BE1029423B1 - Proanthocyanidinen (gecondenseerde tanninen) als voedingsstof voor ongewervelden - Google Patents

Abstract

Er zijn methoden voor het voeren van ongewervelde dieren, bestaande uit: ▪ het verstrekken van een niet-pollen samenstelling die een nutritioneel werkzame hoeveelheid proanthocyanidinen bevat; en ▪ toediening van de niet-pollen samenstelling aan ongewervelde dieren.

Description

PROANTHOCYANIDINEN (GECONDENSEERDE TANNINEN) ALS VOEDINGSSTOF VOOR ONGEWERVELDEN

ACHTERGROND Bijen zijn in de modeme landbouw zeer belangrijk voor de bestuiving van gewassen. Bestuivers worden de laatste tijd bedreigd door blootstelling aan bestrijdingsmiddelen, toegenomen prevalentie van ziekteverwekkers en parasieten, en veranderingen in landschapsbeheer die de overvloed aan natuurlijk bloemstuifmeel verminderen. Imkers voeden honingbijenkolonies van oudsher met een voedselbron die stuifmeel of pollen bevat dat door bijen in natuurlijke of agrarische ecosystemen is verzameld. Omdat stuifmeel slechts beperkt beschikbaar is en op beperkte schaal wordt verzameld, is het verzamelen van stuifmeel duur, is het moeilijk stuifmeel vers te houden en kan stuifmeel dat in natuurlijke of agrarische ecosystemen wordt verzameld, drager zijn van plagen, ziekten en bestrijdingsmiddelen. Daarom bevatten in de handel verkrijgbare voeders meestal geen stuifmeel. Deze stufmeelvervangende samenstellingen zijn reeds beschreven door de huidige uitvinders. US2019/0090507 aan Apix Biosciences benadrukt het belang van het evenwicht tussen macronutriënten (eiwitten, koolhydraten, vetten), vitaminen en mineralen, en enkele specifieke verschillende fenolverbindingen. In US2019/0090507 worden proanthocyanidinen echter niet als bijenvoedingsstof vermeld. Proanthocyanidinen (PA's) zijn oligomere of polymere polyfenolische verbindingen die in de volksmond gecondenseerde tannines, catechine tannines (CT's), of oligomere proanthocyanidinen (OPA's) worden genoemd . Ze worden gevormd door epimerisatie van catechinen en epicatechinen (Rauf et al. 2019). PA's worden geproduceerd in verschillende plantenweefsels, waaronder bladeren, vruchten en zaden, om de plant te beschermen tegen predatie; ze hebben daarom vaak een samentrekkende smaak en zijn giftig voor insecten (Dixon et al. 2005). In planten vormen PA's na lignine de meest voorkomende natuurlijke fenolverbindingen (Li en Deinzer 2009). PA's zijn gevarieerde en complexe moleculen, die zich richten op verschillende biologische processen en een breed scala aan toxicologische activiteiten vertonen (Cos et al. 2004; Muema et al. 2017). Sommige van deze processen omvatten het vermogen om vrije radicalen te scharrelen, metaalionen te cheleren, pro-oxidatieve enzymen en lipide peroxidatie te remmen. Deze vermogens zijn in de gezondheidszorg toegeschreven aan het verlichten van oxidatieve stress gerelateerde complicaties bij kanker, hart- en vaatziekten, diabetes, cataract, veroudering, obesitas en neurodegeneratieve ziekten (de la Iglesia et al. 2010; Muema et al. 2017). Van PA's is ook aangetoond dat ze de hechting van bacteriën en virussen aan gastheercellen remmen, waardoor de daaropvolgende proliferatie wordt geblokkeerd en ze antimicrobiële effecten vertonen (Mayer et al. 2008; de la Iglesia et al. 2010; Daglia 2012). Interessant is dat, in tegenstelling tot de gezondheidsbevorderende effecten bij de mens, uit steeds meer gegevens blijkt dat PA's werken tegen een groot aantal taxa en insecten met uiteenlopende voedingsecologieën, die bladeren, hout, zaden, floëem en andere plantenweefsels consumeren. Zelfs PAs-rijke extracten van bepaalde planten, waarvan in verschillende studies is aangetoond dat ze gezondheidsbevorderende effecten hebben bij mensen en knaagdieren, bleken giftig te zijn voor Drosophila (Junior et al. 2016). De inname van PA's ontlokt schadelijke effecten aan herbivore insecten door hun middendamepitheel aan te tasten na afbraak in vrije radicalen (Barbehenn en Constabel 2011). C. sinensis bladextracten hebben potentie voor het onderdrukken van muggenvectorpopulaties door interferentie van larvale overleving en ontwikkeling (Muema et al. 2016). Van catechine is bekend dat het insectendodende eigenschappen bezit (Elumalai et al. 2016). Het is giftig voor larven van de rode palmsnuitkever, Rhynchophorus ferrugineus, in concentraties zo laag als 0,03 mg/g (0,003%) (Monroy et al. 2021). Catechine tannines (een andere naam voor PA's) in plantenextract (Abarema cochliocarpos schors) zijn geïmpliceerd met afschrikkende en anti-voedingseffecten op de maïssnuitkever, Sitophilus zeamais, en met insectendodende effecten op muggenlarven en op volwassen termieten (Silva et al. 2020). Sorghum is rijk aan flavonoïden, waaronder de 3-deoxyanthocyanidinen, die afschrikkend en giftig zijn voor bladluizen die zich met het floëem voeden . Fenolverbindingen in nectar worden er algemeen van verdacht afstotend te zijn voor bijen (Hagler en Buchmann 1993; Adler 2000), en zeffs in verband te worden gebracht met koloniesterfte (Liu en Fu 2004).

KORTE BESCHRIJVING VAN DE UITVINDING De huidige uitvinders hebben verrassend vastgesteld dat proanthocyanidinen die via een stuifmeelvrij dieet worden toegediend, de broedproductie en overleving van werkbijen verhogen in vergelijking met een bijenvrij dieet zonder toevoeging van proanthocyanidinen. Dit is het eerste bewijs dat een bijenvoeding met proanthocyanidinen voordelig is. Wij hebben dus een verbetering uitgevonden ten opzichte van de huidige kunst om de voeding van bijen te verrijken met een ingrediënt uit een niet-pollenbron, wat de gezondheid, de voortplanting en de overleving van bijenkolonies verbetert.

In de handel verkrijgbare bijenvoedersamenstellingen bevatten echter geen proanthocyanidinen in biologisch significante concentraties. Bijgevolg is met deze uitvinding voor het eerst aangetoond dat de toevoeging van proanthocyanidinen aan een bijenvoer zonder pollen voordelen oplevert.

Bijgevolg bestaat een eerste aspect van de uitvinding uit een methode voor het voederen van ongewervelde dieren, bestaande uit: — het verstrekken van een niet-pollen samenstelling die een nutritioneel werkzame hoeveelheid proanthocyanidinen bevat; en — toediening van de niet-pollen samenstelling aan ongewervelde dieren. In een ander aspect is de samenstelling een volledige voeding van ongewervelde dieren, een deel van een voeding van ongewervelde dieren of een voedingssupplement. In een ander aspect wordt de samenstelling toegediend aan ongewervelde dieren van de geslachten Apis of Bombus, in het bijzonder honingbijen of hommels.

In een ander aspect wordt de samenstelling toegediend = in vaste vorm, zoals een pasteitje, of in vloeibare vorm, zoals een oplossing of een verstuiver; = binnen of buiten de korf.

Een ander aspect is dat de bron van de proanthocyanidinen bestaat uit een niet-pollenweefsel van een of meer plantensoorten, gekozen uit de groep bestaande uit bladeren, stengels, wortels, knollen, schors, bloemen, zaden en vruchten en combinaties daarvan.

Een ander aspect is dat de bron van de proanthocyanidinen een extract, een olie of een raffinage is van een niet-pollenweefsel van een of meer plantensoorten of een combinatie daavan.

Een ander aspect is dat de bron van de proanthocyanidinen bestaat uit een niet-pollenweefsel van één of meer plantensoorten, gekozen uit de groep bestaande uit Solanaceae, Poaceae, Vitaceae, Lauraceae, Peulvruchten, Ericaceae, Rosaceae, Anacardiaceae, Ranunculaceae, Fabaceae, Corylaceae, Cannabaceae, Chenopodiaceae, Fagaceae, Salicaceae.

In een ander aspect is de bron van de proanthocyanidinen een niet-pollenbron die wordt gekozen uit de groep bestaande uit: =» een zee- of zoetwateralg, in het bijzonder een extract, een olie of een raffinage van Eisenia bicyclis; 2 een mariene diatomeeënsoort, met name een extract, een olie of een raffinaat van Phaeodactylum tricornutum; en =» een schimmel, met name een extract, een olie of een raffinage van Saccharomyces cerevisiae, of Yarrowia lipolytica.

In een ander aspect worden de proanthocyanidinen chemisch of enzymatisch gesynthetiseerd of verkregen door genetisch gemodificeerde gastheerorganismen zoals schimmels, bacteriën of algen.

In een ander aspect wordt de bron van de proanthocyanidinen gekozen uit de groep bestaande uit algen, planten, schimmels, algen, diatomeeën en combinaties daarvan en is de bron van de proanthocyanidinen een niet-pollenweefsel.

Tabel 1 geeft enkele voorbeelden van bronnen.

Enkele van deze bronnen zijn de zemelen van rode rijst, van sumak of zwarte sorghum, of van om het even welk graan, appelbessen, bosbessen en andere bessen, appels, druiven, druivenpitten, met inbegrip van extracten daarvan, en diverse cultivars of variëteiten van om het even welk van deze.

HOP EN HENNEP.

Een ander aspect is dat de proanthocyanidinen aan een eusociale bijenkolonie worden verstrekt uit een synthetische bron.

In een ander aspect worden de proanthocyanidinen geleverd als onderdeel van een stuifmeelvervangende samenstelling, waarbij de stuifmeelvervangende samenstelling bestaat uit: = eiwitten in een hoeveelheid van 10 tot 50 gew%, bij voorkeur van 20 tot 40 gew%, =» vetzuren in een hoeveelheid van 1 w% tot 20 w%, bij voorkeur van 5 w% tot 15 w%, = koolhydraten in een hoeveelheid van 30 tot 90 gew%, bij voorkeur van 5 tot 15 gew%, =" eventueel vitaminen, en

=" eventueel mineralen, waarbij de totale hoeveelheid bestanddelen en eventueel verdere bestanddelen opgeteld 100 w% bedraagt en waarbij het w% betrekking heeft op het totale drooggewicht van de samenstelling. 5 Een ander aspect is dat de samenstelling proanthocyanidinen bevat in een hoeveelheid =» van 100-50.000 microgram/g, bij voorkeur van 200 microgram/g tot 30.000 microgram/g en nog meer bij voorkeur van 300 microgram/g tot 15.000 microgram/g van het drooggewicht van de stuifmeelsubstitutensamenstelling, of = van 0,01 w% tot 5 w%, bij voorkeur van 0,02 w% tot 3 w%, en nog meer bij voorkeur van 0,03 w% tot 1,5 w%. Een ander aspect is dat de samenstelling in wezen vrij is van pollen.

Tabel 1. Voorbeelden van mogelijke bronnen van proanthocyanidinen.

Voedselbron Totaal Vochtgehalte | Totaal Totaal | Fenolzuur | Referentie PA's (%) PA's PA's (mg (mg/100g (mg/100g | (% GAE/g) nat) droge droog) stof) Zwarte sorghum 23.4 Burdette et zemelen al. 2010 Bruinwier (Eisenia 193 (Machu et bicyclis) al. 2015) Sumak sorghum | 3,965.4 9.2 4,367.2 44 62.5 (Gu et al. zemelen 2004), (Burdette et al. 2010 Druivenpitten (droog) 3523.3 3,523.3 3.5 Gu et al. 2004 Druivenpitextract 76-99 (Kuhnert et (droog) al. 2015) Kaneel (gemalen) 8108.2 9.5 8,959.3 Gu et al. 2004 Pinto bonen (rauw) 796.3 11 894.7 Gu et al. 2004

Bosbessen 267 - 85 — 85.5 1,841.4- 1.8- (Gu et al

331.9 2,212.7 22 2004; Hellstrom et al. 2009 Groene druiven 30.5- 80.7- 85.2 206.1 - 0.2- (Gu et al.

81.5 422.3 0.4 2004; Hellstrom et al. 2009) Bramen 27 86.9 206.1 0.2 Gu et al. 2004 Granny Smith appels | 72-141 85.5 - 85.7 496.6 - 0.5- (Gu et al.

986.0 1.0 2004; Hellstrom et al. 2009) Red Delicious appels 154.0 86.3 1,124.1 1.1 (Hellstrom et al. 2009) Chokeberry 1,730.0 79.7 8,522.2 8.5 (Hellstrom et al. 2009) Rode rijstzemelen 2,470.0 25 (Gunaratne et al. 2013) Hop 0.5-5.0 (Neve 1991; Li en Deinzer 2006) Hennepzaadkoek 262.0 0.3 (Pap et al. 2020) Populier stammen 380—470 | 04— (Ullah et al.

0.5 2019) Extract van 36,000 36 (Kim et al. dennenboomnaalden 2010) Extract van 48,900 48.9 (Ku et al. pijnboomschors 2007)

KORTE BESCHRIJVING VAN DE TEKENINGEN Figuur 1 toont de keuze van cohorten bijen van voeding met of zonder proanthocyanidinen. Figuur 2 toont de overleving van cohorten bijen die zich voedden met diëten die specifieke concentraties proanthocyanidinen bevatten, hetzij tijdens de larvale ontwikkeling (A), hetzij als pasgeboren volwassen bijen (B). Figuur 3 toont de invloed van proanthocyanidinen in bijendieet op het aantal geproduceerde dopbroedsels.

GEDETAILLEERDE BESCHRIJVING VAN DE UITVINDING Belichamingen van de huidige uitvindingen worden hiema beschreven.

Proanthocyanidinen Voorbeelden van de structuren van de flavan-3-ol bouwstenen van proanthocyanidinen (1-2) en van eenvoudige proanthocyanidinen van het B-type (3-6) (1): (|) {ts Be za & a pu.

N 3 8 ç $ Sr i à 3 A ; Ar EN 4 5 3 a DA RIFREH, hnsisireiechin am ‚£ Ad, RISRÈSHE, is}afzelecin Tex ce} >> "8 RISQ, Rie, &Henicatschin TX X 7 RtaQH, BZS, {+ -cuischin © je sro RISRESOH, Cbepigalanatenhin °F Ds RisRI=ON, {r-galiceatenhin SM is) IR A in en 0088 oe SB Pen sa a Sr LI.

SOV 8 U AR 08 NS au pn SH mj a; #12 07 #5 OF re Fee A0 x Se gt Ta “Qu Se 8 8 OE {5 me ho SL “os x tes x “ou èn $ N ès {33 Frocyariin 81 {43 Frecyanidn 82 {2} Frocyanidin BE {6} Procyaridin 54 (IN). _ Proanthocyanidinen als voedingsstof voor insecten De huidige uitvinders hebben verrassend ontdekt dat proanthocyanidinen een heilzame voedingsstof voor bijen zijn.

Niet-pollen samenstelling De eigenschap "niet-stuifmeelhoudend" betekent in wezen vrij van stuifmeel.

Er kunnen echter kleine hoeveelheden stuifmeel aanwezig zijn in de samenstellingen van de huidige uitvindingen.

In één belichaming is de hoeveelheid stuifmeel 15 w% of minder, bij voorkeur 10 w% of minder, nog liever 5 w% of minder en nog liever 1 w% of minder en nog liever 0,1 w% of minder in verhouding tot het drooggewicht van de samenstelling.

Niet-pollen bronnen van proanthocyanidinen Proanthocyanidinen kunnen worden verkregen uit andere bronnen dan pollen, bijvoorbeeld door = synthetische chemische synthese; of

= elke niet-pollen plantaardige bron.

Voorbeelden van plantaardige bronnen van proanthocyanidinen die geen pollen zijn, zijn planten, algen, schimmels of bacteriën die proanthocyanidinen bevatten.

In één belichaming bevatten de niet-pollen bronnen van nature proanthocyanidinen.

In een andere belichaming zijn de niet-pollen bronnen van proanthocyanidinen metabolisch gemanipuleerd om proanthocyanidinen te produceren.

Ongewervelden Ongewervelde dieren omvatten = geleedpotigen, zoals insecten, spinachtigen, schaaldieren en myriapoden, = weekdieren, zoals chitons, slakken, tweekleppigen, inktvissen en octopussen, = eencelligen, zoals regenwormen en bloedzuigers; en = cnidarianen, zoals hydra's, kwallen, zeeanemonen en koralen.

Ongewervelde dieren die bij voorkeur worden gekweekt of gekweekt voor menselijke of dierlijke voeding, zoals bijen, hommels, regenwormen, meelwormen, gamalen, rivierkreeften, krekels en vliegenlarven, hebben de voorkeur.

Ongewervelde dieren van de familie van de Apidae, die worden gebruikt als bestuivers voor land- en tuinbouwgewassen, hebben de voorkeur, zoals = bijen van het geslacht Apis, in het bijzonder Apis mellifera of = hommels van het geslacht Bombus en in het bijzonder Bombus terrestris = angelloze honingbijen van de stam Meliponini Dosering en concentratie De proanthocyanidinen worden toegediend in een hoeveelheid die uit voedingsoogpunt effectief is voor bijen.

In één belichaming betekent voedingskundig effectief een concentratie proanthocyanidinen in een hoeveelheid: = van 500-50.000 microgram/g, bij voorkeur van 200 microgram/g tot 30.000 microgram/g en nog meer bij voorkeur van 300 microgram/g tot 15.000 microgram/g van het drooggewicht van de stuifmeelsubstitutensamenstelling, of

= van 0,05 w% tot 5 w%, bij voorkeur van 0,02 w% tot 3 w%, en nog meer bij voorkeur van 0,03 w% tot 1,5 w%. In één belichaming betekent voedingskundig doeltreffend een concentratie proanthocyanidinen van 0,01-5% van de voeding, bij voorkeur 0,01-1% als percentage van het totale gewicht van de stuifmeelvervangende samenstelling.

In een andere belichaming bedraagt de concentratie van proanthocyanidinen of mengsels daarvan 0,03-0,5% voor honingbijen of 0,03-0,8% voor hommels als percentage van het totale gewicht van de stuifmeelvervangende samenstelling.

In een andere belichaming bedraagt de dosering proanthocyanidinen die een imker voor een kolonie honingbijen zou gebruiken, ongeveer 0,1-0,5% van het totale gewicht van het rantsoen.

Als elke voedsterbij 120 mg weegt en 10-15 mg voedsel per dag consumeert, en als een kolonie bijen voor ongeveer 50% uit voedsterbijen of jongvolwassen werkbijen bestaat, zou dit gewoonlijk neerkomen op 5-25 mg proanthocyanidinen per kolonie per dag.

In een andere belichaming zou voor een hommelkolonie van 300 bijen de voeding proanthocyanidinen moeten bevatten in hoeveelheden van 0,3-0,8% van het totale gewicht van de voeding.

Als elke hommel ongeveer 200 mg weegt en 20 mg voedsel per dag consumeert, en als alle bijen het voedsel consumeren, dan zou de effectieve dosis proanthocyanidinen gewoonlijk 2-5 mg per dag per kolonie bedragen.

Voorbeeld 1 - Voorkeur essay: Bijen geven de voorkeur aan specifieke concentraties proanthocyanidinen in voedsel.

Pas uitgekomen volwassen werkhommels (Apis mellifera) en volwassen werkhommels (Bombus terrestris) werden getest in een tweekeuzetest waarbij de bijen toegang hadden tot twee diëten en ad /ibitum toegang hadden tot water.

Het ene dieet bevatte de proanthocyanidinen en het andere bevatte geen proanthocyanidinen.

Pas uitgekomen bijen werden uit het broedraam gehaald en cohorten van 30 bijen per replicaat werden ondergebracht in plastic opfokkooien.

In alle experimenten werden 10 cohorten van —30 bijen gebruikt voor elke behandelingsgroep.

In alle diëten werd het koolhydraatgehalte op 60% gehouden met behulp van sacharose en het vetgehalte op 8%. In één replicaat bevatte het dieet geen eiwit, in een ander replicaat was het dieet verrijkt met eiwit.

De consumptie van elk dieet werd om de 24 uur gemeten gedurende 4 dagen.

De voorkeursindex werd berekend als (geconsumeerde hoeveelheid van de behandeling - geconsumeerde hoeveelheid van de controle)/(totale geconsumeerde hoeveelheid voedsel).

In voorbeeld 1 werd aan cohorten bijen de keuze gegeven tussen een dieet met of zonder proanthocyanidinen.

A.

Eiwitvrij dieet: de bijen prefereerden voedsel dat proanthocyanidinen bevatte in een concentratie van 0,01% -0,05%. B.

Met eiwit verrijkt dieet: de bijen prefereerden voedsel dat proanthocyanidinen bevatte in een concentratie van 0,01% of hoger (maar niet bij 0,05% of 0,1% na 24 uur). Voorbeeld 2 - Overleving: bijen leven langer van voedsel dat proanthocyanidinen bevat Er werden twee verschillende hemalingen uitgevoerd.

In de eerste werden broedramen genomen uit kolonies die gevoed waren met een dieet dat 0,1% of 1% proanthocyanidinen bevatte.

Pas uitgekomen bijen werden van het broedframe verwijderd en cohorten van 30 bijen per replicaat werden gehuisvest in plastic opfokkooien, met ad libitum toegang tot water en sucroseoplossing.

In het tweede experiment werden pas uitgekomen bijen verwijderd uit de broedramen van onbehandelde kolonies en werden cohorten van 30 bijen per experiment gehuisvest in plastic opfokkooien, met een eiwitverrijkt dieet dat 0, 0,1% of 1% proanthocyanidinen bevatte en ad /ibitum toegang tot water.

In alle experimenten werden 10 cohorten van -30 bijen gebruikt voor elke behandelingsgroep.

In alle diëten werd het koolhydraatgehalte op 60% gehouden met behulp van sucrose en het vetgehalte op 8%. De consumptie van elk dieet werd in de loop van het experiment elke dag gemeten.

Het aantal levende bijen in de kast werd gedurende 30 dagen elke dag geteld.

Voorbeeld 2 toont de overleving van cohorten bijen die zich voedden met diëten die specifieke concentraties proanthocyanidinen bevatten (0%, 0,1% en 1% gewicht van het dieet), zoals weergegeven in figuur 2. A: De bijen werden alleen tijdens het larvenstadium met de diëten grootgebracht.

B: De bijen werden vanaf de eerste dag als pasgeboren volwassene met de voeders grootgebracht.

Voorbeeld 3 - Broedproductie: Honingbijen produceren meer broedsel met proanthocyanidinen.

Honingbijen: Volledig functionele geïsoleerde piepschuim APIDEA-nestkasten, bestaande uit 5 miniframes bevolkt met volwassen werksters en 1 gedekte legkoningin, werden bevolkt met 300-400 ml jonge volwassen werksters (- N<1.000 bijen van gemengde leeftijden). De kolonie bevond zich in een gesloten serre met ventilatie, zodat de honingbijen niet op nectar of stuifmeel konden foerageren.

Elke behandeling werd getest met 3-6 kolonies; elke kolonie werd gevoederd met een pasteitje van 60-100 g (vast voer) op de bovenste voederbak,

voorzien van een gaasbodem. Het voer werd op de eerste dag gegeven en nogmaals op dag 6; de geconsumeerde hoeveelheid werd gemeten op dag 6 en dag 15. Als op dag 6 geen larven of eieren/koninginnen worden waargenomen, wordt het experiment stopgezet. Het aantal afgedekte broedcellen werd geteld op dag 15. Suikersiroop (34%) en water werden verstrekt in voederbakken in de tent om te voorkomen dat ze verhongeren aan koolhydraten en om de foerageeractiviteit te stimuleren. In voorbeeld 3 werden de bijen gevoederd met een dieet dat 10-18% eiwit, 6% vet, 1% vitaminen/mineralen en > 75% koolhydraten bevatte. In één duplo werden de kolonies gevoederd met 0% of 1% toegevoegde proanthocyanidinen. In een ander replicaat werden de kolonies gevoederd met 0%, 0,1% of 0,5% toegevoegde proanthocyanidinen. In beide gevallen verhoogde de toevoeging van proanthocyanidinen zowel het verbruik als het aantal afgedekte broedsels, met een piek die varieerde van 0,1% tot 1%, in de twee replicaten, respectievelijk, zoals te zien is in figuur 3.

Vertaling van Engelse uitdrukkingen in de tekeningen Pronanthocyanidins concentration in diet | Concentratie van pronanthocyanidinen in de voeding Cumulative survival Cumulatieve overleving Ke consumption (g/15 days) verbruik (g/15 dagen) capped brood afgetopt broedsel

Claims (15)

CONCLUSIES

1. Een methode voor het voederen van ongewervelde dieren, bestaande uit: =» het verstrekken van een niet-pollen samenstelling die een nutritioneel werkzame hoeveelheid proanthocyanidinen bevat; en = toediening van de niet-pollen samenstelling aan ongewervelde dieren.

2. De methode van stelling 1, waarbij de samenstelling een volledig dieet van ongewervelde dieren, een deel van een dieet van ongewervelde dieren of een voedingssupplement is.

3. De methode van een van de voorgaande beweringen, waarbij de samenstelling wordt toegediend aan ongewervelde dieren van de familie der Apidae, in het bijzonder honingbijen (Apini), hommels (Bombini), of angelloze honingbijen (Meliponini).

4. De methode van een van de voorgaande beweringen, waarbij de samenstelling wordt toegediend = in vaste vorm, zoals een pasteitje, of in vloeibare vorm, zoals een oplossing of een verstuiver; = binnen of buiten de korf.

5. De methode van een van de voorgaande claims, waarbij de bron van de proanthocyanidinen een niet-pollenweefsel is van een of meer plantensoorten, gekozen uit de groep bestaande uit bladeren, stengels, wortels, knollen, bloemen, zaden, schors en vruchten en combinaties daarvan.

6. De methode van een van de voorgaande beweringen, waarbij de bron van de proanthocyanidinen een extract, een olie, of een raffinage van een niet-pollenweefsel van een of meer plantensoorten of een combinatie daarvan is.

7. De methode van een van de voorgaande claims, waarbij de bron van de proanthocyanidinen een niet-pollenweefsel is van een of meer plantensoorten, gekozen uit de groep bestaande uit Solanaceae, Poaceae, Ranunculaceae, Fabaceae, Corylaceae.

8. De methode van een van de voorgaande beweringen, waarin de bron van de proanthocyanidinen een niet-pollenbron is, gekozen uit de groep bestaande uit: =» een zee- of zoetwateralg, in het bijzonder een extract, een olie of een raffinage van Ulva lactuca;

2 een mariene diatomeeënsoort, met name een extract, een olie of een raffinaat van Thalassiosira pseudonana, Thalassiosira rotula, of Chaetoceros mueller; en =» een schimmel, in het bijzonder een extract, een olie of een verfijning van een gist zoals Saccharomyces cervesiae, of Yarrowia lipolytica.

9. De methode van een van de voorgaande beweringen, waarin de proanthocyanidinen chemisch of enzymatisch worden gesynthetiseerd of verkregen door genetisch gemodificeerde gastheerorganismen zoals schimmels, bacteriën of algen.

10. De methode van een van de voorgaande clams, waarbij de bron van de proanthocyanidinen wordt gekozen uit de groep bestaande uit algen, planten, schimmels, algen, diatomeeën en combinaties daarvan en waarbij de bron van de proanthocyanidinen een niet-pollenweefsel is.

11. De methode van een van de voorgaande beweringen, waarbij proanthocyanidinen aan een eusociale bijenkolonie worden verstrekt uit een synthetische bron.

12. De methode van een van de voorgaande beweringen, waarbij de proanthocyanidinen worden geleverd als onderdeel van een stuifmeelvervangende samenstelling, waarbij de stuifmeelvervangende samenstelling bestaat uit: a. eiwitten in een hoeveelheid van 10 tot 50 gew%, bij voorkeur van 20 tot 40 gew%, b. vetzuren in een hoeveelheid van 1 w% tot 20 w%, bij voorkeur van 4 w% tot 12 w%, c. koolhydraten in een hoeveelheid van 30 tot 90 gew%, bij voorkeur van 5 tot 15 gew%, d. eventueel vitaminen, en e. eventueel mineralen, waarbij de totale hoeveelheid van de bestanddelen a) tot en met e) en eventueel verdere bestanddelen opgeteld 100 % bedraagt en waarbij het % betrekking heeft op het totale drooggewicht van de samenstelling.

13. De methode van een van de voorgaande claims, waarbij de samenstelling proanthocyanidinen bevat in een hoeveelheid van 0,01-5% van het dieet, bij voorkeur van 0,01-1% en nog meer bij voorkeur van 0,03-0,5% voor honingbijen en 0,03-0,8% voor hommels, als percentage van het totale gewicht van de stuifmeelvervangende samenstelling.

14. De methode van een van de voorgaande beweringen, waarbij de samenstelling in wezen vrij is van pollen.

15. Gebruik van de stuifmeelvervangende samenstelling van de claims 12 tot en met 14 voor het voederen van ongewervelde dieren, in het bijzonder bijen of hommels.