<EMI ID=1.1>
La présente invention concerne de nouvelles voies de
<EMI ID=2.1>
tibactérien efficace contre de nombreuses bactéries Gram-positives et Gram-négatives et en particulier pour inhiber des organismes kanamycino-résistants comme Staphylococcus kanamycino-résistant et Escherichia coli kanamycino-résistant .
<EMI ID=3.1>
<EMI ID=4.1>
a jusqu'à présent été préparée par un procédé suivant lequel on protège les cinq radicaux amino et tout ou partie des radicaux hydroxyle autres que les radicaux hydroxyle en positions
<EMI ID=5.1>
effectue la sulfonylation des radicaux hydroxyle en positions 3'
<EMI ID=6.1>
nir un composé 3',4'-non saturé, on réduit le composé 3',4'-non saturé et on élimine les radicaux protecteurs restants. Ce procédé classique exige neuf stades depuis la kanamycine B jusqu'à la
<EMI ID=7.1>
De plus, le procédé entraîne une consommation importante d'iodure de sodium et de poudre de zinc pour l'élimination des radi-
<EMI ID=8.1>
expose aux inconvénients de la difficulté d'approvisionnement en iode et de la pollution par l'évacuation des sous-produits. Par conséquent, la mise au point d'un nouveau procédé plus effi-
<EMI ID=9.1>
un intérêt industriel évident.
L'invention a principalement pour but de procurer dif- <EMI ID=10.1>
ne B qui offrent sur les voies connues l'avantage d'éviter la mise en oeuvre des bromures et iodures de métaux alcalins et de la poudre de zinc, qui sont remplacés par des réactifs moins onéreux. Toutes les opérations sont effectuées au départ de la kanamycine B comme dans le procédé classique,mais suivant une autre voie.
Suivant un premier aspect, l'invention a donc pour ob-
<EMI ID=11.1>
<EMI ID=12.1>
où R représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle on aryle, Z représente un radical alkylidène, arylidène, cyclohexylidène ou tétrahydropyrannylidène et le radical époxy en position
<EMI ID=13.1>
<EMI ID=14.1>
où R et Z ont les significations qui leur ont été données ci-
<EMI ID=15.1>
<EMI ID=16.1>
ou R et Z ont les significations qui leur ont été données ci-des-
<EMI ID=17.1>
lange de réaction;
(3) on élimine de manière classique les radicaux -COOR protégeant la fonction amino et le radical Z protégeant la fonction hydroxyle
<EMI ID=18.1>
<EMI ID=19.1>
<EMI ID=20.1>
on convertit ce dernier composé en l'un de ses sels d'addition d'acides.
Le stade (1) du procédé qui fait l'objet du premier
<EMI ID=21.1>
mycine B de formule (I) sous forme a ou p avec un xanthate,peut être effectué dans un solvant organique, de préférence à une température de 50 à 1000C. Le solvant organique est de préfé-
<EMI ID=22.1>
représente un radical alkyle inférieur et Me représente un atome de métal alcalin, comme un atome de sodium ou de potassium.
<EMI ID=23.1>
second produit après lavage du mélange de réaction avec de l'eau, élimination du solvant par distillation et concentration du résidu jusqu'à siccité.
<EMI ID=24.1>
mule (III).
La séparation du premier produit et du second produit que donne le stade (1), à savoir le stade (2) du procédé, est exécutée de préférence par chromatographie, par exemple en couche mince sur gel de silice de la manière habituelle par exemple avec élution au moyen d'un mélange 1:1 en volume de tétrachlorure de carbone et d'acétone.
Le stade (3) du procédé faisant l'objet du premier aspect de l'invention pour l'élimination des radicaux -COOR protégeant la fonction amino et du radical Z protégeant la fonction hydroxyle peut être exécuté de façon classique. Par exemple, le radical protégeant la fonction hydroxyle peut être éliminé le premier par hydrolyse modérée dans de l'acide chlorhydrique dilué ou de l'acide acétique aqueux,puis les radicaux protégeant la
<EMI ID=25.1>
droxyde de baryum ou aussi par hydrogénolyse en présence de palladium catalytique. Le stade (4) du procédé faisant l'objet du premier aspect de l'invention,à savoir l'hydrogénation,peut être exécuté de façon classique. Ainsi, la réduction catalytique par l'hydrogène en présence d'un catalyseur d'hydrogénation courant, comme un métal du groupe du platine tel que le platine ou le palladium�est applicable par préférence au stade (4). Le nickel de Raney catalytique s'est aussi révélé utile à cette fin.
Ce procédé qui fait l'objet du premier aspect de l'invention offre sur le procédé connu les avantages suivants: - <EMI ID=26.1>
réaction au moyen d'un bromure ou iodure de métal .alcalin et de poudre de zinc;
il est possible d'obtenir à l'état exempt de tous radicaux pro-
<EMI ID=27.1>
cine B au dernier stade;
au dernier stade, l'hydrogénation catalytique peut être effectuée assez aisément en produisant sensiblement moins d'impuretés au départ des réactif s,de sorte que la purification du produit final est plus facile que dans le procédé classique suivant lequel l'élimination des radicaux protégeant les fonctions amino et hydroxyle succède à l'hydrogénation.
Il convient de noter toutefois que l'ordre d'exécution des stades (3) et (4) dans le procédé faisant l'objet du premier aspect de l'invention peut être inversé,si la chose est désirée, de façon à suivre l'ordre du procédé classique.
<EMI ID=28.1>
cine B à l'état de base libre, peut être converti à volonté en sel d'addition d'acide organique ou inorganique. Par exemple, le sul-
<EMI ID=29.1>
d'acide sulfurique dilué à une solution aqueuse de la base libre
<EMI ID=30.1>
décolorant à la solution, par filtration de celle-ci et par lyophilisation du filtrat.
<EMI ID=31.1>
fidokanamycine B de formule (III),obtenue comme second produit
au stade (1) du procédé faisant l'objet du premier aspect de l'invention,est utile aussi comme intermédiaire pour la préparation
<EMI ID=32.1>
est sous ce rapport qu'il existe deux voies de conversion de la <EMI ID=33.1>
protégée au niveau des radicaux amino et hydroxyle de formule:
<EMI ID=34.1>
où R représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou aryle, Z représente un radical alkylidène, arylidène, cyclohexylidène
<EMI ID=35.1>
<EMI ID=36.1>
où R et Z ont les significations qui leur ont été données ci-
<EMI ID=37.1>
de formule :
<EMI ID=38.1>
où R et Z ont les significations qui leur ont été données cidessus;
<EMI ID=39.1> de formule:
<EMI ID=40.1>
<EMI ID=41.1>
respectivement.
Le stade (3) dans le second procédé, en l'occurrence la
<EMI ID=42.1>
l�acide chlorhydrique ou bromhydrique concentré. Toutefois, en règle générale, un acide minéral non oxydant,comme l'acide sulfurique,convient à cette fin. De préférence, la réaction est exé-
<EMI ID=43.1>
ment à l'état de sel d'addition d'acide , suivant lequel:
(1) on fait réagir avec un xanthate une 3',4'-époxykanamycine B protégée au niveau des radicaux amino et hydroxyle de formule:
<EMI ID=44.1>
où R représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou
<EMI ID=45.1>
<EMI ID=46.1>
où R et Z ont les significations qui leur ont été données cidessus et le radical épisulfure en position 3',4' a la configu-
<EMI ID=47.1>
de formule :
<EMI ID=48.1>
<EMI ID=49.1>
dessus;
(2) on traite le mélange de réaction obtenu au stade (1) au moyen
<EMI ID=50.1>
(3) on élimine de manière classique les radicaux -COOR protégeant la fonction amino et le radical Z protégeant la fonction hydroxyle
<EMI ID=51.1>
<EMI ID=52.1>
<EMI ID=53.1>
en 3',4'-didésoxykanamycine B et si on le désire on convertit cette dernière en l'un de ses sels d'addition d'acides.
Les stades (1), (3) et (4). du procédé faisant l'objet du troisième- aspect de l'invention correspondent aux stades
(1), (3) et (4) du procédé faisant l'objet du premier aspect.
de l'invention,respectivement.
Au stade (2) du procédé faisant l'objet du troisième aspect de l'invention, la réaetion avec l'hydrazine est exécutée par préférence dans un alkanol inférieur,tel que le méthanol ou l'éthanol, en particulier sous la forme de l'hydrate
<EMI ID=54.1>
rence d'environ 10 à 30 moles par mole du composé de formule (III). La réaction avec le nickel de Raney,lorsqu'elle est effectuée
au stade (2),est exécutée par préférence par dissolution du composé de formule (III) dans un alkanol inférieur, comme le méthanol, par addition de nickel de Raney à la solution en quantité con- venable, par exemple en quantité triple de la quantité de composé de formule (III),sur base pondérale,et par agitation du mélange
<EMI ID=55.1>
3 heures.
Le stade (2) dans le procédé faisant l'objet du troisième aspect de l'invention est applicable aussi,si la chose est
<EMI ID=56.1>
(II), mais il est d'habitude avantageux d'effectuer le stade (II) directement sur le mélange de réaction que donne le stade (1) et qui contient les deux composés de formules (II) et (III), en particulier à l'échelle industrielle.
<EMI ID=57.1> <EMI ID=58.1>
avec un rendement d'ensemble élevé suivant une autre voie en quatre stades. Suivant ce procédé
<EMI ID=59.1>
<EMI ID=60.1>
où R et Z ont les significations qui leur ont été données ci-dessus, avec un agent d'acylation, comme le chlorure de benzoyle,de manière classique, pour acyler le radical hydroxyle en position 2" et obtenir un composé de formule:
<EMI ID=61.1>
où R et Z ont les significations qui leur ont été données cidessus et Y représente un radical acyle;
(2) on fait réagir le composé de formule (V) résultant avec un iodure de métal alcalin ou alcalino-terreux,comme l'iodure de sodium, de préférence en présence d'acétate de sodium et d'acide acétique glacial,pour obtenir un composé de formule:
<EMI ID=62.1>
où R, Z et Y ont les significations qui leur ont été- données cidessus;
<EMI ID=63.1>
fonylation avec un agent de sulfonylation tel que le chlorure de méthanesulfonyle, le chlorure de p-toluènesulfonyle ou le chlorure de benzylsulfonyle de façon classique, de préférence dans la py-
<EMI ID=64.1>
<EMI ID=65.1>
<EMI ID=66.1>
composé de formule (VII) en composé de formule:
<EMI ID=67.1>
où R, Z et Y ont les significations qui leur ont été données cidessus et (5) on fait réagir le composé de formule (VIII) résul-
<EMI ID=68.1> <EMI ID=69.1>
Le composé pentaprotégé au niveau des radicaux amino
<EMI ID=70.1>
<EMI ID=71.1>
ou R et Z ont les significations qui leur ont été données cidessus,qui est le composé de départ pour les procédés faisant l'objet du premier aspect au troisième de -l'invention ,est un nouveau composé qui fait aussi l'objet de l'invention.
Ce nouveau dérivé 3',4'-p-époxydé de la kanamycine B de la formule (IX) peut être préparé au départ de la kanamycine B en quelques stades de réaction comme expliqué ci-après.
En premier lieu, la kanamycine B est protégée au niveau des radicaux amino de la manière classique. La kanamycine B est ensuite mise à réagir avec un chloroformiate de formule RCOOC1 où R représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou aryle, par exemple un radical phényle.pour la protection des.cinq radicaux amino de la kanamycine B sous la forme de radicaux uréthanne
-NHCOOR,comme décrit dans la publication de brevet japonais <EMI ID=72.1>
de formule:
<EMI ID=73.1>
où R a la signification qui lui a été donnée ci-dessus.
Le stade suivant est la protection des radicaux hydro-
<EMI ID=74.1>
fin, le composé de formule (X) peut être mis à réagir avec un agent connu pour la protection de la fonction hydroxyle à choisir parmi les agents d'alkylidénation, les agents d'arylidénation, les agents de cyclohexylidénation et les agents de tétrahydropyrannylidénation. Des exemples typiques de tels agents proté-
<EMI ID=75.1>
thoxypropane, l'anisaldéhyde, le benzaldéhyde, le diméthylacétal, le tolualdéhyde, le 1,1-diméthoxycyclohexane et le 1,1-diméthoxytétrahydropyranne. La réaction est exécutée par préférence
<EMI ID=76.1>
20 heures. La réaction introduit sélectivement les radicaux pro-
<EMI ID=77.1>
<EMI ID=78.1>
<EMI ID=79.1>
pourrait en résulter une attaque de l'agent protégeant la fonction hydroxyle au niveau des radicaux hydroxyle en positions 3' et
<EMI ID=80.1>
Le composé de formule (XI) peut alors être soumis à
une acylation visant à la protection sélective des radicaux hydroxyle en positions 2" et 3' par un radical acyle protecteur de la fonction hydroxyle. L'acylation est exécutée d'habitude par dissolution du composé de formule (XI) dans la pyridine, par addition d'un agent d'acylation tel qu'un chlorure d'acyle à basse tempé-
<EMI ID=81.1>
ge pendant quelques heures.
Il est préférable que l'agent d'acylation soit un chlo-
<EMI ID=82.1>
rure d'acétyle,ou un chlorure d'aroyle comme le chlorure de benzoyle. Le chlorure de benzoyle est spécialement préféré.
<EMI ID=83.1> <EMI ID=84.1>
relativement peu réactifs. On obtient ainsi le dérivé 2",3'-diacylé de formule :
<EMI ID=85.1>
où R et Z ont les significations qui leur ont été données ci-dessus et X et Y représentent chacun un radical acyle, par exemple alkanoyle et en particulier alkanoyle inférieur ,tel qu'acétyle,
ou aroyle tel que benzoyle.
Le dérivé 2"-monoacylé, c'est-à-dire le composé de formule (XII) mais où X représente un atome d'hydrogène,peut être obtenu,si la chose est désirée,aux mêmes fins par conduite de l'acylation dans des conditions plus modérées. Par exemple, lorsque l'agent d'acylation est le chlorure de benzoyle, il est possible d'obtenir en proportion majeure le dérivé 2"-monobenzoylé en ajoutant le chlorure de benzoyle peu peu et lentement au-dessous de
<EMI ID=86.1>
paration peut être réalisée par chromatographie de façon classique, par exemple par chromatographie en couche mince-sur gel de silice avec développement au moyen d'un mélange 2:1 en volume de chloroforme et de méthanol.
<EMI ID=87.1>
<EMI ID=88.1>
où R, Z, X et Y ont les significations qui leur ont été données ci-dessus et W représente un radical méthanesulfonyle, p-toluènesul-
<EMI ID=89.1>
ci-dessus constituant le produit principal par réaction avec un alcoolate métallique. L'époxydation est exécutée de préférence par dissolution du composé de formule (XIII) dans un solvant, comme l'eau, un alkanol Inférieur tel que le méthanol ou l'éthanol,
<EMI ID=90.1>
résultante d'un alcoolate métallique, qui est habituellement un alcoolate de métal alcalin ou alcalino-terreux,tel qu'un alcoolate et en particulier un alcoolate inférieur de sodium, de potassium ou de lithium, par exemple le méthylate ou l'éthylate de sodium, et par maintien du mélange de réaction à la température ambiante,
<EMI ID=91.1>
res. Au cours de l'époxydation, le radical Y qui protège le radical hydroxyle en position 2" s'élimine en raison de l'alcalinité du milieu, de sorte que le radical hydroxyle en position 2" est
<EMI ID=92.1>
par réaction avec un alcoolate de métal alcalin tel que le méthylate de sodium, les détails de l'opération étant précisés dans la
<EMI ID=93.1>
<EMI ID=94.1>
<EMI ID=95.1>
<EMI ID=96.1>
<EMI ID=97.1>
Voie A = procédé faisant l'objet du premier aspect de l'invention Voie B = procédé faisant l'objet du second aspect de l'invention Voie C = procédé faisant l'objet du troisième aspect de l'invention Voie D = variante des voies A et C
L'invention est davantage illustrée par les exemples
<EMI ID=98.1>
thèse.
<EMI ID=99.1>
(1) Préparation de la penta-N-éthoxycarbonylkanamycine B.
On prépare la penta-N-éthoxycarbonylkanamycine B à partir de la kanamycine B sous.forme de base libre comme décrit
<EMI ID=100.1>
On met 10 g de penta-N-éthoxycarbonylkanamycine B en suspension dans 70 ml de diméthylformamide et on y ajoute de l'aci-de p-toluènesulfonique jusqu'à ce que le pH de la suspension soit inférieur à 3,0,après quoi on ajoute 10 ml de cyclohexane-
<EMI ID=101.1>
confirme l'achèvement de la réaction par chromatographie en couche mince sur gel de silice (Merck) comme phase stationnsire qu'on élue avec un mélange 10:1 en volume de chloroforme et de méthanol:
<EMI ID=102.1>
de de triéthylamine. On concentre la phase liquide neutralisée sous vide pour obtenir 25 ml d'un liquide résiduel qu'on dissout
<EMI ID=103.1>
une température de 0 à 5[deg.]C, on ajoute 3,9 ml de-chlorure de benzoyle et on laisse réagir le mélange pendant 3 heures. On confirme l'achèvement de la réaction par chromatographie en couche mince. On ajoute 5 ml d'eau au mélange résultant,puis on agite
le mélange à la température ambiante pendant 30 minutes, on le concentre et on le verse dans 200 ml d'eau pour obtenir un précipité
<EMI ID=104.1>
<EMI ID=105.1>
(3) Préparation de la 2",3'-di-0-benzoyl-penta-N-éthoxycarbonyl-
<EMI ID=106.1>
la température ambiante, on y ajoute 5 ml d'eau pour décomposer le chlorure de méthanesulfonyle en excès et on concentre le mélange. On ajoute au concentré 200 ml d'eau pour faire précipiter le composé <EMI ID=107.1>
<EMI ID=108.1>
<EMI ID=109.1>
100 ml de méthanol additionné de 2,2 g de méthylate de sodium. On agite le mélange à la température ambiante pendant 2 heures. On confirme l'achèvement de la réaction par chromatographie en couche mince sur une phase stationnaire de gel de silice qu'on élue avec un mélange 1:1 en volume de tétrachlorure de carbone et d'acétone" après quoi on refroidit le mélange de réaction dans de la glace, on le neutralise avec 1,25 ml d'acide chlorhydrique concentré et on le concentre. On ajoute 100 ml d'eau au concentré neutralisé pour faire précipiter le composé recherché qu'on recueille par filtration en quantité de 3,5 g, soit avec un rendement de 9?%. Ce composé a les propriétés suivantes:
<EMI ID=110.1>
<EMI ID=111.1>
<EMI ID=112.1>
tanol,puis on y ajoute 1,7 g de n-butylxanthate de potassium et on poursuit la réaction pendant 4 heures à 80[deg.]C. Après avoir con-firmé l'achèvement de la réaction par chromatographie en couche mince sur gel de silice qu'on élue avec un mélange 1:1 en volume de tétrachlorure de carbone et d'acétone, on refroidit le mélange et on le lave deux fois avec 40 ml d'eau à chaque reprise, après quoi on concentre la couche butanolique résultante jusqu'à siccité. On obtient ainsi 900 mg de produit intermédiaire._,La chromatographie en couche mince sur gel de silice confirme que ce
<EMI ID=113.1>
On chromatographie ce mélange sur gel de silice en couche mince qu'on élue avec un mélange 5:1 en volume de tétrachlorure de carbone et d'acétone pour obtenir la 3',4'-didésoxy-3'-
<EMI ID=114.1>
<EMI ID=115.1>
<EMI ID=116.1>
éthoxycarbonyl-4",6"-0-cyclohexylidène-kanamycine B dans 5 ml
<EMI ID=117.1>
pour ajuster le pH de la solution à 2,0. On chauffe la solution
<EMI ID=118.1>
d'hydroxyde de baryum octahydraté,après quoi on poursuit le chauffage peur chasser le méthanol par distillation et on maintient le mélange au reflux pendant 8 heures avant de le refroidir.
On fait barboter du dioxyde de carbone dans le mélange refroidi et on sépare par filtration le carbonate de baryum résultant. Par purification sur une colonne de résine Amberlite CG-50
<EMI ID=119.1>
<EMI ID=120.1>
<EMI ID=121.1>
dans 4 ml d'eau et on y ajoute 0,2 ml de nickel de Raney. On fait barboter de l'hydrogène dans la solution pendant 2 heures
à la température et sous la pression atmosphériques. Après avoir séparé le catalyseur par filtration, on concentre le filtrat à siccité pour obtenir le composé recherché en quantité de 108 mg, soit avec un rendement de 95%.
EXEMPLE 2 - �
(1) Préparation de la penta-N-t-butoxycarbonyl-kanamycine B.
On ajoute 10 g de kanamycine B à un mélange de 34 ml
<EMI ID=122.1>
bonate de t-butyle.au mélange à la température ambiante,
puis on agite le nouveau mélange à cette température pendant
18 heures. Par addition de 150 ml d'eau au mélange, on obtient des cristaux qu'on recueille par filtration et qu'on lave soigneusement avec une solution aqueuse saturée d'acétate d'éthyle. On obtient ainsi en quantité de 20. g, soit avec un rendement de 100%, le composé recherché fondant à 229-234[deg.]C (décomposition avec moussage).
<EMI ID=123.1>
<EMI ID=124.1>
<EMI ID=125.1>
B comme décrit dans l'exemple 1 (2), (3) et (4) ci-dessus pour obtenir avec un rendement de 80% le composé recherché dont le pou-
<EMI ID=126.1>
6"-0-cyclohexylidène-kanamycine B en suspension dans 100 ml de n-butanol et on y ajoute 9,5 g de n-butylxanthate de potassium ,
<EMI ID=127.1>
de la réaction, on refroidit le mélange et on le lave deux fois avec 100 ml d'eau, puis on sépare la couche butanolique et on la concentre à siccité pour obtenir 11 g d'un mélange comprenant de
<EMI ID=128.1>
brut à une chromatographie sur gel de silice qu'on élue avec un mélange 50:1 en volume de chloroforme et de méthanol pour isoler
<EMI ID=129.1>
<EMI ID=130.1>
<EMI ID=131.1>
de méthanol, on ajoute 3 ml d'acide chlorhydrique concentré à la solution et on poursuit la réaction pendant 3 heures à la température ambiante.
On concentre le mélange de réaction à siccité,puis on dissout le résidu dans 18 ml d'eau et on ajuste le pH de la solution à 6,5 par addition de 2,5 ml d'une solution d'hydroxyde de
<EMI ID=132.1>
gée du réactif adsorbé alors avec de l'eau,puis avec de l'ammoniaque aqueuse 0,IN,après quoi on l'élue avec de l'ammoniaque aqueuse 0,3N. Par concentration de l'éluat, on obtient 194 mg du composé recherché.
<EMI ID=133.1>
fait barboter de l'hydrogène dans le mélange pendant 2 heures à la température et sous la pression atmosphériques. Après avoir séparé le catalyseur par filtration, on concentre le filtrat à siccité pour obtenir le composé recherché en quantité de 108 mg, soit avec un rendement de 90%.
<EMI ID=134.1>
préparée comme décrit dans l'exemple 1 de la demande publiée de brevet allemand n[deg.] OS 2555479,puis on ajoute 100 mg d'éthylxanthate de potassium à la solution et on chauffe le mélange au reflux pendant 90 minutes, après quoi on le concentre à siccité. On ajoute un mélange 2:3 en volume d'eau et de chloroforme au résidu solide,puis on sépare la couche chloroformique qu'on lave trois fois avec 20 ml d'eau à chaque reprise et qu'on concentre
<EMI ID=135.1> <EMI ID=136.1>
On sépare les deux composés par chromatographie en couche mince comme dans l'exemple 1 (5) ci-dessus.
EXEMPLE 4 -
<EMI ID=137.1>
B préparée coame dans l'exemple 1 (5) ou dans 1'exemple 3 (1) ci-dessus et on y ajoute 0,22 ml d'hydrate d'hydrazine,après quoi on laisse reposer le mélange pendant 2 heures à la température ambiante. On concentre ensuite le mélange de réaction à siccité et on y ajoute 20 ml d'eau pour obtenir un précipité qu'on recueille par filtration en quantité de 362 mg, soit avec un rende-
<EMI ID=138.1>
<EMI ID=139.1>
<EMI ID=140.1>
nol et on effectue les réactions comme dans l'exemple 1 (6) pour obtenir le composé recherché.
<EMI ID=141.1>
On fait réagir la 3',4'-didésoxy-3'-éno-kanamycine B. comme dans l'exemple 1 (7) pour obtenir le composé recherché. EXEMPLE ? -
(1) Préparation de la 3',4'-didésoxy-3'-éno-penta-N-t-butoxycarbonyl-
<EMI ID=142.1>
<EMI ID=143.1>
nickel de Raney par filtration, on concentre le filtrat à sicci-
<EMI ID=144.1>
l'exemple 1 (6) et (7) pour obtenir le composé recherché, avec un rendement de 90%.
EXEMPLE 6 -
<EMI ID=145.1>
sèche,puis on ajoute 0,8 ml de chlorure de benzoyle tandis qu'on refroidit le système dans de la glace,après quoi on laisse reposer
<EMI ID=146.1>
suite 2 ml d'eau au mélange de réaction et on le concentre pour obtenir un sirop qu'on verse dans 20 ml d'eau pour obtenir un précipité. Par filtration, on recueille le précipité qu'on sèche .pour obtenir le composé recherché en quantité de 2,16 g, soit <EMI ID=147.1>
d'acétone, on ajoute à cette solution 1,4 g d'iodure de sodium,
<EMI ID=148.1> on chauffe le mélange résultant au reflux pendant environ 8 heures.
Au terme de la réaction, on refroidit le mélange pour faire se déposer des cristaux ou'on.recueille par filtration
<EMI ID=149.1>
<EMI ID=150.1>
(3) Préparation de la 3',4'-didésoxy-3'-éno-penta-N-t-butoxycar-
<EMI ID=151.1>
<EMI ID=152.1>
ambiante. On concentre le mélange en un sirop auquel on ajoute
10 ml d'eau pour faire se déposer des cristaux. On recueille par filtration les cristaux qu'on lave à l'eau pour obtenir une masse humide du composé recherché.
On identifie le composé par chromatographie en couche mince sur gel de silice qu'on développe avec un mélange 4:1 en volume de tétrachlorure de carbone et d'acétone.
<EMI ID=153.1>
On dissout la masse humide du composé obtenu au stade
(3) dans 20 ml de méthanol et on ajoute à la solution du méthy-
<EMI ID=154.1>
le mélangé à la température ambiant- pendant 30 minutes, on le <EMI ID=155.1>
un sirop. Par addition d'eau au sirop, on obtient un précipité
<EMI ID=156.1>
che pour obtenir le composé recherché en quantité de 360 mg,soit
<EMI ID=157.1>
<EMI ID = 1.1>
The present invention relates to new ways of
<EMI ID = 2.1>
tibacterial effective against many Gram-positive and Gram-negative bacteria and in particular to inhibit kanamycino-resistant organisms such as kanamycino-resistant Staphylococcus and kanamycino-resistant Escherichia coli.
<EMI ID = 3.1>
<EMI ID = 4.1>
has hitherto been prepared by a process according to which the five amino radicals and all or part of the hydroxyl radicals other than the hydroxyl radicals in positions are protected
<EMI ID = 5.1>
performs sulfonylation of hydroxyl radicals in 3 'positions
<EMI ID = 6.1>
If a 3 ', 4'-unsaturated compound is reduced, the 3', 4'-unsaturated compound is reduced and the remaining protective groups are removed. This classic process requires nine stages from kanamycin B to
<EMI ID = 7.1>
In addition, the process results in a significant consumption of sodium iodide and zinc powder for the removal of radiation.
<EMI ID = 8.1>
exposes to the drawbacks of the difficulty of supplying iodine and pollution by the evacuation of by-products. Consequently, the development of a new, more efficient process
<EMI ID = 9.1>
an obvious industrial interest.
The main object of the invention is to provide dif- <EMI ID = 10.1>
ne B which offer over the known routes the advantage of avoiding the use of alkali metal bromides and iodides and zinc powder, which are replaced by less expensive reagents. All the operations are carried out starting from kanamycin B as in the conventional process, but following another route.
According to a first aspect, the object of the invention is therefore
<EMI ID = 11.1>
<EMI ID = 12.1>
where R represents a hydrogen atom or an alkyl or aryl radical, Z represents an alkylidene, arylidene, cyclohexylidene or tetrahydropyrannylidene radical and the epoxy radical in position
<EMI ID = 13.1>
<EMI ID = 14.1>
where R and Z have the meanings given to them below
<EMI ID = 15.1>
<EMI ID = 16.1>
or R and Z have the meanings given to them below
<EMI ID = 17.1>
reaction mixture;
(3) the -COOR radicals protecting the amino function and the Z radical protecting the hydroxyl function are eliminated in a conventional manner
<EMI ID = 18.1>
<EMI ID = 19.1>
<EMI ID = 20.1>
the latter compound is converted into one of its acid addition salts.
Stage (1) of the process which is the subject of the first
<EMI ID = 21.1>
mycin B of formula (I) in a or p form with a xanthate, can be carried out in an organic solvent, preferably at a temperature of 50 to 1000C. The organic solvent is preferably
<EMI ID = 22.1>
represents a lower alkyl radical and Me represents an alkali metal atom, such as a sodium or potassium atom.
<EMI ID = 23.1>
second product after washing the reaction mixture with water, removing the solvent by distillation and concentrating the residue to dryness.
<EMI ID = 24.1>
mule (III).
The separation of the first product and of the second product which stage (1) gives, namely stage (2) of the process, is preferably carried out by chromatography, for example in a thin layer on silica gel in the usual way, for example with elution using a 1: 1 by volume mixture of carbon tetrachloride and acetone.
Stage (3) of the process forming the subject of the first aspect of the invention for the elimination of the -COOR radicals protecting the amino function and of the Z radical protecting the hydroxyl function can be carried out in a conventional manner. For example, the radical protecting the hydroxyl function can be removed first by moderate hydrolysis in dilute hydrochloric acid or aqueous acetic acid, then the radicals protecting the hydroxyl function.
<EMI ID = 25.1>
barium droxide or also by hydrogenolysis in the presence of catalytic palladium. Stage (4) of the process forming the subject of the first aspect of the invention, namely the hydrogenation, can be carried out in a conventional manner. Thus, catalytic reduction with hydrogen in the presence of a common hydrogenation catalyst, such as a platinum group metal such as platinum or palladium is preferably applicable in step (4). Catalytic Raney nickel has also been found useful for this purpose.
This method which is the subject of the first aspect of the invention offers the following advantages over the known method: - <EMI ID = 26.1>
reaction by means of an alkali metal bromide or iodide and zinc powder;
it is possible to obtain in the state free of all pro radicals
<EMI ID = 27.1>
cine B at the last stage;
at the last stage, the catalytic hydrogenation can be carried out quite easily by producing significantly less impurities from the reactants, so that the purification of the final product is easier than in the conventional process whereby the removal of the protecting radicals. the amino and hydroxyl functions follow the hydrogenation.
It should be noted, however, that the order of execution of steps (3) and (4) in the method forming the subject of the first aspect of the invention can be reversed, if desired, so as to follow the order of the conventional process.
<EMI ID = 28.1>
cine B in the form of the free base, can be converted at will into an organic or inorganic acid addition salt. For example, the sul-
<EMI ID = 29.1>
sulfuric acid diluted with an aqueous solution of the free base
<EMI ID = 30.1>
decolorizing in solution, by filtration thereof and freeze-drying of the filtrate.
<EMI ID = 31.1>
fidokanamycin B of formula (III), obtained as a second product
in stage (1) of the process forming the subject of the first aspect of the invention, is also useful as an intermediate for the preparation
<EMI ID = 32.1>
is in this respect that there are two ways of converting the <EMI ID = 33.1>
protected at the level of amino and hydroxyl radicals of formula:
<EMI ID = 34.1>
where R represents a hydrogen atom or an alkyl or aryl radical, Z represents an alkylidene, arylidene or cyclohexylidene radical
<EMI ID = 35.1>
<EMI ID = 36.1>
where R and Z have the meanings given to them below
<EMI ID = 37.1>
of formula:
<EMI ID = 38.1>
where R and Z have the meanings given to them above;
<EMI ID = 39.1> of formula:
<EMI ID = 40.1>
<EMI ID = 41.1>
respectively.
Step (3) in the second process, in this case the
<EMI ID = 42.1>
concentrated hydrochloric or hydrobromic acid. However, in general, a non-oxidizing mineral acid, such as sulfuric acid, is suitable for this purpose. Preferably, the reaction is carried out.
<EMI ID = 43.1>
in the form of an acid addition salt, according to which:
(1) a 3 ', 4'-epoxykanamycin B protected at the level of amino and hydroxyl radicals of formula is reacted with a xanthate:
<EMI ID = 44.1>
where R represents a hydrogen atom or an alkyl radical or
<EMI ID = 45.1>
<EMI ID = 46.1>
where R and Z have the meanings given to them above and the episulfide radical in position 3 ', 4' has the configu-
<EMI ID = 47.1>
of formula:
<EMI ID = 48.1>
<EMI ID = 49.1>
above;
(2) the reaction mixture obtained in step (1) is treated by means
<EMI ID = 50.1>
(3) the -COOR radicals protecting the amino function and the Z radical protecting the hydroxyl function are eliminated in a conventional manner
<EMI ID = 51.1>
<EMI ID = 52.1>
<EMI ID = 53.1>
into 3 ', 4'-dideoxykanamycin B and if desired, the latter is converted into one of its acid addition salts.
Stages (1), (3) and (4). of the process forming the subject of the third aspect of the invention correspond to the stages
(1), (3) and (4) of the method forming the subject of the first aspect.
of the invention, respectively.
In step (2) of the process forming the subject of the third aspect of the invention, the reaction with hydrazine is preferably carried out in a lower alkanol, such as methanol or ethanol, in particular in the form of 1 'hydrate
<EMI ID = 54.1>
contains about 10 to 30 moles per mole of the compound of formula (III). The reaction with Raney nickel, when carried out
in step (2), is preferably carried out by dissolving the compound of formula (III) in a lower alkanol, such as methanol, by adding Raney nickel to the solution in a suitable amount, for example in triplicate of the amount of compound of formula (III), on a weight basis, and by stirring the mixture
<EMI ID = 55.1>
3 hours.
Step (2) in the process forming the subject of the third aspect of the invention is also applicable, if the thing is
<EMI ID = 56.1>
(II), but it is usually advantageous to carry out step (II) directly on the reaction mixture which gives step (1) and which contains the two compounds of formulas (II) and (III), in particular on an industrial scale.
<EMI ID = 57.1> <EMI ID = 58.1>
with a high overall yield following another four-stage path. According to this process
<EMI ID = 59.1>
<EMI ID = 60.1>
where R and Z have the meanings given to them above, with an acylating agent, such as benzoyl chloride, in a conventional manner, to acylate the hydroxyl radical in position 2 "and obtain a compound of formula:
<EMI ID = 61.1>
where R and Z have the meanings given to them above and Y represents an acyl radical;
(2) the resulting compound of formula (V) is reacted with an alkali or alkaline earth metal iodide, such as sodium iodide, preferably in the presence of sodium acetate and glacial acetic acid, to obtain a compound of formula:
<EMI ID = 62.1>
where R, Z and Y have the meanings given to them above;
<EMI ID = 63.1>
fonylation with a sulfonylating agent such as methanesulfonyl chloride, p-toluenesulfonyl chloride or benzylsulfonyl chloride in a conventional manner, preferably in py-
<EMI ID = 64.1>
<EMI ID = 65.1>
<EMI ID = 66.1>
compound of formula (VII) in compound of formula:
<EMI ID = 67.1>
where R, Z and Y have the meanings given to them above and (5) the compound of formula (VIII) is reacted.
<EMI ID = 68.1> <EMI ID = 69.1>
The pentaprotected compound at the level of amino radicals
<EMI ID = 70.1>
<EMI ID = 71.1>
where R and Z have the meanings given to them above, which is the starting compound for the processes forming the subject of the first aspect to the third aspect of the invention, is a new compound which is also the subject of the invention. 'invention.
This new 3 ', 4'-p-epoxidized derivative of kanamycin B of formula (IX) can be prepared starting from kanamycin B in a few reaction stages as explained below.
First, kanamycin B is protected at amino radicals in the conventional manner. Kanamycin B is then reacted with a chloroformate of formula RCOOC1 where R represents a hydrogen atom or an alkyl or aryl radical, for example a phenyl radical. For the protection of the five amino radicals of kanamycin B in the form urethane radicals
-NHCOOR, as described in Japanese Patent Publication <EMI ID = 72.1>
of formula:
<EMI ID = 73.1>
where R has the meaning given to it above.
The next stage is the protection of hydro- radicals
<EMI ID = 74.1>
Finally, the compound of formula (X) can be reacted with an agent known for the protection of the hydroxyl function, to be chosen from among alkylidenation agents, arylidenation agents, cyclohexylidenation agents and tetrahydropyrannylidenation agents. Typical examples of such protective agents
<EMI ID = 75.1>
thoxypropane, anisaldehyde, benzaldehyde, dimethylacetal, tolualdehyde, 1,1-dimethoxycyclohexane and 1,1-dimethoxytetrahydropyran. The reaction is performed by preference
<EMI ID = 76.1>
20 hours. The reaction selectively introduces radicals pro-
<EMI ID = 77.1>
<EMI ID = 78.1>
<EMI ID = 79.1>
could result in an attack of the agent protecting the hydroxyl function at the hydroxyl radicals in positions 3 'and
<EMI ID = 80.1>
The compound of formula (XI) can then be subjected to
an acylation aimed at the selective protection of the hydroxyl radicals in positions 2 "and 3 'by an acyl radical protecting the hydroxyl function. The acylation is usually carried out by dissolving the compound of formula (XI) in pyridine, by addition an acylating agent such as low temperature acyl chloride
<EMI ID = 81.1>
ge for a few hours.
It is preferable that the acylating agent is a chloro-
<EMI ID = 82.1>
acetyl chloride, or an aroyl chloride such as benzoyl chloride. Especially preferred is benzoyl chloride.
<EMI ID = 83.1> <EMI ID = 84.1>
relatively unreactive. The 2 ", 3'-diacyl derivative of formula is thus obtained:
<EMI ID = 85.1>
where R and Z have the meanings given to them above and X and Y each represent an acyl radical, for example alkanoyl and in particular lower alkanoyl, such as acetyl,
or aroyl such as benzoyl.
The 2 "-monoacylated derivative, that is to say the compound of formula (XII) but where X represents a hydrogen atom, can be obtained, if desired, for the same purposes by carrying out the acylation under more moderate conditions. For example, when the acylating agent is benzoyl chloride, it is possible to obtain in major proportion the 2 "-monobenzoyl derivative by adding the benzoyl chloride a little and slowly below. of
<EMI ID = 86.1>
Paration can be carried out by chromatography in a conventional manner, for example by thin-layer chromatography on silica gel with development by means of a 2: 1 mixture by volume of chloroform and methanol.
<EMI ID = 87.1>
<EMI ID = 88.1>
where R, Z, X and Y have the meanings given to them above and W represents a methanesulfonyl radical, p-toluenesul-
<EMI ID = 89.1>
above constituting the main product by reaction with a metal alkoxide. The epoxidation is preferably carried out by dissolving the compound of formula (XIII) in a solvent, such as water, a lower alkanol such as methanol or ethanol,
<EMI ID = 90.1>
resulting from a metal alcoholate, which is usually an alkali metal or alkaline earth metal alcoholate, such as an alcoholate and in particular a lower alcoholate of sodium, potassium or lithium, for example sodium methoxide or ethoxide , and by maintaining the reaction mixture at room temperature,
<EMI ID = 91.1>
res. During epoxidation, the Y radical which protects the hydroxyl radical in position 2 "is eliminated due to the alkalinity of the medium, so that the hydroxyl radical in position 2" is
<EMI ID = 92.1>
by reaction with an alkali metal alcoholate such as sodium methoxide, the details of the operation being specified in the
<EMI ID = 93.1>
<EMI ID = 94.1>
<EMI ID = 95.1>
<EMI ID = 96.1>
<EMI ID = 97.1>
Route A = method forming the subject of the first aspect of the invention Route B = method forming the subject of the second aspect of the invention Route C = method forming the subject of the third aspect of the invention Route D = variant of channels A and C
The invention is further illustrated by the examples
<EMI ID = 98.1>
thesis.
<EMI ID = 99.1>
(1) Preparation of penta-N-ethoxycarbonylkanamycin B.
Penta-N-ethoxycarbonylkanamycin B is prepared from kanamycin B as the free base as described.
<EMI ID = 100.1>
10 g of penta-N-ethoxycarbonylkanamycin B is suspended in 70 ml of dimethylformamide and p-toluenesulfonic acid is added thereto until the pH of the suspension is less than 3.0, after which 10 ml of cyclohexane are added
<EMI ID = 101.1>
confirms the completion of the reaction by thin layer chromatography on silica gel (Merck) as a stationary phase which is eluted with a 10: 1 by volume mixture of chloroform and methanol:
<EMI ID = 102.1>
of triethylamine. The neutralized liquid phase is concentrated in vacuo to obtain 25 ml of a residual liquid which is dissolved
<EMI ID = 103.1>
at a temperature of 0 to 5 [deg.] C, 3.9 ml of benzoyl chloride are added and the mixture is left to react for 3 hours. Completion of the reaction was confirmed by thin layer chromatography. 5 ml of water are added to the resulting mixture, followed by stirring.
the mixture at room temperature for 30 minutes, concentrated and poured into 200 ml of water to obtain a precipitate
<EMI ID = 104.1>
<EMI ID = 105.1>
(3) Preparation of 2 ", 3'-di-0-benzoyl-penta-N-ethoxycarbonyl-
<EMI ID = 106.1>
At room temperature, 5 ml of water was added thereto to decompose the excess methanesulfonyl chloride and the mixture was concentrated. 200 ml of water are added to the concentrate to precipitate the compound <EMI ID = 107.1>
<EMI ID = 108.1>
<EMI ID = 109.1>
100 ml of methanol supplemented with 2.2 g of sodium methoxide. The mixture is stirred at room temperature for 2 hours. The completion of the reaction was confirmed by thin layer chromatography on a stationary phase of silica gel which was eluted with a 1: 1 by volume mixture of carbon tetrachloride and acetone "after which the reaction mixture was cooled. in ice, neutralized with 1.25 ml of concentrated hydrochloric acid and concentrated. 100 ml of water are added to the neutralized concentrate to precipitate the desired compound which is collected by filtration in an amount of 3. 5 g, ie with a yield of 9% This compound has the following properties:
<EMI ID = 110.1>
<EMI ID = 111.1>
<EMI ID = 112.1>
tanol, then 1.7 g of potassium n-butylxanthate are added thereto and the reaction is continued for 4 hours at 80 [deg.] C. After confirming the completion of the reaction by thin layer chromatography on silica gel which is eluted with a 1: 1 by volume mixture of carbon tetrachloride and acetone, the mixture is cooled and washed twice. times with 40 ml of water each time, after which the resulting butanol layer is concentrated to dryness. 900 mg of intermediate product are thus obtained. Thin layer chromatography on silica gel confirms that this
<EMI ID = 113.1>
This mixture is chromatographed on silica gel in a thin layer which is eluted with a 5: 1 mixture by volume of carbon tetrachloride and acetone to give 3 ', 4'-dideoxy-3'-
<EMI ID = 114.1>
<EMI ID = 115.1>
<EMI ID = 116.1>
ethoxycarbonyl-4 ", 6" -0-cyclohexylidene-kanamycin B in 5 ml
<EMI ID = 117.1>
to adjust the pH of the solution to 2.0. We heat the solution
<EMI ID = 118.1>
of barium hydroxide octahydrate, after which heating is continued to remove the methanol by distillation and the mixture is maintained at reflux for 8 hours before being cooled.
Carbon dioxide is bubbled through the cooled mixture and the resulting barium carbonate is filtered off. By purification on an Amberlite CG-50 resin column
<EMI ID = 119.1>
<EMI ID = 120.1>
<EMI ID = 121.1>
in 4 ml of water and 0.2 ml of Raney nickel is added thereto. Hydrogen is bubbled through the solution for 2 hours
at atmospheric temperature and pressure. After having separated the catalyst by filtration, the filtrate is concentrated to dryness to obtain the desired compound in an amount of 108 mg, ie with a yield of 95%.
EXAMPLE 2 - �
(1) Preparation of penta-N-t-butoxycarbonyl-kanamycin B.
10 g of kanamycin B are added to a mixture of 34 ml
<EMI ID = 122.1>
t-butyl bonate. to the mixture at room temperature,
then the new mixture is stirred at this temperature for
18 hours. By adding 150 ml of water to the mixture, crystals are obtained which are collected by filtration and washed thoroughly with a saturated aqueous solution of ethyl acetate. The desired compound is thus obtained in an amount of 20. g, ie with a yield of 100%, melting at 229-234 [deg.] C (decomposition with foaming).
<EMI ID = 123.1>
<EMI ID = 124.1>
<EMI ID = 125.1>
B as described in Example 1 (2), (3) and (4) above to obtain with a yield of 80% the desired compound whose potency
<EMI ID = 126.1>
6 "-0-cyclohexylidene-kanamycin B in suspension in 100 ml of n-butanol and 9.5 g of potassium n-butylxanthate are added thereto,
<EMI ID = 127.1>
of the reaction, the mixture is cooled and washed twice with 100 ml of water, then the butanol layer is separated and concentrated to dryness to obtain 11 g of a mixture comprising
<EMI ID = 128.1>
crude to chromatography on silica gel which is eluted with a 50: 1 mixture by volume of chloroform and methanol to isolate
<EMI ID = 129.1>
<EMI ID = 130.1>
<EMI ID = 131.1>
of methanol, 3 ml of concentrated hydrochloric acid is added to the solution and the reaction is continued for 3 hours at room temperature.
The reaction mixture is concentrated to dryness, then the residue is dissolved in 18 ml of water and the pH of the solution is adjusted to 6.5 by the addition of 2.5 ml of sodium hydroxide solution.
<EMI ID = 132.1>
The reagent is then adsorbed with water, then with 0.1N aqueous ammonia, after which it is eluted with 0.3N aqueous ammonia. By concentrating the eluate, 194 mg of the desired compound are obtained.
<EMI ID = 133.1>
bubbled hydrogen through the mixture for 2 hours at atmospheric temperature and pressure. After having separated the catalyst by filtration, the filtrate is concentrated to dryness to obtain the desired compound in an amount of 108 mg, ie with a yield of 90%.
<EMI ID = 134.1>
prepared as described in Example 1 of German Published Application No [deg.] OS 2555479, then 100 mg of potassium ethylxanthate is added to the solution and the mixture is heated under reflux for 90 minutes, after which it is added concentrates it to dryness. A 2: 3 mixture by volume of water and chloroform is added to the solid residue, then the chloroform layer is separated, washed three times with 20 ml of water each time and concentrated.
<EMI ID = 135.1> <EMI ID = 136.1>
The two compounds are separated by thin layer chromatography as in Example 1 (5) above.
EXAMPLE 4 -
<EMI ID = 137.1>
B prepared as in Example 1 (5) or in Example 3 (1) above and 0.22 ml of hydrazine hydrate is added thereto, after which the mixture is allowed to stand for 2 hours at ambient temperature. The reaction mixture is then concentrated to dryness and 20 ml of water are added thereto to obtain a precipitate which is collected by filtration in an amount of 362 mg, ie with a yield.
<EMI ID = 138.1>
<EMI ID = 139.1>
<EMI ID = 140.1>
nol and the reactions are carried out as in Example 1 (6) to obtain the desired compound.
<EMI ID = 141.1>
3 ', 4'-dideoxy-3'-eno-kanamycin B is reacted as in Example 1 (7) to obtain the desired compound. EXAMPLE? -
(1) Preparation of 3 ', 4'-dideoxy-3'-eno-penta-N-t-butoxycarbonyl-
<EMI ID = 142.1>
<EMI ID = 143.1>
Raney nickel by filtration, the filtrate is concentrated to sicci
<EMI ID = 144.1>
Example 1 (6) and (7) to obtain the desired compound, with a yield of 90%.
EXAMPLE 6 -
<EMI ID = 145.1>
dry, then 0.8 ml of benzoyl chloride is added while the system is cooled in ice, after which it is allowed to stand
<EMI ID = 146.1>
Following 2 ml of water to the reaction mixture and concentrated to obtain a syrup which is poured into 20 ml of water to obtain a precipitate. By filtration, the precipitate is collected and dried to obtain the desired compound in an amount of 2.16 g, ie <EMI ID = 147.1>
of acetone, 1.4 g of sodium iodide are added to this solution,
<EMI ID = 148.1> The resulting mixture is heated under reflux for about 8 hours.
At the end of the reaction, the mixture is cooled to deposit crystals which are collected by filtration.
<EMI ID = 149.1>
<EMI ID = 150.1>
(3) Preparation of 3 ', 4'-dideoxy-3'-eno-penta-N-t-butoxycar-
<EMI ID = 151.1>
<EMI ID = 152.1>
ambient. The mixture is concentrated into a syrup to which is added
10 ml of water to make the crystals settle. The crystals are collected by filtration and washed with water to obtain a wet mass of the desired compound.
The compound was identified by thin layer chromatography on silica gel which was developed with a 4: 1 by volume mixture of carbon tetrachloride and acetone.
<EMI ID = 153.1>
The wet mass of the compound obtained in stage is dissolved
(3) in 20 ml of methanol and to the solution is added methyl
<EMI ID = 154.1>
the mixed at room temperature - for 30 minutes, it is <EMI ID = 155.1>
a syrup. By adding water to the syrup, a precipitate is obtained
<EMI ID = 156.1>
che to obtain the desired compound in an amount of 360 mg, i.e.
<EMI ID = 157.1>