AT213099B - Fluorescence device for microscopes - Google Patents

Fluorescence device for microscopes

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Publication number
AT213099B
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AT
Austria
Prior art keywords
filter
blocking
filters
disk
excitation
Prior art date
Application number
AT26160A
Other languages
German (de)
Inventor
Franz Dr Weinberger
Original Assignee
Reichert Optische Werke Ag
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    • GPHYSICS
    • G02OPTICS
    • G02BOPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
    • G02B21/00Microscopes
    • G02B21/16Microscopes adapted for ultraviolet illumination ; Fluorescence microscopes
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/645Specially adapted constructive features of fluorimeters
    • G01N21/6456Spatial resolved fluorescence measurements; Imaging
    • G01N21/6458Fluorescence microscopy
    • GPHYSICS
    • G02OPTICS
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    • G02B26/00Optical devices or arrangements for the control of light using movable or deformable optical elements
    • G02B26/007Optical devices or arrangements for the control of light using movable or deformable optical elements the movable or deformable optical element controlling the colour, i.e. a spectral characteristic, of the light
    • GPHYSICS
    • G02OPTICS
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    • G02B7/00Mountings, adjusting means, or light-tight connections, for optical elements
    • G02B7/006Filter holders

Description

  

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 einem Erregerfilter so zugeordnet ist, dass beide miteinander im sichtbaren und im ultravioletten Wellenlängenbereich undurchlässig sind. Es ist auch bekannt, die Erregerfilter und die Sperrfilter in je eine Wechselvorrichtung einzusetzen und dort nach sich stetig verschiebenden Durchlässigkeitsbereichen der Erregerfilter zu ordnen, so dass bei gleichzeitiger, eventuell gekoppelter Betätigung von beiden Wechselvorrichtungen jeweils zueinander im obigen Sinne zugeordnete Filter im Strahlengang liegen. 



   Die Fig. l veranschaulicht durch eine Reihe von schematisierten Filterdurchlässigkeitskurven diese Verhältnisse. Die voll ausgezogenen Kurven (1-6) geben die Durchlässigkeit (T   in 0/0)   der Erregerfilter in Ab-   hängigkeit   von der    Wellenlänge (À. innm)   an, während die   Durchlässigkeiten   der zugeordneten Sperrfilter durch gestrichelte Kurven (1-6) dargestellt sind. Das Gesichtsfeld bleibt, wenn irgend ein Erregerfilter mit einem mit gleicher Nummer bezeichneten Sperrfilter kombiniert wird, dunkel und hellt sich erst auf, wenn das Objekt fluoreszierende Details enthält.

   Je nach dem Durchlässigkeitsbereich des eingeschalteten Erregerfilters kann die Fluoreszenzfarbe variieren und aus dieser Variation können gegebenenfalls   Rückschlüsse   auf die zu untersuchenden Details gezogen werden. 



   Bei der praktischen Arbeit mit einer solchen Einrichtung empfindet man es als nachteilig, dass nur die fluoreszierenden Details des Objektes sichtbar gemacht werden, aber deren Lokalisierung im dunklen Umfeld schwer oder gar nicht möglich ist. Die vorliegende Erfindung beseitigt diesen Mangel. Sie bezieht sich auf eine Fluoreszenzeinrichtung für Mikroskope mit je einem Satz von n Erregerfiltern und n Sperrfiltern, die in miteinander   gekoppeltenWechselvorrichtungen eingesetzt und dort nach   sich stetig verschiebendem Durchlässigkeitsbereich geordnet sind, so dass das i-te Erregerfilter zusammen mit dem i-ten Sperrfilter im sichtbaren und im ultravioletten Wellenlängenbereich undurchlässig ist und ist dadurch gekennzeichnet,

   dass die Koppelung der beiden Wechselvorrichtungen die synchrone Einschaltung des i-ten Erregerfilters sowohl mit dem i-ten als auch mit dem   (i+l)-ten Sperrfilter   ermöglicht. Wenn nämlich das i-te Erregerfilter mit dem i-ten Sperrfilter gekoppelt in den Strahlengang eingeschaltet ist, so erblickt man die Fluoreszenzerscheinung auf dunklem Untergrund. Koppelt man aber das i-te Erregerfilter mit dem i+1-   ten Sperrfilter, so kannbeigeeigneter Wahl derDurchlässigkeitsbereiche   erreicht werden, dass nunmehr der Untergrund schwach gefärbt erscheint und daher die Lokalisierung der fluoreszierenden Details im übrigen Objekt möglich wird.

   Eine besonders zweckmässige Ausgestaltung der Erfindung besteht darin, dass die Kopplung der als Revolverscheiben mit n darin eingesetzten Filtern ausgeführten Wechselvorrichtung über einen Mitnehmerstift erfolgt, der in eine sektorförmige Ausnehmung mit einer Öffnung von 360/n Grad eingreift und in beiden Anschlagstellungen durch Rasten festgehalten werden kann. 



   Ein Ausführungsbeispiel der Erfindung wird an Hand der Fig. 2 und 3 erläutert. In Fig. 2 ist in einem schematischen Aufriss ein Mikroskop dargestellt, das aus dem Objektiv 1 und dem Okular 2 besteht. Das Präparat 3 wird aus   derPfeilrichtung   über den Spiegel 4 und den Kondensor 5 beleuchtet. Im Beleuchtungstrahlengang ist eine Revolverscheibe 6 und im Abbildungsstrahlengang eine analoge Scheibe 7 vorgesehen. 



  In ersterer sitzen sechs Erregerfilter 8 und in letzterer ebensoviele Sperrfilter 9. Die Öffnungen für alle diese Filter sind gegeneinander um je 600 versetzt. Beide Revolverscheiben sind mit je einer Welle 10 

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11einen Schlitz 15 der Scheibe 13 ein, der sich über einen Winkel von   600 erstreckt.   Hält man die Scheibe 13 fest, so kann man die Scheibe 12 und mit ihr den Stift 14 verdrehen, bis der Stift 14 an den Enden des Schlitzes anschlägt und dort durch die Rastkugel 16 festgehalten wird. Diese Rastkugeln sind in Radialbohrungen der Scheibe 13 eingedrückt und ragen unter dem Druck der Federn 17 in den Schlitz 15 hinein. 



  Stehen die Scheiben 12 und 13 so, dass sich der Stift 14 in der eingezeichneten Endstellung befindet, so ist im Sinne der eingangs angeführten Terminologie das i-te Erregerfilter in der Scheibe 6 gleichzeitig mit dem i-ten Sperrfilter in der Scheibe 7 im Strahlengang eingeschaltet. Beim Einblick ins Mikroskop erscheint das Gesichtsfeld dunkel, mit Ausnahme der fluoreszierenden Stellen des Präparates 3. Verdreht man jetzt 12 gegen 13 bis der Stift 14 in der andern Endstellung   14'einrastet,   ist das i-te Erregerfilter   dem (i+l)-tenSperrfilter zugeordnetundoserscheinondle fluoreszierendenDetails   auf einem schwach erhellten Untergrund. Die Intensität des Untergrundes lässt sich aus der Fig. 1 bestimmen.

   Ist beispielsweise   dasEnegerfilter l   mit dem Sperrfilter 2 gekoppelt, so ist die Gesamthelligkeit des Untergrundes durch die schräg schraffierte Fläche gegeben, die von der voll gezeichneten Kurve   l,   der gestrichelt gezeichneten Kurve 2 und der \-Achse eingeschlossen ist. Eine Ausnahme bildet lediglich das Erregerfilter 6, das mit dem Sperrfilter 1 kombiniert, keinen   gemeinsamen Durchlässigkeitsbereich   besitzt und daher keinen aufgehellten Untergrund liefert. 



   Es bedarf im übrigen keiner ausdrücklichen Erwähnung, dass die Kopplung der beiden Wechselvorrichtungen für die   Erreger- bzw. Sperrfilter   auch auf andere als die vorbeschriebene Art, u. zw. insbesondere elektromagnetisch, erfolgen kann. 



    PATENTANSPRÜCHE :    
 EMI2.2 
 die in miteinander gekoppelten Wechselvorrichtungen eingesetzt und dort nach sich stetig verschiebendem Durchlässigkeitsbereich geordnet sind, so dass das i-te Erregerfilter zusammen mit dem   i-tenSperrfilter   im sichtbaren und im ultravioletten Wellenlängenbereich undurchlässig ist, dadurch gekennzeichnet, dass 
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 EMI1.1
 
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 is assigned to an excitation filter so that both are opaque to one another in the visible and in the ultraviolet wavelength range. It is also known to use the exciter filter and the blocking filter in a changeover device and to arrange them according to continuously shifting permeability ranges of the exciter filters, so that when both changeover devices are operated simultaneously, possibly coupled, filters that are assigned to one another in the above sense are in the beam path.



   FIG. 1 illustrates these relationships by means of a series of schematic filter permeability curves. The solid curves (1-6) indicate the transmittance (T in 0/0) of the excitation filter as a function of the wavelength (À. Innm), while the transmittances of the assigned blocking filters are shown by dashed curves (1-6) are. If any excitation filter is combined with a blocking filter with the same number, the field of view remains dark and only brightens up when the object contains fluorescent details.

   Depending on the permeability range of the activated exciter filter, the fluorescence color can vary and conclusions can be drawn from this variation about the details to be examined.



   In practical work with such a device, it is felt to be disadvantageous that only the fluorescent details of the object are made visible, but their localization in the dark environment is difficult or impossible. The present invention overcomes this deficiency. It relates to a fluorescence device for microscopes, each with a set of n excitation filters and n blocking filters, which are used in mutually coupled interchangeable devices and arranged there according to continuously shifting permeability range, so that the i-th excitation filter together with the i-th blocking filter is visible and is opaque in the ultraviolet wavelength range and is characterized by

   that the coupling of the two changeover devices enables the i-th excitation filter to be switched on synchronously with both the i-th and the (i + l) -th blocking filter. If the i-th excitation filter is coupled to the i-th blocking filter and is switched into the beam path, one sees the fluorescence phenomenon on a dark background. If, however, the i-th excitation filter is coupled with the i + 1-th blocking filter, a suitable choice of the permeability ranges can be achieved so that the background now appears weakly colored and therefore the localization of the fluorescent details in the rest of the object is possible.

   A particularly expedient embodiment of the invention is that the coupling of the changing device, designed as turret disks with n filters inserted therein, takes place via a driving pin which engages in a sector-shaped recess with an opening of 360 / n degrees and can be held in both stop positions by locking .



   An exemplary embodiment of the invention is explained with reference to FIGS. 2 and 3. In Fig. 2, a microscope is shown in a schematic elevation, which consists of the objective 1 and the eyepiece 2. The preparation 3 is illuminated from the direction of the arrow via the mirror 4 and the condenser 5. A turret disk 6 is provided in the illumination beam path and an analog disk 7 is provided in the imaging beam path.



  Six excitation filters 8 are located in the former and the same number of blocking filters 9 in the latter. The openings for all these filters are offset from one another by 600 each. Both turret disks each have a shaft 10

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11 a slot 15 of the disk 13, which extends over an angle of 600. If the disk 13 is held firmly, the disk 12 and with it the pin 14 can be rotated until the pin 14 strikes the ends of the slot and is held there by the locking ball 16. These locking balls are pressed into radial bores in the disk 13 and protrude into the slot 15 under the pressure of the springs 17.



  If the disks 12 and 13 are positioned so that the pin 14 is in the drawn-in end position, the i-th exciter filter in the disk 6 is switched on simultaneously with the i-th blocking filter in the disk 7 in the beam path in the sense of the terminology mentioned at the beginning . When looking into the microscope, the field of view appears dark, with the exception of the fluorescent areas of preparation 3. If you now turn 12 against 13 until the pin 14 engages in the other end position 14 ', the i-th excitation filter is the (i + l) -th blocking filter assigned and not shown, fluorescent details on a weakly lit background. The intensity of the background can be determined from FIG. 1.

   If, for example, the negative filter 1 is coupled to the blocking filter 2, the overall brightness of the background is given by the diagonally hatched area, which is enclosed by the fully drawn curve 1, the dashed curve 2 and the \ -axis. The only exception is the exciter filter 6, which, combined with the blocking filter 1, does not have a common permeability range and therefore does not provide a brightened background.



   In addition, it does not need to be explicitly mentioned that the coupling of the two changing devices for the exciter or blocking filter can also be carried out in a manner other than the one described above, u. between in particular electromagnetically.



    PATENT CLAIMS:
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 which are used in mutually coupled interchangeable devices and are arranged there according to a continuously shifting permeability range, so that the i-th excitation filter together with the i-th blocking filter is impermeable in the visible and in the ultraviolet wavelength range, characterized in that
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DE19835070B4 (en) * 1998-08-04 2006-03-16 Carl Zeiss Jena Gmbh Arrangement for adjustable wavelength-dependent detection in a fluorescence microscope
DE19835068A1 (en) * 1998-08-04 2000-02-10 Zeiss Carl Jena Gmbh Microscope, esp. laser-scanning microscope, has illumination with intensity of wavelength(s) controlled via rotatable interference filter(s) in illumination beam path

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