BE1023862B1 - AIRBORNE AND RESISTANT CONSTANTS OF FILAMENTOUS FUNGUS STRAINS AND PROCESS FOR OBTAINING THEM - Google Patents

AIRBORNE AND RESISTANT CONSTANTS OF FILAMENTOUS FUNGUS STRAINS AND PROCESS FOR OBTAINING THEM Download PDF

Info

Publication number
BE1023862B1
BE1023862B1 BE2016/5120A BE201605120A BE1023862B1 BE 1023862 B1 BE1023862 B1 BE 1023862B1 BE 2016/5120 A BE2016/5120 A BE 2016/5120A BE 201605120 A BE201605120 A BE 201605120A BE 1023862 B1 BE1023862 B1 BE 1023862B1
Authority
BE
Belgium
Prior art keywords
conidia
spores
trichoderma
strains
filamentous fungus
Prior art date
Application number
BE2016/5120A
Other languages
French (fr)
Other versions
BE1023862A1 (en
Inventor
Omran Zaki
Ahmed Sabri
Philippe Thonart
Frédéric Weekers
Philippe Jacques
Caroline LABÉ
Richard Bélanger
Original Assignee
Artechno Sa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Artechno Sa filed Critical Artechno Sa
Priority to BE2016/5120A priority Critical patent/BE1023862B1/en
Priority to EP17710489.0A priority patent/EP3420069A1/en
Priority to PCT/EP2017/053994 priority patent/WO2017144500A1/en
Priority to MA043708A priority patent/MA43708A/en
Publication of BE1023862A1 publication Critical patent/BE1023862A1/en
Application granted granted Critical
Publication of BE1023862B1 publication Critical patent/BE1023862B1/en

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14Fungi; Culture media therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N3/00Spore forming or isolating processes

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

La présente invention se rapporte à un procédé d'obtention de conidies ou spores de souches de champignons filamenteux, aux conidies ou spores obtenues et à leurs applications agronomiques et agro-alimentaires.The present invention relates to a process for obtaining conidia or spores of strains of filamentous fungi, conidia or spores obtained and their agronomic and agro-food applications.

Description

Conidies aériennes et résistantes de souches de champignons filamenteux et leur procédé d'obtentionAerial and resistant conidia of strains of filamentous fungi and their method of obtaining

Objet de l'invention [0001] La présente invention se rapporte au domaine de la lutte biologique, ou bio-contrôle, de nuisibles de cultures, et a trait en particulier à des conidies ou des spores, aériennes et résistantes, de souches de champignons filamenteux, en particulier des conidies ou des spores de Pseudozyma de Trichoderma ou de Pénicillium sous forme de poudre, ainsi qu'à leur procédé d'obtention et leurs applications, en tant qu'agent de lutte biologique ou dans 1'agroalimentaire.OBJECT OF THE INVENTION [0001] The present invention relates to the field of biological control, or bio-control, of pests of crops, and relates in particular to conidia or spores, aerial and resistant, of strains of fungi filamentous, in particular conidia or spores of Pseudozyma Trichoderma or Penicillium in powder form, and their method of production and their applications, as biological control agent or agrifood.

Arrière-plan technologique à la base de l'invention [0002] La lutte biologique, encore appelée bio contrôle, est une méthode connue pour la protection des végétaux contre par exemple des nuisibles, ravageurs de culture, comme les insectes, les acariens ou les nématodes, la protection ou le traitement contre des maladies, en particulier les maladies fongiques, bactériennes ou virales, ou une méthode de lutte contre les mauvaises herbes, plantes adventices, par l'utilisation, soit d'organismes vivants antagonistes, soit de produits biodégradables constitutifs de ces organismes, ou bien de métabolites produits par ces organismes, appelés agents de lutte biologique.BACKGROUND OF THE INVENTION [0002] Biological control, also called bio-control, is a known method for the protection of plants against, for example, pests, crop pests, such as insects, mites or mites. nematodes, protection or treatment against diseases, in particular fungal, bacterial or viral diseases, or a method of controlling weeds, weeds, by the use of either living antagonistic organisms or biodegradable products constituents of these organisms, or of metabolites produced by these organisms, called biological control agents.

[0003] Comme cette lutte met en jeu des organismes vivants, comme des prédateurs tels les nématodes, arthropodes, vertébrés, ou mollusques, ou à des agents pathogènes, tels des bactéries ou champignons, ou encore à des substances naturelles herbivores, ou phytophages, ou à des constituants ou métabolites produits par ces organismes vivants, elle présente l'avantage de se faire sans recours à des pesticides chimiques.As this fight involves living organisms, such as predators such as nematodes, arthropods, vertebrates, or molluscs, or pathogens, such as bacteria or fungi, or natural herbivorous substances, or phytophages, or to constituents or metabolites produced by these living organisms, it has the advantage of being made without the use of chemical pesticides.

[0004] En effet, avec toute la problématique provoquée par les pesticides chimiques sur l'environnement, il y a un intérêt croissant à exploiter des nouvelles matières biologiques, ou des nouveaux organismes vivants, tels que par exemple des champignons filamenteux, ou leurs métabolites primaires ou secondaires, pour le contrôle des parasites, des mauvaises herbes et/ou des maladies.Indeed, with all the problems caused by chemical pesticides on the environment, there is a growing interest in exploiting new biological materials, or new living organisms, such as for example filamentous fungi, or their metabolites. primary or secondary, for the control of pests, weeds and / or diseases.

[0005] De plus, il est à noter que, pour ce qui concerne en particulier la lutte biologique fongique, cette dernière s'articule autour de multiples disciplines, telle que la pathologie de la souche utilisée, l'écologie, la physiologie, la production de masse, la formulation et les stratégies d'application.In addition, it should be noted that, particularly with regard to fungal biological control, the latter is articulated around multiple disciplines, such as the pathology of the strain used, ecology, physiology, mass production, formulation and application strategies.

[0006] Il existe un grand nombre de souches de champignons, en particulier des champignons filamenteux, qui ont un grand intérêt agroalimentaire et agronomique, en particulier comme agents de bio-contrôle, notamment comme fongicides, mais qui ne sont pas encore pleinement exploitées en raison de la difficulté à les faire sporuler en culture liquide.There are a large number of strains of fungi, in particular filamentous fungi, which have a great agri-food and agronomic interest, particularly as bio-control agents, especially as fungicides, but which are not yet fully exploited. because of the difficulty to sporulate them in liquid culture.

[0007] Par exemple, Pseudozyma flocculosa est une souche connue de champignon phyllosphère épiphyte, faisant partie de la classe des Basidiomycètes et appartenant à l'ordre des Ustilaginale.For example, Pseudozyma flocculosa is a known strain of phyllosphere fungus epiphyte, belonging to the class Basidiomycetes and belonging to the order Ustilaginale.

[0008] Sa classification définitive a été établie en 1995 par Boekhout sur la base d'analyses approfondies sur le plan génétique. Actuellement, ce champignon est classé dans le genre Pseudozyma apparenté aux Ustilaginales du phylum des Basidiomycètes (Boekhout 1995) . La taxonomie complète de ce champignon est consignée dans le tableau 1.Its definitive classification was established in 1995 by Boekhout on the basis of in-depth genetic analyzes. Currently, this fungus is classified as Pseudozyma related to the Ustilaginales of the phylum Basidiomycetes (Boekhout 1995). The complete taxonomy of this fungus is recorded in Table 1.

Tableau 1. Description taxonomique de Pseudozyma flocculosa (Taxonomy ID: 84751).Table 1. Taxonomic description of Pseudozyma flocculosa (Taxonomy ID: 84751).

[0009] Ce champignon est reconnu comme agent de lutte biologique très efficace contre le blanc induit parThis fungus is recognized as a very effective biological control agent against white induced by

Erysiphe poligoni, de plusieurs plantes dont le rosier et le concombre.Erysiphe poligoni, several plants including rose and cucumber.

[0010] Par ailleurs, le genre Trichoderma est également connu pour regrouper un ensemble de champignons qui se retrouvent couramment dans le sol, sur le bois mort, les débris végétaux et la partie aérienne des plantes.Moreover, the genus Trichoderma is also known to group a group of fungi that are commonly found in the soil, on dead wood, plant debris and the aerial part of plants.

[0011] De nombreuses espèces de Trichoderma se sont avérés efficaces comme agents biologiques contre par exemple Pythium, Phytophthora cinnamomi, Rhizoctonia solanir Sclerotium rolfsiie et Cryphonectria parasitica. Ces champignons pathogènes causent d'importants dégâts dans les cultures fruitières, légumières, en serre et ornementales.Many species of Trichoderma have been found effective as biological agents against eg Pythium, Phytophthora cinnamomi, Rhizoctonia solanir Sclerotium rolfsiie and Cryphonectria parasitica. These pathogenic fungi cause significant damage to fruit, vegetable, greenhouse and ornamental crops.

[0012] Les performances de Trichoderma atroviride comme agent de lutte biologique est due en partie à la production d'endochitinase et il a également été montré que ce champignon intervient, selon divers mécanismes et à divers niveaux, dans la stimulation de la croissance racinaire par l'utilisation de minéraux fertilisants et la stimulation des défenses naturelles des plantes.The performance of Trichoderma atroviride as a biological control agent is due in part to the production of endochitinase and it has also been shown that this fungus intervenes, according to various mechanisms and at various levels, in the stimulation of root growth by the use of fertilizing minerals and the stimulation of natural plant defenses.

[0013] Par ailleurs, il est connu que les champignons des divisions de Zygomycètes, Ascomycètes et Basidiomycètes produisent des spores asexuées appelées conidies, leur permettant une propagation végétative rapide. Par contre, chez les Deutéromycètes, dits aussi champignons imparfaits, le cycle sexuel n'a jamais été observé et la reproduction se fait uniquement par voie asexuée, via la production de conidies.Furthermore, it is known that the fungi of the divisions of Zygomycetes, Ascomycetes and Basidiomycetes produce asexual spores called conidia, allowing them rapid vegetative propagation. On the other hand, in Deuteromycetes, also called imperfect fungi, the sexual cycle has never been observed and the reproduction is done only asexually, via the production of conidia.

[0014] Les conidies ou spores sont les principaux moyens de protection, et de conservation, des génomes fongiques, grâce à leur résistance aux traitements de conditionnement et aux conditions environnementales hostiles, telles que les températures extrêmes, les rayons ultraviolets et les faibles valeurs d'humidité relative. A titre d'exemple, une partie des conidies ou spores d'Aspergillus niger maintiennent leur capacité de germination après passage dans un autoclave pendant une heure à 120°C (Morozova et al 2001) .Conidia or spores are the main means of protection, and conservation, fungal genomes, thanks to their resistance to conditioning treatments and hostile environmental conditions, such as extreme temperatures, ultraviolet rays and low light levels. 'relative humidity. For example, some of the conidia or spores of Aspergillus niger maintain their germinability after passage through an autoclave for one hour at 120 ° C (Morozova et al 2001).

[0015] En outre, la production de ces spores asexuées, ou conidies, est essentielle dans le cycle de vie de nombreux champignons. Elle forme le principal moyen de dispersion pour le génome fongique dans des conditions environnementales défavorables.In addition, the production of these asexual spores, or conidia, is essential in the life cycle of many fungi. It forms the primary means of dispersal for the fungal genome under adverse environmental conditions.

[0016] De nombreux obstacles restent à surmonter afin de pouvoir commercialiser des agents de lutte biologique fongique à base de champignons filamenteux, notamment du fait de leur faible aptitude à être stocké sur des longues périodes, en particulier à cause de la faible viabilité des conidies ou spores issues d'une fermentation liquide.Many obstacles remain to be overcome in order to market fungal biological control agents based on filamentous fungi, especially because of their low ability to be stored over long periods, especially because of the low viability of conidia. or spores from a liquid fermentation.

[0017] De nombreux champignons, y compris les filamenteux, peuvent être cultivés dans des milieux liquides, c'est-à-dire au cours d'une phase de fermentation dite liquide. Toutefois, la fermentation liquide est particulièrement problématique.Many fungi, including filamentous, can be grown in liquid media, that is to say during a so-called liquid fermentation phase. However, liquid fermentation is particularly problematic.

[0018] Dans cet environnement liquide, selon les espèces, les Hyphomycètes peuvent être amenés à se développer sous des formes diverses, y compris, les organismes hyphes unicellulaires à paroi mince, quelques formes dénommées blastospores, et les conidies ou spores submergées. Ces dernières sont obtenues soit directement à partir de blastospores microcycles, par conidiation, ou soit à partir de cellules conidiogènes qui se forment sur les hyphes submergées.In this liquid environment, depending on the species, Hyphomycetes can be caused to develop in various forms, including thin-walled unicellular hyphae, some forms called blastospores, and submerged conidia or spores. These are obtained either directly from blastospores microcycles, by conidiation, or from conidiogenic cells that form on submerged hyphae.

[0019] En général, la méthode préférée pour la production de conidies ou spores à grande échelle est la culture submergée en raison d'une part de sa bonne rentabilité, sa courte durée de production, et la disponibilité de tous les matériaux nécessaires pour une fermentation liquide.In general, the preferred method for the production of conidia or spores on a large scale is the submerged culture because of a part of its good profitability, its short production time, and the availability of all the materials necessary for a liquid fermentation.

[0020] Malgré tous ses avantages, les conidies ou spores produites par cette technique ont une trop courte durée de vie dans des conditions environnementales défavorables. C'est pourquoi, la plupart des agents de biocontrôle, à base de conidies ou spores submergées, nécessitent une utilisation immédiate sur les plantes et les terrains infestés par les ravageurs, qu'ils soient fongiques ou d'insectes.Despite all its advantages, the conidia or spores produced by this technique have too short a life in adverse environmental conditions. As a result, most biocontrol agents, based on conidia or submerged spores, require immediate use on pest infested plants and sites, whether fungal or insect-borne.

[0021] Il est également possible de produire des conidies par fermentation sur un support ou un substrat solide, dite aussi phase ou fermentation solide.It is also possible to produce conidia by fermentation on a support or a solid substrate, also called phase or solid fermentation.

[0022] Bien que la fermentation solide soit connue depuis longtemps, elle n'a jamais connu un véritable essor industriel et a souvent été délaissée pour la culture en milieu liquide.Although solid fermentation has been known for a long time, it has never experienced a real industrial boom and has often been abandoned for culture in liquid medium.

[0023] La fermentation solide présente plusieurs difficultés pour ce qui concerne de nombreuses espèces de champignons. Paecilomyces fumosoroseus, par exemple, a besoin de lumière pour une production optimale de conidies aériennes (Wraight et al. 2001), et la production efficace de conidies de cette souche de champignon nécessite donc une culture en surface, ou une agitation périodique des supports ou substrats solides particulaires, pour augmenter l'exposition à la lumière. Les conidies ou spores de Verticillium se développent, quant à elles, en globules collantes produites à des densités relativement faibles sur une croissance d'hyphes, alors que celles d'aschersonia doivent être produites en circonvolutions, ou sous forme de fosses dans un stroma dense.The solid fermentation has several difficulties with regard to many species of fungi. Paecilomyces fumosoroseus, for example, needs light for optimal production of aerial conidia (Wraight et al., 2001), and the efficient production of conidia of this fungal strain therefore requires surface culture, or periodic agitation of the media or particulate solid substrates, to increase the exposure to light. Verticillium conidia or spores, in turn, develop into sticky globules produced at relatively low densities on hyphae growth, whereas those of aschersonia must be produced in convolutions, or as pits in a dense stroma. .

[0024] Par ailleurs, l'augmentation de la température et le changement de pH durant la phase de croissance végétative est un problème critique dans le domaine de fermentation solide (Smits et al. 1998).In addition, the increase in temperature and the change in pH during the vegetative growth phase is a critical problem in the solid fermentation field (Smits et al., 1998).

[0025] L'intérêt pour la fermentation en milieu solide n'est pas nouveau, pourtant ce mode de culture n'a jamais été développé à cause des difficultés de contrôle des paramètres physico-chimiques de la culture. En effet, la production massive de conidies ou spores doit être initiée à un stade de développement végétatif du mycélium, durant lequel il faut non seulement maintenir les conditions optimales de croissance (température, aération, humidité, pH) , mais également contrôler la différenciation du mycélium et empêcher un phénomène de sporulation précoce qui peut réduire fortement le rendement de production (Raimbault & Durand 1980) .The interest in fermentation in solid medium is not new, yet this mode of culture has never been developed because of difficulties in controlling the physico-chemical parameters of the culture. In fact, the massive production of conidia or spores must be initiated at a stage of vegetative development of the mycelium, during which it is necessary not only to maintain the optimal growth conditions (temperature, aeration, humidity, pH), but also to control the differentiation of the mycelium and prevent an early sporulation phenomenon that can greatly reduce production yield (Raimbault & Durand 1980).

[0026] De plus, le problème d'évacuation de la chaleur, produite lors de la fermentation solide, semble particulièrement difficile à résoudre. En effet, la chaleur dégagée par les réactions métaboliques, lors de la phase de croissance végétative, peut être délétère si la température dépasse les seuils limites permis. Il en est de même pour l'évolution du pH qui est quasiment impossible à réguler en l'absence de circulation de liquide (Pandey 2003).In addition, the problem of heat removal, produced during the solid fermentation, seems particularly difficult to solve. Indeed, the heat released by the metabolic reactions, during the vegetative growth phase, can be deleterious if the temperature exceeds the allowed thresholds. It is the same for the evolution of the pH which is almost impossible to regulate in the absence of circulation of liquid (Pandey 2003).

[0027] A ces difficultés, liées à la fermentation s'ajoute un autre inconvénient, aussi important, lié au fait qu'en fin de culture on se trouve avec des conidies ou spores mélangées à de grandes quantités de mycélium et de résidus du support ou substrat solide, ce qui peut réduire la qualité du produit final obtenu et les possibilités d'application de celui-ci, notamment dans le domaine agroalimentaire.To these difficulties, related to the fermentation is added another disadvantage, as important, related to the fact that at the end of culture we are with conidia or spores mixed with large amounts of mycelium and residues of the support or solid substrate, which can reduce the quality of the final product obtained and the application possibilities thereof, particularly in the agri-food field.

Etat de la technique [0028] La demande de brevet W02009/037399 décrit un procédé de production de conidies ou spores, et de leurs métabolites, sur un support, ou substrat, solide par une fermentation classique, la phase de croissance se faisant également sur un tel support. Le milieu solide doit comporter un support ou substrat solide adéquat, c'est-à-dire un support ou substrat absorbant de faible densité et pratiquement non fermentable, mais imprégné d'un milieu de culture approprié à la croissance des conidies ou spores de champignons. Le procédé consiste en l'application d'un stress hydrique durant la phase de production des spores.STATE OF THE ART The patent application WO2009 / 037399 describes a process for producing conidia or spores, and their metabolites, on a support, or substrate, solid by a conventional fermentation, the growth phase also being carried out on such a support. The solid medium must comprise a suitable solid support or substrate, that is to say a support or absorbent substrate of low density and practically non-fermentable, but impregnated with a culture medium suitable for the growth of conidia or spores of fungi . The process involves the application of water stress during the spore production phase.

[0029] La demande de brevet EP2390345 décrit la production de métabolites et autres molécules d'intérêt par fermentation en milieu solide sur de multiples supports ou substrats solides, tels que de la biomasse végétale, en particulier des produits agricoles comme des céréales, des sous-produits de l'industrie agroalimentaire forestière, papetière ou des boues d'épuration.The patent application EP2390345 describes the production of metabolites and other molecules of interest by fermentation in a solid medium on multiple supports or solid substrates, such as plant biomass, in particular agricultural products such as cereals, sub-products. -products of the agri-food industry, pulp or sewage sludge.

[0030] Le brevet US 4 837 155 décrit une méthode de production de la souche Trichoderma en phase liquide et en condition aérobie à des températures comprises entre environ 25°C et environ 30°C et à un pH compris entre environ 5,8 et environ 7,0, pour générer à partir d'un inoculant, une densité de conidies d'au moins 5 x 108 par ml, mais sans aucune phase de maturation sur support solide.US Pat. No. 4,837,155 describes a method for producing the Trichoderma strain in the liquid phase and under aerobic conditions at temperatures of between about 25 ° C. and about 30 ° C. and at a pH of between about 5.8 and about 7.0, to generate from an inoculant a conidial density of at least 5 x 108 per ml, but without any solid support maturation phase.

[0031] Le document EP0223809 décrit un procédé de production de conidies ou spores de champignons filamenteux dans un fermenteur à disques rotatifs en phase liquide.EP0223809 discloses a process for producing conidia or spores of filamentous fungi in a rotary disk fermentor in the liquid phase.

[0032] Il est aussi connu d'obtenir un compostage accéléré grâce à une combinaison d'une fermentation liquide et solide générant une grande quantité de biomasse sur un support non inerte fermentable, qui sera dégradé par le développement des souches et qui peut devenir un compost comprenant des conidies de Trichoderma sp.It is also known to obtain accelerated composting through a combination of a liquid and solid fermentation generating a large amount of biomass on a fermentable non-inert support, which will be degraded by the development of the strains and which can become a compost comprising conidia of Trichoderma sp.

[0033] Ainsi, il apparaît que les procédés connus de l'état de technique effectuent toutes les étapes de production de souches de champignons, ou de métabolites issus de ces souches de champignons, soit uniquement en phase liquide, soit uniquement en phase solide sur un substrat adéquat.Thus, it appears that the methods known from the state of the art perform all steps of production of strains of fungi, or metabolites from these strains of fungi, either only in the liquid phase, or only in solid phase on a suitable substrate.

Buts de l'invention [0034] La présente invention vise à obtenir des souches de champignons filamenteux présentant un intérêt agronomique ou agroalimentaire, utilisables sous forme solide, en particulier sous forme d'une poudre, ainsi qu'un nouveau procédé d'obtention de ces souches, en particulier sous forme de poudre et qui ne présentent pas les inconvénients de l'état de la technique.OBJECTS OF THE INVENTION The present invention aims to obtain strains of filamentous fungi of agronomic or agri-food interest, usable in solid form, in particular in the form of a powder, as well as a new process for obtaining these strains, in particular in the form of powder and which do not have the drawbacks of the state of the art.

[0035] En particulier, la présente invention vise à fournir des souches de champignons filamenteux qui soient aisément manipulables, présentent une viabilité améliorée, en particulier après des longues durées de conservation, et éventuellement d'une haute pureté, c'est dire des souches essentiellement dépourvues de contaminants et/ou de résidus du support de culture, afin de pouvoir les utiliser pour des applications agronomiques ou agroalimentaires, en particulier pour la préparation de fromages ou de charcuteries.In particular, the present invention aims to provide strains of filamentous fungi that are easily manipulated, have improved viability, especially after long storage times, and possibly high purity, ie strains essentially free of contaminants and / or residues of the culture medium, in order to be able to use them for agronomic or agri-food applications, in particular for the preparation of cheeses or cold meats.

[0036] Un autre but de la présente invention est d'obtenir un procédé d'obtention desdits champignons filamenteux, de préférence sous forme de poudre de conidies ou spores ou de leurs métabolites primaires ou secondaires, en particulier un procédé qui soit rapide, de conception simple, qui présente un rendement efficace et dont les paramètres physico-chimiques de chaque étape soient aisément contrôlables.Another object of the present invention is to obtain a process for obtaining said filamentous fungi, preferably in the form of powder of conidia or spores or of their primary or secondary metabolites, in particular a process which is rapid, of simple design, which has an efficient efficiency and whose physicochemical parameters of each stage are easily controllable.

[0037] Un denier but de l'invention vise à obtenir un support ou substrat solide adéquat pour la maturation de conidies ou spores de champignons filamenteux.A purpose of the invention is to provide a support or solid substrate suitable for the maturation of conidia or spores of filamentous fungi.

Eléments caractéristiques de l'invention [0038] La présente invention concerne un procédé d'obtention de conidies ou spores de souches de champignons filamenteux comprenant les étapes suivantes : croître des champignons filamenteux durant une première phase de croissance mycélienne en phase liquide, pour générer une biomasse mycélienne, mélanger ladite biomasse mycélienne obtenue avec un support solide inerte, générer des conidies ou spores durant une seconde phase de maturation de ladite biomasse mycélienne sur ledit support solide inerte, éventuellement sécher les conidies ou les spores obtenues, et éventuellement extraire une ou plusieurs molécules d'intérêt des conidies ou des spores obtenues.Characteristic Elements of the Invention The present invention relates to a process for obtaining conidia or spores of strains of filamentous fungi comprising the steps of: growing filamentous fungi during a first phase of mycelial growth in the liquid phase, to generate a mycelial biomass, mixing said obtained mycelial biomass with an inert solid support, generating conidia or spores during a second phase of maturation of said mycelial biomass on said inert solid support, optionally drying the conidia or spores obtained, and optionally extracting one or more molecules of interest conidia or spores obtained.

[0039] Dans le procédé de l'invention, le support solide inerte est le son d'une céréale, en particulier du son de blé, de préférence un tissu dans lequel les cellules du son de la céréale formant le support solide inerte sont dépourvues de leurs fractions fermentescibles, en particulier d'amidon.In the process of the invention, the inert solid support is the sound of a cereal, in particular wheat bran, preferably a tissue in which the cereal bran cells forming the inert solid support are devoid of of their fermentable fractions, in particular starch.

[0040] Dans le procédé de l'invention, la phase de maturation génère une concentration en conidies ou spores comprise, de préférence entre 3xE+08 et 5xl09 conidies/g pour Pseudozyma flocculosa, et entre lE+09 et 5xl010 conidies/g, pour Trichoderma atroviride et entre 5xE+8 et lxE+10 conidies/g de conidies de Trichoderma harzianum.In the process of the invention, the maturation phase generates a concentration of conidia or spores, preferably between 3xE + 08 and 5x10 9 conidia / g for Pseudozyma flocculosa, and between E + 09 and 5x10 10 conidia / g, for Trichoderma atroviride and between 5xE + 8 and 1xE + 10 conidia / g conidia of Trichoderma harzianum.

[0041] Dans le procédé de l'invention, la durée d'obtention des conidies ou des spores est avantageusement inférieure à trois semaines, de préférence inférieure à deux semaines, plus particulièrement inférieure à une semaine.In the process of the invention, the duration of conidia or spores is advantageously less than three weeks, preferably less than two weeks, more particularly less than one week.

[0042] Selon l'invention, le champignon filamenteux est de préférence du genre Pseudozyma sp. , en particulier Pseudozyma flocculosa, du genre Tricoderma sp. , en particulier Trichoderma harzianum, Trichoderma atroviride, Trichoderma hamatum, et Trichoderma viride, du genre Penicilum sp. , en particulier Penicilium camemberti etAccording to the invention, the filamentous fungus is preferably of the genus Pseudozyma sp. , in particular Pseudozyma flocculosa, of the genus Tricoderma sp. , in particular Trichoderma harzianum, Trichoderma atroviride, Trichoderma hamatum, and Trichoderma viride, of the genus Penicilum sp. , especially Penicilium camemberti and

Penicilium nalgiovense, du genre Metarhizium sp. ou du genre Bauveria sp.Penicilium nalgiovense, of the genus Metarhizium sp. or of the genus Bauveria sp.

[0043] Un autre aspect de l'invention concerne les conidies ou les spores de souches de champignons filamenteux obtenues par le procédé de l'invention, résistantes à la dessiccation et se conservant à l'état sec durant une période supérieure à trois mois, de préférence comprise entre trois mois et vingt-quatre mois, voire plus de vingt-quatre mois, à une température ambiante, c'est à dire une température comprise entre environ 15°c et environ 30°C, plus particulièrement une température comprise entre environ 20°C et environ 30°C.Another aspect of the invention relates to the conidia or spores of strains of filamentous fungi obtained by the process of the invention, resistant to desiccation and stored in the dry state for a period greater than three months, preferably between three months and twenty-four months, or even more than twenty-four months, at an ambient temperature, that is to say a temperature of between about 15 ° C. and about 30 ° C., more particularly a temperature between about 20 ° C and about 30 ° C.

[0044] L'invention concerne aussi les conidies ou des spores de souches de champignons filamenteux matures, du genre Pseudozyma sp. , en particulier Pseudozyma flocculosa, dont la fraction cytoplasmique est chargée de réserve et enrichie en mélanine.The invention also relates to conidia or spores of strains of mature filamentous fungi, of the genus Pseudozyma sp. , in particular Pseudozyma flocculosa, whose cytoplasmic fraction is charged with reserve and enriched with melanin.

[0045] Un autre aspect de l'invention concerne une poudre de conidies ou spores de l'invention, en particulier une poudre de conidies ou de spores obtenue par le procédé de 1'invention.Another aspect of the invention relates to a conidia or spore powder of the invention, in particular a conidia or spore powder obtained by the process of the invention.

[0046] L'invention concerne aussi des compositions alimentaires, en particulier des charcuteries et des fromages comprenant les conidies, les spores ou la poudre de conidies ou de spores de l'invention.The invention also relates to food compositions, in particular sausages and cheeses comprising the conidia, spores or conidia powder or spores of the invention.

[0047] Un dernier aspect de l'invention concerne l'utilisation des conidies, les spores ou de la poudre de conidies ou de spores de l'invention contre la prolifération de nuisibles, en particulier des champignons, des bactéries, des virus ou des insectes, de plantes ou de fruits, pour favoriser la croissance des plantes, en particulier la croissance des racines de plantes, la germination et le taux de croissance cellulaire desdites plantes. De préférence, cette plante ou ce fruit est choisi parmi le groupe constitué par le rosier, les cucurbitacées, en particulier le concombre, la courge ou le melon, la tomate, la fraise, la framboise, la groseille, la vigne, le raisin la pomme, le pommier, la poire, le poirier, la prune, le prunier et la pomme de terre.A final aspect of the invention relates to the use of conidia, spores or conidial or spore powder of the invention against the proliferation of pests, in particular fungi, bacteria, viruses or viruses. insects, plants or fruits, to promote plant growth, in particular the growth of plant roots, germination and the cell growth rate of said plants. Preferably, this plant or this fruit is chosen from the group constituted by the rose bush, the cucurbits, in particular cucumber, squash or melon, tomato, strawberry, raspberry, gooseberry, grape, grape or grape. apple, apple, pear, pear, plum, plum and potato.

[0048] Un dernier aspect de la présente invention concerne l'utilisation des conidies, des spores ou la poudre de conidies ou de spores de l'invention pour la préparation de compositions alimentaires, en particulier des charcuteries et des fromages.A final aspect of the present invention relates to the use of conidia, spores or the powder of conidia or spores of the invention for the preparation of food compositions, especially sausages and cheeses.

[0049] La présente invention sera décrite dans la description détaillée ci-dessous en référence aux figures présentées à titre d'illustrations non limitatives de 1'invention.The present invention will be described in the detailed description below with reference to the figures presented by way of non-limiting illustrations of the invention.

Brève description des figures [0050] La figure 1 représente schématiquement la procédure de production de poudre de conidies ou spores selon l'invention combinant avantageusement une première étape fermentation en phase liquide générant de la biomasse mycélienne suivie d'une seconde étape de maturation, dite phase de sporulation, en phase solide.BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES [0050] FIG. 1 schematically represents the procedure for producing conidia or spore powder according to the invention, advantageously combining a first fermentation stage in the liquid phase generating mycelial biomass followed by a second stage of maturation, so-called phase of sporulation, in solid phase.

[0051] La figure 2 en A) est une observation au microscope binoculaire G:40x et qui représente la structure d'une particule de son de blé ayant subi un curetage enzymatique. Ces cellules sont vidées de leurs contenus et acquièrent une structure alvéolaire en nid d'abeilles fortement aérée ; en B) et C) sont des coupes histologiques d'environ 50 pm d'un tissu imprégné dans une résine époxy, après une fixation au glutaraldehyde et au tétroxyde d'osmium et une révélation au bleu de toluidine B) est la coupe transversale d'une particule de son avant traitement enzymatique. Les cellules sont chargées de réserves, et C) est la coupe transversale d'une particule du dérivé du son formant le support ou substrat solide inerte de l'invention et utilisé dans le procédé de l'invention. Les cellules sont vidées de leurs contenus suite aux traitements enzymatiques successifs, cette nouvelle structure du support ou substrat solide inerte l'invention est propice à une grande capacité d'absorption de liquides.Figure 2 in A) is a binocular microscope observation G: 40x and which represents the structure of a wheat bran particle having undergone enzymatic curettage. These cells are emptied of their contents and acquire a honeycomb honeycomb structure highly aerated; in B) and C) are histological sections of about 50 μm of a fabric impregnated in an epoxy resin, after fixation with glutaraldehyde and osmium tetroxide and a revelation with toluidine blue B) is the cross section of a particle of sound before enzymatic treatment. The cells are loaded with reserves, and C) is the cross section of a particle of the sound derivative forming the inert solid support or substrate of the invention and used in the process of the invention. The cells are emptied of their contents following the successive enzymatic treatments, this new structure of the support or solid substrate inert the invention is conducive to a large liquid absorption capacity.

Description détaillée de l'invention [0052] De nombreuses souches de champignons ne sporulent que faiblement, de façon aléatoire et non stable dans le temps en culture liquide, ce qui représente un frein majeur à leur commercialisation et leurs applications.DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [0052] Many strains of fungi sporulate only slightly, randomly and not stable over time in liquid culture, which represents a major obstacle to their marketing and their applications.

[0053] Le procédé selon la présente invention combine, pour la première fois, une première étape dite de croissance pour générer une biomasse mycélienne en milieu ou en phase liquide et une seconde étape dite de maturation en milieu ou en phase solide sur un support ou substrat solide inerte adéquat, qui soit naturel, c'est-à-dire obtenu à partir de matière biologique renouvelable, ou qui soit de synthèse, en particulier des billes de gel de dextrane ou d'agarose ou un dérivé plastique du pétrole, de préférence recyclable, tel que du polystyrène expansé sous forme de billes ou sous une forme alvéolaire adéquate.The method according to the present invention combines, for the first time, a first so-called growth stage for generating a mycelial biomass in a medium or in a liquid phase and a second stage called maturation in a medium or in a solid phase on a support or suitable inert solid substrate, which is natural, that is to say obtained from renewable biological material, or which is synthetic, in particular dextran or agarose gel beads or a plastic derivative of petroleum, of preferably recyclable, such as expanded polystyrene in the form of beads or in an adequate cellular form.

[0054] En effet, ce support ou substrat solide doit présenter les caractéristiques suivantes : être inerte, non dégradable et sans nutriments, c'est-à-dire non ou peu fermentable et donc non ou peu accessible au développement bactérien et à la dégradation bactérienne ; présenter une structure alvéolaire, très aérée propice à des échanges gazeux optimaux et à l'évaporation de l'eau, c'est à dire un substrat ou support solide ayant des cellules ou alvéoles vides avec des diamètres compris entre environ 2 pm et environ 1000 pm, de préférence entre environ 10 pm et environ 500 pm ; présenter une grande capacité d'absorption et de rétention de liquides, en particulier de l'eau ; c'est à dire avoir la capacité d'absorber entre environ 5 fois et environ 15 fois, de préférence entre environ 8 fois et environ 10 fois, plus particulièrement environ 9 fois son propre poids en ces liquides.Indeed, this support or solid substrate must have the following characteristics: be inert, non-degradable and nutrient-free, that is to say, no or little fermentable and therefore not or little accessible to bacterial development and degradation bacterial; have a honeycomb structure, very aerated conducive to optimal gas exchange and evaporation of water, that is to say a solid substrate or support having empty cells or cells with diameters of between about 2 microns and about 1000 pm, preferably between about 10 pm and about 500 pm; have a high capacity for absorption and retention of liquids, in particular water; that is, having the capacity to absorb between about 5 times and about 15 times, preferably between about 8 times and about 10 times, more particularly about 9 times its own weight in these liquids.

[0055] De préférence, ce substrat ou support solide inerte d'origine végétale, comprend essentiellement des tissus, dont les cellules ont conservées leurs parois, mais dont l'amidon et les fractions des cellules les plus accessibles à une fermentation et au développement bactérien (cellulose et hémi-cellulose) ont été éliminés. Ce substrat ou support solide inerte peut se présenter sous forme de billes ou de fibres, et être produit à partir de déchets végétaux, tels que de la paille, de la sciure de bois, de la pulpe de betterave, de grognons d'olives, de la pulpe de café, de la bagasse de canne à sucre et leur mélanges.Preferably, this substrate or inert solid carrier of plant origin, essentially comprises tissues, the cells of which have retained their walls, but whose starch and the fractions of the cells most accessible to fermentation and bacterial development. (cellulose and hemi-cellulose) were removed. This substrate or inert solid support may be in the form of beads or fibers, and be produced from plant waste, such as straw, sawdust, beet pulp, olive grunts, coffee pulp, sugarcane bagasse and their mixtures.

[0056] Avantageusement, ce substrat ou support solide inerte est un dérivé de céréales, de préférence un dérivé du blé, ou de riz, plus particulièrement de son de blé ou de riz, qui se trouve dépourvu de toute trace d'amidon et d'une grande partie de sa fraction fibreuse cellulosique et hémi-cellulosique, en particulier suite à un traitement enzymatique séquentiel de ce son de blé qui présentera les caractéristiques susmentionnées et dont des coupes histologiques sont représentées dans les figures 2A à 2C. Ce substrat ou support solide inerte de l'invention, en particulier ce dérivé du son de blé, est utilisé comme support ou substrat solide inerte pour une seconde étape dite de maturation, en l'absence de nutriments, de plusieurs espèces des champignons filamenteux, en particulier des conidies ou spores de Pseudozyma flocculosa, de Trichoderma Atroviride, Trichoderma Hazianum, Pénicillium camemberti et Pénicillium nalgiovense, Beauveria bassiana et Metarhizium anisopliae, ou d'autres espèces de champignons filamenteux.Advantageously, this substrate or inert solid support is a derivative of cereals, preferably a derivative of wheat, or rice, more particularly wheat bran or rice, which is devoid of any trace of starch and dough. a large part of its cellulosic and hemi-cellulosic fibrous fraction, in particular following a sequential enzymatic treatment of this wheat bran, which will have the aforementioned characteristics and of which histological sections are shown in FIGS. 2A to 2C. This substrate or inert solid support of the invention, in particular this derivative of wheat bran, is used as an inert solid support or substrate for a second so-called maturation stage, in the absence of nutrients, of several species of filamentous fungi, especially conidia or spores of Pseudozyma flocculosa, Trichoderma Atroviride, Trichoderma Hazianum, Penicillium camemberti and Penicillium nalgiovense, Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae, or other species of filamentous fungi.

[0057] L'utilisation du substrat ou support solide inerte selon l'invention présente l'avantage d'apporter des solutions aux problèmes majeurs que connaît la fermentation en milieu solide. L'inoculation massive d'un tel dérivé de céréales, en particulier d'un tel dérivé de son de blé, et la faible teneur en eau du mélange, mais surtout le fait que ce dérivé de céréales, en particulier ce dérivé du son de blé, soit aussi dépourvu de nutriments, y compris de toute partie fermentescible présente dans les cellules du tissu végétal comme de l'amidon, permet de réduire considérablement les contaminations microbiennes, en particulier bactérienne, en phase solide.The use of the inert solid substrate or support according to the invention has the advantage of providing solutions to the major problems experienced by fermentation in solid medium. The massive inoculation of such a derivative of cereals, in particular of such a derivative of wheat bran, and the low water content of the mixture, but especially the fact that this derivative of cereals, in particular this derivative of wheat, also lacking nutrients, including any fermentable part present in plant tissue cells such as starch, can significantly reduce microbial contamination, particularly bacterial, in the solid phase.

[0058] Selon l'invention, la combinaison de deux modes ou étapes de cultures successifs, à savoir une première phase ou fermentation liquide, suivie d'une seconde phase de maturation en phase solide sur un tel substrat ou support solide inerte adéquat tel que sus-décrit, permet de contrôler avantageusement les paramètres de croissance et de les maintenir à leurs valeurs optimales, sans générer de risques liés aux croissances excessives obtenues dans les procédés de l'état de la technique et présentant les inconvénients de générer des modifications importantes de la température et du pH.According to the invention, the combination of two modes or steps of successive cultures, namely a first phase or liquid fermentation, followed by a second phase of solid phase processing on such a substrate or adequate inert solid support such as described above, makes it possible to advantageously control the growth parameters and to maintain them at their optimal values, without generating risks related to the excessive growths obtained in the processes of the state of the art and having the drawbacks of generating significant modifications of temperature and pH.

[0059] En effet, tel que décrit dans la figure 1, la première phase de croissance végétative, dite phase liquide 1, d'une durée généralement comprise entre environ deux jours et environ quatre jours, génératrice de chaleur et d'acides organiques, est réalisée en un fermenteur selon des conditions (température, pH, choix et quantité des nutriments ajoutés, stress induit ou non, ...) bien connues de l'homme de l'art et adaptables en fonction du type de champignon filamenteux produit. Le mycélium de la souche de ce champignon filamenteux génère massivement une biomasse 2. Les paramètres physicochimiques suivis du fermenteur sont de préférence les suivants: - Température : maintenue entre environ 20°C et environ 4 0 ° C . - Vitesse d'agitation : comprise entre environ 70 rpm et environ 250 rpm, avec une P02 supérieur à 30%, de préférence supérieur à 50% et plus particulièrement supérieur à 80%. - pH : maintenu entre environ 4 et environ 7.8 (pas de régulation de pH nécessaire dans cette production). - Pas de stress induit durant la fermentation. - Plusieurs milieux de culture connus de l'homme de l'art peuvent être utilisés comme: - MAI (extrait de malt 10 g). - MA2 (Extrait de malt 20 g) . - MEA (Extrait de malt 20 g, Extrait de levure 2 g) - YMPD (Extrait de malt 5 g, Extrait de levure 3 g,Indeed, as described in Figure 1, the first vegetative growth phase, said liquid phase 1, of a duration generally between about two days and about four days, generating heat and organic acids, is carried out in a fermenter according to conditions (temperature, pH, choice and quantity of nutrients added, stress induced or not, ...) well known to those skilled in the art and adaptable depending on the type of filamentous mushroom produced. The mycelium of the strain of this filamentous fungus massively generates a biomass 2. The physicochemical parameters followed by the fermenter are preferably as follows: Temperature: maintained between about 20 ° C. and about 40 ° C. Stirring speed: between about 70 rpm and about 250 rpm, with a P02 greater than 30%, preferably greater than 50% and more particularly greater than 80%. - pH: maintained between about 4 and about 7.8 (no pH regulation necessary in this production). - No stress induced during fermentation. Several culture media known to those skilled in the art can be used as: MAI (10 g malt extract). - MA2 (Malt extract 20 g). - MEA (malted extract 20 g, yeast extract 2 g) - YMPD (malted extract 5 g, yeast extract 3 g,

Dextrose 15 g, peptone de soja 6 g) [0060] La biomasse 2 obtenue est ensuite récoltée et mélangée, comme représenté par l'étape 3 de la figure 1, avec un substrat ou support solide inerte, de préférence constitué d'un dérivé de son de blé dépourvu d'amidon, pour subir une étape de maturation 4 en phase solide d'une durée généralement comprise entre environ deux jours et environ neuf jours, mais variable en fonction du type de champignon filamenteux utilisé, afin de générer ces conidies ou ces spores. Ces conidies ou spores peuvent ensuite avantageusement être soumis à une étape de séchage 5, généralement d'une durée comprise entre environ un jour et environ huit jours, et une étape de génération des conidies ou spores aériennes 6, avant un éventuel traitement final de séparation ou purification du produit final obtenu sous forme d'une poudre de conidies ou de spores. Comme le substrat ou le support solide inerte selon l'invention est avantageusement non fermentescible, la phase de maturation 4 ne nécessite pas de régulation de pH et le peu de chaleur produite en phase solide peut être facilement contrôlée, via une ventilation. En outre, ce procédé est particulièrement efficace et génère de manière avantageuse une grande quantité de ces conidies ou ces spores dans des délais courts, de préférence de moins de trois semaines, de moins de deux semaines, de moins d'une semaine, voire de quelques jours. De manière optionnelle, le procédé de l'invention peut aussi comporter une étape d'extraction et de purification de métabolites primaires ou secondaires ou de toute molécule d'intérêt produits par ces conidies ou spores, en particulier des enzymes, telles que des amylases, des phosphatases, des protéases, des vitamines, des alcaloïdes, des acides organiques, des arômes, des pigments, des lactones, de la mélanine ou des antibiotiques.Dextrose 15 g, soy peptone 6 g) The biomass 2 obtained is then harvested and mixed, as represented by step 3 of FIG. 1, with an inert solid substrate or support, preferably consisting of a derivative starch-free wheat bran, to undergo a solid phase maturation step 4 of a duration generally of between about two days and about nine days, but variable depending on the type of filamentous fungus used, in order to generate these conidia or these spores. These conidia or spores can then advantageously be subjected to a drying step 5, generally lasting between about one day and about eight days, and a step of generating conidia or aerial spores 6, before a possible final separation treatment. or purification of the final product obtained in the form of a powder of conidia or spores. Since the substrate or the inert solid support according to the invention is advantageously non-fermentable, the maturation phase 4 does not require pH regulation and the little heat produced in the solid phase can be easily controlled by means of ventilation. In addition, this method is particularly effective and advantageously generates a large amount of these conidia or spores in a short time, preferably less than three weeks, less than two weeks, less than a week, or even less than one week. some days. Optionally, the process of the invention may also comprise a step of extraction and purification of primary or secondary metabolites or of any molecule of interest produced by these conidia or spores, in particular enzymes, such as amylases, phosphatases, proteases, vitamins, alkaloids, organic acids, flavors, pigments, lactones, melanin or antibiotics.

[0061] Par conséquent, la présente invention apporte une solution aux problèmes de la culture sur substrat ou support solide, y compris à l'inconvénient éventuel de l'hétérogénéité du produit final obtenu sous forme de poudre. En effet, il est possible qu'en fin d'étape de séchage 5, on se retrouve avec des conidies aériennes mélangées à de grandes quantités de mycélium et de résidus de support solide, par exemple le son de blé dépourvu d'amidon, qui sont éliminés, voire recyclés pour une nouvelle étape de maturation, par une étape de séparation ou de purification supplémentaire.Therefore, the present invention provides a solution to the problems of the substrate culture or solid support, including the possible disadvantage of the heterogeneity of the final product obtained in the form of powder. Indeed, it is possible that at the end of the drying step 5, one finds oneself with aerial conidia mixed with large quantities of mycelium and solid support residues, for example wheat bran without starch, which are eliminated, or even recycled for a new maturation step, by an additional separation or purification step.

[0062] Un autre aspect de l'invention concerne les conidies ou spores obtenues par le procédé de l'invention, en particulier des conidies ou spores de Pseudozyma flocculosa, dont la fraction cytoplasmique est complètement transformée et se charge de vésicules de réserve, et dont les mitochondries et ribosomes sont non détectables ce qui n'a jamais été observé auparavant en mode de culture liquide des mêmes souches de champignons filamenteux qui sont généralement enrichies en mitochondries et en ribosomes libres marqueurs d'une activité métabolique et synthèse protéique intense, non propice à une conservation.Another aspect of the invention relates to the conidia or spores obtained by the process of the invention, in particular conidia or spores of Pseudozyma flocculosa, the cytoplasmic fraction of which is completely transformed and is responsible for storage vesicles, and whose mitochondria and ribosomes are undetectable, which has never been observed before in the liquid culture mode of the same strains of filamentous fungi which are generally enriched in mitochondria and in free ribosomes which are markers of a metabolic activity and intense protein synthesis, no conducive to conservation.

[0063] L'analyse par microscopie à fluorescence révèle également qu'en employant le procédé de l'invention, les conidies ou spores obtenues produisent une substance fluorescente, il s'agit d'une accumulation à la surface de la conidie ou spore de mélanine, ce qui serait un mode de protection contre les rayons ultraviolets. Cette caractéristique n'a jamais été observée auparavant chez les conidies ou spores produites en mode de culture liquide. Au contraire, les conidies ou spores issues du milieu submergé présentent un amincissement de leur paroi.Fluorescence microscopy analysis also reveals that by using the method of the invention, the conidia or spores obtained produce a fluorescent substance, it is an accumulation on the surface of the conidium or spore of melanin, which would be a form of protection against ultraviolet rays. This characteristic has never been observed before in conidia or spores produced in liquid culture mode. Conversely, conidia or spores from the submerged medium show a thinning of their wall.

[0064] Par ailleurs, une autre caractéristique structurale est l'aspect essentiellement concave de la forme extérieure de la conidie ou de la spore obtenue, qui est spécifique à son haut degré de maturation, en lien avec le mode de dissémination des conidies ou spores par voie aérienne. Ces caractéristiques présentent des avantages en termes de récolte, de purification et de dispersion des conidies ou spores. En particulier, l'étape finale de séparation et de purification du produit final sous forme de poudre, présente l'avantage de réduire considérablement la présence de possibles contaminants, tels que du mycélium ou des résidus du support ou substrat solide inerte utilisé.Furthermore, another structural characteristic is the essentially concave appearance of the external shape of the conidia or spore obtained, which is specific to its high degree of maturation, in connection with the mode of dissemination of conidia or spores. by air. These characteristics have advantages in terms of harvesting, purifying and dispersing conidia or spores. In particular, the final step of separation and purification of the final product in powder form has the advantage of considerably reducing the presence of possible contaminants, such as mycelium or residues of the support or inert solid substrate used.

ExemplesExamples

Exemple 1 : Production de conidies de Pseudozyma flocculosa [0065] Pour la production de conidies ou spores de Pseudozyma flocculosa, des mycéliums issus de la fermentation liquide sont mis à maturation avec le support ou substrat solide inerte de l'invention, qui est un dérivé du son de blé.Example 1: Production of conidia of Pseudozyma flocculosa [0065] For the production of conidia or spores of Pseudozyma flocculosa, mycelia derived from liquid fermentation are matured with the inert solid support or substrate of the invention, which is a derivative wheat bran.

[0066] L'étape de la conidiation ou d'obtention de conidies, ou de sporulation, de deux à sept jours est suivie d'une étape de séchaqe pour obtenir une concentration finale de conidies ou spores de Pseudozyma flocculosa après maturation d'environ de 3xE+08 à 5xl09 conidies/g. Des tests de protection de plantes ou de lutte biologique contre des nuisibles de plantes, effectués avec ces conidies ou spores ont montré une efficacité similaire à celle obtenue avec des conidies ou spores obtenues par les procédés de l'état de la technique.The stage of conidiation or of obtaining conidia, or sporulation, of two to seven days is followed by a drying step to obtain a final concentration of conidia or spores of Pseudozyma flocculosa after maturation of about from 3xE + 08 to 5x109 conidia / g. Plant protection or biological pest control tests carried out with these conidia or spores have shown an efficiency similar to that obtained with conidia or spores obtained by the methods of the state of the art.

Exemple 2: Production de Trichoderma harzlanum etExample 2: Production of Trichoderma harzlanum and

Trlchderma atroviride [0067] L'étape de fermentation liquide de deux jours est suivie d'une étape de condition sur le dérivé du son pendant quatre à huit jours, pour obtenir une concentration finale, après maturation, d'environ lE+09 à 3xl010 conidies/g, de conidies de Trichoderma atroviride et de 5xE+8 à lxE+10 conidies/g de conidies de Trichoderma harzianum. RéférencesTrlchderma atroviride [0067] The two-day liquid fermentation step is followed by a condition step on the bran derivative for four to eight days, to obtain a final concentration, after ripening, of about 1E + 09 to 3x1010. conidia / g, Trichoderma atroviride conidia and 5xE + 8 to 1xE + 10 conidia / g Trichoderma harzianum conidia. References

Boekhout, T., 1995. Pseudozyma Bandoni emend. Boekhout, a genus for yeast-like anamorphs of Ustilaginales. The Journal of General and Applied Microhiology, 41(4), pp.359-366. Available at: https ://vpn.gw.ulg.ac.be/article/jgarni955/41/4/41_4_359 /,DanaInfo=www.j stage.j st.go.jp,SSL+_article.Boekhout, T., 1995. Pseudozyma Bandoni emend. Boekhout, has genus for yeast-like anamorphs of Ustilaginales. The Journal of General and Applied Microhiology, 41 (4), pp. 359-366. Available at: https://vpn.gw.ulg.ac.be/article/jgarni955/41/4/41_4_359 /,DanaInfo=www.j stage.j st.go.jp, SSL + _article.

Morozova et al, 2001, Peculiarities of exogeneous dormancy of Asperguilllus nigerconidia. Microbiololgy 70(5), pp. 527-534.Morozova et al, 2001, Peculiarities of exogenous dormancy of Asperguilllus nigerconidia. Microbiololgy 70 (5), pp. 527-534.

Pandey, A., 2003. Solid-state fermentation. Biochemical Engineering Journal, 13 (2-3), pp. 81-84.Pandey, A., 2003. Solid-state fermentation. Biochemical Engineering Journal, 13 (2-3), pp. 81-84.

Raimbault, M. & Durand, G., 1980. Fermentation en milieu solide - Croissance de champignons filamenteux sur substrat amylacé, Available at: http://horizon.documentation.ird.fr/exl-doc/pleins_textes/pleins_textes_5/pt5/travaux_d/00626.p df.Raimbault, M. & Durand, G., 1980. Fermentation in Solid Media - Growth of Filamentous Fungi on Starchy Substrate, Available at: http://horizon.documentation.ird.fr/exl-doc/pleins_textes/pleins_textes_5/pt5/travaux_d/00626.p df.

Smits, J.P. et al., 1998. The influence of température on kinetics in solid-state fermentation. Enzyme and Microbial Technology, 22(1), pp.50-57.Smits, J.P. et al., 1998. The influence of temperature on kinetics in solid-state fermentation. Enzyme and Microbial Technology, 22 (1), pp. 50-57.

Wraight, S.P. et al, 2001. Productionr Stabilization and Formulation of Fungal Biocontrol Agents,Wraight, S.P. et al, 2001. Productionr Stabilization and Formulation of Fungal Biocontrol Agents,

Claims (24)

REVENDICATIONS 1. Procédé d'obtention de conidies de souches de champignons filamenteux comprenant les étapes suivantes : croître des champignons filamenteux durant une première phase de croissance mycélienne en phase liquide, pour générer une biomasse mycélienne, mélanger ladite biomasse mycélienne obtenue avec un support solide inerte, et générer essentiellement sans fermentation des conidies et/ou des spores durant une seconde phase de maturation de ladite biomasse mycélienne sur ledit support solide inerte.A process for obtaining conidia of strains of filamentous fungi comprising the steps of: growing filamentous fungi during a first phase of mycelial growth in the liquid phase, to generate a mycelial biomass, mixing said obtained mycelial biomass with an inert solid support, and generating essentially without fermentation conidia and / or spores during a second phase of maturation of said mycelial biomass on said inert solid support. 2. Le procédé selon la revendication 1, comprenant en outre une étape de séchage des conidies.2. The method of claim 1, further comprising a step of drying the conidia. 3. Le procédé selon la revendication 1 ou 2, comprenant en outre une étape d'extraction d'une ou de plusieurs molécule(s) d'intérêt des conidies.3. The method of claim 1 or 2, further comprising a step of extracting one or more molecule (s) of interest conidia. 4. Le procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le support solide inerte est du son d'une céréale.4. The process according to any of the preceding claims, wherein the inert solid support is cereal bran. 5. Le procédé selon la revendication 4 dans lequel la céréale est du blé.5. The method of claim 4 wherein the cereal is wheat. 6. Le procédé selon la revendication 4 ou la revendication 5, dans lequel les cellules du son de la céréale formant le support solide inerte, sont dépourvues de leur fraction fermentescible, en particulier d'amidon.6. The method of claim 4 or claim 5, wherein the sound cells of the cereal forming the inert solid support, are free of their fermentable fraction, in particular starch. 7. Le procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel la phase de maturation génère une concentration en conidies comprise entre 3xE+08 conidies/g et 5xl09 conidies/g pour Pseudozyma flocculosa, et entre lE+09 conidies/g et 5xl010 conidies/g, pour Trichoderma atroviride et entre 5xE+8 conidies/g et lxE+10 conidies/g de conidies de Trichoderma harzianum.The method according to any one of the preceding claims, wherein the maturation stage generates a conidium concentration of between 3xE + 08 conidia / g and 5x109 conidia / g for Pseudozyma flocculosa, and between I + 09 conidia / g and 5x1010 conidia / g, for Trichoderma atroviride and between 5xE + 8 conidia / g and 1xE + 10 conidia / g conidia of Trichoderma harzianum. 8. Le procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dont la durée d'obtention des conidies est inférieure à 3 semaines, de préférence moins de deux semaines, plus particulièrement moins de 1 semaine.8. The method according to any one of the preceding claims, the duration of conidia obtaining is less than 3 weeks, preferably less than two weeks, more particularly less than 1 week. 9. Le procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le champignon filamenteux est du genre Pseudozyma sp. , en particulier Pseudozyma flocculosa.9. The method according to any one of the preceding claims, wherein the filamentous fungus is of the genus Pseudozyma sp. , in particular Pseudozyma flocculosa. 10. Le procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes 1 à 8, dans lequel le champignon filamenteux est du genre Trichoderma sp. , en particulier Trichoderma harzianum, Trichoderma atroviride, Trichoderma hamatum et Trichoderma virideThe method of any one of the preceding claims 1 to 8, wherein the filamentous fungus is of the genus Trichoderma sp. , in particular Trichoderma harzianum, Trichoderma atroviride, Trichoderma hamatum and Trichoderma viride 11. Le procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes 1 à 8, dans lequel le champignon filamenteux est du genre Pénicillium sp. , en particulier Penicilium camemberti et Penicilium nalgiovense.11. The method according to any one of the preceding claims 1 to 8, wherein the filamentous fungus is of the genus Penicillium sp. , in particular Penicilium camemberti and Penicilium nalgiovense. 12. Le procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes 1 à 8, dans lequel le champignon filamenteux est choisi parmi le groupe constitué par Metarhizium sp. et Bauveria sp.The process according to any one of the preceding claims 1 to 8, wherein the filamentous fungus is selected from the group consisting of Metarhizium sp. and Bauveria sp. 13. Conidies de souches de champignons filamenteux obtenues par le procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, résistantes à la dessiccation et se conservant à l'état sec à température ambiante, durant une période supérieure à un mois ou deux mois, de préférence durant une période comprise entre trois mois et vingt-quatre mois.13. Conidia of strains of filamentous fungi obtained by the method according to any one of the preceding claims, resistant to drying and stored in a dry state at room temperature, for a period greater than one month or two months, preferably during a period of between three months and twenty-four months. 14. Conidies et/ou spores de souches de champignons filamenteux matures du genre Pseudozyma sp. , en particulier de Pseudozyma flocculosa, dont la fraction cytoplasmique est chargée de réserves et riche en mélanine.14. Conidia and / or spores of mature filamentous fungus strains of the genus Pseudozyma sp. , in particular Pseudozyma flocculosa, whose cytoplasmic fraction is charged with reserves and rich in melanin. 15. Conidies de souches de champignons filamenteux selon la revendication 14 est obtenues par le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9.15. Conidia of strains of filamentous fungi according to claim 14 is obtained by the method according to any one of claims 1 to 9. 16. Poudre de conidies et/ou des spores selon l'une quelconque des revendications précédentes 13 à 15.16. Conidia powder and / or spores according to any one of the preceding claims 13 to 15. 17. Composition alimentaire comprenant les conidies ou la poudre de conidies selon l'une quelconque des revendications précédentes 13 à 16.17. A food composition comprising the conidia or the conidia powder according to any one of the preceding claims 13 to 16. 18. Composition alimentaire selon la revendication 17, caractérisée en ce qu'elle est choisie parmi le groupe constitué par les charcuteries et les fromages.18. Food composition according to claim 17, characterized in that it is chosen from the group consisting of meats and cheeses. 19. Utilisation de conidies ou d'une poudre de conidies selon l'une quelconque des revendications précédentes 13 à 16, contre la prolifération de nuisibles de plantes ou de fruits.19. Use of conidia or a conidia powder according to any one of the preceding claims 13 to 16, against the proliferation of pests of plants or fruits. 20. Utilisation de conidies ou d'une poudre de conidies selon l'une quelconque des revendications précédentes 13 à 16, pour favoriser la croissance de plantes.20. Use of conidia or a conidia powder according to any one of the preceding claims 13 to 16, for promoting the growth of plants. 21. Utilisation selon la revendication 20, pour favoriser la croissance des plantes, en particulier la germination et le taux de croissance cellulaire et racinaire de plantes.21. Use according to claim 20 for promoting plant growth, in particular germination and the rate of cell and root growth of plants. 22. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes 19 à 21, dans laquelle la plante ou le fruit est choisi parmi le groupe constitué par le rosier, les cucurbitacées, en particulier, le concombre, la courge ou le melon, la tomate, la fraise, la framboise, la groseille, la vigne, le raisin, la pomme, le pommier, la poire, le poirier, la prune, le prunier et la pomme-de-terre.22. Use according to any one of the preceding claims 19 to 21, wherein the plant or the fruit is chosen from the group consisting of the rose bush, the cucurbits, in particular, the cucumber, the squash or the melon, the tomato, strawberry, raspberry, currant, grape, grape, apple, apple, pear, pear, plum, plum and potato. 23. Utilisation de conidies ou d'une poudre de conidies selon l'une quelconque des revendications précédentes 13 à 16 pour la préparation d'une composition alimentaire.23. Use of conidia or a conidia powder according to any one of the preceding claims 13 to 16 for the preparation of a food composition. 24. Utilisation selon la revendication 23, dans laquelle la composition alimentaire est choisie parmi le groupe constitué par les charcuteries et les fromages.24. Use according to claim 23, wherein the food composition is selected from the group consisting of sausages and cheeses.
BE2016/5120A 2016-02-22 2016-02-22 AIRBORNE AND RESISTANT CONSTANTS OF FILAMENTOUS FUNGUS STRAINS AND PROCESS FOR OBTAINING THEM BE1023862B1 (en)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
BE2016/5120A BE1023862B1 (en) 2016-02-22 2016-02-22 AIRBORNE AND RESISTANT CONSTANTS OF FILAMENTOUS FUNGUS STRAINS AND PROCESS FOR OBTAINING THEM
EP17710489.0A EP3420069A1 (en) 2016-02-22 2017-02-22 Resistant aerial conidia of filamentous fungus strains and method for obtaining same
PCT/EP2017/053994 WO2017144500A1 (en) 2016-02-22 2017-02-22 Resistant aerial conidia of filamentous fungus strains and method for obtaining same
MA043708A MA43708A (en) 2016-02-22 2017-02-22 AERIAL AND RESISTANT CONIDIA OF FILAMENTOUS MUSHROOM STRAINS AND THEIR PROCESS FOR OBTAINING THEIR

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
BE2016/5120A BE1023862B1 (en) 2016-02-22 2016-02-22 AIRBORNE AND RESISTANT CONSTANTS OF FILAMENTOUS FUNGUS STRAINS AND PROCESS FOR OBTAINING THEM

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BE1023862A1 BE1023862A1 (en) 2017-08-23
BE1023862B1 true BE1023862B1 (en) 2017-08-24

Family

ID=55586978

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BE2016/5120A BE1023862B1 (en) 2016-02-22 2016-02-22 AIRBORNE AND RESISTANT CONSTANTS OF FILAMENTOUS FUNGUS STRAINS AND PROCESS FOR OBTAINING THEM

Country Status (4)

Country Link
EP (1) EP3420069A1 (en)
BE (1) BE1023862B1 (en)
MA (1) MA43708A (en)
WO (1) WO2017144500A1 (en)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3457854A1 (en) 2016-05-16 2019-03-27 Danisco US Inc. Entomopathogenic proucts, metarhizium anisopliae or metarhizium robertsii

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009037399A2 (en) * 2007-07-27 2009-03-26 Institut De La Recherche Pour Le Developpement (Ird) Method for producing spores and metabolites from fungal microorganisms and uses thereof
CN102676445A (en) * 2012-05-16 2012-09-19 甘肃农业大学 Method for preparing trichoderma fungicide

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL68523A0 (en) 1983-04-29 1983-07-31 Bio Techn Gen Ltd Method of growing trichoderma
FR2583059B1 (en) 1985-06-06 1987-10-09 Orstom PROCESS FOR PRODUCING FILAMENTOUS MUSHROOM SPORES AND DEVICE USED
FR2960551B1 (en) 2010-05-27 2012-09-14 Comptoir Agricole PRODUCTION OF MOLECULES OF INTEREST IN SOLID MEDIUM

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009037399A2 (en) * 2007-07-27 2009-03-26 Institut De La Recherche Pour Le Developpement (Ird) Method for producing spores and metabolites from fungal microorganisms and uses thereof
CN102676445A (en) * 2012-05-16 2012-09-19 甘肃农业大学 Method for preparing trichoderma fungicide

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ROSANE S. CAVALCANTE ET AL: "Effect of Moisture on Trichoderma Conidia Production on Corn and Wheat Bran by Solid State Fermentation", FOOD AND BIOPROCESS TECHNOLOGY, vol. 1, no. 1, 21 November 2007 (2007-11-21), New York, NY, pages 100 - 104, XP055315004, ISSN: 1935-5130, DOI: 10.1007/s11947-007-0034-x *
U. HÖLKER ET AL: "Biotechnological advantages of laboratory-scale solid-state fermentation with fungi", APPLIED MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY, vol. 64, no. 2, 1 April 2004 (2004-04-01), DE, pages 175 - 186, XP055314806, ISSN: 0175-7598, DOI: 10.1007/s00253-003-1504-3 *
Z. OMRAN ET AL.: "Morphological difference of aerial and submerged conidia of the bio-fungicide fungus Pseudozyma flocculosa.", 19 October 2015 (2015-10-19), pages 38, XP002763648, Retrieved from the Internet <URL:http://www.umc.edu.dz/index.php/fr/component/k2/item/download/39_5049daa69fba1262589142338c1aeb6d> [retrieved on 20161028] *

Also Published As

Publication number Publication date
EP3420069A1 (en) 2019-01-02
BE1023862A1 (en) 2017-08-23
MA43708A (en) 2018-11-28
WO2017144500A1 (en) 2017-08-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Fan et al. Use of various coffee industry residues for the cultivation of Pleurotus ostreatus in solid state fermentation
US20070004022A1 (en) Industrial fermenting production process of Hirsutella hepiali Chen &amp; Shen of anamorphic fungi related to Chinese Cordyceps Sinensis
EP3883364B1 (en) Method for producing a mycorrhiza inoculum and inoculum obtained
Djajanegara et al. Protoplast fusion between white and brown oyster mushrooms
FR2915999A1 (en) ATROVIRID TRICHODERMA STRAIN AND ITS USE AS A PHYTOSANITARY PRODUCT FOR VINE DISEASES.
BE1023862B1 (en) AIRBORNE AND RESISTANT CONSTANTS OF FILAMENTOUS FUNGUS STRAINS AND PROCESS FOR OBTAINING THEM
Shide et al. Studies on the degraduation of wood sawdust by Lentinus squarrosulus (Mont.) Singer
EP1203811A2 (en) Production of metabolites of interest by co-culture of plant cells and non-plant cells
EP2173871A2 (en) Method for producing spores and metabolites from fungal microorganisms and uses thereof
JP2013507142A (en) Vineyard culture method that can obtain the yeast to obtain high sugar content and alcohol content
Umor et al. Challenges and current state-of-art of the Volvariella volvacea cultivation using agriculture waste: A brief review
EP3151673A1 (en) Method and composition for improving the productivity of non-leguminous plants
Tuszyński et al. Microbiological characteristics of the Węgierka Zwykła plum orchard in submontane region.
CN1486613A (en) Batch production process of biological herbicide
CN104304328A (en) A preparing method of a hyperparasitic fungal inoculant for sclerotinia sclerotiorum
FR2864832A1 (en) New clones of Trichoderma harzianum, useful for biological control of fungi pathogens on vines and other perennial crops
EP0214210B1 (en) Method for accelerating the fermentation of biomass based on cellulose materials
Rahim et al. The Diversity of Rot Fungi from Cocoa Plantation and Its Ability to Grow on Carbon Source Media
WO2018124864A2 (en) New thermophilic strain and use thereof to accelerate the composting of organic waste to produce a soil conditioner
EP0248832B1 (en) Method for cultivating microorganisms, particularly of the frankia group and preparation of bacterial inoculums
Hiba et al. Production of Trichoderma harzianum (127a and 127b) spores by fermentation (LF and SSF)
CN113980824B (en) Trichoderma harzianum stabilizer and application thereof
WO2023084126A1 (en) Method for sampling, isolating, selecting, propagating and inoculating indigenous microbial populations of soils
FR2494717A1 (en) Producing resting spores of entomopathogenic fungi - by fermenting hyphae, blending pre:spores with carrier and maturing
Sapareng et al. Isolation and characteristics molding fungus of stalks and empty fruit bunches of oil palms

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Effective date: 20170824