Composés antiviraux et leur synthèse.
Les herpès-virus sont responsables de nombreuses infections des mammifères telles que, chez l'homme, la kératite, l'herpès labial (chancre froid), l'herpès cutané, le zona, l'herpès génital, l'encéphalite herpétique, l'herpès néonatal, le panaris herpétique et la gengivostomatite herpétique aiguë.
<EMI ID=1.1> bles de la variole chez l'homme. On n'a pu encore découvrir d'agent antiviral totalement satisfaisant qui combine une haute efficacité et une faible toxicité. Des efforts considérables ont donc été consacrés à la mise au point d'un agent approprié.
La Demanderesse a découvert à présent que des composés
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teurs des herpès -virus et sont sensiblement non toxiques. La pré-
<EMI ID=3.1>
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d'entre eux, en association ou non avec d'autres agents thérapeutiquement actifs.
Les exemples ci-après illustrent la synthèse de la
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composé basique avec un acide en milieu aqueux,puis par évaporation du solvant, par exemple par lyophilisation. Les sels sont généralement plus solubles que la base libre et sont souvent préférés pour la préparation de compositions à base aqueuse comme les collyres. Par exemple, il est possible de faire réagir une suspension de l'amine libre dans de l'eau distillée avec une quantité équivalente d'un acide aqueux et de stabiliser la solution résultante au moyen d'un tampon, comme une solution physiologique saline tamponnée au phosphate.
Les acides Qui conviennent pour préparer les sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables de l'invention sont ceux contenant des anions non toxiques et sont notamment l'acide chlorhydrique, l'acide sulfurique, l'acide phosphorique, .l'acide acétique, l'acide lactique, l'acide citrique, l'acide tartrique,
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gluconique, l'acide saccharique et ainsi de suite.
EXEMPLE 1.-
<EMI ID=7.1>
dans 100 ni de pyridine sèche fraîchement distillée et on conserve
<EMI ID=8.1>
moles) de chlorure de p-tolylsulfonyle fraîchement recristallisé
<EMI ID=9.1>
ajoute lentement cette solution à la solution du nucléoside. On
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<EMI ID=11.1>
alors cette solution à deux reprises avec 500 ml de chloroforme, on combine les extraits chloroformiques et on les extrait en retour avec 250 ni d'une solution saturée de bicarbonate de so-
<EMI ID=12.1>
sèche sur du sulfate de magnésium anhydre. On chasse le solvant à l'évaporateur rotatif sous vide pour obtenir 32 g d�un produit
<EMI ID=13.1>
<EMI ID=14.1>
à 162[deg.]C.
<EMI ID=15.1>
<EMI ID=16.1>
la solution à 100[deg.]C pendant 2 heures} puis on la refroidit et on
<EMI ID=17.1>
<EMI ID=18.1>
<EMI ID=19.1>
<EMI ID=20.1>
ambiante pendant 30 minutes. Après filtration, on réduit le volume à 20 - 30 ml par évaporation du solvant à l'évaporateur rotatif. A mesure que la solution se concentre, il se forme un <EMI ID=21.1>
sèche sous vide sur des pastilles d'hydroxyde de potassium et on
<EMI ID=22.1>
<EMI ID=23.1>
<EMI ID=24.1>
charbon palladié.à 10% comme catalyseur. On maintient la suspension sous la pression atmosphérique dans un appareil d'hydrogénation pendant 2 heures et 30 minutes,puis on filtre le.mélange sur le produit vendu sous le nom de Celite. On chasse le solvant sous vide, on dissout le résidu dans de l'eau et on verse la solution aqueuse sur une colonne de la résine vendue sous le nom de Dowex 50
sous forme H'. Après avoir lavé la colonne avec 100 ml d'eau, on
<EMI ID=25.1>
<EMI ID=26.1>
127 mg (rendement de $6%) du produit recherché.
<EMI ID=27.1>
<EMI ID=28.1>
<EMI ID=29.1>
ment avec 3 g de la résine vendue sous le nom de Chelex 100. On sépare la résine par filtration et on ajoute au filtrat 20 ml
<EMI ID=30.1>
<EMI ID=31.1>
<EMI ID=32.1>
forme. On évapore la solution aqueuse à siccité et on dissout le
<EMI ID=33.1> <EMI ID=34.1>
EXEMPLE 2. - '
<EMI ID=35.1>
<EMI ID=36.1>
<EMI ID=37.1>
<EMI ID=38.1>
sépare la résine par filtrat-ion, et on ajoute au filtrat 0,177 g .
<EMI ID=39.1>
<EMI ID=40.1>
<EMI ID=41.1>
<EMI ID=42.1>
(69%) du produit recherché.,
EXEMPLE ^,-
Sels d'addition d'acides.
<EMI ID=43.1>
il-1 pour obtenir une solution du chlorhydrate de l'aminé. On recueille le sel par lyophilisation.
On prépare de la mené manière d'autres sels d'addition
<EMI ID=44.1>
<EMI ID=45.1>
citrique et d'acide tartrique.
On prépare également par le même mode opératoire les sels du composé trôné correspondant.
On peut administrer les composés de l'invention isolément,nais, en général, on les administre en association avec des véhicules non toxiques pharmaceutiquement acceptables dont la proportion est déterminée par les propriétés et la nature chimique du véhicule envisagé, le mode d'administration et la pratique pharmaceutique. Par exemple, pour combattre diverses infections ou entretenir une dose thérapeutiquement efficace dans le sang ou les tissus, on peut administrer les composés par voie orale sous forme de comprimés ou de capsules contenant des excipients tels que de l'amidon, du lactose, certaines argiles, etc. Les composés peuvent être kératinisés de manière à mieux résister à l'acide et aux enzymes présents dans l'estomac.
Pour l'administration intraveineuse et intramusculaire, les composés peuvent être utilisés sous forme d'une solution stérile contenant d'autres solutés, par exemple suffisamment de sel ou de glucose pour rendre la solution isotonique. Il est possible de présenter les compositions sous diverses formes unitaires.
Le médecin ou le vétérinaire détermine suivant le cas le régime efficace d'administration. Ce régime dépend de facteurs
<EMI ID=46.1>
fection et la forme unitaire choisie. Des doses unitaires contenant
<EMI ID=47.1>
Les composés de l'invention assurent une inhibition de l'ordre de 90% avec la souche de cellules de singe Vero infectée par le virus de l'herpès simple, en une concentration d'à peine
<EMI ID=48.1>
<EMI ID=49.1>
<EMI ID=50.1>
<EMI ID=51.1>
<EMI ID=52.1> l'idoxuridine, bien qu'elle présente une activité élevée en des doses relativement faibles, est presque totalement cytotoxique
en une concentration de 50 micronoles par litre.
On applique des techniques normalisées pour l'entretien du virus et des cellules Vero. Ces techniques comprennent la culture et le titrage par dosage en plaque de même que la nultip lication du virus en présence des composés essayés. On maintient
<EMI ID=53.1>
de sérum de veau foetal.
Pour l'essai,on infecte les cellules avec le virus jusqu'à environ 10 unités formant plaque par cellule. On prélève
<EMI ID=54.1>
volume convenable de milieu contenant le composé à essayer. Après
<EMI ID=55.1>
titrage.
Dans des études semblables, ce manque de cytotoxicité a été mis en évidence sur diverses cellules de mammifère mises
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de hamsters, ainsi que de cellules de poulets.
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bromé correspondant faisant l'objet de l'invention,ainsi que les
<EMI ID=58.1>
lement utiles pour le traitement de la kératite^ herpétique chez les mammifères.
Actuellement, la thérapie généralement admise pour la. kératite herpétique aiguë comprend l'utilisation de la �-iodo-
<EMI ID=59.1>
<EMI ID=60.1>
thérapie antivirale pour les infections oculaires herpétiques.^
<EMI ID=61.1> mise en évidence par des effets secondaires indésirables, comme l'apparition de conjonctivite folliculaire et papillaire, ainsi que de kératopathie épithéliale ponctuée.
Pour ces raisons,ainsi que pour d'autres, notamment la
<EMI ID=62.1>
<EMI ID=63.1>
que chez des lapines gravides recevant topiquement le médicament sur l'oeil en des doses semblables à celles utilisées clinique-
<EMI ID=64.1>
<EMI ID=65.1>
<EMI ID=66.1>
a été mis en évidence lors du traitement de lapins. Pour cette
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<EMI ID=68.1>
On traite les animaux de chacun des groupes suivant la technique à double insu au moyen de gouttes topiques à intervalles de 4. heures
<EMI ID=69.1>
administre les solutions suivantes :
(1) solution physiologique saline
<EMI ID=70.1> ni est moins puissante que sous les formes dosées plus concentrées, L mais une guérison plus rapide qu'avec la solution physiologique servant de témoin.
<EMI ID=71.1>
jeune souris tétant encore, plus faible que celui de la 5-iodo-
<EMI ID=72.1>
en 5 groupes les animaux de 6 cages comprenant 10 souris âgées de 1 à 2 jours avec 1 mère par cage et on injecte aux animaux
1 fois par jour pendant les 5 jours suivants les composés comme indiqué ci-après.
<EMI ID=73.1>
Les témoins reçoivent de la solution physiologique
<EMI ID=74.1>
prennent 2 souris par cage. En raison de l'effet de la aère,
<EMI ID=75.1>
le début du traitement.
On pratique l'énucléation et on fixe les globes
<EMI ID=76.1>
traitées. au moyen de la 5-iododésoxyuridine pèsent 20 à 30% de
<EMI ID=77.1>
est évidente. L'examen visuel indique que les souris sont naïades.
<EMI ID=78.1>
5-iodouridine apparaissent en bonne santé et pèsent à peu près autant que les témoins.
<EMI ID=79.1>
raissent des signes de non maturité de la cornée,du corps cilaire ainsi qu'une cataracte évidente. On constate une diminution mar- quée de la largeur de la rétine. Les plus importantes nodifica-tions sont dans la rétine périphérique :
1) épaississement et une ondulation de la couche . nucléaire extérieure,
2) disparition de la couche plexiforrne extérieure,
3) troubles dans les deux couches nucléaires, noyaux
<EMI ID=80.1>
couche nucléaire intérieure, et
<EMI ID=81.1>
riphérie, aplasie de bâtonnets et cônes; ces modifications sont
<EMI ID=82.1>
et noins évidentes pour une dose de 125 mg par kg.
Toutes les études ci-dessus font ressortir les avantages sensibles des composés de l'invention sur les agents thérapeutieues actuellement disponibles.
REVENDICATIONS
<EMI ID=83.1>
ciation avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Antiviral compounds and their synthesis.
Herpes viruses are responsible for many infections of mammals such as, in humans, keratitis, herpes labialis (cold chancre), cutaneous herpes, shingles, genital herpes, herpetic encephalitis, neonatal herpes, herpetic whitlow, and acute herpetic gengivostomatitis.
<EMI ID = 1.1> causes of smallpox in humans. No fully satisfactory antiviral agent has yet been found which combines high efficacy and low toxicity. Considerable effort has therefore been devoted to the development of an appropriate agent.
The Applicant has now discovered that compounds
<EMI ID = 2.1>
herpes virus and are substantially non-toxic. The pre-
<EMI ID = 3.1>
<EMI ID = 4.1>
of them, in combination or not with other therapeutically active agents.
The examples below illustrate the synthesis of
<EMI ID = 5.1>
basic compound with an acid in aqueous medium, then by evaporation of the solvent, for example by lyophilization. The salts are generally more soluble than the free base and are often preferred for the preparation of aqueous-based compositions such as eye drops. For example, it is possible to react a suspension of the free amine in distilled water with an equivalent amount of an aqueous acid and stabilize the resulting solution by means of a buffer, such as physiological buffered saline. phosphate.
The acids which are suitable for preparing the addition salts of pharmaceutically acceptable acids of the invention are those containing non-toxic anions and are in particular hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, acetic acid. , lactic acid, citric acid, tartaric acid,
<EMI ID = 6.1>
gluconic, saccharic acid and so on.
EXAMPLE 1.-
<EMI ID = 7.1>
in 100 µl of freshly distilled dry pyridine and keep
<EMI ID = 8.1>
moles) of freshly recrystallized p-tolylsulfonyl chloride
<EMI ID = 9.1>
slowly add this solution to the nucleoside solution. We
<EMI ID = 10.1>
<EMI ID = 11.1>
then this solution twice with 500 ml of chloroform, the chloroform extracts are combined and back-extracted with 250 µl of saturated sodium bicarbonate solution.
<EMI ID = 12.1>
dried over anhydrous magnesium sulfate. The solvent was removed on a rotary evaporator under vacuum to obtain 32 g of a product.
<EMI ID = 13.1>
<EMI ID = 14.1>
at 162 [deg.] C.
<EMI ID = 15.1>
<EMI ID = 16.1>
the solution at 100 [deg.] C for 2 hours} then cooled and
<EMI ID = 17.1>
<EMI ID = 18.1>
<EMI ID = 19.1>
<EMI ID = 20.1>
room temperature for 30 minutes. After filtration, the volume is reduced to 20-30 ml by evaporating the solvent on a rotary evaporator. As the solution concentrates, an <EMI ID = 21.1> is formed.
vacuum dried over potassium hydroxide pellets and
<EMI ID = 22.1>
<EMI ID = 23.1>
<EMI ID = 24.1>
10% palladium on charcoal as a catalyst. The suspension was maintained at atmospheric pressure in a hydrogenation apparatus for 2 hours and 30 minutes, then the mixture was filtered through the product sold under the name Celite. The solvent is removed in vacuo, the residue is dissolved in water and the aqueous solution is poured onto a column of the resin sold under the name Dowex 50.
in H 'form. After washing the column with 100 ml of water,
<EMI ID = 25.1>
<EMI ID = 26.1>
127 mg (yield of $ 6%) of the desired product.
<EMI ID = 27.1>
<EMI ID = 28.1>
<EMI ID = 29.1>
ment with 3 g of the resin sold under the name Chelex 100. The resin is separated by filtration and 20 ml are added to the filtrate.
<EMI ID = 30.1>
<EMI ID = 31.1>
<EMI ID = 32.1>
form. The aqueous solution is evaporated to dryness and the mixture is dissolved.
<EMI ID = 33.1> <EMI ID = 34.1>
EXAMPLE 2. - '
<EMI ID = 35.1>
<EMI ID = 36.1>
<EMI ID = 37.1>
<EMI ID = 38.1>
the resin is filtered off, and 0.177 g is added to the filtrate.
<EMI ID = 39.1>
<EMI ID = 40.1>
<EMI ID = 41.1>
<EMI ID = 42.1>
(69%) of the desired product.,
EXAMPLE ^, -
Acid addition salts.
<EMI ID = 43.1>
il-1 to obtain a solution of the hydrochloride of the amine. The salt is collected by lyophilization.
Other addition salts are prepared in the same way
<EMI ID = 44.1>
<EMI ID = 45.1>
citric and tartaric acid.
The salts of the corresponding trone compound are also prepared by the same procedure.
The compounds of the invention may be administered in isolation, but in general they are administered in combination with non-toxic pharmaceutically acceptable vehicles the proportion of which is determined by the properties and chemical nature of the vehicle envisaged, the mode of administration and pharmaceutical practice. For example, to combat various infections or to maintain a therapeutically effective dose in the blood or tissues, the compounds can be administered orally in the form of tablets or capsules containing excipients such as starch, lactose, certain clays. , etc. The compounds can be keratinized in order to better resist the acid and the enzymes present in the stomach.
For intravenous and intramuscular administration, the compounds can be used in the form of a sterile solution containing other solutes, for example enough salt or glucose to make the solution isotonic. It is possible to present the compositions in various unit forms.
The doctor or veterinarian determines the effective administration regimen as appropriate. This diet depends on factors
<EMI ID = 46.1>
fection and the chosen unit form. Unit doses containing
<EMI ID = 47.1>
The compounds of the invention provide an inhibition of the order of 90% with the monkey cell strain Vero infected with the herpes simplex virus, in a concentration of barely
<EMI ID = 48.1>
<EMI ID = 49.1>
<EMI ID = 50.1>
<EMI ID = 51.1>
<EMI ID = 52.1> idoxuridine, although it shows high activity in relatively low doses, is almost completely cytotoxic
in a concentration of 50 micronoles per liter.
Standard techniques are applied for the maintenance of virus and Vero cells. These techniques include cultivation and titration by plaque assay as well as the nultiplication of the virus in the presence of the compounds tested. We maintain
<EMI ID = 53.1>
of fetal calf serum.
For the assay, cells are infected with virus up to about 10 plaque forming units per cell. We take
<EMI ID = 54.1>
appropriate volume of medium containing the compound to be tested. After
<EMI ID = 55.1>
titration.
In similar studies, this lack of cytotoxicity has been demonstrated in various mammalian cells.
<EMI ID = 56.1>
hamsters, as well as chicken cells.
<EMI ID = 57.1>
corresponding brominated subject of the invention, as well as
<EMI ID = 58.1>
Also useful for the treatment of herpetic keratitis in mammals.
Currently, the generally accepted therapy for. Acute herpetic keratitis includes the use of � -iodo-
<EMI ID = 59.1>
<EMI ID = 60.1>
antiviral therapy for herpetic eye infections. ^
<EMI ID = 61.1> evidenced by undesirable side effects, such as the onset of follicular and papillary conjunctivitis, as well as punctate epithelial keratopathy.
For these reasons, as well as others, notably the
<EMI ID = 62.1>
<EMI ID = 63.1>
than in pregnant rabbits receiving the drug topically to the eye in doses similar to those used clinically.
<EMI ID = 64.1>
<EMI ID = 65.1>
<EMI ID = 66.1>
has been shown in the treatment of rabbits. For this
<EMI ID = 67.1>
<EMI ID = 68.1>
The animals in each of the groups were treated using the double-blind technique with topical drops at 4 hour intervals.
<EMI ID = 69.1>
administers the following solutions:
(1) physiological saline solution
<EMI ID = 70.1> ni is less potent than in the more concentrated dosage forms, L but faster healing than with physiological solution serving as a control.
<EMI ID = 71.1>
young mouse still sucking, weaker than that of 5-iodo-
<EMI ID = 72.1>
in 5 groups the animals of 6 cages comprising 10 mice aged 1 to 2 days with 1 mother per cage and the animals are injected
1 time per day for the next 5 days the compounds as indicated below.
<EMI ID = 73.1>
Witnesses receive physiological solution
<EMI ID = 74.1>
take 2 mice per cage. Due to the effect of the airs,
<EMI ID = 75.1>
the start of treatment.
We practice enucleation and we fix the globes
<EMI ID = 76.1>
processed. by means of 5-iododeoxyuridine weigh 20 to 30% of
<EMI ID = 77.1>
is obvious. Visual examination indicates that the mice are naive.
<EMI ID = 78.1>
5-iodouridine appeared healthy and weighed about as much as the controls.
<EMI ID = 79.1>
There are signs of non-maturity of the cornea, of the cilar body as well as an obvious cataract. There is a marked decrease in the width of the retina. The most important nodifications are in the peripheral retina:
1) thickening and rippling of the layer. nuclear exterior,
2) disappearance of the outer plexiforum layer,
3) disorders in the two nuclear layers, nuclei
<EMI ID = 80.1>
inner nuclear layer, and
<EMI ID = 81.1>
riphérie, aplasia of rods and cones; these modifications are
<EMI ID = 82.1>
and not obvious for a dose of 125 mg per kg.
All of the above studies demonstrate the substantial advantages of the compounds of the invention over the currently available therapeutic agents.
CLAIMS
<EMI ID = 83.1>
ciation with a pharmaceutically acceptable carrier.