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" PROCEDE DE PREPARATION DE LA TETRACYCLINE PAR
EXTRACTION DES BOUILLONS DE CULTURS ".-
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Cette invention est relative à un procédé de préparation de tétracycline à partir de bouillons de culture*
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On Mit que la tétracycline ne peut 8tre précipitée que partiellement des bouillons de culture, après séparation du mycé- lium, étant donné que par simple alcI11iRA Uon du bouillon,une quantité considérable de l'antibiotique demeure l'état dissous dans les eettx de précipitation.
Pour pallier à cet inconvénient, on effectue l' a1 oalisl\t:ton en présence de sels d'ammonium quater- naires (tels que ceux connus sous la marque de fabrication "Arquadf par exemple) et d'ions métalliques, ce qui entraine la formation de sels complexe de tétracycline insolubles à l'eau, qui peuvent
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être extraits par des solvants tes procédés d'extraction de la 1'0 technique antérieure se basent sur ce principe.
Cependant, ce procèdes présentent encore des inconvénients et en particulier
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on retrouve les sel d'ammonium quatf)rnaire(Arquadt<)h l'état de traces plus ou moins importantes, dans le produit final.
Selon la présente invention, on effectue l'extraction de
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la tétracycline du bouillon de culture nsns utiliser de fft'!l1 tIJ d' ammonium quaternaire ou de solvant ,par acidification directe des bouillons de eu'! furet
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En !,artieuli"'!"..I!Ilon l'invention,la tetracyclino peut ttr4m récupérée quasi intégralement du bouillon de culture en opèrent de la manière suivante @ oncidifie le bouillon de
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culture jusque un plt de 1,8 à z9 par de l'acide sulfurique de façon A solubiliser l'antiMotique et à assurer son passage en phase lîqttide#ori6joitte le bouillon de farine fossile et
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l'on filtre.
On traite le bouillon filtré par de l'acide oxa-
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lique de façon A précipiter la plus grande partie du calcium présent et l'on filtre l'oxalate précipite* On ajoute de laaw aavn,aquar au filtrat jusque obtenir un pl de 6, et l'on ajoute ensuite 3,5 à 4 kg de carbonate de sodium par m3 de bouillon et, de l'ammoniaque 'Jusqu'à Un pH de 6,8 à 9#5. La tétracycline précipite quasi totalement nous forme d'un sel complexe de caleïum-atnmoniwn-magné3im et le précipité. a une pureté variait! entre 60 et 70 %. Le produit complexe précipité est recueilli par filtration et lavé sur un filtre par de l'eau déminéralisée.
Le tourteau de filtration est repris par une solution à 5 % d'acide oxalique, de façon à obtenir une solution contenant 40.000 à 50.000 y/cc environ de complexe de tétracyline. On remue le tout jusqu'à précipitation complète du calcium; on filtre l'oxalate de calcium précipité et l'on fait précipiter la base du filtrat clair par addition directe d'une solution d'hydroxyde de sodium.
La base séparée par filtration est successivement
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abchée et transformée en lea sel* désirés.
Il est également possible d'acidifier directement le bouillon de culture par de l'acide oxalique en une quantité telle qu'elle n'élimine pas complètement le calcium présent, puis d'aci- difier le bouillon par de l'acide sulfurique jusqu'à un pH de
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1,6 - 1,9 et de procéder ensuite comme décrit ci-dessus.
EXEMPLE 1 On acidifie 10 1. de bouillon de fermentation, titrant
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5200 y/cop par de l'acide sulfurique, jusqu'à un pH de 1,B , en agitant continuellement. On ajoute ensuite 300 g* de farine fossile, on agite encore pendant une demi-heure, on filtre et on traite le filtrat clair par 90 g.' d'acide oxalique. On agite pendant 2 heures et on filtre ensuite l'oxalate de calcium pré-
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cipité.
On amène le filtrat limpide à pH 6 par addition d'aatwniaque, puis on ajoute 35 %, de carbonate de sodium et on élève
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ensuite le pH à la valeur de 9,2. Après 15 minutes environ, on filtre la base précipitée sous forme d'un complexe. Les eau%* mères épuisées ont un titre de 140 y/cc. La base brute préci- pitée est reprise par deux parties environ de son poids de solu- tion d'acide oxalique à 5% (pH de la solution 1,9),on agite pen- dant 2 heures environ, on ajoute du charbon décolorant et on filtre l'oxalate de calcium précipite. On ajoute lentement au filtrat clair, titrant 43.000 y/cc, une solution d'hydrate de sodium à 10 % jusqu'à obtenir un pH de 3.
On amorce la précipitation par addition de tétracycline- baae et, l'on agite pendant trois heures au moins, de façon à assurer la précipitation de 70% du produit, on élève ensuite le pH à 4,5 et on filtre la base précipitée .Les eaux-mères épuisées ont un titre en tétracycline de 3200 y/cc. La base recueillie et sèchée a une pureté de 99 % et une puissance de
1020 y/mg.
EXEMPLE 2
5 litres de bouillon de culture, ayant un titre de
5340 y/cc, sont traités directement par 47 Se* d'acide oxalique, en agitant continuellement, et le pH est amené à 1,85 par de l'acide sulfurique 1:1. L'ensemble est agité pendant une demi- heure et filtré, le mycélium étant soumis à un lavage poussé. On aHoute ajoute au filtrat clair l'ammonique jusqu'à un pH de 6, puis 00
10 gr de carbonate de aodium et on l'amène 1 pH 9,2 par de l'am- moniaque. Après une demi-heure, on filtre le produit complexe précipité qui, recueilli et séché, pèse 35,2 gr et a un titre en tétracyline de 72 %.
Les eaux-mères épuisées titrent 210 y/cc. L'on suspend 20 gr de produit brut dans 300 ce. de solution d'acide oxalique à 5 % (pH 1,8). Après chauffage à 30-35 C, l'on remue pendant deux heures pour assurer la précipitation de tout le calcium sous forme d'oxalate. L'on ajoute 2 ge de charbon et l'on filtre.
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Le filtrat clair, titrant 42.900 y/cc, est amené pH 2,9 par addition lente d'hydroxyde de sodium, et agité pen- dant 2 heures de façon à assurer la précipitation quasi totale de la base et est ensuite amené à pH 4,5, Après une demi-heure, on filtre la base, qui, recueillie et aèchée, pèse 13,2 gr et a une puissance de 990 y/mg.
REVENDICATIONS.
1.- Procédé de préparation de tétracycline par extrac- tion de bouillons de culture, caractérisé en ce que l'on effectue cette extraction sans utiliser des solvants et des cols d'ammo- nium quaternaires, par acidification directe des bouillons de culture.
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"PROCESS FOR PREPARING TETRACYCLINE BY
EXTRACTION OF BROTHS FROM CULTURES ".-
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This invention relates to a process for preparing tetracycline from culture broths *
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It has been said that tetracycline can only be partially precipitated from the culture broths after separation of the mycelium, since by simple alcification of the broth a considerable amount of the antibiotic remains in the dissolved state in the precipitating eets. .
To overcome this drawback, the aloalisl \ t: ton is carried out in the presence of quaternary ammonium salts (such as those known under the trade name "Arquadf for example) and metal ions, which entails the formation of water-insoluble tetracycline complex salts, which can
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to be extracted by solvents your prior art extraction methods are based on this principle.
However, this process still has drawbacks and in particular
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the quaternary ammonium salts (Arquadt <) are found in more or less significant traces in the final product.
According to the present invention, the extraction of
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tetracycline from culture broth nsns use of quaternary ammonium or solvent, by direct acidification of eu broths! ferret
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In!, Artieuli "'!" .. On the invention, the tetracyclino can be recovered almost entirely from the culture broth by operating in the following manner @ oncidifies the broth of
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culture up to a level of 1.8 to z9 with sulfuric acid so as to dissolve the antiMotic and ensure its passage into the liquid phase # ori6joitte the fossil flour broth and
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we filter.
The filtered broth is treated with oxa-acid.
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lic so as to precipitate most of the calcium present and the precipitated oxalate is filtered * Laaw aavn, aquar is added to the filtrate until a pl of 6 is obtained, and then 3.5 to 4 kg are added of sodium carbonate per m3 of broth and, ammonia 'Up to a pH of 6.8 to 9 # 5. Tetracycline precipitates almost completely forms a complex salt of calium-atnmoniwn-magnesium and the precipitate. has a varying purity! between 60 and 70%. The precipitated complex product is collected by filtration and washed on a filter with demineralized water.
The filter cake is taken up in a 5% solution of oxalic acid, so as to obtain a solution containing approximately 40,000 to 50,000 y / cc of tetracyline complex. Stir everything until complete precipitation of calcium; the precipitated calcium oxalate is filtered off and the base is precipitated from the clear filtrate by the direct addition of sodium hydroxide solution.
The base separated by filtration is successively
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abeached and transformed into the desired salt *.
It is also possible to directly acidify the culture broth with oxalic acid in an amount such that it does not completely remove the calcium present, and then to acidify the broth with sulfuric acid until at a pH of
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1.6 - 1.9 and then proceed as described above.
EXAMPLE 1 10 liters of fermentation broth are acidified, titrating
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5200 y / cop with sulfuric acid, to a pH of 1.0, with continuous stirring. Then 300 g * of fossil flour are added, stirred for a further half an hour, filtered and the clear filtrate treated with 90 g. oxalic acid. Stirred for 2 hours and then filtered off the pre-calcium oxalate.
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hurried.
The clear filtrate is brought to pH 6 by the addition of aatomic, then 35% of sodium carbonate is added and the mixture is raised.
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then the pH to the value of 9.2. After about 15 minutes, the precipitated base is filtered off in the form of a complex. The depleted mother water% * has a titer of 140 y / cc. The precipitated crude base is taken up in approximately two parts of its weight of 5% oxalic acid solution (pH of the solution 1.9), the mixture is stirred for approximately 2 hours, decolorizing charcoal is added. and filtering the precipitated calcium oxalate. A 10% sodium hydrate solution is slowly added to the clear filtrate, assaying 43,000 y / cc, until a pH of 3 is obtained.
The precipitation is initiated by adding tetracycline-baae and the mixture is stirred for at least three hours so as to ensure the precipitation of 70% of the product, the pH is then raised to 4.5 and the precipitated base is filtered off. The depleted mother liquors have a tetracycline titer of 3200 y / cc. The base collected and dried has a purity of 99% and a potency of
1020 y / mg.
EXAMPLE 2
5 liters of culture broth, having a titre of
5340 y / cc, are treated directly with 47 Se * of oxalic acid, with continuous stirring, and the pH is brought to 1.85 with sulfuric acid 1: 1. The whole is stirred for half an hour and filtered, the mycelium being subjected to thorough washing. Ammonium is added to the clear filtrate to a pH of 6, then 00
10 g of aodium carbonate and brought to pH 9.2 with ammonia. After half an hour, the precipitated complex product is filtered which, collected and dried, weighs 35.2 g and has a tetracyline titer of 72%.
The depleted mother liquors give 210 y / cc. 20 gr of crude product are suspended in 300 cc. of 5% oxalic acid solution (pH 1.8). After heating to 30-35 C, stir for two hours to ensure precipitation of all the calcium in the form of oxalate. We add 2 ge of carbon and filter.
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The clear filtrate, titrating 42,900 y / cc, is brought to pH 2.9 by the slow addition of sodium hydroxide, and stirred for 2 hours so as to ensure almost total precipitation of the base and is then brought to pH 4. 5. After half an hour, the base is filtered, which, collected and dried, weighs 13.2 g and has a power of 990 y / mg.
CLAIMS.
1.- Process for preparing tetracycline by extracting culture broths, characterized in that this extraction is carried out without using solvents and quaternary ammonium necks, by direct acidification of the culture broths.