ELI LILLY AND COMPANY
<EMI ID=1.1>
présentant une activité analgésique par administration parentérale.
Récemment, des substances endogènes ayant des propriétés du type morphine ont été extraites du cerveau ou du liquide cérébro- <EMI ID=2.1> par Hughes et al., Nature, 258, 577 (1975) comme étant des pentapeptides de formules suivantes :
H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-OH
H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-OH.
Ces composés sont appelés respectivement méthionine-enképhaline et leucine-enképhaline.
Bien que ces composés aient montré une activité analgésique chez les souris par administration dans les ventricules cérébraux
<EMI ID=3.1>
exempts de toute activité analgésique utile quand on les administre par voie parentérale.
On a maintenant découvert une nouvelle catégorie de composés qui présente une activité analgésique significative et démontrable quand on les administre de façon générale. C'est cette catégorie de composés que concerne cette invention.
Cette invention concerne donc une catégorie de composés de formule générale
<EMI ID=4.1>
et leurs sels d'addition d'acide non toxiques pharmaceutiquement
<EMI ID=5.1> <EMI ID=6.1>
un atome d'hydrogène ;
R3 est un atome d'hydrogène ou un groupement alkyle primaire
<EMI ID=7.1>
<EMI ID=8.1>
<EMI ID=9.1>
R6 est un atome d'hydrogène ou un groupement alkyle primaire
<EMI ID=10.1>
R7 est un atome d'hydrogène ou un groupement alkyle primaire
<EMI ID=11.1>
Y est un atome d'hydrogène ou un groupement acétyle ;
0
<EMI ID=12.1>
<EMI ID=13.1>
<EMI ID=14.1>
Une catégorie préférée de composes comprend ceux dans lesquels W est un groupement -CH2-X-CH3 et dans cette catégorie les composés dans lesquels X est le soufre.
<EMI ID=15.1>
acceptable3 compris dans le domaine des composés de formule (I) sont les sels d'addition d'acides organiques et minéraux, par exemple ceux préparés à partir des acides comme les acides chlorhydrique, sulfurique, sulfonique, tartrique, fumarique, bromhydrique, glycoli-
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hydrique, de l'acide acétique ou de l'acide succinique. Tous les sels précédents sont préparés par des procédés classiques.
Comme on le verra en se reportant à la définition des divers
<EMI ID=17.1> <EMI ID=18.1>
acide des pentapeptides de cette invention sont numérotés successivement en partant du reste ayant la fonction amine terminale., L'asymétrie des restes amino-acides, en lisant de la position 1 à la position 5, est ainsi L, D, L, L et L. Quand les composés qui sont définis par la formule (I) constituent un tétrapeptide, la séquence d'asymétrie précédente s'applique à l'exception que le reste amino-acide qui représente initialement la position 5 est omis. En outre, on notera que le reste en position 3 est défini de façon à comprendre un groupement glycine. Dans ce cas évidemment, il n'existe aucune asymétrie en ce qui concerne ce reste. Il est simplement important de noter que, quand la position 3 définit un reste amino-acide ayant une asymétrie, cette asymétrie doit être L.
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isopropyle.
<EMI ID=20.1>
définis de façon à comprendre les groupements "alkyle primaire en
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un groupement éthyle. Par le tprme "aralkyle", on designs les groupements aralkyle non substitués et substitués, et de préférence
<EMI ID=22.1> <EMI ID=23.1>
j-
quand il y en a un, est placé en position para. Un substituant très nettement préféré est le groupement méthoxy, et le groupement
<EMI ID=24.1>
En ce qui concerne la position particulière des restes de tétrapeptides et de pentapeptides de formule (I), les considérations suivantes prévalent :
(A). Position 1 .
Cette position représente la portion terminale à groupement amino du peptide. Le reste est celui qui vient de la L-tyrosine ou de la L-(O-acétyl-)tyrosine. Dans l'un ou l'autre des cas, le reste
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deux des atomes d'hydrogène. Il peut être substitué par un groupe-
<EMI ID=26.1>
reste peut être substitué par un ou deux groupements alkyle
<EMI ID=27.1>
est présent en position 1 du peptide de formule (I) n'est pas substitué sur l'azote. En outre, on préfère que le reste soit un reste tyrosyle .
(B). Position 2.
Le reste amino-acide qui est présent en deuxième position
<EMI ID=28.1>
quelconque de plusieurs restes d'amino-acide. Ils comprennent les
<EMI ID=29.1>
<EMI ID=30.1>
<EMI ID=31.1>
par N-méthyl-, N-éthyl- et N-n-propyl-. De préférence, l'aminoacide en position 2 n'est pas substitué sur l'azote, c'est-à-dire que R- est un atome d'hydrogène.
(C). Position 3.
<EMI ID=32.1>
provenant de la glycine (Gly) ou de l'un quelconque d'un groupe de L-amino-acides. Les amino-acides comprennent les suivants :
<EMI ID=33.1>
L-norleucine, L-leucine et L-isoleucine. De préférence, le reste en cette position du peptide est celui provenant de la glycine.
(D). Position 4.
Le reste d'amino-acide présent en cette position est celui
<EMI ID=34.1>
N-éthyl- ou N-n-propyl: De préférence, le reste n'est pas substitué
<EMI ID=35.1>
(E). Position 5.
(1). Pentapeptide.
En ce qui concerne les composés de formule (1) qui définissent
0
<EMI ID=36.1> <EMI ID=37.1>
substituants N-mêthyl-, N-éthyl-, et N-n-propyl-. De préférence,
<EMI ID=38.1>
<EMI ID=39.1>
représente l'amino-acide à groupement carboxyle terminal, il est présent sous forme d'un amide. De préférence, l'amide est non
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Cependant, le groupement amide peut être N-monosubstitué, le
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groupement amide terminal est un groupement N-méthyl-, N-éthyl-, N-n-propyl- ou N-isopropyl-.
(2). Tétrapeptide.
Il est également possible selon cette invention d'éliminer le
<EMI ID=42.1> <EMI ID=43.1>
fluorobenzylthio) éthyle.
Dans cette description, on utilise les abréviations suivantes dont la plupart sont bien connues et sont couramment utilisées dans la technique :
<EMI ID=44.1>
Ala - alanine Cys - cystéine Gly - glycine Hse - homosérine Ile - isoleucine Leu - leucine Met - méthionine
<EMI ID=45.1>
Nva - norvaline Phe - phénylalanine Ser - sérine Tyr - tyrosine Val - valide Ac - acétyle Me - méthyle Et - éthyle Ip - isopropyle Pr - n-propyle Bu - n-butyle i-Bu - isobutyle t-Bu - t-butyle
<EMI ID=46.1>
<EMI ID=47.1>
les suivants <EMI ID=48.1>
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L-Met-NH2;
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L-(N-Me)Met-NH2;
<EMI ID=49.1>
H-L-Tyr-D-Ala-L-Ala-L-Phe-L-(N-Me)Met-NH2;
H-L-Tyr-D-Ala-L-Abu-L-Phe-L-Met-NH2;
<EMI ID=50.1>
<EMI ID=51.1>
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-NH(�-pentyl):
H-L-Tyr-D-(N-Me)Ala-Gly-L-Phe-L-Met-NH2;
<EMI ID=52.1> Met-NH2;
(N-Me,N-Et)-L-Tyr(Ac)-D-(N-Pr)Nle-L-Ala-L-Phe-
L-(N-Me)Met-NH2;
(N,N-Di-Me)-L-Tyr(Ac)-D-(N-Et)Ile-L-Val-L-Phe-
L-(N-Pr)Met-NH2;
(N-Me)-L-Tyr(Ac)-D-(N-Me)Leu-Gly-L-Phe-L-(N-Et)-
Nle-NH2;
(N-Me)-L-Tyr(Ac)-D-(N-Me)Nva-L-Nva-L-Phe-L-
(N-Me) Hse (Me) -NH2;
<EMI ID=53.1>
methylthiopropyl);
(N-Pr)-L-Tyr(Ac)-D-(N-Me)Val-L-Leu-L-Phe-NH(n-
pentyl) ;
<EMI ID=54.1>
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-(N-Pr)Phe-L-(N-Me)Hse(Me)-
NH2;
<EMI ID=55.1>
<EMI ID=56.1> <EMI ID=57.1>
H-L-Tyr-D-Abu-Gly-L-Phe-L-(N-Me)Leu-NH2;
H-L-Tyr-D-Nva-Gly-L-Phe-L-(N-Me)Leu-NH2;
<EMI ID=58.1>
<EMI ID=59.1>
chloro-Bzl)-NH 2;
H-L-Tyr(Ac)-D-Ala-Gly-L-Phe-L-Ser(m-trifluoro-
<EMI ID=60.1>
Bzl)-NH�:
(N-Allyl)-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L-(N-Me)Leu-NH2;
(N-Et)-L-Tyr-D-Abu-L-Ala-L-Phe-L-(N-Et)Leu-NH2;
(N,N-di-Pr)-L-Tyr-D-Val-L-Ala-L-Phe-L-(N-Me)-
Leu-NH2 ;
<EMI ID=61.1>
(N,N-Di-Et)-L-Tyr-D-(N-Pr)Abu-L-Ala-L-Phe-L-
Leu-NH2;
(N-Me,N-Et)-L-Tyr(Ac)-D-(N-Pr)Nle-L-Ala-L-Phe-
<EMI ID=62.1>
Leu-NH 2;
(N-Me)-L-Tyr(Ac)-D-(N-Me)Nva-L-Nva-L-Phe-L-
<EMI ID=63.1>
méthylthioêthyl);
(N-Pr)-L-Tyr(Ac)-D-(N-Me)Val-L-Leu-L-Phe-N(Me)(3-
<EMI ID=64.1>
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L-Ser(Et)-NH(Me);
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L-(N-Me)Leu-NH(Me) ;
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L-(N-Et)Leu-NH(Me);
<EMI ID=65.1>
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L-(N-Et)Leu-NH(Et);
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L-(N-Me)Leu-NH(Me);
<EMI ID=66.1>
NH(Pr);
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L-(N-Pr)Leu-NH(Me);
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L-Cys(Ip)-NH(Pr);
<EMI ID=67.1>
L-(N-Me)Leu-NH(Me);
(N-Me)-L-Tyr-D-Ala-L-Val-L-{N-Me)Phe-L-(N-Pr)-
Ser(Bzl)-NH(Me);
<EMI ID=68.1> <EMI ID=69.1>
Phe-L-(N-Pr)Leu-NH(Et); et
(N-Me)-L-Tyr(Ac)-D-(N-Pr)Leu-L-Abu-L-(N-Me)Phe-
<EMI ID=70.1>
On prépare les composés de formule (I) par des procédés classiques pour la synthèse des peptides. Il est possible pendant la synthèse de certains des composés de formule (I) qu'une racémisation partielle puisse se produire. Cependant, le degré de racémisation s'il se produit n'est pas suffisant pour modifier de façon sérieuse l'activité analgésique des composes de formule (I).
Les procédés de préparation des composés de formule (I) comprennent la copulation d'aminc-acidesou de fragments peptidiques par réaction de la fonction carboxyle de l'un avec la fonction amine de l'autre pour produire une liaison amide. Pour effectuer de façon efficace la copulation, il est d'abord indiqué que toutes les fonctions réactives ne participant pas directement à la réaction soient inactivées par l'utilisation de groupements de blocage appropriés et ensuite que la fonction carboxyle qui doit être liée soit activée de façon appropriée pour permettre à la copulation de se faire. Tout ceci nécessite une sélection soigneuse de l'ordre des réactions et des conditions de réaction ainsi que
<EMI ID=71.1>
<EMI ID=72.1>
<EMI ID=73.1>
choisis de façon particulière, est préparé en utilisant des
<EMI ID=74.1> <EMI ID=75.1>
carbonyle (AdOC) et isobornyloxycarbonyle comme groupements de blocage du groupement amine dans la synthèse des composes de formule (I). En outre, le groupement benzyle .(Bzl) est généralement utilisé comme groupement protecteur du groupement hydroxy du reste
<EMI ID=76.1>
ments comme les groupements p-nitrobenzyle (PNB) et p-méthoxybenzyle (PMB).
Les groupements de blocage des groupements carboxyle utilisés pour préparer les composés de formule (I) peuvent être l'un quelconque des groupements types formant des esters, par exemple
<EMI ID=77.1>
<EMI ID=78.1>
La copulation du fragment peptidique ou de l'amine-acide N-bloqué,protégé de façon appropriée,avec un amino-acide ou un fragment peptidique à groupement carboxy protégé de façon appropriée, dans la préparation des composés de formule (I), consiste à rendre la fonction carboxyle libre de l'amino-acide ou du fragment peptidique,active vis-à-vis de la réaction de copulation. Ceci peut être effectué en utilisant l'une quelconque de plusieurs techniques bien connues. Une telle technique d'activation comprend
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mixte. On active la fonction carboxylique libre par réaction avec un autre acide, typiquement un-dérivé d'acide carbonique, comme un chlorure d'acide. Des exemples des chlorures d'acide utilisés pour former des anhydrides mixtes sont le chloroformiate d'éthyle, le chloroformiate de phényle, le chloroformiate de s-butyle, le chloroformiate d'isobutyle et le chlorure de pivaloyle. On utilise de préférence le chloroformiate d'isobutyle.
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dans le but d'effectuer la réaction de copulation est sa transformation en un de ses dérivés ester actif. De tels esters actifs
<EMI ID=81.1>
autre procédé de copulation dont on dispose est le procédé bien connu de copulation par l'azide.
<EMI ID=82.1> d'activation et de copulation est mise en oeuvre en utilisant
une quantité équimolaire de DCC par rapport à l'amino-acide.ou au fragment peptidique et on la met en oeuvre en présence d'une quantité équimolaire de 1-hydroxybenzotriazole (HBT). La présence de HBT supprime les réactions secondaires indésirables, y compris la possibilité de racémisation.
La coupure de groupements de blocage choisis est nécessaire à des moments particuliers de la séquence de synthèse utilisée dans la préparation des composés de formule (I). Un chimiste ayant des connaissances dans la synthèse des peptides peut facilement déterminer parmi les groupements protecteurs types les groupements qui sont compatibles, au sens que la coupure sélective du produit peut être effectuée en permettant l'élimination de l'un ou plusieurs
<EMI ID=83.1>
acide ou le fragment peptidique. Ces techniques sont bien connues dans le domaine. On trouvera une discussion plus complète des techniques dont on dispose pour la coupure sélective dans
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(1965), et en particulier dans le tableau pages 72 et 75 de cet ouvrage.
On peut effectuer par saponification alcaline la coupure des groupements protecteurs du groupement carboxyle. On utilise généralement pour désestérifier le groupement carboxyle protégé des conditions alcalines relativement fortes,en utilisant typiquement un hydroxyde de métal alcalin, comme 1'hydroxyde de sodium, l'hydroxyde de potassium et l'hydroxyde de lithium. Les conditions de réaction dans lesquelles s'effectue la saponification sont bien connues dans la technique. Les groupement e blocage
du groupement carboxyle peuvent également être éliminés par
<EMI ID=85.1>
on peut effectuer le déblocage par réduction en présence de zinc
<EMI ID=86.1>
<EMI ID=87.1>
sel d'addition d'acide correspondant. La coupure du groupement blocage du groupement aminé peut également être effectuée en traitant l'amino-acide ou le peptide bloqué, par un mélange de
<EMI ID=88.1>
ou chlorhydrate correspondant. Tous ces agents de déblocage sont donc un milieu acide essentiellement sec. Le procédé ou le réactif particulier que l'on utilisera dépendra des caractéristiques chimiques ou physiques des substances utilisées dans la réaction de déblocage particulière. On a découvert, dans le cas où le
<EMI ID=89.1>
un peptide contenant au moins trois restes amino-acides, qu'il est nettement préféré que le peptide soit débloqué par l'acide trifluoroacêtique ou l'acide formique pour produire le sel d'addition d'acide correspondant. Le sel peut être transformé en une forma
<EMI ID=90.1>
Amberlyst A27.
<EMI ID=91.1>
reste tyrosyle peut être conserve sur le peptide pendant toute sa préparation, en étant éliminé pendant l'étape de synthèse finale en même temps que la coupure du groupement de blocage du groupement
<EMI ID=92.1>
du groupement de blocage du groupement carboxyle, il peut être enlevé plus tôt dans la séquence de préparation. Quand le groupement carboxyle est coupé par saponification alcaline, le groupement protecteur du groupement hydroxy n'est pas affecte ;
<EMI ID=93.1>
<EMI ID=94.1>
<EMI ID=95.1>
<EMI ID=96.1> <EMI ID=97.1>
illustrant la préparation d'un pentapeptide de formule (I), peut être décrite comme suit. Dans la séquence de réaction, le symbole AA représente le reste d'amino-acide, et le numéro accolé représent la position de l'amino-acide dans la séquence peptidique finale.
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Le schéma précédent représente seulement une séquence de préparation des composés de formule (I). On dispose d'autres séquences de réaction. Un autre procédé que l'on peut utiliser comprend l'addition séquentielle par étapes d'amino-acides séparés dans la construction de la chaîne peptidique, en commençant par l'amino-acide terminal à groupement carboxamide. Un autre procédé que l'on peut encore utiliser comprend la synthèse peptidique en phase solide. Le reste à C-terminal est fixé à un support polymère approprié et on prolonge le peptide d'un reste à chaque fois jusqu'à ce qu'on ait synthétisé le peptide désiré toujours fixé au polymère. Le peptide est enlevé du polymère par un agent de déblocage approprié. Par exemple, un amino-acide N-méthylé à
<EMI ID=99.1>
t-butyloxycarbonyle, peut être copulé à un polymère de benzhydrylamine par activation par le dicyclohexylcarbodiimide. On enlève le groupement N-t-butyloxycarbonyle par réaction du reste fixé sur le polymère et de l'acide trifluoroacétique dans.le chlorure de méthylène. La neutralisation du sel polymère par une base tertiaire appropriée et l'addition d'un second résidu s'effectue de la même manière. Le peptide bloqué est enlevé du polymère par traitement
<EMI ID=100.1>
conditions particulières de cette synthèse sont connues de l'homme de l'art. On pourrait utiliser des techniques de réaction comme celles décrites précédemment dans cette séquence de réaction ainsi
<EMI ID=101.1>
Dans certains des composés de formule (I), un ou plusieurs des
<EMI ID=102.1>
<EMI ID=103.1>
<EMI ID=104.1>
<EMI ID=105.1>
<EMI ID=106.1>
Comme le schéma précédent le montre, on traite d'abord l'amino-acide par l'hydrure de potassium en présence d'un éther en couronne approprié, pour former le dianion. On traite ensuite l'intermédiaire par l'iodure d'alkyle ou d'allyle approprié pour
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alcalines comme celles que l'on utilise dans le procédé d'alkylation précédent. Le degré de racëmisation peut varier selon l'amino-acide particulier qui est. utilisé. On peut minimiser la racémisation en utilisant un excès de l'agent d'alkylation et en maintenant la
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même dans le cas où il peut se-produire une racëmisation excessive, on peut purifier le produit par recristallisation sous forme du sel d'une amine asymétrique appropriée, par exemple sous forme du
<EMI ID=109.1>
<EMI ID=110.1>
<EMI ID=111.1>
disubstituée désirée par le schéma suivant :
<EMI ID=112.1>
<EMI ID=113.1> <EMI ID=114.1>
décrit ci-dessus.
On transforme en son amide la portion à C terminal des peptides de formule (I). Dans les pentapeptides de formule (I) , l'amide est non substitué ou N-monosubstitué. Dans les tétrapeptides de formule (I), l'amide est N-monosubstitué ou N,N-disubstitué. La transformation en amide est effectuée en activant le groupement carboxyle de l'amino-acide par le N,N'-dicyclohexylcarbodiimide
<EMI ID=115.1>
l'ester de HBT. Dans la production des pentapeptides de formule
(I), on fait ensuite réagir l'ester avec l'ammoniac ou l'amine primaire appropriée pour obtenir l'amide non substitué ou l'amide N-monosubstitué. Des exemples des-amines primaires appropriées pour la préparation des pentapeptides de formule (I) comprennent
<EMI ID=116.1>
la N- [pound]3- (méthoxy ) propylj -N-propylamine , la N-n-pentyl-N-propylamine,
<EMI ID=117.1> <EMI ID=118.1>
la 2-benzylthioêthylamine,
<EMI ID=119.1>
On prépare les composés de formule (I) dans laquelle Y est un groupement acétyle à partir du peptide correspondant dans lequel Y est un atome d'hydrogène et le groupement amino terminal est bloqué de façon appropriée. On traite ce dernier composé par l'anhydride acétique en présence de pyridine pour former le
<EMI ID=120.1>
mélange d'acide chlorhydrique et d'acide acétique, on obtient le composé désiré.
Les composés de formule (I) sont des agents pharmaceutiques intéressants. Ils présentent une activité analgésique et ils sont particulièrement utiles par administration parentérale chez les mammifères y compris l'homme.
Les composés de formule (I) peuvent être administrés tels quels, ou bien ils peuvent être prépares selon des préparations pharmaceutiques, sous des formes posologiques unitaires pour l'administration parentérale. Dans la préparation, on peut utiliser des solides et/ou des liquides- organiques ou minéraux qui sont des supports pharmaceutiquement acceptables. De tels supports appropriés sont bien connus de l'homme de l'art. Les compositions peuvent prendre la forme de comprimés, de granules de poudre, de capsules, de suspensions, de solutions et d'autres formes appropriées.
Les composés de formule (I) , administrés en quantité efficace,
<EMI ID=121.1>
générale d'environ 0,1 mg à environ 100 mg par kilogramme de poids corporel du patient. L'intervalle de dose préféré est généralement
<EMI ID=122.1>
<EMI ID=123.1>
<EMI ID=124.1>
être considérés comme limitant le domaine de l'invention.
<EMI ID=125.1>
Exemple 1
Préparation du chlorhydrate de L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phényl-
<EMI ID=126.1>
monohydraté, on ajoute 25 g (0,281 mole) de D-alanine. On porte
le mélange à reflux et on en élimine/ par voie azéotrope dans un appareil Dean-Stark. On chauffe le mélange pendant 15 h puis on le refroidit jusqu'à la température ambiante et on le dilue avec de l'ëther. On recueille le précipité résultant et on le recristallise dans un mélange de méthanol et d'éther, ce qui donne 55,3 g (56 %) du composé cité en titre, p.f. 112-115[deg.]C.
Analyse, calculée pour C17H21N05S (351,42) :
C, 58,10 ; H, 6,02 ; N, 3,99
Trouvée, C, 58,19 ; H, 6,06 ; N, 3,82
<EMI ID=127.1>
<EMI ID=128.1>
et on le refroidit à 0[deg.]C et l'on ajoute 11,2 g (0,1 mole) de diazabicyclooctane (DABCO). On agite le mélange pendant 10 mn à 0[deg.]C
<EMI ID=129.1>
<EMI ID=130.1>
température ambiante pendant 24 h. Puis on refroidit le mélange à 0[deg.]C, on filtre la suspension résultante et on concentre le filtrat sous vide. On dissout de nouveau ensuite le résidu résultant dans
<EMI ID=131.1>
de l'eau, de l'acide citrique froid à 0,75 N et de J'eau. Puis on <EMI ID=132.1> <EMI ID=133.1>
d'eau, on ajoute 31,2 g (0,06 mole) du produit de la partie B. On refroidit à 0[deg.]C la solution résultante et on ajoute lentement
13,2 ml (1,1 équivalent) d'hydroxyde de sodium 5N. On agite le mélange résultant et on le laisse se réchauffer lentement jusqu'à
la température ambiante. Après 5 h, on répartit le mélange entre
de l'eau et de l'éther. On sépare la couche aqueuse et on la refroidit, on ajuste le pH à 2 par addition d'acide citrique et on extrait le mélange avec de l'acétate d'éthyle. On lave avec de l'eau l'extrait d'acétate d'éthyle, on le sèche sur sulfate de magnésium, on le filtre et on le dilue avec de l'éther. On recueille le précipité résultant et l'on obtient 17,7 g (67 %) du composé
<EMI ID=134.1>
Analyse, calculée pour C24H30N206 (442,51) :
C, 65,14 ; H, 6,83 ; N, 6,63
Trouvée, C, 64,73 ; H, 6,70 ; N, 6,20
<EMI ID=135.1>
de benzyle.
<EMI ID=136.1>
p-toluènesulfonique du glycinate de benzyle. On refroidit à 0[deg.]C le mélange résultant et on ajoute 2,24 g (0,020 mole) de DABCO. On agite le mélange pendant quelques minutes puis on ajoute 8,84 g
(0,020 mole) du produit de la partie C, puis 2,7 g (0,020 mole) de HBT et 4,12 g (0,020 mole) de DCC. On agite le mélange réactionnel pendant 2 h à 0[deg.]C puis pendant-24 h à la température ambiante. On refroidit à 0[deg.]C la suspension résultante, on la filtre et on concentre le filtrat sous vide. On dissout dans de l'acétate d'éthyle le résidu résultant et on le lave successivement avec du
<EMI ID=137.1>
froid et de l'eau. On sèche sur sulfate de magnésium la phase
<EMI ID=138.1>
<EMI ID=139.1>
du composé cité en titre pur, p.f. 145-147[deg.]C.
Analyse, calculée pour C33H39N307 (589,69) :
<EMI ID=140.1>
<EMI ID=141.1>
l'azote et on introduit de l'hydrogène par un tube de dispersion de <EMI ID=142.1>
<EMI ID=143.1>
par filtration le catalyseur. On concentre le filtrat sous vide. La trituration du résidu avec de l'éther donne 5,4 g (75 %) du composé cité en titre sous forme d'un solide amorphe.
<EMI ID=144.1>
C, 69,94 ; H, 5,87 ; N, 6,27
Trouvée, C, 70,08 ; H, 5,82 ; N, 6,16
<EMI ID=145.1>
carbonyl-L-méthionine (17,2 g, 0,04 mole) entre de l'acétate d'éthyle et de l'acide citrique 0,75 N froid. On sépare la phase organique résultante, on la lave avec de l'eau, on la sèche sur sulfate de magnésium, on la filtre et on la concentre sous vide jusqu'à un résidu huileux. On dissout le résidu dans un mélange de
<EMI ID=146.1>
<EMI ID=147.1>
au mélange refroidi résultant en 30 mn. On ajoute 2,49 ml
(0,04 mole) d'iodure de méthyle, et on agite le mélange pendant
24 h à la température ambiante. Puis on refroidit le mélange
<EMI ID=148.1>
puis on le répartit entre de 1 [deg.] eau et de l'éther. On lave la couche
<EMI ID=149.1>
<EMI ID=150.1>
acidifie à pH 2 et on les extrait avec de l'acétate d'éthyle. On sèche sur sulfate de magnésium l'extrait d'acétate d'éthyle, on filtre et on évapore sous vide, ce qui donne 8,4 g d'un produit
<EMI ID=151.1>
<EMI ID=152.1>
<EMI ID=153.1>
<EMI ID=154.1>
<EMI ID=155.1>
fractions provenant de la colonne et la combinaison ultérieure en fonction du profil en CCM donnent, après concentration sous vide, un produit que l'on recristallise deux fois dans un mélange d'éther et d'éther de pétrole pour obtenir 4,1 g (39 %) du composé cité en titre, p.f. 75-78[deg.]C.
<EMI ID=156.1>
<EMI ID=157.1>
<EMI ID=158.1>
C, 50,36 ; H, 8,45 ; N, 10,68
Trouvée, C, 50,59 ; H, 8,24 ; N, 10,87
G. N*-t-butl,-loxycarbonyl-L-phénylalanyl-Nck-méthyl-L-méthionylamide.
On prépare un mélange de 20 ml d'acide acétique glacial, de
2 ml d'anisole, de 2 ml de triéthylsilane et de 3,8 g (0,0144 sole} du produit de la partie F. On fait barboter du gaz chlorhydrique
<EMI ID=159.1>
<EMI ID=160.1>
<EMI ID=161.1>
refroidit le mélange à 0[deg.]C et on ajoute 2,9 ml (0,0146 mole) de
<EMI ID=162.1>
<EMI ID=163.1>
(0,0146 mole) de DCC. On agite le mélange résultant pendant 2 h à 0[deg.]C puis pendant 24 h à la température ambiante. On refroidit à 0[deg.]C le mélange et on le filtre. Puis on concentre BOUS vide le filtrat résultant. On redissout le résidu dans de l'acétate d'éthyle et on
<EMI ID=164.1>
de l'eau, de l'acide citrique 0,75 N et de l'eau. On sèche ensuite sur sulfate de magnésium la solution d'acétate d'éthyle et on
<EMI ID=165.1> et de méthanol. L'analyse par CCM des fractions de la colonne et la
<EMI ID=166.1> <EMI ID=167.1>
A un mélange de 20 ml d'acide acétique glacial, de 3 ml d'anisole et de 3 ml de triéthylsilane, on ajoute 2,2 g
(5,37 mmoles) du produit de la partie G. On fait barboter du gaz chlorhydrique sec dans le mélange pendant 30 mn. On ajoute de l'éther au mélange et il précipite un solide que l'on filtre et que l'on sèche sous vide. On dissout le solide (1,75 g, 5 mmoles) dans 30 ml de DMF sec et on refroidit le mélange à 0[deg.]C. On neutralise alors le chlorhydrate par addition de 0,99 ml (5 mmoles) de dicyclohexylamine. Après 5 mn, on ajoute 2,05 g (5 mmoles) du produit de la partie E, puis 0,68 g (5 mmoles) de HBT et 1,0 g
(5 mmoles) de DCC. Puis on agite le mélange pendant 24 h à 4[deg.]C.
On élimine par filtration la substance insoluble résultante et on évapore le filtrat sous vide. On redissout dans de l'acétate d'éthyle le résidu résultant, et on lave l'acétate d'éthyle successivement avec du bicarbonate de sodium aqueux 111, de l'acide
<EMI ID=168.1>
sur sulfate de magnésium et on l'applique sur une colonne de 3 x 50 cm de gel de silice (74-250 � ) et on élue avec du
<EMI ID=169.1>
L'analyse par CCM des fractions provenant de la colonne et la combinaison ultérieure en se basant sur le profil de CCM donnant
<EMI ID=170.1>
On purifie d avantage le premier lot par chromatographie prëparative sur couche épaisse sur gel de silice (chloroforme:méthanol 9:1) et l'on obtient 0,62 g du composé cité en titre sous forme d'un solide amorphe.
<EMI ID=171.1> <EMI ID=172.1> ajoute 0,72 g (1,03 mmole) du composé du titre de la partie H. On fait ensuite barboter dans le mélange pendant 20 mn du gaz chlorhydrique anhydre. On lyophilise le mélange et l'on obtient 0,74 g du composé cité en titre, Rf 0,3.
On sèche sous vide à 100[deg.]C un échantillon analytique du produit.
<EMI ID=173.1>
C, 54,66 ; H, 6,49 ; N, 13,19
Trouvée, C, 54,36 ; H, 6,19 : N, 13,00
Analyse des amino-acides, trouvée : Tyr, 1,01 ; Ala, 0,99 ;
<EMI ID=174.1>
Exemple 2
Préparation du monoacétate du sesqui-chlorhydrate de L-tyrosyl-D-
<EMI ID=175.1>
du dérivé de D-alinate. Rendement 73 %, p.f. 155-156[deg.]C.
Analyse, calculée pour C20H27N05S (393,50) :
<EMI ID=176.1>
<EMI ID=177.1>
<EMI ID=178.1>
benzyle
<EMI ID=179.1>
<EMI ID=180.1>
(0,020 mole) de DABCO. On agite le mélange pendant 5 mn puis on
<EMI ID=181.1>
<EMI ID=182.1>
<EMI ID=183.1>
<EMI ID=184.1> <EMI ID=185.1>
C, 71,06 ; H, 7,37 ; N, 4,87
Trouvée, C, 71,30 ; H, 7,15 ; N, 4,79
<EMI ID=186.1>
<EMI ID=187.1>
la partie B. Après addition de 20 ml d'eau, on refroidit à 0[deg.]C le mélange résultant, et on ajoute lentement 7,25 ml (0,0145 mole) d'hydroxyde de sodium 2N. Une fois l'addition terminée, on agite le mélange à 0[deg.]C pendant 30 mn puis à la température ambiante pendant 4 h. On répartit ensuite le mélange réactionnel entre de l'eau et de l'éther. On sépare la phase aqueuse, on la refroidit à 0[deg.]C, on l'acidifie à pH 2 avec HC1 IN froid et on l'extrait avec de l'acétate d'éthyle. Puis on lave à l'eau l'extrait d'acétate d'éthyle, on le sèche sur sulfate de magnésium, on le filtre et
on le concentre sous vide ce qui donne un résidu sirupeux. On cristallise le résidu dans un mélange d'éther et d'éther de pétrole, et l'on obtient 6,4 g (95 %) du composé cité en titre, p.f. 90-94[deg.]C.
<EMI ID=188.1>
C, 66,92 ; H, 7,49 ; N, 5,78
Trouvée, C, 67,14 ; H, 7,38 ; N, 5,76
<EMI ID=189.1>
de benzyle.
On prépare un mélange de 3,37 g (0,010 mole) du p-toluènesulfonate de glycinate de benzyle et de 1,12 g (0,010 mole) de
<EMI ID=190.1>
(0,010 mole) du composé de la partie C. Puis on refroidit le mélange à 0[deg.]C et on ajoute 1,35 g (0,010 mole) de HBT et 2,06 g
(0,010 mole) de DCC. On agite le mélange résultant pendant 2 h à 0[deg.]C puis pendant 24 h à la température ambiante. On refroidit le mélange à 0[deg.]C, on le filtre et on concentre le filtrat sous vide.
<EMI ID=191.1>
lave la solution d'acétate d'éthyle successivement avec du bicarbonate de sodium IN, de l'eau, de l'acide citrique 0,75 N
<EMI ID=192.1> <EMI ID=193.1>
A 5 ml de DMF anhydre, on ajoute 3,9 g (0,006 mole) du composé de la partie D, puis 1,5 g de Pd/C à 5 %. Au mélange on ajoute alors 40 ml d'éthanol, on le purge avec de l'azote et on introduit de l'hydrogène pendant 5 h, en maintenant le mélange à la pression atmosphérique et à la température ambiante. Puis on filtre le catalyseur du mélange et l'on évapore le filtrat sous vide. On cristallise le résidu résultant dans un mélange d'éther et d'acétate d'éthyle, et l'on obtient 2,3 g (85 %) du composé cité en titre, p.f. 189-190[deg.]C.
<EMI ID=194.1>
C, 58,52 ; H, 7,37 ; N, 9,31
Trouvée, C, 58,79 ; H, 7,48 ; N, 9,39
<EMI ID=195.1>
comme dans la partie H de l'Exemple 1) et 0,903 g (0,002 mole) du produit de la partie E. On refroidit à 0[deg.]C le mélange résultant et
<EMI ID=196.1>
0,27 g (0,002 mole) de HBT et 0,412 g (0,002 mole) de DCC. Puis on agite le mélange à 0[deg.]C pendant 2 h puis à 4[deg.]C pendant 24 h. On enlève par filtration le précipité résultant et on concentre le filtrat sous vide jusqu'à un résidu que l'on dissout alors dans de l'acétate d'éthyle. On lave la solution d'acétate successivement
<EMI ID=197.1>
0,75 N froid et de l'eau. Puis on sèche la phase organique sur sulfate de magnésium, on la filtre et on concentre le filtrat sous vide. On applique le résidu sur deux plaques de chromatographie prêparatives sur couche épaisse, et on élue les plaques avec un
<EMI ID=198.1> <EMI ID=199.1>
Gly, 1,00 ; Phe, 0,99
G. Monoacétate du sesquichlorhydrate de L-tyrosyl-D-leucyl-
<EMI ID=200.1>
A 5 ml d'acide acétique glacial contenant 0,3 ml d'anisole, on ajoute 0,900 g (0,0012 mole) du composé de la partie F. On fait barboter dans le mélange pendant 20 mn du gaz chlorhydrique sec. Puis on chasse le solvant par lyophilisation de l'acide acétique aqueux et l'on obtient le composé cité en titre sous forme d'un solide amorphe.
<EMI ID=201.1>
C, 53,93 ; H, 6,79 ; N, 11,10 Cl, 7,02 Trouvée, C, 54,30 ; H, 6,64 ; N, 11,32 ; Cl, 6,96 Analyse des amino-acides, trouvée : Tyr, 0,99 ; Leu, 1,03 ; Gly, 0,99 ; Phe, 0,99
Exemple 3
<EMI ID=202.1>
<EMI ID=203.1>
méthyle.
<EMI ID=204.1>
de L-méthionate de méthyle. On refroidit le mélange à 0[deg.]C et on
<EMI ID=205.1>
13,5 g (0,1 mole) de HBT et 20,6 g (0,1 mole) de DCC. On agite le mélange résultant à 0[deg.]C pendant 2 h puis à la température ambiante pendant 24 h. On refroidit à nouveau le mélange à 0[deg.]C et on enlève par filtration le précipité résultant. On concentre le filtrat sous vide. On dissout alors le résidu dans de l'acétate
<EMI ID=206.1>
<EMI ID=207.1>
A 60 ml de méthanol, on ajoute 13,0 g (0,032 mole) du composé de la partie A. On place la suspension résultante dans un récipient sous pression équipé d'un barreau d'agitation magnétique. On refroidit le mélange à -78[deg.]C et on ajoute 60 ml d'ammoniac liquide anhydre. On ferme le récipient de réaction et on le laisse se réchauffer jusqu'à la température ambiante. On agite le mélange pendant 24 h à la température ambiante. On refroidit de nouveau lentement le récipient à -78[deg.]C et on l'ouvre. On évapore l'ammoniac résiduel en chauffant le mélange et on recristallise dans le
<EMI ID=208.1>
obtient 9,7 g (77 %) du composé cité en titre, p.f. 192-195[deg.]C.
Analyse, calculée pour C19H29N304S (395,52) :
C, 57,70 ; H, 7,39 ; N, 10,62
Trouvée, C, 57,41 ; H, 7,17 ; N- 10,37
C. Chlorhydrate de L-phênylalanyl-L-méthionylamide.
A 150 ml d'acide acétique glacial contenant 10 ml d'anisole et 10 ml de triéthylsilane, on ajoute 9,6 g (0,024 mole) du produit de la partie B. Puis on introduit du gaz chlorhydrique anhydre par un tube de dispersion de gaz. Au bout de 30 mn, on dilue avec de l'éther le mélange réactionnel. On recueille le précipité résultant et on le recristallise dans un mélange d'éthanol et d'éther, ce qui donne 7,5 g (94 %) du composé cité en titre, p.f.,214-216[deg.]C.
<EMI ID=209.1>
C, 50,67 ; H, 6,68 ; N, 12,66
Trouvée, C, 50,75 ; H, 6,84 ; N, 12,54
<EMI ID=210.1>
méthionylamide.
A 40 ml de DMF, on ajoute 1,66 g (0,005 mole) du produit de la partie C. On ajoute 0,99 ml (0,005 mole) de dicyclohexylamine et on
<EMI ID=211.1>
0,68 g (0,005 mole) de HBT et 1,03 g (0,005 mole) de DCC. On agite le mélange résultant pendant 2 h à 0[deg.]C puis à la température ambiante pendant 24 h. Après un nouveau refroidissement du mélange
<EMI ID=212.1>
filtrat sous vide. On dissout dans de l'acétate d'éthyle le résidu
<EMI ID=213.1>
de magnésium, on la filtre et on l'évapore sous vide. Puis on <EMI ID=214.1> la cristallisation. On filtre le gel et l'on sèche le solide
<EMI ID=215.1>
que monohydraté et on agite le mélange pendant 5 h. On recueille par filtration le précipité résultant et on le sèche, ce qui donne
<EMI ID=216.1>
<EMI ID=217.1>
0,336 g (0,003 mole) de DABCO puis, après 10 mn, 0,8 g
<EMI ID=218.1>
<EMI ID=219.1>
<EMI ID=220.1>
<EMI ID=221.1>
<EMI ID=222.1>
<EMI ID=223.1>
<EMI ID=224.1>
l'eau, de l'acide citrique 0,75 N froid et de l'eau. On sécha la phase organique sur sulfate de magnésium, on la filtre et on la concentre sous vide. On dissout le résidu résultant dans de
<EMI ID=225.1> <EMI ID=226.1>
précipite qui s'est formé et on concentre le filtrat sous vide. Puis on dissout le résidu résultant dans du n-butanol et on lave la solution successivement avec du bicarbonate de sodium IN, de l'eau, de l'acide citrique froid 0,75 N et de l'eau. Puis on sèche sur sulfate de magnésium la phase organique et on la filtre, et on concentre le filtrat sous vide. Des essais de recristallisation du résidu dans l'acétate d'éthyle ou dans l'êthanol donnent des gels. On dissout alors le résidu dans du méthanol chaud et on applique la solution sur une plaque de chromatographie préparative sur couche épaisse et on élue avec un mélange 9:1 de chloroforme et de
<EMI ID=227.1>
trait avec le mélange chloroforme-méthanol. On évapore le solvant sous vide, ce qui donne 0,270 g (21 %) du composé cité en titre,
<EMI ID=228.1>
Analyse des amino-acides, trouvée : Tyr, 1,00 ; Ala, 1,02 ;
<EMI ID=229.1>
introduit du gaz chlorhydrique anhydre par un tube de dispersion de gaz pendant 20 mn. Puis on congèle le mélange résultant et on
<EMI ID=230.1>
<EMI ID=231.1>
<EMI ID=232.1>
<EMI ID=233.1>
L'analyse indique la présence du suif oxyde de méthionine.
Exemple
<EMI ID=234.1> <EMI ID=235.1> d'iodure de méthyle., On poursuit l'agitation à la température ambiante pendant 24 h. Puis on verse le mélange sur de la glace pilée et on l'extrait avec de l'éther. On acidifie la phase aqueuse à pH 2 avec de l'acide citrique puis on l'extrait avec de l'acétate d'éthyle. On lave alors la phasè organique avec de l'eau, on la sèche sur sulfate de magnésium et on la concentre sous vide, ce qui donne un sirop qui ne cristallise pas. Le spectre RMN du sirop est compatible avec le dérivé attendu :
<EMI ID=236.1>
l'éther et on ajoute 4,0 ml de dicyclohexylamine. Des cristaux se forment par refroidissement. On recueille le précipité et on le recristallise dans un mélange de méthanol et d'éther, ce qui donne 6,8 g (74 %) du composé cité en titre, p.f. 171-174[deg.]C.
<EMI ID=237.1>
C, 70,40 ; H, 9,63 ; N, 6,08
Trouvée, C, 70,60 ; H, 9,49 ; N, 6,19
<EMI ID=238.1>
L-mêthionylamide.
<EMI ID=239.1>
<EMI ID=240.1>
<EMI ID=241.1>
<EMI ID=242.1>
(0,010 mole) de DCC. On agite le mélange résultant pendant 2 h à 0[deg.]C puis pendant 24 h à la température ambiante. On élimine par filtration le précipité résultant et on concentre le filtrat sous vide jusqu'à un sirop que l'on redissout dans de l'acétate
<EMI ID=243.1>
<EMI ID=244.1>
mole) du produit de la partie-B. On introduit du -gaz chlorhydrique anhydre par un tube de dispersion de gaz pendant 30 mn, puis on dilue le mélange réactionnel avec de l'éther. On recueille le précipité résultant et on le sèche (1,1 g) puis on le redissout dans 40 ml de DMF. On refroidit alors à 0[deg.]C le mélange réactionnel et on ajoute 1,27 g (0,031 mole) du produit de la partie E de l'Exemple 1, 0,420 g (0,0031 mole) de HBT et 0,640 g (0,0031 mole)
<EMI ID=245.1>
amine et on poursuit l'agitation à 0[deg.]C pendant 2 h puis à 4[deg.]C pendant 48 h. On élimine par filtration le précipité résultant et on concentre le filtrat -sous vide jusqu'3 un résidu sirupeux que l'on dissout alors à nouveau dans de l'acétate d'éthyle. On lave la solution d'acétate d'éthyle successivement avec du bicarbonate
<EMI ID=246.1>
l'eau puis on la sèche sur sulfate de magnésium, on la filtre et on concentre sous vide, ce qui donne 2,0 g de produit brut. On dissout le produit dans du chloroforme et on l'applique à une
<EMI ID=247.1>
avec du chloroforme puis un mélange 9:1 de chloroforme et de méthanol. L'analyse par CCM des fractions provenant de la colonne et la combinaison ultérieure de ces fractions en se basant sur le profil de CCM donnent, après concentration sous vide, 1,1 g (47 %) du composé cité en titre non cristallisé.
<EMI ID=248.1>
d'anisole, on ajoute 0,70 g (0,001 mole) du produit de la partie C.
On introduit du gaz chlorhydrique sec par un tube de dispersion
<EMI ID=249.1>
<EMI ID=250.1>
C, 51,08 ; H, 7,0 ; N, 11,91
Trouvée, C, 51,13 ; H, 6,97 ; N, 11,72
Analyse des amino-acides, trouvée : Tyr, 1,03 ; Ala, 1,01 ; Gly, 0,96.
Exemple 5
Préparation du mono-acétate du chlorhydrate (1,25 HC1) du L-
<EMI ID=251.1>
alinate de benzyle.
A une solution de 3,19 g (0,010 mole) du p-toluènesulfonate d'alinate de benzyle dans 30 ml de DMF sec, on ajoute 4,43 g
(0,010 mole) du produit de la partie B de' l'Exemple 1.'On refroidit à 0[deg.]C le mélange résultant et on ajoute 1,12 g (0,010 mole) puis en 10 mn 1,135 g (0,010 mole) de HBT et 2,06 g (0,010 mole) ce DCC. On agite le mélange résultant à 0[deg.]C pendant 2 h puis à la
<EMI ID=252.1>
précipité résultant et on évapore le filtrat sous vide jusqu'à un sirop. On dissout à nouveau le sirop dans de l'acétate d'éthyle et on lave la solution d'acétate d'éthyle successivement avec du bicarbonate de sodium IN, de l'eau, de l'acide chlorhydrique 0,75 N froid et de l'eau. Puis on sèche la phase organique sur sulfate de magnésium et on la filtre, et on concentre le filtrat sous vide, ce qui donne un résidu qui ne cristallise pas dans l'éthanol ou l'éther. La dilution de la solution éthérée avec de l'éther de pétrole donne un gel que l'on recueille par filtration et que l'on sèche sous vide. On applique le solide amorphe impur
(4,0 g) sur une colonne de 3 x 50 cm de gel de silice (74-250
<EMI ID=253.1>
<EMI ID=254.1>
<EMI ID=255.1>
<EMI ID=256.1>
solvant sous vide donnent un résidu sirupeux. On dissout ce
<EMI ID=257.1>
<EMI ID=258.1>
A 5 ml de DMF sec, on ajoute 2,9 g (0,0048 mole) du produit de la partie A. Au mélange, on ajoute alors 1,0 g de Pd/C à 5 % puis 50 ml d'éthanol. On introduit de l'hydrogène à la pression atmosphérique et à la température ambiante par un tube de dispersion de gaz, pendant 6 h. Puis on purge avec de l'azote le récipient de réaction, on recueille le catalyseur par-filtration et on concentre le filtrat sous vide. On dissout le résidu dans de l'acétate d'éthyle et on dilue la solution avec de l'éther. On recueille par filtration le précipité résultant et on le sèche sous vide, ce qui donne 1,5 g (74 %) du composé cité en titre sous forme d'un solide amorphe.
<EMI ID=259.1>
Analyse, calculée pour C20H29N307 (423,47) :
C, 56,73 ; H, 6,90 ; N, 9,92
<EMI ID=260.1>
<EMI ID=261.1>
connue dans la partie H de l'Exemple 1). On refroidit le mélange à 0[deg.]C et on ajoute 0,28 ml (0,002 mole) de triêthylamine. On agite le mélange réactionnel pendant 10 mn, et on ajoute 0,846 g (0,002 mole) du produit de la partie B, puis 0,270 g (0,002 mole) de HBT et 0,412 g (0,002 mole) de DCC. On agite le mélange résultant à 0[deg.]C pendant 2 h puis à la température ambiante pendant 48 h. Après un nouveau refroidissement du mélange à 0[deg.]C, on le filtre et on concentre le filtrat sous vide. On redissout le résidu dans de l'acétate d'éthyle et on lave la solution d'acétate d'éthyle
<EMI ID=262.1>
l'acide citrique 0,75 N froid et de l'eau. Puis on sôche la phase
<EMI ID=263.1>
<EMI ID=264.1>
le produit dans du chloroforme et on l'applique sur deux plaques
<EMI ID=265.1>
<EMI ID=266.1>
<EMI ID=267.1> <EMI ID=268.1>
<EMI ID=269.1>
MeOH)
<EMI ID=270.1>
C, 58,80 ; H, 7,05 ; N, 11,76
Trouvée, C, 58,60 ; H, 6,87 ; N, 11,53
D. Mono-acétate du chlorhydrate de L-tyrosyl-D-alanyl-L-
<EMI ID=271.1>
A 5 ml d'acide acétique glacial contenant 0,5 ml d'anisole, on ajoute 0,880 g (0,0011 mole) du produit de la partie C. On introduit du gaz chlorhydrique anhydre par un. tube de dispersion de gaz pendant 20 mn. Puis on congèle le mélange réactionnel et on le lyophilise, ce qui donne 0,704 g du composé cité en titre ;
<EMI ID=272.1>
<EMI ID=273.1>
C, 53,43 ; H, 6,45 ; N, 11,68 ; Cl, 6,16 Trouvée, C, 53,48 ; H, 6,47 ; N, 11,62 ; Cl, 6,50 Analyse des amino-acides, trouvée : Tyr, 1,00 ; Ala, 1,99 ; Phe, 1,01.
Exemple 6
Préparation de l'acétate de L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-
<EMI ID=274.1>
nel 44,8 ml (0,336 mole) de tétraméthylguanidine et 66,8 ml
(0,336 mole) de dicyclohexylamine. Puis on ajoute goutte à goutte
<EMI ID=275.1>
<EMI ID=276.1>
<EMI ID=277.1>
couche aqueuse. On sépare et on rejette la couche organique. Puis
<EMI ID=278.1> <EMI ID=279.1>
<EMI ID=280.1>
159[deg.]C.
<EMI ID=281.1>
Analyse, calculée pour C22H42N204S (430,6) :
C, 61,36 ; H, 9,83 ; N, 6,51
Trouvée, C, 61,37 ; H, 9,98 ; N, 6,26
<EMI ID=282.1>
par neutralisation du produit de la partie A et extraction dans de l'acétate d'éthyle). On ajoute goutte à goutte en 30 mn le mélange résultant à une suspension mécaniquement agitée de 42,45 g d'une suspension d'hydrure de potassium (22,1 % de KH dans l'huile minérale ; 0,234 mole de KH) dans 375 ml de THF à 0[deg.]C et contenant 0,5 g d'éther (6) en couronne (18). On ajoute goutte à goutte en
15-20 minutes 9,25 ml (0,149 mole) d'iodure de méthyle dans 20 ml
<EMI ID=283.1>
<EMI ID=284.1>
5 ml d'éthanol. Puis on verse sur de la glace le mélange réactionnel résultant et on ajuste le pH du mélange à environ 9 par addition d'hydroxyde de sodium 2N. On extrait avec de l'éther la solution aqueuse résultante. Puis on ajuste à 3 le pH de la couche aqueuse par addition d'acide citrique solide et on extrait à nouveau avec trois portions de 300 ml d'éther. On réunit: les extraits éthérés, on les extrait en retour avec de l'eau, on les sèche sur sulfate de magnésium et on les concentre sous vide. On dissout le résidu résultant dans 200 ml d'éther, et on ajoute
<EMI ID=285.1>
mélange et on ajoute 500 ml d'éther de pétrole. Il ne se produit
<EMI ID=286.1>
<EMI ID=287.1>
On dissout le produit (6,5 g, 0,025 mole) dans 80 ml de DMF et <EMI ID=288.1>
on refroidit le mélange à -15[deg.]C. On ajoute 3,6 ml (0,027 mole) de
<EMI ID=289.1>
morpholine. On agite le mélange résultant pendant 10 mn à -15[deg.]C puis on fait barboter de l'ammoniac anhydre dans le mélange réactionnel pendant 1 h. On agite le mélange 4 h supplémentaires
à -15[deg.]C puis on le verse sur un mélange de glace et de bicarbonate de sodium IN. On extrait avec de l'éther la couche aqueuse froide. On extrait ensuite l'extrait éthéré avec de l'acide citrique 0,75 N froid et de l'eau, on sèche sur sulfate de magnésium et on concentre sous vide, ce qui donne un résidu qui cristallise dans un mélange d'éther et d'éther de pétrole en donnant 1,7 g (26 %) du composé cité en titre, p.f. 56-59[deg.]C.
<EMI ID=290.1>
<EMI ID=291.1>
<EMI ID=292.1>
<EMI ID=293.1>
<EMI ID=294.1>
<EMI ID=295.1>
cystêinylamide.
<EMI ID=296.1>
<EMI ID=297.1>
<EMI ID=298.1>
barboter dans le mélange pendant 30 mn du gaz chlorhydrique sec
<EMI ID=299.1>
(1,8 g). On dissout le précipite dans 25 ml de DMF. On refroidit
<EMI ID=300.1> <EMI ID=301.1>
<EMI ID=302.1>
combinaison des fractions appropriées et évaporation du solvant sous vide, 3,0 g du composé cité en titre.
<EMI ID=303.1>
<EMI ID=304.1>
C, 58,65 ; H, 7,63 ; N, 10,26
<EMI ID=305.1>
<EMI ID=306.1>
On dissout dans 150 ml d'alcool isopropylique le produit de l'hydrogénolyse (selon le procédé de la partie.E de l'Exemple 1)
<EMI ID=307.1>
glycinate de benzyle, et on ajoute 16 ml (0,081 mole) de dicyclohexylamine. On ajoute de l'éther pour porter le volume à environ 1,5 1. On triture la masse semi-solide jusqu'à ce qu'elle soit
<EMI ID=308.1>
<EMI ID=309.1>
<EMI ID=310.1>
d'alcool isopropylique. On réduit le volume de la solution, sous courant d'azote, à environ 150 ml. Par refroidissement, la cristallisation commence. On laisse le mélange reposer pendant une nuit et on recueille le précipité que l'on sèche, ce qui donne
41,44 g (88 %) du composé cité en titre, p.f. 198-200,5[deg.]C.
<EMI ID=311.1>
<EMI ID=312.1>
<EMI ID=313.1>
<EMI ID=314.1> le filtrat sous vide. On dissout le résidu dans de l'acétate d'éthyle et on extrait la solution d'acétate d'éthyle avec du bicarbonate de sodium IN, de l'eau, de l'acide citrique 0,75 N et de l'eau. On sèche la phase organique sur sulfate de magnésium et on l'évapore sous vide, ce qui donne 3,5 g du composé cité en titre brut. On dissout le produit dans du chloroforme et on l'applique sur une colonne 3 x 45 cm de gel de silice de qualité
62 de chez Grace and Davidson et on élue avec un gradient disconti-
<EMI ID=315.1>
les fractions en se basant sur leur profil en ÇCM et on les évapore sous vide, ce qui donne 2,4 g (62 %) du composé cité en
<EMI ID=316.1>
<EMI ID=317.1>
C, 58,27 ; H, 6,90 ; N, 11,99
<EMI ID=318.1>
<EMI ID=319.1>
A 20 ml d'acide acétique glacial contenant 2 ml d'anisole et 2 ml de triéthylsilane, on ajoute 2,2 g (3 mmoles) du produit de la partie E. On fait barboter du gaz chlorhydrique sec dans le mélange réactionnel pendant 25 mn. Puis on ajoute de l'éther au mélange et on le refroidit. On filtre et on sèche le précipite résultant (2,0 g). On dissout une portion du précipité (1,2 g) dans suffisamment de tampon (1 % de pyridine et 0,05 % d'acide acétique dans de l'eau) pour obtenir un total de 10 ml. On dépose la solution sur une colonne 2,5 x 99 cm de DEAE-Sephadex A 25
<EMI ID=320.1> <EMI ID=321.1>
Exemple 7
Préparation de l'acétate de L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phënyl-
<EMI ID=322.1>
oxycarbonyl-L-leucine hydratée. On sèche le mélange sur sulfate de magnésium et on le concentre sous vide. On dissout le résidu dans
75 ml de THF et on ajoute la solution résultante goutte à goutte en 35 ion à une suspension refroidie (0[deg.]C) mécaniquement agitée de
<EMI ID=323.1>
<EMI ID=324.1>
contenant 0,25 g d'éther (6) en couronne (18). On ajoute goutte à
<EMI ID=325.1>
maintient le mélange à 0[deg.]C pendant 3 h puis on ajoute goutte
<EMI ID=326.1>
<EMI ID=327.1>
<EMI ID=328.1>
On extrait la solution aqueuse avec de l'éther puis on l'acidifie
à pH 3 par addition d'acide citrique solide. On extrait ensuite la suspension aqueuse acidifiée avec de l'éther. On lave les extraits ethérés réunis avec de l'eau, on les sèche sur sulfate de magnésium
<EMI ID=329.1>
<EMI ID=330.1>
indique la présence d'une certaine quantité de substance de départ n'ayant pas réagi . On dissout le produit dans de l'éther et on ajoute 5,25 ml (0,05 mole) de t-butylamine. On dilue la solution éthérée avec de l'éther de pétrole et on la refroidit
<EMI ID=331.1>
<EMI ID=332.1>
<EMI ID=333.1>
<EMI ID=334.1>
<EMI ID=335.1>
produit de la partie A avec de l'acide citrique et extraction dans l'éther). On refroidit le mélange à -15[deg.]C puis on ajoute 6,7 ml
(0,052 mole) de chloroformiate d'isobutyle et 5,7 ml (0,052 mole) de N-méthylmorpholine. On agite le mélange pendant 10 mn à -15[deg.]C et on fait barboter de l'ammoniac anhydre dans le mélange réactionnel pendant 1 heure. On poursuit l'agitation pendant 4 h
à -15[deg.]C. On verse le mélange réactionnel sur un mélange de
<EMI ID=336.1>
avec de l'éther. Puis on extrait la couche éthérée avec de l'acide citrique 0,75 N et de l'eau, on la sèche sur sulfate de magnésium et on l'évapore sous vide. On cristallise le résidu dans un mélange d'éther et d'éther de pétrole, ce qui donne 5,5 g (48 'il du
<EMI ID=337.1>
<EMI ID=338.1>
C, 58,99 ; H, 9,90 ; N, 11,47
Trouvée, C, 59,17 ; H, 9,66 ; N, 11,21
<EMI ID=339.1>
amide
<EMI ID=340.1>
3 ml de triéthylsilane, on ajoute 5,0 g (0,02 mole) du produit de la partie B. On fait barboter du gaz chlorhydrique sec dans le mélange réactionnel pendant 25 mn. Puis on ajoute de l'éther et on refroidit le mélange. On recueille et on sèche le précipité résultant (3,6 g). On dissout le chlorhydrate recueilli dans 60 ml de DMF. On refroidit la solution résultante à 0[deg.]C et on ajoute 3,99 ml (0,02 mole) de dicyclohexylamine. On agite le mélange à 0[deg.]C
<EMI ID=341.1>
<EMI ID=342.1>
0[deg.]C puis à la température ambiante pendant 24 h. On refroidit le
<EMI ID=343.1>
<EMI ID=344.1>
<EMI ID=345.1>
<EMI ID=346.1>
l'applique sur une colonne 3 x 45 cm de gel de silice qualité 62 <EMI ID=347.1>
<EMI ID=348.1>
réunit les fractions en se basant sur leur profil en CCM et l'on obtient, après évaporation du solvant, 5,7 g (73 %) du composé
<EMI ID=349.1>
<EMI ID=350.1>
alanyl-N�-mêthyl-L-leucylamide.
<EMI ID=351.1>
glacial contenant 1 ml d'anisole, on ajoute 2,0 g du produit de la partie C. On maintient le mélange à la température ambiante pendant
30 mn puis on ajoute de l'éther. On refroidit le mélange, et on recueille le précipité résultant que l'on sèche (1,63 g). On
<EMI ID=352.1>
<EMI ID=353.1>
carbonyl-L-tyrosyl-D-alanyl-glycine. On agite le mélange pendant
15 mn à 0[deg.]C et on ajoute 0,675 g (0,005 mole) de HBT et 1,3 g
(0,005 mole) de DCC. On agite alors le mélange réactionnel pendant
24 h à 4[deg.]C. On recueille le précipité résultant et on concentre le filtrat sous vide. On dissout le résidu dans de l'acétate d'éthyle et on extrait la solution d'acétate d'éthyle avec du bicarbonate de sodium IN, de l'eau, de l'acide citrique 0,75 N et de l'eau. Puis on sèche la solution d'acétate d'éthyle sur sulfate de magnésium et on la concentre sous vide. On dissout dans du chloroforme le résidu résultant et on dépose la solution chloroformique sur une colonne 3 x 45 cm de gel de silice Woelm de qualité III. On élue
<EMI ID=354.1>
sur leur profil en CCM. Après évaporation du solvant, on obtient 2,3 g (67 %) du composa cité en titre.
<EMI ID=355.1>
Analyse, calculée pour C35H50N608 (682,8) :
C, 61,57 ; H, 7,38 ; N, 12,31
<EMI ID=356.1>
<EMI ID=357.1>
de triéthylsilane, on ajoute 1,8 g (0,003 mole) du produit de la <EMI ID=358.1>
3 h. Puis on dilue le mélange réactionnel avec de l'éther et on le laisse reposer pendant 1 heure. On décante l'éther de l'huile résultante et on dissout l'huile dans de l'éthanol. L'addition d'éther donne un précipité que l'on filtre.et que l'on sèche, ce qui donne 0,9 g du composé cité en titre brut. On dissout le produit dans suffisamment de solution tampon (1 % de pyridine et 0,05 % d'acide formique dans de l'eau) pour faire un total de
5,0 ml. On applique la solution sur une colonne 2,5 x 100 cm de DEAE-Sephadex A-25 (formiate) et on élue avec le même tampon. On réunit les fractions appropriées en se basant sur leur profil
<EMI ID=359.1>
sations dans de l'acide acétique à 10 % et dans un mélange à 75:25 d'eau et d'acétonitrile donnent 0,852 g du composé cité en titre.
<EMI ID=360.1>
Analyse des amino-acides, trouvée : Tyr, 1,02 ; Ala, 1,00 Gly, 1,01 ; Phe, 0,96 ; NH3, 1,03.
Exemple 8
Préparation du chlorhydrate de L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phënyl-
<EMI ID=361.1>
refroidi résultant, on ajoute 2,88 ml (0,022 mole) de chloroformiate d'isobutyle et 2,42 ml (0,022 mole) de N-méthylmorpholine. Après 15 mn, on fait barboter de l'ammoniac anhydre dans le mélange réactionnel pendant 1,5 h. On poursuit l'agitation à -15[deg.]C pendant 2 heures supplémentaires. On verse le mélange réactionnel dans un mélange de glace et de bicarbonate de sodium IN. On extrait la
<EMI ID=362.1>
citrique 0,75 N et de l'eau. Puis on sèche la couche organique sur sulfate de magnésium et on la concentre sous vide. On recristallise
<EMI ID=363.1>
<EMI ID=364.1>
Analyse, calculée pour C16H24N204S (340,4) :
<EMI ID=365.1> <EMI ID=366.1>
cystêinylamide.
On fait barboter du gaz chlorhydrique anhydre dans une solution de 4,1 g (0,012 mole) du produit de la partie A dans
45 ml d'acide acétique glacial, 5 ml d'anisole et 5 ml de triéthylsilane. Au bout de 20 mn, on ajoute de l'éther et l'on recueille le précipité résultant que l'on sèche (3,3 g). On dissout le chlorhydrate recueilli dans 50 ml de DMF et on ajoute 2,92 g (0,012 mole) de dicyclohexylamine, 3,19 g (0,012 mole) de
<EMI ID=367.1>
HBT. On agite le mélange pendant 10 mn à 0[deg.]C et on ajoute 2,47 g
(0,012 mole) de DCC. Au bout de 2 h à 0[deg.]C, on agite le mélange réactionnel à la température ambiante pendant 24 h puis on le refroidit à 0[deg.]C. On filtre le précipité résultant. On concentre le filtrat sous vide et on dissout le résidu résultant dans de l'alcool n-butylique. On extrait la solution avec du bicarbonate de sodium IN et de l'eau puis on la sèche sur sulfate de magnésium et on l'évapore sous vide. On recristallise le résidu résultant dans l'éthanol, ce qui donne 4,95 g (85 %) du composé cité en
<EMI ID=368.1>
<EMI ID=369.1>
C, 61,58 : H, 6,82 ; N, 8,62
Trouvée, C, 61,78 ; H, 6,78 ; N, 8,28
<EMI ID=370.1>
On fait barboter du gaz chlorhydrique anhydre dans une solution de 1,3 g (0,027 mole) du produit de la partie B dans 40 ml d'acide acétique glacial, 4 ml d'anisole et 4 ml de triéthylsilane. Au bout de 20 mn, on ajoute de l'éther au mélange et on recueille
<EMI ID=371.1>
<EMI ID=372.1>
l'acide citrique 0,75 N et de l'eau. Puis on sèche l'extrait sur Sulfata de magnésium et on le concentre sous vide. On dissout le résidu résultant dans de l'acétate d'éthyle et on le purifie par chromatographie sur colonne sèche sur du gel de silice de qualité
62 de chez Grâce and Davidson. On réunit les fractions en se basant sur leur profil en CCM et on les concentre, ce qui donne 1,1 g
<EMI ID=373.1>
<EMI ID=374.1>
<EMI ID=375.1>
C, 60,14 ; H, 6,14 ; N, 10,79
Trouvée, C, 59,95 ; H, 6,24 ; N, 10,53
Analyse des amino-acides, trouvée : Tyr, 0,98 ; Ala, 1,03 ;
<EMI ID=376.1>
D. Chlorhydrate de L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phénylalanyl-S-
<EMI ID=377.1>
<EMI ID=378.1>
<EMI ID=379.1>
<EMI ID=380.1>
Trouvée, C, 56,85 ; H, 6,06 ; N, 11,48 ; Cl, 5,21
Analyse des amino-acides, trouvée ; Tyr, 0,99 ; Ala, 1,01 ;
<EMI ID=381.1> <EMI ID=382.1>
puis 40 ml d'éthanol. On agite le mélange pendant 30 mn puis on le verse sur 2 1 de glace. On ajuste le pH du mélange aqueux à 7 avec de l'hydroxyde de potassium 2N. On entrait le mélange aqueux trois fois avec 400 ml d'éther puis on l'acidifie à pH 3 avec de l'acide citrique solide. On extrait le mélange trois fois avec 500 ml d'éther. On réunit les extraits éthérés, on les extrait, on les sèche sur sulfate de magnésium et on les évapore sous vide jusqu'à un sirop (44,76 g, 84 % du rendement théorique). On dissout le sirop dans 450 ml d'acétate d'éthyle et on ajoute 25,78 ml
<EMI ID=383.1>
frottement, la cristallisation se fait. On recueille par filtration le composé cité en titre, 51,05 g (66 %), p.f. 131-134[deg.]C.
<EMI ID=384.1>
<EMI ID=385.1>
C, 59,35 ; H, 8,39 ; 'il, 7,29
<EMI ID=386.1>
<EMI ID=387.1>
l'éther). On refroidit la solution à -15[deg.]C et on ajoute 18,3 ml
(0,14 mole) de chloroformiate d'isobutyle et 15,4 ml (0,14 mole)
<EMI ID=388.1>
et on fait barboter de l'ammoniac anhydre dans le mélange par un tube de dispersion de gaz pendant 1 heure. On agite le mélange
<EMI ID=389.1>
<EMI ID=390.1>
aqueuse avec de l'éther. On lave l'extrait éthéré avec de l'eau, de l'acide citrique 0,75 N froid et de l'eau, on le sèche sur
<EMI ID=391.1> <EMI ID=392.1>
du produit de la partie B. On fait barboter du gaz chlorhydrique anhydre dans le mélange résultant pendant 27 mn. Puis on verse le mélange dans de l'éther, et on recueille et on sèche le précipité résultant (9,9 g). On dissout le chlorhydrate dans 200 ml dé DMF. On refroidit le mélange à 0[deg.]C et on ajoute 9,9 ml (0,05 mole) de dicyclohexylamine. Après 10 mn d'agitation, on ajoute 6,8 g
<EMI ID=393.1>
phénylalanine et 10,3 g (0,05 mole) de DCC. On agite le mélange
<EMI ID=394.1>
ambiante. On refroidit le mélange à 0[deg.]C et on le filtre. On concentre ensuite sous vide le filtrat résultant jusqu'à une huile. On redissout l'huile dans de l'acétate d'éthyle et on lave la
<EMI ID=395.1>
<EMI ID=396.1>
<EMI ID=397.1>
vide, ce qui donne un résidu qui cristallise dans l'éther, 16,4 g
<EMI ID=398.1>
<EMI ID=399.1>
<EMI ID=400.1>
<EMI ID=401.1>
Trouvée, C, 58,76 ; H, 7,42 ; N, 10,30
<EMI ID=402.1>
A un mélange de 20 ml d'acide acétique glacial, de 2 ml d'anisole et de 2 ml de triéthylsilane, on ajoute 3,5 g (8,56 mmoles) du produit de la partie C. On fait barboter du gaz chlorhydrique anhydre dans le mélange pendant 25 mn. On ajoute de l'éther au mélange et on précipite le chlorhydrate que l'on filtre
<EMI ID=403.1>
<EMI ID=404.1> <EMI ID=405.1>
sulfate de magnésium et on 1[deg.] évapore sous vide. On chromatographie le résidu sur gel de silice Grace and Davidson de qualité 62, ce
<EMI ID=406.1>
<EMI ID=407.1>
Analyse, calculée pour C34H48N608S (700,86) :
<EMI ID=408.1>
Trouvée, C, 58,05 ; H, 6,62 ; N, 11,73
Analyse des amino-acides, trouvée : Tyr, 1,00 ; Ala, 1,01 ; Gly, 0,99 ; Phe, 1,00 ; NH3, 1,01.
<EMI ID=409.1>
A 15 ml de thioanisole, on ajoute 8,3 g (0,012 mole) du produit de la partie D. On refroidit le mélange à 0[deg.]C et on ajoute
<EMI ID=410.1>
<EMI ID=411.1>
<EMI ID=412.1>
<EMI ID=413.1>
<EMI ID=414.1>
<EMI ID=415.1>
de DEAE Sephadex A-25 (forme acétate) préalablement équilibrée
<EMI ID=416.1>
<EMI ID=417.1>
le tampon. On dissout le résidu dans environ 200 ml d'acide acétique
<EMI ID=418.1>
un mélange 3:1 d'eau et d'acëtonitrile donne 6,64 g (83 %) du
<EMI ID=419.1>
<EMI ID=420.1>
<EMI ID=421.1>
<EMI ID=422.1>
<EMI ID=423.1>
<EMI ID=424.1>
L'activité analgésique des composés de formule I est démontrée par l'essai de la plaque chaude sur la sciais. Dans cet essaie une
<EMI ID=425.1> <EMI ID=426.1>
d'essai puis on place la sourie sur-la surface de la plaque chaude. On note alors le temps de latence, en secondes jusqu'à apparition de chacun de deux phénomènes différents. On mesure d'abord le temps de latence jusqu'à ce que la souris soulève ses pattesarriêres et ensuite le temps de latence jusqu'à ce que la souris saute de la surface de la plaque chaude. Un agent présentant une activité analgésique produit une augmentation de ces deux temps de latence par rapport à ceux de souris témoins qui ne reçoivent en injection que le support. Ceci doit se produire pour un intervalle de dose qui ne produit pas d'incoordination ou d'incapacité motrices. Les tableaux suivants donnent les résultats obtenus dans cet essai,
en les comparant avec un témoin, avec l'enképhaline naturelle et avec l'enképhaline naturelle transformée en amide. Le tableau I donne le temps de latence pour le soulèvement de la patte arriêre ; le tableau II donne le temps de latence jusqu'au saut marquant la
<EMI ID=427.1>
pourcentage des animaux dans chaque groupe d'essai qui présentent un effet analgésique. Le critère permettant d'affirmer qu'il y a effet analgésique est le suivant : le temps de latence pour le soulèvement des pattes arrière ou le saut chez un animal traité doit être égal ou supérieur au temps de latence témoin moyen plus deux écarts standard de la moyenne. Chaque résultat fourni dans les tableaux I et II représente la valeur moyenne plus ou moins l'erreur type et le tableau III donne le pourcentage obtenu pour un nombre de souris donnant au moins 9 jusqu'à 40.
<EMI ID=428.1>
<EMI ID=429.1>
<EMI ID=430.1>
<EMI ID=431.1>
<EMI ID=432.1>
<EMI ID=433.1>
<EMI ID=434.1>
<EMI ID=435.1>
<EMI ID=436.1>
<EMI ID=437.1>
<EMI ID=438.1>
<EMI ID=439.1>
Notes
a. A moins d'indication contraire, les essais sont effectués en utilisant un témoin qui est la solution saline. Les numéros "1" et "2" apparaissant en indices supérieurs indiquent que le
<EMI ID=440.1>
<EMI ID=441.1>
présent sous forme de suspension.
c. Les désignations se réfèrent aux composés suivants :
A. Chlorhydrate de L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phénylalanyl-
<EMI ID=442.1>
B. Chlorhydrate de L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phénylalanylL-méthionylamide (Exemple 3)
C. Monoacétate du chlorhydrate(1,25 HC1) du L-tyrosyl-D-
<EMI ID=443.1>
5).
<EMI ID=444.1>
<EMI ID=445.1>
EJ = saut d'évasion
e. Quand on l'essaie à 0,3 mg/kg, le temps de latence pour le soulèvement des pattes arrière est 33,9 + 2,3 secondes, le temps de
<EMI ID=446.1>
réponse analgésique est 10 % pour HPL et 60 % pour EJ.
ELI LILLY AND COMPANY
<EMI ID = 1.1>
exhibiting analgesic activity on parenteral administration.
Recently, endogenous substances with morphine-like properties have been extracted from brain or cerebral fluid- <EMI ID = 2.1> by Hughes et al., Nature, 258, 577 (1975) as pentapeptides of the following formulas:
H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-OH
H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-OH.
These compounds are called methionine-enkephalin and leucine-enkephalin, respectively.
Although these compounds have shown analgesic activity in mice when administered to the ventricles of the brain
<EMI ID = 3.1>
free of any useful analgesic activity when administered parenterally.
A new class of compounds has now been discovered which exhibits significant and demonstrable analgesic activity when administered systemically. It is this class of compounds that this invention relates to.
This invention therefore relates to a class of compounds of general formula
<EMI ID = 4.1>
and their pharmaceutically non-toxic acid addition salts
<EMI ID = 5.1> <EMI ID = 6.1>
a hydrogen atom;
R3 is a hydrogen atom or a primary alkyl group
<EMI ID = 7.1>
<EMI ID = 8.1>
<EMI ID = 9.1>
R6 is a hydrogen atom or a primary alkyl group
<EMI ID = 10.1>
R7 is a hydrogen atom or a primary alkyl group
<EMI ID = 11.1>
Y is a hydrogen atom or an acetyl group;
0
<EMI ID = 12.1>
<EMI ID = 13.1>
<EMI ID = 14.1>
A preferred category of compounds includes those in which W is a -CH2-X-CH3 group and in this category the compounds in which X is sulfur.
<EMI ID = 15.1>
acceptable3 included in the field of compounds of formula (I) are the addition salts of organic and inorganic acids, for example those prepared from acids such as hydrochloric, sulfuric, sulphonic, tartaric, fumaric, hydrobromic, glycol-
<EMI ID = 16.1>
water, acetic acid or succinic acid. All of the foregoing salts are prepared by conventional methods.
As will be seen by referring to the definition of the various
<EMI ID = 17.1> <EMI ID = 18.1>
acid of the pentapeptides of this invention are numbered successively from the remainder having the terminal amine function., The asymmetry of the amino acid residues, reading from position 1 to position 5, is thus L, D, L, L and L. When the compounds which are defined by formula (I) constitute a tetrapeptide, the preceding asymmetry sequence applies except that the amino acid residue which initially represents the 5 position is omitted. In addition, it will be noted that the remainder in position 3 is defined so as to include a glycine group. In this case, of course, there is no asymmetry with regard to this remainder. It is simply important to note that, when position 3 defines an amino acid residue having an asymmetry, that asymmetry must be L.
<EMI ID = 19.1>
isopropyl.
<EMI ID = 20.1>
defined so as to understand the groups "primary alkyl in
<EMI ID = 21.1>
an ethyl group. By the term "aralkyl" we mean unsubstituted and substituted aralkyl groups, and preferably
<EMI ID = 22.1> <EMI ID = 23.1>
j-
when there is one, is placed in the para position. A very clearly preferred substituent is the methoxy group, and the group
<EMI ID = 24.1>
With regard to the particular position of the residues of tetrapeptides and pentapeptides of formula (I), the following considerations prevail:
(AT). Position 1.
This position represents the terminal amino moiety of the peptide. The rest is the one that comes from L-tyrosine or L- (O-acetyl-) tyrosine. In either case, the rest
<EMI ID = 25.1>
two of the hydrogen atoms. It can be substituted by a group-
<EMI ID = 26.1>
remainder can be substituted by one or two alkyl groups
<EMI ID = 27.1>
is present in position 1 of the peptide of formula (I) is not substituted on nitrogen. Further, it is preferred that the remainder is a tyrosyl residue.
(B). Position 2.
The amino acid residue which is present in the second position
<EMI ID = 28.1>
any of several amino acid residues. They understand the
<EMI ID = 29.1>
<EMI ID = 30.1>
<EMI ID = 31.1>
by N-methyl-, N-ethyl- and N-n-propyl-. Preferably, the amino acid in position 2 is not substituted on the nitrogen, that is to say that R- is a hydrogen atom.
(VS). Position 3.
<EMI ID = 32.1>
from glycine (Gly) or any one of a group of L-amino acids. Amino acids include the following:
<EMI ID = 33.1>
L-norleucine, L-leucine and L-isoleucine. Preferably, the remainder at this position of the peptide is that originating from glycine.
(D). Position 4.
The amino acid residue present in this position is that
<EMI ID = 34.1>
N-ethyl- or N-n-propyl: Preferably, the remainder is not substituted
<EMI ID = 35.1>
(E). Position 5.
(1). Pentapeptide.
With regard to the compounds of formula (1) which define
0
<EMI ID = 36.1> <EMI ID = 37.1>
N-methyl-, N-ethyl-, and N-n-propyl- substituents. Preferably
<EMI ID = 38.1>
<EMI ID = 39.1>
represents the amino acid with a terminal carboxyl group, it is present in the form of an amide. Preferably, the amide is not
<EMI ID = 40.1>
However, the amide group can be N-monosubstituted, the
<EMI ID = 41.1>
terminal amide group is an N-methyl-, N-ethyl-, N-n-propyl- or N-isopropyl- group.
(2). Tetrapeptide.
It is also possible according to this invention to eliminate the
<EMI ID = 42.1> <EMI ID = 43.1>
fluorobenzylthio) ethyl.
In this description, the following abbreviations are used, most of which are well known and are commonly used in the art:
<EMI ID = 44.1>
Ala - alanine Cys - cysteine Gly - glycine Hse - homoserine Ile - isoleucine Leu - leucine Met - methionine
<EMI ID = 45.1>
Nva - norvaline Phe - phenylalanine Ser - serine Tyr - tyrosine Val - valid Ac - acetyl Me - methyl Et - ethyl Ip - isopropyl Pr - n-propyl Bu - n-butyl i-Bu - isobutyl t-Bu - t-butyl
<EMI ID = 46.1>
<EMI ID = 47.1>
the following <EMI ID = 48.1>
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L-Met-NH2;
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L- (N-Me) Met-NH2;
<EMI ID = 49.1>
H-L-Tyr-D-Ala-L-Ala-L-Phe-L- (N-Me) Met-NH2;
H-L-Tyr-D-Ala-L-Abu-L-Phe-L-Met-NH2;
<EMI ID = 50.1>
<EMI ID = 51.1>
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-NH (� -pentyl):
H-L-Tyr-D- (N-Me) Ala-Gly-L-Phe-L-Met-NH2;
<EMI ID = 52.1> Met-NH2;
(N-Me, N-Et) -L-Tyr (Ac) -D- (N-Pr) Nle-L-Ala-L-Phe-
L- (N-Me) Met-NH2;
(N, N-Di-Me) -L-Tyr (Ac) -D- (N-Et) Ile-L-Val-L-Phe-
L- (N-Pr) Met-NH2;
(N-Me) -L-Tyr (Ac) -D- (N-Me) Leu-Gly-L-Phe-L- (N-Et) -
Nle-NH2;
(N-Me) -L-Tyr (Ac) -D- (N-Me) Nva-L-Nva-L-Phe-L-
(N-Me) Hse (Me) -NH2;
<EMI ID = 53.1>
methylthiopropyl);
(N-Pr) -L-Tyr (Ac) -D- (N-Me) Val-L-Leu-L-Phe-NH (n-
pentyl);
<EMI ID = 54.1>
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L- (N-Pr) Phe-L- (N-Me) Hse (Me) -
NH2;
<EMI ID = 55.1>
<EMI ID = 56.1> <EMI ID = 57.1>
H-L-Tyr-D-Abu-Gly-L-Phe-L- (N-Me) Leu-NH2;
H-L-Tyr-D-Nva-Gly-L-Phe-L- (N-Me) Leu-NH2;
<EMI ID = 58.1>
<EMI ID = 59.1>
chloro-Bzl) -NH 2;
H-L-Tyr (Ac) -D-Ala-Gly-L-Phe-L-Ser (m-trifluoro-
<EMI ID = 60.1>
Bzl) -NH �:
(N-Allyl) -L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L- (N-Me) Leu-NH2;
(N-Et) -L-Tyr-D-Abu-L-Ala-L-Phe-L- (N-Et) Leu-NH2;
(N, N-di-Pr) -L-Tyr-D-Val-L-Ala-L-Phe-L- (N-Me) -
Leu-NH2;
<EMI ID = 61.1>
(N, N-Di-Et) -L-Tyr-D- (N-Pr) Abu-L-Ala-L-Phe-L-
Leu-NH2;
(N-Me, N-Et) -L-Tyr (Ac) -D- (N-Pr) Nle-L-Ala-L-Phe-
<EMI ID = 62.1>
Leu-NH 2;
(N-Me) -L-Tyr (Ac) -D- (N-Me) Nva-L-Nva-L-Phe-L-
<EMI ID = 63.1>
methylthioethyl);
(N-Pr) -L-Tyr (Ac) -D- (N-Me) Val-L-Leu-L-Phe-N (Me) (3-
<EMI ID = 64.1>
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L-Ser (Et) -NH (Me);
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L- (N-Me) Leu-NH (Me);
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L- (N-Et) Leu-NH (Me);
<EMI ID = 65.1>
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L- (N-Et) Leu-NH (Et);
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L- (N-Me) Leu-NH (Me);
<EMI ID = 66.1>
NH (Pr);
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L- (N-Pr) Leu-NH (Me);
H-L-Tyr-D-Ala-Gly-L-Phe-L-Cys (Ip) -NH (Pr);
<EMI ID = 67.1>
L- (N-Me) Leu-NH (Me);
(N-Me) -L-Tyr-D-Ala-L-Val-L- {N-Me) Phe-L- (N-Pr) -
Ser (Bzl) -NH (Me);
<EMI ID = 68.1> <EMI ID = 69.1>
Phe-L- (N-Pr) Leu-NH (Et); and
(N-Me) -L-Tyr (Ac) -D- (N-Pr) Leu-L-Abu-L- (N-Me) Phe-
<EMI ID = 70.1>
The compounds of formula (I) are prepared by conventional methods for the synthesis of peptides. It is possible during the synthesis of some of the compounds of formula (I) that partial racemization may occur. However, the degree of racemization if it occurs is not sufficient to seriously alter the analgesic activity of the compounds of formula (I).
Methods of preparing compounds of formula (I) comprise the coupling of amino acids or peptide fragments by reacting the carboxyl function of one with the amine function of the other to produce an amide bond. In order to effect the coupling efficiently, it is first indicated that all the reactive functions not participating directly in the reaction are inactivated by the use of appropriate blocking groups and then that the carboxyl function which is to be linked is activated from appropriate way to allow copulation to take place. All this requires careful selection of the order of reactions and reaction conditions as well as
<EMI ID = 71.1>
<EMI ID = 72.1>
<EMI ID = 73.1>
specially chosen, is prepared using
<EMI ID = 74.1> <EMI ID = 75.1>
carbonyl (AdOC) and isobornyloxycarbonyl as blocking groups for the amine group in the synthesis of compounds of formula (I). In addition, the benzyl group (Bzl) is generally used as a protective group for the hydroxy group of the remainder
<EMI ID = 76.1>
elements such as p-nitrobenzyl (PNB) and p-methoxybenzyl (PMB) groups.
The blocking groups of the carboxyl groups used to prepare the compounds of formula (I) can be any of the typical ester-forming groups, for example
<EMI ID = 77.1>
<EMI ID = 78.1>
Coupling of the appropriately protected peptide or N-blocked amine-acid moiety with an appropriately protected amino acid or carboxy moiety peptide moiety in the preparation of the compounds of formula (I) consists of in making the carboxyl function free of the amino acid or of the peptide fragment, active vis-à-vis the coupling reaction. This can be done using any of several well known techniques. Such an activation technique comprises
<EMI ID = 79.1>
mixed. The free carboxylic function is activated by reaction with another acid, typically a carbonic acid derivative, such as an acid chloride. Examples of the acid chlorides used to form mixed anhydrides are ethyl chloroformate, phenyl chloroformate, s-butyl chloroformate, isobutyl chloroformate and pivaloyl chloride. Isobutyl chloroformate is preferably used.
<EMI ID = 80.1>
for the purpose of carrying out the coupling reaction is its transformation into one of its active ester derivatives. Such active esters
<EMI ID = 81.1>
Another method of coupling available is the well known method of coupling with azide.
<EMI ID = 82.1> activation and copulation is implemented using
an equimolar amount of DCC relative to the amino acid or to the peptide fragment and it is carried out in the presence of an equimolar amount of 1-hydroxybenzotriazole (HBT). The presence of HBT suppresses unwanted side reactions, including the possibility of racemization.
The cleavage of selected blocking groups is necessary at particular times of the synthetic sequence used in the preparation of the compounds of formula (I). A chemist skilled in the synthesis of peptides can easily determine which of the typical protective groups are compatible, in the sense that the selective cleavage of the product can be effected by allowing the removal of one or more.
<EMI ID = 83.1>
acid or the peptide fragment. These techniques are well known in the field. A fuller discussion of the techniques available for selective cleavage can be found in
<EMI ID = 84.1>
(1965), and in particular in the table on pages 72 and 75 of this work.
The cleavage of the protective groups of the carboxyl group can be carried out by alkaline saponification. Relatively strong alkaline conditions are generally used to deesterify the protected carboxyl group, typically using an alkali metal hydroxide, such as sodium hydroxide, potassium hydroxide and lithium hydroxide. The reaction conditions under which saponification takes place are well known in the art. Grouping and blocking
of the carboxyl group can also be removed by
<EMI ID = 85.1>
the release can be carried out by reduction in the presence of zinc
<EMI ID = 86.1>
<EMI ID = 87.1>
corresponding acid addition salt. The cleavage of the blocking group of the amino group can also be carried out by treating the blocked amino acid or peptide with a mixture of
<EMI ID = 88.1>
or corresponding hydrochloride. All these deblocking agents are therefore an essentially dry acidic medium. The particular method or reagent that will be used will depend on the chemical or physical characteristics of the substances used in the particular deblocking reaction. We have discovered, in the event that the
<EMI ID = 89.1>
a peptide containing at least three amino acid residues, which it is much preferred that the peptide be unblocked by trifluoroacetic acid or formic acid to produce the corresponding acid addition salt. Salt can be made into a forma
<EMI ID = 90.1>
Amberlyst A27.
<EMI ID = 91.1>
tyrosyl residue can be preserved on the peptide throughout its preparation, being removed during the final synthetic step at the same time as the cleavage of the blocking group of the group
<EMI ID = 92.1>
from the blocking group of the carboxyl group, it can be removed earlier in the preparation sequence. When the carboxyl group is cut by alkaline saponification, the protecting group of the hydroxy group is not affected;
<EMI ID = 93.1>
<EMI ID = 94.1>
<EMI ID = 95.1>
<EMI ID = 96.1> <EMI ID = 97.1>
illustrating the preparation of a pentapeptide of formula (I), can be described as follows. In the reaction sequence, the symbol AA represents the amino acid residue, and the appended number represents the position of the amino acid in the final peptide sequence.
<EMI ID = 98.1>
The preceding scheme represents only a sequence for preparing the compounds of formula (I). We have other reaction sequences. Another method that can be used involves the sequential addition of separate amino acids in stages in the construction of the peptide chain, starting with the terminal carboxamide amino acid. Yet another method which can be used comprises solid phase peptide synthesis. The C-terminal residue is attached to an appropriate polymeric support and the peptide is extended by a residue each time until the desired peptide still attached to the polymer has been synthesized. The peptide is removed from the polymer by an appropriate deblocking agent. For example, an N-methylated amino acid
<EMI ID = 99.1>
t-Butyloxycarbonyl, can be coupled to a benzhydrylamine polymer by activation with dicyclohexylcarbodiimide. The N-t-butyloxycarbonyl group is removed by reacting the residue attached to the polymer and trifluoroacetic acid in methylene chloride. Neutralization of the polymer salt with an appropriate tertiary base and the addition of a second residue is carried out in the same manner. The blocked peptide is removed from the polymer by processing
<EMI ID = 100.1>
particular conditions for this synthesis are known to those skilled in the art. One could use reaction techniques like those described previously in this reaction sequence as well.
<EMI ID = 101.1>
In some of the compounds of formula (I), one or more of
<EMI ID = 102.1>
<EMI ID = 103.1>
<EMI ID = 104.1>
<EMI ID = 105.1>
<EMI ID = 106.1>
As the previous scheme shows, the amino acid is first treated with potassium hydride in the presence of an appropriate crown ether, to form the dianion. The intermediate is then treated with the appropriate alkyl or allyl iodide for
<EMI ID = 107.1>
alkaline like those used in the previous alkylation process. The degree of racemization can vary depending on the particular amino acid that is. used. Racemization can be minimized by using an excess of the alkylating agent and maintaining the
<EMI ID = 108.1>
even in the case where excessive racemization may occur, the product can be purified by recrystallization as the salt of a suitable asymmetric amine, for example as the salt.
<EMI ID = 109.1>
<EMI ID = 110.1>
<EMI ID = 111.1>
disubstituted desired by the following diagram:
<EMI ID = 112.1>
<EMI ID = 113.1> <EMI ID = 114.1>
described above.
The C-terminal portion of the peptides of formula (I) is converted into its amide. In the pentapeptides of formula (I), the amide is unsubstituted or N-monosubstituted. In the tetrapeptides of formula (I), the amide is N-monosubstituted or N, N-disubstituted. The transformation into an amide is carried out by activating the carboxyl group of the amino acid with N, N'-dicyclohexylcarbodiimide
<EMI ID = 115.1>
the ester of HBT. In the production of the pentapeptides of the formula
(I), the ester is then reacted with ammonia or the appropriate primary amine to obtain the unsubstituted amide or the N-monosubstituted amide. Examples of primary amines suitable for the preparation of the pentapeptides of formula (I) include
<EMI ID = 116.1>
N- [pound] 3- (methoxy) propylj -N-propylamine, N-n-pentyl-N-propylamine,
<EMI ID = 117.1> <EMI ID = 118.1>
2-benzylthioethylamine,
<EMI ID = 119.1>
Compounds of formula (I) in which Y is an acetyl group are prepared from the corresponding peptide in which Y is a hydrogen atom and the terminal amino group is suitably blocked. The latter compound is treated with acetic anhydride in the presence of pyridine to form the
<EMI ID = 120.1>
mixture of hydrochloric acid and acetic acid, the desired compound is obtained.
Compounds of formula (I) are valuable pharmaceutical agents. They exhibit analgesic activity and are particularly useful by parenteral administration in mammals including humans.
The compounds of formula (I) can be administered as such, or they can be prepared according to pharmaceutical preparations, in unit dosage forms for parenteral administration. In the preparation, organic or inorganic solids and / or liquids which are pharmaceutically acceptable carriers can be used. Such suitable supports are well known to those skilled in the art. The compositions can take the form of tablets, powder granules, capsules, suspensions, solutions and other suitable forms.
The compounds of formula (I), administered in an effective amount,
<EMI ID = 121.1>
general from about 0.1 mg to about 100 mg per kilogram of the patient's body weight. The preferred dose interval is generally
<EMI ID = 122.1>
<EMI ID = 123.1>
<EMI ID = 124.1>
be considered as limiting the scope of the invention.
<EMI ID = 125.1>
Example 1
Preparation of L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenyl- hydrochloride
<EMI ID = 126.1>
monohydrate, 25 g (0.281 mol) of D-alanine are added. We wear
the mixture was refluxed and removed therefrom azeotropically in a Dean-Stark apparatus. The mixture was heated for 15 h then cooled to room temperature and diluted with ether. The resulting precipitate was collected and recrystallized from a mixture of methanol and ether to give 55.3 g (56%) of the title compound, m.p. 112-115 [deg.] C.
Analysis, calculated for C17H21N05S (351.42):
C, 58.10; H, 6.02; N, 3.99
Found, C, 58.19; H, 6.06; N, 3.82
<EMI ID = 127.1>
<EMI ID = 128.1>
and cooled to 0 ° C. and 11.2 g (0.1 mol) of diazabicyclooctane (DABCO) are added. The mixture is stirred for 10 min at 0 [deg.] C
<EMI ID = 129.1>
<EMI ID = 130.1>
room temperature for 24 h. The mixture is then cooled to 0 ° C., the resulting suspension is filtered and the filtrate is concentrated in vacuo. The resulting residue is then dissolved again in
<EMI ID = 131.1>
water, cold 0.75 N citric acid and water. Then on <EMI ID = 132.1> <EMI ID = 133.1>
of water, 31.2 g (0.06 mol) of the product of part B are added. The resulting solution is cooled to 0 [deg.] C and slowly added.
13.2 ml (1.1 equivalent) of 5N sodium hydroxide. The resulting mixture is stirred and allowed to warm slowly until
Room temperature. After 5 h, the mixture is distributed between
water and ether. The aqueous layer is separated and cooled, the pH is adjusted to 2 by addition of citric acid and the mixture is extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate extract is washed with water, dried over magnesium sulfate, filtered and diluted with ether. The resulting precipitate is collected and 17.7 g (67%) of the compound are obtained.
<EMI ID = 134.1>
Analysis, calculated for C24H30N2O6 (442.51):
C, 65.14; H, 6.83; N, 6.63
Found, C, 64.73; H, 6.70; N, 6.20
<EMI ID = 135.1>
benzyl.
<EMI ID = 136.1>
p-toluenesulfonic acid of benzyl glycinate. The resulting mixture is cooled to 0 ° C. and 2.24 g (0.020 mol) of DABCO are added. The mixture is stirred for a few minutes then 8.84 g are added.
(0.020 mole) of the product of part C, then 2.7 g (0.020 mole) of HBT and 4.12 g (0.020 mole) of DCC. The reaction mixture is stirred for 2 h at 0 [deg.] C then for 24 h at room temperature. The resulting suspension is cooled to 0 ° C., filtered and the filtrate concentrated in vacuo. The resulting residue is dissolved in ethyl acetate and washed successively with
<EMI ID = 137.1>
cold and water. The phase is dried over magnesium sulfate
<EMI ID = 138.1>
<EMI ID = 139.1>
of the pure title compound, m.p. 145-147 [deg.] C.
Analysis calculated for C33H39N3O7 (589.69):
<EMI ID = 140.1>
<EMI ID = 141.1>
nitrogen and hydrogen is introduced through a dispersion tube of <EMI ID = 142.1>
<EMI ID = 143.1>
by filtration the catalyst. The filtrate is concentrated in vacuo. Trituration of the residue with ether gives 5.4 g (75%) of the title compound as an amorphous solid.
<EMI ID = 144.1>
C, 69.94; H, 5.87; N, 6.27
Found, C, 70.08; H, 5.82; N, 6.16
<EMI ID = 145.1>
carbonyl-L-methionine (17.2 g, 0.04 mol) between ethyl acetate and cold 0.75 N citric acid. The resulting organic phase is separated, washed with water, dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated in vacuo to an oily residue. The residue is dissolved in a mixture of
<EMI ID = 146.1>
<EMI ID = 147.1>
to the resulting cooled mixture over 30 min. 2.49 ml are added
(0.04 mole) of methyl iodide, and the mixture is stirred for
24 h at room temperature. Then we cool the mixture
<EMI ID = 148.1>
then it is distributed between 1 [deg.] water and ether. We wash the diaper
<EMI ID = 149.1>
<EMI ID = 150.1>
acidified to pH 2 and extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate extract is dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated in vacuo to give 8.4 g of a product.
<EMI ID = 151.1>
<EMI ID = 152.1>
<EMI ID = 153.1>
<EMI ID = 154.1>
<EMI ID = 155.1>
fractions from the column and the subsequent combination according to the TLC profile give, after concentration in vacuo, a product which is recrystallized twice from a mixture of ether and petroleum ether to obtain 4.1 g ( 39%) of the title compound, mp 75-78 [deg.] C.
<EMI ID = 156.1>
<EMI ID = 157.1>
<EMI ID = 158.1>
C, 50.36; H, 8.45; N, 10.68
Found, C, 50.59; H, 8.24; N, 10.87
G. N * -t-butl, -loxycarbonyl-L-phenylalanyl-Nck-methyl-L-methionylamide.
Prepare a mixture of 20 ml of glacial acetic acid,
2 ml of anisole, 2 ml of triethylsilane and 3.8 g (0.0144 sole} of the product of part F. Hydrochloric gas is bubbled through
<EMI ID = 159.1>
<EMI ID = 160.1>
<EMI ID = 161.1>
the mixture is cooled to 0 [deg.] C and 2.9 ml (0.0146 mol) of
<EMI ID = 162.1>
<EMI ID = 163.1>
(0.0146 mol) of DCC. The resulting mixture is stirred for 2 h at 0 [deg.] C and then for 24 h at room temperature. The mixture is cooled to 0 [deg.] C and filtered. Then concentrate BOUS and empty the resulting filtrate. The residue is redissolved in ethyl acetate and
<EMI ID = 164.1>
water, 0.75 N citric acid and water. The ethyl acetate solution is then dried over magnesium sulfate and
<EMI ID = 165.1> and methanol. TLC analysis of column fractions and
<EMI ID = 166.1> <EMI ID = 167.1>
To a mixture of 20 ml of glacial acetic acid, 3 ml of anisole and 3 ml of triethylsilane, 2.2 g are added.
(5.37 mmol) of the product of part G. Dry hydrochloric gas is bubbled through the mixture for 30 min. Ether is added to the mixture and a solid precipitates which is filtered and dried in vacuo. The solid (1.75 g, 5 mmol) was dissolved in 30 ml of dry DMF and the mixture was cooled to 0 [deg.] C. The hydrochloride is then neutralized by adding 0.99 ml (5 mmol) of dicyclohexylamine. After 5 min, 2.05 g (5 mmol) of the product from part E are added, then 0.68 g (5 mmol) of HBT and 1.0 g
(5 mmol) of DCC. Then the mixture is stirred for 24 h at 4 [deg.] C.
The resulting insoluble substance is filtered off and the filtrate evaporated in vacuo. The resulting residue is redissolved in ethyl acetate, and the ethyl acetate washed successively with aqueous sodium bicarbonate 111, acid.
<EMI ID = 168.1>
over magnesium sulfate and applied to a 3 x 50 cm column of silica gel (74-250) and eluted with
<EMI ID = 169.1>
TLC analysis of fractions from the column and subsequent combination based on the TLC profile giving
<EMI ID = 170.1>
The first batch is further purified by preparative thick layer chromatography on silica gel (chloroform: methanol 9: 1) and 0.62 g of the title compound is obtained in the form of an amorphous solid.
<EMI ID = 171.1> <EMI ID = 172.1> adds 0.72 g (1.03 mmol) of the title compound from part H. Anhydrous hydrochloric gas is then bubbled through the mixture for 20 min. The mixture is lyophilized and 0.74 g of the title compound, Rf 0.3, is obtained.
An analytical sample of the product is dried under vacuum at 100 [deg.] C.
<EMI ID = 173.1>
C, 54.66; H, 6.49; N, 13.19
Found, C, 54.36; H, 6.19: N, 13.00
Amino acid analysis, found: Tyr, 1.01; Ala, 0.99;
<EMI ID = 174.1>
Example 2
Preparation of L-tyrosyl-D- sesqui-hydrochloride monoacetate
<EMI ID = 175.1>
of the D-alinate derivative. Yield 73%, m.p. 155-156 [deg.] C.
Analysis, calculated for C20H27N05S (393.50):
<EMI ID = 176.1>
<EMI ID = 177.1>
<EMI ID = 178.1>
benzyl
<EMI ID = 179.1>
<EMI ID = 180.1>
(0.020 mole) of DABCO. The mixture is stirred for 5 min then
<EMI ID = 181.1>
<EMI ID = 182.1>
<EMI ID = 183.1>
<EMI ID = 184.1> <EMI ID = 185.1>
C, 71.06; H, 7.37; N, 4.87
Found, C, 71.30; H, 7.15; N, 4.79
<EMI ID = 186.1>
<EMI ID = 187.1>
part B. After addition of 20 ml of water, the resulting mixture is cooled to 0 ° C., and 7.25 ml (0.0145 mole) of 2N sodium hydroxide are slowly added. Once the addition is complete, the mixture is stirred at 0 [deg.] C for 30 min and then at room temperature for 4 h. The reaction mixture is then partitioned between water and ether. The aqueous phase is separated, cooled to 0.degree. C., acidified to pH 2 with cold 1N HCl and extracted with ethyl acetate. Then the ethyl acetate extract is washed with water, dried over magnesium sulfate, filtered and
it is concentrated in vacuo which gives a syrupy residue. The residue is crystallized from a mixture of ether and petroleum ether, to give 6.4 g (95%) of the title compound, m.p. 90-94 [deg.] C.
<EMI ID = 188.1>
C, 66.92; H, 7.49; N, 5.78
Found, C, 67.14; H, 7.38; N, 5.76
<EMI ID = 189.1>
benzyl.
A mixture of 3.37 g (0.010 mole) of benzyl glycinate p-toluenesulfonate and 1.12 g (0.010 mole) of
<EMI ID = 190.1>
(0.010 mole) of the compound of part C. Then the mixture is cooled to 0 [deg.] C and 1.35 g (0.010 mole) of HBT and 2.06 g are added.
(0.010 mol) of DCC. The resulting mixture is stirred for 2 h at 0 [deg.] C and then for 24 h at room temperature. The mixture is cooled to 0 ° C., filtered and the filtrate is concentrated in vacuo.
<EMI ID = 191.1>
wash the ethyl acetate solution successively with IN sodium bicarbonate, water, 0.75 N citric acid
<EMI ID = 192.1> <EMI ID = 193.1>
3.9 g (0.006 mol) of the compound of part D are added to 5 ml of anhydrous DMF, followed by 1.5 g of 5% Pd / C. To the mixture was then added 40 ml of ethanol, purged with nitrogen and hydrogen was introduced for 5 h, maintaining the mixture at atmospheric pressure and at room temperature. The catalyst is then filtered from the mixture and the filtrate is evaporated in vacuo. The resulting residue is crystallized from a mixture of ether and ethyl acetate, to give 2.3 g (85%) of the title compound, m.p. 189-190 [deg.] C.
<EMI ID = 194.1>
C, 58.52; H, 7.37; N, 9.31
Found, C, 58.79; H, 7.48; N, 9.39
<EMI ID = 195.1>
as in part H of Example 1) and 0.903 g (0.002 mol) of the product of part E. The resulting mixture is cooled to 0 [deg.] C and
<EMI ID = 196.1>
0.27 g (0.002 mole) of HBT and 0.412 g (0.002 mole) of DCC. The mixture is then stirred at 0 [deg.] C for 2 h then at 4 [deg.] C for 24 h. The resulting precipitate is removed by filtration and the filtrate is concentrated in vacuo to a residue which is then dissolved in ethyl acetate. The acetate solution is washed successively
<EMI ID = 197.1>
0.75 N cold and water. The organic phase is then dried over magnesium sulfate, filtered and the filtrate is concentrated in vacuo. The residue is applied to two preparative thick layer chromatography plates, and the plates are eluted with a
<EMI ID = 198.1> <EMI ID = 199.1>
Gly, 1.00; Phe, 0.99
G. L-tyrosyl-D-leucyl- sesquichlorhydrate monoacetate
<EMI ID = 200.1>
To 5 ml of glacial acetic acid containing 0.3 ml of anisole, 0.900 g (0.0012 mole) of the compound of part F is added. Dry hydrochloric gas is bubbled through the mixture for 20 minutes. The solvent is then removed by lyophilization of aqueous acetic acid, and the title compound is obtained in the form of an amorphous solid.
<EMI ID = 201.1>
C, 53.93; H, 6.79; N, 11.10 Cl, 7.02 Found, C, 54.30; H, 6.64; N, 11.32; Cl, 6.96 Amino acid analysis, found: Tyr, 0.99; Leu, 1.03; Gly, 0.99; Phe, 0.99
Example 3
<EMI ID = 202.1>
<EMI ID = 203.1>
methyl.
<EMI ID = 204.1>
of methyl L-methionate. The mixture is cooled to 0 [deg.] C and
<EMI ID = 205.1>
13.5 g (0.1 mole) of HBT and 20.6 g (0.1 mole) of DCC. The resulting mixture was stirred at 0 [deg.] C for 2 h then at room temperature for 24 h. The mixture was again cooled to 0 ° C. and the resulting precipitate was removed by filtration. The filtrate is concentrated in vacuo. The residue is then dissolved in acetate
<EMI ID = 206.1>
<EMI ID = 207.1>
To 60 ml of methanol is added 13.0 g (0.032 mol) of the compound of part A. The resulting suspension is placed in a pressure vessel equipped with a magnetic stir bar. The mixture is cooled to -78 [deg.] C and 60 ml of anhydrous liquid ammonia is added. The reaction vessel is closed and allowed to warm to room temperature. The mixture is stirred for 24 h at room temperature. The jar is slowly cooled again to -78 [deg.] C and opened. The residual ammonia is evaporated off by heating the mixture and recrystallized from
<EMI ID = 208.1>
obtains 9.7 g (77%) of the title compound, m.p. 192-195 [deg.] C.
Analysis calculated for C19H29N3O4S (395.52):
C, 57.70; H, 7.39; N, 10.62
Found, C, 57.41; H, 7.17; N- 10.37
C. L-phenylalanyl-L-methionylamide hydrochloride.
To 150 ml of glacial acetic acid containing 10 ml of anisole and 10 ml of triethylsilane, 9.6 g (0.024 mol) of the product of part B is added. Then anhydrous hydrochloric gas is introduced through a dispersion tube of gas. After 30 min, the reaction mixture is diluted with ether. The resulting precipitate was collected and recrystallized from a mixture of ethanol and ether to give 7.5 g (94%) of the title compound, m.p., 214-216 [deg.] C.
<EMI ID = 209.1>
C, 50.67; H, 6.68; N, 12.66
Found, C, 50.75; H, 6.84; N, 12.54
<EMI ID = 210.1>
methionylamide.
To 40 ml of DMF is added 1.66 g (0.005 mol) of the product from part C. 0.99 ml (0.005 mol) of dicyclohexylamine is added and
<EMI ID = 211.1>
0.68 g (0.005 mole) of HBT and 1.03 g (0.005 mole) of DCC. The resulting mixture was stirred for 2 h at 0 [deg.] C then at room temperature for 24 h. After cooling the mixture again
<EMI ID = 212.1>
filtrate under vacuum. The residue is dissolved in ethyl acetate.
<EMI ID = 213.1>
magnesium, filtered and evaporated in vacuo. Then we <EMI ID = 214.1> crystallization. The gel is filtered and the solid is dried
<EMI ID = 215.1>
as monohydrate and the mixture was stirred for 5 h. The resulting precipitate was collected by filtration and dried to give
<EMI ID = 216.1>
<EMI ID = 217.1>
0.336 g (0.003 mol) of DABCO then, after 10 min, 0.8 g
<EMI ID = 218.1>
<EMI ID = 219.1>
<EMI ID = 220.1>
<EMI ID = 221.1>
<EMI ID = 222.1>
<EMI ID = 223.1>
<EMI ID = 224.1>
water, cold 0.75 N citric acid and water. The organic phase is dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated in vacuo. The resulting residue is dissolved in
<EMI ID = 225.1> <EMI ID = 226.1>
which precipitates and the filtrate is concentrated in vacuo. Then the resulting residue was dissolved in n-butanol and the solution washed successively with 1N sodium bicarbonate, water, cold 0.75N citric acid and water. The organic phase is then dried over magnesium sulfate and filtered, and the filtrate is concentrated in vacuo. Attempts to recrystallize the residue from ethyl acetate or from ethanol give gels. The residue is then dissolved in hot methanol and the solution is applied to a preparative thick layer chromatography plate and eluted with a 9: 1 mixture of chloroform and
<EMI ID = 227.1>
treated with the chloroform-methanol mixture. The solvent is evaporated off in vacuo to give 0.270 g (21%) of the title compound,
<EMI ID = 228.1>
Amino acid analysis, found: Tyr, 1.00; Ala, 1.02;
<EMI ID = 229.1>
introduced anhydrous hydrochloric gas through a gas dispersion tube for 20 min. Then the resulting mixture is frozen and
<EMI ID = 230.1>
<EMI ID = 231.1>
<EMI ID = 232.1>
<EMI ID = 233.1>
Analysis indicates the presence of methionine tallow oxide.
Example
<EMI ID = 234.1> <EMI ID = 235.1> of methyl iodide. Stirring is continued at room temperature for 24 h. Then the mixture is poured onto crushed ice and extracted with ether. The aqueous phase is acidified to pH 2 with citric acid and then extracted with ethyl acetate. The organic phase is then washed with water, dried over magnesium sulfate and concentrated in vacuo, which gives a syrup which does not crystallize. The NMR spectrum of the syrup is compatible with the expected derivative:
<EMI ID = 236.1>
ether and 4.0 ml of dicyclohexylamine is added. Crystals form on cooling. The precipitate was collected and recrystallized from a mixture of methanol and ether to give 6.8 g (74%) of the title compound, m.p. 171-174 [deg.] C.
<EMI ID = 237.1>
C, 70.40; H, 9.63; N, 6.08
Found, C, 70.60; H, 9.49; N, 6.19
<EMI ID = 238.1>
L-methionylamide.
<EMI ID = 239.1>
<EMI ID = 240.1>
<EMI ID = 241.1>
<EMI ID = 242.1>
(0.010 mol) of DCC. The resulting mixture is stirred for 2 h at 0 [deg.] C and then for 24 h at room temperature. The resulting precipitate is removed by filtration and the filtrate is concentrated in vacuo to a syrup which is redissolved in acetate.
<EMI ID = 243.1>
<EMI ID = 244.1>
mole) of the product of part-B. Anhydrous hydrochloric gas is introduced through a gas dispersion tube for 30 min, then the reaction mixture is diluted with ether. The resulting precipitate is collected and dried (1.1 g) and then redissolved in 40 ml of DMF. The reaction mixture is then cooled to 0 ° C. and 1.27 g (0.031 mol) of the product of part E of Example 1, 0.420 g (0.0031 mol) of HBT and 0.640 g ( 0.0031 mole)
<EMI ID = 245.1>
amine and stirring is continued at 0 [deg.] C for 2 h and then at 4 [deg.] C for 48 h. The resulting precipitate was filtered off and the filtrate was concentrated in vacuo to a syrupy residue which was then dissolved again in ethyl acetate. The ethyl acetate solution is washed successively with bicarbonate
<EMI ID = 246.1>
water and then dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated in vacuo, which gives 2.0 g of crude product. The product is dissolved in chloroform and applied to a
<EMI ID = 247.1>
with chloroform followed by a 9: 1 mixture of chloroform and methanol. TLC analysis of the fractions from the column and subsequent combination of these fractions based on the TLC profile gives, after concentration in vacuo, 1.1 g (47%) of the title compound, uncrystallized.
<EMI ID = 248.1>
of anisole, 0.70 g (0.001 mol) of the product of part C.
Dry hydrochloric gas is introduced through a dispersion tube
<EMI ID = 249.1>
<EMI ID = 250.1>
C, 51.08; H, 7.0; N, 11.91
Found, C, 51.13; H, 6.97; N, 11.72
Amino acid analysis, found: Tyr, 1.03; Ala, 1.01; Gly, 0.96.
Example 5
Preparation of L- hydrochloride mono-acetate (1.25 HCl)
<EMI ID = 251.1>
benzyl alinate.
To a solution of 3.19 g (0.010 mole) of benzyl alinate p-toluenesulfonate in 30 ml of dry DMF, 4.43 g is added.
(0.010 mole) of the product of part B of 'Example 1.' The resulting mixture is cooled to 0 [deg.] C and 1.12 g (0.010 mole) are added, followed by 1.135 g (0.010 mole) in 10 min. ) HBT and 2.06 g (0.010 mol) this DCC. The resulting mixture is stirred at 0 [deg.] C for 2 h then at
<EMI ID = 252.1>
resulting precipitate and the filtrate evaporated in vacuo to a syrup. The syrup is dissolved again in ethyl acetate and the ethyl acetate solution is washed successively with 1N sodium bicarbonate, water, cold 0.75N hydrochloric acid and the water. Then the organic phase is dried over magnesium sulfate and filtered, and the filtrate is concentrated in vacuo, to give a residue which does not crystallize from ethanol or ether. Dilution of the ethereal solution with petroleum ether gives a gel which is collected by filtration and dried in vacuo. The impure amorphous solid is applied
(4.0 g) on a 3 x 50 cm column of silica gel (74-250
<EMI ID = 253.1>
<EMI ID = 254.1>
<EMI ID = 255.1>
<EMI ID = 256.1>
solvent in vacuo give a syrupy residue. We dissolve this
<EMI ID = 257.1>
<EMI ID = 258.1>
2.9 g (0.0048 mol) of the product from part A are added to 5 ml of dry DMF. To the mixture are then added 1.0 g of 5% Pd / C and then 50 ml of ethanol. Hydrogen is introduced at atmospheric pressure and at room temperature through a gas dispersion tube for 6 h. The reaction vessel is then purged with nitrogen, the catalyst is collected by filtration and the filtrate is concentrated in vacuo. The residue is dissolved in ethyl acetate and the solution is diluted with ether. The resulting precipitate was collected by filtration and dried in vacuo to give 1.5 g (74%) of the title compound as an amorphous solid.
<EMI ID = 259.1>
Analysis, calculated for C20H29N3O7 (423.47):
C, 56.73; H, 6.90; N, 9.92
<EMI ID = 260.1>
<EMI ID = 261.1>
known in part H of Example 1). The mixture is cooled to 0 ° C. and 0.28 ml (0.002 mol) of triethylamine is added. The reaction mixture is stirred for 10 min, and 0.846 g (0.002 mole) of the product of part B is added, followed by 0.270 g (0.002 mole) of HBT and 0.412 g (0.002 mole) of DCC. The resulting mixture was stirred at 0 [deg.] C for 2 h and then at room temperature for 48 h. After cooling the mixture again to 0 [deg.] C, it is filtered and the filtrate is concentrated in vacuo. The residue is redissolved in ethyl acetate and the ethyl acetate solution washed.
<EMI ID = 262.1>
cold 0.75N citric acid and water. Then we skip the phase
<EMI ID = 263.1>
<EMI ID = 264.1>
the product in chloroform and applied to two plates
<EMI ID = 265.1>
<EMI ID = 266.1>
<EMI ID = 267.1> <EMI ID = 268.1>
<EMI ID = 269.1>
MeOH)
<EMI ID = 270.1>
C, 58.80; H, 7.05; N, 11.76
Found, C, 58.60; H, 6.87; N, 11.53
D. L-tyrosyl-D-alanyl-L- hydrochloride mono-acetate
<EMI ID = 271.1>
To 5 ml of glacial acetic acid containing 0.5 ml of anisole, 0.880 g (0.0011 mol) of the product of part C. is added. Anhydrous hydrochloric gas is introduced by one. gas dispersion tube for 20 min. The reaction mixture is then frozen and lyophilized to give 0.704 g of the title compound;
<EMI ID = 272.1>
<EMI ID = 273.1>
C, 53.43; H, 6.45; N, 11.68; Cl, 6.16 Found, C, 53.48; H, 6.47; N, 11.62; Cl, 6.50 Amino acid analysis, found: Tyr, 1.00; Ala, 1.99; Phe, 1.01.
Example 6
Preparation of L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L- acetate
<EMI ID = 274.1>
nel 44.8 ml (0.336 mol) of tetramethylguanidine and 66.8 ml
(0.336 mol) of dicyclohexylamine. Then we add drop by drop
<EMI ID = 275.1>
<EMI ID = 276.1>
<EMI ID = 277.1>
aqueous layer. The organic layer is separated and discarded. Then
<EMI ID = 278.1> <EMI ID = 279.1>
<EMI ID = 280.1>
159 [deg.] C.
<EMI ID = 281.1>
Analysis, calculated for C22H42N2O4S (430.6):
C, 61.36; H, 9.83; N, 6.51
Found, C, 61.37; H, 9.98; N, 6.26
<EMI ID = 282.1>
by neutralization of the product of part A and extraction in ethyl acetate). The resulting mixture is added dropwise over 30 min to a mechanically stirred suspension of 42.45 g of a suspension of potassium hydride (22.1% KH in mineral oil; 0.234 mol of KH) in 375. ml of THF at 0 [deg.] C and containing 0.5 g of ether (6) in a crown (18). We add drop by drop in
15-20 minutes 9.25 ml (0.149 mole) of methyl iodide in 20 ml
<EMI ID = 283.1>
<EMI ID = 284.1>
5 ml of ethanol. The resulting reaction mixture is then poured onto ice and the pH of the mixture is adjusted to about 9 by addition of 2N sodium hydroxide. The resulting aqueous solution was extracted with ether. The pH of the aqueous layer is then adjusted to 3 by adding solid citric acid and extracted again with three 300 ml portions of ether. The ethereal extracts are combined, extracted back with water, dried over magnesium sulphate and concentrated in vacuo. The resulting residue is dissolved in 200 ml of ether, and added.
<EMI ID = 285.1>
mixture and 500 ml of petroleum ether are added. It does not happen
<EMI ID = 286.1>
<EMI ID = 287.1>
The product (6.5 g, 0.025 mol) is dissolved in 80 ml of DMF and <EMI ID = 288.1>
the mixture is cooled to -15 [deg.] C. 3.6 ml (0.027 mol) of
<EMI ID = 289.1>
morpholine. The resulting mixture was stirred for 10 min at -15 [deg.] C and then anhydrous ammonia was bubbled through the reaction mixture for 1 h. The mixture is stirred for an additional 4 h
at -15 [deg.] C and then poured onto a mixture of ice and IN sodium bicarbonate. The cold aqueous layer is extracted with ether. The ethereal extract was then extracted with cold 0.75N citric acid and water, dried over magnesium sulfate and concentrated in vacuo to give a residue which crystallized from a mixture of ether and petroleum ether giving 1.7 g (26%) of the title compound, mp 56-59 [deg.] C.
<EMI ID = 290.1>
<EMI ID = 291.1>
<EMI ID = 292.1>
<EMI ID = 293.1>
<EMI ID = 294.1>
<EMI ID = 295.1>
cysteinylamide.
<EMI ID = 296.1>
<EMI ID = 297.1>
<EMI ID = 298.1>
bubbling dry hydrochloric gas in the mixture for 30 minutes
<EMI ID = 299.1>
(1.8 g). The precipitate is dissolved in 25 ml of DMF. We cool
<EMI ID = 300.1> <EMI ID = 301.1>
<EMI ID = 302.1>
combination of the appropriate fractions and evaporation of the solvent in vacuo, 3.0 g of the title compound.
<EMI ID = 303.1>
<EMI ID = 304.1>
C, 58.65; H, 7.63; N, 10.26
<EMI ID = 305.1>
<EMI ID = 306.1>
The product of the hydrogenolysis is dissolved in 150 ml of isopropyl alcohol (according to the process of part E. of Example 1)
<EMI ID = 307.1>
benzyl glycinate, and 16 ml (0.081 mol) of dicyclohexylamine are added. Ether is added to bring the volume to about 1.5 1. The semi-solid mass is triturated until it is
<EMI ID = 308.1>
<EMI ID = 309.1>
<EMI ID = 310.1>
isopropyl alcohol. The volume of the solution is reduced, under a stream of nitrogen, to approximately 150 ml. On cooling, crystallization begins. The mixture is left to stand overnight and the precipitate is collected and dried, which gives
41.44 g (88%) of the title compound, m.p. 198-200.5 [deg.] C.
<EMI ID = 311.1>
<EMI ID = 312.1>
<EMI ID = 313.1>
<EMI ID = 314.1> the filtrate under vacuum. The residue was dissolved in ethyl acetate and the ethyl acetate solution was extracted with 1N sodium bicarbonate, water, 0.75 N citric acid and water. The organic phase is dried over magnesium sulfate and evaporated in vacuo, to give 3.5 g of the crude title compound. The product is dissolved in chloroform and applied to a 3 x 45 cm column of quality silica gel.
62 from Grace and Davidson and we elect with a continuous gradient
<EMI ID = 315.1>
fractions based on their CCM profile and evaporated in vacuo, to give 2.4 g (62%) of the compound mentioned in
<EMI ID = 316.1>
<EMI ID = 317.1>
C, 58.27; H, 6.90; N, 11.99
<EMI ID = 318.1>
<EMI ID = 319.1>
To 20 ml of glacial acetic acid containing 2 ml of anisole and 2 ml of triethylsilane, 2.2 g (3 mmol) of the product of part E is added. Dry hydrochloric gas is bubbled through the reaction mixture for 25 mn. Then ether is added to the mixture and cooled. Filter and dry the resulting precipitate (2.0 g). A portion of the precipitate (1.2 g) was dissolved in sufficient buffer (1% pyridine and 0.05% acetic acid in water) to make a total of 10 ml. The solution is deposited on a 2.5 x 99 cm column of DEAE-Sephadex A 25
<EMI ID = 320.1> <EMI ID = 321.1>
Example 7
Preparation of L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenyl- acetate
<EMI ID = 322.1>
hydrated oxycarbonyl-L-leucine. The mixture is dried over magnesium sulfate and concentrated in vacuo. The residue is dissolved in
75 ml of THF and the resulting ionized solution is added dropwise to a cooled (0 [deg.] C) mechanically stirred suspension of
<EMI ID = 323.1>
<EMI ID = 324.1>
containing 0.25 g of ether (6) in a crown (18). We add drop to
<EMI ID = 325.1>
maintains the mixture at 0 [deg.] C for 3 h then added dropwise
<EMI ID = 326.1>
<EMI ID = 327.1>
<EMI ID = 328.1>
The aqueous solution is extracted with ether and then acidified.
at pH 3 by addition of solid citric acid. The acidified aqueous suspension is then extracted with ether. The combined ethereal extracts are washed with water, dried over magnesium sulfate.
<EMI ID = 329.1>
<EMI ID = 330.1>
indicates the presence of a certain amount of unreacted starting material. The product is dissolved in ether and 5.25 ml (0.05 mole) of t-butylamine is added. The ethereal solution is diluted with petroleum ether and cooled.
<EMI ID = 331.1>
<EMI ID = 332.1>
<EMI ID = 333.1>
<EMI ID = 334.1>
<EMI ID = 335.1>
product of part A with citric acid and extraction in ether). The mixture is cooled to -15 [deg.] C then 6.7 ml are added.
(0.052 mole) of isobutyl chloroformate and 5.7 ml (0.052 mole) of N-methylmorpholine. The mixture is stirred for 10 min at -15 [deg.] C and anhydrous ammonia is bubbled through the reaction mixture for 1 hour. Stirring is continued for 4 h
at -15 [deg.] C. The reaction mixture is poured onto a mixture of
<EMI ID = 336.1>
with ether. Then the ethereal layer is extracted with 0.75 N citric acid and water, dried over magnesium sulfate and evaporated in vacuo. The residue is crystallized from a mixture of ether and petroleum ether to give 5.5 g (48 µl of
<EMI ID = 337.1>
<EMI ID = 338.1>
C, 58.99; H, 9.90; N, 11.47
Found, C, 59.17; H, 9.66; N, 11.21
<EMI ID = 339.1>
amide
<EMI ID = 340.1>
3 ml of triethylsilane are added 5.0 g (0.02 mol) of the product of part B. Dry hydrochloric gas is bubbled through the reaction mixture for 25 min. Then ether is added and the mixture is cooled. The resulting precipitate was collected and dried (3.6 g). The hydrochloride collected is dissolved in 60 ml of DMF. The resulting solution was cooled to 0 ° C. and 3.99 ml (0.02 mole) of dicyclohexylamine was added. The mixture is stirred at 0 [deg.] C
<EMI ID = 341.1>
<EMI ID = 342.1>
0 [deg.] C then at room temperature for 24 h. We cool the
<EMI ID = 343.1>
<EMI ID = 344.1>
<EMI ID = 345.1>
<EMI ID = 346.1>
Apply it to a 3 x 45 cm column of silica gel quality 62 <EMI ID = 347.1>
<EMI ID = 348.1>
combines the fractions based on their TLC profile and after evaporation of the solvent, 5.7 g (73%) of the compound are obtained
<EMI ID = 349.1>
<EMI ID = 350.1>
alanyl-N � -methyl-L-leucylamide.
<EMI ID = 351.1>
ice-cold containing 1 ml of anisole, 2.0 g of the product from part C are added. The mixture is kept at room temperature for
30 minutes then ether is added. The mixture was cooled, and the resulting precipitate was collected and dried (1.63 g). We
<EMI ID = 352.1>
<EMI ID = 353.1>
carbonyl-L-tyrosyl-D-alanyl-glycine. The mixture is stirred for
15 min at 0 [deg.] C and 0.675 g (0.005 mol) of HBT and 1.3 g are added
(0.005 mol) of DCC. The reaction mixture is then stirred for
24 h at 4 [deg.] C. The resulting precipitate is collected and the filtrate is concentrated in vacuo. The residue was dissolved in ethyl acetate and the ethyl acetate solution was extracted with 1N sodium bicarbonate, water, 0.75 N citric acid and water. Then the ethyl acetate solution is dried over magnesium sulfate and concentrated in vacuo. The resulting residue was dissolved in chloroform and the chloroform solution was deposited on a 3 x 45 cm column of Woelm grade III silica gel. We elected
<EMI ID = 354.1>
on their CCM profile. After evaporation of the solvent, 2.3 g (67%) of the title compound are obtained.
<EMI ID = 355.1>
Analysis, calculated for C35H50N608 (682.8):
C, 61.57; H, 7.38; N, 12.31
<EMI ID = 356.1>
<EMI ID = 357.1>
of triethylsilane, 1.8 g (0.003 mol) of the product of <EMI ID = 358.1> are added
3 hrs. Then the reaction mixture is diluted with ether and allowed to stand for 1 hour. The ether is decanted from the resulting oil and the oil is dissolved in ethanol. Addition of ether gives a precipitate which is filtered and dried to give 0.9 g of the crude title compound. The product is dissolved in enough buffer solution (1% pyridine and 0.05% formic acid in water) to make a total of
5.0 ml. The solution was applied to a 2.5 x 100 cm column of DEAE-Sephadex A-25 (formate) and eluted with the same buffer. We gather the appropriate fractions based on their profile
<EMI ID = 359.1>
Sations in 10% acetic acid and a 75:25 mixture of water and acetonitrile give 0.852 g of the title compound.
<EMI ID = 360.1>
Amino acid analysis, found: Tyr, 1.02; Ala, 1.00 Gly, 1.01; Phe, 0.96; NH3, 1.03.
Example 8
Preparation of L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenyl- hydrochloride
<EMI ID = 361.1>
When cooled, 2.88 ml (0.022 mole) of isobutyl chloroformate and 2.42 ml (0.022 mole) of N-methylmorpholine are added. After 15 min, anhydrous ammonia is bubbled through the reaction mixture for 1.5 h. Stirring is continued at -15 [deg.] C for a further 2 hours. The reaction mixture is poured into a mixture of ice and 1N sodium bicarbonate. We extract the
<EMI ID = 362.1>
citric 0.75 N and water. The organic layer is then dried over magnesium sulfate and concentrated in vacuo. We recrystallize
<EMI ID = 363.1>
<EMI ID = 364.1>
Analysis, calculated for C16H24N2O4S (340.4):
<EMI ID = 365.1> <EMI ID = 366.1>
cysteinylamide.
Anhydrous hydrochloric gas is bubbled through a solution of 4.1 g (0.012 mole) of the product of part A in
45 ml of glacial acetic acid, 5 ml of anisole and 5 ml of triethylsilane. After 20 min, ether is added and the resulting precipitate is collected and dried (3.3 g). The hydrochloride collected is dissolved in 50 ml of DMF and 2.92 g (0.012 mole) of dicyclohexylamine, 3.19 g (0.012 mole) of
<EMI ID = 367.1>
HBT. The mixture is stirred for 10 min at 0 [deg.] C and 2.47 g are added.
(0.012 mol) of DCC. After 2 h at 0 [deg.] C, the reaction mixture is stirred at room temperature for 24 h and then cooled to 0 [deg.] C. The resulting precipitate is filtered off. The filtrate is concentrated in vacuo and the resulting residue dissolved in n-butyl alcohol. The solution is extracted with IN sodium bicarbonate and water, then dried over magnesium sulfate and evaporated in vacuo. The resulting residue is recrystallized from ethanol to give 4.95 g (85%) of the compound mentioned in
<EMI ID = 368.1>
<EMI ID = 369.1>
C, 61.58: H, 6.82; N, 8.62
Found, C, 61.78; H, 6.78; N, 8.28
<EMI ID = 370.1>
Anhydrous hydrochloric gas is bubbled through a solution of 1.3 g (0.027 mol) of the product of part B in 40 ml of glacial acetic acid, 4 ml of anisole and 4 ml of triethylsilane. After 20 min, ether is added to the mixture and the mixture is collected.
<EMI ID = 371.1>
<EMI ID = 372.1>
0.75 N citric acid and water. Then the extract is dried over magnesium sulphate and concentrated in vacuo. The resulting residue is dissolved in ethyl acetate and purified by dry column chromatography on quality silica gel.
62 from Grâce and Davidson. The fractions were pooled based on their TLC profile and concentrated to give 1.1 g
<EMI ID = 373.1>
<EMI ID = 374.1>
<EMI ID = 375.1>
C, 60.14; H, 6.14; N, 10.79
Found, C, 59.95; H, 6.24; N, 10.53
Amino acid analysis, found: Tyr, 0.98; Ala, 1.03;
<EMI ID = 376.1>
D. L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-S- hydrochloride
<EMI ID = 377.1>
<EMI ID = 378.1>
<EMI ID = 379.1>
<EMI ID = 380.1>
Found, C, 56.85; H, 6.06; N, 11.48; Cl, 5.21
Amino acid analysis, found; Tyr, 0.99; Ala, 1.01;
<EMI ID = 381.1> <EMI ID = 382.1>
then 40 ml of ethanol. The mixture is stirred for 30 minutes and then poured onto 2 l of ice. The pH of the aqueous mixture is adjusted to 7 with 2N potassium hydroxide. The aqueous mixture was entered three times with 400 ml of ether and then acidified to pH 3 with solid citric acid. The mixture is extracted three times with 500 ml of ether. The ethereal extracts are combined, extracted, dried over magnesium sulfate and evaporated in vacuo to a syrup (44.76 g, 84% of the theoretical yield). The syrup is dissolved in 450 ml of ethyl acetate and 25.78 ml is added.
<EMI ID = 383.1>
friction, crystallization takes place. The title compound, 51.05 g (66%), m.p. 131-134 [deg.] C.
<EMI ID = 384.1>
<EMI ID = 385.1>
C, 59.35; H, 8.39; 'he, 7.29
<EMI ID = 386.1>
<EMI ID = 387.1>
ether). The solution is cooled to -15 [deg.] C and 18.3 ml are added.
(0.14 mole) of isobutyl chloroformate and 15.4 ml (0.14 mole)
<EMI ID = 388.1>
and anhydrous ammonia is bubbled through the mixture through a gas dispersion tube for 1 hour. We stir the mixture
<EMI ID = 389.1>
<EMI ID = 390.1>
aqueous with ether. The ethereal extract is washed with water, cold 0.75N citric acid and water, dried over
<EMI ID = 391.1> <EMI ID = 392.1>
of the product of Part B. Dry hydrochloric gas is bubbled through the resulting mixture for 27 min. The mixture was then poured into ether, and the resulting precipitate was collected and dried (9.9 g). The hydrochloride is dissolved in 200 ml of DMF. The mixture is cooled to 0 ° C. and 9.9 ml (0.05 mol) of dicyclohexylamine are added. After 10 min of stirring, 6.8 g are added
<EMI ID = 393.1>
phenylalanine and 10.3 g (0.05 mol) of DCC. We stir the mixture
<EMI ID = 394.1>
ambient. The mixture is cooled to 0 [deg.] C and filtered. The resulting filtrate is then concentrated in vacuo to an oil. The oil is dissolved in ethyl acetate and the mixture is washed.
<EMI ID = 395.1>
<EMI ID = 396.1>
<EMI ID = 397.1>
empty, giving a residue which crystallizes from ether, 16.4 g
<EMI ID = 398.1>
<EMI ID = 399.1>
<EMI ID = 400.1>
<EMI ID = 401.1>
Found, C, 58.76; H, 7.42; N, 10.30
<EMI ID = 402.1>
To a mixture of 20 ml of glacial acetic acid, 2 ml of anisole and 2 ml of triethylsilane is added 3.5 g (8.56 mmol) of the product of part C. Hydrochloric gas is bubbled through. anhydrous in the mixture for 25 min. Ether is added to the mixture and the hydrochloride is precipitated which is filtered.
<EMI ID = 403.1>
<EMI ID = 404.1> <EMI ID = 405.1>
magnesium sulfate and evaporated 1 [deg.] under vacuum. The residue is chromatographed on Grace and Davidson silica gel of grade 62, this
<EMI ID = 406.1>
<EMI ID = 407.1>
Analysis, calculated for C34H48N608S (700.86):
<EMI ID = 408.1>
Found, C, 58.05; H, 6.62; N, 11.73
Amino acid analysis, found: Tyr, 1.00; Ala, 1.01; Gly, 0.99; Phe, 1.00; NH3, 1.01.
<EMI ID = 409.1>
8.3 g (0.012 mol) of the product from part D are added to 15 ml of thioanisole. The mixture is cooled to 0 [deg.] C and added.
<EMI ID = 410.1>
<EMI ID = 411.1>
<EMI ID = 412.1>
<EMI ID = 413.1>
<EMI ID = 414.1>
<EMI ID = 415.1>
of DEAE Sephadex A-25 (acetate form) previously balanced
<EMI ID = 416.1>
<EMI ID = 417.1>
buffer. The residue is dissolved in about 200 ml of acetic acid
<EMI ID = 418.1>
a 3: 1 mixture of water and acetonitrile gives 6.64 g (83%) of
<EMI ID = 419.1>
<EMI ID = 420.1>
<EMI ID = 421.1>
<EMI ID = 422.1>
<EMI ID = 423.1>
<EMI ID = 424.1>
The analgesic activity of compounds of formula I is demonstrated by the hot plate test on the sciais. In this try a
<EMI ID = 425.1> <EMI ID = 426.1>
test and then place the mouse on the surface of the hot plate. The latency time is then noted, in seconds until the appearance of each of two different phenomena. The latency time is measured first until the mouse lifts its hind legs and then the latency time until the mouse jumps off the surface of the hot plate. An agent exhibiting analgesic activity produces an increase in these two latency times compared with those of control mice which are injected only with the carrier. This should occur for a dose interval which does not produce incoordination or motor disability. The following tables give the results obtained in this test,
by comparing them with a control, with natural enkephalin and with natural enkephalin transformed into amide. Table I gives the latency time for the lifting of the hind leg; Table II gives the latency time until the jump marking the
<EMI ID = 427.1>
percentage of animals in each test group that exhibit analgesic effect. The criterion for asserting that there is an analgesic effect is as follows: the latency time for raising the hind legs or jumping in a treated animal must be equal to or greater than the mean control latency time plus two standard deviations of the average. Each result provided in Tables I and II represents the mean value plus or minus the standard error and Table III gives the percentage obtained for a number of mice giving at least 9 up to 40.
<EMI ID = 428.1>
<EMI ID = 429.1>
<EMI ID = 430.1>
<EMI ID = 431.1>
<EMI ID = 432.1>
<EMI ID = 433.1>
<EMI ID = 434.1>
<EMI ID = 435.1>
<EMI ID = 436.1>
<EMI ID = 437.1>
<EMI ID = 438.1>
<EMI ID = 439.1>
Notes
at. Unless otherwise indicated, the tests are carried out using a control which is the saline solution. The numbers "1" and "2" appearing in upper indices indicate that the
<EMI ID = 440.1>
<EMI ID = 441.1>
present as a suspension.
vs. The designations refer to the following compounds:
A. L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenylalanyl- hydrochloride
<EMI ID = 442.1>
B. L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenylalanylL-methionylamide hydrochloride (Example 3)
C. L-tyrosyl-D- hydrochloride (1.25 HCl) monoacetate
<EMI ID = 443.1>
5).
<EMI ID = 444.1>
<EMI ID = 445.1>
EJ = escape jump
e. When tested at 0.3 mg / kg, the lag time for hind leg lift is 33.9 + 2.3 seconds, the time to
<EMI ID = 446.1>
Analgesic response is 10% for HPL and 60% for EJ.