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Ddrlvdo du camphène-phénol et compositions pharmaceutiques les contenant.
La présente invention concerne les dérivés camphène-phénol, à activité thérapeutique, et obtenus par l'action du camphène sur le 3,4- xylénol, En particulier, elle a pour objet le
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6-.sobornyl-3, .xylnol et/ou son Isomère, le 6-exo-isocamphanyi-x,4-xylénoi.
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Ces composés nouveau%que 1'on a pu isoler, @nt des propriétés thérapeutiques parti- culièrement intéressantes.
La présente invention vice également l'application thérapeutique de ces composés, plus particulièrement en tant que bactérie-statiques, ainsi que les compositions pharmaceutiques conte- nant les composés de l'invention et un support non toxique pharmaceutiquement acceptable,
L'invention concerne également un
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procède de préparation du 6-îsobornyl-3,4-xylénol exo-f et/ou du 6-isaaamphanyl-3, i-xrlnol ;
à. cet -off"* on met en contact le 3,4-xylénol avec le camphène, en présence de chlorure stannique comme catalyseur, à une température comprise entre 70 et 80 C, on extrait la masse réactionnelle refroidie, par un
Mélange de benzène et d'eau, on lave la couche benzénique par de la potasse, puis par de l'eau jusqu'à neutralité, on chasse le benzène et on distille, on recueille la fraction qui passe entre
203 et 223 C sous 200 mm de Hg et on recristallise cette fraction dans l'éther de pétrole ppur obtenir
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un mélange de 6-isobornyl-tt-xylénol et de 6-jlso- camphanyl-3,4-xylénol, et si on le désire, on
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redissout le produit cristallisé dans 1+hexane, et on sépare le produit 6-isobornyl-3,
4-xylénol exo-
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du 6-socamphanyl-3,-xylénol par chromatographie sur colonne d'alumine en employant du benzène comme' éluant.
On donnera ci-après, un exemple de préparation des composés conformes à l'invention.
EXEMPLE.
Dans un ballon à deux tubulures, muni d'un réfrigérant à reflux et d'un thermomètres on fait fondre 100 g de 3,4-xylénol et 150 g de camphéne. On ajoute par petites quantités 10 g de chlorure stannique. On maintient la température entre 70 et 80 C pendant 4 heures. Au bout de ce temps, on laisse refroidir la masse réactionnelle et on ajoute 300 cm3 de benzène et 300 cm3 d'eau.
On décante la couche aqueuse. On lave la couche organique surnageante, une première fois avec 1 200 cm3 de potasse à 10%, et ensuite avec de l'eau jusqu'à neutralité,
On chasse le benzène et on distille.
On recueille la fraction qui passe entre 203 et 223 C sous 200 mm de mercure et on recristallise cette fraction dans l'éther de pétrole..
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100 mg du produit provenant de la recristallisation précédente sont mis en solution dans 10 ml d'hexane.
Cette solution est passée lentement sur une colon- ne d'alumine de 20 cm de Ions et de 16 mm de diamètre conte- nant 20 g d'alumine pour chromatographie.
On élue ensuite avec du benzène que l'on recueille par fraction de 2 ml à partir du moment où le produit appa- rait dans l'éluat; la présence du produit est mise en éviden- ce par la coloration que l'on obtient en mélangeant : 1 Goutte de perchlorure de fer à 2%, 2 gouttes de ferricyanure de po- tassium à 5%'
On recueille 18 ml d'une première fraction puis on élimine une fraction de 2 ml et on recueille ensuite 20 ml d'une dernière fraction.
Après distillation du solvant, la première fraction donne un produit dont le point de fusion est 94-96' et la dernière traction, un produit dont le point de fusion est 86- 88 .
Le produit de la première fraction correspond au
EMI4.1
6-isobornyl -5, 4-xylénol, Le produit de la deuxième fraction est son isomère, le 6-exo-izooamphanyl-3#4-xylénol.
Ces composés nouveaux sont définis par les carac- téristiques suivantes;
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-1*)Point de fusion s
EMI5.1
6-isobornyl->,4-xyiénol 94-96 C 6-exo-iaoaamphanyl-x, 4-xyiénol 86-88 C .20)Chromatographie en phase gazeuse :
appareil Perkin-Elmer F 20 colonne Apiezon M température de colonne 240 C gaz vecteur azote 40 ml/mn en solution dans CHCl3 Temps de rétention
EMI5.2
6-ixobornyl-5,4-xylénoi 10 mn 42 secondes 6-exo-isocamphanyl-3,4-xylénol 12 mn 85 secondes - 3 ) chromatoiraphie en couches minces s sur gel de silice de 250 microns active 30 mn à 120 C liquide de migration benzène température 22 C Rf
EMI5.3
6-isobornyl->,4-xlénol o,fi8 6-exo-1socamphanyl-,,4-xylénol 0, 55 - 4 ) Spectre de résonance magnétique nucléaire Les spectres RMN des composés en solution dans le deutériochlo- roforme ont été mesurés sur l'appareil VARIAN A-60 et les
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déplacements chimiquen évalués en unité8 µ ,
sont exprimés en ppm à partir du signal du tétraméthylsilane pris comme zéro de référence.
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6.isoborrv,3, -xylënoi (voir figure 1 ci-jointe) - A 7,03 et 6,51 ppm, 2 singulets correspondant à 2 H aroma- tiques, situés en para.
- A 4,60 ppm, signal d'un H hydroxylique échangeable contre du deutérium.
- A 3,08 ppm, triplet correspondant à ltH benzylique situé
EMI6.2
en 2 sur le cycle 1sobornane, il est du au oouplase, avec une constante identique (J- 8,5 cps), à deux autres protons.
- A 2,15 ppm, pic unique dû aux groupements méthyle aroma- tiques.
- Entre 1 et 1,90 ppm, hydrogènes du cycle alicyolique.
EMI6.3
- Entre OP78 et 1,05 ppMt groupements méthyle tertiaires# au nombre de.3. avec
Ce spectre RMN concorde bien/la structure spatiale
EMI6.4
suivante du 6-isobornyl-3,4-xylénol :
EMI6.5
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EMI7.1
G-exo-isocamphanyl-3,+-xyléno. (figure 2) - A 6,90 et 6,55 ppm, H aromatiques situés en para - A 4,60 ppm, H phénolique .. A 2,83 ppm, figure à allure de triplet dû à un H benzylique couplé, avec une constante identique (J = 7,5cps) à deux autres protons et avec une constante presque nulle à un autre.
Entre 1,10 ppm et 1,90 ppm, H alicycliques - A 1,05 et 0,91 ppm, 2 groupements méthyle tertiaires - A 0,90 ppm, doublet (J = 6,5 cps) dû à un groupement méthyle secondaire.
Ce spectre RMN concorde avec la struc-
EMI7.2
ture spatiale suivante du 6-exo-isocamphanyl-3,4-xylénolt
EMI7.3
L'obtention du mélange d'isomères se conçoit très bien si
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l'on imagine la forme anchïmérique III du carbocation inter- médiaire.
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Attaque nucléophile sur le centre a # (II) Attaque nucléophile sur le centre b # (I ).
L'activité bactériostatique des nouveaux composés selon l'invention a été mise en évidence dans les tests sui- vants.
EMI8.2
1 - Activité bactériostatique du 6-isoborhyl-3,..xylénol par la technique dite du "stylo à microbes".
Cette technique consiste à effectuer des dilutions croissantes du composé à tester dans une gélose spéciale cou- lée en bottes de Pétri.Ces géloses sont ensemencées en stries parallèles par différents germes.
A cet effet, les germes ont étépréalablement ense- mencés sur des milieux inclinés de gélose ayant la formule suivante :
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Chair musculaire 500 g Peptone 10 g Cl Na 5 g gélose 15 g eau 1 000 cm3
On a porté les milieux de gélose à l'étuve à 37 C pendant 24 heures, puis on les a conservés à la glacière.
A l'aide d'une anse de platine, on a prélevé les colonies bactériennes sur les milieux inclinés et on les a ensemencées sur des bouillons nutritifs de formule suivante : Chair musculaire 500 g peptone 10 g Cl Na 5 g eau 1 000 cm3
Après 24 heures à l'étuve à 37 C, les bouillons constituent des milieux d'ensemencement.
On a préparé par ailleurs des solutions mères contenant-20 mg/cm3 de composé à essayer, le solvant étant l'éthylèneglycol.,
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Par dilutions successives, on peut obtenir des concentrations de. 10 mg/cm3, 5 mg/cm3, etc.
On prépare ensuite les géloses dites "pour antibiotiques" en boites de Pétri.
Extrait de viande Liebig 1,5 g autolysat de levure 3 peptone 6 chlorure de sodium 5 eau 1 litre gélose 15 g phosphate disodique 9,3 g phosphate monopotassique 0,7 g glucose pur 2 g pH final : 7,4.
Ces géloses sont portées au bain-marie à une température voisine de 50 C pour obtenir leur liquéfaction: elles sont mélangées à raison de 28,5 cm3 pour 1,5 cm3 de la dilution précédemment préparée. '
Ia gélose est coulée en botte de Pétri stérile après homogénéisation. On obtient ainsi tout un jeu de géloses coulées en bottes de Pétri, contenant des dilutions à titres croissants du composé à essayer.
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Après solidification des géloses, celles-ci sont mises pendant une heure à @étuve à 37 C pour être séchées,
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On a rempli des pipettesmbxtaÉ,cr0.&spr capillarité, du milieu d'ensemencement constitué par le bouillon nutritif dans lequel le germe considéré a été cultivé.
L'ensemencement a lieu sur la gélose par stries parallèles,
Pour chaque boîte, on obtient de cette façon un réseau de stries parallèles cor- respondantes à chaque bactérie.
Les bottes de Pétri correspondant aux différentes dilutions sont mises pendant 24 heures à l'étuve à 37 C.
Après cette période, on peut effectuer les lectures; si le produit est actif pour une dilution déterminée sur un germe donné, il n'y a aucune poussée sur la strie correspondante. S'il est inactif, des colonies prennent naissance tout le long de la strie.
On a donné dans le tableau suivant les résultats qui ont été obtenus pour les différents germes mentionnés en précisant, dans le cas de
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l'activité, le taux correspondant à l'inhibition en gamma/cm3.
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<tb>
Taux <SEP> d'inhi-
<tb>
<tb>
<tb> GERMES <SEP> bition <SEP> en
<tb>
<tb>
<tb> gamma/cm3
<tb>
EMI12.2
Mwwwwwwerwwrwwwwwww.rrwwrwerwrwwwwwwwmwwwwwwmY.wwwwwwe.
EMI12.3
<tb> Klebsiella <SEP> acrobacter <SEP> souche <SEP> 45 <SEP> 62,5
<tb>
<tb> Staphylococcus <SEP> souche <SEP> Londres <SEP> 1,95
<tb>
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Staphylooocous aureus souche 133 1,95
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<tb> Streptococcus <SEP> souche <SEP> ClO <SEP> aristène <SEP> 3,90
<tb>
<tb> Enterococcus <SEP> souche <SEP> Deval <SEP> 3,90
<tb>
<tb> Streptocoque <SEP> foecalis <SEP> 3,90
<tb>
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L'isomère 6-exo-isocamphanyl-3*4- xylénol a une activité bactériostatique moitié
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moindre que celle du 6-isobornyl-,,4-xylénol.
2 - Activité anti-bactérienne des nouveaux composés in vivo sur la souris.
On a injecté par voie intrapéritonéale à des souris Albinos, une culture diluée en bouil- lon de pneumocoque qui provoque la mort de 100% des animaux d'un lot et on a cherché à déterminer
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la dose des produits étudiés qui, injectée par la même voie et immédiatement après, empêche partiel- lement ou totalement les mortalités.
On a utilisé des souris Albinos de souche RAP, d'un poids moyen de 20 g,
On a employé comme culture le diplo- coccus pneumoniae (Til). Cette bactérie est prati quement la seule qui donne des résultats fidèle@ et reproductibles d'une expérimentation à l'a@re.
On a utilisé des cultures en bc.llon ascite de 24 heures. On a dilué la culture avec du dérivé soluté isotonique jusqu'à ce que l@a obtien- ne par comparaison opacimétrique avec un@gamme des concentrations bactériennes qui corresp@dent en poids de bactéries humides à la concen@ation de 10-5, ce qui correspond à environ 5 O@ doses mor- telles pour 0,5 cm3.
On a injecté aux animas par voie
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lntrapéritondale, 0,5 em3 de la cuivre diluée et aussitôt après 0,5 cm3 de la su@ension du composé à étudier.
Les animaux sur lesquls les tests ont été faits ont été divisés en lets de dix; un lot témoin n'a rien reçu; cinq @ts ont reçu des
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quantités croissantes d'un composé à étudiera les doses ainsi administrées avaient été déterminées dans des expériences préliminaires de façon à les encadrer entre la dose minimale protégeant parfai- tement les animaux et la dose la plus forte ne pro- voquant aucune protection,
On a pu déterminer que pour les nouveaux composés selon l'invention, la dose minimale pro- tégeant 50% des animaux est de 110 mg/kg par voie intrapéritonéale.
3 - Toxicité des nouveaux composés
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6-isobornyl-3,-xylénol t DL4 = 1200 mg/kg par voie intrapéritonéale chez le rat 4listar 6-exo-ixocamphanyi-5,4-xyiénoi DLcn " 800 mgjkg par voie I.P. chez le rat Wistar.
A titre de comparaison, la toxicité DL50
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du produit connu 6-isobornyl-2,4-xylénol est de 650 mg/kg par voie I.P. chez le rat Wistarj mais la toxicité retardée de ce composé ne permet pas d'en- visager son emploi en thérapeutique ;
t en effet, alors qu'avec les nouveaux composés selon l'invention, la mortalité des animaux testés se stabilise au bout de 24 heures, au contraire, aveo le composé connu
<Desc/Clms Page number 15>
6-isoborny1-2,4-xylénol, la mortalité augmente continuellement, la totalité d'un lot de cinq animaux testés meurt pour une dose de 900 mg/kg en 72 heures, pour une dose de 1 500 mg/kg en 24 heures, et pour une dose de 2 000 mg/kg en 12 heures, 4 - Activité antiseptique des nouveaux composés.
On a déterminé celle-ci sur différents germes : - par la concentration à laquelle le composé tue le germe, par le temps de contact nécessaire entre le composé et la bactérie pour que cette dernière soit tuée.
On a comparé les résultats obtenus avec ceux que donne le phénol ; cela, on a établi le rapport entre la dilution limite active du composé étudié et la dilution limite active du phénol.
Les cultures servant aux ensemencements étaient des cultures de 24 heures en bouillon.
Dans l'expérimentation, on verse dix gouttes de la culture dans un tube contenant 10 cm3 de bouillon nutritif et 1 cm3 d'une solution de
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phénol à 10%; la concentration en phénol est ainsi de 1/110.
On place une goutte de bouillon phénolé ainsi ensemencé dans un tube de bouillon nutritif vierge au bout d'un temps détermine qui varie d'un tube à l'autre de 2,5 à 15 minutes; les tubes sont ensuite placés à l'étuve à 37 C pendant 24 heures.
On note les temps et les concentrations pour lesquels il y a culture.
Pour chacun des germes étudiés, on a déterminé le pouvoir antiseptique du phénol à la dilution de 1/110 et le temps nécessaire à l'anti- septie ainsi que le pouvoir antiseptique du composé de l'invention ! dilution maximale et temps mini- mal.
Le coefficient phénol est ainsi le rapport entre ce pouvoir antiseptique et 110,
On a indiqué ci-après, selon les différents germes, la dilution limite aotive, le temps minimal pour que s'exerce à cette dilution le pouvoir antiseptique et le coefficient phénol.
Staphylocoocus souche Londres
On donne ci-après le tableau des résultats$ dans lequel
<Desc/Clms Page number 17>
- indique qu'il y a culture - indique l'absence de culture.
EMI17.1
<tb>
Temps <SEP> de <SEP> contact <SEP> 2,5 <SEP> 5 <SEP> 10 <SEP> 15
<tb> mn <SEP> mn <SEP> mn <SEP> mn
<tb>
EMI17.2
-------.-----------------.¯----------------.----------------
EMI17.3
<tb> Phénol <SEP> au <SEP> 1/110 <SEP> + <SEP> @ <SEP> +
<tb>
<tb>
<tb> Nouveaux <SEP> composes <SEP> selon <SEP> l'invention <SEP> :
<tb>
<tb> au <SEP> 1/100 <SEP> -
<tb>
<tb> au <SEP> 1/10 <SEP> 000-
<tb>
<tb> au <SEP> 1/100 <SEP> 000 <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> -
<tb>
<tb> au <SEP> l/l <SEP> 000 <SEP> 000 <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb>
<tb> au <SEP> 1/5 <SEP> 000 <SEP> 000 <SEP> + <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb>
Le coefficient phénol est ainsi de 1000.
Streptocoque Foecalis
On a donné ci-après le tableau des ré- sultats obtenus.
EMI17.4
<tb>
Temps <SEP> de <SEP> contact <SEP> 2,5 <SEP> 5 <SEP> 10 <SEP> 15
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> mn <SEP> mn <SEP> mn <SEP> mn
<tb>
EMI17.5
wwwwwwWwwwwwwrwwwwwwwwwswW wwwwwwwwwrwwwwwrwwwwwrwwwwwwwrwrw
EMI17.6
<tb> Phénol <SEP> au <SEP> 1/110 <SEP> + <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb>
<tb> Nouveaux <SEP> composés <SEP> selon <SEP> l'invention=
<tb> au <SEP> 1/1 <SEP> 000 <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> au <SEP> 1/10 <SEP> 000
<tb> au <SEP> 1/50 <SEP> 000 <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> au <SEP> 1/100 <SEP> 000 <SEP> + <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb>
Le coefficient phénol est de 500.
<Desc/Clms Page number 18>
Enterocoque souche Deval
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<tb> 'Temps <SEP> de <SEP> contact <SEP> 2,5 <SEP> 5 <SEP> 10 <SEP> 15
<tb> mn <SEP> mn <SEP> mn <SEP> mn
<tb>
<tb> Phénol <SEP> au <SEP> 1/110 <SEP> + <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb>
<tb> Nouveaux <SEP> composés <SEP> selon <SEP> l'invention <SEP> i
<tb> au <SEP> 1/100 <SEP> - <SEP> au <SEP> 1/1 <SEP> 000 <SEP> - <SEP> - <SEP> au <SEP> 1/5 <SEP> 000 <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> au <SEP> 1/la <SEP> 000 <SEP> + <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb>
EMI18.2
au 1/loo coe ... u . J.n Luurr. .,¯ .:..... . ..
Les nouveaux composés de l'invention fil sont utiles pour le traitement des affections a germes pyogènes quelles que soient leurs locali- sations (cutanées, tissu interstitiel, poumons, oreilles, nez, gorge),
Les compositions pharmaceutiques conformes à l'invention peuvent se présenter sous les formes suivantes ! - pommades dermiques de l à 10%, - pommades à action percutanée (la 10%) en asso- ciation avec un facteur de pénétration tel que l'eucalyptcl,
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- suppositoires destinés au traitement des pneumo- pathies (également en association aveo l'euca- lyptol), - solutions alcooliques (l à 5%) pour désinfection de la peau en chirurgie, - suspensions destinées 4 être pulvérisées dans le nez ou la gorge (1 à 5%), - gouttes auriculaires (1 à 5%)
pour les otites aiguës ou catarrhales, - suspensions injectables par voie intramusculaire ou sous-cutanée (le composé est solubilisé dans l'huile d'olive interestérifiée, qui est mise en suspension dans cinq parties de soluté chloruré isotonique (1 à 2 %), - comprimés.
On a procédé à un certain nombre d'essais cliniques sur des pneumopathies banales, des angines banales, des infections intestinales banales et des infections pyogènes cutanées banales.
On a utilisé les formes pharmaceutiques suivantes t - suppositoires de 2 g pour les adultes et de 1 g pour les enfants, contenant 6% du produit de l'in- vention et 3% d'eucalyptol, ayant pour but de faci-
<Desc/Clms Page number 20>
liter le passage rapide à travers la muqueuse rectale, ces produits étant associés à du.beurre de cacao, cachets de 0,050 g de principe actif, - pommade constituée par de la cire de Lanette figurant au Codex français, contenant 5% du pro- duit de l'invention et 3% d'eucalyptol.
Dans le traitement des pneumopathies banales, on a traité quarante malades (vingt adul- tes et vingt enfants de 1 à 5 ans) en leur adminis- trant un suppositoire toutes les 6 heures,
Les affections pulmonaires traitées entrent dans le cadre des affections saisonnières ou des affections aiguës des jeunes enfants ou des' vieillards. '
Dans tous les cas, sauf deux cas de pneumopathie à virus, on a obtenu une guérison après 48 heures et les suppositoires ont toujours été bien tolérés.
Un même traitement a été utilisé dans 20 cas d'angines banales (quinze adultes et cinq enfants).
Les résultats ont toujours été satisfai- sants et la guérison est intervenue en 24 heures
<Desc/Clms Page number 21>
dans dix-sept cas et 48 heures dans trois cas; la tolérance a également été parfaite.
Pour le traitement des infections in- testinales banales, on a traité dix adultes en leur faisant absorber un cachet toutes les quatre .heures pendant 24 heures.
Tous les cas entraient dens le cadre des diarrhées estivales banales.
Les résultats sur l'élément infectieux ont été remarquables, tant par leur rapidité (souvent moins de 12 heures) que par la puissance de l'action.
La tolérance a également été parfaite.
Dans de tels traitements, on peut avoir Intérêt à associer les composés de l'invention à un anti-spasmodique, à des vitamines du groupe B et à des ferments lactiques.
Dans le traitement des infections pyo- gènes cutanées banales, on a utilisé la pommade sur quinze cas de plaies ouvertes infectées. La tolérance a été parfaite et les résultats furent excellents.
<Desc / Clms Page number 1>
EMI1.1
Ddrlvdo of camphene-phenol and pharmaceutical compositions containing them.
The present invention relates to camphene-phenol derivatives, with therapeutic activity, and obtained by the action of camphene on 3,4-xylenol. In particular, it relates to the
EMI1.2
6-.sobornyl-3, .xylnol and / or its isomer, 6-exo-isocamphanyi-x, 4-xylenol.
<Desc / Clms Page number 2>
These new compounds which have been able to be isolated have particularly interesting therapeutic properties.
The present invention also defeats the therapeutic application of these compounds, more particularly as bacteria-statics, as well as the pharmaceutical compositions containing the compounds of the invention and a non-toxic pharmaceutically acceptable carrier,
The invention also relates to a
EMI2.1
proceeds from the preparation of 6-isobornyl-3,4-xylenol exo-f and / or 6-isaaamphanyl-3, i-xrlnol;
at. this -off "* the 3,4-xylenol is brought into contact with camphene, in the presence of stannic chloride as catalyst, at a temperature of between 70 and 80 C, the cooled reaction mass is extracted with a
Mixture of benzene and water, the benzene layer is washed with potash, then with water until neutral, the benzene is driven off and distilled, the fraction which passes between
203 and 223 C under 200 mm of Hg and this fraction is recrystallized from petroleum ether to obtain
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a mixture of 6-isobornyl-tt-xylenol and 6-jlso-camphanyl-3,4-xylenol, and if desired, one
<Desc / Clms Page number 3>
the crystallized product is redissolved in 1 + hexane, and the product 6-isobornyl-3 is separated,
4-xylenol exo-
EMI3.1
6-socamphanyl-3, -xylenol by chromatography on an alumina column using benzene as the eluent.
An example of the preparation of the compounds in accordance with the invention will be given below.
EXAMPLE.
In a two-necked flask, fitted with a reflux condenser and a thermometer, 100 g of 3,4-xylenol and 150 g of camphene are melted. 10 g of stannic chloride are added in small quantities. The temperature is maintained between 70 and 80 C for 4 hours. At the end of this time, the reaction mass is allowed to cool and 300 cm3 of benzene and 300 cm3 of water are added.
The aqueous layer is decanted. The supernatant organic layer is washed, a first time with 1200 cm3 of 10% potassium hydroxide, and then with water until neutral,
The benzene is driven off and distilled.
The fraction which passes between 203 and 223 C under 200 mm of mercury is collected and this fraction is recrystallized from petroleum ether.
<Desc / Clms Page number 4>
100 mg of the product from the previous recrystallization are dissolved in 10 ml of hexane.
This solution is passed slowly over a column of alumina 20 cm in ion and 16 mm in diameter containing 20 g of alumina for chromatography.
It is then eluted with benzene which is collected in portions of 2 ml from the moment when the product appears in the eluate; the presence of the product is evidenced by the coloring which is obtained by mixing: 1 drop of 2% iron perchloride, 2 drops of 5% potassium ferricyanide '
18 ml of a first fraction are collected and then a 2 ml fraction is removed and 20 ml of a last fraction are then collected.
After distillation of the solvent, the first fraction gives a product with a melting point of 94-96 'and the last pull a product with a melting point of 86-88.
The product of the first fraction is the
EMI4.1
6-isobornyl -5, 4-xylenol. The product of the second fraction is its isomer, 6-exo-izooamphanyl-3 # 4-xylenol.
These new compounds are defined by the following characteristics;
<Desc / Clms Page number 5>
-1 *) Melting point s
EMI5.1
6-isobornyl ->, 4-xyienol 94-96 C 6-exo-iaoaamphanyl-x, 4-xyienol 86-88 C. 20) Gas chromatography:
Perkin-Elmer F 20 apparatus Apiezon M column column temperature 240 C nitrogen carrier gas 40 ml / min in solution in CHCl3 Retention time
EMI5.2
6-ixobornyl-5,4-xylénoi 10 mn 42 seconds 6-exo-isocamphanyl-3,4-xylenol 12 mn 85 seconds - 3) chromatoiraphy in thin layers s on silica gel of 250 microns active 30 mn at 120 C liquid benzene migration temperature 22 C Rf
EMI5.3
6-isobornyl ->, 4-xlénol o, fi8 6-exo-1socamphanyl - ,, 4-xylenol 0, 55 - 4) Nuclear magnetic resonance spectrum The NMR spectra of compounds in solution in deuteriochloroform were measured on the VARIAN A-60 device and the
EMI5.4
chemical shifts evaluated in 8 µ units,
are expressed in ppm from the tetramethylsilane signal taken as the reference zero.
<Desc / Clms Page number 6>
EMI6.1
6.isoborrv, 3, -xylënoi (see figure 1 attached) - At 7.03 and 6.51 ppm, 2 singlets corresponding to 2 aromatic H, located in para.
- At 4.60 ppm, signal of a hydroxylic H exchangeable against deuterium.
- At 3.08 ppm, triplet corresponding to benzyl ltH located
EMI6.2
in 2 on the 1sobornan cycle, it is due to the oouplase, with an identical constant (J-8.5 cps), to two other protons.
- At 2.15 ppm, single peak due to the aromatic methyl groups.
- Between 1 and 1.90 ppm, hydrogens of the alicyolic cycle.
EMI6.3
- Between OP78 and 1.05 ppMt tertiary methyl groups # 3. with
This NMR spectrum agrees well with the spatial structure
EMI6.4
following of 6-isobornyl-3,4-xylenol:
EMI6.5
<Desc / Clms Page number 7>
EMI7.1
G-exo-isocamphanyl-3, + - xyleno. (figure 2) - A 6.90 and 6.55 ppm, aromatic H situated in para - A 4.60 ppm, phenolic H .. At 2.83 ppm, figure at the appearance of a triplet due to a coupled benzyl H, with an identical constant (J = 7.5cps) to two other protons and with an almost zero constant to another.
Between 1.10 ppm and 1.90 ppm, alicyclic H - A 1.05 and 0.91 ppm, 2 tertiary methyl groups - A 0.90 ppm, doublet (J = 6.5 cps) due to a secondary methyl group .
This NMR spectrum agrees with the structure
EMI7.2
following spatial ture of 6-exo-isocamphanyl-3,4-xylenolt
EMI7.3
Obtaining the mixture of isomers is easily conceivable if
EMI7.4
one can imagine the anchimeric form III of the intermediate carbocation.
<Desc / Clms Page number 8>
EMI8.1
Nucleophilic attack on the center a # (II) Nucleophilic attack on the center b # (I).
The bacteriostatic activity of the new compounds according to the invention has been demonstrated in the following tests.
EMI8.2
1 - Bacteriostatic activity of 6-isoborhyl-3, .. xylenol by the so-called "microbe pen" technique.
This technique consists in carrying out increasing dilutions of the compound to be tested in a special agar poured in Petri boots. These agars are inoculated in parallel streaks with different germs.
For this purpose, the germs were previously seeded on agar slant media having the following formula:
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Muscle meat 500 g Peptone 10 g Cl Na 5 g agar 15 g water 1000 cm3
The agar media were heated in an oven at 37 ° C. for 24 hours, then kept in the cooler.
With the aid of a platinum loop, the bacterial colonies were taken from the inclined media and they were inoculated on nutrient broths of the following formula: Muscle flesh 500 g peptone 10 g Cl Na 5 g water 1000 cm3
After 24 hours in an oven at 37 C, the broths constitute seeding media.
Stock solutions were also prepared containing 20 mg / cm3 of compound to be tested, the solvent being ethylene glycol.
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By successive dilutions, one can obtain concentrations of. 10 mg / cm3, 5 mg / cm3, etc.
The so-called "antibiotic" agars are then prepared in Petri dishes.
Liebig meat extract 1.5 g yeast autolysate 3 peptone 6 sodium chloride 5 water 1 liter agar 15 g disodium phosphate 9.3 g monopotassium phosphate 0.7 g pure glucose 2 g final pH: 7.4.
These agars are brought to a water bath at a temperature in the region of 50 ° C. to obtain their liquefaction: they are mixed at the rate of 28.5 cm3 for 1.5 cm3 of the dilution prepared previously. '
The agar is poured into a sterile Petri boot after homogenization. There is thus obtained a whole set of agars cast in Petri boots, containing dilutions in increasing titers of the compound to be tested.
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After solidification of the agars, they are placed for one hour in an oven at 37 C to be dried,
EMI11.1
PipettesmbxtaE, cr0. & Spr capillarity were filled with the inoculation medium consisting of the nutrient broth in which the germ in question was cultivated.
The inoculation takes place on the agar by parallel streaks,
For each dish, we obtain in this way a network of parallel streaks corresponding to each bacterium.
The Petri boots corresponding to the various dilutions are placed for 24 hours in an oven at 37 C.
After this period, the readings can be taken; if the product is active for a determined dilution on a given germ, there is no push on the corresponding streak. If it is inactive, colonies are formed all along the streak.
The results which were obtained for the various germs mentioned have been given in the following table, specifying, in the case of
<Desc / Clms Page number 12>
activity, the rate corresponding to the inhibition in gamma / cm3.
EMI12.1
<tb>
Inhi- rate <SEP>
<tb>
<tb>
<tb> GERMS <SEP> bition <SEP> en
<tb>
<tb>
<tb> gamma / cm3
<tb>
EMI12.2
Mwwwwwwerwwrwwwwwww.rrwwrwerwrwwwwwwwmwwwwwwmY.wwwwwwe.
EMI12.3
<tb> Klebsiella <SEP> acrobacter <SEP> strain <SEP> 45 <SEP> 62.5
<tb>
<tb> Staphylococcus <SEP> strain <SEP> London <SEP> 1.95
<tb>
EMI12.4
Staphylooocous aureus strain 133 1.95
EMI12.5
<tb> Streptococcus <SEP> strain <SEP> ClO <SEP> aristene <SEP> 3.90
<tb>
<tb> Enterococcus <SEP> strain <SEP> Deval <SEP> 3.90
<tb>
<tb> Streptococcus <SEP> foecalis <SEP> 3.90
<tb>
EMI12.6
The 6-exo-isocamphanyl-3 * 4-xylenol isomer has half bacteriostatic activity
EMI12.7
less than that of 6-isobornyl - ,, 4-xylenol.
2 - Anti-bacterial activity of the new compounds in vivo on the mouse.
Albino mice were injected intraperitoneally with a diluted broth culture of pneumococcus which causes the death of 100% of the animals in a batch and an attempt was made to determine
<Desc / Clms Page number 13>
the dose of the products studied which, injected by the same route and immediately afterwards, partially or totally prevents mortalities.
Albino mice of the RAP strain, with an average weight of 20 g, were used,
Diplococcus pneumoniae (Til) was used as a culture. This bacterium is practically the only one which gives faithful and reproducible results of an experiment in the field.
24 hour ascites bc cultures were used. The culture was diluted with isotonic solute derivative until it was obtained by opacimetric comparison with a range of bacterial concentrations which corresponded by weight of wet bacteria to the concentration of 10-5, which corresponds to about 50% fatal doses per 0.5 cc.
We injected the animas by way
EMI13.1
lntraperitondale, 0.5 em3 of diluted copper and immediately after 0.5 cm3 of the su @ ension of the compound to be studied.
The animals on which the tests were made were divided into rows of ten; a control batch received nothing; five @ts received
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increasing quantities of a compound to be studied the doses thus administered had been determined in preliminary experiments so as to frame them between the minimum dose which perfectly protects the animals and the highest dose not causing any protection,
It has been possible to determine that for the new compounds according to the invention, the minimum dose protecting 50% of the animals is 110 mg / kg intraperitoneally.
3 - Toxicity of new compounds
EMI14.1
6-isobornyl-3, -xylenol t DL4 = 1200 mg / kg intraperitoneally in rats 4listar 6-exo-ixocamphanyi-5,4-xyiénoi DLcn "800 mg / kg by I.P. route in Wistar rats.
For comparison, the LD50 toxicity
EMI14.2
of the known product 6-isobornyl-2,4-xylenol is 650 mg / kg by the I.P. route in the Wistarj rat, but the delayed toxicity of this compound does not allow its use in therapy to be considered;
t in fact, whereas with the new compounds according to the invention, the mortality of the animals tested stabilizes after 24 hours, on the contrary, with the known compound
<Desc / Clms Page number 15>
6-isoborny1-2,4-xylenol, mortality continuously increases, the entire batch of five animals tested dies for a dose of 900 mg / kg in 72 hours, for a dose of 1500 mg / kg in 24 hours , and for a dose of 2000 mg / kg over 12 hours, 4 - Antiseptic activity of the new compounds.
This was determined on different germs: - by the concentration at which the compound kills the germ, by the contact time necessary between the compound and the bacteria for the latter to be killed.
The results obtained were compared with those given by phenol; This, the ratio was established between the active limit dilution of the test compound and the active limit dilution of phenol.
Cultures used for inoculation were 24 hour cultures in broth.
In the experiment, ten drops of the culture are poured into a tube containing 10 cm3 of nutrient broth and 1 cm3 of a solution of
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10% phenol; the phenol concentration is thus 1/110.
A drop of phenolized broth thus inoculated is placed in a tube of virgin nutritive broth after a determined time which varies from one tube to another from 2.5 to 15 minutes; the tubes are then placed in an oven at 37 ° C. for 24 hours.
We note the times and concentrations for which there is culture.
For each of the germs studied, the antiseptic power of phenol at a dilution of 1/110 and the time required for the antiseptic action as well as the antiseptic power of the compound of the invention were determined! maximum dilution and minimum time.
The phenol coefficient is thus the ratio between this antiseptic power and 110,
According to the different germs, the limit aotive dilution, the minimum time for the antiseptic power and the phenol coefficient to be exerted at this dilution have been indicated.
Staphylocoocus strain London
The table of results $ in which
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- indicates that there is culture - indicates the absence of culture.
EMI17.1
<tb>
Contact <SEP> time <SEP> 2.5 <SEP> 5 <SEP> 10 <SEP> 15
<tb> mn <SEP> mn <SEP> mn <SEP> mn
<tb>
EMI17.2
-------.-----------------. ¯ ----------------.------ ----------
EMI17.3
<tb> Phenol <SEP> at <SEP> 1/110 <SEP> + <SEP> @ <SEP> +
<tb>
<tb>
<tb> New <SEP> compounds <SEP> according to <SEP> invention <SEP>:
<tb>
<tb> to <SEP> 1/100 <SEP> -
<tb>
<tb> to <SEP> 1/10 <SEP> 000-
<tb>
<tb> to <SEP> 1/100 <SEP> 000 <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> -
<tb>
<tb> to <SEP> l / l <SEP> 000 <SEP> 000 <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb>
<tb> to <SEP> 1/5 <SEP> 000 <SEP> 000 <SEP> + <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb>
The phenol coefficient is thus 1000.
Streptococcus Foecalis
The table of results obtained is given below.
EMI17.4
<tb>
Contact <SEP> time <SEP> 2.5 <SEP> 5 <SEP> 10 <SEP> 15
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> mn <SEP> mn <SEP> mn <SEP> mn
<tb>
EMI17.5
wwwwwwWwwwwwwrwwwwwwwwwswW wwwwwwwwwrwwwwwrwwwwwrwwwwwwwrwrw
EMI17.6
<tb> Phenol <SEP> at <SEP> 1/110 <SEP> + <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb>
<tb> New <SEP> compounds <SEP> according to <SEP> the invention =
<tb> at <SEP> 1/1 <SEP> 000 <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> at <SEP> 1/10 <SEP> 000
<tb> to <SEP> 1/50 <SEP> 000 <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> to <SEP> 1/100 <SEP> 000 <SEP> + <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb>
The phenol coefficient is 500.
<Desc / Clms Page number 18>
Enterococcus strain Deval
EMI18.1
<tb> 'Time <SEP> of <SEP> contact <SEP> 2.5 <SEP> 5 <SEP> 10 <SEP> 15
<tb> mn <SEP> mn <SEP> mn <SEP> mn
<tb>
<tb> Phenol <SEP> at <SEP> 1/110 <SEP> + <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb>
<tb> New <SEP> compounds <SEP> according to <SEP> invention <SEP> i
<tb> at <SEP> 1/100 <SEP> - <SEP> at <SEP> 1/1 <SEP> 000 <SEP> - <SEP> - <SEP> at <SEP> 1/5 <SEP> 000 <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> to <SEP> 1 / the <SEP> 000 <SEP> + <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb>
EMI18.2
at 1 / loo coe ... u. J.n Luurr. ., ¯.: ...... ..
The new compounds of the invention are useful for the treatment of conditions with pyogenic germs whatever their localization (skin, interstitial tissue, lungs, ears, nose, throat),
The pharmaceutical compositions in accordance with the invention can be provided in the following forms! - dermal ointments from 1 to 10%, - ointments with percutaneous action (10%) in combination with a penetration factor such as eucalyptcl,
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- suppositories intended for the treatment of pneumopathies (also in combination with eucalyptol), - alcoholic solutions (1 to 5%) for disinfecting the skin in surgery, - suspensions intended 4 to be sprayed into the nose or throat (1 to 5%), - ear drops (1 to 5%)
for acute or catarrhal otitis, - suspensions for intramuscular or subcutaneous injection (the compound is dissolved in interesterified olive oil, which is suspended in five parts of isotonic chloride solution (1 to 2%), - tablets.
A number of clinical trials have been performed on common pneumonia, common tonsillitis, common intestinal infections and common pyogenic skin infections.
The following pharmaceutical forms were used: suppositories of 2 g for adults and 1 g for children, containing 6% of the product of the invention and 3% eucalyptol, with the aim of facilitating
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liter the rapid passage through the rectal mucosa, these products being associated with cocoa butter, tablets of 0.050 g of active principle, - ointment consisting of Lanette wax appearing in the French Codex, containing 5% of the product of the invention and 3% eucalyptol.
In the treatment of banal pneumopathies, forty patients (twenty adults and twenty children aged 1 to 5) were treated by administering a suppository every 6 hours,
The pulmonary affections treated fall within the scope of seasonal affections or acute illnesses of young children or the elderly. '
In all except two cases of viral pneumonitis, recovery was achieved after 48 hours and the suppositories were always well tolerated.
The same treatment was used in 20 cases of banal tonsillitis (fifteen adults and five children).
The results have always been satisfactory and the cure took place within 24 hours.
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in seventeen cases and 48 hours in three cases; tolerance was also perfect.
For the treatment of common intestinal infections, ten adults were treated with one pill every four hours for 24 hours.
All cases fell within the framework of banal summer diarrhea.
The results on the infectious element were remarkable, both for their speed (often less than 12 hours) and for the power of the action.
The tolerance was also perfect.
In such treatments, it may be advantageous to combine the compounds of the invention with an anti-spasmodic, with group B vitamins and with lactic ferments.
In the treatment of common pyogenic skin infections, the ointment has been used on fifteen cases of infected open wounds. Tolerance was perfect and the results were excellent.