<EMI ID=1.1>
d'un produit de glucose isomérase immobilisé et produit
glucose isomérase immobilisé ainsi préparé.
La présente invention se rapporte à un procédé
de conditionnement d'un produit de glucose isomérase immobilisé et au produit de glucose isomérase immobilisé conditionné ainsi préparé.
Au cours de l'isomérisation continue du glucose
avec certaines espèces de glucose isomérase immobilisée,
spécialement la glucose isomérase immobilisée préparée à
partir d'un Bacillus coagulans, par exemple un Bacillus
coagulans atypique comme décrit dans le brevet belge
809.546, on observe une chute de pH à travers un réacteur
à lit fixe jusqu'à environ 2,5 unités. La chute de pH à
travers le réacteur à lit fixe est normalement la plus
grande au cours des cent premières heures qui suivent le
démarrage du réacteur, mais la grandeur de la chute'de pH <EMI ID=2.1>
reste défavorablement grande pendant tout le cours de l'isomérisation continue, c'est-à-dire jusqu'à ce que le processus soit terminé, parce que l'activité du produit de glucose isoméraae immobilisé dans le réacteur est tombée à. un niveau inéconomiquement bas. La chute de pH est indésirable pour les raisons suivantes. Le produit de glucose isomérase immobilisé a le meilleur comportement, c'est-à-dire-donne l'activité maximum, la stabilité et dès lors aussi la productivité, lorsqu'il est utilisé à un intervalle de valeurs de pH
<EMI ID=3.1>
pour le produit de glucose isomérase en question. Une déviation en dehors de l'intervalle optimum de pH d'un côté ou
de l'autre crée des effets nuisibles qui sont d'autant plus prononcés que la déviation est élevée, par exemple en termes d'une diminution de l'activité, de la stabilité et de la productivité de la préparation, et/ou en termes de formation de coloration due à la production de sous-produits indésira-
<EMI ID=4.1>
sant, ce qui provoque des canaux dans le lit des particules d'enzyme, ce qui de nouveau se traduit par une performance médiocre de la colonne. De même, un pH croissant crée un gonflement du lit des particules d'enzyme qui, à son tour, conduit à une forte chute de pression. Pour réduire au minimum les effets nuisibles de la chute de pH, l'isomérisation est donc initiée intentionnellement à une valeur de pH bien au-dessus de l'intervalle de pH optimum.
Le problème de la chute de pH défavorable a été abordé de deux manières différentes.
La première approche comprend l'addition d'un système tampon à l'alimentation de glucose comme décrit par
<EMI ID=5.1>
ligne 20 à 22 en relation avec un produit de glucose isomé-
<EMI ID=6.1>
<EMI ID=7.1>
Cette approche a de sérieux inconvénients. Premièrement, le <EMI ID=8.1>
fabricant d'isosirop doit s'assurer que le système tampon ne crée pas de réactions secondaires indésirables au cours de l'isomérisation et deuxièmement éliminer le système tampon ou la majorité de celui-ci après isomérisation, par exemple par échange d'ions.
En conséquence, le problème a été abordé par d'autres voies, par exemple en ajoutant les substances régulatrices de pH au produit de glucose isomérase immobilisé au lieu de le faire au sirop entrant: Cette approche peut être utilisée avec des produits de glucose isomérase préparés au moyen de certaines souches appartenant au genre Streptomyces. Des produits chimiques régulateurs de pH appropriés peuvent être
<EMI ID=9.1>
est faite ici au brevet américain n[deg.] 3.715.276. Pendant
<EMI ID=10.1>
<EMI ID=11.1>
conséquent la chute de pH sera combattue jusqu'à ce que tout
<EMI ID=12.1>
de la résine échangeuse d'ions soit épuisée; à partir de là
<EMI ID=13.1>
cette approche est l'emploi de produits chimiques régulateurs de pH peut solubles, lesquels ne sont pas aisément enlevés du réacteur par lavage. Une seconde caractéristique est que cette approche ne tente pas d'éliminer la cause de la chute de pH mais neutralise simplement la chute du pH par addition d'une quantité balancée de produits,chimiques alcalins.
Or, conformément à l'intention, on a mis au point un procédé de conditionnement d'un produit de glucose isomérase immobilisé préparé à partir d'un Bacillus coagulans, par exemple un Bacillus coagulans atypique comme décrit dans le brevet belge 809546, si bien que la cause de la chute de pH est éliminée. De ce fait, le produit de glucose isomérase immobilisé préparé conformément à l'invention fonctionne au cours de son temps de vie économique sans donner lieu à une chute de pH significative, ce résultat étant atteint sans addition de produits chimiques quelconques régulateurs de pH au sirop de glucose et sans addition de produits chimiques insolubles ou peu solubles au produit de glucose isomérase immobilisé.
Plus spécifiquement le procédé de conditionnement d'un produit de glucose isomérase immobilisé conforme à l'in-
<EMI ID=14.1>
mérase immobilisé fabriqué au moyen d'un Bacillus coagulans avec une solution aqueuse d'un agent séquestrant à un pH
<EMI ID=15.1>
trant est séparée du produit de glucose isomérase immobilisé.
La solution de l'agent séquestrant doit être utilisée en des quantités suffisantes, à savoir en des quantités suffisant à éliminer complètement ou prasiue complètement
<EMI ID=16.1>
Le procédé conforme à l'invention est ordinairement exécuté aux températures ambiantes. Si la température est trop élevée, la glucose isomérase immobilisée perdra trop de son activité, et, comme le procédé conforme à l'in-
<EMI ID=17.1>
température doit être supérieure au point de congélation de
<EMI ID=18.1>
férence le procédé conforme à l'invention est exécuté entre
<EMI ID=19.1>
L'effet est manifeste après quelques minutes, mais on préfère un traitement un peu plus long.
La. chute de pH observée au cours de l'isomérisatio:
en utilisant le produit de glucose isomérase conditionné est <EMI ID=20.1>
substantiellement diminuée, à savoir qu'elle� dépasse pas quelques dixièmes d'une unité de pH. L'activité du produit de glucose isomérase immobilisé traité à l'agent séquestrant n'est pas différente de manière significative de l'activité de la matière de départ.
Une forme de réalisation préférée du procédé de conditionnement d'un produit de glucose isomérase immobilisé conforme à l'invention comprend l'activation supplémentaire du produit par addition de l'agent activateur connu Co(II).
<EMI ID=21.1>
<EMI ID=22.1>
que processus séquentiel. De plus la stabilité de la glucose isomérase immobilisée traitée avec l'agent séquestrant et par la suite activée est nettement améliorée par rapport à la matière première non traitée par l'agent séquestrant.
Une forme de réalisation préférée du procédé de conditionnement d'un produit de glucose isomérase immobilisé conforme à l'invention comprend l'utilisation d'une glucose
<EMI ID=23.1>
au moyen d'un Bacillus coagulans atypique.
Une forme de réalisation préférée du procédé de
<EMI ID=24.1>
conforme à l'invention comprend l'emploi d'une solution d'un
<EMI ID=25.1>
séquestrant.
Une forme de réalisation préférée du procédé de
<EMI ID=26.1>
conforme à l'invention comprend l'utilisation d'une solution d'un citrate de métal alcalin soluble comme agent séquestrait
<EMI ID=27.1>
<EMI ID=28.1>
<EMI ID=29.1> <EMI ID=30.1>
équivalente d'autres citrates de métal alcalin solubles en proportion du produit de glucose isomérase immobilisé calculé en matière sèche.
Une forme de réalisation préférée du procédé de conditionnement d'un produit de glucose isomérase immobilisé conforme à l'invention comprend l'utilisation d'un produit
de glucose isomérase immobilisé conforme aux procédés décrits dans le brevet belge n[deg.] 832.852.
Une forme de réalisation préférée du procédé de conditionnement d'un produit de glucose isomérase immobilisé conforme à l'invention comprend l'emploi d'une solution d'un agent séquestrant qui contient en outre du dextrose, de préférence à une concentration environ égale à la concentration de dextrose utilisée durant l'isomérisation ultérieure. Dans certains cas cette méthode simplifie le procédé.
Pour simplifier le procédé, il est possible de trai.
ter le produit de glucose isomérase immobilisé non encore séché, qui apparait en tant que produit intermédiaire au cours de la préparation de la glucose isomérase immobilisée.
Ainsi, une forme de réalisation préférée du procédé de conditionnement d'un produit de glucose isomérase immobilisée conforme à l'invention comprend l'utilisation de la glucose isomérase immobilisée;non encore séchée comme produit de glucose isomérase immobilisé.
De même, l'invention comporte le produit de glucose isomérase immobilisé conditionné conformément au procédé de l'invention.
Comme cela apparaît plus haut, l'invention est limitée .au traitement d'un produit de glucose isomérase immo-
<EMI ID=31.1>
rase obtenue au moyen d'un Bacillus coagulans.
<EMI ID=32.1>
Traité avec un agent séquestrant comme indiqué plus haut, ce produit de glucose isomérase immobilisé est condi-
<EMI ID=33.1>
l'activité et possibilité d'une activation supplémentaire par addition d'un agent activateur et meilleure stabilité).
<EMI ID=34.1>
exactement ce comportement quand ils sont traités avec un agent séquestrant. En guise d'exemple on se réfère au Fifth
<EMI ID=35.1>
15-19, page 291 dans l'abrégé, duquel il ressort qu'un traitement au citrate d'un produit de glucose isomérase provenant d'un microorganisme appartenant au genre Streptomyces n'améliore pas la stabilité, mais que le traitement au citrate réduit l'activité et qu'il en crée pas un produit capable d'exécuter l'isomérisation sans une chute du pH. De même, la
<EMI ID=36.1>
<EMI ID=37.1>
produit de glucose isomérase immobilisé ne peut pas être utilisée avec le produit de glucose isomérase*immobilisé utilisé dans le procédé conforme à l'invention, parce que ce
<EMI ID=38.1>
Le produit de glucose isomérase immobilisé conditionné au moyen du procédé conforme à l'invention est plus
<EMI ID=39.1>
isomérase immobilisé utilisé comme matière de départ dans lE procédé conforme à l'invention. Ainsi la concentration de
<EMI ID=40.1>
<EMI ID=41.1>
<EMI ID=42.1>
mentation, l'activité du produit de glucose isomérase immo-
<EMI ID=43.1>
d'autant plus élevé que la concentration en Ca ++ dépassera
<EMI ID=44.1>
<EMI ID=45.1>
Pour une meilleure compréhension de la mise en oeuvre de la présente invention, on se rapporte aux exemples spécifiques suivants dans lesquels l'activité de l'enzyme immobilisée est mesurée en unités définies comme étant la quantité d'enzyme qui convertit le glucose en fructose avec un taux initial de 1/u mole/minute dans une colonne à lit fixe qui est en fonctionnement continu; dimension de la colonne : 2,5 x 40 cm.
Dans les exemples, la productivité de l'enzyme en un temps donné (heures) est définie comme la quantité de glucose en kg par kg d'enzyme qui peut être convertie en un mélange de fructose et de glucose avec un degré de conversion de 0,45.
EXEMPLE 1
Le produit de glucose isomérase produit par fermentation comme décrit dans le brevet belge 809.546, exemple III et immobilisé conformément au brevet belge 832.852, exemple V (à l'exception que le Bacillus coagulant NRRL B 5650 est utilisé au lieu du Bacillus coagulans B 5656), est conditionné avec une solution de citrate de la manière suivante :
On trempe 25 g de la glucose isomérase immobilisée ayant une activité de 167 unités/g pendant 2 heures dans
<EMI ID=46.1>
té (selon Merck, Darmstadt, Chemikalien, Reagenzien 1974y
6432, DAB 7, B.P. 1973), et on ajuste le pH à 8,5 avec du NaOH. La préparation d'enzyme est alors lavée avec 100 ml d'eau pour éliminer l'excès de citrate puis séchée.
L'activité des préparations de glucose isomérase conditionnées au citrate est déterminée comme étant de 165 unités/g. Tant cette activité que l'activité déterminée avant conditionnement au citrate (167 unités/g, qui ne diffère pas de manière significative de l'activité de 165 <EMI ID=47.1>
glucose à 40 % poids/poids, pH 8,5 à l'entrée, 65[deg.] C et
<EMI ID=48.1>
ne à lit empilé en continu, dimension de colonne : 2,5 x 40 cm. La chute de pH à travers la colonne durant la détermina-
<EMI ID=49.1>
glucose isomérase immobilisé non conditionné au citrate, tandis que la chute de pH à travers la colonne durant la détermination de l'activité n'est que de 0,15 unité pour le produit de glucose isomérase immobilisé traité au citrate.
EXEMPLE 2
On conditionne 25 g du produit utilisé comme matière de départ dans l'exemple 1 conformément à la méthode de l'exemple 1 avec les modifications suivantes : on le trempe d'abord pendant 2 heures dans 200 ml de solution
<EMI ID=50.1>
de citrate trisodique 2-hydraté.
Puis on plonge la préparation d'enzyme pendant 2 heures dans 200 ml de solution aqueuse de dextrose à 50 % en poids/poids avec 0,05 g de CoS04.7H20 après un lavage
<EMI ID=51.1>
poids pour éliminer l'excès de citrate. On transfère la préparation dans une colonne (I) et on l'utilise dans un procédé d'isomérisation pendant 1200 heures. De même, à titre de comparaison, on fait fonctionner une colonne (II) avec un produit de glucose isomérase immobilisé qui est le produit de glucose isomérase immobilisé utilisé comme matière de départ et trempé pendant 4 heures à 25[deg.] C dans 500 ml -le solution aqueuse de dextrose à 50 % en poids/poids, à un pH
<EMI ID=52.1>
<EMI ID=53.1>
ditionné au citrate).
Conditions d'isomérisation pour les colonnes I et II :
<EMI ID=54.1>
65[deg.] C
pH d'entrée 8,5
<EMI ID=55.1>
A la colonne I on n'iriroduit pas d'additifs tels
<EMI ID=56.1>
<EMI ID=57.1>
colonne II fonctionne avec les conditions les plus favorables quand on utilise un produit de glucose isomérase immobilisé non conditionné au citrate, selon le brevet belge
<EMI ID=58.1>
ment de la colonne II serait un peu inférieur. Résultats expérimentaux :
<EMI ID=59.1>
pH de sortie de colonne durant l'isomérisation :
<EMI ID=60.1>
EXEMPLE 3
On conditionne 20 g du produit utilisé comme matière de départ dans l'exemple 1 suivant la méthode donnée à l'exemple 1,. avec les modifications suivantes :
on le trempe d'abord pendant 2 heures dans 200 ml de solu-
<EMI ID=61.1>
10 g de Na EDTA (Titriplex II de Merck), réglée à un pH de 8,5 avec du NaOH.
On trempe ensuite la préparation d'enzyme pendant 2 heures dans 200 ml de solution aqueuse de dextrose à 50 % en poids/poids avec 1 g de CoS04.7H20 après un lavage avec
1000 ml de solution aqueuse de dextrose à 50 % en poids/ poids pour éliminer l'excès d'EDTA.
La préparation est transférée à une colonne (III) et utilisée dans un procédé d'isomérisation pendant 1915 heures. De même, pour des raisons de comparaison, on met en fonctionnement une colonne (IV) avec un produit de glucose isomérase immobilisé qui est le produit de glucose isomérase immobilisé utilisé comme matière de départ et qui a réagi pendant 4 heures à 25[deg.] C dans 500 ml de solution aqueuse de dextrose à 50 % en poids/poids à un pH de 8,5 et avec 0,5 g de MgS04.7H20 par litre (à savoir un produit de glucose isomérase immobilisé qui n'est pas traité avec un agent séquestrant) .
Conditions d'isomérisation pour les colonnes III et IV :
solution aqueuse de dextrose à 50 % en poids/poids
<EMI ID=62.1>
pH d'entrée 8,5
<EMI ID=63.1>
A la colonne III on n'ajoute pas d'additifs tels
<EMI ID=64.1> <EMI ID=65.1>
favorables quand on utilise un produit de glucose isomérase immobilisé non conditionné avec un agent séquestrant, confor-
<EMI ID=66.1>
le comportement de la colonne IV serait quelque peu inférieur.
<EMI ID=67.1>
Résultats expérimentaux :
<EMI ID=68.1>
pH de sortie de colonne durant l'isomérisation :
<EMI ID=69.1>
REVENDICATIONS
1. Procédé de conditionnement d'un produit de glucose isomérase immobilisé, caractérisé en ce qu'on traite un produit de glucose isomérase immobilisé fabriqué au moyen d'un Bacillus coagulans avec une solution aqueuse d'un agent
<EMI ID=70.1>
la solution de l'agent séquestrant du produit de glucose
<EMI ID=71.1>
2. Procédé de conditionnement d'un produit de glu-
<EMI ID = 1.1>
of an immobilized glucose isomerase product which produces
immobilized glucose isomerase thus prepared.
The present invention relates to a method
packaging of an immobilized glucose isomerase product and to the conditioned immobilized glucose isomerase product thus prepared.
During the continuous isomerization of glucose
with certain species of immobilized glucose isomerase,
especially the immobilized glucose isomerase prepared from
from a Bacillus coagulans, for example a Bacillus
atypical coagulans as described in the Belgian patent
809.546, a drop in pH is observed through a reactor
fixed bed up to about 2.5 units. The drop in pH to
through the fixed bed reactor is normally the most
large during the first 100 hours after
start of the reactor, but the magnitude of the drop in pH <EMI ID = 2.1>
remains unfavorably large throughout the course of the continuous isomerization, that is, until the process is complete, because the activity of the isomeric glucose product immobilized in the reactor has dropped to. an ineconomically low level. The drop in pH is undesirable for the following reasons. The immobilized glucose isomerase product has the best performance, i.e. gives maximum activity, stability and hence also productivity, when used at a range of pH values.
<EMI ID = 3.1>
for the glucose isomerase product in question. A deviation outside the optimum pH range on one side or
on the other hand creates deleterious effects which are all the more pronounced as the deviation is high, for example in terms of a decrease in the activity, stability and productivity of the preparation, and / or in terms color formation due to the production of unwanted by-products
<EMI ID = 4.1>
This causes channels in the bed of the enzyme particles, which again results in poor column performance. Likewise, increasing pH creates swelling of the enzyme particle bed which in turn leads to a large pressure drop. To minimize the deleterious effects of the pH drop, isomerization is therefore intentionally initiated at a pH value well above the optimum pH range.
The problem of unfavorable pH drop has been approached in two different ways.
The first approach involves adding a buffer system to the glucose feed as described by
<EMI ID = 5.1>
lane 20 to 22 in relation to an isomeric glucose product
<EMI ID = 6.1>
<EMI ID = 7.1>
This approach has serious drawbacks. First, the <EMI ID = 8.1>
isosirop manufacturer must ensure that the buffer system does not create unwanted side reactions during isomerization and secondly remove the buffer system or the majority of it after isomerization, for example by ion exchange.
As a result, the problem has been addressed through other routes, for example by adding the pH regulating substances to the immobilized glucose isomerase product instead of to the incoming syrup: This approach can be used with prepared glucose isomerase products. by means of certain strains belonging to the genus Streptomyces. Appropriate pH regulating chemicals can be
<EMI ID = 9.1>
is made here at US Patent No. [deg.] 3,715,276. during
<EMI ID = 10.1>
<EMI ID = 11.1>
therefore the drop in pH will be fought until all
<EMI ID = 12.1>
the ion exchange resin is exhausted; from there
<EMI ID = 13.1>
this approach is the use of low soluble pH regulating chemicals which are not easily washed out of the reactor. A second feature is that this approach does not attempt to eliminate the cause of the drop in pH but simply counteracts the drop in pH by adding a balanced amount of alkaline chemicals.
However, in accordance with the intention, a process has been developed for packaging an immobilized glucose isomerase product prepared from a Bacillus coagulans, for example an atypical Bacillus coagulans as described in Belgian patent 809546, so well that the cause of the drop in pH is eliminated. As a result, the immobilized glucose isomerase product prepared in accordance with the invention functions during its economic lifetime without giving rise to a significant drop in pH, this result being achieved without the addition of any pH regulating chemicals to the syrup. of glucose and without the addition of insoluble or poorly soluble chemicals to the immobilized glucose isomerase product.
More specifically, the process for packaging an immobilized glucose isomerase product in accordance with the
<EMI ID = 14.1>
immobilized merase made by means of a Bacillus coagulans with an aqueous solution of a sequestering agent at pH
<EMI ID = 15.1>
Trant is separated from the immobilized glucose isomerase product.
The sequestering agent solution should be used in sufficient amounts, i.e. in amounts sufficient to eliminate completely or almost completely.
<EMI ID = 16.1>
The process according to the invention is ordinarily carried out at ambient temperatures. If the temperature is too high, the immobilized glucose isomerase will lose too much of its activity, and, as the process according to the in-
<EMI ID = 17.1>
temperature must be above the freezing point of
<EMI ID = 18.1>
the method according to the invention is carried out between
<EMI ID = 19.1>
The effect is evident after a few minutes, but a little longer treatment is preferred.
The drop in pH observed during isomerization:
using the conditioned glucose isomerase product is <EMI ID = 20.1>
substantially diminished, namely that it � not exceed a few tenths of a pH unit. The activity of the immobilized glucose isomerase product treated with the sequestering agent is not significantly different from the activity of the starting material.
A preferred embodiment of the process for packaging an immobilized glucose isomerase product according to the invention comprises further activation of the product by addition of the known activating agent Co (II).
<EMI ID = 21.1>
<EMI ID = 22.1>
that sequential process. In addition, the stability of the immobilized glucose isomerase treated with the sequestering agent and subsequently activated is markedly improved compared with the raw material not treated with the sequestering agent.
A preferred embodiment of the process for packaging an immobilized glucose isomerase product according to the invention comprises the use of a glucose
<EMI ID = 23.1>
by means of an atypical Bacillus coagulans.
A preferred embodiment of the method of
<EMI ID = 24.1>
according to the invention comprises the use of a solution of a
<EMI ID = 25.1>
sequestering.
A preferred embodiment of the method of
<EMI ID = 26.1>
according to the invention comprises the use of a solution of a soluble alkali metal citrate as sequestering agent
<EMI ID = 27.1>
<EMI ID = 28.1>
<EMI ID = 29.1> <EMI ID = 30.1>
equivalent of other soluble alkali metal citrates in proportion to the immobilized glucose isomerase product calculated as dry matter.
A preferred embodiment of the process for packaging an immobilized glucose isomerase product according to the invention comprises the use of a product
of immobilized glucose isomerase in accordance with the methods described in Belgian patent no. [deg.] 832,852.
A preferred embodiment of the process for conditioning an immobilized glucose isomerase product according to the invention comprises the use of a solution of a sequestering agent which further contains dextrose, preferably at a concentration of approximately equal to the concentration of dextrose used during the subsequent isomerization. In some cases this method simplifies the process.
To simplify the process, it is possible to process.
the immobilized glucose isomerase product which has not yet been dried, which appears as an intermediate during the preparation of the immobilized glucose isomerase.
Thus, a preferred embodiment of the process for conditioning an immobilized glucose isomerase product according to the invention comprises the use of the immobilized glucose isomerase; not yet dried as the immobilized glucose isomerase product.
Likewise, the invention includes the immobilized glucose isomerase product packaged in accordance with the process of the invention.
As will appear above, the invention is limited to the treatment of an immo-glucose isomerase product.
<EMI ID = 31.1>
shave obtained by means of a Bacillus coagulans.
<EMI ID = 32.1>
Treated with a sequestering agent as indicated above, this immobilized glucose isomerase product is conditioned.
<EMI ID = 33.1>
activity and possibility of further activation by addition of an activating agent and better stability).
<EMI ID = 34.1>
exactly this behavior when treated with a sequestering agent. As an example we refer to the Fifth
<EMI ID = 35.1>
15-19, page 291 in the abstract, from which it appears that treatment with citrate of a glucose isomerase product from a microorganism belonging to the genus Streptomyces does not improve stability, but that treatment with citrate reduces activity and does not create a product capable of carrying out isomerization without a drop in pH. Likewise, the
<EMI ID = 36.1>
<EMI ID = 37.1>
immobilized glucose isomerase product cannot be used together with the immobilized glucose isomerase * product used in the process according to the invention, because this
<EMI ID = 38.1>
The immobilized glucose isomerase product conditioned by means of the process according to the invention is more
<EMI ID = 39.1>
immobilized isomerase used as starting material in the process according to the invention. Thus the concentration of
<EMI ID = 40.1>
<EMI ID = 41.1>
<EMI ID = 42.1>
mentation, the activity of the glucose isomerase product immo-
<EMI ID = 43.1>
the higher the concentration of Ca ++ exceeds
<EMI ID = 44.1>
<EMI ID = 45.1>
For a better understanding of the practice of the present invention, reference is made to the following specific examples in which the activity of the immobilized enzyme is measured in units defined as the amount of enzyme which converts glucose into fructose with an initial rate of 1 µmole / minute in a fixed bed column which is in continuous operation; dimension of the column: 2.5 x 40 cm.
In the examples, the productivity of the enzyme in a given time (hours) is defined as the quantity of glucose in kg per kg of enzyme which can be converted into a mixture of fructose and glucose with a degree of conversion of 0 , 45.
EXAMPLE 1
The glucose isomerase product produced by fermentation as described in Belgian patent 809,546, example III and immobilized in accordance with Belgian patent 832,852, example V (except that the coagulating Bacillus NRRL B 5650 is used instead of Bacillus coagulans B 5656) , is packaged with a citrate solution as follows:
25 g of the immobilized glucose isomerase having an activity of 167 units / g are soaked for 2 hours in
<EMI ID = 46.1>
tee (according to Merck, Darmstadt, Chemikalien, Reagenzien 1974y
6432, DAB 7, B.P. 1973), and the pH is adjusted to 8.5 with NaOH. The enzyme preparation is then washed with 100 ml of water to remove excess citrate and then dried.
The activity of the citrate conditioned glucose isomerase preparations was determined to be 165 units / g. Both this activity and the activity determined before conditioning with citrate (167 units / g, which does not differ significantly from the activity of 165 <EMI ID = 47.1>
glucose 40% w / w, pH 8.5 at the inlet, 65 [deg.] C and
<EMI ID = 48.1>
with continuous stacked bed, column dimension: 2.5 x 40 cm. The drop in pH through the column during the determination
<EMI ID = 49.1>
immobilized non-citrate conditioned glucose isomerase, whereas the pH drop across the column during activity determination is only 0.15 units for the immobilized citrate treated glucose isomerase product.
EXAMPLE 2
25 g of the product used as starting material in Example 1 are conditioned according to the method of Example 1 with the following modifications: it is first soaked for 2 hours in 200 ml of solution
<EMI ID = 50.1>
of 2-hydrated trisodium citrate.
Then the enzyme preparation is immersed for 2 hours in 200 ml of 50% w / w dextrose aqueous solution with 0.05 g of CoS04.7H20 after washing.
<EMI ID = 51.1>
weight to remove excess citrate. The preparation is transferred to a column (I) and used in an isomerization process for 1200 hours. Also, for comparison, a column (II) is operated with an immobilized glucose isomerase product which is the immobilized glucose isomerase product used as a starting material and soaked for 4 hours at 25 [deg.] C in 500. ml - 50% w / w dextrose aqueous solution at pH
<EMI ID = 52.1>
<EMI ID = 53.1>
ditioned with citrate).
Isomerization conditions for columns I and II:
<EMI ID = 54.1>
65 [deg.] C
input pH 8.5
<EMI ID = 55.1>
In column I, no additives such as
<EMI ID = 56.1>
<EMI ID = 57.1>
column II operates under the most favorable conditions when using an immobilized glucose isomerase product not conditioned with citrate, according to the Belgian patent
<EMI ID = 58.1>
ment of column II would be a little lower. Experimental results :
<EMI ID = 59.1>
Column outlet pH during isomerization:
<EMI ID = 60.1>
EXAMPLE 3
20 g of the product used as starting material in Example 1 are conditioned according to the method given in Example 1. with the following modifications:
it is first soaked for 2 hours in 200 ml of solution.
<EMI ID = 61.1>
10 g of Na EDTA (Titriplex II from Merck), adjusted to pH 8.5 with NaOH.
The enzyme preparation is then soaked for 2 hours in 200 ml of 50% w / w dextrose aqueous solution with 1 g of CoSO4.7H20 after washing with
1000 ml of 50% w / w dextrose aqueous solution to remove excess EDTA.
The preparation is transferred to a column (III) and used in an isomerization process for 1915 hours. Likewise, for the sake of comparison, a column (IV) is operated with an immobilized glucose isomerase product which is the immobilized glucose isomerase product used as a starting material and which has reacted for 4 hours at 25 [deg. ] C in 500 ml of 50% w / w dextrose aqueous solution at pH 8.5 and with 0.5 g of MgS04.7H20 per liter (i.e. an immobilized glucose isomerase product which is not treated with a sequestering agent).
Isomerization conditions for columns III and IV:
50% w / w dextrose aqueous solution
<EMI ID = 62.1>
input pH 8.5
<EMI ID = 63.1>
In column III no additives such as
<EMI ID = 64.1> <EMI ID = 65.1>
favorable when using an immobilized glucose isomerase product not packaged with a sequestering agent, conforming to
<EMI ID = 66.1>
the behavior of column IV would be somewhat lower.
<EMI ID = 67.1>
Experimental results :
<EMI ID = 68.1>
Column outlet pH during isomerization:
<EMI ID = 69.1>
CLAIMS
1. A method of conditioning an immobilized glucose isomerase product, characterized in that an immobilized glucose isomerase product produced by means of a Bacillus coagulans is treated with an aqueous solution of an agent.
<EMI ID = 70.1>
the solution of the sequestering agent of the glucose product
<EMI ID = 71.1>
2. Process for packaging a glu-