Nouveaux tripeptides utiles comme �édica-ments et leur procédé de préparation.
La présente invention concerne certains tripeptides et leur application comme anti-dépressifs et/ou comme stimu-
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procédés pour leur préparation.
L'hormone libérant la thyréotrophine qu'on trouve dans la nature (TRH) est le triptide L-pyroglutamyl-L-histidyl-Lproline amide. Des procédés pour la synthèse de ce peptide sont connus. Des procédés particuliers sont décrits dans les brevets des Etats-Unis d'Amérique Nos 3 753 569, 3 746 697, 3 757 003
et 3 752 800. Des analogues, dérivés et isomères de la TRH sont également décrits dans "Vitamins and Hormones, Advances in Research and Applications" volume 29, pages 1-39, Académie Press, New York et Londres (1971) ; "Chemistry and Biology of Peptides, Proceedings of the Third American Peptide Symposium", pages
601-608, Ann Arbor Science Publ.ishers Inc., Ann Arbor, Michigan
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95001 v (1970).
En plus de son activité de stimulation de libération des hormones thyroïdiennes, on a trouvé que la TRH a aussi un
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On a préparé de nouveaux tripeptides ayant une activité anti-dépressive et une activité de libération de l'hormone thyréotrope du type TRH.
Un mode de réalisation de la présente invention est un tripeptide ayant la formule
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dans laquelle <EMI ID=5.1> <EMI ID=6.1> <EMI ID=7.1> <EMI ID=8.1>
his et L-pro ne doivent pas être présents ensemble dans le tripeptide quand E est -OR.
Pour abréger, les amino-acides sont désignés ici comme suit :
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Le préfixe L- uu D,L- est utilisé pour désigner respectivement un stéréoisomère individuel d'amino-acide ou des mélanges de stéréoisomères. Quand on n'utilise pas de préfice, l'amino-acide comprend à la fois le stéréoisomère L et les mélanges D,L. Par exemple, pca englobe des mélanges de-L-pca et de D,L-pca, y compris des mélanges racémiques. En général, les
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En plus des abréviations concernant les amino-acides, on donne ci-après une liste d'abréviations qui sont utilisées ici pour d'autres constituants, corps en réaction, solvants, groupes protecteurs, etc.. qui sont impliqués dans la préparation des peptides.
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Les présents tripeptides englobent deux groupes généraux de composés : les amides,. dont le groupe terminal E dans
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est -OR. R, dans le groupe ester, est un :groupe alcoyle approprié quelconque. Des groupes alcoyle préférés sont ceux ayant de 1 à 10 atomes de carbone. Ils comprennent des groupes alcoyle substitués ou non, linéaires, ramifiés et cycliques. Des exemples de groupes R appropriés préférés sont les groupes t-butyle,
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des groupes alcoyle d'hydrocarbures sont particulièrement préférés, et le groupe méthyle est un groupe R tout particulièrement t préf éré.
Un groupe de tripeptides préférés est constitué par
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ces tripeptides sont les suivants :
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la formule I est un noyau hétérocyclique hexagonal contenant un résidu d'amino-acide. Un tripeptide particulièrement préfé-
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Un autre groupe de tripeptides préférés est constitué
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Des exemples de ces tripeptides préférés sont les suivants :
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etc... Des peptides particulièrement préférés sont pca-histca-E et pca-his-L-pip-E. Des tripeptides tout spécialement
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ayant les formules respectives
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Un autre groupe de tripeptides préférés est constitué
<EMI ID=24.1>
dans la formule suivante
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Des groupes substituants préférés sont des groupes
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groupes substituants particulièrement préférés. Des exemples <EMI ID=27.1>
sont :
<EMI ID=28.1>
etc... Les tripeptides particulièrement préférés du groupe sont illustrés par :
<EMI ID=29.1>
etc... Un autre groupe de tripeptides préférés ayant la formule
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tca ou L-pip. Des exemples de ces tripeptides sont :
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etc... Des peptides particulièrement préférés de ce groupe sont L-kpc-L-his-L-pip-E ayant la formule :
<EMI ID=32.1>
*Un autre groupe de tripeptides préférés est constitué
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dessus. Des exemples de ces tripeptides sont :
<EMI ID=34.1>
etc..
Un autre mode de réalisation de l'invention est constitué par les tripeptides ayant la formule
<EMI ID=35.1>
<EMI ID=36.1>
tripeptides sont :
<EMI ID=37.1>
<EMI ID=38.1>
etc.*. un tripeptide particulièrement préféré de formule II est
<EMI ID=39.1>
Un autre mode de réalisation de la présente invention est constitué par les tripeptides ayant la formule
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<EMI ID=41.1> et -CH2-COOH. Des exemples de tripeptides de formule II sont
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etc.., et des tripeptides tout particulièrement préférés sont
<EMI ID=43.1>
En plus des tripeptides décrits, des sels de ces tripeptides sont aussi un mode de réalisation de la présente invention. Ces sels comprennent des sels phûrmaceutiquement
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HBr, H3P04, etc.. ainsi que d'acides organiques, par exemple des acides cyclohexylcarboxylique, tartrique, oxalique, fumarique, citrique, malique, ascorbique, acétique, lactique, des acides gras, par exemple les acides oléique, pamoique, palmiti- <EMI ID=45.1>
que les sels sont sensiblement non-toxiques et ont une activité
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Les tripeptides de la présente invention peuvent être préparés en utilisant divers procédés et diverses techniques. La préparation fait généralement intervenir un couplage des constituants amino-acides appropriés par la liaison peptide, 0 H
"
-C-N-. Quand le peptide préparé est linéaire, le couplage implique une réaction entre un groupe a-amino et un groupe carboxyle de constituants mino-acides différents. La pratique générale pour régler ou diriger ce couplage consiste à protéger ou à bloquer, dans les constituants amino-acides, les groupes fonctionnels qui ne doivent pas participer à la formation de la liaison peptide. Des exigences fonctionnelles importantes concernant les groupes de blocage sont que (1) ils ne doivent pas avoir une influence défavorable sur la réaction de couplage et (2) ils doivent pouvoir être éliminés commodément suivant le besoin durant la préparation des peptides.
Divers types de groupes de blocage ou protecteurs sont disponibles et peuvent être utilisés. Des groupes utilisables pour protéger les groupes amino comprennent des groupes du type acyle ayant les formules
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où Ra est un groupe alcoyle, aryle, aralcoyle, arkaryle ou alcoyle ou aryle substitués ; des groupes du type uréthane ayant les formules
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où Rb est un groupe alcoyle, aryle, alcaryle, alcoyle ou aryle à substitution aralcoyle, alcoylamino, hétérocyclique, etc...; des groupes alcoyle, aryle et alcoyle ou aryle substitués ; et
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est un groupe aryle ou aryle substitué.
Des exemples représentatifs des groupes du type acyle sont les groupes formyle, p-toluènesulfonyle, chloroacétyle, trifluoroacétyle, phtaloyle, phosphoryle, benzènesulfonyle, o-
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ryle, etc...; Des exemples de groupes de blocage pour les groupes alcoyle et aryle sont les groupes triphénylméthyle, benzyle, trialcoylsilyle, benzylthiométhyle, dinitrophényle, diphényle, etc... Des exemples de groupes arylidène utiles sont les groupes benzylidène, 2-hydroxy-5-chloro-benzylidène, etc...
Des groupes particulièrement utiles pour bloquer les groupes amino sont ceux du type uréthane ayant la formule
0
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R -0-C-. Des exemples des groupes protecteurs du type uréthane spécialement utiles sont ceux dans lesquels Rb, est un groupe benzyle, benzyle substitué, par exemple p-méthoxybenzyle, pnitrobenzyle, p-phénylazobenzyle, p-bromobenzyle, 2-nitrobenzyle, etc..., des groupes cycloalcoyle, par exemple méthylcyclohexyle,cyclopentyle, etc.., cycloalcoyle substitué, par exemple méthylcyclohexyle, dodécylcyclohexyle, isobutylcyclopentyle, etc...
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par exemple n-propyle, t-butyle, t-amyle, octyle, dodécyle, etc..
En plus des groupes de blocage décrits ci-dessus, la fonction amino peut aussi être protégée par formation d'un sel du moment que le groupe amino est suffisamment basique.
La protection des groupes carboxyle du constituant amino-acide est généralement effectuée par esrérification, formation d'amide ou d'hydrazide et formation de sels.
Des esters utiles pour protéger les groupes carboxyle comprennent les esters d'alcoyle comme de méthyle, d'éthyle, de t-butyle, de décyle, etc...., des esters d'aryle comme ceux de benzyle, de phényle, de benzhydryle, etc.., des esters d'alcoyle substitué et des esters de phényle substitué comme de pentamé-
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Des hydrazides qui sont utiles pour protéger les groupes carboxyle sont en général, des hydrazides substitués. Des exemples de ces hydrazides sont le benzyloxyhydrazide, le tert-
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de, etc...
La protection du groupe carboxyle par formation d'un amide est de peu d'utilité en général car le groupe amide est difficile à éliminer sans rupture de la liaison peptide ellemême. Toutefois, quand comme ici, le groupe terminal du tripeptide peut être un amide, ce moyen de protection des groupes carboxyle peut être avantageusement utilisé.
Dans le cas de certains des groupes ester utilisés pour protéger les groupes carboxyle, ces groupes ont aussi ce qu'on appelle un effet activant. Cette activation concerne une amélioration de la réactivité de couplage. Le degré d'activation dépend de la configuration chimique de l'ester particulier, la règle générale étant que l'activation est déterminée par la mesure dans laquelle le groupe protecteur rend la fonction carboxyle plus sensible à l'attaque nucléophile. Des exemples de groupes ester activant les groupes carboxyle sont les groupes p-nitro-
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phényle, cyanométhyle, perchlorophényle, 2,4,5-trichlorophényle, 4-méthylthiophényle, 8-hydroxyquinolyle, 1-hydroxybenzotriazole, des thioesters, par exemple p-nitrobenzylthio, p-nitrophénylthio, phénylthio, etc...
Le couplage des constituants amino-acides peut être effectué par -diverses réactions. Parmi ces réactions, sont incluses les suivantes :
a) condensation directe d'un constituant amino-acide <EMI ID=56.1>
bloqué ; b) transformation d'un constituant amino-acide bloqué <EMI ID=57.1>
amino-acide à groupe carboxyle bloqué ; c) réaction d'un halogénure d'amino-acide bloqué en na ou d'un anhydride mixte avec un constituant amin-oacide à groupe carboxyle bloqué ; d) réaction d'un ester actif d'amino-acide bloqué en avec un amino-acide à groupe carboxyle bloqué ; e) couplage direct d'un constituant amino-acide bloqué <EMI ID=58.1>
en utilisant un agent de couplage, par exemple un carbodiimide ;
un carbodiimide plus un hydroxybenzotriazole ; un carbodiimide
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Parmi les réactions de couplage, sont spécialement utiles la technique (b) passant par l'azide et la technique (e) utilisant un carbodiimide.
On peut utiliser divers schémas de préparation pour obtenir les présents peptides. Un schéma commode utilise le
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d'abord un produit intermédiaire dipeptide et ensuite le tripeptide final.
Dans l'exécution des étapes de couplage, le constituant réagissant à son groupe carboxyle est généralement protégé à
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groupe a-amino est généralement protégé à son groupe carboxyle. Quand le constituant a aussi un groupe fonctionnel secondaire, par exemple le groupe imidazole dans l'histidine, il peut aussi être protégé. Les équations suivantes illustrent une telle séquence échelonnée. La séquence montre une préparation d'amide ; on utilise une séquence analogue pour préparer les tripeptides du type ester. Y, dans les équations, est un groupe protecteur de groupe carboxyle.
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Si y dans l'étape (a) est un groupe activant, les étapes (b) et (c) peuvent être combinées- De plus, bien que L-pca ne soit pas représenté comme protégé à son groupe amino, il peut être protégé si on le désire. Dans ce cas, une étape supplémentaire serait nécessaire pour éliminer le groupe protecteur ainf de
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La séquence de réactions représentée dans les équations
(a) à (c) est illustrative et ne doit pas être considérée comme limitative. Ainsi, la séquence utilisée peut comporter le cou-
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Un autre schéma pour préparer les présents tripeptides utilise une matrice de résine sur laquelle le peptide est édifié suivant une séquence. Ce schéma peut comporter un système de résine soluble ou un système insoluble. Le système de résine insoluble est préféré et on en parle de manière classique comme
de la synthèee en phase solide (ou de Merrifield). La résine insoluble est généralement une résine qui comporte des sites où
on peut trouver des groupes carboxyle. Un exemple d'une telle résine est celle couramment appelée résine de Merrifield. Une forme de cette résine est un copolymère de styrène et de divinylbenzène qui est chlorométhylé pour donner des sites réactifs avec les groupes carboxyle. Le perfide est formé à partir d'un amino-acide à la fois jusqu'à ce que le tripeptide désiré soit formé.
Ce mode opératoire est illustré dans la séquence d'équations de réaction présentée ci-dessous. Dans les équations,
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des groupes de blocage de groupes amino
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Dans l'étape ou les étapes suivantes de la séquence,
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réaction utilisé, le tripeptide libéré peut avoir un g'oupe terminal acide, ester ou amide- Quand, après clivage de la résine, le troupe terminal est le groupe acide , ce tripeptide peut être transformé en l'ester ou 1* amide correspondant par des modes
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un groupe terminal ester, le groupe amide peut éventuellement lui est substitué par des techniques classiques.
Une manière très commode de séparer le tripeptide de la résine@ est la transestérification avec un alcool approprié. Un avantage de cette technique est que l'ester est obtenu directement et que l'ester peut être facilement transformé en l'amide si on le désire. Ces réactions sont illustrées ci-
dessous
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Bien que ce ne soit pas représenté dans l'équation de réaction ci-dessus, les azotes du groupe imidazole du kic et de l'histidine peuvent être bloqués durant la réaction si on le désire, les groupes de blocage étant éliminés à un stade approprié dans la préparation des peptiàas. Des tripeptides
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étant ajouté avant ou au cours de la synthèse.
Dans les deux schémas décrits ci-dessus et dans la préparation de peptides d'une façon générale, les groupes de blocage et/ou activants sont ajoutés et enlevés. On effectue
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lisant des techniques et des systèmes de réaction connus de l'homme de l'art et disponibles. Des exemples de certaines réactions par lesquelles les groupes protecteurs ou ce blocage sont
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l'hydrogénolyse (par exemple en utilisant Pd/C comme catalyseur) le traitement avec un acide halogénhydrique (HC1, HBr, etc) dans de l'acide acétique ou le traitement par TFA. Le sustème de réaction particulier utilisé pour le déblocage, c'est-àdire pour l'élimination d'un groupe de blocage, aussi bien que pour bloquer un groupe dans un constituant amino-acide est choisi de manière que (1) si nécessaire l'élimination des groupes de blocage soit sélective et (2) elle n'ait pas d'influence défavorable sur le procédé de préparation des peptides.
Les exemples non limitatifs suivants illustrent la préparation de tripeptides de formule I et de certains composés intermédiaires. Toutes les parties sont en poids, à moins d'indication contraire.
- EXEMPLE 1 -
(A) Préparation d'acide L-2-cétoimidazolidine-5-carboxylique
Une solution de 25 g de NaOH dans 60 cm<3> d'eau est préparée dans un récipient et placée dans un bain de refroidis-
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température pendant 45 minutes. La solution est ensuite refroidie
<EMI ID=76.1>
de méthylène chaque fois. La solution extraite est évaporée à sec et la matière solide restante est séchée pendant toute une nuit dans une étuve à vide. La matière solide séchée est traitée par extraction à l'éthanol. L'extrait est évaporé jusqu'à précipitation du produit,
acide L-2-cétoimidazolidine-5-carboxylique
1
<EMI ID=77.1>
Après filtration du produit, il est séché sous vide.
On obtient environ 4,20 grammes de produit acide. Le point de fusion est de 166-170[deg.]C. L'analyse élémentaire du produit indique
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équivalents de dicyclohexylcarbodiimide et 1,3 g de 1-hydro�- benzotiiazole sont mélangés dans du DMF et on les laisse réagir
<EMI ID=80.1>
de ce temps, la réaction est sensiblement complète et le rende-
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est agité à la température ambiante pendant 5 jours et ensuite abandonné à la température ambiante pendant 6 jours environ.
Le mélange est ensuite filtré, évaporé à sec et purifié par élut*[pound]on à travers une colonne de silice (rapport 200:1). L'éluant est un mélange de 70 parties en volume de CHC13, de 30 par-
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produit L-kic-L-his-L-pro-OCH;, est isolé par lyophilisation. La production est de 1,54 gramme.
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ture ambiante pendant 7 jours. On dissout ce mélange de réaction dans du méthanol. Après évaporation sous vide, le résidu est séché par liquéfaction-congélation Le principal produit
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En substituant de l'acide D,L-2-cétopipéridine-6-carboxylique à l'acide L-2-cétoimidazolidine-5-carboxylique et en utilisant sensiblement les menés modes opératoires que dans
<EMI ID=85.1>
Des exemples d'autres tripeptides qui sont préparés en utilisant le mode opératoire général de l'Exemple 1B sont
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etc.., et ces esters sont transformés en amides correspondants
<EMI ID=87.1> <EMI ID=88.1>
Un récipient, équipé pour agitation et refroidissement, est chargé de dichlorhydrate d'ester de méthyle de L-
<EMI ID=89.1>
une période de 10 minutes, en maintenant la température à 0[deg.]C. Ce mélange est ensuite mis à vieillir pendant 15 minutes. Une
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d'acétonitrile est ensuite ajoutée progressivement en une période de 5 à 10 minutes. On fait vieillir le mélange résultant à 0[deg.]C pendant 30 minutes, puis on le laisse réchauffer à la température ambiante et ensuite on l'agite pendant 24 heures à la température ambiante.
Le mélange est ensuite filtré et le gâteau de filtra-
<EMI ID=91.1>
fois). On se débarrasse de ce filtrat.
Le gâteau lavé est ensuite mis en bouillie dans l'en- <EMI ID=92.1>
ment de 30 minutes est suffisant) et il est ensuite filtré. Le gâteau de filtration est lavé deux fois avec un mélange 9:1
<EMI ID=93.1>
gâteau de filtration lavé est ensuite mis en bouillie avec 500
<EMI ID=94.1>
et le gâteau de filtration est lavé quatre fois avec du chloroforme (45 cm<3>) chaque fois.
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nol et chauffé rapidement à l'ébullition. Ce mélange chaud est filtré. On laisse refroidir le filtrat à la température ambiante et on le fait vieillir à la température ambiante pendant 3 heures. Il se forme un produit cristallin blanc, du L-pyroglutamyl-
<EMI ID=96.1>
Le point de fusion du produit est de 208-210[deg.]C. L'analyse par chromatographie sur couches minces (TLC) indique que le produit
<EMI ID=97.1>
<EMI ID=98.1>
Dans un récipient équipé d'un thermomètre et d'un agitateur, et placé dans un bain de glace, on dissout 33,6 g
<EMI ID=99.1>
en maintenant la température au-dessous de 20[deg.]C. Le mélanre de réaction est agité pendant 6 minutes supplémentaires à 18-20[deg.]C et il est ensuite transféré dans un deuxième récipient et soumis à une extraction sous vide.
La matière solide blanche résultante est redispersée
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La matière solide blanche résultante est ensuite dis-
<EMI ID=101.1>
<EMI ID=102.1>
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dant 45 minutes à la température ambiante et filtrée. Le gâteau de filtration est lavé deux fois avec de l'éthanol-2BA
<EMI ID=104.1>
<EMI ID=105.1>
refroidir le mélange à la température ambiante, en l'agitant, on le filtre et le gâteau de filtration est lavé deux fois
<EMI ID=106.1>
sous vide. La produiction de L-pyroglutamyl-L-histidine-hydrazide est de 25,69 g (rendement 76,5%). L'analyse par TLC indique que ce produit est sensiblement pur.
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On met en suspension 800 mg (3 mm) de L-pyroglutamyl-
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refroidie à -20[deg.]C et portée à un pH de 1,5 par addition de
HCl 5,9M dans THF.
On ajoute 4 cm<3> de nitrite d'isoamyle à 10% dans DMF. Le mélange est agité pendant 25 minutes tandis qu'on maintient la température à -20[deg.]C. On ajoute ensuite 500 mg (3 mm) d'acide L-thiazolidine-5-carboxylique et le pH est réglé à 8,5 par
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à -15[deg.]C pendant sept jours*
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<EMI ID=111.1>
et la solution est traitée par extraction quatre fois avec un
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La couche aqueuse est évaporée et le résidu est traité par extraction avec 50, 25 et 25 cm<3> de méthanol. Les solutions méthanoliques sont combinées et évaporées sous vide. Le résidu restant est de l'acide L-pyroglutamyl-L-histidyl-Lthiazolidine-5-carboxylique.
On dissout l'acide L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-thiazo- <EMI ID=113.1>
ajoute à la solution 260-mg (1,7 mm) de HBT et on règle le pH à 4 avec de la triéthylamine. On ajoute 180 mg (3,4 mm) de
<EMI ID=114.1>
réactionnel est agité pendant toute une nuit à la température ambiante.
On filtre ensuite le mélange de réaction. On évapore
<EMI ID=115.1>
chloroforme:méthanol:eau) et on charge la solution sur une colonne de 200 g de gel de silice.
Les fractions contenant le produit amide d'acide Lpyroglutamyl-L-histidyl-L-thiazolidine-carboxylique sont combinées et évaporées ; la production est de 370 mg du produit sensiblement pur par TLC.
D'autres tripeptides qui peuvent être préparés en utilisant le mode opératoire général de l'Exemple 3 sont :
<EMI ID=116.1>
<EMI ID=117.1>
<EMI ID=118.1>
<EMI ID=119.1>
lange réactionnel est agité pendant 18 heures environ et la solution est évaporée à sec. Le résidu séché est chromatographié sur
<EMI ID=120.1>
<EMI ID=121.1> <EMI ID=122.1>
tué L-his peut être élue sous la forme d'un sel iodure. Ce sel peut être neutralisé par exemple avec du Dowex 1 (hydroxyde) pour donner le produit tripeptide libre.
<EMI ID=123.1>
qui sont préparés à partir du tripeptide approprié en utilisant le mode opératoire général de l'Exemple 4 sont :
<EMI ID=124.1>
<EMI ID=125.1>
en une période de 40 minutes environ, on ajoute 0,77 cm de nitrite d'isoamyle (charge initiale de 0,65 cm<3> suivie de trois
<EMI ID=126.1>
ajoute 965 mg (5,37 mm) d'ester de méthyle d'acide L-pipéridine-
<EMI ID=127.1>
<EMI ID=128.1>
<EMI ID=129.1>
toute une nuit. (Durant cette période, on ajoute trois portions <EMI ID=130.1>
de manière à maintenir le pH à ?,2 environ).
Au bout de ce temps, on sépare par filtration le
<EMI ID=131.1>
filtrat. On répète encore deux fois cette séquence de filtration/lavage" Le filtrat et les liquides de lavage finals sont ensuite évaporés sous vide pour donner 2,87 g de produit tripeptide brut. Ce produit brut est purifié par élution à travers une colonne de gel de silice avec un mélange 90/10/1 chloroforme/méthanol/eau. Les produits recueillis sont L-pca-L-his-
<EMI ID=132.1>
D'autres tripeptides qui sont préparés en utilisant le mode opératoire général de l'Exemple 5 sont :
<EMI ID=133.1>
En plus des procédés de préparation illustrés par les exemples et décrits ci-dessus, les présents tripeptides peuvent aussi être préparés en utilisant des procédés de préparation de tripeptides du type TRH décrits dans la technique antérieure citée ci-dessus. Dans la mesure où la description de la technique antérieure est nécessaire, elle est incorporée ici par référence.
On a trouvé que les tripeptides de la présente invention possèdent une activité anti-dépressive et une activité d'hormone libérant la thyréotrophine. Leur activité comme anti-dépressifs est une activité de stimulants du système nerveux central (CNS) et on l'a déterminée en essayant des tripeptides représentatifs de la présente invention en utilisant des essais in vivo basés sur le rétablissement de l'action anticonvulsivante du méthazolamide chez des souris traitées à l'acide picolinique. L'activité d'hormone libérant le thyréotrophine des présents polypeptides a été déterminée en utilisant l'essai
in vivo sensiblement comme décrit dans "Vitamins and Hormone" R.S. Harris et autres, 29, 3-4 (1971).
<EMI ID=134.1>
sents tripeptides font montre d'une séparation d'activité, c'est-à-dire que leur activité anti-dépressive est plus grande que leur activité d'hormone libérant la thyréotrophine. Ce type d'activité séparée offre l'avantage de rendre le tripeptide spécialement utile à des doses appropriées pour traiter une dépression sans causer de libération importante de thyréotrophine quand on ne le désire pas ou que ce n'est pas nécessaire.
Le tableau suivant contient des résultats d'activité pour un certain nombre de peptides représentatifs de la présente invention. Les protocoles utilisés pour obtenir les résultats sont ceux décrits ci-dessus. Les résultats sont exprimés numériquement en multiples de l'activité TS (stimulation de thyréotrophine) et AD (anti-dépressive) par rapport aux activités TS et
<EMI ID=135.1>
tion S.N. est utilisée pour indiquer qu'il n'y a sensiblement pas d'activité détectable au niveau de dosage essayé.
<EMI ID=136.1>
<EMI ID=137.1>
<EMI ID=138.1>
<EMI ID=139.1>
Les résultats donnés dans le Tableau I illustrent clairement l'efficacité pharmacologique et la séparation inattendue des activités TS et AD des présents peptides.
D'après l'efficacité in vivo des présents peptides comme activateurs de libération de la thyréotrophine et comme stimulants du système nerveux central (activité anti-dépressive), ces peptides peuvent être utilisés efficacement pour traiter
des mammifères soufrant d'une dépression du système nerveux central et/ou ayant besoin d'une activation de la libération
de thyréotrophine.
Les peptides peuvent être administrés d'une manière commode quelconque, par exemple par voie orale, parentérale, intraveineuse, sublinguale, par insufflation, par suppositoires, etc..
On utilise des niveaux de dosage suffisants pour produire l'effet désiré. Généralement, les doses seront comprises entre 0,05 et 100 ng par dose, suivant le mode d'administration. Les intervalles de dosage dépendront du degré de soulagement désiré. Les tripeptides peuvent être administrés isolément,
dans des véhicules pharmaceutiquement acceptables ou dans des compositions avec d'autres substances phnrmaceutiquement actives, comme on le désire.
REVENDICATIONS
1) Un tripeptide ayant la formule
<EMI ID=140.1>
dans laquelle <EMI ID=141.1> avec les conditions que (1) quand E est -NH2, pca et L-pro ne doivent pas être présents ensemble dans le tripeptide et (2) quand E est -OR, his et L-pro ne doivent pas être présents ensemble dans le tripeptide.
Novel tripeptides useful as edications and their preparation process.
The present invention relates to certain tripeptides and their application as anti-depressants and / or as stimulants.
<EMI ID = 1.1>
processes for their preparation.
The naturally occurring thyreotrophin releasing hormone (TRH) is the triptide L-pyroglutamyl-L-histidyl-Lproline amide. Methods for the synthesis of this peptide are known. Particular processes are described in U.S. Patent Nos. 3,753,569, 3,746,697, 3,757,003
and 3,752,800. Analogs, derivatives and isomers of TRH are also described in "Vitamins and Hormones, Advances in Research and Applications" volume 29, pages 1-39, Academy Press, New York and London (1971); "Chemistry and Biology of Peptides, Proceedings of the Third American Peptide Symposium", pages
601-608, Ann Arbor Science Publ.ishers Inc., Ann Arbor, Michigan
<EMI ID = 2.1>
95001 v (1970).
In addition to its activity in stimulating the release of thyroid hormones, it has been found that TRH also has a
<EMI ID = 3.1>
Novel tripeptides have been prepared having antidepressant activity and thyrotropic hormone release activity of the TRH type.
One embodiment of the present invention is a tripeptide having the formula
<EMI ID = 4.1>
where <EMI ID = 5.1> <EMI ID = 6.1> <EMI ID = 7.1> <EMI ID = 8.1>
his and L-pro must not be present together in the tripeptide when E is -OR.
For short, amino acids are referred to here as follows:
<EMI ID = 9.1>
The prefix L- or D, L- is used to denote, respectively, an individual amino acid stereoisomer or mixtures of stereoisomers. When not using a prefice, the amino acid includes both the L stereoisomer and the D, L mixtures. For example, pca encompasses mixtures of-L-pca and D, L-pca, including racemic mixtures. In general,
<EMI ID = 10.1>
<EMI ID = 11.1>
In addition to the abbreviations relating to amino acids, the following is a list of abbreviations which are used herein for other components, reactants, solvents, protecting groups, etc. which are involved in the preparation of the peptides. .
<EMI ID = 12.1>
The present tripeptides encompass two general groups of compounds: amides ,. whose terminal group E in
<EMI ID = 13.1>
is -OR. R, in the ester group, is any suitable alkyl group. Preferred alkyl groups are those having 1 to 10 carbon atoms. They include substituted or unsubstituted, linear, branched and cyclic alkyl groups. Examples of suitable preferred R groups are t-butyl groups,
<EMI ID = 14.1>
alkyl groups of hydrocarbons are particularly preferred, and the methyl group is a particularly preferred R group.
A group of preferred tripeptides consists of
<EMI ID = 15.1>
these tripeptides are:
<EMI ID = 16.1>
<EMI ID = 17.1>
Formula I is a 6-membered heterocyclic ring containing an amino acid residue. A particularly preferred tripeptide
<EMI ID = 18.1>
<EMI ID = 19.1>
Another group of preferred tripeptides consists of
<EMI ID = 20.1>
Examples of these preferred tripeptides are as follows:
<EMI ID = 21.1>
etc. Particularly preferred peptides are pca-histca-E and pca-his-L-pip-E. Tripeptides especially
<EMI ID = 22.1>
having the respective formulas
<EMI ID = 23.1>
Another group of preferred tripeptides consists of
<EMI ID = 24.1>
in the following formula
<EMI ID = 25.1>
Preferred substituent groups are groups
<EMI ID = 26.1>
particularly preferred substituent groups. Examples <EMI ID = 27.1>
are :
<EMI ID = 28.1>
etc ... Particularly preferred tripeptides of the group are illustrated by:
<EMI ID = 29.1>
etc ... Another group of preferred tripeptides having the formula
<EMI ID = 30.1>
tca or L-pip. Examples of these tripeptides are:
<EMI ID = 31.1>
etc. Particularly preferred peptides from this group are L-kpc-L-his-L-pip-E having the formula:
<EMI ID = 32.1>
* Another group of preferred tripeptides consists of
<EMI ID = 33.1>
above. Examples of these tripeptides are:
<EMI ID = 34.1>
etc ..
Another embodiment of the invention consists of the tripeptides having the formula
<EMI ID = 35.1>
<EMI ID = 36.1>
tripeptides are:
<EMI ID = 37.1>
<EMI ID = 38.1>
etc. *. a particularly preferred tripeptide of formula II is
<EMI ID = 39.1>
Another embodiment of the present invention consists of the tripeptides having the formula
<EMI ID = 40.1>
<EMI ID = 41.1> and -CH2-COOH. Examples of tripeptides of formula II are
<EMI ID = 42.1>
etc., and particularly preferred tripeptides are
<EMI ID = 43.1>
In addition to the tripeptides described, salts of these tripeptides are also an embodiment of the present invention. These salts include pharmaceutically
<EMI ID = 44.1>
HBr, H3PO4, etc., as well as organic acids, for example cyclohexylcarboxylic, tartaric, oxalic, fumaric, citric, malic, ascorbic, acetic, lactic, fatty acids, for example oleic, pamoic, palmiti- <EMI ID = 45.1>
that the salts are substantially non-toxic and have an activity
<EMI ID = 46.1>
The tripeptides of the present invention can be prepared using a variety of methods and techniques. The preparation generally involves a coupling of the appropriate amino acid constituents by the peptide bond, 0 H
"
-C-N-. When the prepared peptide is linear, the coupling involves a reaction between an α-amino group and a carboxyl group of different mino-acid constituents. The general practice for regulating or directing this coupling is to protect or block, in the amino acid constituents, the functional groups which should not participate in the formation of the peptide bond. Important functional requirements for blocking groups are that (1) they should not adversely affect the coupling reaction and (2) they should be able to be conveniently removed as needed during peptide preparation.
Various types of blocking or protective groups are available and can be used. Groups useful for protecting amino groups include acyl groups having the formulas
<EMI ID = 47.1>
where Ra is an alkyl, aryl, aralkyl, arkaryl or substituted alkyl or aryl group; urethane-type groups having the formulas
<EMI ID = 48.1>
where Rb is an alkyl, aryl, alkaryl, alkyl or aryl substituted aralkyl, alkyllamino, heterocyclic group, etc ...; alkyl, aryl, and substituted alkyl or aryl groups; and
<EMI ID = 49.1>
is an aryl or substituted aryl group.
Representative examples of acyl-type groups are formyl, p-toluenesulfonyl, chloroacetyl, trifluoroacetyl, phthaloyl, phosphoryl, benzenesulfonyl, o-
<EMI ID = 50.1>
ryle, etc ...; Examples of blocking groups for alkyl and aryl groups are triphenylmethyl, benzyl, trialkylsilyl, benzylthiomethyl, dinitrophenyl, diphenyl, etc. Examples of useful arylidene groups are benzylidene, 2-hydroxy-5-chloro- groups. benzylidene, etc ...
Particularly useful groups for blocking amino groups are those of the urethane type having the formula
0
<EMI ID = 51.1>
R -0-C-. Examples of especially useful urethane protecting groups are those in which Rb is benzyl, substituted benzyl, for example p-methoxybenzyl, pnitrobenzyl, p-phenylazobenzyl, p-bromobenzyl, 2-nitrobenzyl, etc. cycloalkyl groups, for example methylcyclohexyl, cyclopentyl, etc., substituted cycloalkyl, for example methylcyclohexyl, dodecylcyclohexyl, isobutylcyclopentyl, etc.
<EMI ID = 52.1>
for example n-propyl, t-butyl, t-amyl, octyl, dodecyl, etc.
In addition to the blocking groups described above, the amino function can also be protected by salt formation as long as the amino group is sufficiently basic.
Protection of the carboxyl groups of the amino acid component is generally accomplished by esterification, amide or hydrazide formation and salt formation.
Esters useful in protecting carboxyl groups include alkyl esters such as methyl, ethyl, t-butyl, decyl, etc., aryl esters such as benzyl, phenyl, benzhydryl, etc., substituted alkyl esters and substituted phenyl esters such as pentame.
<EMI ID = 53.1>
Hydrazides which are useful for protecting carboxyl groups are generally substituted hydrazides. Examples of these hydrazides are benzyloxyhydrazide, tert-
<EMI ID = 54.1>
of, etc ...
Protection of the carboxyl group by formation of an amide is of little use in general because the amide group is difficult to remove without breaking the peptide bond itself. However, when as here, the terminal group of the tripeptide can be an amide, this means of protecting the carboxyl groups can be advantageously used.
In the case of some of the ester groups used to protect the carboxyl groups, these groups also have what is called an activating effect. This activation relates to an improvement in the coupling reactivity. The degree of activation depends on the chemical configuration of the particular ester, the general rule being that activation is determined by the extent to which the protecting group makes the carboxyl function more susceptible to nucleophilic attack. Examples of ester groups activating carboxyl groups are p-nitro- groups.
<EMI ID = 55.1>
phenyl, cyanomethyl, perchlorophenyl, 2,4,5-trichlorophenyl, 4-methylthiophenyl, 8-hydroxyquinolyl, 1-hydroxybenzotriazole, thioesters, for example p-nitrobenzylthio, p-nitrophenylthio, phenylthio, etc ...
The coupling of the amino acid constituents can be effected by various reactions. Among these reactions are included the following:
a) direct condensation of an amino acid component <EMI ID = 56.1>
blocked; b) transformation of a blocked amino acid component <EMI ID = 57.1>
blocked carboxyl group amino acid; c) reacting an na-blocked amino acid halide or mixed anhydride with a carboxyl-blocked amino acid component; d) reacting an active ester of blocked amino acid with a blocked carboxyl group amino acid; e) direct coupling of a blocked amino acid component <EMI ID = 58.1>
using a coupling agent, for example a carbodiimide;
a carbodiimide plus a hydroxybenzotriazole; a carbodiimide
<EMI ID = 59.1>
Among the coupling reactions, technique (b) using azide and technique (e) using a carbodiimide are especially useful.
Various preparation schemes can be used to obtain the present peptides. A convenient diagram uses the
<EMI ID = 60.1>
first a dipeptide intermediate and then the final tripeptide.
In performing the coupling steps, the component reacting with its carboxyl group is generally protected against
<EMI ID = 61.1>
a-amino group is generally protected at its carboxyl group. When the component also has a secondary functional group, for example the imidazole group in histidine, it can also be protected. The following equations illustrate such a step sequence. The sequence shows an amide preparation; An analogous sequence is used to prepare the ester-type tripeptides. Y, in the equations, is a carboxyl group protecting group.
<EMI ID = 62.1>
If y in step (a) is an activating group, steps (b) and (c) can be combined. Additionally, although L-pca is not shown as protected at its amino group, it can be protected. if desired. In this case, an additional step would be necessary to remove the protecting group in order to
<EMI ID = 63.1>
The sequence of reactions represented in the equations
(a) to (c) is illustrative and should not be construed as limiting. Thus, the sequence used can include the color
<EMI ID = 64.1>
Another scheme for preparing the present tripeptides uses a resin matrix on which the peptide is built in sequence. This scheme can include a soluble resin system or an insoluble system. The insoluble resin system is preferred and is conventionally referred to as
of the solid phase synthesis (or of Merrifield). Insoluble resin is generally a resin that has sites where
carboxyl groups can be found. An example of such a resin is that commonly referred to as Merrifield resin. One form of this resin is a copolymer of styrene and divinylbenzene which is chloromethylated to give sites reactive with carboxyl groups. The perfidious is formed from one amino acid at a time until the desired tripeptide is formed.
This procedure is illustrated in the sequence of reaction equations shown below. In the equations,
<EMI ID = 65.1>
blocking groups of amino groups
<EMI ID = 66.1>
In the next step or steps of the sequence,
<EMI ID = 67.1>
reaction used, the liberated tripeptide may have an acid, ester or amide terminal group. When, after cleavage of the resin, the terminal group is the acid group, this tripeptide can be transformed into the corresponding ester or amide by modes
<EMI ID = 68.1>
an ester terminal group, the amide group can optionally be substituted therefor by conventional techniques.
A very convenient way to separate the tripeptide from the resin is by transesterification with a suitable alcohol. An advantage of this technique is that the ester is obtained directly and the ester can be easily converted into the amide if desired. These reactions are illustrated below.
below
<EMI ID = 69.1>
<EMI ID = 70.1>
Although not shown in the reaction equation above, the nitrogen of the imidazole group of kic and histidine can be blocked during the reaction if desired, with blocking groups removed at an appropriate stage. in the preparation of peptia. Tripeptides
<EMI ID = 71.1>
<EMI ID = 72.1>
being added before or during the synthesis.
In both schemes described above and in the preparation of peptides in general, blocking and / or activating groups are added and removed. We perform
<EMI ID = 73.1>
reading techniques and reaction systems known to those skilled in the art and available. Examples of certain reactions by which protecting groups or this blocking are
<EMI ID = 74.1>
hydrogenolysis (eg using Pd / C as a catalyst) treatment with hydrohalic acid (HCl, HBr, etc.) in acetic acid or treatment with TFA. The particular reaction system used for unblocking, i.e., removing a blocking group, as well as blocking a group in an amino acid component is chosen such that (1) if necessary l removal of blocking groups is selective and (2) it does not adversely affect the process for preparing the peptides.
The following non-limiting examples illustrate the preparation of tripeptides of formula I and certain intermediates. All parts are by weight unless otherwise noted.
- EXAMPLE 1 -
(A) Preparation of L-2-ketoimidazolidine-5-carboxylic acid
A solution of 25 g of NaOH in 60 cm <3> of water is prepared in a container and placed in a cooling bath.
<EMI ID = 75.1>
temperature for 45 minutes. The solution is then cooled
<EMI ID = 76.1>
of methylene each time. The extracted solution is evaporated to dryness and the remaining solid material is dried overnight in a vacuum oven. The dried solid material is treated by extraction with ethanol. The extract is evaporated until the product precipitates,
L-2-ketoimidazolidine-5-carboxylic acid
1
<EMI ID = 77.1>
After filtration of the product, it is dried under vacuum.
About 4.20 grams of acid product are obtained. The melting point is 166-170 [deg.] C. Elemental analysis of the product indicates
<EMI ID = 78.1>
<EMI ID = 79.1>
equivalents of dicyclohexylcarbodiimide and 1.3 g of 1-hydro-benzotiiazole are mixed in DMF and allowed to react
<EMI ID = 80.1>
of this time, the reaction is appreciably complete and makes it
<EMI ID = 81.1>
is stirred at room temperature for 5 days and then left at room temperature for about 6 days.
The mixture is then filtered, evaporated to dryness and purified by eluting * [pound] on through a column of silica (ratio 200: 1). The eluent is a mixture of 70 parts by volume of CHCl3, 30 per-
<EMI ID = 82.1>
product L-kic-L-his-L-pro-OCH ;, is isolated by lyophilization. The production is 1.54 grams.
<EMI ID = 83.1>
room temperature for 7 days. This reaction mixture is dissolved in methanol. After evaporation under vacuum, the residue is dried by liquefaction-freezing The main product
<EMI ID = 84.1>
By substituting D, L-2-ketopiperidine-6-carboxylic acid for L-2-ketoimidazolidine-5-carboxylic acid and using substantially the procedures as in
<EMI ID = 85.1>
Examples of other tripeptides which are prepared using the general procedure of Example 1B are
<EMI ID = 86.1>
etc., and these esters are converted into the corresponding amides
<EMI ID = 87.1> <EMI ID = 88.1>
A vessel, equipped for stirring and cooling, is charged with L- methyl ester dihydrochloride.
<EMI ID = 89.1>
a period of 10 minutes, keeping the temperature at 0 [deg.] C. This mixture is then left to age for 15 minutes. A
<EMI ID = 90.1>
of acetonitrile is then added gradually over a period of 5 to 10 minutes. The resulting mixture was aged at 0 [deg.] C for 30 minutes, then allowed to warm to room temperature and then stirred for 24 hours at room temperature.
The mixture is then filtered and the filter cake
<EMI ID = 91.1>
time). We get rid of this filtrate.
The washed cake is then slurried in the en- <EMI ID = 92.1>
30 minutes is sufficient) and is then filtered. The filter cake is washed twice with a 9: 1 mixture
<EMI ID = 93.1>
washed filter cake is then slurried with 500
<EMI ID = 94.1>
and the filter cake is washed four times with chloroform (45 cm <3>) each time.
<EMI ID = 95.1>
nol and quickly heated to a boil. This hot mixture is filtered. The filtrate is allowed to cool to room temperature and aged at room temperature for 3 hours. A white crystalline product is formed, L-pyroglutamyl-
<EMI ID = 96.1>
The melting point of the product is 208-210 [deg.] C. Analysis by thin layer chromatography (TLC) indicates that the product
<EMI ID = 97.1>
<EMI ID = 98.1>
In a container equipped with a thermometer and a stirrer, and placed in an ice bath, dissolve 33.6 g
<EMI ID = 99.1>
keeping the temperature below 20 [deg.] C. The reaction mixture is stirred for an additional 6 minutes at 18-20 [deg.] C and is then transferred to a second vessel and subjected to vacuum extraction.
The resulting white solid is redispersed
<EMI ID = 100.1>
The resulting white solid is then dissolved.
<EMI ID = 101.1>
<EMI ID = 102.1>
<EMI ID = 103.1>
for 45 minutes at room temperature and filtered. The filter cake is washed twice with ethanol-2BA
<EMI ID = 104.1>
<EMI ID = 105.1>
cool the mixture to room temperature, with stirring, it is filtered and the filter cake is washed twice
<EMI ID = 106.1>
under vacuum. The production of L-pyroglutamyl-L-histidine-hydrazide is 25.69 g (yield 76.5%). Analysis by TLC indicates that this product is substantially pure.
<EMI ID = 107.1>
800 mg (3 mm) of L-pyroglutamyl-
<EMI ID = 108.1>
cooled to -20 [deg.] C and brought to a pH of 1.5 by addition of
5.9M HCl in THF.
4 cc of 10% isoamyl nitrite in DMF are added. The mixture is stirred for 25 minutes while the temperature is maintained at -20 [deg.] C. Then added 500 mg (3 mm) of L-thiazolidine-5-carboxylic acid and the pH is adjusted to 8.5 by
<EMI ID = 109.1>
at -15 [deg.] C for seven days *
<EMI ID = 110.1>
<EMI ID = 111.1>
and the solution is extracted four times with a
<EMI ID = 112.1>
The aqueous layer is evaporated and the residue is extracted by extraction with 50, 25 and 25 cm 3 of methanol. The methanolic solutions are combined and evaporated in vacuo. The remaining residue is L-pyroglutamyl-L-histidyl-Lthiazolidine-5-carboxylic acid.
L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-thiazo- <EMI ID = 113.1> is dissolved
260 mg (1.7 mm) of HBT is added to the solution and the pH is adjusted to 4 with triethylamine. 180 mg (3.4 mm) of
<EMI ID = 114.1>
The reaction is stirred overnight at room temperature.
The reaction mixture is then filtered. We evaporate
<EMI ID = 115.1>
chloroform: methanol: water) and the solution is loaded onto a column of 200 g of silica gel.
The fractions containing the Lpyroglutamyl-L-histidyl-L-thiazolidine-carboxylic acid amide product are combined and evaporated; the yield is 370 mg of the substantially pure product by TLC.
Other tripeptides which can be prepared using the general procedure of Example 3 are:
<EMI ID = 116.1>
<EMI ID = 117.1>
<EMI ID = 118.1>
<EMI ID = 119.1>
The reaction mixture is stirred for about 18 hours and the solution is evaporated to dryness. The dried residue is chromatographed on
<EMI ID = 120.1>
<EMI ID = 121.1> <EMI ID = 122.1>
killed L-his can be eluted as an iodized salt. This salt can be neutralized, for example, with Dowex 1 (hydroxide) to give the free tripeptide product.
<EMI ID = 123.1>
which are prepared from the appropriate tripeptide using the general procedure of Example 4 are:
<EMI ID = 124.1>
<EMI ID = 125.1>
over a period of about 40 minutes, 0.77 cm of isoamyl nitrite is added (initial charge of 0.65 cm <3> followed by three
<EMI ID = 126.1>
add 965 mg (5.37 mm) of L-piperidine-acid methyl ester
<EMI ID = 127.1>
<EMI ID = 128.1>
<EMI ID = 129.1>
the whole night. (During this period, we add three portions <EMI ID = 130.1>
so as to maintain the pH at approximately?, 2).
At the end of this time, the
<EMI ID = 131.1>
filtrate. This filtration / washing sequence is repeated twice more. The filtrate and the final washings are then evaporated in vacuo to give 2.87 g of crude tripeptide product. This crude product is purified by elution through a gel column of silica with a 90/10/1 chloroform / methanol / water mixture The products collected are L-pca-L-his-
<EMI ID = 132.1>
Other tripeptides which are prepared using the general procedure of Example 5 are:
<EMI ID = 133.1>
In addition to the preparation methods illustrated by the examples and described above, the present tripeptides can also be prepared using the preparation methods of TRH type tripeptides described in the prior art cited above. Insofar as the description of the prior art is necessary, it is incorporated herein by reference.
The tripeptides of the present invention have been found to possess antidepressant activity and thyrotrophin releasing hormone activity. Their activity as an anti-depressant is central nervous system (CNS) stimulant activity and was determined by testing representative tripeptides of the present invention using in vivo assays based on the restoration of the anticonvulsant action of methazolamide. in mice treated with picolinic acid. The thyrotrophin releasing hormone activity of the present polypeptides was determined using the assay
in vivo substantially as described in "Vitamins and Hormone" R.S. Harris et al., 29, 3-4 (1971).
<EMI ID = 134.1>
These tripeptides show a separation of activity, that is, their anti-depressive activity is greater than their activity as a thyrotrophin releasing hormone. This type of separate activity offers the advantage of making the tripeptide especially useful in dosages suitable for treating depression without causing a significant release of thyrotropin when it is not desired or needed.
The following table contains activity results for a number of representative peptides of the present invention. The protocols used to obtain the results are those described above. Results are expressed numerically as multiples of TS (thyrotropin stimulation) and AD (anti-depressive) activity relative to TS and
<EMI ID = 135.1>
S.N. tion is used to indicate that there is substantially no detectable activity at the assay level tested.
<EMI ID = 136.1>
<EMI ID = 137.1>
<EMI ID = 138.1>
<EMI ID = 139.1>
The results given in Table I clearly illustrate the pharmacological efficacy and the unexpected separation of TS and AD activities of the present peptides.
Based on the in vivo efficacy of the present peptides as thyrotrophin release activators and central nervous system stimulants (anti-depressive activity), these peptides can be effectively used to treat
mammals suffering from central nervous system depression and / or in need of activation of release
thyrotrophin.
The peptides can be administered in any convenient manner, for example orally, parenterally, intravenously, sublingually, by insufflation, by suppositories, etc.
Sufficient dosage levels are used to produce the desired effect. Generally, the doses will be between 0.05 and 100 ng per dose, depending on the mode of administration. Dosage intervals will depend on the degree of relief desired. Tripeptides can be administered alone,
in pharmaceutically acceptable vehicles or in compositions with other pharmaceutically active substances, as desired.
CLAIMS
1) A tripeptide having the formula
<EMI ID = 140.1>
where <EMI ID = 141.1> with the conditions that (1) when E is -NH2, pca and L-pro must not be present together in the tripeptide and (2) when E is -OR, his and L-pro must not be present together in the tripeptide.