etc. For the treatment of the eyes or the ears, the preparations can be presented in the form of individual capsules, whether liquid or semi-solid, or they can be used in the form of drops, etc. Topical applications can be carried out by incorporating the compounds according to the invention into hydrophobic or hydrophilic bases, such as ointments, creams, lotions, brushes, powders, ointments, etc.
Likewise, in addition to an excir'ent, the compositions in accordance with the invention may also contain other ingredients, such as stabilizers, binders, antioxidants, preservatives, lubricants,
suspending agents, conferring agents
viscosity or flavoring agents and the like.
In addition, it is also possible to incorporate into the compositions in accordance with the invention other active ingredients so as to obtain a broader spectrum of antibiotic activity.
For use in veterinary medicine, the compositions may, for example, be presented as
the form of intramammary preparations in bases
rapid release of the drug substance or
with prolonged activity.
The dose administered depends to a large extent on the condition of the subject to be treated and the weight
of this subject, the mode and frequency of administration, the parenteral route being preferable for the treatment of generalized infections and the oral route being preferable for the treatment of intestinal infections. In general, the daily dose to be administered orally varies from about 15 to about 600 mg of active ingredient per kg of the subject's body weight, in one or more administrations per day. A preferred daily dose for adult humans ranges from about 80 to
120 mg of active ingredient per kg of body weight.
The compositions in accordance with the invention can be administered in the form of several unit doses as is the case, for example, of a solid or liquid form, administered orally. The compositions may contain, per unit dose, that they are solid
<EMI ID = 40.1>
the preferred proportion of active substance varying from about 10 to 60%. The composition generally contains
15 mg to about 1500 mg of active ingredient; however, in general, it is preferable to use a dose of active ingredient in the composition which ranges from about 250 mg to 1000 mg. When administered parenterally, the unit dose is usually in the form of the pure compound dissolved in sterile slightly acidified water or in the form of a soluble powder intended for solution.
The examples which follow illustrate the products, processes, compositions and treatment methods in accordance with the invention without, however, limiting the latter.
<EMI ID = 41.1>
to the nuclear magnetic resonance spectrum.
EXAMPLE 1
Preparation of the sodium salt of N-bromo-t-butyloxy-
<EMI ID = 42.1>
of solution between 8.5 and 9.0 using 1N NaOH, while 480 mg of t-bromo-t-butyl chloroformate was added to the solution over 5 minutes. The mixture was stirred for 30 minutes and then neutralized to pH 7.0 with 1N hydrochloric acid and extracted with ether. The aqueous layer was separated, concentrated to a volume of
<EMI ID = 43.1>
50X8 (Na form) (3.8 x 25.4 cm) and elution was carried out with water to obtain 113 mg of the desired product after lyophilization.
Method B: Thienamycin (95 mg) was maintained in
10 ml of 0.1 M phosphate buffer and 10 ml of dioxane
at 0 [deg.] C. The pH of the solution was adjusted and maintained at 8.5-9.0 while adding 240 mg of t-bromo-t-butyl chloroformate. The mixture was stirred for
30 minutes and then acidified to a pH of
2.0 with H3P04. The acidified solution was extracted with 2 x 25 ml of ethyl acetate. The organic layer was separated and re-extracted with 10 ml of an aqueous solution.
<EMI ID = 44.1>
EXAMPLE 2
Preparation of p-nitrobenzyl ester of N-bromot-butyloxvcarbonyl thienamycin
The sodium salt of lyophilized N-bromo-tbutyloxycarbonylthienamycin (100 mg) at 26 [deg.] C, with p-nitrobenzyl bromide (300 mg) in 2 ml of hexamethylphosphoramide, was stirred for 1 hour. We have diluted
the mixture with 10 ml of ethyl acetate and then washed vigorously with water. We separated the organic layer
<EMI ID = 45.1>
graphed on two silica gel thin-layer chromatography plates of 250 GF using ethyl acetate as solvent (Rf: 0.45), so as to obtain 50 mg of the desired product. IR (CDC13): 1777 (P-lac-
<EMI ID = 46.1>
max <EMI ID = 47.1>
identical to that described above, except that an equivalent amount of benzyl bromide has been substituted for the aforementioned p-nitrobenzyl bromide.
EXAMPLE 3
Preparation of N-benzyloxycarbonyl thienamycin benzyl ester
<EMI ID = 48.1>
Thienamycin (214 mg,
<EMI ID = 49.1>
the solution was stirred under cooling in an ice bath; NaECO was added all at once :; (995 mg,
11.85 mmol) and stirring continued for
5 minutes. Dioxane (17.6 ml) was then added and the solution stirred for an additional 5 minutes. An ice-cold solution of benzyl chloroformate (242 mg, 1.42 mmol) in tetrahydrofuran was then added.
(5 ml), divided into 5 equal fractions, over the space of
16 minutes. After stirring for an additional 15 minutes in the cold, the reaction mixture was covered with ice-cold diethyl ether (Et 20) (40 ml) and the whole was acidified: .- To a pH of 6.8 with a solution. cold aqueous 5% H3PO4. The layers were separated and the aqueous fraction extracted with additional diethyl ether (2 x 30 mL).
The aqueous phase was covered with ice-cold ethyl acetate
(EtOAc, 35 mL) and the mixture was quickly stirred under ice bath cooling, while the pH was brought to 2.4 with a cold aqueous solution at
<EMI ID = 50.1>
aqueous fractim with additional ethyl acetate. The combined ethyl acetate solutions were washed with ice-cold brine (20 mL), then dried over Na2SO4 in the cold and filtered.
The solution thus obtained contained N-benzyloxycarbonyl thienamycin.
Ethereal phenyldiazomethane was added,
Ice-cold (15 ml of a 0.25 M solution) in the ethyl acetate solution and the resulting solution was allowed to stand in a refrigerator for 1 hour.
The solvents were evaporated in vacuo and the residue was diluted twice with ethyl acetate and freed from dioxane in vacuo. The residue was dissolved in ethyl acetate (5 mL) and slowly diluted.
<EMI ID = 51.1>
Served in the refrigerator overnight, the mixture was filtered to separate the precipitate. We washed this
<EMI ID = 52.1>
The mother liquors and the wash liquors were combined and evaporated in vacuo. The residue was triturated with hexane (3 x 50 mL), dissolved in ethyl acetate, and the solution passed through a sintered glass filter containing silica gel ( 2 g). The silica gel pad was washed with additional ethyl acetate. The ethyl acetate was evaporated in vacuo until a volume of about 1 ml was obtained, this volume was diluted with diethyl ether until a volume of 5 ml was obtained and the mixture was abandoned. solution in a refrigerator for
2 days. The precipitate formed was collected, washed with cold diethyl ether and dried in vacuo to obtain N-benzyl benzyl ester.
<EMI ID = 53.1>
of white sequins.
The first crop of product had the following characteristics: m.p. 125-126 [deg.] (Mid-stage
<EMI ID = 54.1>
Thienamycin (798 mg, 2.93 mmol) was dissolved in ice water (200 ml) and the resulting solution was stirred under cooling in an ice bath. Solid sodium bicarbonate (2.462g, 29.3mmol) was added in one portion and after a few minutes dioxane (200ml) was added. The resulting mixture was stirred in the cold for 3 minutes and then worked up dropwise over a period of
10 minutes, with a solution of benzyl chloroformate
(750 mg, 4.4 mmol) in dry dioxane (12 mL). After stirring for an additional 10 minutes in the cold, the reaction mixture was extracted with ice-cold diethyl ether (2 x 120 ml).
The aqueous layer was covered with cold ethyl acetate (100 mL) and stirred vigorously, while acidifying it to pH 2.3 with cold 1M sulfuric acid. The layers were separated and the aqueous phase was extracted.
with an additional amount of cold ethyl acetate,
(2 x 30 ml). The combined ethyl acetate solutions were washed with ice-cold brine (50 ml) and then extracted with ice-cold 0.05 N lithium hydroxide (58.6 ml). The aqueous lithium hydroxide extract was subjected to rotary evaporation in vacuo.
to drive off ethyl acetate and then lyophilized to obtain crude N-benzyloxycarbonyl thienamycin lithium salt (1.0 g) as a light yellow solid.
A sample of the aforementioned lithium carboxylate (864 mg) was suspended in anhydrous hexamethylphosphoramide (HMPA) (15.7 ml) and
the suspension was treated with benzyl bromide
(1.15 ml). The resulting mixture was stirred under a nitrogen atmosphere and at 25 [deg.] C for 2 hours, then diluted with ethyl acetate (350 mL) and washed. with water (2 x 300 ml), 5% sodium bicarbonate (150 ml), water (2 x 150 ml) and brine
(150 ml). The ethyl acetate solution was dried with magnesium sulfate, filtered and evaporated in vacuo until a gummy residue was obtained.
This material was triturated with hexane (5 x 10 ml), to remove excess benzyl bromide and then dried in vacuo to give a light yellow solid (817 mg). The crude product was dissolved in hot ethyl acetate (15ml) and the solution diluted with diethyl ether (15ml). The solution was seeded as well. obtained and left in a freezer overnight. The precipitate was collected, washed with cold diethyl ether and dried in vacuo to obtain N-benzyloxycarbonyl thienamycin benzyl ester (405 mg) <EMI ID = 55.1>
Mother liquors and wash liquors were evaporated in vacuo until an oily residue was obtained.
which was dissolved in hot ethyl acetate (approx.
<EMI ID = 56.1>
(<-v 10 ml). The solution was left in a freezer for several days to obtain a second crop of product (106 mg) as a yellow solid.
EXAMPLE 5
N-Benzyloxycarbonyl 0-methanesulfonyl thienamycin benzyl ester
<EMI ID = 57.1>
N-Benzyloxycarbonyl thienamycin benzyl ester (50 mg, 0.1 mmol) was dissolved in CH2Cl2
(3.0 mL) and the solution was stirred under ice-bath cooling under a nitrogen atmosphere. Triethylamine (Et3N) (27.9 (II), 0.2 mmol) was added to the solution, this addition being followed by the addition, drop.
dropwise over 5 minutes with a solution of methanesulfonyl chloride (17.2 mg, 0.15 mmol) in CH 2 Cl 2 (0.4 mL). The resulting solution was stirred in the cold for 90 minutes, then diluted with
ice cold CH2C12 (10 ml), washed with cold water
<EMI ID = 58.1>
and cold 2% NaHCO3 (5 mL), it was dried over
<EMI ID = 59.1>
obtained the benzyl ester of N-benzyloxycarbonyl 0-methanesulfonyl thienamycin (57 mg), under the
<EMI ID = 60.1>
7.32 (m, 10, ArH).
By repeating the procedure described above, the p-nitrobenzyl ester of N-bromo-t-butylo :: ycarbonyl O-methanesulfonyl thienamycin was obtained when the benzyl ester of the
<EMI ID = 61.1>
valente of the p-nitrobenzyl ester of N-bromo-tbutyloxycarbonyl thienamycin.
EXAMPLE 6
6-ethylidene-3- (2-benzyloxycarbonylaminoethyl) -thio-7-
<EMI ID = 62.1>
benzyl
<EMI ID = 63.1>
Powdered NaHCO3 (12.0 mg, 0.154 mmol) was added to a solution of N-benzyloxycarbonyl O-methanesulfonyl thienamycin benzyl ester.
<EMI ID = 64.1>
stirred the resulting mixture at 25 [deg.] C for 10 minutes. The mixture was diluted with CH2Cl2 (15 mL),
<EMI ID = 65.1>
it was filtered and evaporated in vacuo to an oil (33 mg). This material was purified by thin-layer chromatography on a silica gel plate GF 250 � x 20 x 20 cm using a mixture of ethyl acetate and chloroform (3: 1) as the developing solvent. The main UV visible band was separated and eluted with ethyl acetate to give an oil (24 mg). This material was rechromatographed as described above to obtain 6-ethylidene-3- (2-benzyl-
<EMI ID = 66.1>
and 210.
By repeating the procedure described above,
<EMI ID = 67.1>
thienamycin of Example 6 with an equivalent amount of p-nitrobenzyl ester of N-bromo-t-butyloxycarbonyl O-methanesulfonyl thienamycin of Example 5.
EXAMPLE 7
<EMI ID = 68.1>
<EMI ID = 69.1>
<EMI ID = 70.1>
A mixture of 6-ethylidene-3-
<EMI ID = 71.1>
in a glass bomb at a pressure of 2.8 kg / cm2 for 2 hours. An additional amount of catalyst (5 mg) was added and the hydrogenation continued for a further 2 hours. The mixture was filtered through
<EMI ID = 72.1>
each of these) using ethyl acetate (20 µl) as the eluent. Evaporation of acetate
<EMI ID = 73.1> 6-ethyl-3- (2-benzyloxycarbonylaminoethyl) -thio-7-
<EMI ID = 74.1>
p-nitrobenzyl hept-2-en-2-carboxylate when the 6-ethylidene-3- (2-benzyloxycarbonyl-
<EMI ID = 75.1>
p-nitrobenzyl hept-2-en-2-carboxylate.
EXAMPLE 8
<EMI ID = 76.1>
<EMI ID = 77.1>
<EMI ID = 78.1> (4 ml) and the solution was treated with
<EMI ID = 79.1>
10% palladium (20 mg). The mixture was hydrogenated
at atmospheric pressure at 25 [deg.] C, for 1 hour and
it was then filtered. The filtrate was concentrated in vacuo to a volume of 2 ml and extracted with ethyl acetate. The aqueous fraction was chromatographed on a Dowex-50 X 4 type ion exchange column (sodium form), using deionized water as elution solvent. The desired fractions were combined and lyophilized to afford 6 - ethylidene-3- (2-aminoethyl) -thio-7-oxo-1-aza-
<EMI ID = 80.1>
EXAMPLE 9
6-ethyl-3- (2-aminoethyl) thio-7-oxo-1-azabicyclo- acid
<EMI ID = 81.1>
<EMI ID = 82.1>
A mixture of 6-ethyl-3- (2benzyloxycarbonylaminoethyl) -thio-7-oxo-1-azabicyclo- <EMI ID = 83.1> <EMI ID = 84.1> was hydrogenated
of 2.8 kg / cm2 for 1 hour. The mixture was filtered so as to separate the catalyst which was washed with
<EMI ID = 85.1> the washing liquors and the filtrate combined under vacuum to a volume of 2 ml and these 2 ml were introduced into a column of ion exchange resin of the type
<EMI ID = 86.1>
eluted the column with deionized water. The appropriate fractions were combined and lyophilized to afford 6-ethyl-3- (2-aminoethyl) - acid.
<EMI ID = 87.1>
than.
EXAMPLE 10
<EMI ID = 88.1>
<EMI ID = 89.1>
<EMI ID = 90.1>
P-nitrobenzyl 2-ene-2-carboxylate (20 mg) in 4 ml of ethanol. To this solution were added 2 ml of a 0.1 M phosphate buffer with a pH of 8.0 and 60 mg of carbon supporting 10% palladium. The mixture was stirred under an atmosphere of hydrogen at 25 [deg.] C for 75 minutes and then filtered to free it from the catalyst. The filtrate was neutralized to pH 7.0 with 2.5N hydrochloric acid, concentrated to a volume of 3 ml and quickly extracted with 5 ml of ether. The aqueous solution thus obtained
<EMI ID = 91.1>
sodium xylate.
EXAMPLE 11
Preparation of 6-ethyl-3- (2-aminoethyl) thio-7-oxo- acid
<EMI ID = 92.1>
<EMI ID = 93.1>
The solution obtained in Example was heated
<EMI ID = 94.1>
1 hour. The mixture was chromatographed on a Dowex-50 X 8 type ion exchange column (sodium form).
and elution was carried out with water to obtain 6-ethyl-3- (2-aminoethyl) thio-7-oxo-1-aza- acid.
<EMI ID = 95.1>
EXAMPLE 12
P-Nitrobenzyl ester of N- (p-nitrobenzyloxycar-
<EMI ID = 96.1>
Thienamycin (140 mg,
0.51mmol) in ice water (35ml) and the solution was treated with NaHCO- (428mg, 5.1mmol. Dioxane (35ml) was then added with stirring. and cooling in an ice bath After 3 minutes, a solution of p-nitrobenzyl chloroformate (165 mg) was added dropwise over the course of 2 minutes.
<EMI ID = 97.1>
in cold for 10 minutes and then extracted with ice-cold diethyl ether (2 x 20 mL). The aqueous phase was separated, covered with ice-cold ethyl acetate (35 ml) and acidified to pH.
<EMI ID = 98.1>
ice bath. We separated the layers and we extracted
the aqueous fraction with an additional quantity of cold ethyl acetate (2 x 5 ml). The combined ethyl acetate extracts were washed with cold brine and
they were then vigorously extracted with an aqueous solution of 0.05 N LiOH (10 ml). We submitted the extract
with LiOH to rotary evaporation so as to remove ethyl acetate and then lyophilization was carried out so as to obtain the lithium salt of crude N- (p-nitrobenzyloxycarbonyl) thienamycin (288 mg), under the form of a yellow solid.
A fraction of the crude lithium carboxylate (250 mg) and p-nitrobenzyl bromide were stirred
<EMI ID = 99.1>
at room temperature for 105 minutes. The mixture was diluted with ethyl acetate (60 mL). it was washed with water (2 x 50 ml), a solution of
<EMI ID = 100.1>
filtered and evaporated in vacuo to obtain a yellow solid (423 mg). This material was triturated with diethyl ether to remove excess p-nitrobenzyl bromide, and the residual crystals were filtered off and dried in vacuo to obtain p-nitrobenzyl ester. N- (p-nitrobenzyloxycarbonyl) thienamycin (126 mg), in the form of a yellow solid: mp 163.5-
<EMI ID = 101.1>
EXAMPLE 13
P-Nitrobenzyl ester of N- (p-nitrobenzyloxycar-
<EMI ID = 102.1>
<EMI ID = 103.1>
To a stirred ice-cold solution of N- (p-nitrobenzyloxycarbonyl) thienaaycine p-nitrobenzyl ester (186 mg, 0.32 mmol) in anhydrous tetrahydrofuran (9.5 mL) was added
Et N (89 (II, 0.64 mmol) and, dropwise over 2 minutes, a solution of methanesulfonyl chloride (55 mg, 0.48 mmol) in tetrahydrofuran (1.0 ml The resulting mixture was stirred in cold and under nitrogen for 90 minutes and then diluted with ice cold CH2Cl2 (50 µl). The solution was washed with cold water (20ml),
<EMI ID = 104.1>
and a cold 5% NaHCO3 solution (20 ml), it was
<EMI ID = 105.1>
empty so as to obtain a yellow mousse. This material was triturated with anhydrous diethyl ether to obtain the p-nitrobenzyl ester of N- (p-nitrobenzyloxycarbonyl) -o-methanesulfonyl thienamycin (192 mg) as a yellow solid.
<EMI ID = 106.1>
4.25; N, 8.43; S, 9.65. Found: C, 49.19; H, 4.36; N, 8.09; S, 9.61.
EXAMPLE 14
<EMI ID = 107.1>
A solution of p-nitrobenzyl ester of N- (p-nitrobenzyloxycarbonyl) 0-methanesulfonyl thienamycin (50 mg, 0.075 mmol) was treated.
<EMI ID = 108.1>
and NaHCO3 (12.6 ng, 0.15 mmol). The resulting mixture was stirred at room temperature for 17 hours. The precipitate was filtered off, washed with several fractions of water and dried under.
<EMI ID = 109.1>
(m, 1, -CH), 7.68 (m, ArH), and 8.25 (m, ArH); spectrum of
<EMI ID = 110.1>
EXAMPLE_15
6-ethyl-3- (2-aminoethyl) -thio-7-oxo-1-azabicyclo- acid
<EMI ID = 111.1> and at 25 [deg.] C, for 2.5 hours. The catalyst was filtered off and washed well with 0.1 M phosphate buffer pH 7 (5 ml). The washings and the combined filtrate were concentrated under. vacuum so as to remove most of the organic solvents. The aqueous residue was chromatographed on an ion exchange resin column.
of the Dowex-50 X 4 type (Na form); the product was eluted with deionized water. The appropriate fractions were combined and lyophilized from
<EMI ID = 112.1>
<EMI ID = 113.1>
To a solution of 50 mg of p-nitrobenzyl ester of N- (p-nitrobenzyloxycarbonyl) thienamycin in 0.5 ml of pyridine was added 20 mg of sulfur trioxide in pyridine. The mixture was allowed to react at 25 [deg.] C for 4 hours, then the excess pyridine was removed under reduced pressure. The residue was stirred with 20 ml of methylene chloride and 20 ml of 0.1% sodium bicarbonate solution for 30 minutes, then the aqueous layer was separated and lyophilized. The sodium salt of p-nitrobenzyl ester of 0-sulfo N- (p-nitrobenzyloxy-
<EMI ID = 114.1>
of dioxane 1: 1 and the solution was hydrogenated for 4 hours in the presence of 5.0 mg of a platinum oxide catalyst at a gauge pressure of
2.8 kg / cm2. The catalyst was filtered off and the filtrate was extracted twice with ethyl acetate. The aqueous layer was concentrated to a volume of 5 ml and chromatographed on 40 ml of an XAD-2 resin. The column was eluted with water and the fraction containing the sodium salt of O-sulfothienamycin was collected and lyophilized.
EXAMPLE 17
Preparation of pharmaceutical compositions
A unit dose form is obtained by mixing 120 mg of 3- (2-aminoethylthio) -6-ethyl-7- acid
<EMI ID = 115.1>
<EMI ID = 116.1>
introducing the 145 mg mixture into a gelatin capsule n [deg.] 3. Similarly, by using more active ingredient and less lactose, other unit doses can be obtained in gelatin capsules n [deg. .] 3 and, if it was necessary to mix
more than 145 mg of ingredients, larger capsules could be used to make tablets or pills. The following examples illustrate the preparation of pharmaceutical compositions.
<EMI ID = 117.1>
P.E.U.A. = pharmacopoeia of the United States of America.
The active ingredient is mixed with dicalcium phosphate, lactose and about half of the corn starch. The mixture is then granulated with a
<EMI ID = 118.1>
coarse sieving. The granules are dried at 45 [deg.] C and again sieved through n [deg.] 16 sieves. The rest of the corn starch and the magnesium stearate are added.
and compressing the mixture into tablets approximately 1.27 cm in diameter each weighing 800 mg.
PARENTAL SOLUTION
<EMI ID = 119.1>