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"VACCIH CONTRE M ROUGEQLE ET PROCEDE POUR SA PREDATION"
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La présente invention concerne un nouveau procédé de préparation de vaooin tué contre la rougeole et le vaccin obtenu par ce procédé...
On connaît déjà plusieurs moyens de conférer une protection vis-à-vis de la rougeole. Parmi ces moyens, on , trouve l'utilisation de gamma-globulines ou de vaccina préparés à partir d'un virus de la rougeole vivant et atténué ou à partir d'un virus de la rougeole tué.
On sait que l'im- muni+' conférée par les gamma-globulines est de durée rela- tivement courte et que l'administration du vaccin vivant procure une immunité durable mais s'accompagne très souvent d'effets secondaires désagréables,
Des vaccina tuée peuvent être préparés par culture du virus our tissu embryonnaire de poulet ou, de préférence,. sur du tissu primaire de mammifère.
L'administration de vaccin tué ne présente pas ces inconvénients mais une bonne immunisation à l'aide do vaccin tué ne peut être réalisée qu'à partir d'une masse antigénique relativisent importante et on sait que la culture du virus de la roueeole dans les conditions ordinaires ne permet pas d'obtenir des concentrations suffisamment élevées en virus.
Afin d'obtenir une concentration suffisante, il était donc jusqu'à présent nécessaire lors de la préparation do vaccin tué de concentrer la suspension de virus tué par ion des particules stimulent la réponse anticorps et da reconstituer ensuite la suspension dans un volume au moins quatre fois plus concentré que le milieu de croissance,
En d'autres termes, la préparation de vaccin tué contre la rougeole sur culture de tissu primaire de mammifère comprenait jusqu'à présent essentiellement ! la préparation
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d'une culture de tissu primaire de mammifère -de préférence du *.issu rénal de singe-,
la propagation du virus de la rougeole dans ladite culture pour obtenir une suspension rela.- tivement diluée du virus dans le milieu de croissance, la clarification de la suspension obtenue, son inactivation, sa concentration par agglomération des particules stimulant la réponse anticorps et la reconstitution de la suspension
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dans un volume au moins quatre fois plus oQncentrè que le milieu de croissance.
La présente invention permet d'éviter le stade de concentration et le stade de reconstitution* Elle a également comme conséquence d'effectuer les opérations de
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clarification et d'inactivation sur des vol'uïa'es Y-4,àuitio Le procède suivant l'invention coa;ea4 fe"nt..il.. ment la préparation d'une culture de tis'$'V'1. pï'i'aae ,8,é mammifère -de préférence du tissu rénal de iar= :t'I#:s'è'>mencement et l'amorce de la propagation du viras àe 1a rougeole dans ladite culture en prdoende d Il'\!1'è GfQ,'à'f:lt:
a.1t normale de milieu de croissance, le resiplaoeïa'e'nt d'è ci volume de milieu de croissance par un vOl'Wi1é âU moins quatre fois plus réduit et la production dru v1Y"u ,rà'è \(tet ensemble agité d'un Mouvement tel qu'il aà4U.P.e wnx3 &i\i.'à'tr.1\.'Too bution continue du milieu de croinsancê 'èùr 1-e 'tàip1l% éT cellules 1 la clarification de la auspenoioa de 'Vi1:'1..]!" a'bm inactivation et, éventuellement, l'addition d'au moins un agent adsorbnnt au vaccin obtenu.
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Suivant la présente invention 1:a éùltaY<é d'là '.2'u' de la rougeole se réalise comme suit aU d'épart d''uth"e tdlutlhè tissulaire monocellulaire recouverue d'un Tnili'eu d'O 'c'ôeàthë
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classique (par exemple, solution dt Hnnko , additionnée de 0,5fi d'Iydrolysat de 13ctolbuminc et de 2% do uérum de veau ).
Le milieu est inocule Pvuc une zuspension du virus de la rougeole et incub6 à une température d'environ 360C.
Apres 30 à 40 heures environ, plus précisément lorsqu'apparat l'effet oytopathop,,rr.(j caractéristique du virus 3e la rougeole, on écarte le liquide surnageant et on lave aoigneur3emlt la culture avec wie solution saline isotoniqui, par uxoemple avec de la solution do Hanks. Aprbo 61iminntion (un liquides de lavage, un introduit une nouvelle quantité de m11iEW nutritif composa par 0xmplo de solution de Hanko adàltiona4e de 2% d'hydrolysat de plazma bovin, ladite nouvelle qu'an tité étant nu maximum 4gule au quart de lu quantitd qui o's trouvait îhitinll-ment, Ainsi par exemple, pour une boîte 'dI'é Roux du type standard qui dern8hdt approxifhntivcment $0 m11i\ litres dé milieu dù croiananou, on utilisera Moine d µ'0 millilitres environ.
Etnnt donne notnmmont lu fait que l'c fond aes boites de Roux nr: pr4ventu finn une nurfaàe .9i>Ééiàf>eiseiàént tlùnci cette qutintit6 réduite est inaufrinnhtc p2t bl1ignor convenablement In couche monoccllulniru un jà/(?H3ittlèlf.1 ' &tationnair& ; on remédie à cette orrandu en diapoënnt leo récipient sur un dispositif d'agitation lente qui bfëe'àl'6 le récipient dann In mcaurE néC!(,sst1ire pour bseurer Une d'istribution e ti- 1-.z liquide sur 111 dOl1èhc riton'..1..f Ainsi pr oxtmplut dann lu aad de boites du RouX) Co dispositif peut comporter un hiouveihent dH bnlanft prévu= quf*nt dûs flux et reflux aucuc-98ifu du liquide oie là 0u'd monocéllulaire ;
dans le cas de bouteilleb è²lihdiq'Oà te dispositif peut commnnder un mouvehient c1o rointion des b6àE< il"
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les autour de l'axe générateur du cylindre,
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T)7n: chaque can nénnnioiniJ, 1<, mouvement doit d'une part, ô1;re nuff'U3nrntolmt lent et régulier pour éviter le décollage de la culture de la paroi et suffisamment rapide pour empêcher la 4<.Jvi<;ntifin ie le culture.
La propagation, df, la culture de virus s'effectue à la tfimp6r,,tturo habjtuûllerncnt utilisée pour ce genre d'op6rntion, cas vuro bzz.
Ln Vith890 fie propC8tion de la culture du virus n'est pas R0nsiblLmnt influunoû par ces conditions prtioulirs et lorsque l'effet cytop1thognB atteint de 90 à 100% 3r la culture, l'ngintion est nrrétée et le virun oint rrS^o7 té.
Le clrifioti0n 1ù 1 ; suspension obtenue s'effectue <:ns>Àit<# :lni.v:3r J.'\..I11(: ou 1'?:tre Ci(-,a tcchru-ques bien connues rit, DpCl11ptL3, p1r 0xtmplu par centrifugation ou par fi7.trr!:z,ci..
L0 mili clarifia ,:1;t inmtivé au formaldéhyde ou ii 1.inirl<, ,1 1>r, 1trG 'nt 1'jn"aivtion classique et le Vt1':ln obtenu ,;;t '(.ve.-t;'.:;l.1J:mu,t 1"i':1':.JitiQnné d'un agent ;t:::1"t''n' -pnr ':x-rr.pi6 du phosphate ou de l'hydroxyde d'nluin!.-)".Lt;3 .,i ,ât:.*.t: d'agent njacrbant souhaîtnbles sont v:i 3::î,G...
61n 1 le pr0a?d du la prés nte invention ne son pas limité a l'utilisation de tissu rénal de singe, cc; tiaau pr4scrjtù r1nt l'nvcntgG d'avoir été déjà p:1.rticulihcr:.-:nt tien 4tiÀji4 r.ot'H du point de vue des v ,ru ,' .j.l v en".i. cc;: et son utilisation procure de ce fait eu vnc:,n résultant lune sécurité exceptionnelle. C' est pourquoi, in 2'oc^xre::c., il est préféré, malgré un certain inconvénient
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économique possible vis-à-vis d'autres cultures tiss@aires moins bien connues.
L'invention est illustrée par l'exemple lion limitatif suivant : Préparation de la culture monocellulaire de reins de singe
Une paire de reins de singe est prélevée asep@iquement etla partie corticale découpée en petits morceaux. Apris trois lavages successifs à l'aide de solution de Hanko, les morgeaux sont mis en contact avec une solution tamponnée do trypsing (2,5 g par litre). Le mélange est maintenu sous agitation continue pendant une dizaine de minutes à 37 C. Le surnageant est alors décanté et remplacé par un volume égal de solution tamponnée fraiche de trypsine.
La trypsinisation est continuée sous agitation jusqu'à épuisement des tissus, les cellules en suspension dans le liquide surnageant étant périodiquement extraites par centrifugation. Le sédiment obtenu est remis en suspension dans un milieu à base de solution de Hanks et comprenant
5 g d'hydrolysat de lactalbumine et 20 ml de sérum de veau par litre de solution de Hanks. La masse cellulaire est à nouveau séparée, les opérations de mise en suspension et de séparation sont encore répétées deux foie, de façon à effec- tuer un bon lavage des cellules.
Après le dernier lavage, le sédiment est remis en suspension dans un milieu à base de solution de Hanks addi- tionnée de 0,5% d'hydrolysat de lactalbumine et de 2 de sérum de veau et l'on procède à un comptage de cellulcn. Le volume est ajusté de façon à obtc.nir environ 80 x 106 cellules
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par litre de milieu.
Dans des bouteilles du type "Jena pénicilline" de '.} litres de capacité, on introduit 250 ml de la suspension (càd environ 20 x 106 cellules).
Les bouteilles sont alors incubées horizontalement et sans agitation à la température de 37 C.
Trois jours plus tard, le milieu nutritif est rem- placé par un même volume de milieu frais de même composition et, après une durée d'incubation de 5 à 6 jours, on constatu la formation d'une couche monocellulaire complète.
Préparation du vaccin
Le surnageant des cultures monocellulaires est éliminé par aspiration et remplacé par 250 ml de milieu frais de même composition. On procède slorr à l'ensemencement des cultures titulaires par inoculation d'un millilitre d'une suspension du virus de la rougeole à chaque culture et les bouteilles sont incubées à nouveau à 36 C.
Lorsque, ,près 30 à 40 heures, on constate l'appa- rition de l'effet cytopathogène caractéristique du virus de la rougoolo, on élimine le surnageant par aspiration ot on offectue deux lavnca successifs des cultures à l'aide do 250 ml de solution de Hanks par lavage. Les solutions de lavage sont écartées.
On introduit ensuite 50 ml de milieu nutritif à base de solution de Hanks comprenant 0,22% de bicarbonate de sodium, 0,3% do trometa@ol et 2 d'hydrolysnt de plasma bovin.
Les bouteilles sont alors flxées sur les plateaux rectangulaires (1 x 60 cm) d'une machine qui entraîne chaque
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plateau dans un mouvumunt ce Lrx:.c;i; autour d'un :1XI.: passant par le milieu der, petits côtÛ:3 du r:ct3nle for::;l: par chnque plateau. L'amplitude du wa.m:r;ni.; t.:t d'environ 5 cr.rxt;irn,tp ' . à l'cxtré:ité dor: plltl:;:}I1X let In périodicité du mou'iLmcnt est de 10 ?l.'l.2lCG.'.'(:r'iT.i; environ par .'713Yaüté ..
1:'cnt.r,.>wlc ;::;t ùizpo;:é dnnrJ une chambre thirmJsiAtiqig ,. réglée à 4-;,Qr-; ùt # .4 (=T.D:t7r;i:C.!'at de l'affût t Cf L01:';t#lO(.r est: contrôlé rfr,e7.irzrcnü. L5r#qu,: l' \:[1'<.:1. cytoV.thogi:t1;; itteint 90 à 100% d'.J ,(.;tlJ.hl, 11glt'Jtion.(:t l'incubation :1, ¯ eorit a.x'rft=ï:.
Aprè:; i-rr rIr, .= 'Je coryel.t.i.r,n r.:1. déc(JI1C('l'Jtion , ucce.ivr;, le contenu ,J(::1 L(jlJtLllLL:1 ont r4cn'l<à ,:1 10 ::u...rezj,ion QOnr.)(1ntrf: rh v-ir=ac: 'l;) rEet.r,:illz=: par ,]6<;:mtt\ t.ion.
La :3;:;r,c;r:.ian ohtfinub ,:Jt lrifiCù pur ','untr1.1'\Jgl)tirt.
A cette fin, on u,tiliUl.: un c;ntrii'tz;r.uz CEPA h (cou) (ment continu, u drlhit =3'c:r.virort )00 mi/minut-c' (vitco:n' dé rottion 15.000 tour:/mjnut(1). Li VlrlJ.:1 oesit nattits inoctivû par .t.,,> ...
'\\'- adjonction de fo.C'mol È une cGn:r.ntrctafm t inoeL;> du 1./a407 ' .
,( Ic: vaccin min#ii Irr3prrf plm't i;trv; tr'f!t1:Jf(rÓ dtlns des aznmr.tl,:; r')rltr:ri-.:ni, par r.f=;rnplr, de:! doac.3 individut-llcc do un millilitre. " ..(;ll ' , Adsorption du vaccin L'=:3:3rrt;t,x.rx (, ':n'L U l' 11 du vaccin pULl t, !1 i4alix<ar currcrr:r: ;,)uj l, lor;!rj1.t'r)(j ui;iliiJ<; 1>nr c;xra,rplu du L'alun O()!lîJ1tO ' n0nt t, n J ; o r 1, <: ri t . , .)¯ , ' A l.iLrY=:;! rJI! vrjccin :7.rlxi.i'Ir; ot inMcLiv'i obtenue ': >- ' ' 4t7zrun=: 1¯1 (;(31; <14<;ili d,un htut, (JI) ajoubu un titre d'un') ': ,1., t1(; 1.1.1 t l.on "i 1,Ôji d'.' è Y" ;0 .Ivl (;; 1 U j3 .< 'IiCJ et, 00IW .ye,t tt, t;i.OÈltn%k < on !"1jl.wtc. le i>1.1 du !!t1lnn{1.: a 'l,6 à 1 '<ii'i<i (1(: fioudu cnuitiquu:. 6"' :
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L'ngitntion est ensuite maintenue pndnnt 4 jours à 4 C.
Pouvo ir :ntisbrni.u<< du vnçc in Pour ddtorminor a pouvoir nnti.n3.que du vaccin obtenu rnÜvl1nt la pr:3('nt.(; invuntioii, on emploie 80 poussins de 2 b 3 Domnin63 rp1rti" on quatre: groupes de vingt poussins.
Le8 dux prcmicrn groupas sont inoculés avec le vaccin prPQr6 Huivunt .1.' .c.mpi.c donné ci-avant, un fies deux groupen rf:c:cvant du vaccin non dilu4, l'autre recevant du vaocin dilue dann 14 rapport de 1 à 6.
Les deux nutr,s groupes sont inoculés avec du vaccin de rdf6rGnC0 prnpar d1n 1<;r; mRmos conditions mais sans a,ita+ion et avec 250 ml de. milicuiriu lieu des 50 z1 employés donn 1 ' <;xemple ci-dc3:us. Un de ces groupes reçoit du vaccin non dilué t, .Autr0 reçoit lu vnccin dilué 1/6.
La .joar. fidrfiinisr& chaque poussin est de 0,5 ml. ï'a;;rrzriorntro: J fmit p1r voie: Rous- cutanée.
Que.,torzre joura 'lP':':': 1" vaccination, on prélève 5 ml d "" i;U1g 1.r;r . ='z .^.irx .:t on r;4p <rc le sërun des échantillons. tifrr: >=x 'ni^:.: z,;: cet <i4terrniJa± sur le sérum :rv;.r"nt li .4'i;xù<; Je 1;lr.o-i;,,,Jtr"iliJtiJn.
Ltr: r4;1<ait;t;J ::r,r.. r";'!".:T.t:48 d'1:13 le t:1tleu 'J1.4'"!n +;:
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REPONSE ANTIGENIQUE ETABLIE SUR POULETS
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<tb> dilution <SEP> Concentrntion <SEP> de <SEP> virus <SEP> Nombre <SEP> Somme <SEP> des
<tb>
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u neutralisé en logio d'nnimnux réponses
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<tb>
<tb> vaccin <SEP> 4 <SEP> 2 <SEP> 1og10 <SEP> pour <SEP> 20
<tb> nnimnux
<tb> Vaccin <SEP> suivant <SEP> l'invention
<tb> ,Ion <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> 14 <SEP> 19 <SEP> 20 <SEP> 34
<tb> dilué
<tb> 1/6 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 4 <SEP> 7 <SEP> 18 <SEP> 18.9
<tb> Vaccin <SEP> de <SEP> référence
<tb> 'on <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 4 <SEP> 14 <SEP> 18 <SEP> 20
<tb> dilué
<tb>
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6 z z 19 8.4
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Par calcul au départ de ces résultats,
on trouve que le pouvoir antigénique du vaccin suivant l'invention est 5,17 fois plus élevé que celui du vaccin de référence utilisé, ce qui est statistiquement significatif pour P=0,05.
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"VACCIH AGAINST M ROUGEQLE AND PROCESS FOR ITS PREDATION"
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The present invention relates to a new process for the preparation of killed vaooin against measles and the vaccine obtained by this process.
Several means are already known to provide protection against measles. Among these means is the use of gamma globulins or vaccina prepared from a live attenuated measles virus or from a killed measles virus.
It is known that the immunity + 'conferred by the gamma-globulins is of relatively short duration and that the administration of the live vaccine provides lasting immunity but is very often accompanied by unpleasant side effects.
Killed vaccines can be prepared by culturing the virus in chick or, preferably, embryonic tissue. on primary mammalian tissue.
The administration of killed vaccine does not have these drawbacks, but good immunization with the aid of killed vaccine can only be carried out from a large antigenic mass in perspective and it is known that the culture of the measles virus in ordinary conditions do not achieve sufficiently high virus concentrations.
In order to obtain a sufficient concentration, it was thus heretofore necessary during the preparation of the killed vaccine to concentrate the suspension of killed virus by ionizing particles stimulating the antibody response and then to reconstitute the suspension in a volume of at least four. times more concentrated than the growth medium,
In other words, the preparation of killed measles vaccine in mammalian primary tissue culture has heretofore essentially comprised! the preparation
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a culture of primary mammalian tissue - preferably monkey kidney tissue,
the propagation of the measles virus in said culture to obtain a relatively dilute suspension of the virus in the growth medium, the clarification of the suspension obtained, its inactivation, its concentration by agglomeration of the particles stimulating the antibody response and the reconstitution suspension
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in a volume at least four times more centered than the growth medium.
The present invention makes it possible to avoid the concentration stage and the reconstitution stage. It also has the consequence of carrying out the operations of
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clarification and inactivation on Y-4 vol'uïa'es, touitio The process according to the invention coa; ea4 fe "nt..il .. ment the preparation of a culture of tis '$' V'1. pï'i'aae, 8, é mammal -preferably renal tissue of iar =: t'I #: start and initiation of the spread of measles virus in said culture in prdoende d Il '\! 1'è GfQ,' à'f: lt:
normal amount of growth medium, the resiplaoya'nt of this volume of growth medium by a volume of at least four times less and the production of dru v1Y "u, rà'è \ (tet together shaken with a movement such that it has at 4U.Pe wnx3 & i \ i.'à'tr.1 \. 'Continuous injection of the medium of croinsancê' èùr 1-e 'tàip1l% éT cells 1 the clarification of the auspenoioa of 'Vi1:' 1 ..]! "A'bm inactivation and, optionally, the addition of at least one adsorbent agent to the vaccine obtained.
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According to the present invention 1: the elimination of measles is carried out as follows: aU from uh "and single cell tissue covered with a Tnili'eu of O ' c'eàthë
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conventional (for example, Hnnko solution, supplemented with 0.5% 13ctolbuminc hydrolyzate and 2% calf uterum).
The medium is inoculated Pvuc a zuspension of the measles virus and incubated at a temperature of about 360C.
After approximately 30 to 40 hours, more precisely when the oytopathop ,, rr effect appears (characteristic of the measles virus, the supernatant liquid is discarded and the culture is washed aointeur3emlt with isotonic saline solution, for example with Hanks' solution. Aprbo 61iminntion (a washing liquid, a new quantity of nutrient m11iEW composed by 0xmplo of Hanko's solution added to 2% bovine plazma hydrolyzate, said new that an tity being a maximum of 4gule at quarter of the quantity that was found in the cellar. Thus, for example, for a 'dI'é Roux tin of the standard type which lasted approximately $ 0 m11i \ liters of medium of croiananou, we would use a monk of about µ0 milliliters.
Andnnt gives notnmmont read the fact that the bottom of the Roux boxes nr: pr4ventu finn a nurfaàe .9i> Ééiàf> eiseiàént tlùnci this reduced qutintity is infrainnhtc p2t bl1ignor suitably In monoccllelulniru layer &'; Htlnfair (? remedies this orrandu by sliding the container over a slow stirring device which bfëe'àl'6 the container in mcaurE néC! (, sst1ire to bseurer A distribution e ti- 1-.z liquid on 111 dOl1èhc riton ' ..1..f Thus pr oxtmplut dann lu aad of boxes of the RouX) Co device can include a hiouveihent dH bnlanft provided = quf * nt due to ebb and flow of the goose liquid there 0u'd monocellular;
in the case of bottleb è²lihdiq'Oà the device can control a movement c1o rointion of the b6àE <il "
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them around the generator axis of the cylinder,
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T) 7n: each can nénnnioiniJ, 1 <, movement must on the one hand, ô1; re nuff'U3nrntolmt slow and regular to prevent the culture taking off from the wall and fast enough to prevent the 4 <.Jvi <; ntifin ie culture.
The propagation, df, the culture of virus is carried out with the tfimp6r ,, tturo habjtuûllerncnt used for this kind of operation, case vuro bzz.
Ln Vith890 fie propC8tion of virus culture is not R0nsiblLmnt influenced by these prtioulir conditions and when the cytop1thognB effect reaches 90 to 100% 3r the culture, the ingestion is nrested and the viral anointed rrS ^ o7 t.
Clrifioti0n 1ù 1; suspension obtained is carried out <: ns> Àit <#: lni.v: 3r J. '\ .. I11 (: or 1'?: be Ci (-, a well-known tcchru-c rit, DpCl11ptL3, p1r 0xtmplu by centrifugation or by fi7.trr!: z, ci ..
L0 mili clarifia,: 1; t inmtivated with formaldehyde or ii 1.inirl <,, 1 1> r, 1trG 'nt 1'jn "aivtion classic and the Vt1': ln obtained, ;; t '(.ve.- t; '.:; l.1J: mu, t 1 "i': 1 ':. JitiQnné of an agent; t ::: 1" t''n' -pnr ': x-rr.pi6 phosphate or nluin hydroxide! .-) ". Lt; 3., i, ât:. *. t: of desirable njacrbant agent are v: i 3 :: î, G ...
61n 1 the method of the present invention is not limited to the use of monkey kidney tissue, cc; tiaau pr4scrjtù r1nt the invcntgG to have already been p: 1.rticulihcr: .-: nt tien 4tiÀji4 r.ot'H from the point of view of v, ru, '.jl v in ".i. cc ;: and its use therefore affords exceptional security. This is why, in 2'oc ^ xre :: c., it is preferred, despite a certain drawback.
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economic possible vis-à-vis other less well-known tissue cultures.
The invention is illustrated by the following limiting example: Preparation of the single-cell culture of monkey kidneys
A pair of monkey kidneys are removed aseptically and the cortical part cut into small pieces. After three successive washings with Hanko's solution, the morgeaux are brought into contact with a buffered tryping solution (2.5 g per liter). The mixture is kept under continuous stirring for ten minutes at 37 ° C. The supernatant is then decanted and replaced with an equal volume of fresh buffered solution of trypsin.
The trypsinization is continued with stirring until the tissues are exhausted, the cells in suspension in the supernatant liquid being periodically extracted by centrifugation. The sediment obtained is resuspended in a medium based on Hanks' solution and comprising
5 g of lactalbumin hydrolyzate and 20 ml of calf serum per liter of Hanks solution. The cell mass is separated again, the suspending and separating operations are repeated two times more, so as to wash the cells well.
After the last washing, the sediment is resuspended in a medium based on Hanks solution supplemented with 0.5% lactalbumin hydrolyzate and 2 calf serum and the cell count is carried out. . The volume is adjusted so as to obtain approximately 80 x 106 cells
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per liter of medium.
250 ml of the suspension (ie about 20 x 106 cells) are introduced into bottles of the "Jena penicillin" type with a capacity of '.
The bottles are then incubated horizontally and without shaking at a temperature of 37 C.
Three days later, the nutrient medium is replaced by the same volume of fresh medium of the same composition and, after an incubation period of 5 to 6 days, the formation of a complete single-cell layer is observed.
Preparing the vaccine
The supernatant of the single-cell cultures is removed by aspiration and replaced with 250 ml of fresh medium of the same composition. The titular cultures are inoculated by inoculating one milliliter of a suspension of the measles virus into each culture and the bottles are incubated again at 36 C.
When, after 30 to 40 hours, the appearance of the cytopathogenic effect characteristic of the rougoolo virus is observed, the supernatant is removed by aspiration and two successive lava cultures are offected with 250 ml of Hanks' solution by washing. The washing solutions are discarded.
Then introduced 50 ml of nutrient medium based on Hanks' solution comprising 0.22% sodium bicarbonate, 0.3% trometalol and 2 hydrolyzate of bovine plasma.
The bottles are then fixed on the rectangular trays (1 x 60 cm) of a machine which drives each
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plateau in a movement this Lrx: .c; i; around a: 1XI .: passing through the middle of the, small sides: 3 of the r: ct3nle for ::; l: by each plateau. The amplitude of the wa.m: r; ni .; t.:t of about 5 cr.rxt; irn, tp '. at the extremity: golden ity: plltl:;:} I1X let In periodicity of movement is 10? l.'l.2lCG. '.' (: r'iT.i; approximately par .'713Yaüté ..
1: 'cnt.r,.> Wlc; ::; t ùizpo;: é dnnrJ a thirmJsiAtiqig room,. set to 4 - ;, Qr-; ùt # .4 (= TD: t7r; i: C.! 'at the lookout t Cf L01:'; t # lO (.r is: controlled rfr, e7.irzrcnü. L5r # qu ,: l ' : [1 '<.: 1. CytoV.thogi: t1 ;; itteint 90 to 100% of.J, (.; tlJ.hl, 11glt'Jtion. (: T incubation: 1, ¯ eorit a. x'rft = ï :.
After :; i-rr rIr,. = 'I coryel.t.i.r, n r.:1. dec (JI1C ('l'Jtion, ucce.ivr ;, content, J (:: 1 L (jlJtLllLL: 1 have r4cn'l <to,: 1 10 :: u ... rezj, ion QOnr.) ( 1ntrf: rh v-ir = ac: 'l;) rEet.r,: illz =: by,] 6 <;: mtt \ t.ion.
La: 3;:; r, c; r: .ian ohtfinub,: Jt lrifiCù pur ',' untr1.1 '\ Jgl) tirt.
To this end, we u, tiliUl .: un c; ntrii'tz; r.uz CEPA h (neck) (continuous ment, u drlhit = 3'c: r.virort) 00 mi / minut-c '(vitco: n 'de rottion 15,000 turn: / mjnut (1). Li VlrlJ.:1 oesit nattits inoctivû by .t. ,,> ...
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EMI9.1
The ingestion is then maintained for 4 days at 4 C.
Pouvo ir: ntisbrni.u << du vnçc in For ddtorminor to be able to nnti.n3.que the vaccine obtained rnÜvl1nt the pr: 3 ('nt. (; Invuntioii, we use 80 chicks of 2 b 3 Domnin63 rep1rti "four: groups of twenty chicks.
Le8 dux prcmicrn groupas are inoculated with the vaccine prPQr6 Huivunt. 1. .c.mpi.c given above, one fies two groups in rf: c: cvant undiluted vaccine4, the other receiving vaocin diluted in 14 ratio of 1 to 6.
The two nutrients groups are inoculated with rdf6rGnC0 vaccine prepared by d1n 1 <; r; mRmos conditions but without a, ita + ion and with 250 ml of. milicuiri instead of the 50 employees given 1 '<; xample below: us. One of these groups receives undiluted t 1 vaccine. Another group receives 1/6 diluted vaccine.
The .joar. fidrfiinisr & each chick is 0.5 ml. ï'a ;; rrzriorntro: J fmit p1r route: Rous- cutaneous.
Que., Torzre joura 'lP': ':': 1 "vaccination, 5 ml of d" "i; U1g 1.r; r. = 'Z. ^. Irx.: T on r; 4p <rc le one of the samples. tifrr:> = x 'ni ^:.: z,;: ce <i4terrniJa ± on the serum: rv; .r "nt li .4'i; xù <; I 1; lr.o-i; ,,, Jtr "iliJtiJn.
Ltr: r4; 1 <ait; t; J :: r, r .. r "; '!" .: T.t: 48 of 1:13 the t: 1tleu' J1.4 '"! N + ;:
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ANTIGENIC RESPONSE ESTABLISHED ON CHICKENS
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<tb>
<tb> dilution <SEP> Concentrntion <SEP> of <SEP> virus <SEP> Number <SEP> Sum <SEP> of
<tb>
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u neutralized in logio d'nnimnux responses
EMI10.3
<tb>
<tb> vaccine <SEP> 4 <SEP> 2 <SEP> 1og10 <SEP> for <SEP> 20
<tb> nnimnux
<tb> Vaccine <SEP> according to <SEP> the invention
<tb>, Ion <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> 14 <SEP> 19 <SEP> 20 <SEP> 34
<tb> diluted
<tb> 1/6 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 4 <SEP> 7 <SEP> 18 <SEP> 18.9
<tb> <SEP> vaccine from <SEP> reference
<tb> 'on <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 4 <SEP> 14 <SEP> 18 <SEP> 20
<tb> diluted
<tb>
EMI10.4
6 z z 19 8.4
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By calculation from these results,
it is found that the antigenic power of the vaccine according to the invention is 5.17 times higher than that of the reference vaccine used, which is statistically significant for P = 0.05.