BE1026780B1 - Process for the batchwise separation and purification of a polyester catechin by means of gel chromatography - Google Patents

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BE1026780B1 BE20195913A BE201905913A BE1026780B1 BE 1026780 B1 BE1026780 B1 BE 1026780B1 BE 20195913 A BE20195913 A BE 20195913A BE 201905913 A BE201905913 A BE 201905913A BE 1026780 B1 BE1026780 B1 BE 1026780B1
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Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester-Catechins mittels Gelchromatographie, welches das Gebiet der Tiefenverarbeitung von Tee betrifft. Das Verfahren umfasst die folgenden Schritte:1) Lösen des Polyester-Catechin-Extrakts mit Wasser oder einer wässrigen Ethanollösung, um eine Polyester-Catechin-Extraktlösung herzustellen;2) Langsames Durchlassen der Polyester-Catechin-Extraktlösung durch eine mit dem Gelfüllstoff gefüllte Chromatographiesäule;3) Durchführen einer Gradientenelution für die Chromatographiesäule mit dem Elutionslösungsmittel;4) Jeweiliges Konzentrieren von den drei Sorten von Eluaten, um drei Sorten von Konzentraten zu erhalten, Trocknen, um drei Sorten von Polyester-Catechin-Monomeren des Polyester- Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester-Catechins C zu erhalten. Mit der vorliegenden Erfindung kann nach Bedarf ein Polyester-Catechin-Monomer von irgendeiner Sorte selektiv hergestellt werden, um die Erfordernisse der Entwicklung verschiedener Produkte in den Bereichen von Medizin, Lebensmittel, chemischer Industrie usw. zu erfüllen; zugleich kann die Nutzung des Polyester- Catechin-Extrakts erheblich verbessert werden, so dass er für die Entwicklung einer Vielzahl von Gesundheitsprodukten verwendet werden kann; dieses Verfahren eignet sich sehr gut für die Serienproduktion.The present invention relates to a process for the batchwise separation and purification of a polyester catechin by means of gel chromatography, which relates to the field of deep processing of tea. The method comprises the following steps: 1) dissolving the polyester-catechin extract with water or an aqueous ethanol solution to produce a polyester-catechin extract solution; 2) slowly passing the polyester-catechin extract solution through a chromatography column filled with the gel filler; 3) Performing a gradient elution for the chromatography column with the eluting solvent; 4) Concentrating each of the three kinds of eluates to obtain three kinds of concentrates, drying to obtain three kinds of polyester-catechin monomers of polyester-catechin A, polyester -Catechins B and polyester catechins C. With the present invention, a polyester-catechin monomer of any kind can be selectively produced as required to meet the needs of developing various products in the fields of medicine, food, chemical industry, etc .; at the same time, the use of polyester catechin extract can be significantly improved so that it can be used in the development of a wide variety of health products; this process is very suitable for series production.

Description

Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester- Catechins mittels GelchromatographieProcess for the batchwise separation and purification of a polyester catechin by means of gel chromatography

TECHNISCHES GEBIET Die vorliegende Erfindung betrifft das Gebiet der Tiefenverarbeitung von Tee, insbesondere ein Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester-Catechins mittels Gelchromatographie.TECHNICAL FIELD The present invention relates to the field of deep processing of tea, in particular to a method for batch separation and purification of a polyester catechin by means of gel chromatography.

STAND DER TECHNIK Die Polyester-Catechin sind pflanzliche Phenolpigmente, weisen antioxidative, antivirale, bakteriostatische und krebsbekämpfende Wirkungen auf und haben bessere Präventions- und Behandlungseffekte für Arteriosklerose, Hirninfarkt, Thrombozytenaggregation, Bluthochdruck, Hyperlipidämie und Fettstoffwechselstörungen und andere kardiovaskuläre und zerebrovaskuläre Erkrankungen, unter den Funktionskomponenten von Tee stellen die Polyester- Catechin die Verbindungen mit signifikanten Effekten und einem Potenzial für die Entwicklung und Anwendung in dieser Stufe dar. Bisher wurden schon acht Arten von Polyester-Catechin aus Schwarztee oder Catechinoxiden abgeschieden und identifiziert, von denen drei den höchsten Gehalt in Schwarztee aufweisen, die jeweils der Polyester-Catechin A (Theasinensins A, als TSA abgekürzt), der Polyester-Catechin B (als TSB abgekürzt) und der Polyester-Catechin C (Theasinensine C, als TSC abgekürzt) sind. Die Monomerkomponenten von unterschiedlichen Polyester-Catechin verfügen über ihre einzigartigen Eigenschaften und weisen an verschiedenen Aspekten unterschiedliche biologische Aktivitäten auf. Mit dem bestehenden Flüssigphasenchromatographie-Analyseverfahren kann das Gemisch verschiedener Arten von Polyester-Catechin abgeschieden werden, allerdings wird es vor allem für die Analyse und Quantifizierung von Substanzen verwendet, wodurch der Polyester-Catechin nicht chargenweise abgeschieden und hergestellt werden.BACKGROUND ART The polyester catechins are vegetable phenol pigments, have antioxidant, antiviral, bacteriostatic and anti-cancer effects, and have better preventive and treatment effects for atherosclerosis, cerebral infarction, platelet aggregation, hypertension, hyperlipidemia and adipose metabolic disorders and other cardiovascular diseases of tea, the polyester catechins represent the compounds with significant effects and a potential for development and application at this stage. So far, eight types of polyester catechin have been separated from black tea or catechin oxides and identified, three of which have the highest levels in black tea which are polyester-catechin A (theasinensins A, abbreviated as TSA), polyester-catechin B (abbreviated as TSB) and polyester-catechin C (theasinensins C, abbreviated as TSC). The monomer components of different polyester catechins have their own unique properties and show different biological activities in different aspects. With the existing liquid phase chromatography analysis method, the mixture of different types of polyester-catechin can be separated, but it is mainly used for the analysis and quantification of substances, whereby the polyester-catechin is not separated and produced in batches.

INHALT DER ERFINDUNG Hinsichtlich der oben geschilderten Problem aus dem Stand der Technik stellt die vorliegende Erfindung eine technische Lösung eines Verfahrens zur chargenweisenCONTENT OF THE INVENTION With regard to the above-described problems from the prior art, the present invention provides a technical solution to a method for batch-wise

Abscheidung und Reinigung eines Polyester-Catechins mittels Gelchromatographie zur Verfügung. Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester-Catechins mittels Gelchromatographie, dadurch gekennzeichnet, dass es die folgenden Schritte umfasst: 1) Lösen des Polyester-Catechin-Extrakts mit Wasser oder einer wässrigen Ethanollösung, um eine Polyester-Catechin-Extraktlösung herzustellen; 2) Langsames Durchlassen der Polyester-Catechin-Extraktlösung durch eine mit dem Gelfüllstoff gefüllte Chromatographiesäule; 3) Durchführen einer Gradientenelution für die Chromatographiesäule mit einem Elutionslösungsmittel, wobei es sich bei dem Elutionslösungsmittel um ein durch Alkohole, anorganische Säuren und reines Wasser gebildetes Lösungsmittelgemisch handelt, jeweiliges Sammeln von drei Sorten von Eluaten, die nacheinander den Monomer des Polyester-Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester- Catechins C enthalten; 4) Jeweiliges Konzentrieren von den drei Sorten von Eluaten, um drei Sorten von Konzentraten zu erhalten, Trocknen, um drei Sorten von Polyester-Catechin- Monomeren des Polyester-Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester-Catechins C zu erhalten.Separation and purification of a polyester catechin using gel chromatography are available. A process for the batchwise separation and purification of a polyester-catechin by means of gel chromatography, characterized in that it comprises the following steps: 1) dissolving the polyester-catechin extract with water or an aqueous ethanol solution to produce a polyester-catechin extract solution; 2) slowly passing the polyester-catechin extract solution through a chromatography column filled with the gel filler; 3) Carrying out a gradient elution for the chromatography column with an elution solvent, the elution solvent being a solvent mixture formed by alcohols, inorganic acids and pure water, each collection of three types of eluates, which successively contain the monomer of polyester catechin A, of polyester-catechin B and polyester-catechin C; 4) Concentrating three kinds of eluates, respectively, to obtain three kinds of concentrates, drying to obtain three kinds of polyester-catechin monomers of polyester-catechin A, polyester-catechin B and polyester-catechin C.

Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester-Catechins mittels Gelchromatographie, dadurch gekennzeichnet, dass es sich im Schritt 2) bei dem Gelfüllstoff um ein vernetztes Dextrangel mit der PartikelgrôBe von 30-100 mesh handelt, bevorzugt 40-80 mesh, bevorzugter 50-70 mesh; wobei der Füllstoff des vernetzten Dextrangels in eine Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 26 mm und einer Länge von 800-1000 mm geladen wird, und wobei das Füllsäulenbett ein Volumen von 300-450 ml aufweist, aufeinanderfolgendes Spülen mit Wasser, 95% Ethanol und Wasser, um die Verunreinigungen zu entfernen. Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester-Catechins mittels Gelchromatographie, dadurch gekennzeichnet, dass es sich im Schritt 3) bei dem Alkohol in dem Elutionslösungsmittel um Methanol, Ethanol oder Aceton handelt, wobei der Alkohol eine Konzentration 30-90% aufweist; und wobei die Fliebgeschwindigkeit der chromatographischen Behandlung 0,5-5 Säulenbettvolumen/Stunde beträgt, bevorzugt 2-4 Säulenbettvolumen/Stunde, bevorzugter 3-3,5 Säulenbettvolumen/Stunde beträgt.Process for the batchwise separation and purification of a polyester catechin by means of gel chromatography, characterized in that in step 2) the gel filler is a cross-linked dextran gel with a particle size of 30-100 mesh, preferably 40-80 mesh, more preferably 50-70 mesh; wherein the filler of the crosslinked dextran gel is loaded into a chromatography column with a diameter of 26 mm and a length of 800-1000 mm, and wherein the filling column bed has a volume of 300-450 ml, successive rinsing with water, 95% ethanol and water, to remove the impurities. Process for batchwise separation and purification of a polyester catechin by means of gel chromatography, characterized in that in step 3) the alcohol in the eluting solvent is methanol, ethanol or acetone, the alcohol having a concentration of 30-90%; and wherein the flow rate of the chromatographic treatment is 0.5-5 column bed volumes / hour, preferably 2-4 column bed volumes / hour, more preferably 3-3.5 column bed volumes / hour.

Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester-Catechins mittels Gelchromatographie, dadurch gekennzeichnet, dass im Schritt 3) jeweils eine Gradientenelution mit einer Alkohollôsung von 20-30%, 50-60% und 80-90% bei der Raumtemperatur durchgeführt wird, wobei gemäß dem Säulenbettvolumen von 1/10- 1/20 die Eluate jeweils gesammelt werden, und wobei durch die Hochleistungsflüssigkeitsphasenchromatographie-Analyse die eluierten Komponenten kombiniert werden. Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester-Catechins mittels Gelchromatographie, dadurch gekennzeichnet, dass im Schritt 3) jeweils eine anorganische Säure zu einer Alkohollôsung zugegeben wird, wobei es sich bei dem Alkohol um Methanol und Essigsäure handelt, und wobei bei einem Elutionsgradienten der Alkohollösung von 50-60% die zugegebene Säuremenge 0,01-0,08% beträgt, während bei einem Elutionsgradienten der Alkohollösung von 80-90% die zugegebene Säuremenge 0,1-0,6% beträgt, und wobei die zugegebene Menge im Übereinstimmung mit dem Volumenverhältnis berechnet wird. Die vorliegende Erfindung hat folgende Vorteile: aus den Polyester-Catechin- Extrakten können gleichzeitig ein Monomer des Polyester-Catechins A, ein Monomer des Polyester-Catechins B und ein Monomer des Polyester-Catechins C hoher Reinheit abgeschieden werden, wodurch nach Bedarf ein Polyester-Catechin- Monomer von irgendeiner Sorte selektiv hergestellt werden kann, um die Erfordernisse der Entwicklung verschiedener Produkte in den Bereichen von Medizin, Lebensmittel, chemischer Industrie usw. zu erfüllen; zugleich kann die Nutzung des Polyester-Catechin-Extrakts erheblich verbessert werden, so dass er für die Entwicklung einer Vielzahl von Gesundheitsprodukten verwendet werden kann; dieses Verfahren eignet sich sehr gut für die Serienproduktion.Process for the batchwise separation and purification of a polyester catechin by means of gel chromatography, characterized in that in step 3) a gradient elution is carried out with an alcohol solution of 20-30%, 50-60% and 80-90% at room temperature, according to the column bed volume of 1 / 10-1 / 20, the eluates are respectively collected, and the eluted components are combined by the high-performance liquid phase chromatography analysis. Process for the batchwise separation and purification of a polyester catechin by means of gel chromatography, characterized in that in step 3) an inorganic acid is added to an alcohol solution, the alcohol being methanol and acetic acid, and an elution gradient of the alcohol solution of 50-60%, the amount of acid added is 0.01-0.08%, while when the elution gradient of the alcohol solution is 80-90%, the amount of acid added is 0.1-0.6%, and the amount added is in accordance with the volume ratio is calculated. The present invention has the following advantages: a monomer of polyester-catechin A, a monomer of polyester-catechin B and a monomer of polyester-catechin C of high purity can be separated from the polyester-catechin extracts, whereby a polyester- Catechin monomer of any kind can be selectively produced to meet the needs of developing various products in the fields of medicine, food, chemical industry, etc .; at the same time, the use of polyester-catechin extract can be greatly improved so that it can be used in the development of a wide variety of health products; this process is very suitable for series production.

KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN Figur 1 zeigt ein Flüssigphasen-Analysediagramm des in der ersten Ausführungsform abgeschiedenen und erhaltenen Polyester-Catechins A. Figur 2 zeigt ein Flüssigphasen-Analysediagramm des in der ersten Ausführungsform abgeschiedenen und erhaltenen Polyester-Catechins B. Figur 3 zeigt ein Flüssigphasen-Analysediagramm des in der ersten Ausführungsform abgeschiedenen und erhaltenen Polyester-Catechins C.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS Figure 1 shows a liquid phase analysis diagram of the polyester catechin A deposited and obtained in the first embodiment. Figure 2 shows a liquid phase analysis diagram of the polyester catechin B deposited and obtained in the first embodiment. Figure 3 shows a liquid phase analysis. Analysis diagram of the polyester catechin C deposited and obtained in the first embodiment.

AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG Im Zusammenhang mit Figuren und Ausführungsformen wird die vorliegende Erfindung im Folgenden näher erläutert. Ausführungsbeispiel 1 1) Die Polyester-Catechin-Extrakte nach der Oxidation von Tee-Polyphenolen werden als Rohstoff verwendet, wobei der Gesamtgehalt am Polyester-Catechin A, Polyester-Catechin B und Polyester-Catechin C 38% beträgt. 3 g von Polyester- Catechin-Extrakten werden genommen und in 25 ml Wasser als obere Säulenlösung gelöst; 2) Der Dextrangelfüllstoff mit einer PartikelgrôBe von 30-50 mesh wird in eine Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 26 mm und einer Länge von 800 mm geladen, wobei das Füllsäulenbett ein Volumen von 300 ml aufweist, aufeinanderfolgendes Spülen mit Wasser, 95% Ethanol und Wasser, um die Verunreinigungen zu entfernen; 3) Durchführen einer Gradientenelution bei der Raumtemperatur nacheinander mit einem Lösungsmittelgemisch von Methanol:Wasser = 30%:70%, Methanol:Wasser:Essigsäure = 50%:49,98%:0,02% und Methanol: Wasser:Essigsäure =80%:18,8%:0,2%, Eluieren von verschiedenen Sorten von Polyester-Catechin mit einer konstanten Fliebgeschwindigkeit von 4 BV/h (BV:Säulenvolumen, h: Stunde) aus der Säule, gemäß dem 1/10 Säulenbettvolumen werden die Eluate jeweils gesammelt, durch die Hochleistungsflüssigphasechromatographie-Analyse werden die eluierten Komponenten kombiniert, durch die Vakuumrotationsverdampfungskonzentration und die Gefriertrocknung werden drei Sorten von Polyester-Catechin- Monomerprodukten des Polyester-Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester-Catechins C erhalten, wobei der Polyester-Catechin A eine Reihnheit von 95%, der Polyester-Catechin B eine Reinheit ovn 98% und der Polyester-Catechin C eine Reinheit von 98% aufweist.DETAILED DESCRIPTION The present invention is explained in more detail below in connection with figures and embodiments. Embodiment 1 1) The polyester-catechin extracts after the oxidation of tea polyphenols are used as raw material, the total content of polyester-catechin A, polyester-catechin B and polyester-catechin C being 38%. 3 g of polyester catechin extracts are taken and dissolved in 25 ml of water as the upper column solution; 2) The dextran gel filler with a particle size of 30-50 mesh is loaded into a chromatography column with a diameter of 26 mm and a length of 800 mm, the filling column bed having a volume of 300 ml, successive rinsing with water, 95% ethanol and water to remove the impurities; 3) Carry out a gradient elution at room temperature in succession with a solvent mixture of methanol: water = 30%: 70%, methanol: water: acetic acid = 50%: 49.98%: 0.02% and methanol: water: acetic acid = 80% : 18.8%: 0.2%, elution of various types of polyester catechin at a constant flow rate of 4 BV / h (BV: column volume, h: hour) from the column, the eluates are according to the 1/10 column bed volume each collected, through the high-performance liquid phase chromatography analysis, the eluted components are combined, through the vacuum rotary evaporation concentration and the freeze-drying, three kinds of polyester-catechin monomer products of polyester-catechin A, polyester-catechin B and polyester-catechin C are obtained, with the Polyester-catechin A has a rank of 95%, polyester-catechin B has a purity of 98% and polyester-catechin C has a purity of 98%.

Ausführungsbeispiel 2 1) Die Polyester-Catechin-Extrakte nach der Oxidation von Tee-Polyphenolen werden als Rohstoff verwendet, wobei der Gesamtgehalt am Polyester-Catechin A, Polyester-Catechin B und Polyester-Catechin C 40% beträgt. 5 g von Polyester-Embodiment 2 1) The polyester-catechin extracts after the oxidation of tea polyphenols are used as raw material, the total content of polyester-catechin A, polyester-catechin B and polyester-catechin C being 40%. 5 g of polyester

Catechin-Extrakten werden genommen und in 25 ml Wasser als obere Säulenlösung gelöst; 2) Der Dextrangelfüllstoff mit einer PartikelgrôBe von 40-60 mesh wird in eine Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 26 mm und einer Länge von 5 1000 mm geladen, wobei das Füllsäulenbett ein Volumen von 400 ml aufweist, aufeinanderfolgendes Spülen mit Wasser, 95% Ethanol und Wasser, um die Verunreinigungen zu entfernen; 3) Durchführen einer Gradientenelution bei der Raumtemperatur nacheinander mit einem Lösungsmittelgemisch von Methanol:Wasser= 25%:75%, Methanol:Wasser:Essigsäure=50%:49,96%:0,04% und Methanol:Wasser:Essigsäure=80%:18,5%:0,5%, Eluieren von verschiedenen Sorten von Polyester-Catechin mit einer konstanten Fliebgeschwindigkeit von 3 BV/h (BV:Säulenvolumen, h: Stunde) aus der Säule, gemäß dem 1/12 Säulenbettvolumen werden die Eluate jeweils gesammelt, durch die Hochleistungsflüssigphasechromatographie-Analyse werden die eluierten Komponenten kombiniert, durch die Vakuumrotationsverdampfungskonzentration und die Gefriertrocknung werden drei Sorten von Polyester-Catechin- Monomerprodukten des Polyester-Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester-Catechins C erhalten, wobei der Polyester-Catechin A eine Reihnheit von 96%, der Polyester-Catechin B eine Reinheit ovn 98% und der Polyester-Catechin C eine Reinheit von 97% aufweist.Catechin extracts are taken and dissolved in 25 ml of water as the top column solution; 2) The dextran gel filler with a particle size of 40-60 mesh is loaded into a chromatography column with a diameter of 26 mm and a length of 5 1000 mm, the filling column bed having a volume of 400 ml, successive rinsing with water, 95% ethanol and Water to remove the impurities; 3) Carrying out a gradient elution at room temperature in succession with a solvent mixture of methanol: water = 25%: 75%, methanol: water: acetic acid = 50%: 49.96%: 0.04% and methanol: water: acetic acid = 80% : 18.5%: 0.5%, elution of different types of polyester catechin at a constant flow rate of 3 BV / h (BV: column volume, h: hour) from the column, the eluates are according to the 1/12 column bed volume each collected, through the high-performance liquid phase chromatography analysis, the eluted components are combined, through the vacuum rotary evaporation concentration and the freeze-drying, three kinds of polyester-catechin monomer products of polyester-catechin A, polyester-catechin B and polyester-catechin C are obtained, with the Polyester-catechin A has a rank of 96%, polyester-catechin B has a purity of 98% and polyester-catechin C has a purity of 97%.

Ausführungsbeispiel 3 1) Die Polyester-Catechin-Extrakte nach der Oxidation von Tee-Polyphenolen werden als Rohstoff verwendet, wobei der Gesamtgehalt am Polyester-Catechin A, Polyester-Catechin B und Polyester-Catechin C 45% beträgt. 5 g von Polyester- Catechin-Extrakten werden genommen und in 25 ml Wasser als obere Säulenlösung gelöst. 2) Der Dextrangelfüllstoff mit einer PartikelgrôBe von 50-70 mesh wird in eine Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 26 mm und einer Länge von 1000 mm geladen, wobei das Füllsäulenbett ein Volumen von 450 ml aufweist, aufeinanderfolgendes Spülen mit Wasser, 95% Ethanol und Wasser, um die Verunreinigungen zu entfernen;Embodiment 3 1) The polyester-catechin extracts after the oxidation of tea polyphenols are used as raw material, the total content of polyester-catechin A, polyester-catechin B and polyester-catechin C being 45%. 5 g of polyester catechin extracts are taken and dissolved in 25 ml of water as the upper column solution. 2) The dextran gel filler with a particle size of 50-70 mesh is loaded into a chromatography column with a diameter of 26 mm and a length of 1000 mm, the filling column bed having a volume of 450 ml, successive rinsing with water, 95% ethanol and water to remove the impurities;

3) Durchführen einer Gradientenelution bei der Raumtemperatur nacheinander mit einem Lösungsmittelgemisch von Methanol:Wasser= 20%:80%, Methanol:Wasser:Essigsäure= 55%:44,96%:0,04% und Methanol:Wasser:Essigsäure= 85%:14,5%:0,5%, Eluieren von verschiedenen Sorten von Polyester-Catechin mit einer konstanten Flie%geschwindigkeit von 2 BV/h (BV:Säulenvolumen, h: Stunde) aus der Säule, gemäß dem 1/15 Säulenbettvolumen werden die Eluate jeweils gesammelt, durch die Hochleistungsflüssigphasechromatographie-Analyse werden die eluierten Komponenten kombiniert, durch die Vakuumrotationsverdampfungskonzentration und die Gefriertrocknung werden drei Sorten von Polyester-Catechin- Monomerprodukten des Polyester-Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester-Catechins C erhalten, wobei der Polyester-Catechin A eine Reihnheit von 94%, der Polyester-Catechin B eine Reinheit von 97% und der Polyester-Catechin C eine Reinheit von 99% aufweist.3) Carrying out a gradient elution at room temperature in succession with a solvent mixture of methanol: water = 20%: 80%, methanol: water: acetic acid = 55%: 44.96%: 0.04% and methanol: water: acetic acid = 85% : 14.5%: 0.5%, eluting various kinds of polyester-catechin at a constant flow rate of 2 BV / h (BV: column volume, h: hour) from the column, according to which 1/15 column bed volume becomes the eluates are collected in each case, the eluted components are combined by the high-performance liquid phase chromatography analysis, three types of polyester-catechin monomer products of polyester-catechin A, polyester-catechin B and polyester-catechin C are obtained by vacuum rotary evaporation concentration and freeze-drying, wherein the polyester-catechin A has a grade of 94%, the polyester-catechin B has a purity of 97% and the polyester-catechin C has a purity of 99%.

Vergleichsbeispiel 1 1) Die Polyester-Catechin-Extrakte nach der Oxidation von Tee-Polyphenolen werden als Rohstoff verwendet, wobei der Gesamtgehalt am Polyester-Catechin A, Polyester-Catechin B und Polyester-Catechin C 45% beträgt. 5 g von Polyester- Catechin-Extrakten werden genommen und in 25 ml Wasser als obere Säulenlösung gelöst. 2) Der Dextrangelfüllstoff mit einer PartikelgrölBe von 100-110 mesh wird in eine Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 26 mm und einer Länge von 1000 mm geladen, wobei das Füllsäulenbett ein Volumen von 450 ml aufweist, aufeinanderfolgendes Spülen mit Wasser, 95% Ethanol und Wasser, um die Verunreinigungen zu entfernen. 3) Durchführen einer isokratischen Elution bei der Raumtemperatur mit Aceton:Wasser=80%:20%, wobei die ElutionsflieBgeschwindigkeit 4 BVh (BV:Säulenvolumen, h: Stunde) beträgt, gemäß dem 1/10 Säulenbettvolumen werden die Eluate jeweils gesammelt, durch die Hochleistungsflüssigphasechromatographie-Analyse werden die eluierten Komponenten kombiniert, durch die Vakuumrotationsverdampfungskonzentration und die Gefriertrocknung wird ein Gemisch des Polyester-Catechins A, desComparative Example 1 1) The polyester-catechin extracts after the oxidation of tea polyphenols are used as raw materials, the total content of polyester-catechin A, polyester-catechin B and polyester-catechin C being 45%. 5 g of polyester catechin extracts are taken and dissolved in 25 ml of water as the upper column solution. 2) The dextran gel filler with a particle size of 100-110 mesh is loaded into a chromatography column with a diameter of 26 mm and a length of 1000 mm, the filling column bed having a volume of 450 ml, successive rinsing with water, 95% ethanol and water to remove the impurities. 3) Carrying out an isocratic elution at room temperature with acetone: water = 80%: 20%, the elution flow rate being 4 BVh (BV: column volume, h: hour), according to the 1/10 column bed volume, the eluates are each collected through the High performance liquid phase chromatography analysis, the eluted components are combined, through the vacuum rotary evaporation concentration and the freeze-drying a mixture of the polyester-catechins A, des

Polyester-Catechins B und des Polyester-Catechins C erhalten, wobei der Gesamtgehalt 68% beträgt. Vergleichsbeispiel 2 1) Die Polyester-Catechin-Extrakte nach der Oxidation von Tee-Polyphenolen werden als Rohstoff verwendet, wobei der Gesamtgehalt am Polyester-Catechin A, Polyester-Catechin B und Polyester-Catechin C 45% beträgt. 5 g von Polyester- Catechin-Extrakten werden genommen und in 25 ml Wasser als obere Säulenlösung gelöst.Obtained polyester catechins B and the polyester catechins C, the total content being 68%. Comparative Example 2 1) The polyester-catechin extracts after the oxidation of tea polyphenols are used as raw material, the total content of polyester-catechin A, polyester-catechin B and polyester-catechin C being 45%. 5 g of polyester catechin extracts are taken and dissolved in 25 ml of water as the upper column solution.

2) Der Dextrangelfüllstoff mit einer PartikelgröBe von 120-140 mesh wird in eine Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 26 mm und einer Länge von 1000 mm geladen, wobei das Füllsäulenbett ein Volumen von 450 ml aufweist, aufeinanderfolgendes Spülen mit Wasser, 95% Ethanol und Wasser, um die Verunreinigungen zu entfernen.2) The dextran gel filler with a particle size of 120-140 mesh is loaded into a chromatography column with a diameter of 26 mm and a length of 1000 mm, the filling column bed having a volume of 450 ml, successive rinsing with water, 95% ethanol and water to remove the impurities.

3) Durchführen einer isokratischen Elution bei der Raumtemperatur mit Aceton:Wasser= 85%:15%, wobei die ElutionsflieBgeschwindigkeit 3 BV/h (BV:Säulenvolumen, h: Stunde) beträgt, gemäß dem 1/12 Säulenbettvolumen werden die Eluate jeweils gesammelt, durch die Hochleistungsflüssigphasechromatographie-Analyse werden die eluierten Komponenten kombiniert, durch die Vakuumrotationsverdampfungskonzentration und die Gefriertrocknung wird ein Gemisch des Polyester-Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester-Catechins C erhalten, wobei der Gesamtgehalt 72% beträgt.3) Carrying out an isocratic elution at room temperature with acetone: water = 85%: 15%, the elution flow rate being 3 BV / h (BV: column volume, h: hour), the eluates are collected according to the 1/12 column bed volume, the high-performance liquid phase chromatography analysis combines the eluted components; the vacuum rotary evaporation concentration and freeze-drying give a mixture of polyester-catechin A, polyester-catechin B and polyester-catechin C, the total content being 72%.

Vergleichsbeispiel 3 1) Die Polyester-Catechin-Extrakte nach der Oxidation von Tee-Polyphenolen werden als Rohstoff verwendet, wobei der Gesamtgehalt am Polyester-Catechin A, Polyester-Catechin B und Polyester-Catechin C 45% beträgt. 5 g von Polyester- Catechin-Extrakten werden genommen und in 25 ml Wasser als obere Säulenlösung gelöst.Comparative Example 3 1) The polyester-catechin extracts after the oxidation of tea polyphenols are used as raw material, the total content of polyester-catechin A, polyester-catechin B and polyester-catechin C being 45%. 5 g of polyester catechin extracts are taken and dissolved in 25 ml of water as the upper column solution.

2) Der Dextrangelfüllstoff mit einer PartikelgrölBe von 120-140 mesh wird in eine Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 26 mm und einer Länge von 1000 mm geladen, wobei das Füllsäulenbett ein Volumen von 450 ml aufweist,2) The dextran gel filler with a particle size of 120-140 mesh is loaded into a chromatography column with a diameter of 26 mm and a length of 1000 mm, the filling column bed having a volume of 450 ml,

aufeinanderfolgendes Spülen mit Wasser, 95% Ethanol und Wasser, um die Verunreinigungen zu entfernen.successive rinsing with water, 95% ethanol and water to remove the contaminants.

3) Durchführen einer isokratischen Elution bei der Raumtemperatur mit Aceton: Wasser= 90%:10%, wobei die ElutionsflieRgeschwindigkeit 2BV/h (BV:Säulenvolumen, h: Stunde) beträgt, gemäß dem 1/15 Säulenbettvolumen werden die Eluate Jeweils gesammelt, durch die Hochleistungsflüssigphasechromatographie-Analyse werden die eluierten Komponenten kombiniert, durch die Vakuumrotationsverdampfungskonzentration und die Gefriertrocknung wird ein Gemisch des Polyester-Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester-Catechins C erhalten, wobei der Gesamtgehalt 73% beträgt. Der Schutzumfang der vorliegenden Erfindung ist nicht nur auf die obigen Ausführungsformen beschränkt, alle Inhalte, die mit den technischen Linien und Lösungen der vorliegenden Erfindung identisch oder äquivalent sind, sollen als von dem Schutzumfang der vorliegenden Erfindung gedeckt angesehen werden.3) Carrying out an isocratic elution at room temperature with acetone: water = 90%: 10%, the elution flow rate being 2BV / h (BV: column volume, h: hour), according to the 1/15 column bed volume, the eluates are each collected by the high-performance liquid phase chromatography analysis, the eluted components are combined, through the vacuum rotary evaporation concentration and the freeze-drying, a mixture of polyester-catechins A, polyester-catechins B and polyester-catechins C is obtained, the total content being 73%. The scope of the present invention is not limited only to the above embodiments, and all contents identical or equivalent to the technical lines and solutions of the present invention are to be construed as being covered by the scope of the present invention.

Claims (5)

PatentansprücheClaims 1. Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester- Catechins mittels Gelchromatographie, dadurch gekennzeichnet, dass das Verfahren die folgenden Schritte umfasst: 1) Lösen des Polyester-Catechin-Extrakts mit Wasser oder einer Ethanollösung, um eine Polyester-Catechin-Extraktlösung herzustellen; 2) Langsames Durchlassen der Polyester-Catechin-Extraktlösung durch eine mit dem Gelfüllstoff gefüllte Chromatographiesäule; 3) Durchführen einer Gradientenelution für die Chromatographiesäule mit einem Elutionslösungsmittel, wobei es sich bei dem Elutionslösungsmittel um ein durch Alkohole, anorganische Säuren und reines Wasser gebildetes Lösungsmittelgemisch handelt, jeweiliges Sammeln von drei Sorten von Eluaten, die nacheinander den Monomer des Polyester-Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester- Catechins C enthalten; 4) Jeweiliges Konzentrieren von den drei Sorten von Eluaten, um drei Sorten von Konzentraten zu erhalten, Trocknen, um drei Sorten von Polyester-Catechin- Monomeren des Polyester-Catechins A, des Polyester-Catechins B und des Polyester-Catechins C zu erhalten.1. A process for the batchwise separation and purification of a polyester-catechin by means of gel chromatography, characterized in that the process comprises the following steps: 1) dissolving the polyester-catechin extract with water or an ethanol solution to produce a polyester-catechin extract solution; 2) slowly passing the polyester-catechin extract solution through a chromatography column filled with the gel filler; 3) Carrying out a gradient elution for the chromatography column with an elution solvent, the elution solvent being a solvent mixture formed by alcohols, inorganic acids and pure water, each collection of three types of eluates, which successively contain the monomer of polyester catechin A, of polyester-catechin B and polyester-catechin C; 4) Concentrating three kinds of eluates, respectively, to obtain three kinds of concentrates, drying to obtain three kinds of polyester-catechin monomers of polyester-catechin A, polyester-catechin B and polyester-catechin C. 2. Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester- Catechins mittels Gelchromatographie nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es sich im Schritt 2) bei dem Gelfüllstoff um ein vernetztes Dextrangel mit der Partikelgröle von 30-100 mesh handelt, bevorzugt 40-80 mesh, bevorzugter 50-70 mesh; wobei der Füllstoff des vernetzten Dextrangels in eine Chromatographiesäule mit einem Durchmesser von 26 mm und einer Länge von 800-1000 mm geladen wird, und wobei das Füllsäulenbett ein Volumen von 300-450 ml aufweist, aufeinanderfolgendes Spülen mit Wasser, 95% Ethanol und Wasser, um die Verunreinigungen zu entfernen.2. A process for the batchwise separation and purification of a polyester catechins by means of gel chromatography according to claim 1, characterized in that in step 2) the gel filler is a cross-linked dextran gel with a particle size of 30-100 mesh, preferably 40-80 mesh , more preferably 50-70 mesh; wherein the filler of the crosslinked dextran gel is loaded into a chromatography column with a diameter of 26 mm and a length of 800-1000 mm, and wherein the filling column bed has a volume of 300-450 ml, successive rinsing with water, 95% ethanol and water, to remove the impurities. 3. Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester- Catechins mittels Gelchromatographie nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es sich im Schritt 3) bei dem Alkohol in dem Elutionslösungsmittel um Methanol, Ethanol oder Aceton handelt, wobei der Alkohol eine Konzentration 30-90% aufweist;3. A process for the batchwise separation and purification of a polyester catechin by means of gel chromatography according to claim 1, characterized in that in step 3) the alcohol in the eluting solvent is methanol, ethanol or acetone, the alcohol having a concentration of 30-90 % having; und wobei die FlieRgeschwindigkeit der chromatographischen Behandlung 0,5-5 Säulenbettvolumen/Stunde beträgt, bevorzugt 2-4 Säulenbettvolumen/Stunde, bevorzugter 3-3,5 Säulenbettvolumen/Stunde beträgt.and wherein the flow rate of the chromatographic treatment is 0.5-5 column bed volumes / hour, preferably 2-4 column bed volumes / hour, more preferably 3-3.5 column bed volumes / hour. 4. Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester- Catechins mittels Gelchromatographie nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass im Schritt 3) jeweils eine Gradientenelution mit einer Alkohollösung von 20- 30%, 50-60% und 80-90% bei der Raumtemperatur durchgeführt wird, wobei gemäß dem Säulenbettvolumen von 1/10-1/20 die Eluate jeweils gesammelt werden, und wobei durch die Hochleistungsflüssigkeitsphasenchromatographie-Analyse die eluierten Komponenten kombiniert werden.4. A method for the batchwise separation and purification of a polyester catechin by means of gel chromatography according to claim 3, characterized in that in step 3) a gradient elution with an alcohol solution of 20-30%, 50-60% and 80-90% at room temperature is carried out, collecting the eluates each according to the column bed volume of 1 / 10-1 / 20, and combining the eluted components by the high-performance liquid phase chromatography analysis. 5. Verfahren zur chargenweisen Abscheidung und Reinigung eines Polyester- Catechins mittels Gelchromatographie nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass im Schritt 3) jeweils eine anorganische Säure zu einer Alkohollösung zugegeben wird, wobei es sich bei dem Alkohol um Methanol und Essigsäure handelt, und wobei bei einem Elutionsgradienten der Alkohollösung von 50-60% die zugegebene Säuremenge 0,01-0,08% beträgt, während bei einem Elutionsgradienten der Alkohollösung von 80-90% die zugegebene Säuremenge 0,1- 0,6% beträgt, und wobei die zugebene Menge im Übereinstimmung mit dem Volumenverhältnis berechnet wird.5. A method for the batchwise separation and purification of a polyester catechin by means of gel chromatography according to claim 4, characterized in that in step 3) an inorganic acid is added to an alcohol solution, the alcohol being methanol and acetic acid, and wherein with an elution gradient of the alcohol solution of 50-60%, the amount of acid added is 0.01-0.08%, while with an elution gradient of the alcohol solution of 80-90%, the amount of acid added is 0.1-0.6%, and the amount added is calculated in accordance with the volume ratio.
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