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Compositions détergentes
L'invention concerne des compositions détergentes, et plus particuli- èrement des compositions détergentes contenant une lipase et au moins un tensioactif, et l'utilisation de ces compositions détergentes.
Des compositions détergentes contenant une lipase et un ou plusieurs tensioactif (s) sont connues. De telles compositions ont, en particulier, été décrites dans la demande de brevet européen 0 430 315, la demande de brevet européen 0 341 999, la demande de brevet international WO 94/03578, la demande de brevet international WO 94/25556 et la demande de brevet international WO 91/00910.
Notamment, la demande de brevet international WO 94/25556 décrit une composition détergente utilisable pour laver la vaisselle. Cette composition détergente contient diverses enzymes (protéase, amylase), un silicate, un copolymère de polyacrylate, des charges, des agents de blanchiment, des agents stabilisants et des tensioactifs. Les tensioactifs mis en oeuvre, qui peuvent être nonioniques, anioniques ou amphotères, doivent être compatibles avec les enzymes contenues dans la composition détergente. Parmi les tensioactifs nonioniques, on peut citer des produits de condensation d'une mole d'un alcool ou d'un acide gras contenant de 10 à 20 atomes de carbone avec 4 à 40 moles d'oxyde d'éthylène. Parmi les tensioactifs anioniques, on peut citer des alkylsulfates et des alkylsulfonates solubles contenant de 8 à 18 atomes de carbone.
Bien que des lipases aient été mentionnées dans cette demande de brevet, aucune composition contenant une lipase n'est exemplifiée.
Bien que les compositions détergentes contenant une lipase et un tensioactif, décrites dans les demandes de brevet citées ci-dessus, présentent une utilité sous certains aspects, elles semblent présenter une efficacité insuffisante. En effet, soit les lipases contenues dans ces compositions sont peu stables, soit leur performance de lavage est faible. Il semble en effet que certains tensioactifs diminuent, ou au moins ne contribuent pas à, la stabilité et/ou la performance de lavage des enzymes, et notamment des lipases, présentes dans ces compositions détergentes.
L'incorporation d'une lipase, produite par une souche de
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Pseudomonas, dans une composition détergente semble augmenter l'efficacité de ces compositions lors du lavage.
Cependant, à notre connaissance, il semble qu'aucune composition détergente contenant une lipase, dérivée d'une souche de Pseudomonas, et un tensioactif ne soit connue.
En conséquence, il y a actuellement un besoin pour une telle composition détergente contenant une lipase utilisable dans le domaine de la détergence, très stable et également très active dans une large gamme de pH et de température.
Il est donc nécessaire, d'une part, d'identifier les tensioactifs, ou les mélanges de tensioactifs, qui contribuent à, ou au moins ne diminuent pas, la stabilité des lipases présentes dans les compositions détergentes, et ceci en particulier pour les lipases produites par les souches de Pseudomonas.
C'est pourquoi, il est nécessaire de fournir et préparer des compositions détergentes contenant de tels tensioactifs, ou de tels mélanges de tensioactifs, et une lipase, et plus particulièrement une lipase produite par une souche de Pseudomonas.
De plus, il y a également un besoin pour une composition détergente, contenant une lipase, particulièrement efficace durant le lavage sur les taches grasses et ceci dès les premiers cycles de lavage. De plus, il y a également un besoin pour une composition détergente, contenant une lipase, particulièrement efficace durant le lavage à des températures basses, c'est-àdire des températures pouvant aller jusqu'à 5 C.
Il est également nécessaire, d'autre part, d'identifier les tensioactifs, ou les mélanges de tensioactifs, qui contribuent à, ou au moins ne diminuent pas, la performance de lavage des lipases présentes dans les compositions détergentes, et ceci en particulier pour les lipases produites par les souches de Pseudomonas. C'est pourquoi, il est nécessaire de fournir et préparer des compositions détergentes contenant de tels tensioactifs, ou de tels mélanges de tensioactifs, et une lipase, et plus particulièrement une lipase produite par une souche de Pseudomonas.
La présente invention a pour but d'identifier les tensioactifs, et les mélanges de ceux-ci, qui inclus avec une lipase dans une composition détergente, permettent de fournir une composition détergente très stable.
Plus particulièrement, la présente invention a pour but d'identifier les tensioactifs, et les mélanges de ceux-ci, qui, inclus avec une lipase produite
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par une souche de Pseudomonas, dans une composition détergente, permettent de fournir une composition détergente très stable.
La présente invention a pour but d'identifier les tensioactifs, et les mélanges de ceux-ci, qui inclus avec une lipase dans une composition détergente, permettent de fournir une composition détergente ayant une performance de lavage élevée. Plus particulièrement, la présente invention a pour but d'identifier les tensioactifs, et les mélanges de ceux-ci, qui, inclus avec une lipase produite par une souche de Pseudomonas, dans une composition détergente, permettent de fournir une composition détergente ayant une performance de lavage élevée.
La présente invention a pour but d'identifier les tensioactifs, et les mélanges de ceux-ci, qui, inclus avec une lipase dans une composition détergente, permettent de fournir une composition détergente active dans une large gamme de température, active dans une large gamme de pH alcalin, et efficace sur les taches grasses dès le premier cycle de lavage.
Plus particulièrement, la présente invention a pour but d'identifier les tensioactifs, et les mélanges de ceux-ci, qui, inclus avec une lipase produite par une souche de Pseudomonas dans une composition détergente, permettent de fournir une composition détergente active dans une large gamme de température, active dans une large gamme de pH alcalin, et efficace dès le premier cycle de lavage, et particulièrement efficace sur les taches grasses dès les premiers cycles de lavage.
La présente invention a pour but d'identifier les tensioactifs, et les mélanges de ceux-ci, qui, inclus avec une lipase dans une composition détergente, permettent de fournir une composition détergente particulièrement efficace durant le lavage à des températures basses, c'est-à-dire des températures pouvant aller jusqu'à 5 C.
La présente invention a également pour but de préparer et de fournir une nouvelle composition détergente, contenant une lipase et au moins un tensioactif, qui est très stable en présence de tensioactifs. Plus particulièrement, la présente invention a également pour but d'identifier et de fournir une nouvelle composition détergente, contenant une lipase, dérivée d'une souche de Pseudomonas, et au moins un tensioactif, qui est très stable en présence de tensioactifs.
La présente invention a également pour but de préparer et fournir une nouvelle composition détergente, contenant une lipase et au moins un
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tensioactif, et qui a une performance de lavage élevée. Plus particulièrement, la présente invention a pour but de préparer et fournir une composition détergente, contenant une lipase dérivée d'une souche de Pseudomonas et au moins un tensioactif, qui a une performance de lavage élevée.
A cet effet, la présente invention concerne l'identification de tensioactifs qui sont particulièrement efficaces lors de leur utilisation avec une lipase dans une composition détergente. Et plus particulièrement, la présente invention concerne l'identification de tensioactifs qui sont particulièrement efficaces lors de leur utilisation avec une lipase produite par une souche de Pseudomonas dans une composition détergente.
Ainsi, les compositions tensioactives selon la présente invention, qui ont donné d'excellents résultats dans ce but, sont constituées d'un tensioactif nonionique choisi parmi les alcools aliphatiques polyéthoxylés contenant d'environ 12 à environ 14 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation de 9 ; et d'un tensioactif anionique choisi parmi les sels d'éthoxysulfate alcoolique de sodium contenant de 12 à 14 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation de 2. Les compositions détergentes contenant une lipase, et plus particulièrement une lipase produite par une souche de Pseudomonas, et une composition tensioactive telle que décrite ci-dessus, ont donné d'excellents résultats.
La présente invention concerne également l'identification de tensioactifs qui permettent de préparer une composition détergente stable contenant une lipase. Et plus particulièrement, la présente invention concerne l'identification de tensioactifs qui permettent de préparer une composition détergente stable contenant une lipase produite par une souche de Pseudomonas.
Ainsi, les tensioactifs qui ont donné de bons résultats, sont les alcools aliphatiques polyéthoxylés contenant d'environ 12 à environ 14 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation compris entre 3 et 9. Les compositions détergentes contenant une lipase, et plus particulièrement une lipase produite par une souche de Pseudomonas, et un tensioactif tel que décrit ci-dessus, ont donné d'excellents résultats.
La présente invention concerne également l'identification de tensioactifs qui permettent de préparer une composition détergente ayant une performance de lavage élevée et contenant une lipase. Et plus particuliè-
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rement, la présente invention concerne l'identification de tensioactifs qui permettent de préparer une composition détergente ayant une performance de lavage élevée et contenant une lipase produite par une souche de Pseudomonas.
Ainsi, les tensioactifs qui ont donné de bons résultats, sont les alcools aliphatiques polyéthoxylés contenant d'environ 12 à environ 14 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation de 9. Les tensioactifs qui ont également donné de bons résultats, sont un mélange comprenant un tensioactif choisi parmi les alcools aliphatiques polyéthoxylés contenant d'environ 12 à environ 14 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation de 9, et un tensioactif choisi parmi les sels d'éthoxysulfate alcoolique de sodium ayant de 12 à 14 atomes de carbone et un degré d'éthoxylation égal à 2.
Les compositions détergentes contenant une lipase, et plus particulièrement une lipase produite par une souche de Pseudomonas, et un tensioactif tel que décrit ci-dessus, ont donné d'excellents résultats.
La présente invention concerne également une composition détergente contenant une lipase produite par une souche de Pseudomonas et au moins un agent tensioactif.
La composition détergente selon l'invention contient au moins un tensioactif nonionique.
Généralement, la composition détergente selon l'invention contient au moins un tensioactif nonionique choisi parmi les alcools aliphatiques poly- éthoxylés contenant d'environ 10 à environ 20 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation compris entre environ 2 et environ 40.
Les alcools aliphatiques polyéthoxylés sont également connus sous le nom d'éthoxylates (Ullman's Encyclopedia of Industrial Chemistry, 1994, 5ième édition, Vol A25, pages 785-787) ou d'alcools gras éthoxylés.
Habituellement, la composition détergente selon l'invention contient au moins un tensioactif nonionique choisi parmi les alcools aliphatiques poly- éthoxylés contenant d'environ 10 à environ 18 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation compris entre environ 2 et environ 20. De préférence, la composition détergente selon l'invention contient au moins un tensioactif nonionique choisi parmi les alcools aliphatiques polyéthoxylés contenant d'environ 12 à environ 14 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation compris entre environ 3 et environ 11.
De manière particulièrement préférée, la composition détergente selon l'invention contient au
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moins un tensioactif nonionique choisi parmi les alcools aliphatiques poly- éthoxylés contenant d'environ 12 à environ 14 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation compris entre environ 3 et environ 9.
De bons résultats ont été obtenus avec un tensioactif nonionique choisi parmi les alcools aliphatiques polyéthoxylés contenant d'environ 12 à environ
14 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation de 3, tel que le produit vendu sous la marque MARUPAL 24/30 par HÜLS AG ; les alcools aliphatiques polyéthoxylés contenant d'environ 12 à environ 14 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation de 6, tel que le produit vendu sous la marque MARLIPAL 24/60 par HÜLS AG ; les alcools aliphatiques polyéthoxylés contenant d'environ 12 à environ 14 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation de 7, tel que le produit vendu sous la marque MARUPAL 24/70 par HÜLS AG ;
et les alcools aliphatiques polyéthoxylés contenant d'environ 12 à environ 14 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation de 9 tel que le produit vendu sous la marque MARUPAL 24/90 par HÜLS AG.
D'excellents résultats ont été obtenus avec un tensioactif nonionique choisi parmi les alcools aliphatiques polyéthoxylés contenant d'environ 12 à environ 14 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation de 9.
La composition détergente selon l'invention peut également contenir au moins un tensioactif anionique.
Généralement, la composition détergente selon l'invention contient au moins un tensioactif anionique choisi parmi les sels d'alkylsulfates contenant de 8 à 24 atomes de carbone et les sels des éthoxysulfates alcooliques contenant de 6 à 20 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation compris entre environ 2 et environ 20.
Les sels d'alkylsulfates sont également connus sous le nom de sels des esters de l'acide sulfurique (Ullman's Encyclopedia of Industrial Chemistry, 1994, 5ième édition, Vol A25, pages 779-780).
Les sels des éthoxysulfates alcooliques sont connus également sous le nom d'éthersulfates, d'alcool éther sulfate ou sels des esters de l'acide sulfurique et des éthers des oligooxyéthylènes ou éthoxylates (Ullman's Encyclopedia of Industrial Chemistry, 1994, 5ième édition, Vol A25, pages 781-782) ou de sulfates d'alcools gras éthoxylés.
Habituellement, la composition détergente selon l'invention contient au moins un tensioactif anionique choisi parmi les sels d'alkylsulfates contenant
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de 12 à 22 atomes de carbone et les sels des éthoxysulfates alcooliques contenant de 8 à 18 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation compris entre environ 2 et environ 16. De préférence, la composition détergente selon l'invention contient au moins un tensioactif anionique choisi parmi les alkylsulfates de sodium contenant de 14 à 20 atomes de carbone et les sels des éthoxysulfates alcooliques (sel de sodium) contenant de 10 à 20 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation compris entre environ 2 et environ 8.
De manière particulièrement préférée, la composition détergente selon l'invention contient au moins un tensioactif anionique choisi parmi les alkylsulfates de sodium contenant de 16 à 18 atomes de carbone et les sels des éthoxysulfates alcooliques (sels de sodium) contenant de 12 à 14 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation de 2.
De bons résultats ont été obtenus avec l'alkylsufate de sodium contenant de 16 à 18 atomes de carbone, vendu sous la marque MARUNAT T55 par HÜLS AG.
De très bons résultats ont été obtenus avec le sel d'éthoxysulfate alcoolique de sodium contenant de 12 à 14 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation de 2, vendu sous la marque MARUNAT 242/70 par HÜLS AG.
D'excellents résultats ont été obtenus avec une composition détergente contenant un tensioactif nonionique choisi parmi les alcools aliphatiques polyéthoxylés contenant d'environ 12 à environ 14 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation de 9 ; et un tensioactif anionique choisi parmi le sel d'éthoxysulfate alccolique de sodium contenant de 12 à 14 atomes de carbone et ayant un degré d'éthoxylation de 2.
Les lipases sont classées dans le système international sous le numéro E. C. 3.1. 1.3. ; il s'agit d'une glycérol ester hydrolase.
Les lipases qui conviennent pour l'invention peuvent être de diverses origines. En général, la composition détergente selon l'invention contient une lipase microbienne. Habituellement, la composition détergente selon l'invention contient une lipase fongique ou bactérienne.
Parmi les lipases bactériennes, on peut citer les lipases dérivées de bactéries aérobies, telles que notamment les souches de Bacillus, en particulier une souche de Bacillus pumilus, les souches de Staphylococcus, les souches d'Acinetobacter et les souches de Pseudomonas. De préférence, la composition détergente selon l'invention contient une lipase dérivée d'une
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souche de Pseudomonas, telle que notamment des souches de Pseudomonas wisconsinensis, mendocina, stutzeri, cepacia, putida, aeroginosa, fluorescens, fragi, nitroreducans, gladioli, plantari, glumae, pseudoalcaligenes, alcaligenes. De bons résultats ont été obtenus avec une composition détergente contenant une lipase dérivée d'une souche de Pseudomonas wisconsinensis.
D'excellents résultats ont été obtenus avec la souche de Pseudomonas wisconsinensis T 92.677/1 ou un dérivé ou mutant de cette souche.
La souche de Pseudomonas wisconsinensis T 92.677/1 a été déposée à la collection nommée BELGIAN COORDINATED COLLECTIONS OF MICROORGANISM (LMG culture collection, Université de Gand, Laboratoire de Microbiologie-K. L. Ledeganckstraat 35, B-9000 Gand, Belgique) conformément au Traité de Budapest sous le numéro LMG P-15151 le 12 octobre 1994.
Parmi les lipases fongiques, on peut citer les lipases dérivées de champignons, tels que notamment les souches d'Aspergillus, les souches de Rhizopus, les souches de Fusarium, les souches de Mucor, les souches de Penicillium, les souches de Candida, les souches d'Humicola et les souches
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de Thcrmomyces. De préférence, la composition détergente selon l'invention contient une lipase dérivée d'une souche d'Aspergillus ou d'une souche d'Humicola.
Les teneurs en lipase et en tensioactifs dans la composition détergente dépendent fortement de l'utilisation envisagée de cette composition.
Les compositions détergentes selon l'invention comprennent habituellement au moins 0,001 % (p/p) de lipase. Généralement, elles comprennent au moins 0,003 % (p/p) de lipase. De préférence, elles comprennent au moins 0,005 % (p/p) de lipase. L'abréviation % (p/p) représente un pourcentage exprimé en poids par poids.
Les compositions détergentes selon l'invention comprennent habituellement au plus 5 % (p/p) de lipase. Généralement, elles comprennent au plus 4 % (p/p) de lipase. De préférence, elles comprennent au plus 3 % (p/p) de lipase.
Les compositions détergentes selon l'invention comprennent habituellement au moins 0,001 % (p/p) de tensioactifs. Généralement, elles comprennent au moins 0,01 % (p/p) de tensioactifs. De préférence, elles comprennent au moins 0,1 % (p/p) de tensioactifs.
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Les compositions détergentes selon l'invention comprennent habituellement au plus 60 % (p/p) de tensioactifs. Généralement, elles comprennent au plus 50 % (p/p) de tensioactifs. De préférence, elles comprennent au plus 40 % (p/p) de tensioactifs.
La préparation des compositions détergentes selon l'invention peut se faire de toute manière connue en elle-même.
La lipase peut être incorporée dans la composition détergente sous forme solide ou sous forme liquide. Notamment, elle peut être incorporée sous forme de suspension ou de granule.
La présente invention concerne également l'utilisation de la composition détergente contenant une lipase, telle que définie ci-dessus. Un exemple d'utilisation en détergence est notamment décrit dans la demande de brevet britannique 1372034 et dans la demande de brevet européen 0 218 272.
Les multiples additifs des compositions détergentes sont connus de l'homme du métier et sont adaptés selon l'utilisation envisagée de la composition. De tels additifs sont notamment des enzymes, telles que par exemple des protéases, amylases et/ou cellulases ; des agents de charge, tels que du tripolyphosphate de sodium ; des agents de blanchiment, tels que du perborate ; des composés peroxydés ; des additifs de formulation ; des tensioactifs.
Des exemples de tels additifs, ajoutés à des compositions détergentes, sont en particulier décrits dans la demande de brevet britannique 1372034, dans la demande de brevet européen 0 218 272, dans la demande de brevet européen 0 430 315, la demande de brevet européen 0 341 999, la demande de brevet international WO 94/03578, la demande de brevet international WO 94/25556 et la demande de brevet international WO 91/00910.
Ces additifs doivent être compatibles avec la lipase et les tensioactifs contenus dans la composition détergente. En particulier, ils doivent être chimiquement inertes vis-à-vis de la lipase et des tensioactifs aux températures normales d'utilisation et de stockage de la composition détergente selon l'invention. La nature des additifs et leur teneur dans la composition doivent par ailleurs être choisies de manière à ne pas affecter notablement l'action de la lipase.
Les compositions détergentes selon l'invention peuvent également contenir d'autres substances choisies en fonction du domaine spécial d'application de la composition détergente. Parmi celles-ci, on peut citer les azurants optiques, les inhibiteurs de ternissement, les agents d'antiredépo-
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sition des salissures, les désinfectants, les inhibiteurs de corrosion, les parfums, les colorants, les agents régulateurs de pH.
Les compositions détergentes de l'invention peuvent être utilisées, selon leur formulation, comme poudre, granule ou liquide lessiviels pour laver le linge ; comme produit détachant pour détacher ou dégraisser des objets ou détacher le linge préalablement au nettoyage ; et comme poudre, granule ou liquide pour laver la vaisselle.
La présente invention est illustrée par les exemples suivants.
Exemple 1 Production de la lipase par la souche de Pseudomonas wisconsinensis T 92.677/1.
La souche de Pseudomonas wisconsinensis T 92.677/1, déposée à la collection nommée BELGIAN COORDINATED COLLECTIONS OF MICROORGANISM (LMG culture collection) sous le numéro LMG P-15151 le 12 octobre 1994, est mise en culture dans 25 ml de milieu LB à 30 C durant 12 heures.
Le milieu LB contient 10 g/l de tryptone (DIFCO), 5 g/l d'extrait de levure et 10 g/l de NaCl. Le pH est ajusté à 7,0 avec NaOH 0, IN. Le
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milieu est stérilisé à 123 C durant 30 minutes.
La culture est réalisée à 30. C sous agitation orbitale à raison de 200 révolutions par minute avec une amplitude d'environ 2,54 cm.
Puis, à partir de cette culture on réalise une culture dans 40 1 de milieu liquide LB contenu dans un fermenteur d'une capacité totale de 72 1.
Le pH du milieu est ajusté à 7,0 avec NaOH 0, 1N, le milieu est stérilisé à 123 C durant 30 minutes. La culture est réalisée à 30 C sous agitation axiale à raison de 150 tours par minute et sous une aération de 7 1 d'air par minute, la régulation d'oxygène dissous étant fixée à 10 % (v/v) par régulation de la vitesse d'agitation.
Dans cette demande, l'abréviation % (v/v) représente un pourcentage exprimé en volume par volume. L'abréviation % (v/p) représente un pourcentage exprimé en volume par poids. L'abréviation % (p/v) représente un pourcentage exprimé en poids par volume. L'abréviation % (p/p) représente un pourcentage exprimé en poids par poids.
Après 16 heures d'incubation, on introduit cette culture dans un fermenteur de 0,75 m3 contenant 0,4 m3 du milieu liquide D stérilisé.
Le milieu D contient K2HP04 2,5 g/l, KH2PO4 2,5 g/l,
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MgSO. THO 1 g/1, (NHSO 2 g/l, (NH2) 2CO 2 g/l, CaC12 1 g/l, farine de soja 20 g/l, extrait de levure 2 g/l, glucose 20 g/l, antimousse Mazuôl (MAZES CHEMICALS) 5 g/l. Le pH est ajusté à 7,4 (par de l'acide phosphorique normal et de la soude caustique normale) avant et après stérilisation dans le fermenteur. Le glucose est stérilisé, à part, à pH 3,5 (pH ajusté avec de l'acide sulfurique normal) durant 30 minutes à 123 C. Le milieu est stérilisé dans le fermenteur 30 minutes à 123 C.
La culture dans le fermenteur est réalisée à une température de 23 C, sous une pression de 0,15. 105 Pa (Pa = Pascal) (0,15 bar), avec une aération de 4 m3/h, avec une agitation axiale de 300 tours par minutes, la régulation d'oxygène dissous étant fixée à 10 % (v/v) par régulation de la vitesse d'agitation.
Après 24 heures de fermentation, on mesure l'activité enzymatique de la culture, ainsi obtenue, par la technique suivante.
L'hydrolyse de la trioléine est quantifiée par la neutralisation des acides gras libérés sous l'action de la lipase. Cette mesure est effectuée à l'aide d'un appareil de titrage automatique, appareil qui maintient le pH constant à une valeur de consigne par l'addition de NaOH 0,01 N.
Une unité lipase (LU) est définie comme la quantité d'enzyme qui catalyse la libération d'une micromole d'acide gras par minute dans les conditions standards de l'essai décrit ci-après.
On mélange 10 g de Trioléine (ROTH 5423.1) et 10 g de gomme arabique (FLUKA 51200) dans 100 ml d'eau distillée. On émulsionne ce mélange à l'aide d'un mélangeur ULTRA-TURRAX à 13500 tours par minutes (agitation axiale) 3 fois durant 5 minutes, en maintenant le mélange sous azote et dans un bain de glace.
On prépare un tampon de dilution contenant 2,34 g/1 de NaCl, 2,94 g/l de CaC12. 2H20 et 0,61 g/l de Tris (2-amino-2-hydroxy- méthyl-1, 3-propanediol).
On utilise un appareil de titrage automatique, muni d'une burette contenant du NaOH O, OIN, d'une sonde de température et d'une sonde de pH, et équipé d'un réacteur thennostatisé.
Dans le réacteur thermostatisé à 30 C, on introduit un barreau magnétique d'agitation, 10 ml d'émulsion de trioléine et 20 ml de tampon de dilution. Le pH de la solution, ainsi obtenue, est ajusté à 9,5 avec NaOH 0, 1N. Puis, on introduit 0,5 ml de l'échantillon à tester contenant la
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lipase, l'échantillon est éventuellement dilué de telle sorte qu'il ne contienne qu'un maximum de 5 LU. On contrôle le pH pendant les deux premières minutes avec NaOH O, OIN. Puis, on enregistre la consommation de soude entre 2 et 4 minutes, tout en maintenant le pH constant (volume de soude consommé entre 2 et 4 minutes = VI en ml).
Ensuite, on réalise le même essai en remplaçant l'échantillon contenant la lipase par 0,5 ml de tampon de dilution (volume de soude consommé entre 2 et 4 minutes = V2 en ml).
On détermine une unité lipase (LU) comme suit : 1 LU/ml = (VI-V2) x dilution éventuelle de l'échantillon x 10
Par cette méthode, une activité lipase est détectée dans la culture.
Exemple 2 Préparation d'une solution concentrée de lipase.
On refroidit la culture, obtenue à l'exemple 1, à une température de 15 C. On ajuste le pH de la culture à un pH d'environ 9 avec de la soude caustique concentrée 10 N.
Puis, on ajoute à cette culture 1 % (v/v) de Triton X-114 (UNION CARBIDE). Le mélange est agité doucement (agitation axiale de 50 tours par minute) pendant 2 heures à 15 C.
Ensuite, on ajoute au mélange 0,5 % (v/p) d'OPTIFLOC FC205 (SOLVAY) sous la forme d'une solution à 10 % (v/v). Le mélange est agité doucement (agitation axiale de 50 tours par minute) pendant 1 heure à 15 C.
Puis, on ajoute à ce mélange, maintenu à 15 C, 4 % (p/p) de produit CELATOM FW6 (EAGLE-PICHER). Le mélange est agité doucement (agitation axiale de 50 tours par minute) pendant 15 minutes à 15 C.
On passe le mélange à travers un filtre-presse WELDERS muni de plaques portant des membranes MARSYNTEX PPD2427 en limitant la pression à l'entrée à 4. 105 Pa (4 bar). On récupère un filtrat clair.
Ensuite, on concentre ce filtrat à l'aide de cartouches d'ultrafiltration AMICON S120, ayant une caractéristique de coupure de 10 kD.
Puis, on ajoute à l'ultrafiltrat 30 % (p/p) de NaCI (SOLVAY). On agite le mélange et on le chauffe à 40 C pendant 5 minutes. On transfert
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l'ultrafiltrat obtenu dans une boule à décanter de 10 1. On le refroidit à 4 C. Ensuite, on le laisse au repos pendant 16 heures à 4 C. On récupère alors la phase supérieure en éliminant la phase inférieure de la boule à
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décanter.
On ajoute à la phase supérieure 20 % (v/p) de n-butanol (JANSSEN 23.208. 25). On agite le mélange.
On centrifuge le mélange 10 minutes à 8500 tours par minute (BECKMAN J21, rotor JA10) à une température de 4 C. On conserve le précipité de centrifugation.
On dissout le précipité de centrifugation dans 5 1 d'une solution de tampon F contenant 40 % (v/v) de propylèneglycol, 3 mM Tris, 12 mM CaC12 et 24 mM NaCI.
On centrifuge le mélange 1 heure à 8500 tours par minute (BECKMAN J21, rotor JA10) à une température de 4 C. On conserve le surnageant de centrifugation.
On ajoute au surnageant de centrifugation 50 % (v/v) d'acétone. On laisse reposer la suspension acétonique pendant 1 heure à 4 C.
Puis, on centrifuge la suspension 10 minutes à 8500 tours par minute (BECKMAN J21, rotor JA10) à une température de 4 C. On conserve le surnageant de centrifugation.
On ajoute de l'acétone au surnageant de centrifugation à 4 C jusqu'à l'obtention d'une concentration en acétone de 80 % (v/v). On laisse reposer le mélange 1 heure à 4 C.
Ensuite, on centrifuge le mélange 10 minutes à 8500 tours par minute (BECKMAN J21, rotor JA10) à une température de 4 C. On conserve le précipité de centrifugation. On met en suspension ce précipité dans 1 1 de la solution de tampon F.
Puis, on centrifuge la suspension, contenant le précipité, 1 heure à 8500 tours par minute (BECKMAN J21, rotor JA10) à une température de 4 C.
On conserve le surnageant de centrifugation, qui forme une solution concentrée de lipase.
Exemple 3 Purification de la lipase.
Pour purifier la solution concentrée de lipase, telle qu'obtenue à l'exemple 2, on utilise la technique de purification mettant en oeuvre une chromatographie d'interaction hydrophobe.
En suivant les indications d'utilisation prescrites par le fournisseur (PHARMACIA) au sujet de la colonne de chromatographie d'interaction
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hydrophobe, on charge une colonne PHARMACIA Phenyl-Sepharose Fast Flow (High Sub-réf 17-0973-05) avec une solution diluée de lipase. On dilue la solution concentrée de lipase, telle qu'obtenue à l'exemple 2, avec 4 volumes de tampon contenant 3 mM Tris, 12 mM CaC12 et 24 mM NaCl.
On utilise, comme tampon d'équilibre, un tampon contenant 50 % (v/v) de propylèneglycol, 3 mM Tris, 12 mM CaC12 et 24 mM NaCI. Le débit est fixé à 5 ml par minute.
On récupère la lipase avec la fraction éluée. La pureté est d'environ 45 %.
Puis, on concentre la fraction, contenant la lipase, jusqu'à 50 ml par ultrafiltration à l'aide d'une cellule AMICON, munie d'une membrane YM10. Exemple 4 Préparation d'une composition détergente contenant la lipase.
On prépare une composition détergente liquide contenant 1 mg/l d'une lipase ayant une activité enzymatique d'environ 9600 LU/ml, et un mélange d'additifs.
On met en oeuvre la lipase telle qu'obtenue à l'exemple 3, que l'on dilue avec de l'eau de dureté 15 (eau contenant du chlorure de calcium 1,98 mM, du chlorure de magnésium 0,69 mM et du bicarbonate de sodium 2,5 mM), en vue d'obtenir la concentration souhaitée.
Le mélange d'additifs mis en oeuvre contient 0,5 g/l de LAS, Na (MARLON A350, C10-C13 alkylbenzène sulfonate de sodium ayant de 10 à 13 atomes de carbone) ; 0,02 g/l de savon ; 0,6 g/l de FAEO (9EO) produit vendu sous la marque MARLIPAL 24/90, alcool aliphatique polyéthoxylé ayant de 12 à 14 atomes de carbone et un degré d'éthoxylation égal à 9 (éthoxylate) (nombre de groupement EO (oxyde d'éthylène) égal à 9)] ; 0,06 g/l de propanediol ; 0,12 g/l d'éthanol ; 0,12 g/l de citrate de sodium ; 0,025 g/l de phosphonate [diethylene triamine penta (methylenephosphonic acid)].
Le pH initial de la composition détergente liquide est ajusté à environ 9,5 avec NaOH (1 mole/l).
Exemple 5 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 4, à l'exception de la formulation du mélange d'additifs.
Dans cet exemple, le mélange d'additifs mis en oeuvre contient
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0,25 g/l de LAS, Na (MARLON A350) ; 0,02 g/l de savon ; 0,8 g/l de FAEO (9EO) (MARUPAL 24/90) ; 0,25 g/l de FAES (MARLINAT 242/70) ; 0,06 g/l de propanediol ; 0,12 g/l d'éthanol ; 0,12 g/l de citrate de sodium ; 0,025 g/l de phosphonate [diethylene triamine penta (methylenephosphonic acid)].
Exemple 6 Utilisation d'une composition détergente.
On prépare un morceau de tissu blanc (R. HOPPE Gmbh) à base de coton (65 %) et de polyester (35 %) de 10 cm sur 10 cm, imprégné de graisse de lard et de rouge Soudan. L'imprégnation du tissu est réalisée comme suit.
On prépare une solution homogène de rouge Soudan 7B (SIGMA cat.
No F 1000) et de graisse de lard (LARU Gmbh) en ajoutant 0,1 % (p/p) de rouge Soudan à la graisse de lard. Le mélange est chauffé à 90 C jusqu'à complète dissolution du rouge Soudan. Un rouleau de tissu est plongé dans
EMI15.1
la solution de rouge Soudan et de graisse de lard maintenue à 90 C et déplacé en continu dans cette solution à la vitesse de 0, 5 m/minute.
Ensuite, le tissu est essoré sous une pression linéaire constante entre deux rouleaux.
Le tissu ainsi imprégné contient 31,5 % (p/p) de matières grasses. Le tissu imprégné est placé à-18 C durant 22 heures jusqu'à complète cristallisation de la matière grasse. Le tissu est découpé en morceaux de 10 cm sur 10 cm. Ensuite, les morceaux de tissu imprégné sont stockés à-18 C dans le noir.
Puis, on lave le tissu imprégné de graisse de lard et de rouge Soudan avec 200 ml de la composition détergente liquide, telle qu'obtenue à l'exemple 4, dans un réacteur de 250 ml. Le lavage a lieu à 10 C durant 25 minutes sous une agitation de 40 révolutions par minute (agitation va et vient de 20 secondes). Après le lavage, le tissu est rincé trois fois avec 200 ml d'eau de dureté de 15, puis séché à 22 C entre deux papiers durant 20 heures.
Ensuite, on détermine la réflectance (RL) à 560 nm du tissu séché à l'aide d'un colorimètre (TRICOLOR LFM 3), la valeur mesurée (Y) étant convertie en valeur L = 10/Y qui correspond à la réflectance.
On reproduit ce test trois fois, c'est-à-dire on effectue ensuite trois fois le cycle de lavage avec la composition détergente liquide contenant la
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lipase et le cycle de rinçage sur le même échantillon de tissu sans l'imprégner de rouge Soudan et de graisse de lard entre chaque cycle. A chaque fin de cycle, on détermine la réflectance à 560 nm du tissu séché.
Un essai strictement identique est réalisé avec une composition détergente, telle qu'obtenue à l'exemple 4, mais dans laquelle la lipase n'a pas été ajoutée. A chaque fin de cycle, on détermine la réflectance (RO) à 560 nm du tissu séché.
On définit la performance de lavage en % comme la différence entre la réflectance (RL) obtenue avec la lavage en présence de lipase et la réflectance (RO) obtenue avec la lavage en absence de lipase, c'est-à-dire RL-RO exprimé en %.
Les résultats obtenus sont rassemblés dans le tableau 1.
Tableau 1
EMI16.1
<tb>
<tb> Quantité <SEP> de <SEP> lipase <SEP> Performance <SEP> de <SEP> lavage
<tb> Nombre <SEP> de <SEP> lavage
<tb> mise <SEP> en <SEP> oeuvre <SEP> mg/1 <SEP> %
<tb> 1 <SEP> 0 <SEP> 26,16
<tb> 1 <SEP> 28,17
<tb> 2 <SEP> 0 <SEP> 56, <SEP> 85
<tb> 1 <SEP> 66,53
<tb> 3 <SEP> 0 <SEP> 69,57
<tb> 1 <SEP> 78, <SEP> 31
<tb> 4 <SEP> 0 <SEP> 78,52
<tb> 1 <SEP> 86,73
<tb>
Les résultats de cet exemple montrent que la composition détergente de l'invention est efficace à une température relativement basse et notamment à 10 C.
Exemple 7 Utilisation d'une composition détergente.
On suit le protocole décrit à l'exemple 6 en utilisant la composition détergente telle qu'obtenue à l'exemple 5.
Les résultats obtenus sont rassemblés dans le tableau 2.
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Tableau 2
EMI17.1
<tb>
<tb> Nombre <SEP> de <SEP> lavage <SEP> Quantité <SEP> de <SEP> lipase <SEP> Performance <SEP> de <SEP> lavage
<tb> mise <SEP> en <SEP> oeuvre <SEP> mg/l <SEP> %
<tb> 1 <SEP> 0 <SEP> 6, <SEP> 81
<tb> 1 <SEP> 8,23
<tb> 2 <SEP> 0 <SEP> 18, <SEP> 67
<tb> 1 <SEP> 63,04
<tb> 3 <SEP> 0 <SEP> 29,96
<tb> 1 <SEP> 79, <SEP> 18
<tb> 4 <SEP> 0 <SEP> 58, <SEP> 3
<tb> 1 <SEP> 88,29
<tb>
Les résultats de cet exemple montrent que la composition détergente de l'invention est efficace à une température basse et notamment à 10 C.
Exemple 8 Utilisation d'une composition détergente contenant la lipase.
On reproduit l'exemple 7, à l'exception de la température du lavage et de la quantité de lipase mise en oeuvre.
Dans cet exemple, le lavage a lieu à 30 C et on met en oeuvre 2 mg/l de lipase ayant une activité enzymatique de 9600 LU/1.
Les résultats obtenus sont rassemblés dans le tableau 3.
<Desc/Clms Page number 18>
EMI18.1
Tableau 3
EMI18.2
<tb>
<tb> Quantité <SEP> de <SEP> lipase <SEP> Performance <SEP> de <SEP> lavage
<tb> Nombre <SEP> de <SEP> lavage
<tb> mise <SEP> en <SEP> oeuvre <SEP> mg/ <SEP> ! <SEP> %
<tb> 1 <SEP> 0 <SEP> 41,12
<tb> 2 <SEP> 64,22
<tb> 2 <SEP> 0 <SEP> 52,86
<tb> 2 <SEP> 76,68
<tb> 3 <SEP> 0 <SEP> 62,2
<tb> 2 <SEP> 91,23
<tb> 4 <SEP> 0 <SEP> 72,82
<tb> 2 <SEP> 100
<tb>
Les résultats de cet exemple montrent que la composition détergente de l'invention est efficace dès le premier cycle de lavage.
Exemple 9 Préparation d'une composition détergente.
On prépare une solution aqueuse contenant 290,8 mg/l de chlorure de calcium CaC12, 2 H20 ; 140 mg/l de chlorure de magnésium MgCl, 2 H20 et 210 mg/l de carbonate de sodium NaHCO.
A cette solution aqueuse, on ajoute un tensioactif FAEO (3EO) produit vendu sous la marque MARUPAL 24/30 par HÜLS AG (Mari, Allemagne), alcool aliphatique polyéthoxylé ayant de 12 à 14 atomes de carbone et un degré d'éthoxylation égal à 3 (éthoxylate) (nombre de groupement EO (oxyde d'éthylène) égal à 3)], à une concentration de 0,5 g/l.
A cette solution aqueuse contenant le tensioactif FAEO (3EO), on ajoute une concentration de lipase équivalente à 20 LU/1. On met en oeuvre la lipase telle qu'obtenue à l'exemple 3, que l'on dilue avec de l'eau de dureté 15 en vue d'obtenir la concentration souhaitée.
Le pH de la composition obtenue est ajusté à un pH de 9,5 avec NaOH (1 mole/l).
On mesure l'activité enzymatique de cette composition détergente immédiatement. La méthode de mesure de l'activité enzymatique est décrite
<Desc/Clms Page number 19>
à l'exemple 2.
Exemple 10 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 9, en remplaçant le tensioactif FAEO (3EO) par le tensioactif FAEO (6EO) produit vendu sous la marque MARLIPAL 24/60 par HÜLS AG (Mari, Allemagne), alcool aliphatique polyéthoxylé ayant de 12 à 14 atomes de carbone et un degré d'éthoxylation égal à 6 (éthoxylate) (nombre de groupement EO (oxyde d'éthylène) égal à 6)], à une concentration de 0,5 g/l.
Exemple 11 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 9, en remplaçant le tensioactif FAEO (3EO) par le FAEO (7EO) produit vendu sous la marque MARLIPAL 24/70 par HÜLS AG (Mari, Allemagne), alcool aliphatique polyéthoxylé ayant de 12 à 14 atomes de carbone et un degré d'éthoxylation égal à 7 (éthoxylate)- (nombre de groupement EO (oxyde d'éthylène) égal à 7)], à une concentration de 0,5 g/l.
Exemple 12 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 9, en remplaçant le tensioactif FAEO (3EO) par le tensioactif FAEO (9EO), produit vendu sous la marque MARLIPAL 24/90 par HÜLS AG (Mari, Allemagne), alcool aliphatique polyéthoxylé ayant de 12 à 14 atomes de carbone et un degré d'éthoxylation égal à 9 (éthoxylate) (nombre de groupement EO (oxyde d'éthylène) égal à 9)] à une concentration de 0,3 g/l.
Exemple 13 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 9, en remplaçant le tensioactif FAEO (3EO) par le tensioactif LAS, Na produit vendu sous la marque MARLON A350 par HÜLS AG (Mari, Allemagne), alkylbenzène sulfonate de sodium ayant de 10 à 13 atomes de carbone, à une concentration de 0,5 g/l.
Exemple 14 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 9, en remplaçant le tensioactif FAEO (3EO) par le tensioactif FAES [produit vendu sous la marque MARUNA T 242170 par HÜLS AG (Mari, Allemagne), le sel d'éthoxysulfate alcoolique de
<Desc/Clms Page number 20>
sodium ayant de 12 à 14 atomes de carbone et un degré d'éthoxylation égal à 2], à une concentration de 0,5 gll.
Exemple 15 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 9, en remplaçant le tensioactif FAEO (3EO) par le tensioactif PAS, Na produit vendu sous la marque MARUNAT T55 par HÜLS AG (Marl, Allemagne), alkylsulfate de sodium ayant de 16 à 18 atomes de carbone], à une concentration de 0,5 g/l.
Exemple 16 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 9, en remplaçant le tensioactif FAEO (3EO) par un mélange de deux tensioactifs : - le tensioactif FAES, à une concentration de 0,5 g/l ; et - le tensioactif FAEO (9EO), à une concentration de 0,5 g/l.
Exemple 17 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 9, en remplaçant le tensioactif FAEO (3EO) par un mélange de trois tensioactifs : - le tensioactif LAS, Na, à une concentration de 0,25 g/l ; - le tensioactif FAES, à une concentration de 0,25 g/l ; et - le tensioactif FAEO (9EO), à une concentration de 0,5 g/l.
Exemple 18 Stabilité de compositions détergentes.
On teste la stabilité des compositions détergentes telles qu'obtenues aux exemples 9 à 17.
On incube les compositions détergentes, telles qu'obtenues aux exemples 9 à 17, durant 45 minutes à 35 C. Puis, on mesure l'activité enzymatique des compositions détergentes incubées.
Les résultats sont exprimés en % de l'activité enzymatique résiduelle basée sur l'activité de la lipase théoriquement ajoutée.
Les résultats sont rassemblés dans le tableau 4.
<Desc/Clms Page number 21>
Tableau 4
EMI21.1
<tb>
<tb> Exemple <SEP> Activité <SEP> résiduelle <SEP> %
<tb> Composition <SEP> avant <SEP> incubation <SEP> après <SEP> incubation
<tb> 9 <SEP> 131 <SEP> 112
<tb> 10 <SEP> 130 <SEP> 123
<tb> 11 <SEP> 124 <SEP> 117
<tb> 12 <SEP> 163 <SEP> 161
<tb> 13 <SEP> 0,5 <SEP> 0,4
<tb> 14 <SEP> 115 <SEP> 98
<tb> 15 <SEP> 97 <SEP> 92
<tb> 16 <SEP> 138 <SEP> 126
<tb> 17 <SEP> 130 <SEP> 107
<tb>
Ces résultats montrent que les compositions détergentes contenant l'un des tensioactifs FAEO (3EO), FAEO (6EO), FAEO (7EO), FAEO (9EO), FAES et PAS, Na, ou un mélange de ceux-ci sont stables ; alors que les compositions détergentes contenant uniquement le tensioactif référencé LAS, Na sont rapidement inactivées.
Ces résultats montrent que les compositions détergentes contenant l'un des tensioactifs FAEO (3EO), FAEO (6EO), FAEO (7EO), FAEO (9EO), ou un mélange de FAEO (9EO) et FAES sont très stables.
D'excellents résultats sont obtenus avec la composition détergente contenant le tensioactif FAEO (9EO).
Exemple 19 Préparation d'une composition détergente.
On prépare une solution aqueuse contenant 290,8 mg/l de chlorure de calcium CaCI2'2 H20 ; 140 mg/l de chlorure de magnésium MgC12, 2 H20 et 210 mg/l de carbonate de sodium NaHCO.
A cette solution aqueuse, on ajoute 120 mg/l de citrate de sodium, 60 mg/l de propylène glycol, 120 mg/l d'éthanol, 25 mg/l d'acide phosphonique (DEQUEST 2060S, MONSANTO) et 20 mg/l de savon d'huile de palme (EDENOR HPK).
A la suspension aqueuse ainsi obtenue, on ajoute deux tensioactifs : le tensioactif LAS, Na à une concentration de 0,5 g/l et le tensioactif
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FAEO (6EO) à une concentration de 0,3 g/l.
A cette suspension aqueuse contenant les deux tensioactifs cités, on ajoute une concentration de lipase équivalente à 20 LU/1. On met en oeuvre la lipase telle qu'obtenue à l'exemple 3, que l'on dilue avec de l'eau de dureté 15 en vue d'obtenir la concentration souhaitée.
Le pH de la composition détergente obtenue est ajusté à un pH de 9,5 avec NaOH (1 mole/l).
On mesure l'activité enzymatique de la composition détergente immédiatement. La méthode de mesure de l'activité enzymatique est décrite à l'exemple 2.
Exemple 20 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 19, en remplaçant le tensioactif FAEO (6EO) par le tensioactif FAEO (7EO) à la même concentration de 0,3 g/l.
Exemple 21 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 19, en remplaçant le tensioactif FAEO (6EO) par le tensioactif FAEO (9EO) à la même concentration de 0,3 g/l.
Exemple 22 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 21, en remplaçant le tensioactif LAS, Na par le tensioactif FAES à une concentration de 0,5 g/l.
Exemple 23 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 19, en remplaçant le mélange de deux tensioactifs [LAS, Na et FAEO (6EO)] par un mélange de trois tensioactifs : le tensioactif LAS, Na à une concentration de 0,25 g/l, le tensioactif FAES à une concentration de 0,25 g/l et le tensioactif FAEO (9EO) à une concentration de 0,5 g/l.
Exemple 24 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 19, en remplaçant le tensioactif FAEO (6EO) par le tensioactif FAEO (3EO) à la même concentration de 0,3 g/l.
Exemple 25 Stabilité de compositions détergentes.
En suivant la procédure décrite à l'exemple 18, on teste la stabilité des
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compositions détergentes telles qu'obtenues aux exemples 19 à 23.
On incube les compositions détergentes, telles qu'obtenues aux exemples 19 à 24, durant 45 minutes à 35 C.
Puis, on mesure l'activité enzymatique des compositions détergentes incubées.
Les résultats sont exprimés en % de l'activité enzymatique résiduelle basée sur l'activité de la lipase théoriquement ajoutée.
Les résultats sont rassemblés dans le tableau 5.
Tableau 5
EMI23.1
<tb>
<tb> Exemple <SEP> Activité <SEP> résiduelle <SEP> %
<tb> Composition <SEP> avant <SEP> incubation <SEP> après <SEP> incubation
<tb> 19 <SEP> 132 <SEP> 2
<tb> 20 <SEP> 130 <SEP> 2
<tb> 21 <SEP> 117 <SEP> 1
<tb> 22 <SEP> 170 <SEP> 163
<tb> 23 <SEP> 128 <SEP> 112
<tb> 24 <SEP> 155 <SEP> 75
<tb>
Ces résultats montrent que la composition détergente contenant deux tensioactifs : le tensioactif FAES et le tensioactif FAEO (9EO) est très stable.
Ces résultats montrent également que la composition détergente contenant trois tensioactifs : le tensioactif LAS, Na, le tensioactif FAES et le tensioactif FAEO (9EO) est stable.
Exemple 26 Préparation d'une composition détergente.
On prépare une composition détergente liquide contenant 0,6 mg/l d'une lipase ayant une activité enzymatique d'environ 9600 LU/ml, et un mélange d'additifs.
On met en oeuvre la lipase telle qu'obtenue à l'exemple 3, que l'on dilue avec de l'eau de dureté 15 (eau contenant du chlorure de calcium 1,98 mM, du chlorure de magnésium 0,69 mM et du bicarbonate de sodium 2,5 mM), en vue d'obtenir la concentration souhaitée.
Le mélange d'additifs mis en oeuvre contient 0,5 gll de LAS, Na ;
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0,02 gll de savon ; 0,3 g/1 de FAEO (3EO) ; 0,06 g/1 de propanediol ; 0,12 g/1 d'éthanol ; 0,12 g/l de citrate de sodium ; 0,025 g/l de phosphonate [diethy- lene triamine penta (methylenephosphonic acid)].
Le pH initial de la composition détergente liquide est ajusté à environ 9,5 avec NaOH (1 mole/l).
Exemple 27 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 26, en remplaçant le tensioactif FAEO (3EO) par le tensioactif FAEO (6EO) à la même concentration de 0,3 g/l.
Exemple 28 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 26, en remplaçant le tensioactif FAEO (3EO) par le tensioactif FAEO (7EO) à la même concentration de 0,3 g/l.
Exemple 29 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 26, en remplaçant le tensioactif FAEO (3EO) par le tensioactif FAEO (9EO) à la même concentration de 0,3 g/l.
Exemple 30 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 26, en remplaçant le tensioactif FAEO (3EO) par le tensioactif FAEO (9EO) à la même concentration de 0,3 g/l et le tensioactif LAS, Na par le tensioactif FAES à la concentration de 0,5 g/l.
Exemple 31 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 26, en mettant en oeuvre le tensioactif
EMI24.1
FAEO (3EO) à la concentration de 0, 15 g/l et en ajoutant le tensioactif FAEO (9EO) à la concentration de 0, 15 g/l.
Exemple 32 Préparation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 31, en remplaçant le tensioactif FAEO (9EO) par le tensioactif FAEO (7EO) à la même concentration de 0,15 g/l.
Exemple 33 Utilisation d'une composition détergente.
On reproduit le protocole décrit à l'exemple 6, à l'exception de la température de lavage qui est de 35 C dans cet exemple, et non de 10 C, et à l'exception de la durée du lavage qui est de 45 minutes dans cet
<Desc/Clms Page number 25>
exemple, et non de 25 minutes. On utilise la composition détergente telle qu'obtenue à l'exemple 26.
Les résultats sont rassemblés dans le tableau 6.
Tableau 6
EMI25.1
<tb>
<tb> Quantité <SEP> de <SEP> lipase <SEP> Performance <SEP> de <SEP> lavage
<tb> Nombre <SEP> de <SEP> lavage
<tb> mise <SEP> en <SEP> oeuvre <SEP> mg/l <SEP> %
<tb> 1 <SEP> 0 <SEP> 65,16
<tb> 0,6 <SEP> 51,76
<tb> 2 <SEP> 0 <SEP> 76,42
<tb> 0,6 <SEP> 69,60
<tb> 3 <SEP> 0 <SEP> 80, <SEP> 72
<tb> 0,6 <SEP> 75,29
<tb> 4 <SEP> 0 <SEP> 83, <SEP> 83
<tb> 0,6 <SEP> 79,03
<tb>
Exemple 34 Utilisation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 33 en mettant en oeuvre la composition détergente telle qu'obtenue à l'exemple 27.
Les résultats sont rassemblés dans le tableau 7.
<Desc/Clms Page number 26>
EMI26.1
Tableau 7
EMI26.2
<tb>
<tb> Quantité <SEP> de <SEP> lipase <SEP> Performance <SEP> de <SEP> lavage
<tb> Nombre <SEP> de <SEP> lavage
<tb> mise <SEP> en <SEP> oeuvre <SEP> mg/1 <SEP> %
<tb> 1 <SEP> 0 <SEP> 67, <SEP> 01
<tb> 0,6 <SEP> 70,11
<tb> 2 <SEP> 0 <SEP> 80, <SEP> 26
<tb> 0,6 <SEP> 81, <SEP> 51
<tb> 3 <SEP> 0 <SEP> 87, <SEP> 21
<tb> 0, <SEP> 6 <SEP> 89,41
<tb> 4 <SEP> 0 <SEP> 93, <SEP> 49
<tb> 0,6 <SEP> 95,62
<tb>
Exemple 35 Utilisation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 33 en mettant en oeuvre la composition détergente telle qu'obtenue à l'exemple 28.
Les résultats sont rassemblés dans le tableau 8.
Tableau 8
EMI26.3
<tb>
<tb> Quantité <SEP> de <SEP> lipase <SEP> Performance <SEP> de <SEP> lavage
<tb> Nombre <SEP> de <SEP> lavage
<tb> mise <SEP> en <SEP> oeuvre <SEP> mg/l <SEP> %
<tb> 1 <SEP> 0 <SEP> 60, <SEP> 46
<tb> 0,6 <SEP> 64, <SEP> 15
<tb> 2 <SEP> 0 <SEP> 79, <SEP> 57
<tb> 0,6 <SEP> 80,64
<tb> 3 <SEP> 0 <SEP> 86,29
<tb> 0,6 <SEP> 88,62
<tb> 4 <SEP> 0 <SEP> 92, <SEP> 35
<tb> 0,6 <SEP> 95,56
<tb>
<Desc/Clms Page number 27>
Exemple 36 Utilisation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 33 en mettant en oeuvre la composition détergente telle qu'obtenue à l'exemple 29.
Les résultats sont rassemblés dans le tableau 9.
Tableau 9
EMI27.1
<tb>
<tb> Quantité <SEP> de <SEP> lipase <SEP> Performance <SEP> de <SEP> lavage
<tb> Nombre <SEP> de <SEP> lavage
<tb> mise <SEP> en <SEP> oeuvre <SEP> mg/l <SEP> %
<tb> 1 <SEP> 0 <SEP> 19,13
<tb> 0,6 <SEP> 23,07
<tb> 2 <SEP> 0 <SEP> 32,12
<tb> 0,6 <SEP> 50,44
<tb> 3 <SEP> 0 <SEP> 44, <SEP> 72
<tb> 0,6 <SEP> 68,52
<tb> 4 <SEP> 0 <SEP> 56,64
<tb> 0, <SEP> 6 <SEP> 80, <SEP> 95
<tb>
Exemple 37 Utilisation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 33 en mettant en oeuvre la composition détergente telle qu'obtenue à l'exemple 30.
Les résultats sont rassemblés dans le tableau 10.
<Desc/Clms Page number 28>
EMI28.1
Tableau 10
EMI28.2
<tb>
<tb> Quantité <SEP> de <SEP> lipase <SEP> Performance <SEP> de <SEP> lavage
<tb> Nombre <SEP> de <SEP> lavage
<tb> mise <SEP> en <SEP> oeuvre <SEP> mg/l <SEP> %
<tb> 1 <SEP> 0 <SEP> 7,34
<tb> 0,6 <SEP> 7,51
<tb> 2 <SEP> 0 <SEP> 8,92
<tb> 0,6 <SEP> 12,13
<tb> 3 <SEP> 0 <SEP> 10, <SEP> 16
<tb> 0,6 <SEP> 29,27
<tb> 4 <SEP> 0 <SEP> 11,17
<tb> 0,6 <SEP> 65,23
<tb>
Ces résultats montrent également que la composition détergente contenant deux tensioactifs : le tensioactif LAS, Na et le tensioactif FAEO (9EO) a une bonne performance de lavage.
Exemple 38 Utilisation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 33 en mettant en oeuvre la composition détergente telle qu'obtenue à l'exemple 31.
Les résultats sont rassemblés dans le tableau Il.
<Desc/Clms Page number 29>
EMI29.1
Tableau 11
EMI29.2
<tb>
<tb> Quantité <SEP> de <SEP> lipase <SEP> Performance <SEP> de <SEP> lavage
<tb> Nombre <SEP> de <SEP> lavage
<tb> mise <SEP> en <SEP> oeuvre <SEP> mg/l <SEP> %
<tb> 1 <SEP> 0 <SEP> 67,01
<tb> 0,6 <SEP> 69,19
<tb> 2 <SEP> 0 <SEP> 80,62
<tb> 0,6 <SEP> 80,99
<tb> 3 <SEP> 0 <SEP> 87,47
<tb> 0,6 <SEP> 88,25
<tb> 4 <SEP> 0 <SEP> 93, <SEP> 64
<tb> 0,6 <SEP> 94,33
<tb>
Ces résultats montrent également que la composition détergente contenant deux tensioactifs : le tensioactif FAES et le tensioactif FAEO (9EO) a une bonne performance de lavage.
Exemple 39 Utilisation d'une composition détergente.
On reproduit l'exemple 33 en mettant en oeuvre la composition détergente telle qu'obtenue à l'exemple 32.
Les résultats sont rassemblés dans le tableau 12.
<Desc/Clms Page number 30>
Tableau 12
EMI30.1
<tb>
<tb> Quantité <SEP> de <SEP> lipase <SEP> Performance <SEP> de <SEP> lavage
<tb> Nombre <SEP> de <SEP> lavage
<tb> mise <SEP> en <SEP> oeuvre <SEP> mg/l <SEP> %
<tb> 1 <SEP> 0 <SEP> 78,00
<tb> 0,6 <SEP> 73,69
<tb> 2 <SEP> 0 <SEP> 84,90
<tb> 0,6 <SEP> 82,09
<tb> 3 <SEP> 0 <SEP> 91,17
<tb> 0,6 <SEP> 88,35
<tb> 4 <SEP> 0 <SEP> 96, <SEP> 05
<tb> 0, <SEP> 6 <SEP> 93,30
<tb>