BE1028330B1 - Composition comprenant de l'Akkermansia muciniphila et de l'extrait de camu camu - Google Patents

Abstract

Sont divulguées des compositions comprenant de l'Akkermansia muciniphila et de l'extrait de camu camu. La composition est utile pour le traitement du prédiabète, du diabète de type 1 ou du diabète de type 2. Une méthode de fabrication de la composition et son utilisation pour contrôler le taux de glucose dans le sang d'un sujet en ayant besoin sont également divulguées.

Description

Composition comprenant de l'Akkermansia muciniphila et de l'extrait de camu camu DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention porte sur une composition comprenant Akkermansia muciniphila et un extrait de camu camu. En particulier, la présente invention concerne une composition comprenant Akkermansia muciniphila et un extrait de camu camu, dans laquelle Akkermansia muciniphila est pasteurisé. Les compositions de la présente invention sont utiles dans la prévention ou le traitement d'un trouble métabolique choisi dans le groupe comprenant l'obésité, le syndrome métabolique, les troubles liés à un déficit en insuline ou à une résistance à l'insuline, le diabète sucré, l'intolérance au glucose, un métabolisme lipidique anormal, l'hyperglycémie, la dyslipidémie, les maladies de la fonction barrière, y compris les maladies inflammatoires de l'intestin, la maladie de Crohn et la colite ulcéreuse, le syndrome du côlon irritable, le trouble de la contractilité intestinale, l'hypercholestérolémie et la dyslipidémie athérogène, et en particulier l'insulinorésistance ou l'obésité. En outre, les compositions de l'invention sont utiles pour favoriser la perte de poids, réduire la graisse viscérale ou améliorer la fonction de barrière intestinale. De plus, les compositions de l'invention sont utiles pour contrôler ou normaliser les niveaux de glucose dans le sang. Enfin, les compositions de l'invention sont utiles dans le traitement de la résistance à l'insuline, du prédiabète, du diabète de type 1 ou du diabète de type 2.

BACKGROUND Le diabète, l'obésité et le surpoids sont une tendance mondiale, avec un nombre d'adultes obèses estimé à environ 600 millions. La prévalence des troubles liés à l'obésité, tels que, par exemple, le diabète, l'hypertension, les pathologies cardiaques et les maladies du foie. En raison de ces pathologies hautement invalidantes, l'obésité est actuellement considérée dans les pays occidentaux comme l'un des problèmes de santé publique les plus importants. Dans le même temps, la prévalence du diabète de type 2 et du prédiabète atteint des proportions pandémiques dans le monde entier. Tant le nombre de cas que la prévalence du diabète n'ont cessé d'augmenter au cours des dernières décennies. Environ 422 millions de personnes dans le monde sont atteintes de diabète. Les diabètes de tous types peuvent entraîner des complications, notamment une insuffisance rénale, l'amputation d'une jambe, une perte de la vue et des lésions nerveuses.

L'obésité est associée à des dysfonctionnements métaboliques ayant un impact sur l'homéostasie du glucose et le métabolisme des lipides par exemple.

Une autre comorbidité de l'obésité et du diabète est un état inflammatoire de bas grade associé à des niveaux plus élevés de lipopolysaccharides sanguins (LPS), également appelé endotoxémie métabolique.

Une autre comorbidité de l'obésité et du diabète est l'altération ou la réduction de la fonction de barrière intestinale.

Une perméabilité intestinale accrue entraîne la translocation de bactéries et/ou de composants de micro-organismes dans la circulation sanguine et dans des organes tels que le foie ou le tissu adipeux.

Linflammation intestinale, le LPS et la translocation bactérienne sont également observés lors de maladies intestinales inflammatoires.

Parmi les exemples, on peut citer la maladie de Crohn, la colite, la colite ulcéreuse, les douleurs intestinales ou coliques et d'autres maladies inflammatoires intestinales.

IL est intéressant de noter que tant les maladies inflammatoires de l'intestin que les maladies liées à l'obésité sont associées à des modifications de la composition du microbiote intestinal.

L'intestin humain est colonisé par une communauté diverse, complexe et dynamique de microbes représentant plus de 1000 espèces différentes, qui interagissent en permanence avec l'hôte.

Le microbiote intestinal dépend des caractéristiques de l'hôte telles que l'âge, le sexe, le bagage génétique.

D'autres facteurs comprennent les conditions environnementales telles que le stress, les médicaments, la chirurgie gastro- intestinale, les agents infectieux et toxiques et les changements alimentaires quotidiens.

Le microbiote intestinal a un impact sur le développement du diabète, de l'obésité et des troubles connexes, de la surcharge pondérale et de l'inflammation intestinale, ou de la douleur intestinale.

La dysbiose du microbiote peut perturber davantage la diaphonie entre les organes et l'intégrité de la barrière intestinale, ce qui entraîne des symptômes.

Le camu camu a également été suggéré dans le traitement de l'obésité, de l'insulinorésistance et de la stéatose.

En particulier, le camu camu serait associé à une meilleure santé et à une plus grande diversité bactérienne dans le microbiote intestinal.

On suggère que le camu camu prévient le dépôt de graisse viscérale et hépatique grâce à l'activation du tissu adipeux brun et à l'augmentation de la dépense énergétique. voir : Anhê et al, Treatment with camu camu (Myrciaria dubia) prevents obesity by altering the gut microbiota and increasing energy expenditure in diet-induced obese mice, Gut, 68(3), 453 - March 2019, https://doi.org/10.1136/gutjnl-2017-315565. Cependant, ce document ne révèle pas une composition comprenant de l'Akkermansia muciniphila et de l'extrait de camu camu.

W0O2013130773A2 à Kaplan révèle une méthode pour modifier l'abondance relative de microbiote chez un sujet comprenant l'administration au sujet d'une dose efficace d'une composition consistant essentiellement en Verrucomicrobia substantiellement purifiée pour le traitement de l'obésité et du syndrome métabolique.

WO2014076246 à l'Université catholique de Louvain et à la Wageningen Universiteit décrit l'utilisation d'Akkermansia muciniphila pour le traitement de l'obésité et des troubles connexes. Toutefois, ce document ne révèle pas une composition comprenant Akkermansia muciniphila et de l'extrait de camu camu.

EP3347030 à l'Université catholique de Louvain et à la Wageningen Universiteit décrit Akkermansia muciniphila pour une utilisation dans le traitement d'un trouble métabolique chez un sujet qui en a besoin, dans lequel Akkermansia muciniphila est pasteurisé. Ce document ne décrit pas la combinaison d'Akkermansia muciniphila avec un extrait de plante.

Toutefois, il est toujours urgent de fournir des compositions améliorées pour le traitement des troubles métaboliques, en particulier le prédiabète, le diabète de type 1 ou le diabète de type 2.

BRÈVE DESCRIPTION DE L'INVENTION Les inventeurs actuels ont découvert de manière surprenante que l'association d'Akkermansia muciniphila et d'un extrait de camu camu donne des résultats supérieurs en matière de contrôle du glucose, de troubles de la sensibilité à l'insuline ou de perte de poids par rapport à d'autres extraits de plantes et est donc synergique. C'est notamment le cas lorsque Akkermansia muciniphila est pasteurisé.

En conséquence, un premier aspect de l'invention est une composition comprenant Akkermansia muciniphila et un extrait de camu camu.

Dans un autre aspect de l'invention, Akkermansia muciniphila est pasteurisée.

Un autre aspect de l'invention est une composition destinée à être utilisée dans la prévention ou le traitement d'un trouble métabolique choisi dans le groupe comprenant l'obésité, le syndrome métabolique, les troubles liés à un déficit en insuline ou à une résistance à l'insuline, le diabète sucré, l'intolérance au glucose, métabolisme anormal des lipides, hyperglycémie, dyslipidémie, maladies de la fonction barrière, y compris les maladies inflammatoires de l'intestin, la maladie de Crohn et la colite ulcéreuse, le syndrome du côlon irritable, le trouble de la contractilité intestinale, l'hypercholestérolémie, le trouble de la fonction barrière intestinale et la dyslipidémie athérogène. Dans un autre aspect de l'invention, le trouble métabolique est le prédiabète, le diabète de type 1 ou le diabète de type 2. Dans un autre aspect de l'invention, la composition réduit le développement de la masse graisseuse, en particulier du tissu adipeux viscéral, par rapport à un sujet non traité. Dans un autre aspect de l'invention, la composition comprend en outre un ou plusieurs ingrédients choisis dans le groupe constitué par les probiotiques, les bactéries, les levures, les microorganismes, Les prébiotiques ou une combinaison de ceux-ci. Dans un autre aspect de l'invention, la composition comprend en outre un minéral ou une vitamine ou une combinaison de ceux-ci. Dans un autre aspect de l'invention, la composition comprend en outre B2, B3, B12 ou une combinaison de ceux-ci. Dans un autre aspect de l'invention, la composition comprend en outre un support pharmaceutiquement acceptable ou un support de qualité alimentaire. Dans un autre aspect de l'invention, la composition est administrée oralement. Dans un autre aspect de l'invention, l'Akkermansia muciniphila pasteurisée est administrée en une quantité de 1.10% cellules à 1.10"? cellules par jour, de préférence de 1.105 cellules à 1.107’ cellules par jour, et, plus encore, de préférence de 1.106 à

1.10"° cellules par jour, de préférence telle qu'exprimée en TFU par cytométrie de flux. Dans un autre aspect de l'invention, l'extrait de camu camu est administré en quantité de 50 mg à 3000 mg par jour, de préférence, 100 mg à 2000 mg, encore plus préférablement 200 mg à 1000 mg par jour, et encore plus préférablement 250 mg à 500 mg par jour.

Dans un autre aspect de l'invention, la composition est une composition cosmétique, une composition nutritionnelle, un produit alimentaire, un complément alimentaire, un 5 aliment médical ou un médicament.

Dans un autre aspect de l'invention, la composition comprend en outre un second extrait de plante.

Dans un autre aspect de l'invention, le second extrait de plante est choisi dans le groupe constitué par Aronia melanocarpa, Emblica officinalis, Olea Europa, Citrus bergamia, Vaccinium macrocarpon, Myrciaria dubia, Panax ginseng rouge, Vaccinium oxycoccos, Vaccinium macrocarpon.

Un autre aspect de l'invention est une méthode de production de la composition de l'invention comprenant les étapes suivantes a.

Cultures de cellules du genre Akkermansia ; b.

Pasteurisation des cellules cultivées obtenues à l'étape a) ; c.

Ajout dun cryoprotecteur et d'un tampon de pH ; d. lyophilisation des cellules pasteurisées de l'étape c) ; e. le mélange de la poudre lyophilisée avec un extrait de camu camu f.

Au choix, produire des capsules, des gélules ou des capsules de gel mou à partir du mélange de l'étape e). Un autre aspect de l'invention est une composition selon l'une des revendications précédentes pour promouvoir la perte de poids ou la fonction de barrière intestinale chez un sujet qui en a besoin.

Un autre aspect de l'invention est une méthode de traitement ou de prévention d'un trouble métabolique chez un sujet qui en a besoin, dans laquelle la méthode comprend l'administration au sujet d'une quantité efficace, en particulier sans effets secondaires limitant le traitement, d'une composition comprenant Akkermansia muciniphila et un extrait de camu camu. Dans un mode de réalisation préféré, Akkermansia muciniphila est pasteurisé.

DÉFINITIONS On entend par “traitement” la réduction ou l'atténuation d'au moins un effet indésirable ou symptôme d'une maladie, d'un trouble ou d'un état. Ce terme désigne donc à la fois le traitement thérapeutique et les mesures prophylactiques ou préventives. Par "prévention", on entend le fait d'empêcher qu'une maladie ou une affection ne survienne ou de réduire le risque qu'elle ne survienne. Par "quantité efficace" ou "quantité thérapeutiquement efficace", on entend le niveau ou la quantité d'agent qui est visé, sans causer d'effets secondaires négatifs ou néfastes importants à la cible, retarder ou prévenir l'apparition d'un trouble métabolique, ralentir ou arrêter la progression, l'aggravation ou la détérioration d'un ou plusieurs symptômes du trouble métabolique ; provoquer une amélioration des symptômes du trouble métabolique ; réduire la gravité ou l'incidence du trouble métabolique ; guérir le trouble métabolique ; ou rétablir la quantité et/ou la proportion normale d'Akkermansia muciniphila dans l'intestin du sujet à traiter. "Akkermansia muciniphila' désigne la bactérie dégradant la mucine identifiée par Derrien (Derrien et al., 2004. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 54:1469-1476). Les cellules sont de forme ovale, non mobiles et à Gram négatif. Akkermansia muciniphila peut également être appelée Akkermansia spp. ou Akkermansia-like bacteria. Elle appartient au phylum Verrucomicrobia. Il est généralement admis que les souches présentant une similarité nucléotidique déterminée expérimentalement par hybridation ADN-ADN d'environ 70 % peuvent être considérées comme la même espèce - ce qui correspond à une identité nucléotidique moyenne (ANI) d'environ 95 %. Dans un mode de réalisation, Akkermansia muciniphila comprend également des fragments d'Akkermansia muciniphila. "Akkermansia muciniphila pasteurisé" désigne l'Akkermansia muciniphila soumis à un traitement thermique. Dans l'une de ses versions, Akkermansia muciniphila pasteurisé désigne Akkermansia muciniphila qui a été chauffé à une température comprise entre 50°C et 100°C pendant au moins 10 minutes.

"TFU" ou "Total Fluorescent Units" signifie le nombre de cellules tel que déterminé par leur luminosité de fluorescence après coloration. Dans un mode de réalisation privilégié, le TFU est mesuré par cytométrie de flux. Par exemple, dans une première étape, des aliquotes de lots de biomasse sont réhydratées dans du PBS et colorées avec Syto 9 et de liodure de propidium selon le protocole du fabricant (LIVE/DEAD® BacLight TM Bacterial Viability Kit, Thermofisher). Le TFU peut ensuite être obtenu en analysant les échantillons colorés sur le cytomètre de flux Attune NxT. En général, les TFU sont exprimés en unités fluorescentes totales par gramme ou par ml, de préférence par gramme.

On entend par "extrait de camu camu" tout produit transformé de toute partie de la plante, en particulier le fruit du camu camu (Myrciaria dubia). Le camus camu est un fruit amazonien qui est utilisé comme antioxydant dans les denrées alimentaires. L'extrait de camu camu peut être obtenu par séchage, extraction alcoolique ou extraction à l'eau, concentré ou non et transformé en liquide ou en poudre. L'extraction à l'eau est préférable. Dans une autre variante, l'extrait de camu camu est un extrait brut. Dans une autre variante, l'extrait de camu camu a une teneur en vitamine C de 10 % ou plus en poids sec. Dans une autre variante, l'extrait de camu-camu comprend des polyphénols choisis dans le groupe constitué par les proanthocyanidines, les flavanols, les flavonoïdes et les ellagitanines. L'extrait de camu-camu peut également comprendre des fibres.

Les "probiotiques” sont des micro-organismes vivants qui, lorsqu'ils sont administrés en quantité efficace, ont un effet bénéfique sur la santé ou le bien-être d'un sujet. Dans un cas, ces bienfaits pour la santé sont associés à l'amélioration de l'équilibre du microbiote humain ou animal dans le tractus gastro-intestinal, ou au rétablissement d'un microbiote normal.

Le terme "prébiotique" désigne une substance, comme par exemple une substance qui ne peut être digérée par l'homme, mais qui module la composition et/ou l'activité du microbiote intestinal par sa métabolisation par des micro-organismes dans l'intestin, conférant ainsi un effet physiologique bénéfique à l'hôte.

Le “sujet” désigne un animal, de préférence un mammifère, plus préférablement un humain ou un animal.

Le terme "surpoids" désigne une situation dans laquelle le sujet a un indice de masse corporelle (IMC) de 25 ou plus.

Dans ce contexte, l'IMC est défini comme la masse corporelle de l'individu (en kg) divisée par le carré de sa taille (en mètre). "L'obésité” désigne une situation dans laquelle le sujet a un IMC supérieur ou égal à 30. Le "diabète sucré de type |" désigne une situation dans laquelle le sujet présente une destruction à médiation auto-immune des cellules bêta du pancréas présentant peu ou pas de sécrétion d'insuline.

Le “prédiabète" désigne une situation où ledit sujet présente un aux élevé de glucose sanguin fou giycérie) avec un taux de glucose à jeun supérieur à 100 mg/dl mais inférieur à 126 mg/dl ou un taux de glucose plasmatique OGTT de 2 heures supérieur à 140 mg/dl mais inférieur à 200 mg/dl.

Le "diabète de type II" désigne une situation dans laquelle ledit sujet présente un taux de glucose sanguin {ou glycémie) élevé avec une glycémie à jeun supérieure ou égale à 126 mg/dl ou une glycémie à 2 heures au test de tolérance au glucose par voie orale (TGC) supérieure ou égale à 200 mg/dl. "Fragment" peut désigner les composants cellulaires, les métabolites, les molécules sécrétées, les vésicules et les composés résultant du métabolisme d'Akkermansia muciniphila et autres.

Les fragments peuvent être obtenus, par exemple, en récupérant le sumageant d'une culture d'Akkermansia muciniphila ou en extrayant des composants cellulaires ou des fractions cellulaires, des métabolites ou des composés sécrétés d'une culture d'Akkermansia muciniphila.

DESCRIPTION DÉTAILLÉE DE L'INVENTION Le demandeur démontre ici que les effets bénéfiques sur le métabolisme observés après administration d'une composition comprenant Akkermansia muciniphila et un extrait de camu camu.

Par conséquent, la présente invention concerne une composition comprenant Akkermansia muciniphila et un extrait de camu camu pour le traitement, ou pour une utilisation dans le traitement, de troubles métaboliques chez un sujet qui en a besoin.

Dans le présent document, un trouble métabolique est un trouble lie à une altération de l'homéostasie métabolique, comme par exemple une altération de l'homéostasie du glucose ou des lipides.

Dans un mode réalisation, ledit trouble métabolique est le prédiabète, le diabète de type 1 ou le diabète de type 2. Parmi les autres troubles métaboliques, on peut citer, entre autres, le syndrome métabolique, les troubles liés à une carence ou à une résistance à l'insuline, le diabète sucré, y compris le diabète de type 1 ou le diabète de type 2, l'intolérance au glucose, le métabolisme anormal des lipides, athérosclérose, hypertension, prééclampsie, pathologie cardiaque, accident vasculaire cérébral, maladie hépatique grasse non alcoolique, hyperglycémie, stéatose hépatique, dyslipidémie, dysfonctionnement du système immunitaire associé au surpoids et à l'obésité, maladies du foie telles que par exemple, la fibrose associée à l'obésité, ou les anomalies des fonctions hépatiques, y compris les modifications de la production de bile, les maladies inflammatoires, immunitaires et des fonctions de barrière comme, par exemple, les maladies inflammatoires de l'intestin, y compris la maladie de Crohn et la colite ulcéreuse, et le syndrome du côlon irritable, les maladies cardiovasculaires, l'hypercholestérolémie, l'élévation des triglycérides, l'asthme, lapnée du sommeil, l'arthrose, la neurodégénérescence, les maladies de la vésicule biliaire, le syndrome X, les troubles inflammatoires et immunitaires, la dyslipidémie athérogène et le cancer.

Dans un cas, l'hypercholestérolémie correspond à une concentration de cholestérol plasmatique supérieure ou égale à 2 g/L ou 5 mmol/L.

Dans une autre variante, l'hypercholestérolémie correspond à un rapport entre la concentration plasmatique de cholestérol total et la concentration plasmatique de HDL (cholestérol à lipoprotéines de haute densité) supérieur ou égal à 4,5:1, de préférence 5:1. Dans un mode de réalisation, les Akkermansia muciniphila pasteurisées de l'invention sont des cellules non viables.

Dans le présent document, les "cellules non viables” désignent les cellules qui ne sont pas capables de proliférer.

Des exemples pour visualiser ou compter les cellules d'Akkermansia muciniphila ont été fournis par Derrien et al. (2008. Appl.

Environ.

Microbiol. 74:1646-8), Derrien et al. (2011. Frontiers Microbiol. 2:166-175) ou Reunanen et al. (2015. Appl.

Environ.

Microbiol. 81(11):3655-62).

La composition de l'invention peut également comprendre un excipient pharmaceutiquement acceptable ou un support de qualité alimentaire, par exemple des solvants, des milieux de dispersion, des revêtements, des agents isotoniques et des agents retardant l'absorption, etc. Pour l'administration humaine, les préparations doivent répondre à des normes générales de sécurité et de pureté, comme l'exigent les normes de l'Office of Biologics de la FDA. La présente invention concerne également un médicament, un aliment médical, un aliment ou un complément alimentaire comprenant une quantité efficace d'Akkermansia muciniphila ou d'un fragment de celle-ci et un extrait de camu camu.

La présente invention concerne également une méthode pour traiter ou prévenir un trouble métabolique chez un sujet qui en a besoin, dans laquelle ladite méthode comprend l'administration d'une quantité efficace d'Akkermansia muciniphila ou d'un fragment de celle-ci et d'un extrait de camu camu au sujet qui en a besoin.

Un autre objet de l'invention est un procédé pour rétablir une proportion normale d'Akkermansia muciniphila, de fragments ou d'autres composés actifs d'Akkermansia muciniphila dans l'intestin d'un sujet qui en a besoin, dans lequel ledit procédé comprend l'administration d'une quantité efficace d'Akkermansia muciniphila ou d'un fragment de celle-ci et d'un extrait de camu camu au sujet.

La composition de l'invention est administrée au moins une fois par semaine, de préférence au moins deux fois par semaine, plus préférablement au moins trois fois par semaine, et encore plus préférablement au moins quatre fois par semaine. Dans une autre forme, la composition de l'invention est administrée au moins une fois par jour, et de préférence au moins deux fois par jour.

Dans un mode de réalisation, la composition de l'invention est administrée pendant 1 semaine, de préférence pendant 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 semaines ou plus, voire de manière permanente.

Dans un mode de réalisation, la composition de l'invention est administrée pendant une période qui dure jusqu'à ce que le résultat souhaité soit atteint, par exemple des niveaux de glucose sanguin normaux, une sensibilité à l'insuline réduite, un prédiabète réduit, une résistance à l'insuline réduite telle qu'exprimée dans HOMA-IR, un diabète de type 1 réduit ou un diabète de type 2 réduit, une perte de poids, le traitement de troubles métaboliques ou la diminution du niveau de cholestérol dans le plasma. Dans un mode de réalisation, 'Akkermansia muciniphila pasteurisée est administrée en une quantité de 1.10* cellules à 1.10"? cellules par jour, de préférence de 1.105 cellules à 1.101! cellules par jour, et, plus encore, de préférence de 1.106 à 1.10"° cellules par jour. Dans une autre version de l'invention, la dose quotidienne d'Akkermansia muciniphila pasteurisée est de 1.10° à environs 1.10"? cellules/jour, de preference d’environs 1.108 à 1.10'°cellules/jour, et, plus encore, de preference de 1.10° à 1.107 cellules/ jour.

La présente invention concerne également l'utilisation cosmétique d'Akkermansia muciniphila pasteurisée ou d'un fragment de celle-ci pour favoriser la perte de poids chez un sujet.

Un autre objet de l'invention est donc une composition cosmétique comprenant une quantité cosmétiquement efficace d'Akkermansia muciniphila pasteurisée ou d'un fragment de celle-ci et d'extrait de camu camu, et son utilisation pour favoriser la perte de poids chez un sujet. Par "quantité cosmétiquement efficace”, on entend ici la quantité d'une composition cosmétique nécessaire et suffisante pour favoriser un effet cosmétique, comme par exemple pour induire une perte de poids chez un sujet.

Dans lune des concrétisations de l'invention, la composition, la composition pharmaceutique, la composition cosmétique ou le médicament comprend en outre des souches ou espèces probiotiques supplémentaires, comme par exemple des souches ou espèces probiotiques bactériennes. Dans une autre forme, les autres souches sont pasteurisées. Ces probiotiques comprennent des souches ou des espèces de bactéries ou de champignons, de préférence des souches ou des espèces de levures. Dans une première variante, ces souches ou espèces probiotiques supplémentaires sont sélectionnées parmi celles qui sont naturellement présentes dans l'intestin du sujet, de préférence dans l'intestin humain, et plus préférentiellement dans l'intestin de sujets humains sains.

Les exemples de souches ou d'espèces probiotiques bactériennes qui peuvent être utilisées dans la présente invention comprennent, sans s'y limiter, Lactobacillus, Lactococcus, Bifidobacterium, Veillonella, Desemzia, Christensenella, Allobaculum, Coprococcus, Collinsella, Citrobacter, Turicibacter, Sutterella, Subdoligranulum, Streptococcus, Sporobacter, Sporacetigenium, Ruminococcus, Roseburia, Proteus, Propionobacterium, Leuconostoc, Weissella, Pediococcus, Streptococcus, Prevotella, Parabacteroides, Papillibacter, Oscillospira, Melissococcus, Dorea, Dialister, Clostridium, Cedecea, Catenibacterium, Butyrivibrio, Buttiauxella, Bulleidia, Bilophila, Bacteroides, Anaerovorax, Anaerostipes, Anaerofilum, _Enterobacteriaceae, Fermicutes, Atopobium, Alistipes, Acinetobacter, Slackie, Shigella, Shewanella, Serratia, Mahella, Lachnospira, Klebsiella, ldiomarina, Fusobacterium, Faecalibacterium, _Eubacterium, … Enterococcus, Enterobacter, Eggerthella, Dysosmobacterium ou Anaerobacterium.

Les souches probiotiques préférées sont Lactobacillus, Lactococcus, Bifidobacterium, Christensenella, Clostridium, Anaerostipes, Faecalibacterium, Eubacterium, Enterococcus, Enterobacter, Eggerthella, Dysosmobacter ou Anaerobacterium.

Les souches ou espèces de procaryotes qui peuvent être utilisées dans la présente invention comprennent, entre autres, Archaea, Firmicutes, Verrucomicrobia, Christensenella, Bacteroidetes (comme, par exemple, Allistipes, Bacteroides ovatus, Bacteroides splachnicus, Bacteroides stercoris, Parabacteroides, Prevotella ruminicola, Porphyromondaceae, et genre apparenté), Protéobactéries, Bêta-protéobactéries (comme, par exemple, Aquabacterium et Burkholderia), Gamma-protéobactéries (comme, par exemple, Xanthomonadaceae), Actinobactéries (comme, par exemple, Actinomycetaceae et Atopobium), Fusobactéries, Méthanobactéries, Spirochètes, Fibrobactéries, Deferribactéries, Deinococcus, Thermus, Cyanobactéries, Méthanobrevibactéries, Peptostreptococcus, Ruminococcus, Coprococcus, Subdolingranulum, Dorea, Bulleidia, Anaerofustis, Gemella, Roseburia, Dialister, Anaerotruncus, Staphylococcus, Micrococcus, Propionobactéries, Enterobacteriaceae, Faecalibacterium, Bacteroides, Parabacteroides, Prevotella, Eubacterium, Bacilles (tels due, par exemple, Lactobacillus salivarius et espèces apparentées, Aerococcus, Granulicatella, Streptococcus bovis et genre apparenté et Streptococcus intermedius et genre apparenté), Clostridium (tel que, par exemple, Anaerobutyricum hallii,

Eubacterium limosum, Anaerobutyricum soehngenii et genre apparenté) et Butyrivibrio. Les exemples de souches ou d'espèces probiotiques fongiques, de préférence des souches ou espèces probiotiques de levure, qui peuvent être utilisées dans la présente invention comprennent, sans sy limiter, les Ascomycètes, les Zygomycètes et les Deutériomycètes, de préférence des groupes Aspergillus, | Torulopsis, Zygosaccharomyces, Hansenula, Candida, Saccharomyces, Clavispora, Bretanomyces, Pichia, Amylomyces, Zygosaccharomyces, Endomycess, Hyphopichia, Zygosaccharomyces, Kluyveromyces, Mucor, Rhizopus, Yarrowia, Endomyces, Debaryomyces, et/ou Penicillium.

Dans un mode e réalisation, la seule souche ou espèce microbienne, de préférence bactérienne, comprise dans la composition, la composition pharmaceutique, la composition cosmétique ou le médicament est Akkermansia muciniphila.

Dans un mode de réalisation, la composition, la composition pharmaceutique, la composition cosmétique ou le médicament consiste en Akkermansia muciniphila pasteurisée.

Dans lune des concrétisations de l'invention, la composition, la composition pharmaceutique, la composition cosmétique ou le médicament comprend en outre un prébiotique.

Les exemples de prébiotiques pouvant être utilisés dans la présente invention comprennent, sans sy limiter, les extraits de plantes contenant des polyphénols, linuline et les fructanes de type inuline, l'oligofructose, les bêta-glucanes, le xylose, l'arabinose, l'arabinoxylan, le ribose, le galactose, le rhamnose, la cellobiose, fructose, lactose, salicine, saccharose, glucose, esculine, tween 80, tréhalose, maltose, mannose, melibiose, mucus ou mucines, raffinose, fructooligosaccharides, galacto- oligosaccharides, acides aminés, alcools, glucides fermentables et toutes combinaisons de ceux-ci.

Parmi les autres exemples non limitatifs de prébiotiques, citons les dérivés de cellulose solubles dans l'eau, les dérivés de cellulose insolubles dans l'eau, les flocons d'avoine non transformés, le métamucil, le son et toute combinaison de ces produits.

Les exemples de dérivés de cellulose hydrosolubles comprennent, sans s'y limiter, la méthylcellulose, la méthyléthylcellulose, l'hydroxyéthytcellulose, l'éthylhydroxyéthylcellulose, l'hydroxyéthylcellulose cationique, l'hydroxypropylcellulose, l'hydroxyéthylméthylcellulose, l'hydroxypropylméthylcellulose et la carboxyméthylcellulose.

La composition de l'invention peut être administrée par voie orale, rectale, oesophagogastroduodénoscopie, coloscopie, sonde naso-gastrique ou orogastrique.

La composition peut être administrée par voie orale sous forme de comprimés, de pilules, de capsules, de gélules de gélatine molle, de pilules enrobées de sucre, ou de comprimés de dispersion, de comprimés effervescents ou d'autres solides.

La composition peut être administrée par voie orale sous forme de liquide, de solution buvable ou de liposome.

Dans un mode de réalisation, la composition de l'invention comprend en outre des excipients, des diluants et/ou des supports choisis en fonction de la voie d'administration prévue.

Les exemples d'excipients, de diluants et/ou de supports comprennent, sans s'y limiter, l'eau, une solution saline tampon au phosphate, une solution saline tampon anaérobie au phosphate, le bicarbonate de sodium, le jus, le lait, le yaourt, les préparations pour nourrissons, les produits laitiers, les colorants, comme, par exemple, le dioxyde de titane (E171), le dioxyde de fer (E172) et le noir brillant BN (E151) ; les agents aromatisants ; les épaississants, comme par exemple le monostéarate de glycérol ; les édulcorants ; les agents d'enrobage, comme par exemple l'huile de colza raffinée, l'huile de soja, l'huile d'arachide, la lécithine de soja ou la gélatine de poisson ; les diluants, comme par exemple le lactose, le lactose monohydraté ou l'amidon ; les liants, comme par exemple la povidone, l'amidon prégélatinisé, les gommes, le saccharose, le polyéthylène glycol (PEG) 4000 ou PEG 6000 ; agents de désintégration, comme par exemple la cellulose microcristalline ou le carboxyméthyl amidon sodique, comme par exemple le carboxyméthyl amidon sodique de type A ; agents lubrifiants, comme par exemple le stéarate de magnésium ; agent d'écoulement, comme par exemple la silice colloïdale anhydre, etc.

La composition de l'invention est une composition pharmaceutique.

Dans un autre cas, la composition de l'invention est un additif alimentaire, un additif pour boisson, un complément alimentaire, un produit nutritionnel, un aliment médical ou une composition nutraceutique. Les troubles de l'homéostasie du glucose sont associés à une perméabilité intestinale accrue et à une altération de la production de mucus, de la barrière épithéliale, du système immunitaire et/ou de la production de composés antibactériens par le sujet et à une inflammation de faible intensité. En conséquence, la composition de la présente invention peut être utilisée pour diminuer la perméabilité intestinale, pour restaurer la production de mucus altérée, pour restaurer la barrière épithéliale, pour restaurer le système immunitaire ou pour restaurer la production de composés antibactériens ou une combinaison de ceux-ci.

De plus, la composition de l'invention peut être utile pour contrôler la fonction de barrière intestinale. En conséquence, un autre aspect est une méthode de contrôle de la fonction de barrière intestinale comprenant l'administration d'une quantité efficace ou cosmétiquement efficace de la composition de l'invention à un sujet qui en a besoin. Dans l'une de ces versions, la composition de l'invention régule l'épaisseur de la couche de mucus qui peut être réduite en cas d'obésité ou d'autres troubles métaboliques. Dans une autre, l'administration de la composition de l'invention induit la production de peptides antimicrobiens du côlon, comme par exemple le Reglllgamma. Dans un autre cas, l'administration de la composition de l'invention induit la production de composés de la famille des endocannabinoïdes, comme par exemple les acylglycérols choisis dans le groupe comprenant le 2-oleoylglycérol, le 2-palmitoylglycérol et le 2- arachidonoylglycérol. Dans une autre variante, l'administration de la composition de l'invention régule le renouvellement du mucus.

Dans un mode de réalisation, l'administration de la composition de l'invention à un sujet augmente la satiété dudit sujet. Par conséquent, selon ce mode de réalisation, la méthode de l'invention augmente la satiété ou diminue l'apport alimentaire chez un sujet, induisant ainsi une perte de poids durable chez le sujet, et traitant ainsi les troubles métaboliques chez ledit sujet, tels que, par exemple, les troubles métaboliques liés à l'obésité.

BRÈVE DESCRIPTION DES DESSINS Figure 1 : Glycémie accélérée à la fin du traitement.

Effets d'une administration orale de véhicule ou d'A. muciniphila pasteurisé ou avec A. muciniphila et Aronia ou A. muciniphila et Camu Camu chez des souris à jeun depuis 6 heures sur la glycémie à la 11e semaine du traitement. **p < 0,01 par rapport au véhicule HFD (les valeurs p ont été obtenues en utilisant une ANOVA à sens unique suivie par le test post-hoc de Bonferroni). Figure 2 : Insulinémie à la fin du traitement.

Effets d'une administration orale de véhicule ou d'A. muciniphila pasteurisé ou d'A. muciniphila et Aronia ou d'A. muciniphila et Camu Camu chez des souris fixées à 6h sur le taux d'insuline plasmatique à la semaine 11. **p < 0,01 par rapport au véhicule HFD ; Sp < 0,05 entre 2 groupes (les valeurs *p ont été obtenues à l'aide d'une ANOVA à sens unique suivie du test post-hoc de Bonferroni ; les valeurs Sp ont été obtenues à l'aide du test t comparant 2 groupes). Figure 3 : Indice HOMA à la fin du traitement.

Effets dune administration orale de véhicule ou d'A. muciniphila pasteurisée ou d'A. muciniphila et Aronia ou d'A. muciniphila et Camu Camu chez des souris fixées à 6h sur l'indice HOMA IR calculé comme insulinémie (mU/L) x glycémie (mmol/L) / 22,5 au début du protocole à la semaine 11 du traitement. **p < 0,01 par rapport au véhicule HFD ; $$p < 0,01 entre 2 groupes (les valeurs p ont été obtenues en utilisant une ANOVA à 1 ou 2 voies suivie par le test post-hoc de Bonferroni ; les valeurs Sp ont été obtenues en utilisant le test t comparant 2 groupes). Figure 4 : expression relative de l'ARNm des biomarqueurs de l'intégrité de la barrière intestinale et des peptides antimicrobiens dans le côlon à la fin du traitement.

Les effets d'une administration orale de véhicule ou de A. muciniphila pasteurisée ou de A. muciniphila et Aronia ou de A. muciniphila et Camu Camu à la semaine 12 sur divers — marqueurs de l'intégrité de la barrière intestinale et des peptides antimicrobiens dans le côlon (analyse par RCPQ de la modification des plis par rapport à l'analyse de l'ARNm) sont décrits dans la figure 4. HFD Vehicle group) expression de 'ARNm ZO-1 (A), Reg3y expression de l'ARNm (B), expression de l'ARNm Intectin (C), expression de l'ARNm Occludin (D), expression de 'ARNm Claudin3 (E), expression de l'ARNm Muc2 (F). *p < 0,05, *p < 0,01, ***p < 0,001 vs HFD Vehicle, #p < 0,05, ##p < 0,001 vs HFD pAkk, Sp entre 2 groupes (les valeurs *p et #p ont été obtenues en utilisant une ANOVA à 1 voie suivie par le post-hoc de Bonferroni, les valeurs Sp ont été obtenues en utilisant le test t comparant 2 groupes).

DESCRIPTION DÉTAILLÉE DU DESSIN Les figures 1, 2, 3 et 4 montrent l'effet in vivo de l'Akkermansia muciniphila pasteurisée (appelée "pAkk" dans les figures) seule ou en combinaison avec des extraits végétaux sur la glycémie à jeun, l'insulinémie à jeun, l'indice HOMA et la fonction de barrière intestinale chez les souris nourries avec un régime riche en graisses, ci-après dénommées "HFD". Les souris C57BL/6J mâles âgées de neuf semaines (Charles River Laboratory, l'Arbresle, France) ont bénéficié d'une période d'acclimatation d'au moins 5 jours après leur arrivée. Les animaux ont été hébergés dans des cages ventilées et enrichies (48 x 37,5 x 21 cm 3) pendant toute la phase expérimentale. Les litières des cages des animaux étaient changées une fois par semaine. Les souris ont été logées en groupes de 5 animaux selon un cycle lumineux normal (à 19 heures, lumières éteintes), 22 + 2 °C et 50 + 10 % d'humidité relative. Les paramètres d'hébergement ont été enregistrés quotidiennement. Pendant la phase d'acclimatation, le régime alimentaire standard (RM1 (E) 801492, SDS) et l'eau du robinet ont été fournis ad libitum. Pendant la phase expérimentale (12 semaines), un régime alimentaire riche en graisses à 45% (Research Diet #12451) (groupe HFD) et de l'eau du robinet ont été fournis ad libitum. Les souris ont été traitées quotidiennement avec un gavage oral de 180 ul de véhicule, ou 180 ul de solution d'A. muciniphila seule ou 180 ul de solution d'A. muciniphila + chaque extrait de plante (Aronia : 100 mg/kg ; Camu Camu : 250 mg/kg) pendant les 12 semaines de traitement HFD. Avant le début du protocole, aux semaines 0, 4, 8 et 11, la glycémie a été évaluée avec un glucomètre (Accu-Chek Active, Roche), et un échantillon de sang a été prélevé pour effectuer un test d'insulinémie (méthode HTRF) après 6h de jeûne. L'indice d'homéostasie a été calculé comme suit : insulinémie (mU/L) x glycémie(mmol/L) / 22,5. À la semaine 11, des souris à jeun ont été chargées oralement de glucose (2 g/kg de poids corporel), environ 24 heures après la dernière administration orale de véhicule ou de traitements. La glycémie a été mesurée à -30, 0 (moment de la charge orale de glucose), et 15, 30, 60, 90 et 120 min avec un glucomètre (Accu-Chek Active, Roche) sur des échantillons de sang prélevés à l'extrémité de la veine caudale.

Du sang a également été prélevé dans la veine de la queue à -30 et 15 min avec des capillaires héparinés (=60ul) (prélèvement de deux capillaires par souris). Le sang a été centrifugé à 13000g pendant 5 min à 4°C.

Au moins 15yL de plasma a été stocké dans un tube de 0,5 ml à - 80°C jusqu'à ce que des analyses supplémentaires soient effectuées.

Le côlon proximal a été homogénéisé individuellement et l'ARN total des tissus a été préparé à l'aide de TRIReagent (Sigma Aldrich) et du kit HT QlAcube RNeasy 96 (Qiagen). L'analyse de quantification de l'ARN total a été effectuée en analysant 1 ul de chaque échantillon dans Nanodrop (Ozyme). L'ADNc a été préparé par transcription inverse de 1 ug d'ARN total en utilisant un kit RT iScript (Biorad). La PCR en temps réel a été réalisée avec le système et le logiciel de PCR en temps réel Via7 (biotechnologie appliquée) en utilisant les mélanges maîtres de PCR en temps réel SYBR Green (Biorad) pour la détection.

Le gène RPL19 a été choisi comme gène d'entretien.

Tous les échantillons ont été effectués en double, et les données ont été analysées selon la méthode 2AACT.

L'identité et la pureté du produit amplifié ont été évaluées par l'analyse de la courbe de fusion à la fin de l'amplification.

IL est surprenant de constater que parmi les extraits de plantes testés, le Camu Camu est celui qui, combiné à l'Akkermansia muciniphila pasteurisée, a donné des résultats supérieurs sur la glycémie à jeun, l'insulinémie et l'indice HOMA (figures 1, 2 et 3), ainsi que sur la fonction de barrière intestinale (figure 4). L'association d'Akkermansia muciniphila pasteurisée et d'un extrait de Camu Camu a également amélioré la fonction barrière avec un effet plus prononcé sur l'expression de l'ARNm Reg-3-, claudin-3 et Muc2 (voir figure 4). Ces résultats indiquent un effet potentialisateur ou synergique de l'extrait de Camu Camu lorsqu'il est combiné avec Akkermansia muciniphila pasteurisée.

Claims (15)

REVENDICATIONS

1. Composition comprenant de l'Akkermansia muciniphila et un extrait de camu camu.

2. Composition selon la revendication 1, dans laquelle Akkermansia muciniphila est pasteurisée.

3. Composition conforme à l'une des revendications précédentes, destinée à être utilisée dans la prévention ou le traitement d'un trouble métabolique choisi dans le groupe comprenant l'obésité, le syndrome métabolique, les troubles liés à un déficit en insuline ou à une résistance à l'insuline, le diabète sucré, l'intolérance au glucose, métabolisme anormal des lipides, hyperglycémie, dyslipidémie, maladies de la fonction barrière, y compris les maladies inflammatoires de l'intestin, la maladie de Crohn et la colite ulcéreuse, le syndrome du côlon irritable, le trouble de la contractilité intestinale, l'hypercholestérolémie et la dyslipidémie athérogène.

4. Composition selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle le trouble métabolique est le prédiabète, le diabète de type 1 ou le diabète de type 2.

5. Composition selon l'une des revendications précédentes, comprenant en outre un ou plusieurs ingrédients choisis dans le groupe constitué par les probiotiques, les bactéries, les levures, les microorganismes, les prébiotiques ou une combinaison de ceux-ci.

6. Composition selon lune des revendications précédentes, dans laquelle la composition comprend en outre un minéral ou une vitamine ou une combinaison de ceux-ci.

7. Composition selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle le minéral est le chrome.

8. Composition selon lune des revendications précédentes, dans laquelle la vitamine est choisie dans le groupe constitué par B2, B3, B12, ou une combinaison de ceux-ci.

9. Composition selon lune des revendications précédentes, dans laquelle la composition comprend en outre un support pharmaceutiquement acceptable ou un support de qualité alimentaire.

10.Composition selon lune des revendications précédentes, dans laquelle la composition est administrée oralement.

11.Composition selon lune des revendications précédentes, dans laquelle l'Akkermansia muciniphila pasteurisé est administré en une quantité de 1.10° cellules à 1.10 cellules par jour, de préférence de 1.10° cellules à 1.101! cellules par jour, et, plus encore, de préférence de 1.106 à 1.101° cellules par jour.

12. Composition selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle l'extrait de camu camu est administré en une quantité de 50 mg à 3000 mg par jour, de préférence, 100 mg à 500 mg, plus préférablement encore 200 mg à 300 mg par jour.

13.Composition selon lune des revendications précédentes, dans laquelle la composition est une composition cosmétique, une composition nutritionnelle, un produit alimentaire, un complément alimentaire, un aliment médical ou un médicament.

14.Méthode de production d'une composition selon l'une des revendications précédentes comprenant les étapes suivantes a. Cultures de cellules du genre Akkermansia ; b. Pasteurisation des cellules cultivées obtenues à l'étape a) ; c. Ajout d'un cryoprotecteur et d'un tampon de pH ; d. lyophilisation des cellules pasteurisées de l'étape c) ; e. le mélange de la poudre lyophilisée avec un extrait de camu camu f. Au choix, produire des capsules ou des gélules à partir du mélange de l'étape e).

15.Utilisation de la composition selon l'une des revendications précédentes pour contrôler le taux de glucose sanguin chez un sujet qui en a besoin.