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Die Erfindung betrifft neue Verwendungen von Präparaten, die aus elektrolytangereicherten Keimlingen hergestellt werden.
Während der positive Einfluss regelmässigen Obst-, Gemüse und Ballaststoff-Konsums auf die Gesundheit und das Immunsystem unbestritten ist, zeigt die Zufuhr einzelner isolierter Vitamine oft widersprüchliche Ergebnisse in klinischen Untersuchungen und Interventionsstudien.
Es ist bekannt, dass bedarfsadäquat dosierte und kombinierte Mikronährstoff-Komplexe einen positiven Einfluss auf das Immunsystem von HIV-positiven Patienten haben, insbesondere den Quotienten aus T-Helferzellen und T-Suppressorzellen steigern können (N. Fuchs et alii : WMW 1996 ; 145 : 483-493. I. Guth et alii : J. f. Ortho Med. 5 ; 4 (1997) 325-348).
Dagegen führte die isolierte Zufuhr einzelner Nährstoffe, z. B. von antioxidativem beta-Carotin zu erhöhter Lungenkrebs-Inzidenz und höherer Mortalitätsrate bei Rauchern (ATBC-Studie : New England Journal of Medicine 1994 ; 15 : 1029-1035). Eine andere Studie zeigte einen Anstieg des Schlaganfall-Risikos nach Einnahme von isoliertem, synthetischem Vitamin E.
Offensichtlich also zeigen Labor-Vitamine nicht immer jene positiven Wirkungen, wie sie von Vitalstoffen aus Obst und Gemüse erwarten werden.
Ein wesentlicher Grund für die unterschiedliche Wirkung von "chemischen" und "natürlichen" Vitaminen beim Menschen mag die Komplexität des menschlichen Zellstoffwechsels sein. Aus der Biochemie sind bis heute etwa 50. 000 verschiedene Stoffwechselreaktionen bekannt. Jede dieser Reaktionen benötigt ein spezielles Vitamin, Spurenelement oder einen anderen Vitalstoff, um optimal ablaufen zu können.
Der menschliche Körper benötigt also nicht einzelne Vitamine und Spurenelemente um gesund zu bleiben, sondern eine Vielzahl von einander unterstützenden und regenerierenden Vitalstoffen (Vitaminen, Spurenelementen, essentiellen Fettsäuren, sogenannten sekundären Pflanzenstoffen). Wie zahlreiche Ernährungs-Studien zeigen, bedarf der humane Stoffwechsel, insbesondere auch jener des Immunsystems, des komplexen Zusammenspiels zellulärer Enzym-Aktivatoren, einander regenerierender antioxidativer Systeme, hochungesättigter Fettsäuren zur Regeneration der zellulären Biomembranen sowie interstitieller Bindegewebsmodu- latoren.
Vergleichende Untersuchungen des pflanzlichen und humanen Zellstoffwechsels zeigten weitgehende Analogien im Metabolismus von Proteinen, Fetten und Kohlenhydraten. Im Gegensatz zur humanen Zelle ist jedoch die Pflanzenzelle in der Lage, die für Wachstum und Regeneration vermehrt benötigten organischen Reduktions-Äquivalente (z. B. Vitamine) über photosynthetische Prozesse endogen zu synthetisieren (A. E. Harmuth-Hoene, A. E. Bognar et alii : Der Einfluss der Keimung auf den Nährwert von Weizen, Mungbohnen und Kichererbsen, Z. Lebensm. Unters.
Forsch. 1987, 185 ; 286-393). Die gesteigerte endogene Syntheseleistung keimender Getreidezellen für antioxidative Vitamine und hochungesättigte Fettsäuren ist somit vermutlich biochemischer Ausdruck des erhöhten Bedarfs im Rahmen reduktiver Aufbau- und Regenerationsprozesse. Im Rahmen zahlreicher Versuchsreihen gelang es, keimende Getreidesamen mit mineralischen, essentiellen Spurenelementen anzureichern (J. Lintschinger, N. Fuchs et alii : Uptake of various trace elements during germination of wheat, buckwheat and quinoa ; Plant Foods for Human Nutrition 50 : 223-237,1997). Durch die moderate Zufuhr essentieller Spurenelemente wurde sowohl die enzymatische Syntheseleistung zur Ausbildung organischer Vitamine, als auch der Gehalt an organisch gebundenen Spurenelementen gesteigert (J. Lintschinger, N. Fuchs et alii : Selenium Enriched Sprouts.
A Raw Material For Fortified Cereal-Based Diets ; J. of Agricultural and Food Chemistry, 2000 : 48, 11 : 5362-5368).
Die Keimung von Pflanzensamen in Elektrolyt-Lösungen zur Herstellung elektrolytangereicherter Keimlinge ist beispielsweise in den EP 0 770 324 A und EP 0 799 578 A beschrieben.
Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung bestand darin, neue Verwendungen für derartige Präparate aus elektrolytangereicherten Keimlingen zur Verfügung zu stellen.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher die Verwendung eines aus elektrolytangereicherten Pflanzenkeimlingen hergestellten Präparates zur Herstellung einer pharmazeutischen Präparation zur Verringerung der Cholesterin-Konzentration im Blut (i. e zur Herbeiführung einer verringerten Cholesterin-Konzentration im Blut).
Weiters eignen sich derartige Präparate zur Herstellung einer pharmazeutischen Präparation zur Verringerung der Low-Density-Lipoprotein- (LDL-) Konzentration im Blut (i. e. zur Herbeiführung einer verringerten LDL-Konzentration im Blut).
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Die erfindungsgemässen Verwendungen haben sich insbesondere im geriatrischen Bereich bewährt, wie die in den Beispielen gezeigten Ergebnisse der medizinischen Studie eindrucksvoll belegen.
Erfindungsgemäss werden die pharmazeutischen Präparationen vorzugsweise in Lebensmittelform zur Verfügung gestellt, um so die prophylaktische Anwendung so leicht wie möglich für die Ziel-Individuen zu gestalten.
Aufgrund der erfindungsgemässen Erkenntnisse betrifft die vorliegende Erfindung auch die Verwendung der elektrolytangereicherten Keimlings-Präparate zur Herstellung einer pharmazeutischen Präparation zur Verhinderung von Atherosklerose, Herzinfarkt und/oder Schlaganfall.
LDL sind Low-Density-Lipoproteine, d. h. Lipoproteine mit geringer Dichte, wobei sie den grössten Teil des Cholesterins im Blut enthalten. LDL transportieren Cholesterin zu den verschiedenen Organen, wo sie durch Rezeptoren in die Zellen eingeschleust werden. Sind zu viel LDL im Blut vorhanden, werden diese stark im Blut angereichert, Makrophagen nehmen das LDL auf und lagern es so lange ein, bis sie mit Cholesterin überladen in der Gefässwand liegen bleiben und so den arteriosklerotischen Prozess auslösen : Die Cholesterin-haltigen Ablagerungen an den Arterienwänden führen zu Gefässeinengungen, die schliesslich den Blutfluss erheblich stören und zur Unterbrechung führen können. Die von diesen Gefässen abhängigen Körpergewebe werden durch längere Unterbrechung der Blutversorgung gefährlich geschädigt.
Dies führt zu Infarkt, d. h. zu einem Absterben von Gewebe bzw. ganzer Organe. Besonders häufig bilden sich solche Ablagerungen an den Gefässen, die das Herz mit Blut versorgen, den Herzkranzgefässen. Die schlimmsten Auswirkungen der Arteriosklerose sind Schlaganfall und Herzinfarkt. Daher besteht ein Zusammenhang zwischen der Cholesterin- und der LDL-Konzentration im Blut sowie Atherosklerose, Herzinfarkt und Schlaganfall.
Dabei war es aber umso überraschender, dass zwar die zelluläre Immunantwort spezifisch mit den erfindungsgemässen Verwendungen beeinflusst werden konnte, nicht aber die humorale Immunantwort. Weiters konnten auch keine signifikanten Wirkungen auf das rote Blutbild (Erythrozyten, Hämoglobin, etc. ), auf die Blutchemie (ausgenommen Cholesterin und LDL) oder die Thrombozytenzahl durch die erfindungsgemässe Verabreichung der elektrolytangereicherten KeimlingsPräparate nachgewiesen werden. Auch klinische Parameter, wie Gewicht, Temperatur, Herzfrequenz, Blutdruck und EKG blieben unbeeinflusst.
Bevorzugte elektrolytangereicherte Keimlinge, die gemäss der vorliegenden Erfindung verwendet werden können, sind die gemäss der EP 0 770 324 A geoffenbarten Keimlinge bzw. die gemäss der EP 0 799 578 A beschriebenen Kombinationspräparate.
Bevorzugter Weise sollten die erfindungsgemässen Keimlinge einen im Vergleich zu herkömmlich (also in herkömmlichem Leitungswasser) aufgekeimten Samen um mindestens 10 bis 20 %, vorzugsweise um mindestens das 1, 5- bis 3-fache, insbesondere um mindestens das 5- bis 10-fache, erhöhten Gehalt an einem oder mehreren Elektrolyten, vorzugsweise an Zink, Eisen, Kalium, Magnesium, Kupfer, Mangan, Strontium, Selen, Molybdän, Chrom, Arsen, Vanadium und/ oder Kobaltionen, aufweisen.
Bei der herkömmlichen Samenkeimung, bei weicher die Samen in destilliertem Wasser oder in Leitungswasser zur Keimung gebracht worden sind, treten immer zum Teil erhebliche Verluste an diesen für die Ernährung wichtigen Bestandteilen auf. Diese Verluste waren sowohl durch den beginnenden Stoffwechselprozess des Pflanzenkeimlings selbst bedingt, aber auch durch die Natur des Quellmittels Wasser, welches zu einer zusätzlichen Elektrolytauslaugung des Keimlings beitrug, da, im Gegensatz zum Ruhezustand (Samen), die Schale des Keimlings einer Elektrolytauslaugung sehr wohl zugänglich ist.
Es hat sich weiters gezeigt, dass die erfindungsgemäss verwendeten elektrolytangereicherten Keimlinge nicht nur eine höhere Konzentration an Mineralstoffen aufweisen, sondern, bedingt durch den erhöhten Mineralstoffgehalt, auch ganz allgemein im Hinblick auf ihre Inhaltsstoffe verbessert sind, beispielsweise einen erhöhten Vitamingehalt aufweisen.
Eine bevorzugte Herstellungsform der erfindungsgemässen Keimlinge besteht darin, dass die keimfähigen Samen in eine Elektrolytlösung eingebracht werden und die Keimlinge in der Elektrolytlösung bei einer geeigneten Temperatur während einer Zeitdauer, die ausreicht, um in den Keimlingen eine Elektrolytanreicherung zu erzielen, inkubiert werden.
Unter Verwendung einer Elektrolytlösung, also einer Lösung, die im Gegensatz zu den
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herkömmlichen Keimungslösungen (Leitungswasser bzw. destilliertes oder sterilisierte Wasser) erhöhte lonenkonzentration beinhaltet, können die im Zuge der Keimung auftretenden Elektrolytverluste ausgeglichen werden bzw. sogar durch einen Elektrolytfluss aus der Keimungslösung in die Keimlinge ins Gegenteil verkehrt werden. Somit können Keimlinge entstehen, die z. T. sogar einen gegenüber dem Samen erhöhten Gehalt an Elektrolyten aufweisen.
Unter Elektrolytlösung wird vorzugsweise eine wässerige Lösung verstanden, welche mit einem oder mehreren Elektrolyten wie nachstehend definiert versetzt bzw. angereichert ist.
Die Ionenkonzentration der Elektrolytlösung kann um mindestens 10 bis 20 % über derjenigen von herkömmlichem Leitungswasser liegen, vorzugsweise ist die Ionenkonzentration der Elektrolytlösung zumindest in Bezug auf Eisen- und/oder Kupfer- und/oder Mangan- und/oder Strontium- und/oder Lithium-und/oder Molybdän-lonen zweimal so hoch wie die von herkömmlichem Leitungswasser, besonders bevorzugt mindestens fünfmal so hoch, insbesondere mindestens zehnmal so hoch.
Die geeignete Temperatur zur Durchführung der Keimung ist selbstverständlich von Samenart zu Samenart verschieden. Prinzipiell ist die Keimungstemperatur, welche im Stand der Technik für die jeweilige Samenart beschrieben ist, auch für das erfindungsgemässe Verfahren anzuwenden.
Vorzugsweise liegt diese Temperatur zwischen 10 und 50 C, insbesondere zwischen 20 und 30 C.
Die Zeitdauer, um in den Keimlingen eine ausreichende Elektrolytanreicherung zu erzielen, ist ebenfalls von Keimlingsart zu Keimlingsart unterschiedlich, es hängt auch davon ab, welche Elektrolytwerte im Keimling erreicht werden sollen. Auch hier dienen für eine bestimmte Art die Keimungsdauern, weiche im Stand der Technik beschrieben sind, als Richtwerte, bevorzugterweise wird daher die Keimung während einer Zeitdauer von etwa 12 bis 120 Stunden, insbesondere etwa 60 bis 100 Stunden, durchgeführt.
Es versteht sich, dass sowohl die Keimungstemperatur als auch die Keimungsdauer von einem Fachmann ohne weiteres durch einfache Versuche für jedes System optimiert werden und für bestimmte Arten durchaus auch über oder unter den oben angegebenen Richtwerten liegen kann.
Als bevorzugte Keimlinge sind erfindungsgemäss Keimlinge von gängigen pflanzlichen Nahrungsmitteln vorgesehen, insbesondere Keimlinge von Hülsenfrüchten und Getreidesamen. Besonders bevorzugte Keimlinge sind daher Weizen-, Buchweizen-, Quinoa-, Mungbohnen-, Bockshornklee-, Rettich-, Alfalfa-, Mais-, Kürbis-, Walnuss-, Roggen-, Gerste-, Reis-, Adzuki-Bohnen-, Erbsen-, Hirse-, Palmen-, Hafer-, Kichererbsen-, Kresse-, Leinsamen-, Linsen-, Senf-, Sesam-, Sojabohnen-, Sonnenblumen-, Amaranthkeimlinge und Mischungen dieser Keimlinge.
Die Elektrolytlösung kann 1 mg/l oder mehr, vorzugsweise 10 mg/l oder mehr, insbesondere 50 mg/l oder mehr Zink-und/oder Eisen-und/oder Kalium-und/oder Magnesiumionen, 0, 5 mg/1 oder mehr, vorzugsweise 5 mg/l oder mehr, insbesondere 25 mg/l oder mehr Kupfer- und/oder Mangan- und/oder Strontium- und/oder Lithiumionen, 0, 1 mg/1 oder mehr, vorzugsweise 1 mg/l oder mehr, insbesondere 5 mg/l oder mehr Selen- und/oder Molybdän- und/oder Chrom- und/oder Arsen- und/oder Vanadium- und/oder Kobaltionen enthalten mit der Massgabe, dass sich die lonenkonzentration der Elektrolytlösung in zumindest einer lonenspezies von der lonenkonzentration in Leitungswasser um mindestens 10 bis 20 % unterscheidet.
Eine besonders bevorzugte Elektrolytlösung enthält zumindest 0, 5 mg/I Kupfer- und/oder 1 mg/l Zink-und/oder 0, 1 mg/l Kobalt-und vorzugsweise mindestens 0, 1 mg/l Molybdän-und/oder 0, 5 mg/I Lithium- und/oder 1 mg/l Selen- und/oder 1 mg/1 Vanadiumionen.
Die elektrolytangereicherten Keimlinge können nach ihrer Herstellung je nach Verwendungszweck gewaschen, getrocknet und gegebenenfalls für den Verkauf geeignet weiterverarbeitet werden. Besonders bevorzugt ist die Aufbereitung der erfindungsgemässen Keimlinge zu Frischkost, zu Brotaufstrichen, zu Backwaren, Suppen oder zu Snack-artigen Lebensmitteln oder Nahrungsergänzungen in Form von Muesli, Kautabletten, Kapseln oder Liquida.
Vorzugsweise werden bei den erfindungsgemässen Verwendungen die Keimlinge in Kombination mit Mikronährstoffen eingesetzt. Bevorzugte Mikronährstoffe sind dabei mehrfach ungesättigte Fettsäuren, natürliche Karotenoidgemische, Keimextrakte, natürliche Anthocyangemische, natürliche Tocophenol- und Tocotrienolgemische, Vitamine und Coenzyme, essentielle und nicht essentielle Aminosäuren, Mineralstoffe und Mischungen derselben.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung im Sinne der Ansprüche ist selbstverständlich auch der nicht-therapeutische Bereich.
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Die Erfindung wird anhand der nachfolgenden medizinischen Studie auf die sie selbstverständlich nicht eingeschränkt ist, näher erläutert.
Beispiel :
Medizinischer Bericht über die Verwendung von einem Mikronährstoff-Konzentrat, enthaltend Präparationen von elektrolytangereicherten Keimlingen, zur Immunmodulation in der Geriatrie.
Indikation :
Ernährungssupplementation von Bewohnern einer geriatrischen Institution mit Erhebung der Auswirkungen auf das Immunsystem.
Prüfmedikation :
Auf Basis getrockneter elektrolytangereicherter Keimlinge, insbesondere Weizenkeimlinge, mit hohen Gehalten endogener Vitamin-, essentieller Fettsäuren- und Spurenelemente-Komplexe wurde ein diätetisches Lebensmittel PMN@-Mikronährstoff-Konzentrat im Rahmen der vorliegenden Studie eingesetzt ("Immunstabilisierender Faktor" ISFS) (Integriertes Mikronährstoffkonzentrat PMN@ vis vitalis AG/Österreich) versus Placebo : Suspendierbare Pulver in vier Geschmacksrichtungen (Tomate, Knoblauch-Spargel, Gemüse, Pilze). In heissem Wasser aufgelöst, 3 Monate hindurch, täglich in Form einer Suppe verabreicht.).
PMN@ steht für Pan Molekulare Nährstoffe und drückt die Lückenlosigkeit der NährstoffKomplexe im Gegensatz zu synthetischen Vitamin- und Spurenelement-Kombinationen aus.
Studienablauf :
Screeningphase
Blutabnahme aller Parameter
2 Monate Supplementation
Grippeimpfung in der 8. Woche
1 Monat Supplementation
Blutabnahme aller Parameter
2 Monate Follow up Zielgrössen : I) Immunologie
1) Lymphozytenphänotypisierung per FACS
2) Lymphozytenfunktionstestung (IL-2, IL-2R)
Lymphozytenaktivierbarkeit in vitro
3) Antikörpertiter nach Grippeimpfung
Parameter der Sicherheit : I) Labor 11) klinische Parameter lil) Erfassung von unerwünschten Wirkungen
Die primären Zielvorgaben lagen vorrangig in der Erhebung von schulmedizinisch akzeptierten und relevanten Parametern, mittels derer die Auswirkungen der Prüfsubstanz auf das Immunsystem evaluiert werden kann.
Da es sich um die Beurteilung eines Mikronährstoffpräparates in Form eines Supplements zur täglichen Ernährung handelt, wurde nach einer Patientenpopulation gesucht, in der der Faktor Ernährung möglichst homogen verteilt ist. Diese wurde in Form von Bewohnern einer geriatrischen Institution gewählt, da alle an der Prüfung teilnehmenden Personen von derselben Grossküche versorgt werden und es somit zu keiner Verfälschung der Ergebnisse kommt.
Die Auswirkungen der Prüfsubstanz auf das Immunsystem wurden entsprechend der zellulären und humoralen Immunität des Menschen mit Parametern, die beiden gerecht werden, evaluiert.
Diese waren : Leukozytenphänotypisierung per FACS, in vitro Aktivierung der T-Lymphozyten mit
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Bestimmung von IL-2 und IL-2r, sowie Antikörpertiterbestimmung nach einer Grippeimpfung im Laufe der Prüfung.
Beschreibung des Patientenkollektivs :
Rekrutiert wurden Patienten beiderlei Geschlechts, die seit mindestens 3 Monaten im Geriatriezentrum wohnhaft waren. Eine schriftliche Einverständniserklärung wurde vom Patienten oder seinem Sachwalter eingeholt.
106 Personen wurden randomisiert. 54 in der Verum- und 52 in der Placebogruppe.
Verum : 45 weibliche, 9 männliche.
Placebo : 44 weibliche, 8 männliche.
Das mittlere Patientenalter betrug 85 Jahre (62-98) in der Verum-und 85, 5 Jahre (65-98) in der Placebogruppe. Die Alters- und Geschlechtsverteilung entspricht demographischen Studien aus dieser Alterspopulation. Diese Verteilungsmuster, Alter und Geschlecht betreffend, ändern sich nicht signifikant in Bezug auf die für die "per protokol Analyse" definierten Patienten. Als solche wurden Patienten definiert, die mindestens 80% der Therapietage wenigstens 50% des Prüfpräparates konsumiert haben. Dies waren in der Verumgruppe 40 (32 weibliche und 8 männliche) und in der Placebogruppe 42 (35 weibliche und 7 männliche) Personen.
I) Zielparameter
1) Leukozytenphänotypisierung :
Diese wurde mittels einer standardisierten, good laboratory practice-konformen Methode per FACS durchgeführt. Bestimmt wurden die Oberflächen marker CD2+/CD3-, CD2+/CD3+, CD3+, CD3+/CD4+, CD3+CD8+, CD3-/CD16, 56+, CD3+/CD16, 56+, CD19, CD3+/HLA-DR+, CD4+/CD45RA+, CD4+/CD45RO+, CD8+/CD38+.
Mit Hilfe von Oberflächenmarkern an den Lymphozyten können die einzelnen Subpopulationen beschrieben und quantifiziert werden. Lymphozyten sind eine Fraktion der Leukozyten. Diese wurden im Zuge der Blutabnahme zu Beginn und am Ende der Prüfung abgenommen und ausgewertet.
Leukozyten :
Im Vergleich der Ausgangswerte zwischen den beiden Gruppen findet sich kein signifikanter Unterschied (p=0, 468).
Die statistische Auswertung der Veränderungen innerhalb der Gruppen zueinander zeigt eine Signifikanz zugunsten der Verum-Gruppe von p=0, 03.
Eine Vermehrung der Leukozyten kann, aus medizinischer Sicht, einen Infekt andeuten. Ein Vergleich dieses Einzelparameters mit den Ergebnissen der Blutsenkung, des CRP und der Aufzeichnung von fiebersenkenden Medikamenten/Antibiotika und Fiebertagen lässt in Kombination all dieser Parameter den Schluss zu, dass die Leukozytenvermehrung in der Verum-Gruppe nicht durch vermehrte Infekte verursacht ist.
Lymphozyten :
Der Vergleich der Ausgangswerte ist mit p=0, 989 nicht signifikant.
Eine Signifikanz von p=0, 034 bei der Gegenüberstellung der Gruppenveränderungen BeginnEnde zeigt eine Vermehrung der Lymphozyten in der Verum-Gruppe.
In Zusammenschau mit den anderen erhobenen Parametern, ist aus medizinisch-hämatologi- scher Sicht ein Einfluss durch die Prüfsubstanz anzunehmen. Dies wird insoferne bestärkt, da sich aus der Kombination aller vorliegenden Daten (siehe oben) keine anderen Ursachen (Infekte etc. ) im klinischen Sinn verifizieren lassen.
Die Lymphozyten repräsentieren das Immunsystem. Man unterscheidet T- und B-Lymphozyten. Die T-Ly repräsentieren die zelluläre Immunität und die B-Ly die humorale (Produktion von Immunglobulinen). In früheren Studien (siehe Einleitung) sind Auswirkungen der Prüfsubstanz auf das zelluläre Immunsystem beobachtet worden. Mit Hilfe der FACS-Untersuchung wurden die Lymphozyten subtypisiert.
B-Lymphozyten :
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Der Oberflächenmarker CD-19 ist repräsentativ für die Population der B-Ly.
Weder in der Verum- (p=0, 216) noch in der Placebo-Gruppe (p=0, 509) kommt es zu Veränderungen während des Studienverlaufs. Auch eine Auswertung der Verläufe einander gegenübergestellt, zeigt keine Signifikanz (p=0, 856).
Da B-Ly immunglobulinproduzierende Zellen sind, wurde deren Auswertung in Kombination mit den Labordaten der Elektrophorese diskutiert :
Sowohl in der Gesamtproteinmenge, als auch in den einzeln ausgewerteten Subgruppen (Alb, a1, a2, ss und y-Globuline) kam es zu keinen medizinisch interpretierbaren Veränderungen. In der Zusammenschau aller, das humorale Immunsystem repräsentierenden Parameter, kommt es in keiner der beiden Gruppen zu einer Veränderung im Sinne einer hämatologisch-immunologi- schen Relevanz.
Zelluläre Immunität :
Mit Hilfe der Oberflächenmarkerprofile CD2+/CD3+, CD2+/CD3- und CD3+ wurde die Population der T-Ly ermittelt. Zusätzliche Fraktionierungen der "Helferzellen" (CD3 +/CD4+),"Suppres- sorzellen" (CD3+/CD8+), "natürlichen Killerzellen" (CD3-/CD16, 56+),"aktivierten T-Ly" (CD3+/HLA-DR+) und der"zytotoxischen T-Ly" (CD8+/CD38+) wurden zur exakten Beschreibung der zellulären Immunität herangezogen.
T-Lymphozyten :
CD3+ definiert T-Ly allgemein. Da in der Immunologie eine Zellart nicht durch einen einzigen Marker, sondern durch Kombinationen aus denselben eingegrenzt wird, wurde auch CD2+/CD3+ bestimmt, um die Population der T-Ly möglichst exakt darzustellen.
In der Auswertung beider Lymphozytenprofile lagen keine signifikanten Unterschiede der Ausgangswerte vor.
CD3+
In der Verumgruppe kommt es zu einem signifikanten Anstieg im Verlauf (p=0, 004). Der Gruppenvergleich zueinander liegt mit p=0, 023 ebenfalls signifikant zu Gunsten Verum vor.
CD2+/CD3+
Auch hier kommt es zu einem signifikanten Anstieg in der Verumgruppe (p=0, 011) und einer Signifikanz von p=0, 037 im Vergleich Verum zu Placebo.
Durch diese exakte Definition der T-Ly und einer statistischen Signifikanz in beiden Populationen ist der Schluss zulässig, dass die Prüfsubstanz eine Veränderung dieser Zellen bewirkt.
Helferzellen CD3+/CD4+
Mit einem p=0, 014 innerhalb des Verlaufes und einem p=0, 093 im Gruppenvergleich zeigt sich in dieser Subpopulation ebenfalls ein Effekt zu Gunsten von Verum.
Suppressorzellen CD3+/CD8+
Innerhalb der Verumgruppe zeigt sich ein signifikanter Anstieg mit p=0, 003. Keine Signifikanz liegt mit p=0, 061 im Gruppenvergleich vor.
Ratio CD4+/CD8+
Dieser Wert ist in der Verumgruppe mit p=0, 019 signifikant im Verlauf abgefallen. Im Gruppenvergleich zeigt sich kein signifikanter Unterschied (p=0, 979).
Natürliche Killerzellen CD3-/CD16, 56+
Mit p=0, 026 findet sich eine signifikante Zunahme dieser Zellen in der Verumgruppe. Der Gruppenvergleich resultiert in einem p-Wert von 0, 509 als nicht signifikant.
T-Lymphozyten in aktivierter Form CD3+/HLA-DR+
Diese Zellen repräsentieren jenen Anteil, der durch einen internen oder externen Reiz in eine aktivierte Form übergegangen ist. Weder innerhalb der Gruppenverläufe, noch im direkten Grup-
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penvergleich kommen Signifikanzen zur Darstellung.
Zytotoxische T-Lymphozyten CD8+/CD38+
Signifikante Anstiege sind sowohl in der Verum- (p < 0, 001), als auch in der Placebogruppe (p=0, 002) zu verzeichnen. Der Gruppenvergleich ist mit p=0, 089 im nicht signifikanten Bereich.
Repräsentative T-Ly Marker des "alten" Immunsystems
Mit den beiden hier gesondert evaluierten Parametern wurde der Einfluss der Prüfsubstanz auf das Immunsystem des alten Menschen beschrieben.
"naive Zellen" CD4+CD45RA+
Im Vergleich zwischen den beiden Gruppen findet sich eine signifikante Zunahme von p=0, 032 zu Gunsten Verum. Der Anstieg innerhalb des Verumverlaufes zeigt einen p-Wert von 0, 026.
Zellen mit"memory Funktion"CD45RO+
Die Verumgruppe verzeichnet einen Anstieg von p=0, 037, zwischen den Gruppen entstand kein signifikanter Unterschied.
2) Lymphozytenaktivität :
Zur Testung der Lymphozytenaktivität wurden ausreichende Mengen an Zellmaterial von jedem Patienten für die Zeitpunkte Beginn und Ende bei-70 C tiefgefroren. Alle Proben wurden gemeinsam, nach "good laboratory practice guidelines", einer Aufarbeitung für folgende Parameter zugeführt :
EMI7.1
- Interleukin-2 (IL-2)
Anzahl der aktivierbaren Lymphozyten
Es wurden jeweils exakt 3000 Lymphozyten untersucht. Die Angaben beziehen sich auf die Prozentzahl der davon in vivo aktivierbaren Zellen. In beiden Gruppen kam es zu einem signifikanten Anstieg von p < 0, 001. Der p-Wert im Gruppenvergleich beträgt 0, 095.
Interleukin-2 Rezeptor
Bestimmt wurde die mittlere Anzahl der Interleukin-2 Rezeptoren per 1000 Zellen. Ein p < 0, 001 findet sich im Verlauf beider Gruppen. Der Vergleich ergibt keine Signifikanz mit p=0, 488.
Interleukin-2
Die Werte werden als Faktor dargestellt. Ermittelt wird, um das Wievielfache sich die IL-2 Produktion nach Stimulierung im Vergleich zu "Beginn" erhöht. In der Verumgruppe findet sich ein Wert von p=0, 054. In der Placebogruppe von p=0, 045. Der Vergleich zwischen den beiden Gruppen liegt bei p=0, 102.
3) Antikörpertiter nach Grippeimpfung
Einen Monat nach der Grippeimpfung wurden die Seren auf Antikörper gegenüber der Stämme Caledonia, Panama und Yamanashi untersucht.
Caledonia
Die Anstiege waren in beiden Gruppen mit p < 0, 001 signifikant. Der Gruppenunterschied lag mit p=0, 745 im nicht signifikanten Bereich.
Yamanashi
Neben signifikanten Gruppenanstiegen (p < 0/001) zeigt sich eine Signifikanz von p=0, 042 von Placebo.
Panama
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Die Beurteilung dieses Parameters ist wegen einer Signifikanz von p=0, 007 zu Gunsten von Placebo bei den Ausgangswerten nur eingeschränkt beurteilbar.
Zusammenfassende Beurteilung aller erhobenen Immunparameter
Im folgenden Abschnitt werden die, der Prüfung zugrundeliegenden, wissenschaftlich belegten Fakten den Ergebnissen gegenübergestellt.
Aus den Untersuchungen der letzten Jahre ist bekannt, dass die Immunantwort mit zunehmendem Alter abnimmt. Dies betrifft besonders die Fraktion der T-Lymphozyten.
Die Analyse der zellulären Immunität anhand der T-Lymphozyten hat in der vorliegenden Prüfung zum Ergebnis, dass die mit Verum behandelte Gruppe einen signifikanten Anstieg dieser Zellen von p=0, 032 (CD3+) und p=0, 037 (CD2+/CD3+) aufweist. Die Gesamtlymphozytenzahl nimmt mit p=0, 034 ebenfalls signifikant zu.
Sowohl die klonale Proliferation, als auch der Reifungsprozess der Lymphozyten nehmen mit zunehmendem Alter ab. Das Verhältnis unreifer zu reifer Zellen verschiebt sich in Richtung der unreifen Formen. Das Äquiiibrium Suppressor - zu Helfer-Lymphozyten verändert sich in Richtung Helferzellen.
Die Ergebnisse in der Verumgruppe zeigen eine signifikante Vermehrung von CD3+/CD4+ (Heifer) mit p=0, 014 und CD3+/CD8+ von p=0, 003. Die Veränderungen des T4/T8Verhältnisses mit 0, 019 im Sinne eines Wertabfalles zeigen eine relative Vermehrung der Suppressorzellen an. Im Gegensatz dazu kommt es in der Placebogruppe zu keiner Signifikanz.
Weiters ist bekannt, dass neben einer Verminderung der Suppressorzellen im Alter diese auch eine geringere Zytotoxizitätskapazität aufweisen.
In der Beurteilung der CD8+/CD38+ zytotoxischen T-Zellen im vorliegenden Datenmaterial findet sich ein Anstieg in beiden Gruppen (Verum : p= < 0, 001, Placebo : p=0, 002). Der Unterschied zwischen den Gruppen ist mit p=0, 089 nicht signifikant, zeigt aber einen deutlicheren Zuwachs in der Verumgruppe. Die "natürlichen Killerzellen" (CD3-/CD16, 56+) steigen in der Verumgruppe signifikant an (p=0, 026).
Naive (CD45RA+) und memory T-Zellen (CD45RO+) unterliegen während des fortlaufenden Lebens einer zunehmenden Gewichtung der memory- Funktion. Dies wird mit der Abnahme der "Vigilanz" des alternden Immunsystems in Verbindung gebracht. Mit einem p-Wert von 0, 032 liegen die naiven T-Zellen der Verumgruppe am Ende der Prüfung signifikant höher als Placebo.
Die erwähnten, in der Literatur angeführten, phänotypischen Veränderungen resultieren in einer reduzierten Lymphozytenfunktion im Alter. Eine verminderte Proliferationstendenz nach Antikörperstimulus ist ebenso nachweisbar wie eine geringere Zytokinproduktion.
In der vorliegenden Prüfung wurden neben einer in vitro Stimulierung die Expression von IL-2r und der Produktionszuwachs von IL-2 gemessen. Da das Immunsystem sehr komplexen Einflüssen unterliegt bzw. ebenso reagiert, finden sich sehr grosse Standardabweichungen bei den erhobenen Parametern.
Der Median des Prozentsatzes von aktivierbaren Zellen am Studienende beträgt 32% (2-61) in der Verum- und 26% (10-52) in der Placebogruppe. Die Auswertung der IL-2r pro Zelle zeigt einen Median von 7378 (2622-28659) in der Verum- und von 5884 (2927-30732) in der Placebogruppe.
Die Zunahme der IL-2 Produktion bezogen auf 1000 Zellen weist sehr hohe Standardabweichungen auf und ist im Gruppenvergleich mit 0, 102 nicht signifikant.
In Zusammenfassung aller aufgelistete Parameter zeigt sich ein positiver Einfluss von Verum auf phänotypische Leukozytenveränderungen im Sinne einer Vermehrung der Zellen der zellulären Immunantwort. Werden die Aktivitätsparameter (IL-2, IL-2r) auf die Anzahl der aktivierbaren Lymphozyten bezogen, zeigt sich auch hier eine Veränderung zugunsten von Verum.
Im Gegensatz dazu sind keine Veränderungen im Bereich der humoralen Immunität zu erkennen. Die Population der B-Lymphozyten zeigt in keiner Gruppe deutliche Tendenzen. Dies gilt ebenso für die in Zusammenhang stehende Globulinanalyse.
Bei der Analyse der erhobenen Grippeantikörpertiter liegt eine signifikante Erhöhung der Spezi- fität "Yamanashi" in der Placebogruppe vor. "Panama" kann wegen signifikanter Ausgangsunterschiede nicht evaluiert werden. "Caledonia" ist im Gruppenvergleich nicht signifikant.
Es kann somit aus hämatologischer Sicht gesagt werden, dass die Prüfsubstanz einen positiven Einfluss auf das zelluläre Immunsystem bei älteren Menschen hat.
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Gesamtbeurteilung :
Die Beurteilung des roten Blutbildes wird ebenfalls als Parameter zur Evaluierung der Lebensqualität herangezogen. Dies basiert auf der Tatsache, dass eine erhöhte Sauerstoffsättigung des Blutes verbesserte cognitive Leistungen mit sich bringt. Ein Zusammenhang der Veränderungen des roten Blutbildes mit den hier angeführten Testergebnissen, ist möglich, in den vorliegenden Grössenordnungen aber nicht beweisend.
Parameter der Sicherheit : I) Laborparameter
Blutbild :
Für die immunologischen Untersuchungen war die Gewinnung von ausreichend Leukozyten essentiell. Die Beschreibung der einzelnen Parameter wurde im Kapitel "Immunologie" abgehandelt.
Thrombozyten
Sowohl in der Verum-, als auch in der Placebogruppe sind keinerlei Änderungen erkennbar.
Die Mediane und Mittelwerte liegen zu Beginn und am Ende im Normalbereich.
Rotes Blutbild :
Erythrozyten
Es treten keine Signifikanzen auf. Alle erhobenen Werte liegen im standardisierten Normalereich.
Hämoglobin :
Zwischen den Gruppen und Untersuchungszeitpunkten zeigen sich keine signifikanten Unterschiede. In der Verumgruppe bleiben Median und Mittelwert stabil. Der Median in der Placebogruppe verändert sich von 13, 1 auf 12, 8. Ebenso ist ein Abfall des Mittel wertes von 12, 94 auf 12, 73 zu verzeichnen.
Hämatokrit
In der Placebogruppe findet sich ein signifikanter Abfall des Wertes während des Studienverlaufes (p=0, 002).
EMI9.1
Es kommt zu einem signifikanten Abfall der Werte innerhalb beider Gruppen (p < 0, 001 Verum und Placebo). Dieser Abfall ist deutlicher in der Placebogruppe.
MCH
Keine Signifikanzen kommen zur Darstellung. Der Median ist in der Verumgruppe mit 28, 9 (vor) zu 28, 85 (nach) sehr stabil. In der Placebogruppe ändert er sich von 29, 4 auf 28, 5.
MCHC
In beiden Gruppen ist ein signifikanter Anstieg während des Verlaufes zu verzeichnen (Verum p=0, 025, Placebo p=0, 003).
Eisen :
Dieser Parameter wurde wegen seiner Verbindung zur Hämoglobinsynthese zum Blutbild hinzugefügt. Gemessen wurde der freie Eisenspiegel. In der Verumgruppe kommt es zu einem deutlichen Abfall während der Prüfung mit einem p-Wert von 0, 075.
Bilirubin
Dieser Wert wurde ebenfalls wegen seiner Nähe zum roten Blutbild hier angeführt. In der Verumgruppe kommt es zu einem signifikanten Abfall mit p=0, 017.
Gesamtbeurteilung der vorliegenden Parameter des roten Blutbildes :
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Hämoglobin, Hämatokrit und MCV fallen in der Placebogruppe teilweise signifikant ab. Der Eisenspiegel in der Verumgruppe verzeichnet einen nahezu signifikanten Abfall. In Zusammenfassung aller erhobenen Befunde ist eine positive Auswirkung der Prüfsubstanz auf das rote Blutbild nachvollziehbar.
Blutchemie :
Eisen und Bilirubin wurden bereits beim roten Blutbild gelistet. Es werden hier nur jene Parameter angeführt, bei denen signifikante Änderungen eingetreten sind. Die übrigen sind deskriptiv dem biometrischen Bericht zu entnehmen.
Kreatinin
Mit p=0, 006 zeigt sich eine signifikante Verminderung dieses Parameters in der Placebogruppe.
GGT
Es findet sich ein signifikanter Anstieg in der Verumgruppe von p=0, 049.
LDH
In der Placebogruppe zeigt sich ein signifikanter Anstieg von p=0, 01.
Cholesterin
Die Verumgruppe verzeichnet einen signifikanten Abfall von p=0, 002.
LDL
Eine Verminderung dieses Parameters mit p < 0, 001 wurde in der Verumgruppe evaluiert.
Albumin
P=0, 005 bei einem Abfall in der Verumgruppe. c (2-Globulin
Sowohl in der Verum-, als auch in der Placebogruppe kommt es zu signifikanten Abfällen.
P=0, 018 bei Verum und p=0, 026 bei Placebo.
Blutsenkung nach 1 Stunde :
In beiden Gruppen ist ein signifikanter Abfall zu verzeichnen. Verum : p=0, 044 ; Placebo : p=0, 012 nach 2 Stunden :
Auch hier zeigt sich eine Signifikanz im Abfall von p=0, 027 für Placebo. Die Verumgruppe ist mit p=0, 09 nicht signifikant.
Interpretation der Sicherheitsdaten aus medizinischer Sicht :
Auffällig ist der Abfall von Cholesterin und der Low-density-Lipoproteine (LDL) in der Verumgruppe. Eine Erhöhung von LDL gilt als internistischer Risikofaktor für atherosklerotische Erkrankungen. Eine Besserung dieses Parameters kann als Benefit für die Patienten interpretiert werden.
Eine Aussage über die anderen, signifikant veränderten Laborparameter (Kreatinin, GGT, Albumin, a2-Globulin und LDH) ist aufgrund eines Mangels an konformen Tendenzen bei klinisch verwandten Parametern nicht möglich.
11) klinische Parameter
Gewicht :
Vergleich der Mediane Screening zu Follow up nach 5 Monaten : Der Median in der Verumgruppe steigt von 67 auf 68, 5 kg an. In der Placebogruppe sinkt er von 59, 5 auf 57, 5 kg.
Body mass Index :
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Der Median in der Verumgruppe betrug 25, 95 zu Beginn und 26, 3 am Ende der Prüfung. Jener der Placebogruppe lag bei 24, 4 vor bzw. 24, 1 nach Abschluss des Beobachtungszeitraumes. Es besteht somit keine signifikante Änderung innerhalb oder zwischen den beiden Gruppen.
Temperatur :
Alle erhobenen Mediane liegen in beiden Gruppen, zu allen Zeitpunkten bei 36, 2-36, 3 Grad und entsprechen klinisch einer normalen Körpertemperatur.
Herzfrequenz :
Die medizinische Evaluierung aller Mittelwerte und Mediane, zu allen Zeitpunkten, zeigt normofrequente und nicht relevante Daten.
Blutdruck diastolisch :
Zu allen Zeitpunkten und in beiden Gruppen keine Werte von klinischer Relevanz. systolisch :
Ebenso, wie beim diastolischen Wert ohne Veränderungen in den Verläufen.
EKG :
Als "pathologisch" bezeichnete Aufzeichnungen :
Im Vergleich Screening zu Studienende nach 3 Monaten ändert sich in der Verumgruppe die Anzahl von 19 auf 15, In der Placebogruppe von 22 auf 16.
111) Erfassung von unerwünschten Wirkungen
Es liegen keine Berichte über unerwünschte Wirkungen vor. Die "serious adverse event reports" betreffend die, während der Prüfung verstorbenen Patienten, wurden an die Ethikkommission weitergeleitet. Auch bei der medizinischen Interpretation der Labor- und Klinikparameter können keine unerwünschten Wirkungen abgeleitet werden. Eine Sichtung der erhobenen ICD-9 Codes für die neu aufgetretenen Erkrankungen, entspricht der normalen Inzidenz und Prävalenz in der untersuchten geriatrischen Personengruppe.
PATENTANSPRÜCHE :
1. Verwendung eines aus elektrolytangereicherten Pflanzenkeimlingen hergestellten Präpara- tes zur Herstellung einer pharmazeutischen Präparation zur Verringerung der Cholesterin-
Konzentration im Blut.
2. Verwendung eines aus elektrolytangereicherten Pflanzenkeimlingen hergestellten Präpara- tes zur Herstellung einer pharmazeutischen Präparation zur Verringerung der Low- Density-Lipoprotein- (LDL-) Konzentration im Blut.
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The invention relates to new uses of preparations which are made from electrolyte-enriched seedlings.
While the positive impact of regular fruit, vegetable and fiber consumption on health and the immune system is undisputed, the intake of individual isolated vitamins often shows conflicting results in clinical studies and intervention studies.
It is known that micronutrient complexes dosed and combined as needed have a positive influence on the immune system of HIV-positive patients, in particular they can increase the quotient of T helper cells and T suppressor cells (N. Fuchs et alii: WMW 1996; 145: 483-493 I. Guth et alii: J. f. Ortho Med. 5; 4 (1997) 325-348).
In contrast, the isolated supply of individual nutrients, e.g. B. from antioxidative beta-carotene to increased lung cancer incidence and higher mortality rate in smokers (ATBC study: New England Journal of Medicine 1994; 15: 1029-1035). Another study showed an increased risk of stroke after taking isolated synthetic vitamin E.
Obviously, laboratory vitamins do not always have the positive effects expected from vital substances from fruits and vegetables.
A major reason for the different effects of "chemical" and "natural" vitamins in humans may be the complexity of the human cell metabolism. To date, about 50,000 different metabolic reactions are known from biochemistry. Each of these reactions requires a special vitamin, trace element or another vital substance in order to be able to function optimally.
The human body therefore does not need individual vitamins and trace elements to stay healthy, but a multitude of mutually supportive and regenerating vital substances (vitamins, trace elements, essential fatty acids, so-called secondary plant substances). As numerous nutritional studies show, human metabolism, especially that of the immune system, requires the complex interplay of cellular enzyme activators, mutually regenerating antioxidative systems, highly unsaturated fatty acids for the regeneration of cellular biomembranes and interstitial connective tissue modulators.
Comparative studies of plant and human cell metabolism showed extensive analogies in the metabolism of proteins, fats and carbohydrates. In contrast to the human cell, however, the plant cell is able to endogenously synthesize the organic reduction equivalents (e.g. vitamins) increasingly required for growth and regeneration via photosynthetic processes (AE Harmuth-Hoene, AE Bognar et alii: The influence germination on the nutritional value of wheat, mung beans and chickpeas, Z. Lebensm. Unters.
Forsch. 1987, 185; 286-393). The increased endogenous synthesis capacity of germinating grain cells for antioxidative vitamins and highly unsaturated fatty acids is therefore probably a biochemical expression of the increased need in the context of reductive build-up and regeneration processes. Numerous test series have succeeded in enriching germinating grain seeds with mineral, essential trace elements (J. Lintschinger, N. Fuchs et alii: Uptake of various trace elements during germination of wheat, buckwheat and quinoa; Plant Foods for Human Nutrition 50: 223-237 , 1997). The moderate intake of essential trace elements increased both the enzymatic synthesis capacity for the formation of organic vitamins and the content of organically bound trace elements (J. Lintschinger, N. Fuchs et alii: Selenium Enriched Sprouts.
A Raw Material For Fortified Cereal-Based Diets; J. of Agricultural and Food Chemistry, 2000: 48, 11: 5362-5368).
The germination of plant seeds in electrolyte solutions for the production of electrolyte-enriched seedlings is described, for example, in EP 0 770 324 A and EP 0 799 578 A.
The object of the present invention was to provide new uses for such preparations from electrolyte-enriched seedlings.
The present invention therefore relates to the use of a preparation produced from electrolyte-enriched plant seedlings for the production of a pharmaceutical preparation for reducing the cholesterol concentration in the blood (i. E. To bring about a reduced cholesterol concentration in the blood).
Furthermore, such preparations are suitable for producing a pharmaceutical preparation for reducing the low-density lipoprotein (LDL) concentration in the blood (in general for bringing about a reduced LDL concentration in the blood).
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The uses according to the invention have proven particularly useful in the geriatric field, as the results of the medical study shown in the examples impressively demonstrate.
According to the invention, the pharmaceutical preparations are preferably made available in the form of foodstuffs in order to make the prophylactic use as easy as possible for the target individuals.
On the basis of the knowledge according to the invention, the present invention also relates to the use of the electrolyte-enriched seedling preparations for producing a pharmaceutical preparation for preventing atherosclerosis, heart attack and / or stroke.
LDL are low-density lipoproteins, i.e. H. Low density lipoproteins, which contain most of the cholesterol in the blood. LDL transport cholesterol to the various organs, where they are introduced into the cells by receptors. If there is too much LDL in the blood, these are highly enriched in the blood, macrophages absorb the LDL and store it until they remain overloaded with cholesterol in the wall of the vessel and thus trigger the arteriosclerotic process: the cholesterol-containing deposits on the arterial walls lead to vasoconstriction, which ultimately significantly disrupts blood flow and can lead to interruption. The body tissues dependent on these vessels are dangerously damaged by prolonged interruption of the blood supply.
This leads to infarction, i.e. H. to the death of tissue or entire organs. Such deposits are particularly common on the vessels that supply the heart with blood, the coronary arteries. The worst effects of atherosclerosis are stroke and heart attack. Therefore there is a connection between the cholesterol and the LDL concentration in the blood as well as atherosclerosis, heart attack and stroke.
It was all the more surprising that the cellular immune response could be influenced specifically with the uses according to the invention, but not the humoral immune response. Furthermore, no significant effects on the red blood count (erythrocytes, hemoglobin, etc.), on the blood chemistry (except cholesterol and LDL) or the platelet count could be demonstrated by the inventive administration of the electrolyte-enriched seedling preparations. Clinical parameters such as weight, temperature, heart rate, blood pressure and ECG were also unaffected.
Preferred electrolyte-enriched seedlings which can be used according to the present invention are the seedlings disclosed according to EP 0 770 324 A or the combination preparations described according to EP 0 799 578 A.
The seedlings according to the invention should preferably have a seed germinated in comparison to conventionally (ie in conventional tap water) by at least 10 to 20%, preferably by at least 1.5 to 3 times, in particular at least 5 to 10 times, have an increased content of one or more electrolytes, preferably zinc, iron, potassium, magnesium, copper, manganese, strontium, selenium, molybdenum, chromium, arsenic, vanadium and / or cobalt ions.
In conventional seed germination, in which the seeds have been germinated in distilled water or in tap water, there are always considerable losses of these nutritionally important components. These losses were due both to the beginning of the metabolic process of the plant seedling itself, but also to the nature of the swelling agent water, which contributed to an additional electrolyte leaching of the seedling, because, in contrast to the resting state (seeds), the shell of the seedling is very accessible to electrolyte leaching is.
It has also been shown that the electrolyte-enriched seedlings used according to the invention not only have a higher concentration of minerals, but are also generally improved in terms of their ingredients, for example have an increased vitamin content, due to the increased mineral content.
A preferred form of production of the seedlings according to the invention is that the germinable seeds are introduced into an electrolyte solution and the seedlings are incubated in the electrolyte solution at a suitable temperature for a period of time sufficient to achieve electrolyte accumulation in the seedlings.
Using an electrolytic solution, i.e. a solution that is in contrast to the
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conventional germination solutions (tap water or distilled or sterilized water) contains an increased ion concentration, the electrolyte losses occurring in the course of germination can be compensated for or even reversed by an electrolyte flow from the germination solution into the seedlings. Thus, seedlings can arise which, for. T. even have an increased electrolyte content compared to the seed.
Electrolyte solution is preferably understood to mean an aqueous solution which is mixed or enriched with one or more electrolytes as defined below.
The ion concentration of the electrolyte solution can be at least 10 to 20% higher than that of conventional tap water, preferably the ion concentration of the electrolyte solution is at least in relation to iron and / or copper and / or manganese and / or strontium and / or lithium and / or molybdenum ions twice as high as that of conventional tap water, particularly preferably at least five times as high, in particular at least ten times as high.
The suitable temperature for carrying out the germination is of course different from seed type to seed type. In principle, the germination temperature, which is described in the prior art for the respective seed type, is also to be used for the method according to the invention.
This temperature is preferably between 10 and 50 C, in particular between 20 and 30 C.
The length of time to achieve sufficient electrolyte accumulation in the seedlings also varies from seedling type to seedling type, it also depends on which electrolyte values are to be achieved in the seedling. Here, too, the germination times, which are described in the prior art, serve as a guideline for a certain type, and therefore the germination is preferably carried out for a period of about 12 to 120 hours, in particular about 60 to 100 hours.
It goes without saying that both the germination temperature and the germination time can easily be optimized by a person skilled in the art by simple tests for each system and for certain species may well be above or below the guide values given above.
According to the invention, preferred seedlings are seedlings of common plant foods, in particular seedlings of legumes and cereal seeds. Particularly preferred seedlings are therefore wheat, buckwheat, quinoa, mung bean, fenugreek, radish, alfalfa, corn, pumpkin, walnut, rye, barley, rice, adzuki bean and peas -, millet, palm, oat, chickpea, cress, linseed, lentil, mustard, sesame, soybean, sunflower, amaranth seedlings and mixtures of these seedlings.
The electrolytic solution can contain 1 mg / l or more, preferably 10 mg / l or more, in particular 50 mg / l or more zinc and / or iron and / or potassium and / or magnesium ions, 0.5 mg / 1 or more , preferably 5 mg / l or more, in particular 25 mg / l or more copper and / or manganese and / or strontium and / or lithium ions, 0.1 mg / 1 or more, preferably 1 mg / l or more, contain in particular 5 mg / l or more selenium and / or molybdenum and / or chromium and / or arsenic and / or vanadium and / or cobalt ions with the proviso that the ion concentration of the electrolyte solution in at least one ion species differs from that ion concentration in tap water differs by at least 10 to 20%.
A particularly preferred electrolyte solution contains at least 0.5 mg / l copper and / or 1 mg / l zinc and / or 0.1 mg / l cobalt and preferably at least 0.1 mg / l molybdenum and / or 0 5 mg / I lithium and / or 1 mg / l selenium and / or 1 mg / 1 vanadium ions.
Depending on their intended use, the electrolyte-enriched seedlings can be washed, dried and, if necessary, further processed for sale. It is particularly preferred to prepare the seedlings according to the invention for fresh food, for spreads, for baked goods, soups or for snack-like foods or nutritional supplements in the form of muesli, chewable tablets, capsules or liquids.
In the uses according to the invention, the seedlings are preferably used in combination with micronutrients. Preferred micronutrients are polyunsaturated fatty acids, natural carotenoid mixtures, germ extracts, natural anthocyanin mixtures, natural tocophenol and tocotrienol mixtures, vitamins and coenzymes, essential and non-essential amino acids, minerals and mixtures thereof.
The subject of the present invention within the meaning of the claims is of course also the non-therapeutic area.
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The invention is explained in more detail on the basis of the following medical study, to which it is of course not restricted.
For example:
Medical report on the use of a micronutrient concentrate containing preparations of electrolyte-enriched seedlings for immunomodulation in geriatrics.
Indication:
Nutritional supplementation of residents of a geriatric institution with a survey of the effects on the immune system.
Trial medication:
Based on dried electrolyte-enriched seedlings, especially wheat seedlings, with high levels of endogenous vitamin, essential fatty acid and trace element complexes, a dietetic food PMN @ -micronutrient concentrate was used in the present study ("immunostabilizing factor" ISFS) (integrated micronutrient concentrate PMN @ vis vitalis AG / Austria) versus placebo: Suspendable powder in four flavors (tomato, garlic asparagus, vegetables, mushrooms). Dissolved in hot water for 3 months, administered daily in the form of a soup.).
PMN @ stands for Pan Molecular Nutrients and expresses the gaplessness of the nutrient complexes in contrast to synthetic vitamin and trace element combinations.
Course of study:
screening phase
Blood sampling of all parameters
2 months supplementation
Flu shot in the 8th week
1 month supplementation
Blood sampling of all parameters
2 months of follow-up targets: I) Immunology
1) Lymphocyte phenotyping using FACS
2) Lymphocyte function test (IL-2, IL-2R)
Lymphocyte activation in vitro
3) Antibody titre after flu shot
Safety parameters: I) laboratory 11) clinical parameters lil) detection of adverse effects
The primary objectives were primarily to collect parameters that are accepted and relevant by conventional medicine, by means of which the effects of the test substance on the immune system can be evaluated.
Since the assessment of a micronutrient preparation in the form of a supplement for daily nutrition is concerned, a patient population was sought in which the nutrition factor is distributed as homogeneously as possible. This was chosen in the form of residents of a geriatric institution, since all people taking the exam are served by the same large kitchen and the results are not falsified.
The effects of the test substance on the immune system were evaluated according to the cellular and humoral immunity of humans with parameters that do justice to both.
These were: leukocyte phenotyping by FACS, in vitro activation of T-lymphocytes
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Determination of IL-2 and IL-2r, as well as antibody titer determination after a flu vaccination during the test.
Description of the patient collective:
Patients of both sexes who had been resident in the geriatric center for at least 3 months were recruited. A written consent form was obtained from the patient or his / her administrator.
106 people were randomized. 54 in the verum and 52 in the placebo group.
Verum: 45 female, 9 male.
Placebo: 44 female, 8 male.
The mean patient age was 85 years (62-98) in the verum and 85.5 years (65-98) in the placebo group. The age and gender distribution corresponds to demographic studies from this age population. These distribution patterns, regarding age and gender, do not change significantly in relation to the patients defined for the "per protocol analysis". Patients were defined as those who consumed at least 80% of the therapy days at least 50% of the investigational medicinal product. These were 40 in the verum group (32 female and 8 male) and 42 (35 female and 7 male) in the placebo group.
I) Target parameters
1) Leukocyte phenotyping:
This was carried out using a standardized, good laboratory practice-compliant method using FACS. The surface markers CD2 + / CD3-, CD2 + / CD3 +, CD3 +, CD3 + / CD4 +, CD3 + CD8 +, CD3- / CD16, 56+, CD3 + / CD16, 56+, CD19, CD3 + / HLA-DR +, CD4 + / CD45RA + were determined , CD4 + / CD45RO +, CD8 + / CD38 +.
With the help of surface markers on the lymphocytes, the individual subpopulations can be described and quantified. Lymphocytes are a fraction of the leukocytes. These were taken and evaluated in the course of the blood collection at the beginning and at the end of the test.
Leukocytes:
There was no significant difference in the comparison of the initial values between the two groups (p = 0, 468).
The statistical evaluation of the changes within the groups to one another shows a significance in favor of the verum group of p = 0.03.
From a medical point of view, an increase in leukocytes can indicate an infection. A comparison of this single parameter with the results of blood lowering, the CRP and the recording of antipyretic drugs / antibiotics and fever days combined with all these parameters leads to the conclusion that the increase in leukocytes in the verum group is not caused by increased infections.
Lymphocytes:
The comparison of the initial values with p = 0.998 is not significant.
A significance of p = 0, 034 when comparing the group changes from beginning to end shows an increase in the number of lymphocytes in the verum group.
In conjunction with the other parameters recorded, an influence from the test substance can be assumed from a medical haematological point of view. This is confirmed because no combination of all available data (see above) can be used to verify any other causes (infections, etc.) in the clinical sense.
The lymphocytes represent the immune system. A distinction is made between T and B lymphocytes. The T-Ly represent cellular immunity and the B-Ly represent humoral (production of immunoglobulins). Effects of the test substance on the cellular immune system have been observed in previous studies (see introduction). The lymphocytes were subtyped using the FACS examination.
B lymphocytes:
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The surface marker CD-19 is representative of the population of the B-Ly.
There were no changes in the verum (p = 0, 216) or placebo (p = 0, 509) group during the course of the study. An evaluation of the courses compared to each other also shows no significance (p = 0, 856).
Since B-Ly are immunoglobulin-producing cells, their evaluation in combination with the laboratory data from electrophoresis was discussed:
There were no medically interpretable changes in the total protein amount or in the individually evaluated subgroups (Alb, a1, a2, ss and y-globulins). When all parameters representing the humoral immune system are viewed together, there is no change in either of the two groups in the sense of haematological-immunological relevance.
Cellular immunity:
The T-Ly population was determined using the surface marker profiles CD2 + / CD3 +, CD2 + / CD3- and CD3 +. Additional fractionations of the "helper cells" (CD3 + / CD4 +), "suppressor cells" (CD3 + / CD8 +), "natural killer cells" (CD3- / CD16, 56 +), "activated T-Ly" (CD3 + / HLA-DR + ) and the "cytotoxic T-Ly" (CD8 + / CD38 +) were used to accurately describe cellular immunity.
T lymphocytes:
CD3 + defines T-Ly in general. Since a cell type is limited in immunology not by a single marker but by combinations of the same, CD2 + / CD3 + was also determined in order to represent the population of T-Ly as precisely as possible.
There were no significant differences between the baseline values in the evaluation of both lymphocyte profiles.
CD3 +
There was a significant increase in the course in the verum group (p = 0.004). The group comparison with each other is also p = 0, 023 significantly in favor of verum.
CD2 + / CD3 +
Here, too, there was a significant increase in the verum group (p = 0.011) and a significance of p = 0.037 compared to verum versus placebo.
Due to this exact definition of the T-Ly and a statistical significance in both populations, it can be concluded that the test substance causes a change in these cells.
Helper cells CD3 + / CD4 +
With ap = 0.014 within the course and ap = 0.093 in the group comparison, this subpopulation also shows an effect in favor of verum.
Suppressor cells CD3 + / CD8 +
Within the verum group there was a significant increase with p = 0.003. There was no significance with p = 0.061 in the group comparison.
Ratio CD4 + / CD8 +
This value dropped significantly in the course of the verum group with p = 0, 019. There was no significant difference in the group comparison (p = 0.979).
Natural killer cells CD3- / CD16, 56+
With p = 0.026 there is a significant increase in these cells in the verum group. The group comparison resulted in a p-value of 0, 509 as not significant.
T lymphocytes in activated form CD3 + / HLA-DR +
These cells represent the part that has changed into an activated form due to an internal or external stimulus. Neither within the group courses, nor in the direct group
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Significance is shown for comparison.
Cytotoxic T lymphocytes CD8 + / CD38 +
Significant increases are both in the consumption (p <0.001), as well as in the placebo group (p = 0.002). The group comparison with p = 0.089 is in the non-significant range.
Representative T-Ly markers of the "old" immune system
The influence of the test substance on the immune system of the elderly was described with the two parameters evaluated separately here.
"naive cells" CD4 + CD45RA +
In the comparison between the two groups there is a significant increase of p = 0.032 in favor of verum. The increase in the course of the verum shows a p-value of 0.026.
Cells with "memory function" CD45RO +
The verum group recorded an increase of p = 0.037, there was no significant difference between the groups.
2) Lymphocyte activity:
To test lymphocyte activity, sufficient amounts of cell material from each patient were frozen at the start and end at -70 ° C. All samples were processed together according to "good laboratory practice guidelines" for the following parameters:
EMI7.1
- Interleukin-2 (IL-2)
Number of lymphocytes that can be activated
Exactly 3000 lymphocytes were examined in each case. The data relate to the percentage of the cells which can be activated in vivo. There was a significant increase in p in both groups <0.001. The p-value in the group comparison is 0.095.
Interleukin-2 receptor
The mean number of interleukin-2 receptors per 1000 cells was determined. A p <0.001 is found in the course of both groups. The comparison shows no significance with p = 0.488.
Interleukin-2
The values are shown as a factor. It is determined by how many times the IL-2 production increases after stimulation compared to "onset". In the verum group there is a value of p = 0.054. In the placebo group of p = 0.045. The comparison between the two groups is p = 0.02.
3) Antibody titre after flu shot
One month after the flu shot, the sera were tested for antibodies to the Caledonia, Panama and Yamanashi strains.
Caledonia
The increases in both groups were p <0.001 significant. The group difference was p = 0.745 in the non-significant range.
Yamanashi
In addition to significant group increases (p <0/001) there was a significance of p = 0.042 of placebo.
Panama
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The assessment of this parameter can only be assessed to a limited extent because of a significance of p = 0.007 in favor of placebo in the initial values.
Summary assessment of all immunological parameters
In the following section, the scientifically proven facts on which the examination is based are compared with the results.
It has been known from studies in recent years that the immune response decreases with age. This particularly affects the T lymphocyte fraction.
The analysis of cellular immunity on the basis of the T lymphocytes in the present test has the result that the group treated with verum has a significant increase in these cells of p = 0.032 (CD3 +) and p = 0.037 (CD2 + / CD3 +) , The total number of lymphocytes also increased significantly with p = 0.034.
Both the clonal proliferation and the maturation process of the lymphocytes decrease with increasing age. The ratio of immature to mature cells shifts towards the immature forms. The equiiibrium suppressor - to helper lymphocytes changes towards helper cells.
The results in the verum group show a significant increase in CD3 + / CD4 + (Heifer) with p = 0, 014 and CD3 + / CD8 + of p = 0, 003. The changes in the T4 / T8 ratio with 0, 019 in the sense of a decrease in value show a relative Increase in suppressor cells. In contrast, there is no significance in the placebo group.
It is also known that, in addition to a reduction in the suppressor cells in old age, they also have a lower cytotoxicity capacity.
In the assessment of the CD8 + / CD38 + cytotoxic T cells in the present data, there was an increase in both groups (verum: p = <0.001, placebo: p = 0.002). The difference between the groups is not significant with p = 0.089, but shows a clear increase in the verum group. The "natural killer cells" (CD3- / CD16, 56+) rise significantly in the verum group (p = 0, 026).
Naive (CD45RA +) and memory T cells (CD45RO +) are subject to an increasing emphasis on the memory function during ongoing life. This has been linked to a decrease in the "vigilance" of the aging immune system. With a p-value of 0.032, the naive T cells of the verum group were significantly higher than placebo at the end of the test.
The phenotypic changes mentioned in the literature result in a reduced lymphocyte function in old age. A reduced tendency to proliferate after antibody stimulus is just as detectable as a lower cytokine production.
In addition to in vitro stimulation, the expression of IL-2r and the increase in production of IL-2 were measured in the present test. Since the immune system is subject to very complex influences or reacts in the same way, there are very large standard deviations in the parameters recorded.
The median percentage of cells that could be activated at the end of the study was 32% (2-61) in the verum and 26% (10-52) in the placebo group. The evaluation of the IL-2r per cell shows a median of 7378 (2622-28659) in the verum and 5884 (2927-30732) in the placebo group.
The increase in IL-2 production based on 1000 cells shows very high standard deviations and is not significant in the group comparison with 0, 102.
A summary of all the parameters listed shows a positive influence of verum on phenotypic changes in leukocytes in the sense of an increase in the cells of the cellular immune response. If the activity parameters (IL-2, IL-2r) are related to the number of activatable lymphocytes, a change in favor of verum is also shown here.
In contrast, no changes in the area of humoral immunity can be seen. The population of B lymphocytes shows no clear trends in any group. This also applies to the related globulin analysis.
When analyzing the flu antibody titers, there was a significant increase in the specificity "Yamanashi" in the placebo group. "Panama" cannot be evaluated because of significant baseline differences. "Caledonia" is not significant in the group comparison.
From a haematological point of view, it can therefore be said that the test substance has a positive influence on the cellular immune system in older people.
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Overall assessment:
The assessment of the red blood count is also used as a parameter for evaluating the quality of life. This is based on the fact that increased blood oxygen saturation brings improved cognitive performance. A connection of the changes in the red blood count with the test results listed here is possible, but is not proving in the present order of magnitude.
Safety parameters: I) Laboratory parameters
Blood count:
The acquisition of sufficient leukocytes was essential for the immunological tests. The description of the individual parameters was dealt with in the "Immunology" chapter.
platelets
No changes can be seen in the verum or placebo group.
The medians and mean values are in the normal range at the beginning and at the end.
Red blood count:
erythrocytes
There is no significance. All the values collected are in the standardized normal range.
Hemoglobin:
There were no significant differences between the groups and the time of investigation. Median and mean values remain stable in the verum group. The median in the placebo group changed from 13, 1 to 12, 8. Likewise, the mean value dropped from 12, 94 to 12, 73.
hematocrit
There was a significant decrease in the value during the course of the study in the placebo group (p = 0.002).
EMI9.1
There is a significant drop in the values within both groups (p <0.001 verum and placebo). This drop is more evident in the placebo group.
MCH
No significance is shown. The median is very stable in the verum group with 28, 9 (before) to 28, 85 (after). In the placebo group it changes from 29.4 to 28.5.
MCHC
In both groups there was a significant increase during the course (verum p = 0.025, placebo p = 0.003).
Iron:
This parameter was added to the blood picture because of its connection to hemoglobin synthesis. The free iron level was measured. There was a significant drop in the verum group during the test with a p-value of 0.075.
bilirubin
This value was also given here because of its proximity to the red blood count. There was a significant drop in the verum group with p = 0.017.
Overall assessment of the available parameters of the red blood count:
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Hemoglobin, hematocrit and MCV decrease significantly in the placebo group. The iron level in the verum group shows an almost significant drop. In summary of all the findings, a positive effect of the test substance on the red blood count is understandable.
Blood chemistry:
Iron and bilirubin have already been listed in the red blood count. Only those parameters are listed here for which significant changes have occurred. The rest can be found descriptively in the biometric report.
creatinine
With p = 0.006 there is a significant reduction in this parameter in the placebo group.
GGT
There is a significant increase in the verum group of p = 0.049.
LDH
In the placebo group there was a significant increase of p = 0.01.
cholesterol
The verum group recorded a significant drop of p = 0.002.
LDL
A reduction of this parameter with p <0.001 was evaluated in the verum group.
albumin
P = 0.005 for a drop in the verum group. c (2-globulin
There is significant waste in both the verum and placebo groups.
P = 0.018 for verum and p = 0.026 for placebo.
Blood decrease after 1 hour:
There was a significant drop in both groups. Verum: p = 0.044; Placebo: p = 0.012 after 2 hours:
Here, too, there is significance in the drop of p = 0.027 for placebo. The verum group is not significant with p = 0.09.
Interpretation of the safety data from a medical perspective:
The drop in cholesterol and low-density lipoproteins (LDL) in the verum group is striking. An increase in LDL is considered an internal risk factor for atherosclerotic diseases. An improvement in this parameter can be interpreted as a benefit for the patient.
A statement about the other, significantly changed laboratory parameters (creatinine, GGT, albumin, a2-globulin and LDH) is not possible due to a lack of conforming trends in clinically related parameters.
11) clinical parameters
Weight :
Comparison of median screening to follow-up after 5 months: the median in the verum group increased from 67 to 68.5 kg. In the placebo group, it drops from 59.5 to 57.5 kg.
Body mass index:
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The median in the verum group was 25, 95 at the beginning and 26, 3 at the end of the test. The placebo group was 24, 4 before and 24, 1 after the end of the observation period. There is therefore no significant change within or between the two groups.
Temperature:
All medians collected in both groups are at 36, 2-36, 3 degrees at all times and correspond clinically to a normal body temperature.
Heart rate:
The medical evaluation of all mean values and medians, at all times, shows normofrequency and irrelevant data.
Blood pressure diastolic:
No values of clinical relevance at all times and in both groups. systolic:
Just as with the diastolic value without changes in the courses.
EKG:
Records referred to as "pathological":
In comparison to screening at the end of the study after 3 months, the number changed from 19 to 15 in the verum group and from 22 to 16 in the placebo group.
111) Detection of adverse effects
There are no reports of adverse effects. The "serious adverse event reports" regarding the patients who died during the examination were forwarded to the Ethics Committee. No undesirable effects can be derived from the medical interpretation of laboratory and clinical parameters. A review of the ICD-9 codes for the newly emerging diseases corresponds to the normal incidence and prevalence in the geriatric group examined.
PATENT CLAIMS:
1. Use of a preparation made from electrolyte-enriched plant seedlings for the production of a pharmaceutical preparation for reducing cholesterol
Concentration in blood.
2. Use of a preparation made from electrolyte-enriched plant seedlings for the production of a pharmaceutical preparation for reducing the low-density lipoprotein (LDL) concentration in the blood.